3D人肝器官模型构建方法、3D人肝器官模型及其应用与流程

技术特征：
1.一种3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将人原代肝脏细胞或其与肝脏非实质细胞的混合细胞、或人肝癌细胞系配制成单细胞悬液；将所述单细胞悬液与基质材料混合，得混合细胞悬液；将所述混合细胞悬液接种于3d器官芯片的培养微孔中，然后置于37℃条件下培养，得到成胶3d器官芯片；其中，每个所述培养微孔中，混合细胞悬液的接种体积为6～10μl，人原代肝脏细胞的接种细胞个数为2500～25000个，人肝癌细胞系的接种细胞个数为500～10000个；向所述成胶3d器官芯片的储液孔内加入培养基，再置于37℃条件下培养，得到3d人肝器官模型。2.根据权利要求1所述的3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，将人原代肝脏细胞消化成单个细胞悬液，离心重悬，然后配制成密度为4.45～44.5
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106cell/ml的单细胞悬液。3.根据权利要求2所述的3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，将人原代肝脏细胞复苏并稀释成单个细胞悬液，离心重悬，然后配制成密度为8.9
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106cell/ml的单细胞悬液。4.根据权利要求2所述的3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，所述人原代肝脏细胞的接种细胞个数为5000～15000个。5.根据权利要求1所述的3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，将人肝癌细胞系hepg2消化成单个细胞悬液，离心重悬，然后配制成密度为0.89～8.9
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106cell/ml的单细胞悬液。6.根据权利要求5所述的3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，将人肝癌细胞系hepg2消化成单个细胞悬液，离心重悬，然后配制成密度为3.56
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106cell/ml的单细胞悬液。7.根据权利要求5所述的3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，所述人肝癌细胞系的接种细胞个数为500～3000个。8.根据权利要求1至7中任一项所述的3d人肝器官模型构建方法，其特征在于，所述向成胶3d器官芯片的储液孔内加入培养基之后，还包括：向所述成胶3d器官芯片的防蒸发结构中加入缓冲液。9.一种3d人肝器官模型，其特征在于，采用如权利要求1至8中任一项所述的构建方法构建获得。10.如权利要求9所述的3d人肝器官模型用于肝毒性药物筛选的应用。

技术总结
本申请涉及生物组织工程技术领域，公开3D人肝器官模型构建方法，包括：将人原代肝脏细胞或其与肝脏非实质细胞的混合细胞、或人肝癌细胞系配制成单细胞悬液，将其与基质材料混合得混合细胞悬液；将混合细胞悬液接种于3D器官芯片的培养微孔中，然后置于37℃条件下培养，得到成胶3D器官芯片；向其储液孔内加入培养基，培养得到3D人肝器官模型。与其他2D人肝器官模型比，构建得到的3D人肝器官模型对肝毒性药物的响应敏感度显著增强，且已报道有肝毒性药物的肝毒性损伤效应更强。与动物模型相比，该3D人肝器官模型可以有效消除种属差异带来的筛选差异。因此，该3D人肝脏器官模型可以体外检测出更多有肝毒性损伤的药物，且与临床报道更为接近。道更为接近。道更为接近。


技术研发人员：肖荣荣 周宇
受保护的技术使用者：北京大橡科技有限公司
技术研发日：2020.05.15
技术公布日：2021/11/19