三唑并[4,5-d]嘧啶衍生物的新用途的制作方法

三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物的新用途
发明领域
[0001]
本发明涉及三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物，其用于在宿主哺乳动物中的细菌感染，特别是深层(深部或根深蒂固的，deep
‑
seated)细菌感染的体内预后和/或诊断中使用。本发明还涉及对所述细菌感染进行成像的方法以及三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物在体外预后和/或诊断细菌感染中的用途。


背景技术：

[0002]
细菌感染是发病率和死亡率的主要原因，特别是当存在深层感染时。
[0003]
深层感染难以从炎症的其他病因中诊断出来。现行实践依赖于活组织检查、血液、尿液样本分析，或放射技术，诸如例如磁共振成像(mri)、x射线、超声(us)、x射线计算机断层扫描(ct)等，其允许定位感染并且检测与感染、宿主反应或二者相关的形态变化。不幸的是，这样的形态变化可能与炎症或癌症肿瘤没有区别。此外，这些形态变化在感染的早期阶段可能无法检测，并且在它们存在时保持非特异性。
[0004]
也可以使用标记有放射性元素然后被称为放射性标记物的示踪剂来鉴别深层感染。放射性标记物(也被称为放射性示踪剂)可以通过核成像技术诸如单光子发射计算机断层扫描(spect)或正电子发射断层扫描(pet)检测。放射性示踪剂的实例是
18
f
‑
氟脱氧葡萄糖pet、
67
ga
‑
柠檬酸盐spect或放射性标记的白细胞spect，但是它们对细菌感染不是特异性的，并且无法区分感染与无菌性炎症或癌症。
[0005]
因此，本领域迫切需要一种新的示踪剂，其用于预后或诊断宿主哺乳动物中的细菌感染(特别是深层感染)。需要一种对细菌将是特异性且敏感的但又是无毒、负担得起、可广泛获得以及容易且快速制备的示踪剂。


技术实现要素：

[0006]
我们令人惊奇地发现，三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物或其组合物可以用作预后和/或诊断宿主哺乳动物中的细菌感染的示踪剂。三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物具有快速且非侵入性地靶向早期感染并且因此区分感染和无菌性炎症或癌症的优点。三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物还具有诊断或预后属于革兰氏阳性或革兰氏阴性物种的广谱细菌的优点。
[0007]
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以被细菌细胞吸收，并且因此可以用作用于在体内或体外预后和/或诊断细菌感染的示踪剂。
具体实施方式
[0008]
在一个方面，本发明提供了一种式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物，其用于在体内预后和/或诊断宿主哺乳动物诊中的细菌感染。
[0009]
在另一个方面，本发明提供了式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物在体外预后和/或诊断细菌感染中的用途。
[0010]
术语“细菌感染”是指例如肺炎(pneumonia)、败血症(septicemia)、心内膜炎
(endocarditis)、骨髓炎(osteomyelitis)、脑膜炎(meningitis)、尿路、皮肤和软组织感染，但是也指与心脏植入物相关的感染性心内膜炎、人工瓣膜心内膜炎或在1％或2％的关节置换手术中发生的假体周围关节感染。
[0011]
细菌感染例如可以由金黄色葡萄球菌(s.aureus)、表皮葡萄球菌(s.epidermidis)、粪肠球菌(e.faecalis)、屎肠球菌(e.faecium)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin
‑
resistant s.aureus，mrsa)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(methicillin
‑
resistant s.epidermidis，mrse)、糖肽中等耐药性金黄色葡萄球菌(glycopeptide intermediate s.aureus，gisa)、凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase
‑
negative staphylococci，cons)、耐万古霉素肠球菌(vancomycin
‑
resistant enterococci，vre)、β
‑
溶血性无乳链球菌(beta
‑
hemolytic streptococcus agalactiae)(b组链球菌，gbs)或属于革兰氏阳性细菌的其他链球菌中的一种或多种引起，或者由鲍氏不动杆菌(acinetobacter baumannil)、绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、耐碳青霉烯绿脓假单胞菌(carbapenem
‑
resistant pseudomonas aeruginosa)、肠杆菌科(enterobacteriaceae)以及属于革兰氏阴性细菌的第3代耐头孢菌素肠杆菌科(cephalosporin
‑
resistant enterobacteriaceae)(肺炎克雷伯氏菌(klebsiella pneumonia)、大肠杆菌(escherichia coli)、肠杆菌属(enterobacter spp)、沙雷氏菌属(serratia spp)、变形杆菌属(proteus spp)、普罗维登斯菌属(providentia spp)和摩根氏菌属(morganella spp))中的一种或多种引起。
[0012]
如本文中使用的，术语诊断是指鉴别宿主哺乳动物中的细菌感染。
[0013]
如本文中使用的，术语预后是指确定宿主哺乳动物中的细菌感染在任何阶段(特别是在早期阶段)的强度。
[0014]
如本文中使用的，术语宿主哺乳动物优选地是指人，但是也指动物。
[0015]
在一个特别的实施方案中，式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物包含可检测标记物。
[0016]
在另一个特别的实施方案中，式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物与可检测标记物结合。
[0017]
如本文中使用的，术语“可检测标记物”是指任何类型的标签，其是可检测的并且因此允许确定三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物的存在：
[0018]
‑
直接地例如作为放射性标记的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物，其中例如该衍生物的一个原子已被选自以下组的一个放射性同位素标记物替换：2h、3h，、
13
f、
18
f、
19
f、
11
c、
13
c、
14
c、
75
br、
76
br、
120
i、
123
i、
124
i、
125
i、
131
i、
15
o、
13
n、
78
br等；优选地，一个卤素原子被选自
13
f、
18
f、
19
f、
75
br、
76
br、
120
i、
123
i、
124
i、
125
i、
131
i、
78
br等的一个放射性同位素替换；
[0019]
‑
或直接地作为放射性标记的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物，其中该衍生物可以与放射性标记物如
99
tc、
63
ga、
67
ga、
111
in等复合；
[0020]
‑
或间接地例如经由包含信号放大器的转运体(transporter)。然后三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物与转运体化学结合，并且该衍生物可以被视为细菌感染的感测器。
[0021]
如本文中使用的，术语“信号放大器”是指将会放大在细菌感染的组织或植入物处的返回信号的任何试剂。
[0022]
信号放大器可以例如在us成像断层扫描中增强超声波在细菌感染的组织或植入
物处的反射、折射、散射、传输或衰减；或在磁共振成像中增强在对于在细菌感染的组织或植入物处由磁场发射的射频脉冲的反应中的共振或不同氢排列；或在x射线计算机断层扫描(ct)中增强在细菌感染的组织或植入物处吸收或散射的x射线的比例。
[0023]
如本文中使用的，术语“转运体”是指例如充当信号放大器或其中可以并入信号放大器的主体，诸如胶束、微球、脂质体、聚合物颗粒、纳米球、纳米悬浮液、纳米乳液、纳米胶囊等。
[0024]
包含经由放射性同位素的可检测标记物的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物，或者经由与可检测标记物的复合物或经由包含可检测标记物的转运体与可检测标记物结合的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物，在下文中也被称为可检测的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物。
[0025]
在一个特别的实施方案中，可检测标记物是信号放大器，其与三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物间接缔合以用于将依赖于标记物的特性的检测方法。
[0026]
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以与信号放大器诸如例如钆(例如
64
gd)螯合物缔合，所述螯合物是能够增强磁共振成像的铁磁性化合物。gd螯合物可以是离子型(例如葡甲胺或钠盐)或非离子型信号放大器。铁氧化物(氧化铁，iron oxide)也可以用作用于mri的信号放大器。例如，锰掺杂的超顺磁性铁氧化物纳米颗粒可以用于形成超灵敏的mri造影剂。然后，这样的mn
‑
spio纳米颗粒在胶束内自组装成将是通过mri可检测的簇。用于mri的其他信号放大器例如是锰螯合物、铁铂(fept)合金纳米晶体、锰铁氧体(mno
‑
fe2o3)纳米晶体或其他金属掺杂的铁氧化物纳米颗粒如co
‑
fe2o3和nio
‑
fe2o3。
[0027]
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物还可以与信号放大器如微泡缔合以用于对比度增强的超声成像(us)。
[0028]
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物还可以与含有碘或钡的信号放大器(也称为造影剂)缔合以用于x射线计算机断层扫描(ct)。造影剂应当增加目标细菌感染与周围组织之间的绝对ct衰减差异。用于x射线计算机断层扫描的合适造影剂的实例是碘海醇(iohexol)(omnipaque
tm
，ge healthcare)；碘普罗胺(iopromide)(ultravist
tm
，bayer healthcare)；碘克沙醇(iodixanol)(visipaque
tm
，ge healthcare)；碘克酸(ioxaglate)(hexabrix
tm
，mallinckrodt imaging)；碘酞酸盐(iothalamate)(cysto
‑
conray ii
tm
，mallinckrodt imaging)；和碘帕醇(iopamidol)(isovue
tm
，bracco imaging)。
[0029]
在另一个特别的实施方案中，可检测标记物是同位素，其允许使用三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物作为将依赖于标记物的特性的检测方法中的示踪剂。因此，包含至少一种可检测同位素的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以通过使用β、γ、正电子或x射线成像被检测到，其中例如β或γ辐照由相关同位素提供并且在适当的波长下被检测到。
[0030]
包含至少一种可检测同位素的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以例如与磁共振光谱(mrs)或磁共振成像(mri)、x射线计算机断层扫描(ct)、正电子发射断层扫描(pet)和单发射计算机断层扫描(spect)一起使用。
[0031]
可检测的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以通过熟知的有机化学技术经由同位素
19
f或
13
c或其组合被检测到而用于mrs/mri。
[0032]
其他可检测的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物也可以通过选自
19
f、
11
c、
75
br、
76
br或
120
i或其组合的同位素被检测到而用于pet技术。
[0033]
其他可检测的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物也可以通过选自
18
f或
11
c或其组合的同
位素被检测到而用于pet体内成像，并且可以如bengt在acta chemica scandinavia,53:651
‑
669(1999)或核医学杂志(the journal of nuclear medicine)58(7):1094
‑
1099(2017)a.m.j.paans在https://cds.cern.ch/record/1005065/files/p363.pdf中描述的那样进行制备。
[0034]
其他可检测的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以通过
123
i和
131
i被检测到而用于spect成像，并且可以如由kulkarni,int.j.rad.appl.&inst(partb)18:647(1991)所描述的那样进行制备。
[0035]
其他可检测的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物也可以用锝
‑
99m(
99m
tc)、
123
i和
111
in被检测到而用于spect成像。相应地被放射性标记的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以由本领域技术人员通过本领域熟知的并且由zhuang在nuclear medicine&biology 26(2):217
‑
24(1999)中或由kulkarni在nuclear medicine&biology 18(6):647
‑
654(1991)中或在国际原子能机构(international atomic energy agency)于2008年出版的技术报告466中描述的技术容易地进行制备。
[0036]
其中一个或多个原子被放射性核素或同位素替代的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物可以用作放射性示踪剂以测试来自宿主哺乳动物的细胞、组织或流体，并且鉴别宿主中的细菌感染(例如在人工瓣膜的表面处)的存在和重要性。
[0037]
如本文中使用的，术语“宿主哺乳动物”优选地是指人，但是也指动物。
[0038]
术语三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物是指下式(i)的化合物：
[0039][0040]
其中r1是任选地被一个或多个卤素原子取代的c3‑5烷基；r2是任选地被一个或多个卤素原子取代的苯基；r3和r4各自是羟基；r是xoh，其中x是ch2、och2ch2或键；
[0041]
或其药用盐或溶剂化物，或者其溶剂化物或这样的盐的溶剂化物，条件是当x是ch2或键时，r1不是丙基；当x是ch2并且r1是ch2ch2cf3、丁基或戊基时，r2处的苯基必须被氟取代；当x是och2ch2并且r1是丙基时，r2处的苯基必须被氟取代。
[0042]
无论是单独的还是作为另一个基团的一部分，烷基是直链的且完全饱和的。
[0043]
在一些实施方案中，r1可以表示任选地被一个或多个氟原子取代的c3‑5烷基。优选地，r1是3,3,3
‑
三氟丙基、丁基或丙基。
[0044]
在一些实施方案中，r2可以表示苯基或被一个或多个卤素原子取代的苯基。优选地，r2是被一个或多个氟原子取代的苯基。最优选地，r2是4
‑
氟苯基或3,4
‑
二氟苯基。
[0045]
在一些实施方案中，r可以表示xoh，其中x是ch2、och2ch2或键；优选地，r是oh或och2ch2oh。
[0046]
最优选的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物是其中r2表示4
‑
氟苯基或3,4
‑
二氟苯基和/
或其中r表示och2ch2oh的式(i)的化合物。
[0047]
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物是众所周知的化合物。它们可以根据us6,525,060中描述的方法获得，所述方法描述于us6,525,060的第3栏第26行至第8栏第14行，该文献通过引用结合于此。
[0048]
优选的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物是其中r表示oh或och2ch2oh和/或r2表示4
‑
氟苯基或3,4
‑
二氟苯基的衍生物。
[0049]
最优选的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物是：(1r
‑
(1α,2α,3β(1r*,2*),5β))
‑3‑
(7
‑
((2
‑
(3,4
‑
二氟苯基)环丙基)氨基)
‑5‑
((3,3,3
‑
三氟丙基)硫基)
‑
3h
‑
1,2,3
‑
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基)
‑5‑
(羟基)环戊烷
‑
1,2
‑
二醇；
[0050]
(1s
‑
(1α,2α,3β(1r*,2*),5β))
‑3‑
(7
‑
((2
‑
(3,4
‑
二氟苯基)环丙基)氨基)
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
1,2,3
‑
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基)
‑5‑
(2
‑
羟基乙氧基)环戊烷
‑
1,2
‑
二醇；
[0051]
(1s,2s,3r,5s)
‑3‑
[7
‑
[(1r,2s)
‑2‑
(3,4
‑
二氟苯基)环丙基氨基]
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基]
‑5‑
(2
‑
羟基乙氧基)
‑
1,2
‑
环戊烷二醇；
[0052]
(1s,2s,3r,5s)
‑3‑
[7
‑
[(1r,2s)
‑2‑
(4
‑
氟苯基)环丙基氨基]
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基]
‑5‑
(2
‑
羟基乙氧基)
‑
1,2
‑
环戊烷二醇)
[0053]
或其药用盐或溶剂化物，或者其溶剂化物或这样的盐的溶剂化物。
[0054]
用于预后和/或诊断的最优选的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物是如式(ii)所定义(并且在下文中也称为triafluocyl)的(1s,2s,3r,5s)
‑3‑
[7
‑
[(1r,2s)
‑2‑
(3,4
‑
二氟苯基)环丙基氨基]
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基]
‑5‑
(2
‑
羟基乙氧基)
‑
1,2
‑
环戊烷二醇)：
[0055][0056]
或其药用盐或溶剂化物，或者其溶剂化物或这样的盐的溶剂化物。
[0057]
用于预后和/或诊断的另一种最优选的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物是如式(iii)所定义(并且也称为fluometacyl)的(1s,2r,3s,4r)
‑4‑
[7
‑
[[(1r,2s)
‑2‑
(3,4
‑
二氟苯基)环丙基]氨基]
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
1,2,3
‑
三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基]
‑
1,2,3
‑
环戊烷三醇：
[0058][0059]
或其药用盐或溶剂化物，或者其溶剂化物或这样的盐的溶剂化物。
[0060]
在一些实施方案中，式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物的一个原子选自由以下各项组成的组：3h、
13
f、
18
f、
19
f、
11
c、
13
c、
14
c、
75
br、
76
br、
120
i、
123
i、
124
i、
125
i、
131
i、
15
o、
13
n、
78
br。
[0061]
在一些实施方案中，式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物的一个卤素取代基可以是
18
f或
123
i。
[0062]
在一些实施方案中，式(i)的三唑并(4,5
‑
d)嘧啶衍生物的一个卤素取代基可以是
18
f。
[0063]
在一些实施方案中，式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物中的r2的一个卤素取代基可以是
18
f。
[0064]
在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物以及药用添加剂，其用于在体内诊断和/或预后宿主哺乳动物中的细菌感染；
[0065]
在又一个方面，本发明提供了包含式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物和药用添加剂的药物组合物在体外预后和/或诊断细菌感染中的用途。
[0066]
药物组合物可以是干粉或具有生理相容性的液体组合物。在一些实施方案中，药用添加剂可以是辅助物质、防腐剂、溶剂和/或粘度调节剂。
[0067]
溶剂意指任何合适的生理相容性溶剂，诸如例如水、盐水或任何其他生理溶液、乙醇、甘油、油(如植物油)或其混合物。粘度调节剂意指例如糖聚合物(如羧甲基纤维素)、多糖(如糖精)等。
[0068]
在一些实施方案中，包含可检测标记物并且用作放射性示踪剂的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物或其药物组合物可以以与所选择的成像装置有关的剂量通过吸入、摄入或注射而局部地或系统地施用。施用可以是口服、肠胃外、局部、直肠、经鼻、阴道施用。
[0069]
肠胃外意指皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内等。
[0070]
施用至宿主哺乳动物的剂量水平取决于其年龄、体重、一般健康情况、性别、施用时间、施用形式等，并且将是本领域技术人员熟知的。根据所选择的成像技术，它们可以在0.001μg/kg/天和10,000mg/kg/天之间变化。
[0071]
在其他实施方案中，可以将包含可检测标记物并且用作放射性示踪剂的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物或其药物组合物以与所选择的成像装置有关的有效量添加到从宿主哺乳动物获得的样品中。
[0072]
从宿主哺乳动物获得的样品意指在其中可以确定细菌感染的细胞、组织或体液的
任何取样。这样的样品的实例包括血液、淋巴、尿液、活组织检查或骨髓。
[0073]
样品也可以是指植入物，在其表面上可以确定细菌感染。
[0074]
植入物意指用于在宿主哺乳动物中的临床使用的所有植入式外来材料，诸如用于假体关节、起搏器、植入式复律除颤器、血管内导管或导尿管、支架(包括冠状动脉支架)、人工心脏瓣膜、人工晶状体、牙科植入物等。
[0075]
在又一个方面，本发明还提供了一种对宿主哺乳动物中的细菌感染进行成像的方法，所述方法包括向宿主哺乳动物施用可检测量的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物的步骤。
[0076]
在另一个方面，本发明还提供了三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物在对细菌感染进行成像的体外方法中的用途。
[0077]
在一些实施方案中，成像的方法可以包括以下步骤：
[0078]
(a)向宿主哺乳动物施用可检测量的如上所述的包含可检测标记物的式(1)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物或可检测量的药物组合物；或向从宿主哺乳动物获得的样品中添加可检测量的如上所述的包含可检测标记物的式(1)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物或可检测量的药物组合物；和
[0079]
(b)通过成像技术诸如例如磁共振成像(mri)、单光子发射计算机断层扫描(spect)、正电子发射断层扫描成像(pet)、正电子发射断层扫描连同计算机断层扫描成像、正电子发射断层扫描连同磁共振成像，来对所述可检测的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物进行示踪；
[0080]
并且显示所述细菌感染的图像。
[0081]
在一个特别的实施方案中，成像技术是正电子发射断层扫描pet或单光子发射计算机断层扫描(spect)。
[0082]
可检测的式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物或其组合物的用途可用于显示细菌感染，但是也可用于监测宿主中的细菌感染的治疗。实际上，通过更好地了解细菌感染的严重程度，可以更好地选择恰当的治疗并且减少细菌耐药性的潜在发展。
[0083]
如果在治疗感染(例如通过施用抗生素)之前将可检测的式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物或其组合物施用或添加到从宿主获得的样品中，则将可以向宿主施用正确有效量的抗生素。
[0084]
在又一个方面，本发明还提供了一种示踪剂，优选一种正电子发射断层扫描(pet)示踪剂或单光子发射计算机断层扫描(spect)示踪剂，该示踪剂包含式(i)的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物，其用于在体内预后和/或诊断细菌感染或用于在体外预后和/或诊断细菌感染。
[0085]
在一些实施方案中，示踪剂可以是成像示踪剂。在一些实施方案中，示踪剂可以包括药物组合物。
[0086]
现在将参考附图中的以下图来举例说明本发明，这些附图不意图限制所要求保护的发明的范围：
[0087]
图1示出了举例说明实施例1的步骤(i)中详述的标记前体的合成的反应方案；和
[0088]
图2示出了举例说明实施例1的步骤(ii)中详述的其他标记前体的合成的反应方案。
[0089]
在以下实施例中将更详细地举例说明本发明，这些实施例不意图以任何方式限制
所要求保护的发明的范围。
[0090]
实施例1：作为包含可检测标记物
18
f的三唑并[4,5
‑
d]嘧啶衍生物的
18
f
‑
triafluocyl的制备
[0091]
i)图1所示的第一标记前体的合成：(3
‑
((3as,4r,6s,6ar)
‑6‑
(2
‑
((叔丁氧基羰基)氧基)乙氧基)
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯(dioxol)
‑4‑
基)
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑7‑
基)((1r,2s)
‑2‑
(3
‑
氟
‑4‑
(三甲基甲锡烷基)苯基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(5)。
[0092]
在第一步骤(i)中，2
‑
(((3ar,4s,6r,6as)
‑6‑
((5
‑
氨基
‑6‑
氯
‑2‑
(丙硫基)嘧啶
‑4‑
基)氨基)
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)氧基)乙醇(1)通过2
‑
(((3ar,4s,6r,6as)
‑6‑
氨基
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)氧基)乙醇与4,6
‑
二氯
‑2‑
(丙硫基)嘧啶
‑5‑
胺的反应获得并且在密封容器中在110℃在乙腈中进行。
[0093]
下一个步骤(ii)在于借助于在5℃至20℃的温度下在乙酸中与亚硝酸钠的重氮化反应的中间体1的闭环反应(步骤ii)，得到2
‑
(((3ar,4s,6r,6as)
‑6‑
(7
‑
氯
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基)
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)氧基)乙醇(2)。
[0094]
在步骤iii中，2
‑
(((3ar,4s,6r,6as)
‑6‑
(7
‑
(((1r,2s)
‑2‑
(4
‑
溴
‑3‑
氟苯基)环丙基)氨基)
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑3‑
基)
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)氧基)乙醇(3)通过在例如20℃的温度下用2
‑
(4
‑
溴
‑3‑
氟苯基)环丙胺盐酸盐对中间体2的氯原子的亲核取代获得。
[0095]
然后，在例如20℃的温度下在四氢呋喃中，在3与二碳酸二叔丁酯反应后，将3的敏感氨基和羟基官能团用叔丁氧基羰基进行保护(步骤iv)，得到((1r,2s)
‑2‑
(4
‑
溴
‑3‑
氟苯基)环丙基)(3
‑
((3as,4r,6s,6ar)
‑6‑
(2
‑
((叔丁氧基羰基)氧基)乙氧基)
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑7‑
基)氨基甲酸叔丁酯(4)。
[0096]
在下一个步骤(步骤v)中，在作为催化剂的四(三苯基膦)钯(0)的存在下，通过使用六甲基二锡烷用三甲基甲锡烷基对(4)的溴原子的亲核取代来活化标记位置，得到(3
‑
((3as,4r,6s,6ar)
‑6‑
(2
‑
((叔丁氧基羰基)氧基)乙氧基)
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑7‑
基)((1r,2s)
‑2‑
(3
‑
氟
‑4‑
(三甲基甲锡烷基)苯基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(5)。
[0097]
图1示出的中间体产物(1)至(5)在下文中称为中间体(1)至中间体(5)
[0098]
如下获得中间体(1)：将4,6
‑
二氯
‑2‑
(丙硫基)嘧啶
‑5‑
胺(1.0g，4.2mmol)、2
‑
(((3ar,4s,6r,6as)
‑6‑
氨基
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)氧基)乙醇(1.17g，5.4mmol)和三乙胺(0.6ml，4.2mmol)在乙腈(10ml)中的混合物引入密封容器中并且在110℃加热过夜。在将溶剂蒸发后，将残余物通过硅胶柱色谱纯化。
[0099]
收率：77％。
[0100]
熔点：112
‑
114℃。
[0101]1h nmr(cdcl3)δ1.03(t,j＝7.4hz,3h,sch2ch2ch3),1.26(s,3h,ch3),1.43(s,3h,ch3),1.75(m,2h,sch2ch2ch3),1.92(d,j＝14.5hz,1h,5
’‑
ha),2.28(ddd,j＝14.5hz/
5.9hz/4.4hz,1h,5
’‑
hb),2.59(bs,1h,oh),2.99(ddd,j＝13.4hz/8.2hz/6.4hz，1h,scha),3.14(ddd,j＝13.5hz/8.2hz/6.4hz,1h,schb),3.38(bs,2h,nh2),3.60(ddd,j＝9.9hz/6.1hz/2.6hz,1h,ocha),3.70(ddd,j＝9.9hz/5.8hz/2.5hz,1h,ochb),3.79(m，2h,och2ch2oh),3.97(d,j＝4.1hz,1h,4
’‑
h),4.53(dd,j＝5.4hz/1.2hz,1h,3a
’‑
h),4.59(m,1h,6
’‑
h),4.61(dd,j＝5.5hz/1.8hz,1h,6a
’‑
h)，6.17(d,j＝8.4hz,1h,nh)。
13
c nmr(cdcl3)δ13.5，23.2,23.8,26.2,32.5,33.2，56.8,61.9,70.4,82.8,84.5,85.3,110.3,116.9,144.5,154.4,162.0。
[0102]
如下获得中间体(2)：向在冰浴上冷却的(1)(1.0g，2.4mmol)在乙酸(10ml)中的溶液中添加nano2(225mg，3.2mmol)。使所得的混合物在1小时内达到室温，然后添加水(40ml)。将所得的混合物用乙酸乙酯(3x 50ml)萃取，并且将合并的有机层用mgso4干燥并且蒸发，得到油状残余物。
[0103]
收率：94％。
[0104]
熔点：油状物。
[0105]1h nmr(cdcl3)δ1.09(t,j＝7.4hz,3h,sch2ch2ch3),1.37(s,3h,ch3),1.55(s,3h,ch3),1.83(h,j＝7.4hz,2h,sch2ch2ch3),2.14(t,j＝6.0hz,1h,oh),2.54(m,1h,5
’‑
ha),2.70(m,1h,5
’‑
hb),3.21(t,j＝7.2hz,2h,sch2ch2ch3),3.49
‑
3.65(m,4h,och2ch2oh),4.05(m,1h,4
’‑
h),4.88(d,j＝6.3hz,1h,3a
’‑
h),5.21(td,j＝7.4hz/6.4hz/2.5hz,1h,6
’‑
h),5.53(dd,j＝6.3hz/2.1hz,1h,6a
’‑
h)。
13
c nmr(cdcl3)δ13.6,22.3,24.5,26.8,33.9,35.9,61.8,63.4，70.7,82.9，83.6,84.0,112.4,132.2,150.7,153.4,171.8。
[0106]
中间体(3)通过以下方式获得：将(2)(0.5g，1.16mmol)、2
‑
(4
‑
溴
‑3‑
氟苯基)环丙胺盐酸盐(0.3g，1.16mmol)与三乙胺(0.21ml，1.45mmol)在乙腈(10ml)中混合，并且使所得的混合物在室温反应2小时。在将溶剂蒸发后，将残余物通过硅胶柱色谱纯化。
[0107]
收率：98％。
[0108]
熔点：122
‑
124℃。
[0109]1h nmr(dmso
‑
d6)δ0.82(t,j＝7.4hz,2.4h,sch2ch2ch3主要),0.99(t,j＝7.3hz,0.6h,sch2ch2ch3次要)，1.26(s，3h，ch3),1.42(m,1h,3
’‑
ha),1.48(s，3h,ch3),1.51(m,2h,sch2ch2ch3主要),1.59(dt,j＝10.0hz/5.4hz，1h,3
’‑
hb),1.70(h,j＝7.3hz,0.4h,sch2ch2ch3次要),2.14(ddd,j＝9.6hz/6.4hz/3.3hz，0.8h，2
’‑
h主要)，2.24(m,0.2h,2
’‑
h次要)，2.52(m,1h，5
”’‑
ha)，2.65(m,1h，5
”’‑
hb)，2.87(m，1.6h,sch2ch2ch3主要)，3.08(m，0.4h，sch2ch2ch3次要)，3.19(dd,j＝7.6hz/4.2hz,0.8h，1
’‑
h主要)，3.39
‑
3.51(m，4h，och2ch2oh)，3.75(m，0.2h，1
’‑
h次要)，4.00(m，1h，4
”’‑
h),4.56(t，j＝5.2hz，1h,oh)，4.64(m，0.2h，3a
”’‑
h次要)，4.67(dt，j＝7.0hz/3.3hz，0.8h，3a
”’‑
h主要)，5.01(m，1h，6
”’‑
h),5.16(m，0.2h，6a
”’‑
h次要)，5.20(dt，j＝7.3hz/4.8hz,0.8h，6a
”’‑
h主要)，6.97(d,j＝7.1hz,0.2h,6
”‑
h次要),7.03(dd,j＝8.3hz/1.9hz,0.8h,6
”‑
h主要),7.18(d,j＝10.0hz,0.2h,2
”‑
h次要),7.24(dd,j＝10.4hz/1.9hz,0.8h,2
”‑
h主要),7.59(t,j＝7.9hz,1h,5
”‑
h),9.01(d,j＝4.7hz,0.2h，nh次要)，9.41(dd，j＝3.9hz/1.2hz,0.8h,nh主要)。
13
c nmr(dmso
‑
d6)δ13.0,15.3,22.3,24.3,24.8,26.9,32.4,34.5,35.4,60.0,61.4,70.7，81.9,83.7,104.5,112.5,114.1,123.2，123.9,132.9,144.3,149.1,153.9，157.3，159.3，169.5。
[0110]
中间体(4)通过以下方式获得：将(3)(0.62g，1.0mmol)、二碳酸二叔丁酯(1g，
4.6mmol)与4
‑
(二甲基氨基)吡啶(30mg，cat.)在四氢呋喃(10ml)中混合，并且使所得的混合物在室温反应过夜。在将溶剂蒸发后，将残余物通过硅胶柱色谱纯化。
[0111]
收率：56％
[0112]
熔点：156
‑
158℃。
[0113]1h nmr(dmso
‑
d6)δ0.99(td,j＝7.3hz/2.6hz,3h,sch2ch2ch3),1.28(s,3h,ch3),1.35(m，1h,3
’‑
ha),1.39(s,9h,c(ch3)3),1.40(s,9h,c(ch3)3),1.50(s,3h，ch3),1.55(qd，j＝7.2hz/2.2hz,1h,3
’‑
hb),1.70(m，2h，sch2ch2ch3)，2.26(m，1h，2
’‑
h)，2.61(m，1h，5
”’‑
ha)，2.73(m，1h，5
”’‑
hb),3.05(m,2h，sch2ch2ch3)，3.27(m，1h,1
’‑
h)，3.62(m,2h，och2ch2oc(ch3)3),4.04(m，3h,och2ch2oc(ch3)3/4
”’‑
h)，4.71(dd，j＝7.2hz/3.0hz，1h,3a
”’‑
h),5.15(m，1h，6
”’‑
h)，5.27(m,1h，6a
”’‑
h),7.02(dd，j＝8.3hz/1.9hz,1h,6
”‑
h),7.24(dt,j＝10.4hz/1.8hz,1h,2
”‑
h),7.59(t,j＝7.9hz,1h,5
”‑
h)。
13
c nmr(dmso
‑
d6)δ13.3,18.1,22.1,24.7,26.0,26.8,27.3,27.4,32.6,35.1,39.0,61.8,65.5,66.7,81.4,82.0,82.1,82.8,83.6,104.9,112.5,114.7,124.3,127.8,132.9,143.4,150.6,152.3,152.9,154.3,157.2,159.1,169.1。
[0114]
前体1：(3
‑
((3as,4r,6s,6ar)
‑6‑
(2
‑
((叔丁氧基羰基)氧基)乙氧基)
‑
2,2
‑
二甲基四氢
‑
3ah
‑
环戊二烯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯
‑4‑
基)
‑5‑
(丙硫基)
‑
3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
d]嘧啶
‑7‑
基)((1r,2s)
‑2‑
(3
‑
氟
‑4‑
(三甲基甲锡烷基)苯基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(5)，通过以下方式获得：将(4)(0.41g，0.5mmol)、六甲基二锡烷(0.49g，1.5mmol)与四(三苯基膦)钯(0)(10mg，cat.)在无水甲苯(5ml)中混合，并且引入到密封容器中并且在氮气下在100℃加热过夜。在冷却后，添加乙酸乙酯(50ml)并且将不溶物过滤掉。将滤液蒸发至干，并且将所得的残余物通过硅胶柱色谱纯化。
[0115]
收率：65％
[0116]
熔点：60
‑
62℃。
[0117]1h nmr(dmso
‑
d6)δ0.30(s,9h,sn(ch3)3),0.96(td,j＝7.3hz/2.9hz,3h,sch2ch2ch3),1.28(s,3h,ch3),1.32(m,1h,3
’‑
ha),1.39(s,9h,c(ch3)3),1.40(s,9h,c(ch3)3),1.50(m,4h,ch3/3
’‑
hb),1.67(m,2h,sch2ch2ch3),2.23(m,1h,2
’‑
h),2.58(m,1h,5
”’‑
ha),2.72(m,1h,5
”’‑
hb),3.03(m,2h,sch2ch2ch3),3.24(m,1h,1
’‑
h),3.61(m,2h,och2ch2oc(ch3)3),4.03(m,3h,och2ch2oc(ch3)3/4
”’‑
h),4.71(d,j＝7.1hz,1h,3a
”’‑
h),5.15(t,j＝9.9hz,1h,6
”’‑
h),5.27(dt,j＝7.9hz/4.4hz,1h,6a
”’‑
h),6.95(m,1h,2
”‑
h),7.02(d,j＝7.4hz,1h,6
”‑
h),7.59(m,1h,5
”‑
h)。
13
c nmr(dmso
‑
d6)δ
‑
8.9,13.3,17.9,22.1,24.7,26.2,26.8,27.3,27.4,32.6,35.1,39.0,61.8,65.5,66.7,81.4,82.0,82.1,82.7,83.6,112.1,112.5,122.7,123.6,127.9,136.4,144.2,150.6,152.4,152.9,154.4,166.1，167.9,169.1。
[0118]
ii)如图2所示的其他标记前体的合成
[0119]
其他前体可以使用羟基(甲苯磺酰基氧基)碘苯由(5)合成(步骤vi)，得到相应的甲苯磺酸碘鎓(6)，或者使用碘由(5)合成(步骤vii)，得到(7)，随后添加麦氏酸(meldrum’s acid)(步骤viii)，得到碘鎓叶立德(8)。
[0120]
标记前体(6)通过在0℃向(5)(0.27g，0.3mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中添加羟基(甲苯磺酰基氧基)碘苯(0.13g，0.33mmol)而获得。想将溶剂蒸发后，将残余物通过硅
letters(2016),18(20),5440
‑
5443)中。
[0131]
关于前体8，在rotstein,benjamin h.；stephenson,nickeisha a.；vasdev,neil；liang,steven h.的spirocyclic hypervalent iodine(iii)
‑
mediated radiofluorination of non
‑
activated and hindered aromatics(非活化和受阻芳烃的螺环高价碘(iii)介导的放射性氟化)(来自nature communications(2014),5,4365)中。
[0132]
实施例2：体外
18
f
‑
triafluocyl和
18
f
‑
fdg摄取测定的比较
[0133]
为了评价
18
f
‑
triafluocyl到细菌中的选择性摄取及其对细菌感染的特异性诊断的效用，我们进行了体外测定，其中我们比较了
18
f
‑
triafluocyl和
18
f
‑
fdg到细菌中的摄取。
[0134]
为此，将表皮葡萄球菌(s.epidermidis)细菌与
18
f
‑
fdg或
18
f
‑
triafluocyl一起温育，并且如下测定与细菌细胞相关的相对放射性。
[0135]
在以250rpm振荡的情况下，将表皮葡萄球菌细菌在胰蛋白酶大豆肉汤(tsb)中在37℃生长过夜。将过夜培养物稀释至od
600 0.1，并且温育直到达到中指数期。将1x10
8 cfu重悬于1ml的由sigma
‑
aldrich(r7638)提供的细胞培养基rpmi 1640中。
[0136]
将细菌和没有细菌的对照与如实施例1所述制备的2mbq 18
f
‑
fdg或2mbq 18
f
‑
triafluocyl在37℃温育1小时。细菌通过离心(600
×
g，5分钟)收获，并且通过连续离心洗涤三次。在洗涤后，将细胞转移到闪烁瓶中。将上清液也收集在闪烁瓶中。通过γ计数器(2470wizard
2tm
(perkin elmer))对细菌和上清液进行计数。
[0137]
结果以计数/分钟获得。结果针对对照(无细菌)并且通过计算含有细胞的闪烁瓶中的活性相比于总计数(细胞和上清液合并)的百分比进行标准化。
[0138]
在与细菌一起温育后，我们发现与细菌细胞相关的
18
f
‑
triafluocyl的相对活性是
18
f
‑
fdg的活性的1.5至2倍高。
[0139]
实施例3：在体外
18
f
‑
triafluocyl用于预后和/或诊断来自从宿主哺乳动物(人)获得的血液样品的细菌感染的用途。
[0140]
由于本领域公知triafluocyl(也称为替格瑞洛(ticagrelor))可逆地结合血小板p2y12受体，并且血小板在细菌感染部位处积聚(如在hamzeh
‑
cognasse h,damien p,chabert a,pozzetto b,cognasse f,garraud o.platelets and infections
‑
complex interactions with bacteria(血小板和感染
‑
与细菌的复杂相互作用).front immunol.2015；6:82.2015年2月26日发表.doi:10.3389/fimmu.2015.00082中所描述的)，所以我们还比较了在存在或不存在细菌的情况下到人血小板中的放射性示踪剂摄取。
[0141]
人洗涤的血小板的制备：在含有1u/ml腺苷三磷酸双磷酸酶的酸性柠檬酸盐葡萄糖(acd：93mm na3‑
柠檬酸盐、7mm柠檬酸、14mm葡萄糖，ph 6.0)上以acd与血液的体积比为1:6从健康志愿者收集血液样品。将血液以800
×
g离心5秒，随后以100
×
g离心5分钟，以获得富含血小板的血浆(prp)。将prp在含有1u/ml腺苷三磷酸双磷酸酶((来自马铃薯的腺苷三磷酸双磷酸酶，i级(a6132 sigma
‑
aldrich))的acd中稀释3倍，并且以1000
×
g离心以获得血小板团粒。将血小板团粒以3
×
108ml
‑1的浓度重悬于台氏缓冲液(tyrode’s buffer)(137mm nacl、12mm nahco3、2mm kcl、0,34mm na2hpo4、1mm mgcl2、5.5mm葡萄糖、5mm hepes、来自sigma aldrich a3294的0.35％牛血清白蛋白)中，并且hepes是指4
‑
(2
‑
羟乙基)哌嗪
‑1‑
乙磺酸、n
‑
(2
‑
羟乙基)哌嗪
‑
n
′‑
(2
‑
乙磺酸)(h4034，sigma
‑
aldrich)。
[0142]
将细菌、血小板和没有细菌的对照与2mbq 18
f
‑
fdg或2mbq
18
f
‑
triafluocyl在37℃温育1小时。细菌和血小板通过离心(1000
×
g，10分钟)收获，并且通过连续离心(1000
×
g，10分钟)洗涤三次。将上清液收集在闪烁瓶中。在洗涤后，将细胞转移到闪烁瓶中。通过γ计数器(2470wizard
2tm
(perkin elmer))对细胞和上清液进行计数。
[0143]
结果以计数/分钟获得。结果针对对照(无细胞)并且通过计算含有细胞的闪烁瓶中的活性相比于总计数(细胞和上清液合并)的百分比进行标准化。
[0144]
结果证实了
18
f
‑
triafluocyl摄取到血小板中，而
18
f
‑
fdg未被转运到这些细胞中。此外，在与含有细菌的血小板悬浮液温育后，我们发现与细胞混合物相关的
18
f
‑
triafluocyl的相对活性是
18
f
‑
fdg的活性的约10倍高。
[0145]
实施例4：
18
f
‑
triafluocyl用于预后和/或诊断从人宿主获得的哺乳动物细胞上的细菌感染的选择性用途
[0146]
在以250rpm振荡的情况下，将表皮葡萄球菌细菌在胰蛋白酶大豆肉汤(tsb)中在37℃生长过夜。将过夜培养物稀释至od
600 0.1，并且温育直到达到中指数期。将1x10
8 cfu重悬于1ml rpmi 1640中。
[0147]
将thp1(tib
‑
202
tm)
和hl60(ccl
‑
240
tm)
细胞系在37℃和5％co2下在补充有l
‑
谷氨酰胺、10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的rpmi 1640组织培养基中生长。将ht29细胞系(htb
‑
38)在37℃和5％co2下在mccoy’s 5a培养基和10％胎牛血清中生长。
[0148]
收获非贴壁细胞系(hl60，thp1；1
×
106个细胞ml
‑1)，洗涤，并且重悬于1ml组织培养基中。将贴壁细胞ht29以80％汇合度保持在6孔板中。
[0149]
将细菌、细胞系和没有细胞的对照与2mbq
18
f
‑
fdg或2mbq
18
f
‑
替格瑞洛在37℃温育1小时。细菌和非贴壁细胞通过离心(600
×
g，5分钟)收获，并且通过连续离心洗涤三次。将细胞上清液收集在闪烁瓶中。在洗涤后，将细胞转移到闪烁瓶中。将贴壁细胞用新鲜培养基(mccoy’s 5a培养基加10％胎牛血清)洗涤三次。将上清液收集到闪烁瓶中。通过胰蛋白酶处理分离贴壁细胞，并且将其放入闪烁瓶中。用于细胞和上清液的闪烁瓶通过γ计数器计数。结果以计数/分钟获得。结果针对对照(无细胞)并且通过计算含有细胞的闪烁瓶中的活性相比于总计数(细胞和上清液合并)的百分比进行标准化。
[0150]
结果证实了
18
f
‑
triafluocyl摄取到细菌中，同时未观察到任何哺乳动物细胞、白细胞(thp1和hl
‑
60)或肿瘤(ht29)细胞中的摄取。相比之下，我们观察到
18
f
‑
fdg摄取到三种哺乳动物细胞系中。因此，
18
f
‑
triafluocyl可以用于人源样品中的细菌感染的特异性体外检测。
[0151]
实施例5：体内预后和/或诊断的方案
[0152]
已经建立了用于在体内预后和/或诊断患者中的细菌感染的测试方案，并且适用于使用
18
f
‑
triafluocyl作为放射性示踪剂。
[0153]
开发下文的方案用于pet
‑
ct成像，但是本领域技术人员可以容易地将其外推到其他成像技术如spect。
[0154]
该方案基于每位患者的相同图像采集：
[0155]
在至少禁食6小时后，通过外周静脉导管注射3.7mbq
18
f
‑
triafluocyl/kg体重(平均活度/患者：277mbq，范围：202
‑
394mbq)。将患者置于安静的房间里，并且指示不要移动。
在注射18f
‑
triafluocyl后大约1小时(平均：69分钟，范围：54
‑
100分钟)，用pet
‑
ct扫描仪进行静态全身检查。获取体积低剂量轴向ct图像。然后，在每个床位记录发射原始数据图像，并且在基于ct衰减模型的散射矫正(卷积减法)和归一化校正后重建为重叠的冠状切片。
[0156]
该方案可以适用于患有细菌感染的患者，从而允许在患者身体的所有组织如肌肉、上皮、结缔组织和神经中进行深层定位，而本方案不易检测到患有癌症或无菌性炎症的患者。