一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式的制作方法

1.本发明涉及水解丝胶蛋白技术领域，具体为一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式。


背景技术：

2.自由基引发氧化作用，人体体外发生氧化，光和空气容易产生活性氧化酶和促进络氨酸活性活化，使皮肤产生皱纹，斑点，变黑老化，引发皮肤癌变的可能。所以清除皮肤表皮自由基能有效的防止老化初期反应能达到抗初老的功效。
3.丝胶蛋白本身因为大分子稳定结构，不具备和自由基反应并清除自由基，但丝胶蛋白不完全水解物质对于去除羟基，超氧自由基的能力较强；因而提出一种能够使不完全水解的蛋白成分维持稳定的水解丝胶蛋白则能够提高其清除自由基的能力。
4.基于此，本发明设计了一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式，以解决上述背景技术中提出的丝胶蛋白本身因为大分子稳定结构，不具备和自由基反应并清除自由基，但丝胶蛋白不完全水解物质对于去除羟基，超氧自由基的能力较强；因而提出一种能够使不完全水解的蛋白成分维持稳定的水解丝胶蛋白则能够提高其清除自由基能力的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式，包括如下步骤：第一步：取100g 丝胶蛋白粉末溶于1l蒸馏水中，配成浓度为0.1g/ml的a溶液；第二步：取100g蛋白酶溶于1l蒸馏水，配成ph为7.0 、浓度为0.1g/ml的b溶液；第三步：将10g海藻糖粉末，10g玻尿酸按照1：1配比溶于1l蒸馏水，制备成浓度为0.01g/ml的c溶液；第四步：将a溶液加热到50度，按照a溶液的1/100的配比加入b溶液（酶和蛋白的比例是1:100）维持温度，并测试ph值为7，如条件变化和用naho进行调节ph值维持在7；第五步：反应两小时后将溶液加热到80
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100度破坏蛋白酶，终止酶的水解反应，降温到室温后加入1/10 的c溶液进行稳定。
7.与现有技术相比，本发明的有益效果为：海藻糖和玻尿酸可保护水解蛋白肽不再发生水解状态，海藻糖是一种稳定的非还原性双糖，性质非常稳定，能够在高温高寒干燥失水的恶劣的条件下在细胞表面形成特殊的保护膜，有效保护生物分子结构不被破坏，是一种非常有效的生物活性物质的稳定剂和保护剂，能够使不完全水解的蛋白成分维持稳定，因而能够达到最佳清除自由基的稳定状态，且海藻糖和玻尿酸1:1的配比的稳定剂具有稳定和修复皮肤损伤的功效。
附图说明
8.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
9.图1为多组酶和蛋白的浓度比以及多组反应时间的清除率结果对比示意图；图2为a溶液和b溶液的偏差平方和、自由度、f值和显著性的结果对比示意图；图3为风味蛋白酶不完全水解丝胶肽氨基酸组成的多组检测数据对比示意图。
具体实施方式
10.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
11.实施案例一：一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式，包括如下步骤：第一步：取100g 丝胶蛋白粉末溶于1l蒸馏水中，配成浓度为0.1g/ml的a溶液；第二步：取100g蛋白酶溶于1l蒸馏水，配成ph为7.0 、浓度为0.1g/ml的b溶液；第三步：将10g海藻糖粉末，10g玻尿酸按照1：1配比溶于1l蒸馏水，制备成浓度为0.01g/ml的c溶液；第四步：将a溶液加热到50度，按照a溶液的1/100的配比加入b溶液（酶和蛋白的比例是1:100）维持温度，并测试ph值为7，如条件变化和用naho进行调节ph值维持在7；第五步：反应两小时后将溶液加热到80
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100度破坏蛋白酶，终止酶的水解反应，降温到室温后加入1/10 的c溶液进行稳定。
12.实施案例二：本实施案例设置多组酶和蛋白的浓度比以及多组反应时间，对其清除率进行比对，结果请参阅图1
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2，其中清除率的计算采用清除自由基（oh）能力测定方法。
13.由图1可知，该蛋白酶水解最佳条件为浓度0.1g/ml、反应温度为50摄氏度、水解时间为2小时的溶液、丝胶蛋白浓度和酶浓度为100：1时抗氧化能力（即清除自由基（oh）能力）最强。
14.实施案例三：本实施案例对风味蛋白酶不完全水解丝胶肽氨基酸的组成进行检测，并与加入稳定剂c溶液后的数据进行对比，结果请参阅图3。
15.由图3可知，即便是高温破坏水解酶停止反应，依然有一部分水解酶会继续与丝胶蛋白发生水解反应，溶液静置1小时后，通过质谱发现水解蛋白酶的物质有改变，不能达到最佳清除自由基的稳定状态。因此当原液加温破坏酶后加入1%海藻糖和玻尿酸原液（1:1）可保护水解蛋白肽不再发生水解状态，海藻糖是一种稳定的非还原性双糖，性质非常稳定，能够在高温高寒干燥失水的恶劣的条件下在细胞表面形成特殊的保护膜，有效保护生物分子结构不被破坏，是一种非常有效的生物活性物质的稳定剂和保护剂。而海藻糖和玻尿酸
1:1的配比的稳定剂具有稳定和修复皮肤损伤的作用，尤其是晒伤的功效。加入海藻糖和玻尿酸的稳定剂后，再次质谱发现不完全水解的蛋白成分维持稳定。
16.本发明的水解丝胶蛋白加入海藻糖和玻尿酸做为稳定剂，能够使不完全水解的蛋白成分维持稳定，因而能够达到最佳清除自由基的稳定状态，且海藻糖和玻尿酸1:1的配比的稳定剂具有稳定和修复皮肤损伤的功效。
17.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
18.以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。


技术特征：
1.一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式，其特征在于，包括如下步骤：第一步：取100g 丝胶蛋白粉末溶于1l蒸馏水中，配成浓度为0.1g/ml的a溶液；第二步：取100g蛋白酶溶于1l蒸馏水，配成ph为7.0 、浓度为0.1g/ml的b溶液；第三步：将10g海藻糖粉末，10g玻尿酸按照1：1配比溶于1l蒸馏水，制备成浓度为0.01g/ml的c溶液；第四步：将a溶液加热到50度，按照a溶液的1/100的配比加入b溶液（酶和蛋白的比例是1:100）维持温度，并测试ph值为7，如条件变化和用naho进行调节ph值维持在7；第五步：反应两小时后将溶液加热到80
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100度破坏蛋白酶，终止酶的水解反应，降温到室温后加入1/10 的c溶液进行稳定。

技术总结
本发明公开了一种不完全酶切丝胶蛋白抗氧化、抗初老原液制备方式，包括如下步骤：首先取100g丝胶蛋白粉末溶于1L蒸馏水中，配成浓度为0.1g/ml的A溶液；取100g蛋白酶溶于1L蒸馏水，配成PH为7.0、浓度为0.1g/ml的B溶液；将10g海藻糖粉末，10g玻尿酸按照1：1配比溶于1L蒸馏水，制备成浓度为0.01g/ml的C溶液；将A溶液加热到50度，按照A溶液的1/100的配比加入B溶液（酶和蛋白的比例是1:100）维持温度，并测试PH值为7，如条件变化和用NAHO进行调节PH值维持在7；反应两小时后将溶液加热到80


技术研发人员：刘牧青
受保护的技术使用者：伊深细胞生物技术（上海）有限公司
技术研发日：2021.09.08
技术公布日：2021/11/14