一组用于检测稻曲病菌交配型的引物组、试剂或试剂盒及其应用和方法与流程

技术特征：
1.一组用于检测稻曲病菌交配型的引物组，其特征在于，所述引物组包括第一引物组和第二引物组；所述第一引物组包括mat1
‑1‑
2外引物组和mat1
‑1‑
2内引物组；所述mat1
‑1‑
2外引物组包括mat1
‑1‑2‑
f3和mat1
‑1‑2‑
b3；所述mat1
‑1‑2‑
f3的核苷酸序列如seq id no.1所示；所述mat1
‑1‑2‑
b3的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述mat1
‑1‑
2内引物组包括mat1
‑1‑2‑
fip和mat1
‑1‑2‑
bip；所述mat1
‑1‑2‑
fip的核苷酸序列如seq id no.3所示；所述mat1
‑1‑2‑
bip的核苷酸序列如seq id no.4所示；所述第二引物组包括mat1
‑2‑
1外引物组和mat1
‑2‑
1内引物组；所述mat1
‑2‑
1外引物组包括mat1
‑2‑1‑
f3和mat1
‑2‑1‑
b3；所述mat1
‑2‑1‑
f3的核苷酸序列如seq id no.5所示；所述mat1
‑2‑1‑
b3的核苷酸序列如seq id no.6所示；所述mat1
‑2‑
1内引物组包括mat1
‑2‑1‑
fip和mat1
‑2‑1‑
bip；所述mat1
‑2‑1‑
fip的核苷酸序列如seq id no.7所示；所述mat1
‑2‑1‑
bip的核苷酸序列如seq id no.8所示。2.权利要求1所述的引物组在制备检测或辅助检测稻曲病菌交配型的工具中的应用。3.一种用于检测稻曲病菌交配型的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1所述的引物组。4.权利要求1所述的引物组或权利要求3所述的试剂或试剂盒在检测或辅助检测稻曲病菌交配型中的应用。5.一种检测稻曲病菌交配型的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测样品的dna为模板dna，与权利要求1所述的引物组中的第一引物组或权利要求3所述的试剂盒中的第一引物组混合后进行lamp扩增；以待测样品的dna为模板dna，与权利要求1所述的引物组中的第二引物组或权利要求3所述的试剂盒中的第二引物组混合后进行lamp扩增；如果采用所述第一引物组能够实现以所述dna为模版的特异性扩增，则待测样品取自mat1
‑
1交配型菌株；如果采用所述第二引物组能够实现以所述dna为模版的特异性扩增，则待测样品取自mat1
‑
2交配型菌株；第一引物组进行lamp扩增和第二引物组进行lamp扩增的顺序没有时间限定。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，若用第一引物组扩增产物显示为蓝色，则表明该待测样品为mat1
‑
1交配型菌株；若用第二引物组扩增产物显示为蓝色，则表明该待测样品为mat1
‑
2交配型菌株。7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，若用第一引物组扩增产物的电泳图谱为梯形条带，则表明该待测样品该稻曲病菌为mat1
‑
1交配型菌株；若用第二引物组扩增产物的电泳图谱为梯形条带，则表明该稻曲病菌为mat1
‑
2交配型菌株。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当采用第一引物组进行lamp扩增时，所述lamp扩增的反应体系以10μl计，包括模板dna 0.9μl、bst dna聚合酶0.2μl、dntp 1.0μl、betaine 1.2μl、mat1
‑1‑2‑
f3 0.5μl、mat1
‑1‑2‑
b3 0.5μl、mat1
‑1‑2‑
fip 0.4μl、mat1
‑1‑2‑
bip 0.4μl、mg
2 0.4μl、hnb 1.0μl、10
×
thermopol buffer 1.0μl和无菌水；当采用第二引物组进行lamp扩增时，所述lamp扩增的反应体系以10μl计，包括dna模板0.9μl、bst dna聚合酶0.2μl、dntp 1.0μl、betaine 1.2μl、mat1
‑2‑1‑
f3 0.5μl、mat1
‑2‑1‑
b3 0.5μl、mat1
‑2‑1‑
fip 0.4μl、mat1
‑2‑1‑
bip 0.4μl、mg
2 0.4μl、hnb 1.0μl、10
×
thermopol buffer 1.0μl和余量的无菌水；所述lamp扩增的反应程序为61.6～63.7℃扩增45～90min。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述bstdna聚合酶的工作浓度为0.16u
·
μl
‑1；所述dntp的工作浓度为1.0mmol
·
l
‑1；所述betaine的工作浓度为0.6mol
·
l
‑1；所述内引物中引物的工作浓度为1.6μmol
·
l
‑1；所述外引物中引物的工作浓度为0.5μmol
·
l
‑1；所述mg
2
的工作浓度为4.0mmol
·
l
‑1；所述hnb的工作浓度为150μmol
·
l
‑1；所述10
×
thermopol buffer的工作浓度为1
×
；所述dna的浓度为>20μg
·
ml
‑1。10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述待测样品包括菌丝或菌核。

技术总结
本发明涉及植物保护技术领域，特别是涉及一组用于检测稻曲病菌交配型的引物组、试剂或试剂盒及其应用和方法。本发明提供了一组用于检测稻曲病菌交配型的引物组，所述引物组包括第一引物组和第二引物组；所述第一引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示的引物；所述第二引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5～8所示的引物。利用本发明所述引物组能够快速检测稻曲病菌交配型基因的分子生物学方法，具有灵敏度高、特异性强等优势。特异性强等优势。特异性强等优势。


技术研发人员：潘夏艳 刘永锋 于俊杰 宋天巧
受保护的技术使用者：江苏省农业科学院
技术研发日：2021.09.09
技术公布日：2021/11/14