一种适合嗜热链球菌培养及游离胞外多糖测定的化学成分确定培养基及其制备方法与流程

技术特征：
1.一种适合嗜热链球菌培养及游离胞外多糖测定的化学成分确定培养基，其特征在于，所述的培养基包括1种碳水化合物、9~20种游离氨基酸、6种维生素、6种无机盐及3种有机盐、去离子水；所述碳水化合物包括乳糖，其中，乳糖占培养基重量的1~4%；即培养基中，乳糖浓度为1~4%；所述游离氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸；其中，丙氨酸占培养基重量的0~0.18%，精氨酸占培养基重量的0~0.35%，天冬酰胺占培养基重量的0~0.27%，天冬氨酸占培养基重量的0 ~0.26%，半胱氨酸占培养基重量的0.01~0.24%，谷氨酰胺占培养基重量的0~0.29%，谷氨酸占培养基重量的0.01~0.30%，甘氨酸占培养基重量的0~0.15%，组氨酸占培养基重量的0.01~0.31%，异亮氨酸占培养基重量的0.01~0.27%，亮氨酸占培养基重量的0.01~0.27%，赖氨酸占培养基重量的0~0.29%，蛋氨酸占培养基重量的0.01~0.30%，苯丙氨酸占培养基重量的0~0.33%，脯氨酸占培养基重量的0~0.06%，丝氨酸占培养基重量的0~0.05%，苏氨酸占培养基重量的0~0.06%，色氨酸占培养基重量的0.01~0.41%，酪氨酸占培养基重量的0.01~0.036%，缬氨酸占培养基重量的0.01~0.23%；即培养基中，丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸浓度分别为0~0.18%、0~0.35 %、0~0.27%、0 ~0.26%、0.01~0.24%、0~0.29%、0.01~0.30%、0~0.15%、0.01~0.31%、0.01~0.27%、0.01~0.27%、0~0.29%、0.01~0.30%、0~0.33%、0~0.06%、0~0.05%、0~0.06%、0.01~0.41%、0.01~0.036%、0.01~0.23%；所述维生素包括抗坏血酸钠、泛酸钙、烟酸、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素，其中，抗坏血酸钠占培养基重量的0.05%~0.1%，泛酸钙占培养基重量的0.0001~0.0005%，烟酸占培养基重量的0.0001~0.0005%，盐酸吡哆醇占培养基重量的0.0001~0.0025%，核黄素占培养基重量的0.0001~0.0005%，盐酸硫胺素占培养基重量的0.0001~0.0005%；即培养基中，抗坏血酸钠、泛酸钙、烟酸、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素浓度分别为0.05%~ 0.1%、0.0001~0.0005%、0.0001~0.0005%、0.0001~0.0025 %、0.0001~0.0005%、0.0001~0.0005%；所述无机盐包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠，其中，磷酸二氢钾占培养基重量的0.2~0.3%，磷酸氢二钾占培养基重量的0.2~0.3%，氯化镁占培养基重量的0.02~0.05%，氯化钙占培养基重量的0.005~0.01%，磷酸二氢钠占培养基重量的0.12~0.36%，磷酸氢二钠占培养基重量的0.14~0.43%；即培养基中，磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠浓度分别为0.2~0.3%、0.2~0.3%、0.02~0.05%、0.005~0.01%、0.12~0.36%、0.14~0.43%；所述有机盐包括柠檬酸三铵、尿素、乙酸钠；其中，柠檬酸三铵占培养基重量的0.06~0.1%，尿素占培养基重量的0.01~0.024%，乙酸钠占培养基重量的0.01~0.1%；即培养基中，柠檬酸三铵、尿素、乙酸钠浓度分别为0.06~0.1%、0.01~0.024 %、0.01~0.1%；其余为去离子水。2.一种适合嗜热链球菌培养及游离胞外多糖测定的化学成分确定培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1）、准备原料，原料包括乳糖、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷
氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、抗坏血酸钠、泛酸钙、烟酸、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、柠檬酸三铵、尿素、乙酸钠、去离子水，其各成分重量百分比为：乳糖1~4%、丙氨酸0~0.18%、精氨酸0~0.35%、天冬酰胺0~0.27%、天冬氨酸0.01~0.26%、半胱氨酸0.01~0.24%、谷氨酰胺0~0.29%、谷氨酸0.01~0.30%、甘氨酸0~0.15%、组氨酸0.01~0.31%、异亮氨酸0.01~0.27%、亮氨酸0.01~0.27%、赖氨酸0~0.29%、蛋氨酸0.01~0.30%、苯丙氨酸0~0.33%、脯氨酸0~0.06%、丝氨酸0~0.05%、苏氨酸0~0.06%、色氨酸0.01~0.41%、酪氨酸0.01~0.036%、缬氨酸0.01~0.23%、抗坏血酸钠0.05%~0.1%、泛酸钙0.0001~0.0005%、烟酸0.0001~0.0005%、盐酸吡哆醇0.0001~0.0025%、核黄素0.0001~0.0005%、盐酸硫胺素0.0001~0.0005%、磷酸二氢钾0.2~0.3%、磷酸氢二钾0.2~0.3%、氯化镁0.02~0.05%、氯化钙0.005~0.01%、磷酸二氢钠0.12~0.36%、磷酸氢二钠0.14~0.43%、柠檬酸三铵0.06~0.1%、尿素0.01~0.024%、乙酸钠0.01~0.1%，其余为去离子水；步骤（2）、将乳糖溶解于去离子水中，浓度为配方中要求比例的5倍，121℃灭菌15 min，冷却备用，得到料液a，其中，乳糖配方中要求的浓度为1~4%；步骤（3）、将柠檬酸三铵、尿素、乙酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化镁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、抗坏血酸钠、酪氨酸溶解于去离子水中，浓度为配方中要求浓度的2倍，121℃灭菌15 min，冷却备用，得到料液b；其中，柠檬酸三铵、尿素、乙酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化镁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、抗坏血酸钠、酪氨酸配方中要求的浓度分别为0.06~0.1%、0.01~0.024%、0.01~0.1%、0.2~0.3%、0.2~0.3%、0.02~0.05%、0.12~0.36%、0.14~0.43%、0.05~0.1%、0.01~0.036%；步骤（3）、将氯化钙溶解于去离子水中，浓度为100倍配方中要求的浓度，121℃灭菌15 min，冷却备用，得到料液c，其中，氯化钙培养中要求浓度为0.005~0.01%；步骤（4）、将16种氨基酸溶解于0.1 m naoh中，16种氨基酸为丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸，各氨基酸浓度为100倍配方中要求的浓度，121℃灭菌15 min，冷却备用，得到料液d，其中，丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸配方中要求的浓度分别为0~0.18%、0~0.35%、0~0.27%、0.0~0.26%、0.01~0.24%、0~0.29%、0~0.15%、0.01~0.26%、0~0.29%、0.01~0.30%、0~0.33%、0~0.06%、0~0.05%、0~0.06%、0.02~0.41%、0.01~0.23%；步骤（5）、将组氨酸、异亮氨酸、谷氨酸溶解于去离子水中，组氨酸、异亮氨酸、谷氨酸浓度均为浓度为100倍配方中要求的浓度，121℃灭菌15 min，冷却备用，得到料液e，其中，组氨酸、异亮氨酸、谷氨酸配方中要求浓度分别为0.01~0.31%、0.01~0.27%、0.01~0.29%；步骤（6）、将泛酸钙、烟酸、盐酸吡哆醇、核黄素和盐酸硫胺素溶解于去离子水中，泛酸钙、烟酸、盐酸吡哆醇、核黄素和盐酸硫胺素浓度均为100倍配方中要求的浓度，121℃灭菌15 min，冷却备用，得到料液f；其中，泛酸钙、烟酸、盐酸吡哆醇、核黄素和盐酸硫胺素配方中要求的浓度分别为0.0001~0.0005%、0.0001~0.0005%、0.0001~0.0025%、0.0001~0.0005%、0.0001~0.0005%；
步骤（7）、将冷却后的料液a、b、c、d、e、f和无菌去离子水分别按20:50:1:1:1:1:26的比例进行混合，即得培养基。3.权利要求1所述的一种适合嗜热链球菌培养及游离胞外多糖测定的化学成分确定培养基对嗜热链球菌游离胞外多糖的快速提取及定量测定的应用。4.权利要求1所述的一种适合嗜热链球菌培养及游离胞外多糖测定的化学成分确定培养基对对不同游离胞外多糖产量的嗜热链球菌筛选的应用。

技术总结
本发明涉及一种适合嗜热链球菌培养及游离胞外多糖测定的化学成分确定培养基及其制备方法，所述培养基包括1种碳水化合物、9~20种游离氨基酸、6种维生素、6种无机盐及3种有机盐、去离子水；本发明公开了一种适合嗜热链球菌快速生长且能提升其游离胞外多糖产量的化学成分确定的培养基配方，还公开了上述培养基在筛选产游离胞外多糖嗜热链球菌中的应用。本发明设计的培养基能嗜热链球菌游离胞外多糖产量，且对产游离胞外多糖嗜热链球菌具有优良的区分度，分离步骤简便，得到的游离胞外多糖纯度高。纯度高。纯度高。


技术研发人员：顾瑞霞 瓦云超 张臣臣 陈大卫 关成冉 彭奎耀 吕田 瞿恒贤
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：2021.08.19
技术公布日：2021/11/23