一种可用于肺腺癌早期诊断的联合检测血清标志物及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种可用于肺腺癌早期诊断的联合检测血清标志物，其特征在于，所述血清标志物为五种igm自身抗体，包括tshr、erbb2、survivin、pik3ca和jak2的自身抗体。2.一种可用于肺腺癌早期诊断的联合检测elisa试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括固相载体和包被于固相载体上所述的联合检测血清标志物所对应的特异性蛋白。3.如权利要求2所述的可用于肺腺癌早期诊断的联合检测elisa试剂盒，其特征在于，所述的固相载体为96孔酶标板。4.如权利要求2所述的可用于肺腺癌早期诊断的联合检测elisa试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样品稀释液、第二抗体、第二抗体稀释液、阳性对照血清、阴性对照血清、显色液、终止液、封闭液和洗涤液。5.如权利要求2所述的可用于肺腺癌早期诊断的联合检测elisa试剂盒，其特征在于，所述第二抗体带有可检测的标记物。6.如权利要求2所述的可用于肺腺癌早期诊断的联合检测elisa试剂盒，其特征在于，所述的标记物为辣根过氧化物酶。7.如权利要求2所述的可用于肺腺癌早期诊断的联合检测elisa试剂盒，其特征在于，所述的第二抗体为羊抗人igm抗体。8.一种如权利要求2
‑
7任一项所述的联合检测elisa试剂盒检测肺腺癌血清样本的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：a）包被：用包被液分别将联合检测血清标志物蛋白浓度稀释为0.125μg/ml，按50μl/孔包被于96孔板内，置于4℃冰箱内过夜；b）封闭：弃去孔中蛋白稀释液，于96孔板内加入封闭液，100μl/孔，置于4℃冰箱内过夜封闭；c）洗涤：弃去孔中封闭液，将酶标板置于自动洗板机内，按照300μl洗液/孔，10秒/次，重复洗涤3次，最后拍干；d）一抗孵育：在96孔板内相应位置加入稀释后的血清和空白对照，50μl/孔，37℃水浴锅内孵育1小时，其中，稀释后的血清是将血清用抗体稀释液按1:100比例进行稀释；空白对照为抗体稀释液；e）洗涤：弃去孔中血清溶液，将酶标板置于自动洗板机内，按照300μl洗液/孔，10秒/次，重复洗涤5次，最后拍干；f）二抗孵育：将hrp标记的羊抗人igm与抗体稀释液按照1:2000比例稀释，后加入96孔酶标板，50μl/孔，37℃水浴锅内孵育1小时；g）洗涤：弃去孔中二抗溶液，将酶标板置于自动洗板机内，按照300μl洗液/孔，10秒/次，重复洗涤5次，最后拍干；h）显色：分别向每孔加入50μl显色液，酶标板下需垫上白纸，置于室温避光显色20min；i）终止：分别向孔中以25μl/孔加终止液；j）测吸光度：使用酶标仪分别测定450nm和620nm波长所对应的吸光度值，以od
450
‑
od
620
为相对od值，然后扣去空白对照。9.一种可用于肺腺癌早期诊断的联合诊断模型的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）蛋白芯片技术筛选igm自身抗体：通过蛋白质芯片技术对肺腺癌患者和正常对照血
清样本进行血清学分析，筛选潜在的可用于肺腺癌诊断的五种igm自身抗体；（2）通过elisa实验对挑选出的候选igm自身抗体指标在肺腺癌患者和正常对照的血清样本中进行验证，获得可用于肺腺癌早期诊断的联合检测血清标志物，包括tshr、erbb2、survivin、pik3ca和jak2的自身抗体；（3）用logistic回归将可用于肺腺癌早期诊断的联合检测血清标志物与传统肿瘤标志物cea联合，进而构建肺腺癌诊断模型p =1 / (1 exp(
ꢀ‑ꢀ
(1.655*od
erbb2 7.862*od
jak2
ꢀ‑ꢀ
10.285*od
tshr 17.135*od
pik3ca
ꢀ‑ꢀ
11.294*od
survivin 0.299*cea
ꢀ‑ꢀ
1.899)))；式中od
erbb2
、od
jak2
、od
tshr
、od
pik3ca
、od
survivin
分别为各个igm自身抗体指标的相对od值减去空白对照后的吸光度值；cea为临床运用电化学发光法检测所得的患者血清内cea含量，单位是ng/ml。

技术总结
本发明公开了一种可用于肺腺癌早期诊断的联合检测血清标志物，包括TSHR、ERBB2、Survivin、PIK3CA和JAK2的IgM自身抗体，应用所述的联合检测血清标志物所对应的特异性蛋白制备ELISA血清检测试剂盒，所述的联合检测血清标志物在提高肺腺癌早期诊断的灵敏度、特异度和准确性方面发挥重要作用，同时应用该联合检测血清标志物联合CEA血清标志物构建诊断模型，提供了一种灵敏度高、特异性强、成本低且可辅助肺腺癌临床诊断的血清学检测方法。辅助肺腺癌临床诊断的血清学检测方法。辅助肺腺癌临床诊断的血清学检测方法。


技术研发人员：代丽萍 张建营 张雪 王雨林 王晓 欧阳松云 赵春玲
受保护的技术使用者：郑州大学
技术研发日：2021.07.14
技术公布日：2021/11/23