作为SHP2拮抗剂的嘧啶酮衍生物的制作方法

作为shp2拮抗剂的嘧啶酮衍生物
1.本发明涉及通式i所示的嘧啶酮衍生物，
[0002][0003]
或其药学上可接受的盐，本发明的化合物在治疗哺乳动物(尤其人类)中的过度增殖性疾病及病症中的用途，以及含有此类化合物的药物组合物。
[0004]
发明背景
[0005]
含有蛋白酪氨酸磷酸酶2(shp2)的src同源区2(sh2)是促成多种细胞功能(包括增殖、分化、细胞循环维持及迁移)的ptpn11基因编码的非受体蛋白酪胺酸磷酸酶。shp2参与通过ras有丝分裂原活化的蛋白激酶、jak
‑
stat或磷酸肌醇3
‑
激酶
‑
akt路径信号传导。shp2具有两个n端src同源2结构域(n
‑
sh2及c
‑
sh2)：一个是催化结构域(ptp)及一个是c端尾。这两个sh2结构域控制shp2的次细胞定位及功能调节。分子以非活性、自抑制构型存在，所述构型由涉及来自n
‑
sh2及ptp结构域的残基的结合网状物稳定。举例而言，由细胞因子或生长因子刺激引起催化位点暴露，导致shp2的酶活化。
[0006]
shp2广泛表达在各种组织及细胞类型中。它在各种信号传导路径中起着调节细胞生物过程的重要作用，且参与各种生长因子及细胞因子的信号传导路径。在单个信号传导路径内，shp2可同时在细胞内信号传导过程中起积极(信号增强)作用及消极(信号衰减)作用。已相信，shp2藉由使其相关信号传导分子去磷酸化起作用，从而使局部信号传导流衰减。然而，shp2活动在大部分信号传导路径(例如，生长因子、细胞因子及细胞外基质受体)中的主要作用为增强信号转导。举例而言，shp2是erk/mapk信号传导路径的正向调节剂，其在调节细胞增殖及存活中起关键作用(k.s.grossman等人，adv.cancer res.，2010，106，53
‑
89及其中所引用的参考文献)。
[0007]
ptpn11基因中影响shp2的基础抑制所涉及的n
‑
sh2或ptp结构域残基的突变产生shp2蛋白的更易活化形式，其会引起不受调控或增加的shp2活性。shp2的此类活化突变体与诸如努南综合征(noonan syndrome)的发育障碍有关，其中几乎shp2的所有突变形式显示ptp活性增加。亦已在幼年型粒单核细胞白血病(例如q506p)、慢性骨髓单核细胞性白血病(例如y63c)、神经母细胞瘤(例如t507k)、黑色素瘤(例如ri38q)、急性骨髓白血病(例如g503v)、乳癌、肺癌(例如e76v)及结肠直肠癌(例如e76g)中检测到活化shp2突变(m.bentires
‑
alj等人，于cancer res.2004,64，8816
‑
8820中；及其中所引用的参考文献)。与癌症相关的其他ptpn1突变揭示于wo 2015/107495及其中所引用的参考文献中。
[0008]
已在数种人类疾病中鉴别出ptpn11基因的突变，随后也发现shp2突变，所述人类疾病诸如努南综合征(ns)、豹皮综合征、糖尿病、嗜中性白血球减少症(科斯特曼综合征(kostmann
′
s syndrome))、全身性红斑性狼疮症、神经母细胞瘤、黑色素瘤、幼年型粒单核细胞白血病、急性骨髓白血病、青少年白血病、慢性骨髓单核细胞白血病以及与shp2失调有关的其他癌症，诸如肺癌、结肠癌及乳癌，诸如her2阳性乳癌、三阴性乳癌、乳房导管癌、乳房浸润性乳腺管癌、非小细胞肺癌(包括肺腺癌)、食道癌、胃癌、头颈部鳞状细胞癌(scchn)及结肠癌(n.aceto等人nature medicine，2012，28，529
‑
538；c.m.furcht等人oncogene，2013，32,2346
‑
2355；v.e.schneeberger等人oncotarget，2015，6，6191
‑
6202；p.cai等人，biomedicine&pharmacotherapy 2014，6，285
‑
290；及其中所引用的参考文献)。
[0009]
因此，shp2代表研发治疗各种疾病的新颖疗法的高度有吸引力的目标。本发明化合物满足抑制shp2活性的小分子的需要。
[0010]
shp2磷酸酶抑制剂揭示于例如wo 2015/107493、wo 2015/107494、wo 2015/107495、wo 2016/203404、wo 2016/203405、wo 2016/203406、wo2017/216706、wo2018/013597、wo2018/136264、wo2018/136265、wo2018/057884、wo2018/081091及j.g.fortanet等人，j.med.chem.2016，doi：10.1021/acs.imedchem.6b00600及其中所引用的参考文献中。shp2磷酸酶抑制的作用描述于例如y.
‑
n.p.chen等人，nature，2016，doi.10.1038/nature/18621；j.wang等人，j.clin.invest.，2016，126，2077
‑
2092；以及其中所引用的参考文献中。shp2磷酸酶抑制剂包括例如8
‑
羟基
‑7‑
[(6
‑
磺基
‑2‑
萘基)偶氮]
‑5‑
喹啉磺酸(nsc 87077)及shp
‑
099。
[0011]
然而，诸如shp
‑
099(或wo2015/107493公开的化合物)或rmc
‑
4550(wo2018/013597公开的化合物)的已知化合物没有展示针对herg的高选择性，但该选择性对于化合物用于治疗疾病的安全性极其重要。herg表达肯定地与qt延长有关，qt延长为一种心脏毒性。具有抑制herg的倾向性进而延长qt的化合物可潜在导致称为心室快速性心律失常的心跳不规则，以及死亡。
[0012]
此外，与诸如shp
‑
099(或wo2015/107493公开的化合物)或rmc
‑
4550(或wo2018/013597公开的化合物)的化合物相比，本发明的化合物展示优良的药物动力学特性(例如低清除率及/或高暴露)。
[0013]
因此，仍有需要具有与先前技术化合物相比改良的毒性及/或药物动力学特性的高度有效的shp2抑制剂。本发明的具体目标是提供能预防或治疗宿主中过度增殖性疾病及病症的改良方法，尤其提供用于治疗及预防此类疾病的有效的shp2拮抗剂。


技术实现要素：

[0014]
出人意料地，已发现，根据本发明的嘧啶酮衍生物是高度有效的shp2抑制剂，因此其可用于治疗过度增殖性疾病及病症，诸如癌症。
[0015]
另外，本发明化合物是高度有效的erk1 2抑制剂，erk12是信号传导路径中的目标下游形式shp2(如上文所提及，shp2为erk/mapk信号传导路径的正向调节剂，erk磷酸化取决于shp2活化)，其在调控细胞增殖及存活中起关键作用。此亦确认本发明化合物可用于治疗过度增殖性疾病及病症，诸如癌症。
[0016]
同时，与已知的shp2拮抗剂shp
‑
099、rmc
‑
4550及类似嘧啶衍生物相比，本发明化
合物出人意料地具有针对herg(离子通道kv11.1)非常高的选择性。shp
‑
099、rmc
‑
4550及类似嘧啶衍生物的高herg抑制活性明显指向潜在心脏毒性风险，本发明化合物能避免该风险。本发明化合物的所述改良的安全性与更合乎需要的药物动力学特性及增强的靶接合(较低ic
50
)组合。本发明化合物的出人意料的特性展示了所需要的shp2抑制剂领域中的显著进展。
[0017]
本发明涉及通式i*所示的嘧啶酮衍生物，
[0018][0019]
式中，
[0020]
r1’是含有3至14个碳原子和0至4个独立地选自n、o及s的杂原子的单环、双环或三环烷基、烯基、杂环基、杂芳基或者双环烷基芳基，所述基团未经取代或经(ch2)
n
nhr4’，(ch2)
n
conh2，(ch2)
n
cf2h，(ch2)
n
cf3，(ch2)
n
oh，烷基，＝o，hal或经n
‑
烷基或烷基
‑
nh2单取代、双取代或三取代，所述n
‑
烷基或烷基
‑
nh2未经取代或经or4
′
单取代或双取代，
[0021]
x
′
是单键、
‑
nh
‑
、
‑
n(ch3)
‑
、
‑
(ch2)
n
‑
或
‑
o
‑
，
[0022]
r2
′
是芳基或杂芳基、s
‑
芳基或s
‑
杂芳基，所述基团未经取代或经(ch2)
n
nh2，(ch2)
n
or4，(ch2)
n
coor4’，(ch2)
n
conh2，烷基，＝s，＝o，＝nh，cn，cf3或hal单取代、双取代或三取代，
[0023]
y
′
是h，nh2，烷基，s
‑
烷基，cf3，cf2h，coor4，conh2，oh或hal，
[0024]
r3
′
是h，烷基，nh2，cf3，cf2h，coor4，conh2，cd3，oh或hal，
[0025]
r4
′
是h或烷基，
[0026]
hal是f、cl、br或i，
[0027]
n是0、1、2或3，
[0028]
及其医药学上可接受的盐。
[0029]
本发明的一个实施例是根据式(i)所示的化合物：
[0030][0031]
或其医药学上可接受的盐，
[0032]
式中，环a是，
[0033][0034]
r1是氢，
‑
f，
‑
cl，
‑
br，
‑
oph，
[0035]
r2和r3各自独立地选自氢，
‑
cf3，
‑
cl，
‑
br，
‑
f，
‑
cn，
‑
nh2，
‑
och3和
‑
ch3；
[0036]
r4和r5各自独立地选自氢，
‑
br，
‑
cl，
‑
cf3，
‑
ch3，
‑
cd3和
‑
nh2；
[0037]
r6是
‑
nh2；
[0038]
r7是氢，
‑
cl，
‑
br，
‑
f，
‑
cn，
‑
och3，
‑
ch3或
‑
nh2；
[0039]
r8和r9各自独立地是氢或甲基；
[0040]
每个w是s或o；
[0041]
z是n或
‑
cr1；
[0042]
x’和x”各自是
‑
ch
‑
或
‑
n
‑
，条件是x’和x”二者不同时是n；以及
[0043]
当y存在时y是
‑
ch2‑
或
‑
o
‑
。
[0044]
此实施例的一方面是式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中z为n。
[0045]
此实施例的另一方面是式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中z为c
‑
r1。
[0046]
本发明的一个实施例是根据式(i)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中z是c
‑
r1；且r1是
‑
h或
‑
f。此实施例的一方面中，r1是
‑
h；r2和r3二者都是
‑
cl；且r4和r5二者都是
‑
ch3。此实施例的另一方面中，环a选自：
[0047][0048]
本发明的另一个实施例是根据式(ia
′
)或式(ib
′
)所示的化合物：
[0049]
[0050][0051]
或其药学上可接受的盐。
[0052]
本发明的另一个实施例是根据式(ia
″
)或式(ib
″
)所示的化合物：
[0053][0054]
或其药学上可接受的盐。
[0055]
本发明的一方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r1是氢或
‑
f。
[0056]
本发明的第二方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r1是氢。
[0057]
本发明的第三方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r2和r3独立地是
‑
cl，
‑
br，
‑
f，
‑
cn，
‑
och3，或
‑
ch3.。
[0058]
本发明的第四方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r2和r3二者都是
‑
cl。
[0059]
本发明的第五方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r4和r5独立地是
‑
ch3或
‑
nh2。
[0060]
本发明的第六方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r4和r5二者都是
‑
ch3。
[0061]
本发明的第七方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r6是
‑
nh2。
[0062]
本发明的第八方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中r7是氢。
[0063]
本发明的第九方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中x’是n且x”是ch。
[0064]
本发明的第十方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中x’是ch且x”是n。
[0065]
本发明的第十一方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中x’和x”二者都是ch。
[0066]
本发明的第十二方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中当y存在时是o。
[0067]
本发明的第十三方面是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中当y存在时是ch2。
[0068]
本发明的一个实施例是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
或ib
″
中任一者所示的化合物，选自以下组内：
[0069]
[0070]
[0071][0072]
或其药学上可接受的盐。
[0073]
本发明的再一个实施例是选自表1的化合物或其药学上可接受的盐。
[0074]
本发明的另一个实施例根据式ii所示的化合物：
[0075][0076]
或其药学上可接受的盐，式中
[0077]
z是cr1或n；
[0078]
r1是氢，
‑
oh，
‑
och3，
‑
f，
‑
cl，
‑
br，
‑
oph，oph，
[0079]
r2和r3各自独立地选自氢，
‑
cf3，
‑
cl，
‑
br，
‑
f，
‑
cn，
‑
nh2，
‑
och3和
‑
ch3；
[0080]
r4和r5各自独立地选自氢，
‑
br，
‑
cl，c1‑
c3烷基，c1‑
c3卤代烷基，
‑
cd3，环丙基，c1‑
c3氨基烷基，c1‑
c3烷氧基，c1‑
c3羟基烷基，c1‑
c3硫代烷基和
‑
nh2；
[0081]
r
10
和r
11
各自独立地选自氢，
‑
oh，
‑
nr’r”，c1‑
c3氨基烷基，c1‑
c3羟基烷基，c1‑
c3羟基(氨基)烷基，c1‑
c3卤代烷基，以及5
‑
7元杂环基，其中所述杂环基任选地经1
‑
3个选自以下的基团取代：甲基，乙基，
‑
oh，
‑
nh2，
‑
ch2nh2和
‑
ch2oh；
[0082]
或者r
10
和r
11
与它们所连接的碳原子一起形成3
‑
10元环烷基或者4
‑
11元杂环基，所述基团任选地经1
‑
3个选自以下的基团取代：甲基，乙基，丙基，异丙基，
‑
oh，
‑
nh2，
‑
br，
‑
cl，
‑
f，c1‑
c3卤代烷基，c1‑
c3氨基烷基和c1‑
c3羟基烷基；
[0083]
r
12
是氢，
‑
oh，c1‑
c3烷基，
‑
nh2，
‑
cl，
‑
br，
‑
f，c1‑
c3羟基烷基，c1‑
c3烷氧基，c1‑
c3氨基烷基；或者
[0084]
当r
12
在碳原子α至r
10
上时，r
12
可以与r
10
以及它们各自连接的含氮环的两个碳原子一起形成5
‑
6元稠合双环或三环杂环，所述杂环任选地经1至3个独立地选自以下的基团取代：甲基，乙基，丙基，异丙基，
‑
oh，
‑
nh2，
‑
br，
‑
cl，
‑
f，c1‑
c3卤代烷基，c1‑
c3氨基烷基和c1‑
c3羟基烷基；
[0085]
r’和r”各自独立地是
‑
h，c1‑
c3烷基，
‑
oh，
‑
ch2(4
‑
羟基环己基)，c1‑
c4羟基烷氧基和c1‑
c3羟基烷基；以及
[0086]
p是0，1或2；
[0087]
并且其中所述化合物不是
元杂环基，其中所述杂环基任选地经1
‑
3个选自以下的基团取代：甲基，乙基，
‑
oh，
‑
nh2，
‑
ch2nh2和
‑
ch2oh。
[0097]
本发明的一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中p是0且r
10
和r
11
各自独立地选自氢，
‑
oh，
‑
nr’r”，c1‑
c3氨基烷基，c1‑
c3羟基烷基，c1‑
c3羟基(氨基)烷基，c1‑
c3卤代烷基和5
‑
7元杂环基，其中所述杂环基任选地经1
‑
3个选自以下的基团取代：甲基，乙基，
‑
oh，
‑
nh2，
‑
ch2nh2和
‑
ch2oh。此实施例的一方面中，r
10
和r
11
所连接的含氮环是：
[0098]
本发明的另一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中p是0且r
10
和r
12
与它们所连接的两个相邻的碳原子一起形成以下所示的稠合双环或三环：
[0099][0100]
其中r
10
和r
12
形成的环独立地且任选地经1
‑
3个选自以下的基团取代：
‑
nh2，
‑
ch2nh2，
‑
ch3，
‑
oh和
‑
ch2oh。此实施例的一方面是以下所示的稠合吡咯烷基部分：
[0101][0102][0103]
本发明的另一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中p是1且r
10
和r
12
与它们所连接的两个相邻的碳原子一起形成以下所示的稠合双环：
[0104]
此实施例的一方面中，所述稠合双环选自和
[0105]
本发明的一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中r
10
和r
11
各自独立地选自氢，
‑
oh，
‑
nr’r”，c1‑
c3氨基烷基，c1‑
c3羟基烷基，c1‑
c3羟基(氨基)烷基，c1‑
c3卤代烷基和5
‑
7元杂环基，其中所述杂环基任选地经1
‑
3个选自以下的基团取代：甲基，乙基，
‑
oh，
‑
nh2，
‑
ch2nh2和
‑
ch2oh。
[0106]
本发明的另一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中p是1或2；且r
10
和r
11
选自氢，
‑
nh2，c1‑
c3氨基烷基，c1‑
c3烷基，c1‑
c3羟基烷基和
‑
oh，其中r
10
和r
11
二者都不是氢。此实施例的一方面中，p是1；且r
10
和r
11
选自氢，
‑
nh2，
‑
ch2nh2，
‑
(ch2)2nh2，
‑
c(o)nh2，
‑
oh，
‑
ch2ch2f，
‑
ch2oh，
‑
ch2ch2oh，
‑
nhch3，
‑
nh(ch2chohch2oh)，
‑
nh(ch2chohch2och3)，
‑
chohch2nh2，其中r
10
和r
11
二者都不是氢。此实施例的另一方面中，r
10
和r
10
中之一是
‑
nh2或
‑
ch2nh2。此实施例的一方面中，哌啶基部分选自以下组内：
[0107][0108]
本发明的一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中p是2；且r
10
和r
11
选自
‑
nh2和
‑
c1‑
c3羟基烷基。此实施例的一方面中，经r
10
和r
11
取代的含氮环选自：
[0109]
[0110][0111]
本发明的另一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中r
10
和r
11
与它们所连接的碳原子一起形成3
‑
10元环烷基或4
‑
11元杂环基，每个所述基团任选地经1至3个独立地选自以下的基团取代：甲基，乙基，丙基，异丙基，
‑
oh，
‑
nh2，
‑
br，
‑
cl，
‑
f，c1‑
c3卤代烷基，c1‑
c3氨基烷基和c1‑
c3羟基烷基。此实施例的一方面中，p是1；且r
10
和r
11
与它们所连接的哌啶基部分上的碳原子一起形成以下所示的基团(包括哌啶基部分)：
[0112][0113]
其中，由r
10
和r
11
形成的每一个环独立地且任选地经1
‑
3个选自以下的基团取代：
‑
nh2，
‑
oh，
‑
ch2oh，
‑
ch2nh2，
‑
ch3和
‑
f。此实施例的一方面中，由r
10
和r
11
形成的环经
‑
nh2或
‑
ch2nh2中至少一个取代。
[0114]
本发明的另一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中r
10
和r
11
与它们所连接的碳原子一起形成选自以下的基团：
[0115]
[0116][0117]
另一个实施例是根据式ii所示的化合物，其中r
12
是氢。
[0118]
本发明的一个实施例是根据式ii所示的化合物，所述化合物选自以下组内：
[0119]
[0120]
[0121]
[0122]
[0123]
[0124]
[0125]
[0126][0127]
或其药学上可接受的盐。
[0128]
本发明的一个实施例是一种药物组合物，其包含根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii中任一者的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、辅剂和/或赋形剂。
[0129]
本发明的一个实施例是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii中任一者的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗癌症。
[0130]
在此实施例的一方面中，癌症选自急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、肾上腺皮质癌、膀胱癌、脑癌、乳癌、子宫癌、子宫增生、绒毛膜癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、原发性血小板增多症、胃癌、泌尿生殖癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、神经纤维瘤、毛细胞白血病、头颈癌、霍奇金氏病(hodgkin
′
s disease)、卡波西肉瘤(kaposi
′
s sarcoma)、肾癌、肺癌、淋巴瘤、恶性类癌瘤、恶性高钙血症、恶性黑色素瘤、恶性胰脏胰岛素瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、蕈状肉芽、骨髓白血病、淋巴细胞白血病、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(non
‑
hodgkin
′
s lymphoma)、非小细胞肺癌、骨原性肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、真性红细胞增多症、原发性脑癌瘤、原发性巨球蛋白血症、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、睪丸癌、甲状腺癌及维尔姆氏瘤(wilm
′
s tumor)。
[0131]
在此实施例的另一方面中，癌症选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、乳癌、食道癌、胃癌、结肠直肠癌、神经胶母细胞瘤、胰腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤及肾癌。
[0132]
在此实施例的另一方面中，根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii中的任一者的化合物或其药学上可接受的盐与一或多种附加治疗剂联合给药。
[0133]
在此实施例的一个方面中，一种或多种附加治疗剂是gfr抑制剂、met抑制剂、pd
‑
l1抑制剂、mek 1/2抑制剂、tgf
‑
βr路径抑制剂或其组合。
[0134]
在此实施例的另一方面中，一或多种附加治疗剂是爱必妥(erbitux)、特普替尼(tepotinib)、阿维鲁单抗(avelumab)、muc1
‑
tgfβr2 nb、egfr
‑
muc1
‑
adc、匹马赛替尼(pimasertib)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、西米单抗(cemiplimab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、度伐利尤单抗(durvalumab)或其组合。
[0135]
在此实施例的另一方面中，一种或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单
抗、匹马赛替尼或其组合。
[0136]
本发明的一个实施例是根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii中任一者的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗选自以下组内的疾病或病症：年龄相关性黄斑变性、克罗恩病、肝硬化、慢性炎症相关疾病、增殖性糖尿病视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变、肉芽肿、与器官或组织移植相关的免疫过度增殖、炎症性肠病、银屑病、类风湿性关节炎、系统性狼疮红斑病(sle)，继发于视网膜缺氧和血管炎的血管过度增生。
[0137]
本发明的一个实施例是一种治疗有需要患者的癌症的方法，包括向所述患者给予有效量的根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii中任一者的化合物或其药学上可接受的盐。
[0138]
在此方法的一方面中，癌症选自急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、肾上腺皮质癌、膀胱癌、脑癌、乳癌、子宫癌、子宫增生、绒毛膜癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、原发性血小板增多症、胃癌、泌尿生殖癌、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、神经纤维瘤、毛细胞白血病、头颈癌、霍奇金氏病、卡波西肉瘤、肾癌、肺癌、淋巴瘤、恶性类癌瘤、恶性高钙血症、恶性黑色素瘤、恶性胰脏胰岛素瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、蕈状肉芽、骨髓白血病、淋巴细胞白血病、神经母细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非小细胞肺癌、骨原性肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、真性红细胞增多症、原发性脑癌瘤、原发性巨球蛋白血症、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、睪丸癌、甲状腺癌及维尔姆氏瘤。
[0139]
在此方法的另一方面中，癌症选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、乳癌、食道癌、胃癌、结肠直肠癌、神经胶母细胞瘤、胰腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤及肾癌。
[0140]
在此方法的另一个实施例中，所述方法进一步包括向患者给予一或多种附加治疗剂。
[0141]
在此实施例的一个方面中，所述一种或多种附加治疗剂是gfr抑制剂、met抑制剂、pd
‑
l1抑制剂、mek 1/2抑制剂、tgf
‑
βr路径抑制剂或其组合。
[0142]
在此实施例的另一方面中，所述一种或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单抗、匹马赛替尼或其组合。
[0143]
在此实施例的另一方面中，一种或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单抗、匹马赛替尼或其组合。
[0144]
本发明的一个实施例是一种治疗有需要患者的增殖性疾病或病症的方法，包括向所述患者给予有效量的根据式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii中任一者的化合物或其药学上可接受的盐。
[0145]
在此实施例的一方面中，所述增殖性疾病或病症选自年龄相关性黄斑变性、克罗恩病、肝硬化、慢性炎症相关疾病、增殖性糖尿病视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变、肉芽肿、与器官或组织移植相关的免疫过度增殖、炎症性肠病、银屑病、类风湿性关节炎、系统性狼疮红斑病、继发于视网膜缺氧和血管炎的血管过度增生。
[0146]
在此发明的另一个实施例中，所述方法进一步包括向患者给予有效量的一种或多种附加治疗剂。
[0147]
本发明的一个实施例是选自表1的化合物或其药学上可接受的盐，其包括由以下组成的组：
[0148]
[0149]
[0150]
[0151]
[0152]
[0153]
[0154]
[0155]
[0156]
[0157]
[0158]
[0159]
[0160]
[0161]
[0162]
[0163]
[0164][0165]
及其药学上可接受的盐。
[0166]
限定式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii中任一者的具体变量之含义的所有上述实施例和实施例的各方面应当以如下方式理解，即这些具体实施例和/或实施例的各方面可以变量的任何可能的定义彼此结合，得到式i、ia
′
、ib
′
、ia
″
、ib
″
或ii所示的化合物。
[0167]“烷基”是饱和直链或支链烃链且具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个c原子。“烷基”的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基等等。
[0168]“氨基烷基”是如上所描述的烷基，其中经1
‑
3个
‑
nh2基团取代。
[0169]“羟基烷基”是如上文所描述的烷基，其中经1
‑
3个
‑
oh基团取代。实例包括
‑
ch2oh、
‑
ch2ch2oh等等。
[0170]“羟基(氨基)烷基”是经至少1个
‑
oh和至少1个
‑
nh2基团取代的烷基。一般地，羟基(氨基)烷基的不同碳原子上具有
‑
oh和
‑
nh2基团。实例包括
‑
ch2chohch2nh2等等。
[0171]“卤代烷基”指如上所描述的烷基，其中经1
‑
3个选自
‑
f、
‑
br和
‑
cl的卤素原子取代。卤代烷基的实例包括
‑
cf3、
‑
ch2f、
‑
cf2h、
‑
ch2chf2、
‑
ccl3、
‑
cclfh等等。
[0172]“烷氧基”指根据通式
‑
o(ch2)
n
ch，中饱和的、无支链或有分支的烃链，其含有至少1
‑
10个碳原子，其中所述通式中的n是0
‑
9。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基等。
[0173]“环烷基”指具有3
‑
15个碳原子且呈桥接环系统、单环系统、双环系统及/或螺接环系统形式的饱和环烃链。单环环烷基较佳为3
‑
7个c原子，较佳地表示环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。环烷基亦可表示部分不饱和环状烷基，诸如环己烯基或环己炔基。当环烷基为双环系统之一部分时，所述环中至少一个是3
‑
7元环烷基，其可与5元或6元杂芳基、苯基、5
‑
7元杂环基或5
‑
7元环烷基稠合。符合环烷基定义的双环系统的实例包括例如2，3
‑
二氢
‑
1h
‑
茚基，4h，5h，6h
‑
环戊二烯并[d][1，3]噻唑基，1，2，3，4
‑
四氢萘基，5，6，7，8
‑
四氢喹啉基，5，6，7，8
‑
四氢异喹啉基，5h，6h，7h
‑
环戊二烯并(b)吡啶基，5h，6h，7h
‑
环戊二烯并(c)吡啶基等。
[0174]“芳基”表示单环或多环芳族或完全不饱和环烃链，例如未经取代的苯基、萘基或联二苯，此外更佳的是苯基、萘基或联二苯，上述每一个基团经例如以下取代基单取代、双取代或三取代：氟、氯、溴、碘、羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、硝基、氰基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、三氟甲基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、苯甲氧基、磺酰氨基、甲基磺酰氨基、乙基磺酰氨基、丙基磺酰氨基、丁基磺酰氨基、二甲基磺酰氨基、苯基磺酰氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、和/或酰胺基。
[0175]“杂环”和“杂环基”指饱和或不饱和非芳族单环，或者可经桥接、双环(“稠合”)和/或螺连接的部分或完全非芳族环系统。杂环基含有至少一个选自o、s及n的杂原子，进一步可包括硫的氧化形式，即so及so2。单环杂环基较佳为3
‑
7个原子，包括氮杂环丁基、四氢呋喃(thf)、二氢呋喃、1，4
‑
二恶烷、吗啉、1，4
‑
二噻烷、哌嗪、哌啶、1，3
‑
二氧戊环、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧硫环戊烷、二硫戊环、1，3
‑
二恶烷、1，3
‑
二噻烷、氧硫杂环己烷、硫代吗啉、氧杂环戊烷、恶烷、氮杂环庚烷等。当杂环基为双环系统的一部分时，至少一个环是可与以下基团稠合的3
‑
7元杂环基：5元或6元杂芳基、苯基、5
‑
7元杂环基或5
‑
7元环烷基。符合杂环基定义的双环系统之实例包括例如2h，3h
‑
呋喃并[2，3
‑
b]吡啶，2h，3h
‑
呋喃并[2，3
‑
c]吡啶，2h，3h
‑
呋喃并[2，3
‑
d]吡啶，2，3
‑
二氢苯并呋喃，八氢
‑
1h
‑
异吲哚，八氢环戊二烯并[c]吡咯，八氢吡咯并[3，4
‑
c]吡咯，3
‑
氮杂双环[3.1.0]己烷，3，9
‑
二氮杂双环[4.2.1]壬
‑3‑
基等。
[0176]“杂芳基”指含有至少一个选自o、s及n的环杂原子的芳族或部分芳族杂环。杂芳基由此包括与其他类型的环(诸如芳基、环烷基及不属于芳族的杂环)稠合的杂芳基。杂芳基的实例包括：吡咯基、异恶唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、恶唑基、恶二唑基、噻二唑基、噻
唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、苯并异恶唑基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、二氢苯并呋喃基、吲哚啉基、哒嗪基、吲唑基、异恶唑基、异吲哚基、二氢苯并噻吩基、吲哚嗪基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、啶基、咔唑基、苯并二氧杂环己烯基、苯并二氧杂环戊烯基、喹唑啉基、嘌呤基、呋呫基、噻吩基、异苯甲基呋喃基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、吲哚基、异喹啉基、二苯并呋喃基等。杂环基和杂芳基包括含有3
‑
15个原子的环及环系统，形成1
‑
3个环。
[0177]“螺接的”环部分表示其中两个环或环系统经由单一共同碳原子连接而成的那些。螺化合物可以是完全碳环(全部是碳原子)或杂环(具有一或多个非碳原子)。将包括两个环的螺接环状部分视为双环；将单环与双环部分连接的螺接环状部分视为三环部分。螺接的双环部分的实例包括8
‑
氮杂螺[4.5]癸烷，2
‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷，2
‑
氮杂螺[3.4]辛烷，6
‑
氮杂螺[3.4]辛烷，2
‑
氧杂
‑6‑
氮杂螺[3.4]辛烷，2
‑
氮杂螺[4.4]壬烷，1
‑
氧杂
‑9‑
氮杂螺[5.5]十一烷，5
‑
氮杂螺[2.4]庚烷，1，3
‑
二氢螺
‑
[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]，5，7
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
6，4
′‑
哌啶]，3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]，3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]，4，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑
‑
5，4
′‑
哌啶]等。
[0178]
本发明化合物可形成阻转异构体，其为与存在于式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii中嘧啶部分有关的构象异构体。阻转异构体是由于围绕单键的旋转受阻而产生的立体异构体，其中因立体应变或其他促成因素所致的能量差异产生对旋转足够高阻碍，以允许个别构象异构体分离。在本发明化合物中观察到两种不同阻转异构体，例如当z是cr1且r1是经取代的苯环时，如下所示：
[0179]
取决于芳基或杂芳基的定向以及嘧啶环上取代基r4，这些形式以化合物命名法表示为m或p形式。m及p形式的实例提供于实施例部分中。特别优选的化合物为具有以下定向的那些：
[0180][0181]
本发明还涉及包含根据本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一的药物制剂。本发明还涉及如上所述的药物制剂，其包含其他赋形剂和/或佐剂。
[0182]
此外，本发明涉及根据本发明的上述药物制剂，其包含一种或多种另外的治疗剂。
[0183]
本发明的化合物可以以其游离碱形式使用。另一方面，本发明还包括本发明化合物以其药学上可接受的盐形式的用途，所述盐可以通过以下本领域已知的方法衍生自各种有机碱和无机碱。术语药学上的盐用于指己与抗衡离子结合形成中性络合物的可电离的药物。通过这个过程将药物转化为盐可以增加其化学稳定性，使络合物更容易给药，并允许控制药剂的药物动力学特性。盐的选择现在是药物开发过程中用可电离的小分子进行的常见标准操作，在许多情况下，与母体分子相比，药物盐显示出较佳特性。本发明化合物的药学上可接受的盐形式大部分是通过常规方法制备的。
[0184]
在一个实施方案中，本发明化合物的药学上可接受的盐可以选自盐酸盐、醋酸盐、钠盐、硫酸盐、磷酸盐或二磷酸盐、氯化物、钾、马来酸盐、钙、柠檬酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、酒石酸盐、铝、葡萄糖酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐和乙二磺酸盐。在该实施方案的一方面，药学上可接受的盐是苯甲酸盐、苯磺酸盐或乙二磺酸盐。
[0185]
本发明化合物在药学上可接受的盐包括所述盐的溶剂化物。术语溶剂化物是指本发明化合物的惰性溶剂分子由于它们的相互吸引力而形成的加合。溶剂化物是例如水合物，诸如单水合物或二水合物或醇盐，亦即与醇(诸如与甲醇或乙醇)的加成化合物。
[0186]
通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii化合物可以具有一个或多个手性中心，以致于本发明也要求保护通式i所示化合物的所有立体异构体、对映异构体、非对映异构体等。因此本发明还涉及这些化合物的旋光体(立体异构体)、对映异构体、外消旋物、非对映异构体和水合物及溶剂化物。
[0187]
具有通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物还应包括其同位素标记形式。具有通式i的化合物的同位素标记形式与所述化合物的区别仅在于所述化合物的一个或多个原子被原子量或质量数与通常是天然存在的原子的原子量或质量数不同的一个或多个原子取代。市场上容易买到且可通过已知方法被结合到具有通式i的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯，例如分别为2h、3h、
13
c、
14
c、
15
n、
18
o、
17
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f和
36
ci。含有一或多个上述同位素和/或其他原子的同位素的通式i化合物、其前药或它们中任一个的药学上可接受的盐都应理解为本发明的一部分。可以多种有利的方式使用同位素标记的通式i化合物。例如，结合了诸如3h或
14
c的放射性同位素的同位素标记的通式1化合物可用于药物和/或底物组织分布试验。由于其制备简单及可检测性良好而尤其优选这两种放射性同位素，即氚(3h)和碳
‑
14(
14
c)。由于诸如氘(2h)的较重的同位素具有较高的代谢稳定性，将这种同位素标记化合物结合到通式i化合物中在治疗上是有好处的。较高的代谢稳定性直接导致体内半衰期延长或剂量减少，这在多数情况下代表了本发明的优选实施例。通常可通过进行本文本的实施例部分和制备部分中的合成方案和相关描述中公开的步骤来制备同位素标记的通式i化合物，用容易得到的同位素标记反应物代替非同位素标记反应物。
[0188]
为了通过一级动力学同位素效应控制化合物的氧化代谢，可将氘(2h)结合到具有通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物中。一级动力学同位素效应是由于同位素核的替换而导致化学反应速率发生变化，这是由于所述同位素替换之后形成共价键所需的基态能量的变化而引起的。较重的同位素的替换通常导致化学键的基态能量降低，从而引起速率限制的键断裂反应的速率降低。如果键断裂发生在沿着多产物反应的坐标的鞍点区中或其附近，产物分布比率可被显着改变。解释如下：如果氘被键合到碳原子的非可替换位置上，通常速率差异k
m
/k
d
＝2
‑
7。如果该速率差异被成功地应用于易于氧化的通式i化合物，则该化
合物在体内的性质可被显着地改变，从而改善药物动力学特性。
[0189]
具有通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物中的氘
‑
氢替换也可被用来有利地改变起始化合物的代谢物谱，以减少或消除不良有毒代谢物。例如，如果通过氧化性碳
‑
氢(c
‑
h)键断裂产生了有毒代谢物，可以合理地认为，含氘类似物将会显着地减少或消除不良代谢物的产生，即使该具体的氧化反应并不是速率决定步骤。更多现有技术中关于氘
‑
氢替换的信息可参见例如hanzlik等，j.org.chem.55，3992
‑
3997，1990，reider等，j.org.chem.52，3326
‑
3334，1987，foster，adv.drug res.14，1
‑
40，1985，gillette等，biochemistry 33(10)2927
‑
2937，1994，和jarman等carcinogenesis 16(4)，683
‑
688，1993。
[0190]
本发明还涉及具有通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物的混合物，例如两种阻转异构体和/或两种或更多种非对映异构体的混合物，例如比例为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶10、1∶100或1∶1000。这些特别优选是两种立体异构体化合物的混合物。在本发明的一个实施方案中，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少80％所希望的构象。在该实施方案的一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少85％所希望的构象。在该实施方案的另一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少90％所希望的构象。在该实施方案的一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少95％所希望的构象。在该实施方案的一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少98％所希望的构象。
[0191]
若需要，原位形成起始材料，采用的方法是不使起始材料与反应混合物分离，但马上将其进一步转化成具有通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物。
[0192]
优选地，通过溶剂分解，尤其水解或氢解进行处理以便从其功能衍生物中释放出通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物而获得。用于溶剂分解或氢解的优选起始物是含有相应的经保护的氨基、羧基和/或羟基而不是一个或多个游离氨基、羧基和/或羟基的化合物，优选具有氨基保护基而不是键合到n原子的h原子的化合物。其他较佳的起始物是携带经保护的羧基而非游离羧基。多个相同或不同的经保护氨基和/或羟基也可以存在于起始物的分子中。如果所存在的保护基彼此不同，那么可以选择性地将它们裂解去除。
[0193]
术语“氨基保护基”表示一般的含义，涉及适合于保护(阻止)氨基发生化学反应但在该分子的其他部位已发生期望的化学反应后易于去除的基团。典型的这种基团特别是：未取代或取代的酰基、未取代或取代的芳基(例如2，4
‑
二硝基苯基)或芳烷基(例如苯甲基、4
‑
硝基苯甲基、三苯甲基)。因为在期望的反应或者反应序列后去除氨基保护基，所以它们的类型和大小并不重要；然而，优选的是具有1
‑
20个特别是1
‑
8个碳原子的保护基。术语“酰基”应被理解成与本方法有关的最广义的含义。其包含从脂肪族、芳香脂肪族、芳香族或杂环羧酸或者磺酸类衍生的酰基，特别是烷氧基羰基、芳基氧基羰基，特别是芳烷氧基羰基。这种酰基的例子是：烷基酰基(例如乙酰基、丙酰基和丁酰基)；芳烷基酰基(例如苯基乙酰基)；芳酰基(例如苯甲酰基和甲苯酰基)；芳氧基烷酰基(例如苯氧基乙酰基)；烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、2，2，2
‑
三氯乙氧基羰基、boc、2
‑
碘乙氧基羰基；芳烷氧基羰基，(例如cbz、4
‑
甲氧基苄氧基羰基和fmoc)。优选的氨基保护基是cbz、fmoc、苄基和乙酰基。
[0194]
术语“酸保护基”或“羧基保护基”同样表示一般的含义，涉及适合于保护
‑
cooh基
团发生化学反应但在该分子的其他部位已发生期望的化学反应后易于去除的基团。典型地使用酯而非游离酸，例如经取代及未经取代的烷基酯(例如甲基、乙基、叔丁基及其经取代的衍生物)、经取代及未经取代的苯甲基酯或甲硅烷基酯。酸保护基的类型和大小并不重要；然而，优选的是具有1
‑
20个特别是1
‑
10个碳原子的保护基。
[0195]
术语“羟基保护基”同样是指一般含义，涉及适合于保护羟基发生化学反应但易于已在分子其它部位完成期望的化学反应后去除的基团。典型的这种基团是上述未取代或取代的芳基、芳烷基或酰基，以及烷基。羟基保护基的类型和大小并不重要，因为在期望的化学反应或反应序列后将它们除去；优选具有1
‑
20个特别是1
‑
10个碳原子的基团。羟基保护基的例子尤其是：苄基、4
‑
甲氧基苄基、对硝基苯甲酰基、对甲苯磺酰基、叔丁基和乙酰基，其中特别优选的是苄基和叔丁基。
[0196]
氨基保护基、酸保护基及羟基保护基的其他典型实例见于例如“greene’s protective groups in organic synthesis”，第四版，wiley
‑
interscience，2007中。
[0197]
根据本发明的所得化合物可以从制备它们的相应溶液中分离(例如通过离心和洗涤)，并且可以在分离后储存在另一种组合物中，或者它们可以直接保留在制备溶液。根据本发明所得的化合物也可以溶解在用于特定用途的所需溶剂中。
[0198]
常规的后处理步骤，例如向反应混合物中加入水和萃取，能够在除去溶剂后获得化合物。为了进一步纯化产物，随后进行蒸馏或结晶或进行色谱纯化可能是有利的。
[0199]
令人惊讶地发现，与现有技术化合物相比，通式i化合物可具有有利的功效、选择性、药代动力学特性、给药方案、较低的毒性和/或物理特性。
[0200]
本发明还涉及根据本发明的化合物在制备用于治疗由shp2或其激动剂引起、促进和/或传播的疾病的药物中的用途。
[0201]
因此，本发明还特别涉及用于治疗和/或预防生理和/或病理生理状况的药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一。具体而言，特别优选与shp2关连的生理和/或病理生理状况。生理和/或病理生理状况应认为指医学相关的生理和/或病理生理状况，例如疾病或病和医学障碍、病痛、症状或并发症等，特别是疾病。
[0202]
本发明还涉及用于治疗选自过度增生性疾病和障碍的生理和/或病理生理状况的药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一，在一个实施例中，过度增生性疾病或障碍为癌症。
[0203]
因此，本发明特别优选涉及一种药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一，其中癌症选自急性和慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、肾上腺皮质癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫癌、子宫增生、绒毛膜癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、原发性血小板增多症、泌尿生殖器癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、头颈癌、霍奇金氏病、卡波西肉瘤、肺癌、淋巴瘤、恶性类癌瘤、恶性高钙血症、恶性黑色素瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、髓性和淋巴细胞性白血病、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非小细胞肺癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、真性红细胞增多症、原发性脑癌、原发性巨球蛋白血症、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌和维尔姆氏瘤。在本发明的一个实施方案中，所述癌症是非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、胰腺癌、成骨肉瘤、黑色素瘤和肾癌。在该实施方案
的一方面，癌症是头颈癌。在该实施方案的另一方面，癌症是肺癌。在该实施方案的一方面，肺癌是非小细胞肺癌。在该实施方案的另一方面，肺癌是小细胞肺癌。在该实施方案的另一方面，癌症是结直肠癌。在该实施方案的另一方面，癌症是食道癌。在该实施方案的另一方面，癌症是胃癌。
[0204]
本发明还优选涉及用于治疗选自过度增生性和感染性疾病和障碍的生理和/或病理生理状况的药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一，其中过度增生性疾病或障碍选自年龄相关性黄斑变性、克罗恩氏病、肝硬化、慢性炎症相关性障碍、增生性糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变、肉芽肿病、与器官或组织移植相关的免疫过度增生以及选自炎性肠病、牛皮癣、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(sle)、继发于视网膜缺氧的血管过度增生和血管炎的免疫增生性疾病或障碍。
[0205]
以上公开的药物旨在包括本发明的化合物制备用于治疗以上生理和/或病理生理状况的药物的相应用途。
[0206]
另外，以上公开的药物旨在包括用于治疗以上生理和/或病理生理状况的相应方法，其中将至少一种本发明的化合物施用至需要这种治疗的患者。
[0207]
如实施例中所述，本发明的化合物优选显示可在酶测定和动物试验中容易得到证明的有利生物学活性。在这样的酶基测定中，本发明的化合物优选展示和引起抑制作用，这通常由在适合的范围内的ic
50
值证明，优选在微摩尔范围内，更优选在纳摩尔范围内。
[0208]
本发明的化合物可施用至人或动物，特别是哺乳动物，例如猿、狗、猫、大鼠或小鼠，并可用于人体或动物体的治疗性治疗，也可用于对抗上述疾病。它们还可用作诊断剂或试剂。
[0209]
此外，本发明的化合物可用于分离shp2和研究其活性或表达。另外，它们特别适用于与受干扰shp2活性相关的疾病的诊断方法。因此，本发明还涉及本发明的化合物用于分离shp2和研究其活性或表达或用作shp2的结合剂和抑制剂的用途。
[0210]
为了诊断目的，可例如放射性标记本发明的化合物。放射性标记的实例为3h、
14
c、
231
i和
125
i。优选的标记方法为indogen法(fraker等人，1978)。另外，本发明的化合物可由酶、荧光团和发色团(chemophore)标记。酶的实例为碱性磷酸酶、β
‑
半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶，荧光团的实例为荧光素，发色团的实例为鲁米诺，并且例如用于例如荧光着色的自动检测系统例如描述于us 4,125,828和us 4,207,554。
[0211]
本发明还涉及包含至少一种式i化合物和/或其药学上可接受的盐的药物制剂。具体地，本发明还涉及包含其他赋形剂和/或辅剂的药物制剂，以及包含至少一种其他药物活性化合物的药物制剂。
[0212]
具体地讲，本发明还涉及制备药物制剂的方法，其特征在于使式i的化合物和/或其其药学上可接受的盐之一与固体、液体或半液体赋形剂或辅剂并任选与一种或多种附加治疗剂一起形成适合的剂型。
[0213]
本发明的药物制剂可在人或兽医学中用作药物。患者或宿主可属于任何哺乳动物物种，例如灵长类物种，特别是人；啮齿类，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔；马、牛、狗、猫等。动物模型对试验研究有意义，其中它们提供治疗人疾病的模型。
[0214]
适合的载体物质为有机或无机物质，它们适用于肠内(例如口服)、肠胃外或局部
施用，且不与新化合物反应，例如水、植物油(如葵花油或鱼肝油)、苯甲醇、聚乙二醇、明胶、碳水化合物(例如乳糖或淀粉)、硬脂酸镁、滑石、羊毛脂或凡士林。由于有专业知识，本领域的技术人员熟悉哪种辅剂适用于所需的药物制剂。除溶剂(例如水、生理盐水溶液或醇(例如乙醇、丙醇或甘油)、糖溶液(例如葡萄糖或甘露醇溶液))或所述溶剂、成胶剂、片剂助剂和其它活性成分载体的混合物外，也可使用例如润滑剂、稳定剂和/或湿润剂、乳化剂、影响渗透压的盐、抗氧化剂、分散剂、防沫剂、缓冲物质、调味剂和/或香料或矫味剂、防腐剂、增溶剂或染料。如果需要，本发明的制剂或药物可包含一种或多种其它活性化合物，例如一种或多种维生素。
[0215]
如果需要，本发明的制剂或药物可包含一种或多种其它活性化合物和/或一种或多种作用增强剂(辅剂)。
[0216]
出于本发明的目的，术语“药物配方”和“药物制剂”用作同义词。
[0217]
本文所用“药学上可接受的”指有利于将自其得到的药物制剂施用至哺乳动物而没有不希望的生理学副作用如噁心、头晕、消化问题等的药物、沉淀试剂、赋形剂、辅剂、稳定剂、溶剂和其它试剂。
[0218]
在用于肠胃外施用的药物制剂中，要求制剂(低毒性)、所用辅剂和初级包装的等渗性、水合正常和耐受性以及安全性。令人惊讶的是，本发明的化合物优选具有以下优点：可直接使用，因此，在本发明的化合物用于药物配制之前，不必用于去除毒理学上不可接受的试剂(例如高浓度有机溶剂或其它毒理学上不可接受的辅剂)的进一步纯化步骤。
[0219]
本发明特别优选还涉及药物制剂，该药物制剂包含至少一种呈沉淀非晶、沉淀结晶或溶解或悬浮形式的本发明的化合物，以及任选的赋形剂和/或辅剂和/或其它药物活性化合物。
[0220]
本发明的化合物优选能够制备高度浓缩制剂，而不会发生本发明化合物的不利、不期望聚集。因此，可借助于本发明的化合物与水性溶剂或在水性介质中制备具有高活性成分含量的即用溶液。
[0221]
所述化合物和/或其生理学上可接受的盐和溶剂化物也可以冻干，所得冻干物例如用于制备注射制剂。
[0222]
本发明的药物制剂也可包含多种本发明化合物的混合物。
[0223]
本发明的制剂在生理学上耐受良好，易于制备，可精确分配，并且优选在整个储存和运输过程中以及在多次冷冻和解冻过程期间就测定、分解产物和聚集体而言是稳定的。它们可优选以稳定方式在冰箱温度(2
‑
8℃)和室温(23
‑
27℃)及60％相对大气湿度(r.h.)下储存至少三个月至两年的时间。
[0224]
例如，本发明的化合物可通过干燥以稳定的方式储存，并且在必要时通过溶解或悬浮转化成即用型药物制剂。可能的干燥方法为例如但不限于以下这些实例：氮气干燥、真空烘箱干燥、冻干、用有机溶剂洗涤且随后空气干燥、液床干燥、流化床干燥、喷雾干燥、辊筒干燥、层干、室温空气干燥和其它方法。
[0225]
术语“有效量”指引起例如研究人员或医师寻求或希望的组织、系统、动物或人的生物或医学反应的药物或药物活性化合物的量。
[0226]
另外，术语“治疗有效量”指与未接受这种量的相应受试者比较，具有以下结果的量：一种或多种症状的改善、治愈或消除疾病、综合征、疾病状况、病痛、障碍或防止副作用。
“
治疗有效量”还包括减少疾病、病痛或障碍的进展。对于癌症治疗，“治疗有效量”可以减轻受试者的肿瘤负担，延缓疾病的进展(“无进展生存”)，延长受试者的预期寿命(提高总体生存率)，减缓或预防原发肿瘤向其他组织的转移和/或改善接受治疗的受试者的生活质量。术语“治疗有效量”也包括有效提高正常生理功能的量。
[0227]
本发明的一个实施方案是使用根据本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐组成的制剂或药物，制剂以每个使用单位在0.1和500mg之间的剂量，特别是在1和300mg之间。日剂量优选在0.001和250mg/kg体重之间，特别在0.01和100mg/kg体重之间。该制剂可每天施用一次或多次，例如每天二、三或四次。然而，患者的个体剂量取决于许多个体因素，例如取决于所用特定化合物的功效、年龄、体重、总体健康状况、性别、营养、施用时间和方法、排泄速率、与其它药物的组合以及特定疾病的严重程度和持续时间。
[0228]
在生物体内药物活性化合物吸收的量度为其生物利用度。如果药物活性化合物以注射溶液的形式静脉内递送到生物体，则其绝对生物利用度，即，以不变的形式达到全身血液即主要循环的药物比例，为100％。在口服施用治疗性活性化合物的情况下，活性化合物通常在制剂中为固体形式，因此必须首先溶解，以便能够克服进入屏障，例如胃肠道、口腔粘膜、鼻膜或皮肤，特别是角质层，或者可由身体吸收。可类似于j.shaffer等人，j.pharm.sciences，88(1999)，313
‑
318的方法获得关于药代动力学的数据，即，生物利用度的数据。
[0229]
另外，这种类型的药物可通过制药领域中通常已知的方法之一来制备。
[0230]
药物可适应于通过任何所需的适合途径施用，例如，通过口服(包括颊或舌下)、直肠、肺、鼻、局部(包括颊、舌下或透皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内，尤其是关节内)途径。这种类型的药物可通过在制药领域已知的所有方法来制备，例如，通过使活性化合物与赋形剂或辅剂组合。
[0231]
适于肠内施用(口服或直肠)的特别为片剂、糖衣丸、胶囊剂、糖浆、果汁、滴剂或栓剂，适合局部使用的为软膏剂、乳膏剂、糊剂、洗剂、凝胶剂、喷雾剂、泡沫剂、气雾剂、溶液(例如在醇(如乙醇或异丙醇)、乙腈、dmf、二甲基乙酰胺、1，2
‑
丙二醇或它们相互和/或与水的混合物中的溶液)或粉剂。脂质体制剂也特别适合局部使用。
[0232]
当然，除了以上特别提到的成分外，本发明的药物也可包含在本领域与特定药物制剂类型相关常用的其它试剂。
[0233]
本发明还涉及由下列单独包装组成的套装(试剂盒)：
[0234]
a)有效量的式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物和/或其药学上可接受的盐，和
[0235]
b)有效量的一种或多种附加治疗剂。
[0236]
套装包括适合的容器，例如盒或纸箱、单个瓶、袋或安瓿。套装可例如包括分开的安瓿，各安瓿包含溶解或冻干形式的有效量的式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物和/或其药学上可接受的盐和有效量的一种或多种附加治疗剂。
[0237]
另外，可使用本发明的药物以便在某些已知疗法中提供加和或协同作用，和/或以便恢复某些现有疗法的功效。
[0238]
除了本发明的化合物外，本发明的药物制剂还可包含一种或多种附加治疗剂，例如用于治疗癌症的其它抗肿瘤药物。为了治疗提及的其它疾病，除了本发明的化合物外，本发明的药物制剂还可包含本领域的技术人员在其治疗中已知的其它药物活性化合物。
[0239]
在一个实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种附加治疗剂组合施用。在本发明的一方面，一种或多种附加治疗剂是egfr抑制剂、met抑制剂、pd
‑
l1抑制剂、mek 1/2抑制剂、tgf
‑
βr路径抑制剂或其组合。在该实施方案的另一方面，一种或多种附加治疗剂是是爱必妥(erbitux)、特普替尼(tepotinib)、阿维鲁单抗(avelumab)、muc1
‑
tgfβr2 nb、egfr
‑
muc1
‑
adc、匹马赛替尼(pimasertib)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、西米单抗(cemiplimab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、度伐利尤单抗(durvalumab)或其组合。在该实施方案的一个方面，一种或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单抗、匹马赛替尼或其组合。
[0240]
在一个主要的实施方案中，提供用于增强有需要的宿主的免疫应答的方法。通过减小t细胞耐受性，包括通过增加ifn
‑
γ释放，通过减少调节性t细胞产生或激活，或通过增加宿主中的抗原特异性记忆t细胞产生，可增强免疫应答。在一个实施方案中，所述方法包括与抗体组合或交替施用本发明的化合物至宿主。在该实施方案的一方面中，抗体为治疗性抗体。在一个具体实施方案中，提供一种增强被动抗体疗法功效的方法，所述方法包括与一种或多种被动抗体组合或交替施用本发明的化合物。这种方法可提高用于治疗异常细胞增生性障碍(例如癌症)的抗体疗法的功效，或者可在治疗或预防感染性疾病中提高疗法的功效。本发明的化合物可与抗体例如利妥昔单抗、赫赛汀或爱必妥组合或交替施用。
[0241]
在另一个主要的实施方案中，提供一种治疗或预防异常细胞增生的方法，所述方法包括基本在没有另一种抗癌剂的存在下施用本发明的化合物至需要其的宿主。
[0242]
在另一个主要的实施方案中，提供一种治疗或预防有需要的宿主的异常细胞增生的方法，所述方法包括首先基本上与第一抗癌剂组合施用本发明的化合物至宿主，随后施用第二shp2拮抗剂。在该实施方案的一方面中，基本在没有另一种抗癌剂的存在下施用第二拮抗剂。在另一个主要的实施方案中，提供一种治疗或预防有需要的宿主的异常细胞增生的方法，所述方法包括基本上与第一抗癌剂组合施用本发明的化合物至宿主，随后在没有拮抗剂的存在下施用第二抗癌剂。
[0243]
因此，本文公开的癌症治疗可作为利用本发明的化合物的疗法或与手术、照射或化疗的组合来进行。这种类型的化疗可包括使用选自以下组内的一种或多种附加治疗剂：
[0244]
(i)用于医学肿瘤学的抗增生/抗肿瘤/破坏dna的活性化合物及其组合，例如烷基化活性化合物(例如顺铂、parboplatin、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢药(例如抗叶酸剂，例如氟嘧啶，例如5
‑
氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、胞嘧啶阿拉伯糖苷、羟基脲和吉西他滨)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环霉素，例如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素
‑
c、放线菌素和光神霉素)；抗有丝分裂活性化合物(例如长春花生物碱，例如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨，和紫杉烷类，例如紫杉醇和泰索帝)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，例如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、伊立替康和喜树碱)和细胞分化活性化合物(例如全反式维甲酸、13
‑
顺式
‑
维甲酸和维甲酰酚胺)；
[0245]
(ii)细胞生长抑制活性化合物，例如抗雌激素剂(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和碘多芬(iod氧基fene))、雌激素受体调节剂(例如氟维司群)、抗雄激素剂(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、lhrh拮抗剂或lhrh激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕酮(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来
曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α
‑
还原酶的抑制剂(例如，如非那雄胺)；
[0246]
(iii)抑制癌症侵袭的活性化合物，包括例如金属蛋白酶抑制剂(如马立马司他)和尿激酶纤溶酶原激活剂受体功能抑制剂；
[0247]
(iv)生长因子功能的抑制剂，例如生长因子抗体，生长因子受体抗体，例如抗erbb2抗体曲妥珠单抗[herceptin
tm
]和抗erbbl抗体西妥昔单抗[c225]，法呢基转移酶抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏糖酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如egfr家族酪氨酸激酶抑制剂，例如n
‑
(3
‑
氯
‑4‑
氟苯基)
‑7‑
甲氧基
‑6‑
(3
‑
吗啉代丙氧基)喹唑啉
‑4‑
胺(吉非替尼，azd1839)，n
‑
(3
‑
乙炔基苯基)
‑
6，7
‑
双(2
‑
甲氧基乙氧基)喹唑啉
‑4‑
胺(厄洛替尼，osi
‑
774)和6
‑
丙烯酰氨基
‑
n
‑
(3
‑
氯
‑4‑
氟苯基)
‑7‑
(3
‑
吗啉代丙氧基)
‑
喹唑啉
‑4‑
胺(ci 1033)，例如血小板衍生生长因子家族的抑制剂，和例如肝细胞生长因子家族的抑制剂；
[0248]
(v)抗血管生成活性化合物，例如贝伐单抗、血管抑素、内皮抑素、利诺胺、巴马司他、卡托普利、软骨衍生的抑制剂、染料木黄酮、白介素12、熏草菌素、醋酸甲羟孕酮、重组人血小板因子4、替可加兰、血小板反应蛋白、tnp
‑
470、抗vegf单克隆抗体、可溶性vegf受体嵌合蛋白、抗vegf受体抗体、抗pdgf受体、整联蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、反义寡核苷酸、反义寡脱氧核苷酸、sirnas、抗vegf适配体、色素上皮衍生因子和已在国际专利申请wo 97/22596、wo 97/30035、wo 97/32856和wo 98/13354中公开的化合物；
[0249]
(vi)血管破坏剂，例如考布他汀a4和已在国际专利申请wo 99/02166、wo 00/40529、wo00/41669、wo 01/92224、wo 02/04434和wo 02/08213中公开的化合物；
[0250]
(vii)反义疗法，例如针对上述靶标的那些，例如isis 2503(一种抗ras反义物)；
[0251]
(viii)基因治疗方法，包括例如置换异常、修饰的基因(例如异常p53或异常brca1或brca2)的方法，gdept方法(基因导向酶前药治疗)，例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法，以及提高患者对化疗或放疗耐受性的方法，例如多药耐受治疗；和
[0252]
(ix)免疫治疗方法，包括例如提高患者肿瘤细胞免疫原性的离体和体内方法，例如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子进行转染，降低t细胞无反应性的方法，使用经转染免疫细胞例如细胞因子转染的树突状细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞的方法，以及使用抗独特型抗体的方法；
[0253]
(x)化疗剂，包括例如阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑珠单抗、阿利维甲酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、bcg live、贝伐珠单抗、贝沙罗汀、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡鲁睾酮、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、塞来考昔、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、西那卡塞特、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、达贝泊汀α、柔红霉素、地尼白介素、右雷佐生、多西他赛、多柔比星、屈他雄酮、表柔比星、依伯汀α、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群和吉西他滨。
[0254]
来自表2的附加治疗剂可优选但非排它性与式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物或其药学上可接受的盐组合。
[0255]
[0256]
[0257]
[0258]
[0259]
[0260]
[0261]
[0262]
[0263][0264]
即使没有进一步的实施方案，也假定本领域技术人员将能够在最广泛的范围内使用以上描述。因此，优选的实施方案应只被视为绝对不以任何方式限制的描述性公开。
[0265]
因此，以下实施例旨在解释本发明，而不限制本发明。除非另外指明，百分数数据表示重量百分数。所有温度均以摄氏度表示。“常规后处理”：如果必要，加入水，如果必要，根据最终产物的组成将ph调节到2和10之间的值，用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取混合物，使相分离，使有机相经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发，并且通过在硅胶上色谱和/或通过结晶来纯化产物。
[0266]
缩略语列表
[0267]
℃
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
摄氏度
[0268]
ac
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
醋酸酯
[0269]
acn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
腈
[0270]
aibn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
偶氮二异丁腈
[0271]
auc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
血浆药物浓度
‑
时间曲线下的面积
[0272]
bop
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
六氟磷酸苯并三唑
‑1‑
氧基三(二甲氨基)磷
[0273]
c
max
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
最大血浆浓度
[0274]
cl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
清除率
[0275]
cv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
变异系数
[0276]
cyp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
细胞色素p450
[0277]
dbu
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1，8
‑
二氮杂二环[5.4.0]十一碳
‑7‑
烯
[0278]
dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲烷
[0279]
dppf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1，1
′‑
双
‑
二苯基膦二茂铁
[0280]
diea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n，n
‑
二异丙基乙胺
[0281]
dma
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基乙酰胺
[0282]
dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基基甲酰胺
[0283]
dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲亚砜
[0284]
et
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙基
[0285]
乙酸乙酯
ꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯
[0286]
％f
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
生物利用度
[0287]
f
a
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
吸收的馏分
[0288]
g
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
克
[0289]
h或hr
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
[0290]
hobt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
羟基苯并三唑
[0291]
hplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高效液相色谱
[0292]
iv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
静脉内
[0293]
lc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
液相色谱
[0294]
lc
‑
ms/ms
ꢀꢀꢀꢀ
液相色谱串联质谱
[0295]
lda
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二异丙基氨基锂
[0296]
lloq
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
定量下限
[0297]
mcpba
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
间氯过氧苯甲酸
[0298]
me
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲基
[0299]
甲醇
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲醇
[0300]
min
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
分钟
[0301]
ml
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
毫升
[0302]
mmol
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
毫摩尔
[0303]
ms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
质谱
[0304]
nahmds
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二(三甲基硅基)氨基钠
[0305]
nbs
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n
‑
溴代琥珀酰亚胺
[0306]
nd
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
未测定
[0307]
nmp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n
‑
甲基
‑2‑
吡咯烷酮
[0308]
nt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
未测试
[0309]
o/n
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
过夜
[0310]
pe
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
石油醚
[0311]
peg
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
聚乙二醇
[0312]
pgp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
渗透性糖蛋白
[0313]
pk
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
药代动力学
[0314]
po
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
经口(口服)
[0315]
rt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
室温
[0316]
t
1/2
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
半衰期
[0317]
t
max
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
达到药物最大血浆浓度时的时间
[0318]
tea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三乙胺
[0319]
tfa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三氟乙酸
[0320]
thf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
四氢呋喃
[0321]
uplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
超高效液相色谱
[0322]
v
ss
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
分布体积(稳态下)
[0323]
v/v
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
体积/体积
[0324]
实施例1：本发明化合物的实例
[0325]
本发明尤其涉及(上述)表1的化合物及其药学上可接受的盐。当适用时，本发明的化合物包括其阻转异构体、立体异构体和/或对映异构体。除非实施例2中描述的合成方法另有说明，立体异构体和/或对映异构体的结构名称是根据停留时间和活性指定的。本发明的化合物包括其所有阻转异构体、立体异构体和/或对映异构体，即使结构描述仅显示一种可能的排列。优选的化合物是符合表1中所示特定结构描述的那些化合物。
[0326]
实施例2：本发明化合物的制备和分析方法
[0327]
一般而言，根据本发明的通式(i)及相关式的化合物可以从容易获得的起始物质制备。如果这种起始物质无法从市场上买到，则可利用标准合成技术制备。一般而言，用于通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的任何单个化合物的合成路径将取决于各分子的具体取代基，此类因子正如本领域普通技术人员所理解的。可采用下文实施例中所描述的以下一般方法和步骤来制备通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物。这些方法是说明性的，并不意味着限制本领域技术人员可以用来制备本文公开的化合物的可能方法。下面流程中所描述的反应条件(例如温度、溶剂、或共试剂)只是作为例子给出而并不是限制性的。应当理解的是，在给出典型的或优选的实验条件(即反应温度、时间、试剂的摩尔数、溶剂等)的情况下，除非另有说明也可以采用其他实验条件。最佳反应条件可视所使用的具体反应剂或溶剂而变化，但这种条件可以由本领域技术人员利用常规的优化步骤来确定。对于所有的保护和脱保护方法，参见philipj.kocienski的“保护基(protecting groups)，georg thieme verlag stuttgart，纽约(1994年)、以及theodora w.greene和peter g.m.wuts“有机合成中的保护基(protective groups in organic synthesis)，wiley interscience，第三版(1999年)。
[0328]
根据z、r1、r2、r3、r4、r5、r10、r11、r12和环a的性质，对于通式i、ia’、ib’、ia”、ib”或ii的化合物的合成可选择不同的合成方案。在以下方案中所示的步骤中，除非另有说明，否则z、r1、r2、r3、r4、r5、r10、r11、r12和环a是如在上面说明中定义的。
[0329]
在bruker avance iii 400nmr光谱仪或者bruker dpx
‑
300mhz光谱仪上记录全部nmr实验结果，该brukeravanceiii400nmr光谱仪配置了brukerpabbobb
‑
1h/d z grd探针，在400mhz处进行质子nmr，该bruker mercury plus 300nmrr光谱仪配置了bruker 300bbfo探针，在300mhz处进行质子nmr。大部分氘化溶剂通常含有0.03％至0.05％v/v四甲基硅烷，其用作参考信号(1h和
13
c均设置为d 0.00)。在氘化溶剂不含四烷基硅烷的情况下，根据公布的指南(j.org.chem.，vol.62，no.21，1997)，将残留的非氘化溶剂峰用作参考信号。化学位移以在每百万份(ppm，δ单位)表示。偶合常数以赫兹为单位(hz)。分裂模式描述明显的多重性，表示如下：s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，qt(五重峰)或brs(宽单峰)。
[0330]
在配备有sq检测器(esi)的水s aquityh进行uplc/ms分析，以及在agilent 1200系列质谱仪上或shimadzu lc
‑
ms仪器进行lc
‑
ms分析，其中该agilent 1200系列配备有四极检测器，该shimadzu lc
‑
ms仪器由uflc 20
‑
ad系统和lcms 2020ms检测器组成。
[0331]
除非另有报告，否则使用报告的色谱柱和溶剂进行分析性手性sfc，溶剂的梯度如
下：3.5分钟内从95％降至40％，然后在40％保持1.5分钟，然后0.5分钟内40％升至95％，在95％保持1分钟。
[0332]
使用biotage initiator microwave synthesizer按照本领域已知的标准协议进行微波反应。
[0333]
除非另有说明，以下实验说明中所使用的市售起始物是从sigma
‑
aldrich或fisher公司购得。
[0334]
中间体1：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0335][0336]
步骤1：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑2‑
亚硫基
‑
1，2，3，4
‑
四氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮
[0337]
在室温下，将(2，3
‑
二氯苯基)硫脲(103g，466mmol)分批加入甲醇钠(12g，500mmol)在甲醇(1000ml)中的溶液中。将反应混合物搅拌10分钟，然后加入丙二酸二乙酯(76g，474mmol)。再回流3小时并减压浓缩。向残留物(1000ml)中加入水并滤出沉淀物。滤液用hcl酸化直至沉淀出白色固体。滤出该固体，用水洗涤并干燥，得到标题化合物(71g，52％)。
[0338]
步骤2：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0339]
将氢氧化钾(17g，303mmol分批加入3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑2‑
亚硫基
‑
1，2，3，4
‑
四氢嘧啶
‑4‑
酮(71g，246mmol)在甲醇(1000ml)中的悬液中。然后滴加碘甲烷(38g，268mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入水(2000ml)，滤出沉淀物，用水洗涤并干燥，得到标题化合物(42g，56％)。
[0340]
步骤3：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0341]
将磷酰氯(27g，176mmol)滴加到3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(45g，148mmol)在乙腈(1000ml)中的悬液中。减压除去溶剂，粗产物通过硅胶快速色谱纯化，得到白色固体状标题化合物(4.4g，10％)。1hnmr(400mhz，cdcl3)：7.8(d，1h)，7.75(t，1h)，7.4(m，1h)，6.7(s，1h)，2.5(s,3h)。
[0342]
中间体2：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0343]
步骤1：n
′‑
(2，3
‑
二氯苯基)乙脒
[0344][0345]
保持在0℃下，将1
‑
(甲基硫烷基)乙烷
‑1‑
亚胺(55g，253mmol，氢碘酸盐)加入到2，3
‑
二氯苯胺(37.5g，231mmol)在二噁烷(300ml)和dmf(50ml)中的溶液中。将反应混合物在100℃加热2天。然后冷却至室温并在减压下除去溶剂。残留物用乙酸乙酯
‑
mtbe混合物(500ml，1∶5)洗涤，溶解在二氯甲烷(200ml)中并过滤。真空浓缩滤液，获得呈黄色固体状的标题化合物(28.0g，37％)。
[0346]
步骤2：2
‑
{[(1e)
‑1‑
[(2，3
‑
二氯苯基)亚氨基]乙基]氨基甲酰基}乙酸甲酯
[0347][0348]
保持在0℃下，将4
‑
甲基吗啉(12.6g，127mmol)和甲基丙二酰氯(17.4g，127mmol)加入到n
′‑
(2，3
‑
二氯苯基)乙脒(28g，85mmol)在二氯甲烷(400ml)中的溶液中。将反应混合物的温度升至室温，搅拌18小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液稀释，用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物，为一种棕色油(18g，70％)。
[0349]
步骤3：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0350][0351]
将2
‑
{[(1e)
‑1‑
[(2，3
‑
二氯苯基)亚氨基]乙基]氨基甲酰基}乙酸甲酯(18g，59mmol)和1，8
‑
二氮杂双环[5.4.0]十一
‑7‑
烯(9g，60mmol)在1，4
‑
二噁烷(100ml)中的溶液在60℃加热4小时。然后在减压下浓缩反应混合物，并向残留物中加入磷酰氯。将反应混合物在100℃加热4小时。减压除去过量的氯化磷，边搅拌边将残留物加入冰水中。边搅拌边将碳酸钠加入混合物中，直至不再观察到起泡。混合物用dcm(2
×
200ml)萃取，合并有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化得到标题化合物，为白色固体(2.5g，23％)。1h nmr(500mhz，cdcl3)：7.67(d，j＝11.5hz，1h)，7.45(m，1h)，7.21(m，1h)，6.56(s，1h)，2.21(s，3h)。lc/ms(m 1)：289.0。
[0352]
中间体3：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲烷磺酰基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0353][0354]
保持在0℃下，将mcpba 3
‑
氯过氧苯甲酸(523mg；2.33mmol)在dcm(5ml)中的溶液缓慢加入到6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体1；1.25g；0.78mmol)在dcm(5ml)中的溶液中。反应混合物升至室温并搅拌2小时。由于反应未完成，在0℃下加入3
‑
氯过氧苯甲酸(348mg；1.55mmol)在dcm(2.5ml)中的溶液，并将反应混合物在室温下再搅拌2小时。滤出沉淀物，减压浓缩滤液。将残留物重新溶解在dcm中并再次过滤沉淀物。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度为95∶5至20∶80)，得到标题化合物，为白色固体(272mg，98％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.78
‑
7.73(m，1h)，7.51(s，1h)，7.50(d，j＝1.7hz，1h)，6.11(s，1h)，2.34(s，3h)。lc/ms(m 1)：352.9。
[0355]
中间体4：2
‑
氨基
‑6‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0356][0357]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲烷磺酰基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(175mg；
0.49mmol)和氨(0.99ml，0.5mmol在0.49mmol二噁烷中的溶液)在thf(3.5ml)中的溶液在室温下搅拌1小时。在减压下除去溶剂，粗产物通过nh
‑
二氧化硅的快速色谱法纯化(己烷：乙酸乙酯，梯度从95∶5到0∶100)，得到标题化合物，为白色固。1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)7.79(dd，j＝6.9，2.8hz，1h)，7.57
‑
7.48(m，2h)，5.82(s，1h)。
[0358]
中间体5：6
‑
氯
‑2‑
甲基
‑3‑
苯基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0359][0360]
采用苯胺为起始材料，依据中间体2描述的程序制备标题化合物，为橙色固体。1h nmr(500mhz，dmso
‑
d6)：7.57(m，3h)，7.34(m，2h)，6.48(s，1h)，2.11(s，3h)。lc/ms(m 1)：221.2。
[0361]
中间体6：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0362][0363]
采用n
′‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，2
‑
二氟乙脒为起始材料，依据中间体2描述的程序制备标题化合物。
[0364]
中间体7：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0365][0366]
将n
‑
(2，3
‑
二氯苯基)乙脒(20g；98.5mmol)、2
‑
甲氧基乙醇(300ml)、1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯(24ml；147mmol)和甲醇钠(21g；394.0mmol)的混合物在氩气气氛下加热至110℃并保持12小时。然后使反应混合物冷却至室温，并用水(200ml)稀释。加入浓硫酸直至ph达到2
‑
3。过滤出沉淀物，用水洗涤并干燥，得到标题化合物，为白色固体(27g，90％)。1hnmr(dmso
‑
d6)：11.45(1h)，7.82(dd，j＝6.6，3.0hz，1h)，7.59(m，2h)，2.02(s，3h)，1.74(s，3h)。lc/ms(m 1)：285.0。
[0367]
中间体7a和7b：(3p)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0368][0369]
通过手性sfc(柱cel2；250x21mm；5微米；甲醇 20mm nh4oh：co2；40/60％v/v)分离中间体7的异构体，获得两种可能的阻转异构体：
[0370]
第一洗脱阻转异构体(中间体7a)：白色固体；rt＝3.24min(分析柱cei2)；de＝100％；lc/ms(m 1)：285.0
[0371]
第二洗脱阻转异构体(中间体7b)：白色固体；rt＝4.06min(分析柱cei2)；de＝100；lc/ms(m 1)：285.0
[0372]
中间体8：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0373][0374]
将3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体7；5.0g；17.54mmol)和三氯化磷酰(phosphoroyl trichloride)(30ml；327mmol)的混合物在100℃加热过夜。减压除去过量的三氯氧磷，边搅拌边将残留物加入冰水中。边搅拌边将碳酸钠加入混合物中，直至不再观察到起泡。混合物用二氯甲烷(2
×
200ml)萃取，萃取液用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：0％至50％)，得到标题化合物，为白色固体(3g，57％)。h nmr(dmso
‑
d6)：1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.87(dd，j＝8.0，1.7hz，1h)，7.65(m，1h)，7.61(m，1h)，2.07(s，6h)。lc/ms(m 1)：303.0。
[0375]
中间体8a和8b：(3p)
‑6‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0376][0377]
通过手性sfc(柱adh；250x21mm；5微米；甲醇 20mm nh4oh：co2；10/90)分离中间体8的异构体，获得两种可能的阻转异构体：
[0378]
第一洗脱阻转异构体(中间体8a)：白色固体；rt＝2.91min(分析柱adh
‑
甲醇 20mm nh4oh：co2；梯度：5至45％)；de＝100％；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.86(dd，j＝8.0，1.7hz，1h)，7.67(dd，j＝8.0，1.7hz，1h)，7.61(t，j＝8.0hz，1h)，2.07(s，6h)；lc/ms(m 1)：302.9。
[0379]
第二洗脱阻转异构体体(中间体8b)：白色固体；rt＝3.26min(分析柱adh
‑
甲醇 20mmnh4oh：co2；梯度：5至45％)；de＝100％；1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.86(dd，j＝8.0，1.7hz，1h)，7.67(dd，j＝7.9，1.7hz，1h)，7.61(t，j＝8.0hz，1h)，2.07(s，6h)；lc/ms(m 1)：302.9。
[0380]
中间体9：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0381][0382]
在惰性气氛下，边搅拌边将alme2cl溶液(5.5ml，0.9m在己烷中的溶液，59.3mmol)滴加到2，3
‑
二氯苯胺(810mg，4.75mmol)和乙腈(248mg，6.0mmol)在甲苯(4ml)中的溶液中。
将反应混合物在室温下搅拌15分钟，然后在150℃微波加热30分钟。减压除去溶剂，然后加入2
‑
甲氧基乙
‑1‑
醇(10ml，131.4mmol)，丙二酸二乙酯(3.36g，20mmol)和甲醇钠(1.13g，20mmol)。所得混合物在130℃下再搅拌24小时。然后用水稀释，并通过添加hcl水溶液(6m)中和至ph 6。过滤出沉淀物，用水(3x10ml)、乙醚(3x20ml)洗涤并干燥，得到标题化合物，为黄色固体(1.2g，86％)。1h nmr(300mhz，dmso
‑
d6)11.94(s，1h)，7.80(dd，j＝7.3，2.4hz，1h)，7.64
‑
7.47(m，2h)，5.36(s，1h)，2.01(s，3h)。lc/ms(m 1)：271.1。熔点：260
‑
262℃。
[0383]
中间体10：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0384][0385]
将3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑2‑
甲基嘧啶
‑4‑
酮(中间体9；700mg，2.04mmol)、对甲苯磺酰氯(953mg，4.07mmol)和k2co3(1.04g，7.12mmol)在thf(20ml)中的混合物在60℃搅拌6小时。过滤所得混合物，滤饼用乙酸乙酯(3x100ml)洗涤，滤液减压下浓缩。通过硅胶快速色谱法(石油醚∶乙酸乙酯，梯度：100∶0至0∶100)纯化残留物，得到标题化合物，为白色固体(800mg，75％)。lc/ms(m 1)：424.9。
[0386]
中间体11：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑5‑
(三氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0387][0388]
使中间体9三氟甲基化，然后使用与中间体1步骤3相同的条件氯化，得到标题化合物。
[0389]
中间体12：6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0390][0391]
采用2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯胺为起始材料，依据中间体2描述的程序制备标题化合物，为黄色固体。1h nmr(400mhz，cdcl3)：7.64(m，1h)，7.21(m，1h)，6.53(s，1h)，2.21(s，3h)。lc/ms(m 1)：307.0。
[0392]
中间体13：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
乙基
‑6‑
羟基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0393][0394]
将n
‑
(2，3
‑
二氯苯基)乙脒(6.50g；32.0mmol)、2
‑
甲氧基乙醇(75ml)、1，3
‑
二乙基
2
‑
丙二酸乙酯(8.57ml；48.1mmol)和甲醇钠(6.92g；128.0mmol)的混合物在氩气气氛下加热至110℃并保持12小时。然后使反应混合物冷却至室温并用水(200ml)稀释。加入浓硫酸直至ph达到2
‑
3。滤出沉淀物，用水洗涤并干燥，得标题化合物，为白色固体(8.3g，87％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：11.45(s，1h)，7.81(dd，j＝7.5，2.2hz，1h)，7.63
‑
7.51(m，2h)，2.31(q，j＝7.3hz，2h)，2.00(s，3h)，0.98(t，j＝7.4hz，3h)。
[0395]
中间体14：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
甲基
‑4‑
(甲基硫烷基)
‑
1，2
‑
二氢
‑
1，3，5
‑
三嗪
‑2‑
酮
[0396][0397]
将{[(e)
‑
[1
‑
(二甲基氨基)亚乙基]氨基](甲基硫烷基)
‑
亚甲基}碘化铵氮(按照j.of heterocyclic chem.，38(1)，93
‑
98；2001中所描述的方法制备；500mg；1.74mmol)和2，3
‑
二氯苯基异氰酸酯(260ul；1.92mmol)在thf(5ml)中的溶液中室温和惰性气氛下搅拌4小时。将反应混合物冷却至0℃，然后加入tea(0.5ml，3.83mmol)。再在室温下搅拌过夜。滤出沉淀物，减压浓缩滤液。通过硅胶快速色谱纯化(己烷：乙酸乙酯，20：80)，得到标题化合物，为白色粉末(105mg，20％)。1hnmr(400mhz，氯仿
‑
d)：7.64(dd，j＝8.2，1.4hz，1h)，7.41(t，j＝8.0hz，1h)，7.30
‑
7.21(m，1h)，2.58(s，3h)，2.14(s，3h)。lc/ms(m 1)：302.0。
[0398]
中间体15：2,5
‑
二甲基
‑1‑
(萘
‑2‑
基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0399][0400]
采用萘
‑2‑
胺为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为白色固体(500mg，23％
‑
两步骤)。lc/ms(m 1)：421.2。
[0401]
中间体16：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
(4
‑
氧代哌啶
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0402][0403]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(300mg；1.04mmol)、哌啶
‑4‑
酮盐酸盐(281mg；2.07mmol)和diea(1.08ml，6.22mmol)在乙醇(6ml)中的溶液在50℃下加热5小时。然后将反应混合物在减压下浓缩，并通过硅胶快速色谱法(乙酸乙酯，100％)纯化，得到标题化合物，为白色固体(307mg，82％)。1hnmr(bruker400mhz，dmso
‑
d6)：7.80(dd，j＝6.0，3.6hz，1h)，7.62
‑
7.49(m，2h)，5.46(s，1h)，3.98
‑
3.78(m，4h)，2.59
‑
2.39(m，4h)，2.02(s，3h)。
[0404]
中间体17：1
‑
(1，3
‑
苯并噻唑
‑7‑
基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0405][0406]
采用1，3
‑
苯并噻唑
‑7‑
胺为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为黄色固体(950mg，53％
‑
两步骤)。lc/ms(m 1)：428.1。
[0407]
中间体18：6
‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑3‑
(喹喔啉
‑6‑
基)
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0408][0409]
采用喹喔啉
‑6‑
胺为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为褐色固体(1.2g，两步骤)。lc/ms(m 1)：423.1。
[0410]
中间体19：1
‑
(1
‑
氯萘
‑2‑
基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0411][0412]
采用1
‑
氯萘
‑2‑
胺为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为褐色固体(0.6g，61％，两步骤)。lc/ms(m 1)：455.1。
[0413]
中间体20：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0414]
步骤1：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
硫烷基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0415][0416]
将2，3
‑
二氯苯基硫脲(3.0g，12.9mmol)、丙二酸二甲酯(3.6g，25.8mmol)，18
‑
冠
‑
6(1.8g，6.45mmol)和甲醇钠(4.64g，25.8mmol)在二噁烷(30ml)中的溶液在氮气氛和70℃下搅拌3小时。然后在减压下浓缩反应混合物，并通过硅胶快速色谱法纯化残留物(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为乳白色固体(4g，834％)。lc/ms(m 1)：303.2。
[0417]
步骤2：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮
[0418][0419]
将3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
硫烷基嘧啶
‑4‑
酮(100mg，0.27mmol)和ch3i(1ml)在thf(1ml)中的溶液在氮气氛和室温下搅拌3小时。将所得混合物浓缩，并通过硅胶快速色谱法纯化残留物(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为乳白色固体(300mg，33％)。lc/ms(m 1)：317.2。
[0420]
步骤3：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0421][0422]
采用3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)嘧啶
‑4‑
酮(80mg，0.23mmol)为起始材料，依据中间体10步骤2描述的程序制备标题化合物，为乳白色固体(50mg，28％)。lc/ms(m 1)：471.2。
[0423]
中间体21：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲氧基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0424][0425]
采用n
‑
(2，3
‑
二氯苯基)乙脒(2g，9.8mmol)和1，3
‑
二乙基2
‑
甲氧基丙二酸酯(2.8g，14.8mmol)为起始材料，依据中间体13描述的程序制备标题化合物，为白色固体(1.6g，54％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：11.5(brs，1h)，7.85(m，1h)，7.61(m，2h)，3.64(s，3h)，1.98(s，3h)。lc/ms(m 1)：301.0。
[0426]
中间体22：n
‑
[(6r)
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑6‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺；三氟乙酸
[0427]
步骤1：1
‑
叔丁基4
‑
乙基4
‑
(3
‑
甲基吡啶
‑2‑
基)哌啶
‑
1，4
‑
二羧酸酯
[0428][0429]
保持在0℃下，将nahmds溶液(1.00m，896ml 1m甲苯溶液)滴加到2
‑
氟
‑3‑
甲基吡啶(65.0g，585mmol)和1
‑
叔丁基4
‑
乙基哌啶
‑
1，4
‑
二羧酸酯(166g，643mmol)在甲苯(600ml)中的溶液中。然后将反应混合物在20℃搅拌24小时。用盐水(500ml)淬灭。分离有机层，用na2so4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，梯度：10∶0至0∶10)，得到标题化合物，为黄色油(50.0g，23％)。1h nmr(400mhz，cdcl3)：8.40(dd，j＝4.8，1.6hz，1h)，7.40(d，j＝7.6hz，1h)，7.10(dd，j＝8.0，4.8hz，1h)，4.19
‑
4.13(m，2h)，3.70
‑
3.64(m，
2h)，3.50
‑
3.48(m，1h)，2.86
‑
2.66(m，1h)，2.25(s，4h)，2.18
‑
2.13(m，1h)，1.91
‑
1.85(m，1h)，1.67
‑
1.56(m，1h)，1.45(s，9h)，1.29
‑
1.14(m，3h)；lc/ms(m 1
‑
boc)：293.2。
[0430]
步骤2：6
‑
氧代
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羟酸叔丁酯
[0431][0432]
保持在0℃下，将lda(140ml，2m thf溶液，2.50eq)加入到1
‑
叔丁基4
‑
乙基4
‑
(3
‑
甲基吡啶
‑2‑
基)哌啶
‑
1，4
‑
二羧酸酯(39g，112mmol)在thf(390ml)中的溶液中。然后将反应混合物在0℃搅拌1小时，倒入冰冻饱和nh4cl(500ml)中并用乙酸乙酯(400ml x 2)萃取。有机层用盐水(500ml)洗涤，na2so4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，梯度：10∶0至0∶10)，得到标题化合物，为黄色固体(18g，52％)。1h nmr(400mhz，cdcl3)：8.52
‑
8.50(m，1h)，7.63
‑
7.61(m，1h)，7.20(dd，j＝8.0，4.2hz，1h)，3.98
‑
3.95(m，2h)，3.60(s，4h)，1.93
‑
1.86(m，2h)，1.78
‑
1.73(m，2h)，1.48(s，9h)。lc/ms(m 1)：247.1。
[0433]
步骤3：(6r)
‑6‑
{[(r)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]氨基}
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸叔丁酯
[0434][0435]
将6
‑
氧代
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]
‑
吡啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸叔丁酯(12.0g，39.7mmol)、ti(oet)4(70.0g，307mmol)和(r)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺(14.4g，119mmol)在2
‑
甲基
‑
thf(72.0ml)中的混合物在80℃搅拌1.5小时。然后将反应混合物冷却至
‑
5℃，保持在0℃下将libh4(4.24g，195mmol)分批加入到混合物中。在0℃下保持1小时后，将反应混合物倒入冰水(300ml)中，过滤。滤饼用乙酸乙酯(300mlx3)洗涤。滤液用盐水(200ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。残留物通过硅胶快速色谱纯化(石油醚∶乙酸乙酯，梯度：10∶0至0∶10)，得到标题化合物，为黄色固体(8.00g，44.6％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)：8.39
‑
8.37(m，1h)，7.50(d，j＝7.2hz，1h)，7.09(dd，j＝7.6，4.8hz，1h)，4.03
‑
4.93(m，2h)，3.76(brs，2h)，3.41(s，1h)，3.27
‑
3.24(m，1h)，2.94(dd，j＝16.0，6.4hz，1h)，1.82
‑
1.79(m，2h)，1.74
‑
1.70(m，2h)，1.47(s，9h)，1.20(s，9h)。lc/ms(m 1)：406.2。
[0436]
步骤4：n
‑
[(6r)
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑6‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺；三氟乙酸
[0437][0438]
将(6r)
‑6‑
{[(r)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]氨基}
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡
啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸叔丁酯(6.0g，14.7mmol)在dcm(60ml)和tfa(10.9ml)中的溶液在25℃下搅拌2小时。减压除去溶剂，残留物通过制备型hplc(0.1％tfa条件)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(2.41g，38.0％产率)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：8.81(s，1h)，8.52(s，1h)，8.38(d，j＝3.6hz，1h)，7.67(d，j＝7.6hz，1h)，7.24(dd，j＝7.6，4.2hz，1h)，5.80(d，j＝9.2hz，1h)，3.99
‑
3.95(m，1h)，3.83
‑
3.78(m，1h)，3.32
‑
3.12(m，3h)，3.01
‑
2.96(m，1h)，2.19
‑
2.01(m，2h)，1.85
‑
1.71(m，2h)，1.18(s，9h)。lc/ms(m 1)：308.2。
[0439]
中间体23：5
‑
环丙基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0440][0441]
采用1，3
‑
二乙基2
‑
环丙基丙二酸酯and 2，3
‑
二氯苯胺为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为黄色固体(0.4g，15％，两步骤)。lc/ms(m 1)：465.2。
[0442]
中间体24：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
(d3)甲基
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0443][0444]
采用2，3
‑
二氯苯胺和1，3
‑
二乙基2
‑
(d3)甲基丙二酸酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为黄色固体(1g，79％)。lc/ms(m 1)：441.9。
[0445]
中间体25：1
‑
(3
‑
溴
‑2‑
氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0446][0447]
采用3
‑
溴
‑2‑
氯苯胺和1，3
‑
二乙基2
‑
甲基丙二酸酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为黄色固体。lc/ms(m 1)：485.0。
[0448]
中间体26：1
‑
(2
‑
氯
‑3‑
氟苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0449]
[0450]
采用2
‑
氯
‑3‑
氟苯胺和1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为色固体。lc/ms(m 1)：423.0。
[0451]
中间体27：1
‑
(2
‑
溴
‑3‑
氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0452][0453]
采用2
‑
溴
‑3‑
氯苯胺和1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：485.1。
[0454]
中间体28：1
‑
(2，3
‑
二氯
‑4‑
甲氧基苯基)
‑
2,5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1,6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0455][0456]
采用2,3
‑
二氯
‑4‑
氟苯胺和1,3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：469.0。
[0457]
中间体29：1
‑
(2，3
‑
二氯
‑4‑
氟苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0458][0459]
采用2,3
‑
二氯
‑4‑
氟苯胺和1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：452.9。
[0460]
中间体30：1
‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
甲基苯基)
‑
2,5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1,6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0461][0462]
采用2,3
‑
二氯
‑6‑
甲基苯胺和1,3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：456.9。
[0463]
中间体31：1
‑
(2
‑
氯
‑4‑
氟
‑3‑
甲基苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0464][0465]
采用2
‑
氯
‑4‑
氟
‑3‑
甲基苯胺和1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：436.9。
[0466]
中间体32：1
‑
(2，4
‑
二氟
‑3‑
甲氧基苯基)
‑
2,5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0467][0468]
采用2，4
‑
二氟
‑3‑
甲氧基苯胺和1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为褐色固体。lc/ms(m 1)：437.1。
[0469]
中间体33：1
‑
(2
‑
氯
‑3‑
氰基苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0470][0471]
采用3
‑
氨基
‑2‑
氯苯甲腈和1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为黄色固体。lc/ms(m 1)：430.1。
[0472]
中间体34：1
‑
(2
‑
氯
‑
3，4
‑
二氟苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0473][0474]
采用2
‑
氯
‑
3，4
‑
二氟苯胺和1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为黄色固体。lc/ms(m 1)：441.1。
[0475]
中间体35：2
‑
氨基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0476]
步骤1：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
硫烷基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0477][0478]
将2，3
‑
二氯苯基硫脲(3.0g，12.9mmol)、1，3
‑2‑
甲基丙二酸二乙酯(3.59g，25.8mmol)、18
‑
冠
‑
6(1.79g，6.445mmol)和甲醇钠(4.64g，25.8mmol)在二噁烷(30ml)中的溶液在70℃和氮气氛下搅拌3小时。减压除去溶剂，残留物通过硅胶快速色谱纯化((石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为乳白色固体(4g，83.6％)。lc/ms(m 1)：302.9。
[0479]
步骤2：3
‑
(2.3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0480][0481]
在氮气气氛和0℃下，将碘甲烷(2.0ml，14.1)加入到3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
硫烷基嘧啶
‑4‑
酮(2.0g，5.4mmol)在thf(2ml)中的溶液中。然后将反应混合物在室温下搅拌3小时并在减压下部分浓缩。滤出沉淀物，用dcm洗涤并减压干燥，得到标题化合物，为乳白色固体(1.5g，88.7％)。lc/ms(m 1)：317.0。
[0482]
步骤3：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0483][0484]
采用3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为乳白色固体。lc/ms(m 1)：471.0。
[0485]
步骤4：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲烷磺酰基
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0486][0487]
保持在0℃下，将m
‑
cpba(1.5g，6.1mmol)在dcm(10ml)中的溶液滴加入到1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯磺酸盐(650mg，1.3mmol)在dcm(20ml)中的溶液中。反应混合物在室温并搅拌4小时。减压除去溶剂，残留物通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯；5∶1)，得到标题化合物，为白色固体(550mg，89％)。lc/ms：503.0(m 1)；566.0(m acn na)。
[0488]
步骤5：2
‑
氨基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基
苯
‑1‑
磺酸盐
[0489][0490]
将1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲烷磺酰基
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯磺酸盐(500mg，0.992mmol)在甲醇/nh3(5.0ml)中的溶液在室温下搅拌1小时。将所得混合物在减压下浓缩，得到标题化合物，为白色固体(500mg，92.8％)。lc/ms(m 1)：440.0。
[0491]
中间体36b：(1m)
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐
[0492][0493]
保持在0℃下，在10分钟内将三氟甲烷磺酸酐(0.89ml；5.26mmol)加入到(3m)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体7b，1.00g；3.51mmol)和吡啶(0.57ml；7.01mmol)在dcm(6ml)中的溶液中。将反应混合物在0℃再搅拌20分钟，然后加入甲醇(1ml)和水(5ml)。将混合物在0℃再搅拌30分钟。分离各相，有机相用水(4ml)、盐水(4ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：90∶10至60∶40)，得到标题化合物，为胶状物(1.38g，94％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.89(dd，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.73(dd，j＝8.0，1.6hz，1h)，7.63(t，j＝8.0hz，1h)，2.13(s，3h)，2.01(s，3h)。lc/ms(m 1)：416.9。
[0494]
中间体36：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐
[0495][0496]
采用外消旋混合物3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体7)为起始材料，依据中间体中间体36b描述的程序制备标题化合物，为黄色油。lc/ms(m 1)：419。
[0497]
中间体37：2
‑
氨基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐
[0498]
步骤1：1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐
[0499][0500]
采用3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮为起始材料，依据中间体36描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：448.9。
[0501]
步骤2：2
‑
氨基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐
[0502][0503]
采用1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐为起始材料，依据中间体35步骤3描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：417.9.
[0504]
中间体38：3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
胺
[0505]
步骤1：3
‑
(1，3
‑
二噻烷
‑2‑
基)
‑2‑
氟吡啶
[0506][0507]
室温下向2
‑
氟吡啶
‑3‑
甲醛(46.0g，349.3mmol)和1，3
‑
丙二硫醇(43.8g，384.2mmol)在dcm(500ml)的溶液中滴加入bf3·
乙醚(29ml，107.6mmol，0.31eq.，47％)。所得混合物在室温下搅拌16小时。用饱和nahco3(200ml)淬灭反应并用乙酸乙酯(3x200ml)萃取。有机层合并，用无水na2so4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，10∶1)，获得标题化合物，为白色固体(59g，63％)。lc/ms(m 1)：216。
[0508]
步骤2：4
‑
[2
‑
(2
‑
氟吡啶
‑3‑
基)
‑
1，3
‑
二噻烷
‑2‑
基]
‑4‑
羟基哌啶
‑1‑
羧酸叔丁酯
[0509][0510]
保持在
‑
78℃，将lda溶液(240ml，2m thf溶液)加入3
‑
(1，3
‑
二噻烷
‑2‑
基)
‑2‑
氟吡啶(59.0g，220.3mmol)在thf(150ml)中的溶液中。所得混合物在
‑
20℃搅拌60分钟，然后在
‑
78℃下加入4
‑
氧代哌啶
‑1‑
羧酸叔丁酯(92.4g，440.6mmol)在thf(30ml)中的溶液中。所得混合物在
‑
78℃搅拌1小时，在0℃下用饱和nh4cl(500ml)淬灭，并用乙酸乙酯(3x300ml)萃取。有机层合并，用无水na2so4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，5∶1)，获得标题化合物，为白色固体(80g，87％)。lc/ms：359(m h
‑
56)。
[0511]
步骤3：4
‑
(2
‑
氟吡啶
‑3‑
羰基)
‑4‑
羟基哌啶
‑1‑
羧酸叔丁酯
[0512][0513]
将4
‑
[2
‑
(2
‑
氟吡啶
‑3‑
基)
‑
1，3
‑
二噻烷
‑2‑
基]
‑4‑
羟基哌啶
‑1‑
羧酸叔丁酯(90.0g，213.6mmol)、tbab(21.7g，64.1mmol)、21^[2]
‑
三溴烷.吡啶(143.8g，427.2mmol)和吡啶(27.2ml，320.4mmol，1.50eq.)在dcm(1l)和h2o(200ml)中的溶液在室温下搅拌10小时。然后用dcm(3x300ml)萃取反应混合物。有机层合并，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，2∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(50.0g，71％)。lc/ms：269(m h
‑
56)。
[0514]
步骤4：3
‑
氧代螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
羧酸叔丁酯
[0515][0516]
室温下将叔丁醇钾(6.51g，55.1mmol)添加到4
‑
(2
‑
氟吡啶
‑3‑
羰基)
‑4‑
羟基哌啶
‑1‑
羧酸叔丁酯(17.0g，50.1mmol)在二噁烷(170ml)中的溶液中。搅拌2小时后，将所得混合物倒入水(200ml)中并用乙酸乙酯(3x200ml)萃取。有机层合并，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，5∶1)，获得标题化合物，为白色固体(8.5g，53％)。lc/ms：249(m h
‑
56)。
[0517]
步骤5：3
‑
[[(r)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]亚氨基]螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸叔丁酯
[0518][0519]
将3
‑
氧代螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
羧酸叔丁酯(8.50g，26.8mmol)、(r)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺(20.5g，160.7mmol)和ti(oet)4(60ml)的混合物在90℃下搅拌2小时。所得混合物冷却至室温，倒入水(150ml)中。过滤，滤液用乙酸乙酯(3x150ml)萃取。有机层合并，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯，5∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(11g，96％)。lc/ms(m 1)：408.0。
[0520]
步骤6：3
‑
[[(s)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]氨基]
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
24
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸叔丁酯
[0521][0522]
在
‑
50℃下，边搅拌边将硼氢化钠(4.66g，117mmol)分批加入3
‑
[[(r)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]亚氨基]螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2,4
‑
哌啶]
‑1‑
羧酸叔丁酯(10.0g，
23.4mmol)在thf(100ml)和甲醇(100ml)中的溶液中。将所得混合物在
‑
50℃搅拌1小时，并用水(10ml)淬灭。减压除去溶剂，然后用水(100ml)稀释混合物并用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。有机层合并，用盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，获得标题化合物，为黄色固体(10g，62％)。lc/ms(m i)：410.0。
[0523]
步骤7：3h
‑
螺[呋喃并[2,3
‑
b]吡啶
‑
2,4
′‑
哌啶]
‑3‑
胺
[0524][0525]
保持在0℃下，将hcl(气态)在1，4
‑
二噁烷(100ml)中的溶液滴加到
‑3‑
[[(s)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]氨基]
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸叔丁酯(10.0g，24.4mmol)在dcm(60ml)中的溶液中。在室温下搅拌1小时后，将所得混合物减压浓缩。将得到的盐酸盐加载到siliabond丙基磺酸(scx
‑
2)树脂上，该树脂用甲醇预润湿，再用甲醇洗脱直到检测不到hcl。然后用7m nh3的甲醇溶液洗掉游离胺。真空浓缩洗脱液，得到标题化合物，为橙色油(4.0g，77.7％)。lc/ms(m 1)：206。
[0526]
中间体39：(s)
‑2‑
甲基
‑
n
‑
[螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
亚基]丙烷
‑2‑
亚磺酰胺三氟乙酸
[0527]
步骤1：4
‑
[(3
‑
溴吡啶
‑4‑
基)甲基]
‑4‑
羟基哌啶
‑1‑
羧酸酯
[0528][0529]
保持在
‑
60℃下，将nahmds溶液(3.3ml 1m thf溶液，3.3mmol)加入到3
‑
溴
‑4‑
甲基吡啶(500mg，2.76mmol)在thf(10ml)中的溶液中。所得混合物在
‑
15℃搅拌1小时，然后
‑
60℃下加入bf3·
乙醚(2.2ml，7.4mmol，3.0eq.，47％)和4
‑
氧代哌啶
‑1‑
羧酸叔丁酯(694mg，3.31mmol)在thf(2ml)中的溶液。在
‑
60℃搅拌2小时后，所得混合物用水(20ml)淬灭并用乙酸乙酯(3x30ml)萃取。有机层合并，用盐水(1x30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶2)，得到标题化合物，为黄色油(5.7g，55％)。lc/ms(m 1)：372,374。
[0530]
步骤2：3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸酯
[0531][0532]
将4
‑
[(3
‑
溴吡啶
‑4‑
基)甲基]
‑4‑
羟基哌啶
‑1‑
羧酸叔丁酯(3.0g，7.96mmol)，喹啉
‑8‑
醇(267mg，1.75mmol)、cs2co3(5.10g，14.9mmol)和cui(143mg，0.713mmol)在甲苯(75ml)中的混合物在110℃搅拌16小时。将所得混合物冷却、过滤并减压浓缩。通过硅胶快速色谱法(dcm：甲醇，12∶1)纯化残留物，得到标题化合物，为绿色固体(2.3g，95％)。lc/ms(m 1)：291。
[0533]
步骤3：3
‑
溴
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸酯
[0534][0535]
将3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
羧酸叔丁酯(100mg，0.328mmol)、aibn(6mg，0.035mmol)和nbs(92mg，0.491mmol)在chcl3(5.0ml)中的溶液在90℃搅拌4小时。将所得混合物冷却至室温，并倒入饱和nahco3溶液(30ml)中，用dcm(3x30ml)萃取。有机层合并，用盐水(1x30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(1.0g，16％产率，63％纯度)。lc/ms(m 1)：369，371。
[0536]
步骤4：3
‑
氧代螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸酯
[0537][0538]
将3
‑
溴
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
羧酸叔丁酯(240mg，0.409mmol，1.0eq.，63％)、nahco3(198mg，2.25mmol，5.49eq.)、dmso(4ml)和4a分子筛(20mg)的混合物在120℃搅拌2.5小时。将所得混合物冷却至室温，并倒入饱和水(30ml)中，用乙酸乙酯(3x30ml)萃取。有机层合并，用盐水(1x30ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(280mg，41％产率，43％纯度)。lc/ms(m 1)：305。
[0539]
步骤5：(3e)
‑3‑
[[(s)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]亚氨基]螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸酯
[0540][0541]
将3
‑
氧代螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
羧酸叔丁酯(280mg，0.394mmol)、(s)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺(170mg，1.33mmol)和ti(oet)4(3ml)的混合物在90℃搅拌2小时。将所得混合物冷却至室温，用水(25ml)和乙酸乙酯(25ml)稀释并过滤(25ml)。滤饼用乙酸乙酯(30ml)洗涤，滤液用乙酸乙酯(3x30ml)萃取。有机层合并，用盐水(1x50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶快速色谱纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为黄色固体(180mg，99％产率)。lc/ms(m＝1)：408。
[0542]
步骤6：(s)
‑2‑
甲基
‑
n
‑
[螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
亚基]丙烷
‑2‑
亚磺酰胺三氟乙酸
[0543]
[0544]
将(3e)
‑3‑
[[(s)
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰基]亚氨基]螺
‑
[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
羧酸叔丁酯(160mg，0.345mmol)、tfa(2.0ml)和dcm(4.0ml)的混合物在25℃搅拌1小时。所得混合物减压浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(108mg，99％)。lc/ms(m 1)：308。
[0545]
中间体40：5，7
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
6，4
′‑
哌啶]
‑5‑
胺二盐酸盐
[0546][0547]
采用5
‑
氧代
‑
5，7
‑
二氢螺[环戊二烯并
‑
[b]吡啶
‑
6，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
羧酸叔丁酯(pharmablock)为起始材料，依据中间体38步骤4至7描述的程序制备标题化合物，为浅黄色固体(分离为盐酸盐)。lc/ms(m 1)：204.1。
[0548]
中间体41：(1r)
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1‑
胺二盐酸盐
[0549][0550]
采用n
‑
boc
‑1‑
氧代
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶](chemshuttle)和(s)
‑
(
‑
)
‑2‑
甲基
‑2‑
丙烷亚磺酰胺为起始材料，依据中间体38步骤5至7描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms (m 1)：203.1。
[0551]
中间体42：1
‑
[2
‑
氯
‑3‑
(三氟甲基)苯基]
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二2氢嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑1‑
磺酸盐
[0552][0553]
采用2
‑
氯
‑3‑
(三氟甲基)苯胺(489mg，2.4mmol)为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为白色固体(350mg，24％，2步骤)。lc/ms(m 1)：458.9。
[0554]
中间体43：甲基2
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑4‑
[(4
‑
甲基苯磺酰基)氧基]
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑5‑
基]乙酸酯
[0555][0556]
采用2，3
‑
二氯苯胺(200mg，1.2mmol)和1，1，2
‑
三乙基乙烷
‑
1，1，2
‑
三羧酸酯(246mg，4.7mmol)为起始材料，依据中间体10描述的程序制备标题化合物，为黄色固体(250mg，68％，2步骤)。lc/ms(m 1)：496.9。
[0557]
化合物1：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，
4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0558]
步骤1：n
‑
{1
‑
[1
‑
(2.3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸叔丁酯
[0559]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体1，100mg；0.31mmol)和(4
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)氨基甲酸叔丁酯(133mg；0.62mmol)在乙醇(1ml)中的溶液在100℃加热16小时。减压除去溶剂，残留物通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：70∶30至0∶100)，得到标题化合物(60mg，98％)。lc/ms(m 1)：499.2。
[0560]
步骤2：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0561][0562]
将n
‑
{1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸叔丁酯(34mg；0.07mmol)在dcm(2ml)和tfa(0.5ml)中的溶液在室温搅拌2小时。减压除去溶剂，粗产物通过制备型hplc(xbridge prep.c18.5μm，30mm x 50mm，acn水溶液/0.1％nh4oh，12分钟梯度：20至80％)纯化，得到标题化合物，为白色粉末(18mg，67％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d 7.82(dd，j＝7.2，2.5hz，1h)，7.57
‑
7.48(m，2h)，5.27(s，1h)，3.73(brs，2h)，3.51(m，2h)，2.42(s，3h)，1.67(brs，2h)，1.43(m，4h)，1.10(s，3h)。lc/ms(m 1)：399.0。hplc纯度：99.0％。
[0563]
化合物2：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0564][0565]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，100mg；0.35mmol)和(4
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)氨基甲酸叔丁酯(111mg；0.52mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(29mg，45％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d 7.78(dt，j＝6.3，2.7hz，1h)，7.59
‑
7.48(m，2h)，5.35(s，1h)，3.70(m，2h)，3.47(m，2h)，1.98(s，3h)，1.47(brs，2h)，1.40(m，4h)，1.09(d，j＝2.1hz，3h)。lc/ms(m 1)：367.1。
[0566]
化合物2a和2b：(3p)
‑6‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0567][0568]
通过制备型sfc(ad
‑
h柱，250x21mm，5微米；洗脱液：甲醇
‑
nh4oh 20mm：co2，25：75
(％v/v))分离6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮的外消旋混合物。
[0569]
第一洗脱异构体（化合物2a)：62mg，rt＝2.41min，纯度：100％，1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.84
‑
7.74(m，1h)，7.58
‑
7.48(m，2h)，5.35(s，1h)，3.70(m，2h)，3.49(m，2h)，1.98(s，3h)，1.54(s，2h)，1.41(m，4h)，1.09(s，3h)。
[0570]
第二洗脱异构体（化合物2b)：75mg，rt＝2.87min，纯度：100％。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.81(dd，j＝7.8，1.9hz，1h)，7.62
‑
7.45(m，2h)，5.47(s，1h)，4.01(m，2h)，2.01(s，3h)，1.72(m，4h)，1.38(s，3h)。
[0571]
化合物3：6
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0572][0573]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，150mg；0.52mmol)和n
‑
[(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(154mg；0.57mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(12mg，19％)。1∶1两种阻转异构体的混合物。lc/ms(m 1)：424.2。
[0574]
化合物3a和3b：(3p)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0575][0576]
通过制备型sfc(as
‑
h柱，250x21mm，5微米；洗脱液：甲醇
‑
nh4oh 20mm：co2，30：70)分离6
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮的阻转异构体。
[0577]
第一洗脱异构体(化合物3a)：33mg，rt＝3.88min，纯度＝100％。1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.86
‑
7.73(m，1h)，7.58
‑
7.46(m，2h)，5.37(s，1h)，4.11
‑
4.01(m，1h)，3.80(m，2h)，3.67(d，j＝8.4hz，1h)，3.48(d，j＝8.4hz，1h)，3.36
‑
3.28(m，2h)，2.90(m，1h)，1.99(s，3h)，1.78
‑
1.36(m，6h)，1.09(d，j＝6.5hz，3h)。
[0578]
第二洗脱异构体(化合物3b)：30mg，rt＝4.50min，纯度＝100％。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.86
‑
7.74(m，1h)，7.60
‑
7.44(m，2h)，5.37(s，1h)，4.14
‑
4.00(m，1h)，3.78(brs，2h)，3.67(d，j＝8.5hz，1h)，3.48(d，j＝8.4hz，1h)，3.41(m，1h)，3.28(m，1h)，2.90(d，j＝5.1hz，1h)，1.99(s，3h)，1.80
‑
1.33(m，6h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。
[0579]
化合物4：6
‑
[4
‑
(氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0580][0581]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，150mg；0.52mmol)和4
‑
(boc
‑
氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶盐酸盐(151mg；0.57mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(5mg，3％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.79(t，j＝5.4hz，1h)，7.59
‑
7.50(m，2h)，5.34(s，1h)，3.80(m，2h)，3.28(m，4h)，2.41(s，2h)，1.98(s,3h)，1.51
‑
1.38(m，2h)，1.27(d，j＝13.7hz，2h)，0.93(s，3h)。lc/ms(m 1)：381.2。
[0582]
化合物5：2
‑
氨基
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0583][0584]
将2
‑
氨基
‑6‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体4，75mg；0.18mmol)和n
‑
[(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(71mg；0.26mmol)在乙醇(2.3ml)中的溶液在100℃搅拌20小时。减压除去溶剂，残留物用水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(25ml)萃取。有机层用水(2x)和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将该粗产物直接重新溶解在dcm(1.8ml)和tfa(0.9ml)中并在室温搅拌1小时。减压除去溶剂，残留物与甲苯共蒸发3次。通过制备型hplc(xbridge prep c
‑
18 obd 10um，30x250；10
‑
45％乙腈/水(0.1％氢氧化铵)，12分钟梯度)纯化，得到标题化合物，为白色粉末(8mg，22％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.71(dd，j＝8.2，1.5hz，1h)，7.45(t，j＝8.0hz，1h)，7.32(dd，j＝7.9，1.5hz，1h)，6.44(s，2h)，4.90(s，1h)，4.11
‑
3.99(m，1h)，3.81
‑
3.67(m，2h)，3.65(d，j＝8.5hz，1h)，3.47(dd，j＝8.4，1.5hz，1h)，3.28
‑
3.08(m，2h)，2.88(dd，j＝5.1，1.1hz，1h)，1.68(ddd，j＝13.2，9.2，3.8hz，1h)，1.63
‑
1.51(m，1h)，1.51
‑
1.24(m，4h)，1.07(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：424.1。hplc纯度：100％。
[0585]
化合物6a和6b：( /
‑
)
‑
(3m)
‑6‑
[(4s)
‑4‑
氨基
‑4‑
甲基环己
‑1‑
烯
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(外消旋
‑
相对构型)和( /
‑
)
‑
(3p)
‑6‑
[(4s)
‑4‑
氨基
‑4‑
甲基环己
‑1‑
烯
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(外消旋，相对构型)
[0586][0587]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，25mg；0.09mmol)、n
‑
[1
‑
甲基
‑4‑
(4，4，5，5
‑
四甲基
‑
1，3，2
‑
二氧硼杂环戊烷
‑2‑
基)环己
‑3‑
烯
‑1‑
基]氨基甲酸叔丁酯(35mg；0.10mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(20mg；0.02mmol)和碳酸铯(62mg；0.19mmol)在二噁烷(1ml)和水(0.3ml)中的混合物在室温搅拌48小时。然后用水稀释并用乙酸乙酯萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后加入hcl在二噁烷中的
溶液(4ml，4n溶液)，将反应混合物在室温搅拌30分钟。在减压下除去溶剂，并通过制备型hplc(xbridge c18.5um，30mm x 250mm，乙腈水溶液(0.1％氨水)，25分钟梯度：5至80％)纯化，得到标题化合物(异构体混合物，任意分配立体化学)。
[0588]
第一洗脱异构体(化合物6a)：3.5mg，1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.84(dd，j＝7.8，1.9hz，1h)，7.65
‑
7.56(m，2h)，7.09(d，j＝4.5hz，1h)，6.32(s，1h)，3.28(s，1h)，2.18(d，j＝8.8hz，1h)，2.08(s，3h)，1.56(t，j＝6.5hz，2h)，1.05(s，3h)。lc/ms(m 1)：364.1。
[0589]
第二洗脱异构体(化合物6b)：2mg.lc/ms(m 1)：364.1。
[0590]
化合物7：6
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑2‑
甲基
‑3‑
苯基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0591][0592]
采用6
‑
氯
‑2‑
甲基
‑3‑
苯基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体5，50mg；0.23mmol)和n
‑
[(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(61mg；0.23mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(21mg，33％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.55
‑
7.42(m，3h)，7.32
‑
7.25(m，2h)，5.35(s，1h)，4.10
‑
4.02(m，1h)，3.78(m，2h)，3.67(d，j＝8.4hz，1h)，3.48(d，j＝8.4hz，1h)，3.42
‑
3.33(m，1h)，3.29
‑
3.22(m，1h)，2.90(d，j＝5.1hz，1h)，1.99(s，3h)，1.71(m，1h)，1.60(m，1h)，1.54
‑
1.40(m，2h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：355.2。
[0593]
化合物8：2
‑
氨基
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑
3，3
‑
二氟
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0594][0595]
采用2
‑
氨基
‑6‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体4，31mg；0.11mmol)和n
‑
[(1r)
‑
3，3
‑
二氟
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基]氨基甲酸叔丁酯(46mg；0.16mmol)为起始材料，依据化合物5描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(16mg，33％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.71(dd，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.45(t，j＝8.0hz，1h)，7.32(dd，j＝7.9，1.5hz，1h)，6.45(s，2h)，4.91(s，1h)，4.23
‑
3.97(m，2h)，3.05
‑
2.80(m，3h)，2.79
‑
2.57(m，2h)，2.46
‑
2.26(m，2h)，2.10
‑
1.86(m，2h)，1.72
‑
1.50(m，2h)，1.39
‑
1.18(m，2h)。lc/ms(m 1)：444.1。
[0596]
化合物9：6
‑
[4
‑
(氨基甲基)
‑4‑
甲基环己
‑1‑
烯
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0597][0598]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，100mg；0.35mmol)和n
‑
{[1
‑
甲基
‑4‑
(4，4，5，5
‑
四甲基
‑
1，3，2
‑
二氧硼杂环戊烷
‑2‑
基)环己
‑3‑
烯
‑
1
‑
基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(145mg；0.41mmol)为起始材料，依据化合物6描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(非对映异构体混合物，58mg，43％)。lc/ms(m 1)：378.1
[0599]
化合物10：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑5‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0600]
步骤1：n
‑
{1
‑
[5
‑
氯
‑1‑
(23
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸叔丁酯
[0601][0602]
保持在0℃下，将n
‑
氯琥珀酰亚胺(25mg；0.19mmol)加入到n
‑
{1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸叔丁酯(在化合物2步骤1中制备，63mg；0.13mmol)在dcm(1ml)中的溶液中。然后将反应混合物在0℃搅拌2小时。添加饱和na2s2o3溶液淬灭，并在室温搅拌10分钟。混合物用乙酸乙酯萃取，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：90∶10至50∶50)，获得标题化合物(54mg，80％)。lc/ms(m 1)：501.1。
[0603]
步骤2：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑5‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0604][0605]
采用n
‑
{1
‑
[5
‑
氯
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸叔丁酯(54mg；0.10mmol)为起始材料，依据化合物1步骤2描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(14mg，34％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.83(dd，j＝7.9，1.7hz，1h)，7.65
‑
7.47(m，2h)，3.89
‑
3.77(m，2h)，3.64(dd，j＝13.5，8.9hz，2h)，2.00(s，3h)，1.51(d，j＝11.8hz，4h)，1.12(s，3h)；lc/ms(m 1)：401.1。
[0606]
化合物11：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2,3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0607]
步骤1：n
‑
{1
‑
[1
‑
(23
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑6‑
氧代
‑
1.6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸叔丁酯
[0608][0609]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮(中间体6，75mg)、(4
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)氨基甲酸叔丁酯(148mg；0.69mmol)和diea(0.16μl，0.92mmol)在无水dmso(1.50ml)中的溶液在70℃搅拌6小时.反应混合物用水(5ml)稀释，然后用乙酸乙酯(10ml)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：80∶20至0∶100)，获得标题化合物，为白色固体(84mg，71％)。1h nmr
(400mhz，dmso
‑
d6)7.81(dd，j＝8.0，1.7hz，1h)，7.58(dt，j＝8.0，1.4hz，1h)，7.52(t，j＝8.0hz，1h)，6.53(t，j＝52.1hz，1h)，5.58(s，1h)，3.28
‑
3.17(m，2h)，2.64
‑
2.52(m，2h)，2.19
‑
2.05(m，2h)，1.53
‑
1.41(m，2h)，1.40(s，9h)，1.26(s，3h)。lc/ms(m 1)：503.1。
[0610]
步骤2：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0611][0612]
采用n
‑
{1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸酯(84mg；0.17mmol)为起始材料，依据化合物1步骤2描述的程序制备标题化合物，为白色固体(58mg，86％)。1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)δ7.98(s，2h)，7.84(dd，j＝7.8，1.9hz，1h)，7.63
‑
7.48(m，2h)，6.55(t，j＝51.9hz，1h)，5.69(s，1h)，4.25
‑
3.84(m，2h)，3.42
‑
3.34(m，2h)，1.84
‑
1.63(m，4h)，1.38(s，3h)。lc/ms(m 1)：403.0。hplc纯度：100％。
[0613]
化合物12：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0614][0615]
采用66
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮(中间体6，75mg)和(4
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)氨基甲酸叔丁酯(156mg；0.74mmol)为起始材料，依据化合物11描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(64mg，65％)。1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)δ7.95(s，2h)，7.82(dd，j＝7.4，2.3hz，1h)，7.61
‑
7.47(m，2h)，3.72
‑
3.59(m，2h)，3.27
‑
3.11(m，2h)，1.99(s,3h)，1.89(s，3h)，1.83
‑
1.67(m，4h)，1.36(s,3h)。lc/ms (m 1)：382.9。hplc纯度：100％。
[0616]
化合物13：6
‑
[1
‑
(氨基甲基)
‑6‑
氮杂螺[2.5]辛烷
‑6‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0617][0618]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)和6
‑
氮杂螺[2.5]辛烷
‑1‑
甲胺(36mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1步骤1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(20mg，27％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.80(dd，j＝7.1，2.5hz，1h)，7.59
‑
7.49(m，2h)，5.42(s，1h)，3.90(m，2h)，3.40(m，2h)，2.94(dd，j＝13.1，7.1hz，1h)，2.73(dd，j＝13.1，7.8hz，1h)，2.00(s，3h)，1.70(m，1h)，1.57(m，
1h)，1.39(m，1h)，1.20(m，1h)，0.87(m，1h)，0.65(m，1h)，0.38(t，j＝4.9hz，1h)；lc/ms(m 1)：393.1。
[0619]
化合物14：6
‑
[3a
‑
(氨基甲基)
‑
八氢环戊二烯并[c]吡咯
‑2‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0620][0621]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)、外消旋
‑
n
‑
([(3ar，6ar)
‑
八氢
‑
环戊二烯并[c]吡咯
‑
3a
‑
基]甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(72mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(40mg，55％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.79(dd，j＝6.9，2.8hz，1h)，7.58
‑
7.47(m，2h)，4.99(d，j＝1.1hz，1h)，3.14
‑
3.71(m 4h)，2.55(s，2h)，2.38(s，1h)，1.97(s，3h)，1.86
‑
1.48(m，6h)。lc/ms(m 1)：393.1。
[0622]
化合物15：6
‑
[1
‑
(氨基甲基)
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0623][0624]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)和n
‑
(8
‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(69mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色[泡沫(25mg，33％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.80(dd，j＝7.7，1.9hz，1h)，7.59
‑
7.47(m，2h)，5.39(s，1h)，4.16(s，1h)，3.23(m，2h)，3.05
‑
2.93(m，2h)，2.58(m，2h)，1.99(s，3h)，1.97
‑
1.87(m，1h)，1.69(m，1h)，1.74
‑
1.28(m，4h)。lc/ms(m 1)：393.1。
[0625]
化合物16：6
‑
[4
‑
(2
‑
氨基乙基)
‑4‑
(羟基甲基)哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0626][0627]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol.)和[4
‑
(2
‑
氨基乙基)哌啶
‑4‑
基]甲醇(60mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1步骤1描述的程序制备标题化合物，为褐色粉末(30mg，38％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.79(m，1h)，7.53(m，2h)，3.54(m，4h)，3.28(s，2h)，2.59(t，j＝6.8hz，2h)，1.98(s，3h)，1.47(m，4h)，1.40(m，2h)。lc/ms(m 1)：411.2。
[0628]
化合物17：6
‑
[4
‑
(氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0629][0630]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体6，75mg；0.23mmol)和4
‑
(boc
‑
氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶盐酸盐(183mg；0.69mmol)为起始材料，依据化合物11描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(55mg，55％)。1hnmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)7.83(dd，j＝7.8，1.9hz，1h)，7.74(s,2h)，7.61
‑
7.46(m，2h)，6.55(t，j＝52.0hz，1h)，5.63(s，1h)，4.02
‑
3.70(m，2h)，3.51
‑
3.36(m，2h)，2.87
‑
2.73(m，2h)，1.59
‑
1.36(m，4h)，1.07(s,3h)。lc/ms(m 1)：417.0。hlpc纯度：96％。
[0631]
化合物18：6
‑
[4
‑
(氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2,5
‑
二甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0632][0633]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体8，75mg；0.25mmol)和4
‑
(boc
‑
氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶盐酸盐(196mg；0.74mmol)为起始材料，依据化合物11描述的程序制备标题化合物，为白色固体(26mg，27％)。1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)7.81(dd，j＝7.3,2.3hz，1h)，7.73(s，2h)，7.62
‑
7.44(m，2h)，3.60
‑
3.45(m，2h)，3.28
‑
3.16(m，2h)，2.80(s，3h)，1.98(s,3h)，1.89(s,3h)，1.63
‑
1.49(m，2h)，1.49
‑
1.36(m，2h)，1.06(s，3h)。lc/ms(m 1)：395.0。hplc纯度：100％。
[0634]
化合物19：( /
‑
)
‑6‑
[(3as，7ar)
‑
7a
‑
(氨基甲基)
‑
八氢吡喃并[3，4
‑
c]吡咯
‑2‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(相对构型)
[0635][0636]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(50mg；0.17mmol)和( /
‑
)
‑
n
‑
{[(3as，7as)
‑
八氢吡喃并[3，4
‑
c]吡咯
‑
7a
‑
基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(56mg，0.2mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(20mg，28％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.80(m，1h)，7.53(m，2h)，4.99(d，j＝1.3hz，1h)，3.57(m，4h)，3.35(m，1h)，3.29(s，2h)，3.17(m，1h)，2.67(m，1h)，2.55(m，1h)，2.45(m，0.5h)，2.34(m，0.5h)，2.16(m，0.5h)，2.07(m，0.5h)，1.98(s，3h)，1.60(m，2h)，1.45(m，2h)。lc/ms(m 1)：410.1。
[0637]
化合物20a和20b：(3p)
‑6‑
[(3s,4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0638][0639]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
(二氟甲基)
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体6，75mg；0.23mmol)和n
‑
[(3s,4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(124mg；0.46mmol)为起始材料，依据化合物11描述的程序制备标题化合物。通过制备型hplc(chiral柱whelk
‑
o，250x21mm，5微米，甲醇/20mm nh4oh和co2，30/70)分离阻转异构体。
[0640]
第一洗脱异构体(化合物20a)：17mg，rt＝3.72min，ed＝100％，白色固体。1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)7.81(dd，j＝8.0，1.7hz，1h)，7.59(dt，j＝8.0，1.3hz，1h)，7.52(t，j＝8.0hz，1h)，6.53(t，j＝52.1hz，1h)，5.58(s，1h)，4.12
‑
4.01(m，1h)，3.93
‑
3.71(m，2h)，3.67(d，j＝8.5hz，1h)，3.48(d，j＝8.5hz，1h)，3.46
‑
3.33(m，2h)，2.92(d，j＝5.1hz，1h)，1.75(ddd，j＝13.2，9.1，3.8hz，1h)，1.63(ddd，j＝13.2，9.0，4.0hz，1h)，1.58
‑
1.32(m，4h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：459.0。hplc纯度：100％。
[0641]
第二洗脱异构体(化合物20b)：19mg，rt＝4.46min，ed＝100％，白色固体。1h nmr(dmso)1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)7.81(dd，j＝8.0，1.7hz，1h)，7.59(dt，j＝8.0，1.3hz，1h)，7.52(t，j＝8.0hz，1h)，6.53(t，j＝52.1hz，1h)，5.58(s，1h)，4.12
‑
4.01(m，1h)，3.93
‑
3.71(m，2h)，3.67(d，j＝8.5hz，1h)，3.48(d，j＝8.5hz，1h)，3.46
‑
3.33(m，2h)，2.92(d，j＝5.1hz，1h)，1.75(ddd，j＝13.2，9.1，3.8hz，1h)，1.63(ddd，j＝13.2，9.0，4.0hz，1h)，1.58
‑
1.32(m，4h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：459.0。hplc纯度：100％。
[0642]
化合物21：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基氮杂环庚烷
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮盐酸盐
[0643]
步骤1：n
‑
{1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基氮杂环庚烷
‑4‑
基}氨基甲酸苯甲酯
[0644][0645]
将1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯
‑
磺酸盐(中间体10，100mg，0.223mmol)、n
‑
(4
‑
甲基氮杂环庚烷
‑4‑
基)氨基甲酸苯甲酯(74mg，0.268mmol)和cs2co3(115mg，0.335mmol)在dmf(10ml)中的溶液在0.268mmol)和cs2co3(115mg，0.335mmol)在dmf(10ml)was stirred for 2h at 100℃搅拌2小时。反应混合物用水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(3x10ml)萃取。有机层合并，用无水硫酸盐干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化(石油醚∶乙酸乙酯，梯度：100∶0至0∶100)，得到标题化合物，为白色固体(50mg，32％)。lc/ms(m 1)：515.3。
[0646]
步骤2：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基氮杂环庚烷
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮盐酸盐
[0647][0648]
保持在0℃下，边搅拌边将溴化氢在乙酸(1.50ml，40％)中的溶液滴加入n
‑
[1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基氮杂环庚烷
‑4‑
基]氨基甲酸苯甲酯(50mg，0.072mmol)在dcm(5.00ml)中的溶液中。然后将反应混合物在室温搅拌1小时并在减压下浓缩。通过制备型hplc(xbridge prep c18 obd柱，19x150mm，5um；水(0.05％hcl)和乙腈，8分钟内从20％至50％)纯化，得到标题化合物，为黄色粉末(14mg，46％)。1h nmr(dmso
‑
d6 d2o)7.74(dd，j＝8.0，1.6hz，1h)，7.55
‑
7.36(m，2h)，3.92(s，1h)，3.40(s，4h)，2.02(s，3h)，1.97
‑
1.71(m，6h)，1.26(s，3h)。lc/ms(m 1)：381.0。hplc(纯度)99％。熔点：158
‑
160℃。
[0649]
化合物22：4
‑
氨基
‑1‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
氢嘧啶
‑4‑
基]哌啶
‑4‑
甲酰胺
[0650][0651]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)和(4
‑
氰基哌啶
‑4‑
基)氨基甲酸叔丁酯(58mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(5mg，7％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.79(dd，j＝6.6，3.1hz，1h)，7.59
‑
7.49(m，2h)，7.43(s，1h)，6.96(s，1h)，5.38(s，1h)，3.98(m，2h)，3.34(m，2h)，1.99(s，3h)，1.88(t，j＝12.6hz，2h)，1.39(m，2h)。lc/ms(m 1)：396.1。
[0652]
化合物23a和23b：(3p)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0653]
步骤1：n
‑
[(3s，4s)
‑8‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯
[0654][0655]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体8，75mg；0.25mmol)、n
‑
[(3s,4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(133mg；0.49mmol)和diea(170μl，0.99mmol)在无水dmso(1.50ml)中的溶液在70℃加热6小
时。反应混合物用水稀释，然后用乙酸乙酯(10ml)萃取。有机层用水(2x5ml)和盐水(5ml)洗涤。用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：80∶20至0∶100)，获得标题化合物，为白色固体(108mg；80％)。lc/ms(m 1)：537.0。
[0656]
步骤2：(3p)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0657][0658]
将n
‑
[(3s,4s)
‑8‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(108mg；0.20mmol)在dcm(2.2ml)和tfa(2.2ml)中的溶液在室温搅拌1小时。减压除去溶剂，残留物与甲苯共蒸发3次。通过制备型hplc(chiral柱ia 250x21mm，5微米；洗脱液：甲醇/20mm nh4oh 20mm和co2，4分钟梯度：5至45％v/v)纯化，获得预期化合物的两种阻转异构体：
[0659]
第一洗脱异构体(化合物23a)：27mg，白色固体，rt＝2.82min，ee＝100％，1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.80(dd，j＝5.8，3.9hz，1h)，7.54(m，2h)，4.07(m，1h)，3.68(d，j＝8.5hz，1h)，3.62
‑
3.53(m，2h)，3.51(d，j＝8.5hz，1h)，3.24
‑
3.06(m，4h)，2.96(d，j＝5.1hz，1h)，1.97(s，3h)，1.89(s，3h)，1.84
‑
1.73(m，1h)，1.73
‑
1.62(m，1h)，1.62
‑
1.45(m，2h)，1.10(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：437.0。
[0660]
第二洗脱异构体(化合物23b)：27mg，白色固体，rt＝4.29min，ee＝100％，1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.84
‑
7.76(m，1h)，7.58
‑
7.49(m，2h)，4.05(qd，j＝6.5，5.1hz，1h)，3.65(d，j＝8.4hz，1h)，3.61
‑
3.50(m，2h)，3.49(d，j＝8.4hz，1h)，3.26
‑
3.17(m，1h)，3.17
‑
3.07(m，1h)，2.89(d，j＝5.1hz，1h)，1.97(s，3h)，1.89(s，3h)，1.77(ddt，j＝16.9，11.0，5.4hz，1h)，1.67(ddd，j＝13.1，9.1，3.7hz，1h)，1.60
‑
1.44(m，2h)，1.42
‑
1.21(m，2h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：437.0。
[0661]
化合物24：6
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑5‑
(三氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0662][0663]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑5‑
(三氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体11，50mg；0.14mmol)和(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺(48mg；0.28mmol)为起始材料，依据化合物11步骤1描述的程序制备标题化合物，为白色固体(两种阻转异构体，25mg，36％)。lc/ms(m 1)491.0。
[0664]
化合物25：( /
‑
)
‑6‑
[(3as，6ar)
‑
3a
‑
(氨基甲基)
‑
八氢环戊二烯并[c]吡咯
‑2‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑5‑
(三氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(相对构型)
[0665][0666]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑5‑
(三氟甲基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体11，50mg；0.14mmol)和( /
‑
)
‑1‑
[(3as，6ar)
‑
八氢环戊二烯并[c]吡咯
‑
3a
‑
基]甲胺二盐酸盐(60mg；0.28mmol)为起始材料，依据化合物11步骤1描述的程序制备标题化合物，为白色固体(阻转异构体混合物，8mg，12％)。lc/ms(m 1)：461.0。
[0667]
化合物26：6
‑
[4
‑
氨基
‑4‑
(2
‑
羟基乙基)哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0668][0669]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)和2
‑
(4
‑
氨基哌啶
‑4‑
基)乙
‑1‑
醇二盐酸盐(56mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1步骤1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(阻转异构体混合物，13mg，18％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ7.79(m，1h)，7.56
‑
7.50(m，2h)，5.35(s，1h)，3.76(m，2h)，3.60(t，j＝6.6hz，2h)，3.44(m，2h)，1.98(s，3h)，1.56(t，j＝6.3hz，2h)，1.46(m，2h)。lc/ms(m 1)：397.1。
[0670]
化合物27：6
‑
{(r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基}
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0671][0672]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)和n
‑
[(1r)
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基]氨基甲酸叔丁酯(wuxi，53mg，0.2mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(阻转异构体混合物，30mg，39％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.80(m，1h)，7.58
‑
7.48(m，2h)，5.35(s，1h)，3.29(m，2h)，3.14
‑
2.96(m，2h)，2.69(t，j＝7.4hz，1h)，1.99(s，3h)，1.92
‑
1.72(m，2h)，1.69
‑
1.47(m，2h)，1.43
‑
1.77(m，6h)。lc/ms(m 1)：407.2。
[0673]
化合物28：6
‑
[4
‑
(氨基甲基)
‑4‑
羟基哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0674][0675]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)和4
‑
(氨基甲基)哌啶
‑4‑
醇二(三氟乙酸)(93mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1步骤1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(21mg，31％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.80(m，1h)，7.52(m，2h)，5.35(d，j＝6.9hz，1h)，4.29(s，1h)，4.00(m，2h)，3.33
‑
3.17(m，2h)，2.45(s，2h)，1.99(s，3h)，1.47(m，4h)。lc/ms(m 1)：383.1。
[0676]
化合物29：6
‑
[4
‑
氨基
‑4‑
(羟基甲基)哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0677][0678]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，50mg；0.17mmol)和n
‑
[4
‑
(羟基甲基)哌啶
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(60mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(26mg，31％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.83
‑
7.74(m，1h)，7.58
‑
7.48(m，2h)，5.33(d，j＝2.2hz，1h)，4.74(d，j＝3.9hz，1h)，3.82(m 2h)，3.57(m，1h)，3.36(m 1h)，3.22(m，1h)，2.91(m，1h)，1.98(s,3h)，1.55(m，4h)。lc/ms(m 1)：383.1。
[0679]
化合物30：( /
‑
)
‑6‑
[(3s，4r)
‑4‑
氨基
‑3‑
羟基哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0680][0681]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，50mg；0.17mmol)、n
‑
[(3s，4r)
‑
rel
‑3‑
羟基哌啶
‑4‑
基]氨基甲酸叔丁酯(56mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(30mg，47％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.80(m，1h)，7.57
‑
7.50(m，2h)，5.36(s，1h)，4.74(s，1h)，3.87(m，2h)，3.21(s，1h)，1.99(s，2h)，1.53(t，j＝11.0hz，2h)，1.34(d，j＝13.7hz，2h)。lc/ms(m 1)：369.1。
[0682]
化合物31：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
[4
‑
甲基
‑4‑
(甲基氨基)哌啶
‑1‑
基]
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0683][0684]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2，50mg；0.17mmol)和n
‑
甲基
‑
n
‑
(4
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)氨基甲酸叔丁酯(59mg；0.26mmol)为起始材料，
依据化合物1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(20mg，30％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.80(m，1h)，7.54(m，2h)，5.34(s，1h)，3.67(m，2h)，3.44(q，j＝10.7hz，2h)，3.27(m，2h)，2.20(s，3h)，1.98(s，3h)，1.55(m，1h)，1.40(m，2h)，1.04(s，3h)。lc/ms (m 1)：381.1。
[0685]
化合物32a和32b：(3p)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0686][0687]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体12；80mg；0.26mmol)和(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺(wuxi；88mg；0.52mmol)为起始材料，依据化合物11步骤1描述的程序制备标题化合物。通过制备型sfc(柱：whelk
‑
01(r，r)，250x21mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co230/70％v/v)分离两种阻转异构体：
[0688]
第一洗脱异构体(化合物32a)：28mg，白色泡沫，rt＝2.62min，纯度＝98.5，1h nmr(dmso
‑
d6)δ7.91(dd，j＝9.2，5.3hz，1h)，7.59(t，j＝8.9hz，1h)，5.39(s，1h)，4.10
‑
3.99(m，1h)，3.89
‑
3.72(m，2h)，3.66(d，j＝8.4hz，1h)，3.48(d，j＝8.4hz，1h)，3.45
‑
3.30(m，2h)，2.90(d，j＝5.2hz，1h)，2.05(s，3h)，1.73(ddd，j＝13.2，9.2，3.8hz，1h)，1.61(ddd，j＝13.1，9.0，4.0hz，1h)，1.56
‑
1.39(m，4h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：441.0。
[0689]
第二洗脱异构体(化合物32b)：27mg，白色泡沫，rt＝5.12min，纯度＝100％，1h nmr(dmso
‑
d6)δ7.91(dd，j＝9.2，5.3hz，1h)，7.59(t，j＝8.9hz，1h)，5.39(s，1h)，4.10
‑
4.01(m，1h)，3.91
‑
3.72(m，2h)，3.66(d，j＝8.4hz，1h)，3.47(d，j＝8.4hz，1h)，3.45
‑
3.36(m，1h)，3.30(s，1h)，2.91(d，j＝5.1hz，1h)，2.05(s，3h)，1.73(ddd，j＝13.3，9.2，3.8hz，1h)，1.62(ddd，j＝13.2，9.0，4.0hz，1h)，1.57
‑
1.39(m，4h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：441.0。
[0690]
化合物33a和33b：(3p)
‑6‑
[4
‑
(氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[4
‑
(氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0691][0692]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯
‑6‑
氟苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体12,40mg；0.13mmol；1.0eq.)和4
‑
(boc
‑
氨基甲基)
‑4‑
甲基哌啶盐酸盐(70mg，0.3mmol)为起始
材料，依据化合物11描述的程序制备标题化合物。通过制备型sfc(柱：ad
‑
h，250x21mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co，25/75％v/v)分离两种阻转异构体：
[0693]
第一洗脱异构体(化合物33a)：16mg，白色固体，rt＝3.0min，ee＝100％，1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.91(dd，j＝9.1，5.3hz，1h)，7.59(t，j＝8.9hz，1h)，5.35(s，1h)，3.93
‑
3.65(m，2h)，3.44
‑
3.17(m，2h)，2.41(s，2h)，2.05(s，3h)，1.79
‑
1.50(m，2h)，1.50
‑
1.36(m，2h)，1.33
‑
1.21(m，2h)，0.92(s，3h)。
[0694]
第二洗脱异构体(化合物33b)：18mg，白色固体，rt＝3.33min，ee＝100％，1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.91(dd，j＝9.2，5.3hz，1h)，7.59(t，j＝8.9hz，1h)，5.35(s，1h)，3.92
‑
3.67(m，2h)，3.44
‑
3.29(m，2h)，2.41(s,2h)，2.05(s,3h)，1.87
‑
1.54(m，2h)，1.44(ddt，j＝14.2，8.6，4.3hz，2h)，1.27(dt，j＝13.5，4.4hz，2h)，0.92(s，3h)。
[0695]
化合物34：( /
‑
)
‑6‑
[(3as，6as)
‑
3a
‑
(氨基甲基)
‑
六氢
‑
1h
‑
呋喃并[3，4
‑
c]吡咯
‑5‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0696][0697]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体8，100mg；0.33mmol)和( /
‑
)
‑1‑
[(3as，6as)
‑
六氢
‑
1h
‑
呋喃并[3，4
‑
c]吡咯
‑
3a
‑
基]甲胺(乙胺；140mg；0.99mmol)为起始材料，依据化合物11步骤1描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(异构体混合物，60mg，42％)。1h nmr(dmso
‑
d6)7.79(dd，j＝7.0，2.6hz，1h)，7.59
‑
7.48(m，2h)，3.92(ddd，j＝9.2，7.3，2.1hz，1h)，3.86
‑
3.49(m，6h)，3.29(m，2h)，2.68(s，2h)，2.02(s，3h)，1.93(s，3h)。l/ms(m 1)＝409.0。
[0698]
化合物35：6
‑
{1
‑
氨基
‑7‑
氮杂螺[3.5]壬烷
‑7‑
基}
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0699][0700]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2,50mg；0.17mmol)和n
‑
(7
‑
氮杂螺[3.5]壬烷
‑1‑
基)氨基甲酸叔丁酯(62mg；0.26mmol)为起始材料，依据化合物11描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(25mg，37％)。1h nmr(dmso
‑
d6)7.83
‑
7.74(m，1h)，7.58
‑
7.48(m，2h)，5.37(d，j＝1.1hz，1h)，4.00(m，2h)，3.21
‑
2.92(m，2h)，2.16
‑
2.02(m，1h)，1.99(s，3h)，1.73
‑
1.47(m，6h)，1.39(m，2h)。lc/ms(m 1)：393.1。
[0701]
化合物36：6
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
乙基
‑2‑
甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0702][0703]
将3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
乙基
‑6‑
羟基
‑2‑
甲基
‑
3,4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮(中间体13，100mg；0.33mmol)和1，8
‑
二氮杂双环(5.4.0)十一
‑7‑
烯(dbu)(153mg；1.00mmol)在dmf(3ml)中的混合物在室温搅拌15分钟。加入苯并三唑
‑1‑
基氧基)三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐(bop)(0.28ml；0.67mmol)，将反应混合物再搅拌15分钟，然后加入(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺(60mg；0.35mmol)和tea(507μl)。将反应混合物搅拌过夜。通过制备型hplc(xbridge，水 0.1％nh4oh和acn，10分钟梯度：20至100％)纯化，得到标题化合物，为白色泡沫(阻转异构体混合物，18mg，12％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.80(m，1h)，7.57
‑
7.50(m，2h)，4.04(m，1h)，3.66(d，j＝8.4hz，1h)，3.52(m，2h)，3.49(d，j＝8.2hz，1h)，3.18(m，3h)，2.90(d，j＝5.1hz，1h)，2.37(q，j＝7.3hz，2h)，1.97(s，3h)，1.74(m，1h)，1.68(m，1h)，1.53(m，2h)，1.37(s，2h)，1.11(t，j＝7.2hz，3h)，1.06(d，j＝6.4hz，3h)；lc/ms(m 1)：451.2。
[0704]
化合物37a和37b：(1m)
‑4‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
甲基
‑
1，2
‑
二氢
‑
1，3，5
‑
三嗪
‑2‑
酮和(1p)
‑4‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
甲基
‑
1，2
‑
二氢
‑
1，3，5
‑
三嗪
‑2‑
酮
[0705][0706]
将1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
甲基
‑4‑
(甲基硫烷基)
‑
1，2
‑
二氢
‑
1，3，5
‑
三嗪
‑2‑
酮(中间体14，100mg；0.33mmol)、(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺(113mg；0.66mmol)和diea(0.23μl，1.32mmol)在无水1，4
‑
二噁烷(3.00ml)中的溶液在100℃搅拌16小时。混合物中减压下浓缩，通过制备型sfc(柱：whelk
‑
01(r，r)，250x21mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，30/70％v/v)纯化，获得两种阻转异构体.
[0707]
第一洗脱异构体(化合物37a)：35mg，白色固体，rt＝5.58min，纯度：97.9％，1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ7.79(dd，j＝8.1，1.6hz，1h)，7.61(m，1h)，7.53(m，1h)，4.20(m，0.5h)，4.12
‑
3.99(m，2h)，3.92(m，0.5h)，3.75(m，0.5h)，3.68(dd，j＝14.2，8.5hz，1h)，3.57(m，0.5h)，3.52
‑
3.41(m，2h)，2.95(d，j＝5.1hz，0.5h)，2.90(d，j＝5.3hz，0.5h)，1.99(s，3h)，1.84
‑
1.29(m，6h)，1.08(dd，j＝6.4，2.9hz，3h)。lc/ms(m 1)：424.0。
[0708]
第二洗脱异构体(化合物37b)：27mg，白色固体，rt＝6.78％，纯度：98.9％。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)7.79(dd，j＝8.0，1.6hz，1h)，7.61(m，1h)，7.53(t，j＝8.0hz，1h)，4.17(m，0.5h)，4.11
‑
3.99(m，2h)，3.94(m，0.5h)，3.68(m，1.5h)，3.60(m，1h)，3.48(dd，j＝
18.1，8.5hz，1h)，3.44
‑
3.36(m，0.5h)，2.95(d，j＝5.1hz，0.5h)，2.89(d，j＝5.3hz，0.5h)，1.99(s，3h)，1.89
‑
1.30(m，6h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)。lc/ms(m 1)：424.0。
[0709]
化合物41：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
(4
‑
{[(2r)
‑
2，3
‑
二羟基丙基]
‑
氨基}哌啶
‑1‑
基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0710][0711]
将3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
(4
‑
氧代哌啶
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(70mg；0.20mmol)和(r)
‑3‑
氨基
‑
1，2
‑
丙二醇(27mg；0.30mmol)在dcm(1.4ml)和甲醇(0.3ml)中的溶液在室温下搅拌30分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(126mg；0.60mmol)。所得反应混合物在室温下搅拌过夜。然后用dcm和饱和碳酸氢钠溶液稀释。水相用dcm萃取。有机相合并，用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗产物通过sfc(柱：2ep，甲醇
‑
nh4oh 20nm)纯化，得到标题化合物，为白色固体(23mg，27％)。1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6 d2o)δ7.76(dd，j＝7.6，2.0hz，1h)，7.56
‑
7.43(m，2h)，5.35(s，1h)，4.31
‑
4.04(m，2h)，3.54
‑
3.45(m，1h)，3.40
‑
3.25(m，2h)，2.97(tdd，j＝13.6，9.8，2.7hz，2h)，2.63(ddd，j＝11.3，8.2，4.1hz，2h)，2.45(dd，j＝11.7，7.3hz，1h)，1.97(s，3h)，1.84(dq，j＝12.4,4.1hz，2h)，1.29
‑
1.10(m，2h)。lc/ms (m 1)：427.0。
[0712]
化合物42：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
(4
‑
{[(2s)
‑
2,3
‑
二羟基丙基]氨基}
‑
哌啶
‑1‑
基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0713][0714]
采用3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
(4
‑
氧代哌啶
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体16；70mg：0.20mmol)和(s)
‑3‑
氨基
‑
1，2
‑
丙二醇(27.16mg；0.30mmol；1.50eq.)为起始材料，依据化合物41描述的程序制备标题化合物，为白色固体(57mg，100％)。1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6 d2o)：7.76(dd，j＝7.7，2.0hz，1h)，7.56
‑
7.44(m，2h)，5.34(s，1h)，4.25
‑
4.05(m，2h)，3.54
‑
3.46(m，1h)，3.38
‑
3.25(m，2h)，3.04
‑
2.90(m，2h)，2.63(ddd，j＝11.6，8.7，4.1hz，2h)，2.44(dd，j＝11.7，7.3hz，1h)，1.97(s，3h)，1.84(dt，j＝13.2，3.8hz，2h)，1.27
‑
1.12(m，2h)；lc/ms(m 1)：427.0。
[0715]
化合物46：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
{4
‑
[(2
‑
羟基
‑3‑
甲氧基丙基)
‑
氨基]哌啶
‑1‑
基}
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0716]
[0717]
采用3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
(4
‑
氧代哌啶
‑1‑
基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体16，70mg；0.20mmol)和1
‑
氨基
‑3‑
甲氧基丙烷
‑2‑
醇(31mg；0.30mmol)为起始材料，依据化合物41描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(6mg，6％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.88
‑
7.72(m，1h)，7.64
‑
7.42(m，2h)，5.37(s，1h)，4.83
‑
4.59(m，1h)，4.30
‑
3.96(m，2h)，3.74
‑
3.54(m，1h)，3.31
‑
3.26(m，2h)，3.23(s，3h)，3.11
‑
2.88(m，2h)，2.73
‑
2.55(m，2h)，1.98(s，3h)，1.92
‑
1.74(m，2h)，1.70
‑
1.47(m，1h)，1.47
‑
1.30(m，1h)，1.30
‑
1.08(m，2h)；lc/ms(m 1)：441.0。
[0718]
化合物49a和49b：(3p)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑5‑
(丙烷
‑2‑
基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s,4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑5‑
(丙烷
‑2‑
基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0719][0720]
采用3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑2‑
甲基
‑5‑
(丙烷
‑2‑
基)
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(300mg；0.10mmol)和(3s,4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺(171mg；0.1mmol)为起始材料，依据化合物36描述的程序制备标题化合物。粗产物通过制备型sfc(柱：cel
2 250x21mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，25∶75)纯化，获得两种阻转异构体。
[0721]
第一洗脱阻转异构体：9.1mg；白色固体；rt＝3.48min.；de＝100％(柱cel2analytical)；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.79346(1h)，7.5495(2h)，4.0583(1h)，3.65(1h)，3.55(1h)，3.47(1h)，3.21(1h)，3.14(1h)，2.90(1h)，2.37(1h)，1.973(3h)，1.7891h)，1.68(1h)，1.54(1h)，1.39(1h)，1.2416(9h)；lc/ms(m 1)：465.3。
[0722]
第二洗脱异构体：6.6mg；白色粉末；rt＝3.63min；de＝97％(柱cel
2 analytical)；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.79346(1h)，7.5495(2h)，4.0583(1h)，3.65(1h)，3.55(1h)，3.47(1h)，3.21(1h)，3.14(1h)，2.90(1h)，2.37(1h)，1.973(3h)，1.7891h)，1.68(1h)，1.54(1h)，1.39(1h)，1.2576(3h)，1.2115(3h)，1.0720(3h)；lc/ms(m 1)：465.3。
[0723]
化合物50：3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
(4
‑
{[(4
‑
羟基环己基)甲基]氨基}
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0724][0725]
将6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮，二(三氟乙酸)(50mg；0.08mmol)、4
‑
(氯甲基)环己
‑1‑
醇(161mg；1.1mmol)和碳酸钾(205mg，1.4mmol)在dmso(2ml)中的溶液在80℃搅拌过夜。粗产物通过制备型sfc(柱：2ep；甲醇 20mm nh4oh)直接纯化，得到标题化合物，为白色固体(6.3mg，14％)。lc/ms (m 1)：
479.1。
[0726]
化合物51：6
‑
(8
‑
氨基
‑
1，2，3，4
‑
四氢异喹啉
‑2‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0727][0728]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体8；30mg；0.10mmol)、1，2，3，4
‑
四氢异喹啉
‑8‑
胺(29mg；0.20mmol)和diea(70μl；0.40mmol)在无水dmso(1.5ml)中的溶液在70℃搅拌过夜。粗产物通过制备型sfc(x
‑
bridge，acn：含0.1％nh4oh的水，10分钟梯度：20∶80至100∶0in 10min，60ml/min)直接纯化，得到标题化合物，为白色粉末(14mg，33％)。1h nmr(dmso
‑
d6)：7.80(d，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.57(m，2h)，6.88(d，j＝8.0hz，1h)，6.52(t，j＝8.0hz，1h)，6.41(dd，j＝8.0hz，1h)，4.87(br，2h)，4.32(m，2h)，3.62(m，2h)，2.85(m，2h)，2.018(s，3h)，2.000(s，3h)。lc/ms(m 1)：417.2。
[0729]
化合物57a和57b：( /
‑
)
‑
(3m)
‑6‑
{4
‑
[(1s)
‑2‑
氨基
‑1‑
羟基乙基]
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基}
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和( /
‑
)
‑
(3p)
‑6‑
{4
‑
[(1s)
‑2‑
氨基
‑1‑
羟基乙基]
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基}
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0730][0731]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2；75mg；0.3mmol)和2
‑
氨基
‑1‑
(4
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)乙
‑1‑
醇二盐酸盐(乙胺；120mg；0.5mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物。粗产物通过制备型sfc(柱：whelk
‑
01(r，r)；250x21mm，5微米；甲醇 20mm nh4oh：co2，30：70％v/v)纯化，获得两种异构体：
[0732]
第一洗脱异构体(化合物57a)：白色固体；15mg；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ7.76(dd，j＝7.2，2.4hz，1h)，7.56
‑
7.44(m，2h)，5.31(s，1h)，4.11
‑
3.78(m，2h)，3.22
‑
3.09(m，2h)，3.07(d，j＝9.9hz，1h)，2.66
‑
2.59(m，1h)，2.40
‑
2.27(m，1h)，1.97(s，3h)，1.59
‑
1.45(m，2h)，1.41
‑
1.31(m，1h)，1.28
‑
1.18(m，1h)，0.90(s，3h)；lc/ms(m 1)：411.0。
[0733]
第二洗脱异构体(化合物57b)：白色固体；17mg；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ7.84
‑
7.72(m，1h)，7.58
‑
7.46(m，2h)，5.33(s，1h)，4.12
‑
3.80(m，2h)，3.23
‑
3.10(m，2h)，3.10
‑
3.01(m，1h)，2.72
‑
2.61(m，1h)，2.42
‑
2.30(m，1h)，1.98(s,3h)，1.62
‑
1.47(m，2h)，1.42
‑
1.32(m，1h)，1.31
‑
1.20(m，1h)，0.91(s，3h)；lc/ms(m 1)：411.0。
[0734]
化合物58a和58b：( /
‑
)
‑
(3m)
‑6‑4‑
[(1r)
‑4‑
氨基
‑4‑
(2，2
‑
二氟乙基)
‑
氮杂环庚烷
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和( /
‑
)
‑
(3p)
‑6‑4‑
[(1r)
‑4‑
氨基
‑4‑
(2，2
‑
二氟乙基)
‑
氮杂环庚烷
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0735][0736]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2；75mg；0.3mmol)和4
‑
(2，2
‑
二氟乙基)氮杂环庚烷
‑4‑
胺二盐酸盐(chemspace；130mg；0.5mmol)为起始材料，依据化合物1描述的程序制备标题化合物。粗产物通过制备型sfc(柱：whelk
‑
01(r，r)；250x21mm，5微米；甲醇 20mm nh4oh：co2，30/70％v/v)纯化，获得两种异构体：
[0737]
第一洗脱异构体(化合物58a)：白色固体；15.5mg；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ7.82
‑
7.72(m，1h)，7.59
‑
7.44(m，2h)，6.25(tt，j＝56.4，4.5hz，1h)，5.14(s，1h)，4.43
‑
3.34(m，4h)，1.98(s，3h)，1.91(td，j＝18.3，4.5hz，3h)，1.82
‑
1.35(m，8h)；lc/ms(m 1)：431.1。
[0738]
第二洗脱异构体(化合物58b)：白色固体；33mg；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ7.93
‑
7.71(m，1h)，7.69
‑
7.46(m，2h)，6.26(tt，j＝56.4，4.4hz，1h)，5.14(s，1h)，4.29
‑
3.66(m，2h)，3.72
‑
3.42(m，2h)，1.99(s，3h)，1.92(td，j＝18.3，4.5hz，2h)，1.85
‑
1.35(m，8h)；lc/ms(m 1)：430.9。
[0739]
化合物62a和62b：(3p)
‑6‑
{(r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基}
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
{(r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基}
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0740][0741]
通过制备型sfc(柱：ig，300x150mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，40/60％v/v)分离两种阻转异构体。
[0742]
第一洗脱阻转异构体(化合物62a)：4.2mg，rt＝3.27min(ad
‑
h柱)，ed＝100％，1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.79(dd，j＝6.3，3.3hz，1h)，7.58
‑
7.47(m，2h)，5.36(s，1h)，4.10(brs，2h)，3.16
‑
2.96(m，2h)，2.79(t，j＝7.3hz，1h)，1.99(s，3h)，1.95
‑
1.84(m，1h)，1.83
‑
1.73(m，1h)，1.70
‑
1.59(m，2h)，1.59
‑
1.48(m，2h)，1.48
‑
1.24(m，4h)，lc/ms(m 1)：407.1。
[0743]
第二洗脱阻转异构体(化合物62b)：4.2mg，rt＝4.23min(ad
‑
h柱)，ed＝100％，：1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.85
‑
7.73(m，1h)，7.58
‑
7.44(m，2h)，5.36(s，1h)，4.10(d，j＝35.5hz，2h)，3.05(ddd，j＝13.7，11.8，3.0hz，2h)，2.80(t，j＝7.3hz，1h)，1.99(d，j＝1.7hz，3h)，1.95
‑
1.83(m，1h)，1.78(ddd，j＝12.4，9.0，5.6hz，1h)，1.70
‑
1.33(m，6h)，1.25(dd，j＝25.9，13.7hz，2h)，lc/ms(m 1)：407.1。
[0744]
化合物63：6
‑
[(3s,4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
(2h3)甲基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0745][0746]
将1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
(2h)
‑3‑
甲基
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯磺酸盐(中间体24，140mg，0.253mmol)和(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺(pharmablock，85mg，0.474mmol)在nmp(2.0ml)中的溶液在140℃搅拌2小时。将所得混合物在真空下浓缩，通过在c18硅胶反向快速色谱法(acn水溶液，梯度：10％至50％)纯化，得到标题化合物，为白色固体(20mg，17.3％)。1h nmr(300mhz，dmso
‑
d6)：7.77(q，j＝4.3，3.8hz，1h)，7.52(d，j＝4.9hz，2h)，4.10
‑
3.96(m，1h)，3.64(d，j＝8.4hz，1h)，3.55(s，1h)，3.48(t，j＝8.0hz，2h)，3.26？3.08(m，1h)，2.88(d，j＝5.1hz，1h)，1.95(s，3h)，1.76(t，j＝10.0hz，1h)，1.63(d，j＝8.7hz，1h)，1.50(s，4h)，1.06(d，j＝6.4hz，3h)，lc/ms(m 1)：440.2；m.p：170
‑
172℃。
[0747]
化合物63a和63b：(3p)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
(d3)甲基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
(d3)甲基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0748][0749]
通过制备型sfc(柱：ad
‑
h，250x21mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，30∶70)从化合物63分离异构体。
[0750]
第一洗脱阻转异构体(化合物63a)：14mg；rt＝2.47min；ed＝100％；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d7.83
‑
7.76(m，1h)，7.57
‑
7.51(m，2h)，4.11
‑
4.00(m，1h)，3.66(d，j＝8.4hz，1h)，3.61
‑
3.51(m，2h)，3.49(d，j＝8.4hz，1h)，3.26
‑
3.08(m，2h)，2.90(d，j＝5.1hz，1h)，1.97(s，3h)，1.84
‑
1.72(m，1h)，1.72
‑
1.61(m，1h)，1.60
‑
1.44(m，2h)，1.42
‑
1.27(m，2h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)；lc/ms(m 1)：440.2。
[0751]
第二洗脱阻转异构体(化合物63b)：15mg；rt＝3.53min，ed＝96.5％；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d7.83
‑
7.76(m，1h)，7.56
‑
7.51(m，2h)，4.06(td，j＝6.4，5.1hz，1h)，3.66(d，j＝8.4hz，1h)，3.61
‑
3.50(m，2h)，3.49(d，j＝8.5hz，1h)，3.26
‑
3.07(m，2h)，2.90(d，j＝5.1hz，1h)，1.97(s，3h)，1.84
‑
1.73(m，1h)，1.73
‑
1.61(m，1h)，1.62
‑
1.38(m，4h)，1.08(d，j＝6.4hz，3h)；lc/ms(m 1)：440.2。
[0752]
化合物66a和66b：(3p)
‑6‑
[(5r)
‑5‑
氨基
‑
5，7
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
6，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(5s)
‑5‑
氨
基
‑
5，7
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
6，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0753][0754]
将(1m)
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2,5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐(中间体36b；1.2g，2.9mmol)，5，7
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
6，4
′‑
哌啶]
‑5‑
胺二盐酸盐(中间体40，1.2g，4.3mmol)和diea(3ml，17.3mmol)在乙醇(12ml)中的溶液在60℃搅拌过夜。减压除去溶剂，残留物被分隔在dcm(10ml)和naoh(23ml 0.5n水溶液)之间。混合物搅拌30分钟。有机相用盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(乙酸乙酯∶甲醇，梯度99∶1至70∶30)，获得标题化合物，为白色粉末(550mg，38％)。混合物通过手性sfc(柱：ojh，250x21mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，45∶55)得到两种纯的阻转异构体：
[0755]
第一洗脱异构体(化合物66a)：138mg，白色固体，rt＝2.04min，ed＝100％，1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d8.31(dd，j＝5.0，1.6hz，1h)，7.84
‑
7.76(m，1h)，7.66(dt，j＝7.5，1.4hz，1h)，7.59
‑
7.51(m，2h)，7.16(dd，j＝7.5，4.9hz，1h)，3.90(s，1h)，3.86
‑
3.71(m，2h)，3.21
‑
3.10(m，2h)，3.08(d，j＝16.2hz，1h)，2.73(d，j＝16.2hz，1h)，1.98(s，3h)，1.91(s，3h)，1.90
‑
1.71(m，2h)，1.54(d，j＝13.2hz，1h)，1.14(d，j＝13.0hz，1h)；lc/ms(m 1)：470.1。
[0756]
第二洗脱异构体（化合物66b)：283mg，白色固体，rt＝2.22min，ed＝100％，1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d8.31(dd，j＝4.9，1.6hz，1h)，7.84
‑
7.76(m，1h)，7.66(dt，j＝7.4，1.3hz，1h)，7.59
‑
7.50(m，2h)，7.16(dd，j＝7.5，4.9hz，1h)，3.90(s，1h)，3.84
‑
3.72(m，2h)，3.20
‑
3.10(m，2h)，3.08(d，j＝16.3hz，1h)，2.73(d，j＝16.3hz，1h)，1.98(s,3h)，1.91(s,3h)，1.89
‑
1.72(m，2h)，1.54(d，j＝14.3hz，1h)，1.15(d，j＝12.6hz，1h)；lc/ms(m 1)：470.1。
[0757]
化合物67a和67b：(3p)
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0758]
步骤1：n
‑
[(1r)
‑8‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基]氨基甲酸叔丁酯
[0759]
[0760]
将6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体8；100mg；0.30mmol)、n
‑
[(1r)
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基]氨基甲酸叔丁酯(wuxi；167mg；0.7mmol)和diea(200μl)在无水dmso(2.0ml中的溶液在70℃搅拌过夜。反应混合物用水(5ml)稀释，然后用乙酸乙酯(10ml)萃取。有机相用水(2x5ml)和盐水(10ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：80∶20至0∶100)，得到标题化合物，为白色固体(118mg，69％)。lc/ms(m 1)：521.1。
[0761]
步骤2：(3p)
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0762][0763][0764]
将n
‑
[(1r)
‑8‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基]氨基甲酸叔丁酯(118mg，0.2mmol)在tfa(1.2ml)和dcm(2.4ml)中的溶液在室温搅拌1小时。然后在减压下除去溶剂。向粗产物中加入甲苯，浓缩以除去残留的三氟乙酸。通过制备型sfc(柱：ad
‑
h；250x21mm，5微米；甲醇 20mm nh4oh：co2，20/80％v/v)纯化，得到两种阻转异构体：
[0765]
第一洗脱阻转异构体(化合物67a)：36mg；白色泡沫；rt＝4.13min；ed＝100％(ad
‑
h柱)；1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)：7.83
‑
7.74(m，1h)，7.59
‑
7.48(m，2h)，3.78
‑
3.66(m，2h)，3.12
‑
2.94(m，2h)，2.71(t，j＝7.3hz，1h)，1.97(s，3h)，1.89(s，3h)，1.88
‑
1.70(m，3h)，1.70
‑
1.56(m，3h)，1.57
‑
1.43(m，2h)，1.43
‑
1.13(m，4h)；lc/ms(m 1)：421.0。
[0766]
第二洗脱阻转异构体(化合物67b)：39mg；白色泡沫；rt＝5.42min(ad
‑
h柱)；ed＝100％；1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)δ7.82
‑
7.74(m，1h)，7.57
‑
7.46(m，2h)，3.78
‑
3.63(m，2h)，3.09
‑
2.96(m，2h)，2.71(t，j＝7.3hz，1h)，1.97(s,3h)，1.89(s，3h)，1.86
‑
1.69(m，3h)，1.69
‑
1.56(m，3h)，1.56
‑
1.42(m，2h)，1.41
‑
1.15(m，4h)；lc/ms(m 1)：421.0。
[0767]
化合物70：6
‑
(4
‑
氨基
‑4‑
甲基
‑
哌啶
‑1‑
基)
‑3‑
(2，3
‑
二二氯
‑
苯基)
‑5‑
甲基
‑
3h
‑
嘧啶
‑4‑
酮
[0768]
步骤1：n
‑
{1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑4‑
基}氨基甲酸叔丁酯
[0769][0770]
中氮气气氛下，将1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑2‑
(甲基硫烷基)
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基4
‑
甲基苯磺酸盐(中间体35，步骤3；80mg，0.12mmol)、n
‑
(4
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)氨基甲酸叔丁
nh4oh)纯化，获得两种异构体(任意分配)：
[0780]
第一洗脱异构体（化合物71a)：27mg，白色固体；lc/ms(m 1)：395.1；
[0781]
第二洗脱异构体（化合物71b)：26mg，白色固体；lc/ms(m 1)：395.1。
[0782]
化合物72a和72b：( /
‑
)
‑
(3p)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
{4
‑
[(3r)
‑3‑
羟基吡咯烷
‑1‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基}
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮和(/
‑
)
‑
(3m)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
{4
‑
[(3r)
‑3‑
羟基
‑
吡咯烷
‑1‑
基]
‑4‑
甲基哌啶
‑1‑
基}
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0783][0784]
采用6
‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体2；75mg；0.3mmol)和1
‑
(4
‑
甲基
‑4‑
哌啶基)
‑3‑
吡咯烷醇二盐酸盐(matrix；133mg；0.5mmol)为起始材料，依据化合物1步骤1描述的程序制备标题化合物。粗产物通过制备型sfc(柱：2ep；甲醇 20mm nh4oh)纯化，获得两种阻转异构体(任意分配)：
[0785]
第二洗脱异构体（化合物72a)：27mg，白色固体；lc/ms(m 1)：437.0；
[0786]
第二洗脱异构体（化合物72b)：26mg，白色固体；lc/ms(m 1)：437.1。
[0787]
化合物73a和73b：(3p)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺
‑
[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲氧基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺
‑
[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲氧基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮
[0788][0789]
采用3
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑5‑
甲氧基
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体21，300mg，1mmol)和(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺二盐酸盐(wuxi，254mg，1mmol)为起始材料，依据化合物36描述的程序制备标题化合物。粗产物通过制备型sfc(柱：adh,250x21mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，30：70)分离阻转异构体。
[0790]
第一洗脱阻转异构体(化合物73a)：36mg；rt＝2.97min；ed＝100％；7.76(dd，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.55(m，2h)，4.04(m，3h)，3.65(d，j＝6.8hz，1h)，3.59(s，3h)，3.480(m，2h)，2.891(d，j＝6.5hz，2h)，1.96(s，3h)，1.79(m，1h)，1.62(m，1h)，1.54
‑
1.44(m，2h)，1.07(d，j＝6.8hz，3h)；lc/ms(m 1)：453.2。
[0791]
第二洗脱阻转异构体(化合物73b)：34mg；rt＝3.98min，ed＝98.5％；8.27(s，1h)，7.76(m，1h)，7.55(m，2h)，4.04(m，3h)，3.65(d，j＝6.8hz，1h)，3.59(s，3h)，3.510(d，j＝
6.8hz，2h)，2.891(d，j＝6.5hz，2h)，1.96(s，3h)，1.79(m，1h)，1.62(m，1h)，1.54
‑
1.44(m，2h)，1.07(d，j＝6.6hz，3h)；lc/ms(m 1)：453.2。
[0792]
化合物74a：(3m)
‑6‑
[(1s)
‑1‑
氨基
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2,4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0793]
步骤1：(3m)
‑
n
‑
[(1s)
‑1′‑
[(1p)
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺
[0794][0795]
采用(3m)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体7b；300mg；1.1mmol)和n
‑
[(1s)
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺；三氟乙酸(wuxi；531mg；1.3mmol)为起始材料，依据化合物36描述的程序制备标题化合物。粗产物通过制备型hplc(柱：水s xbridge prep c
‑
18obd 10um，30x250，acn：含0.1％nh4oh的水，10分钟梯度：20∶100至100∶0，60ml/min)纯化，获得化合物，为白色泡沫。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.81(dd，j＝5.6，4.1hz，1h)，7.54(m，2h)，7.28
‑
7.23(m，4h)，5.65(d，j＝10.4hz，2h)，4.45(d，j＝10.3hz，2h)，3.86(m，2h)，3.16(m，2h)，3.11(d，j＝15.8hz，1h)，2.72(m，1h)，1.91(s，3h)，1.89(s，3h)，1.62(m，1h)，1.29(m，1h)，1.23(s，9h)；lc/ms(m 1)：573.2。
[0796]
步骤2：(3m)
‑6‑
[(1s)
‑1‑
氨基
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(23
‑
二氯苯基)
‑
2.5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0797][0798]
将n
‑
[(1s)
‑1′‑
[(1p)
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺(200mg；0.35mmol)在甲醇/hcl(3m，3ml)中的溶液在室温搅拌3小时。在减压下除去溶剂，通过制备型hplc(柱：水s xbridge prep c
‑
18 obd 10um，30x250，acn：含0.1％nh4oh的水，10分钟梯度：20∶100至100∶0，60ml/min)得到标题化合物，为白色泡沫(94mg，57％)。
[0799]
1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.80(t，j＝4.8hz，1h)，7.58
‑
7.50(m，2h)，7.35
‑
7.28(m，1h)，7.22
‑
7.11(m，3h)，3.85(s，1h)，3.78(ddd，j＝13.6，8.6，5.5hz，2h)，3.21
‑
3.08(m，2h)，3.05(d，j＝15.6hz，1h)，2.61(d，j＝15.6hz，1h)，1.98(s,3h)，1.91(s,3h)，1.89
‑
1.65(m，2h)，1.57
‑
1.47(m，1h)，1.18
‑
1.07(m，1h)。lc/ms(m 1)：469.2。
[0800]
化合物74b：(3p)
‑6‑
[(1s)
‑1‑
氨基
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0801][0802]
将(3p)
‑6‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮(中间体8a，200mg；0.7mmol)，(3s)
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
胺二盐酸盐(pharmablock，113mg；0.66mmol)和diea(0.7ml，4mmol)在乙醇(2.0ml)中的溶液在60℃搅拌过夜。在减压下浓缩混合物，被分隔在dcm(10ml)和naoh水溶液(2.2ml，0.5n溶液)之间。有机层用盐水(3ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体(127mg，40％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)？7.80(dd，j＝5.3，4.3hz，1h)，7.58
‑
7.51(m，2h)，7.34
‑
7.28(m，1h)，7.22
‑
7.11(m，3h)，3.84(s，1h)，3.83
‑
3.69(m，2h)，3.21
‑
3.08(m，2h)，3.05(d，j＝15.6hz，1h)，2.61(d，j＝15.6hz，1h)，1.98(s，3h)，1.91(s，3h)，1.89
‑
1.67(m，4h)，1.56
‑
1.47(m，1h)，1.16
‑
1.08(m，1h)；lc/ms(m 1)：469.2；ed＝100％；rt＝3.04min(sfc，柱ia，4.6x100mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，梯度：5
‑
60至60
‑
5)。
[0803]
化合物74c：(3m)
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0804][0805]
将(1m)
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐(中间体36b；325mg；0.8mmol)，(1r)
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2,4
′‑
哌啶]
‑1‑
胺二盐酸盐(中间体41；322mg；1.2mmol)和diea(0.8ml，4.7mmol)在乙醇(3.3ml)中的溶液在60℃搅拌过夜。减压除去溶剂，残留物被分隔在dcm(10ml)和naoh(6ml，0.5n水溶液)之间。将混合物搅拌30分钟。有机层用盐水(3ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱纯化(乙酸乙酯∶甲醇，梯度：99∶1至70∶30)，得到标题化合物，为白色固体(186mg，51％)。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d 7.84
‑
7.76(m，1h)，7.59
‑
7.51(m，2h)，7.34
‑
7.27(m，1h)，7.23
‑
7.10(m，3h)，3.84(s，1h)，3.83
‑
3.69(m，2h)，3.21
‑
3.08(m，2h)，3.04(d，j＝15.4hz，1h)，2.60(d，j＝15.5hz，1h)，1.98(s,3h)，1.91(s，3h)，1.89
‑
1.79(m，1h)，1.79
‑
1.65(m，3h)，1.52(d，j＝13.3hz，1h)，1.11(d，j＝13.2hz，1h)；lc/ms(m 1)：469.2；ed＝100％；rt＝2.3min(sfc，柱ojh，4.6x100mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，35∶65)。
[0806]
化合物74d：(3p)
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3,4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0807][0808]
采用(3p)
‑6‑
氯
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(中间体7a)
和(1r)
‑
1，3
‑
二氢螺[茚
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1‑
胺二盐酸盐(中间体41)为起始材料，依据化合物74b描述的程序制备标题化合物，为白色固体。1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)d 7.80(t，j＝4.8hz，1h)，7.61
‑
7.48(m，2h)，7.38
‑
7.24(m，1h)，7.24
‑
7.06(m，3h)，3.84(s，1h)，3.77(t，j＝12.2hz，2h)，3.20
‑
3.07(m，2h)，3.04(d，j＝15.7hz，1h)，2.61(d，j＝15.6hz，1h)，1.98(s，3h)，1.91(s，3h)，1.87
‑
1.63(m，4h)，1.59
‑
1.43(m，1h)，1.18
‑
1.07(m，1h)；lc/ms(m i)：469.1；ed＝100％；rt＝6.6min(sfc，柱whelk
‑
01(r，r)，4.6x100mm，5微米，甲醇 20mm nh4oh：co2，45∶55)。
[0809]
化合物75：(3m)
‑6‑
[(6r)
‑6‑
氨基
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0810][0811]
采用(3m)
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑6‑
羟基
‑
2,5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
酮(中间体7b，300mg，1.1mmol)和n
‑
[(6r)
‑
5，6
‑
二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶
‑
7，4
′‑
哌啶]
‑6‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺；三氟乙酸(中间体22，532mg，1.3mmol)为起始材料，依据化合物74a描述的程序制备标题化合物，为白色泡沫(18mg，4％
‑
两步骤)。1h nmr(dmso
‑
d6)：8.32(s，1h)，7.79(s，1h)，7.59(d，j＝8.1hz，1h)，7.56(m，2h)，7.14(t，j＝8.1hz，1h)，3.99(brs，1h)，3.67(m，1h)，3.57(m，2h)，3.41(m，1h)，3.12
‑
309(m，1h)，2.84(m，1h)，2.60
‑
2.57(m，1h)，1.97(s，3h)，1.93(s，3h)，1.74(m，2h)，1.62(m，1h)；lc/ms(m 1)：470.2。
[0812]
化合物76：6
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
(2
‑
羟基乙基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮盐酸盐
[0813]
步骤1：2
‑
{4
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑5‑
基}乙酸甲酯
[0814][0815]
采用2
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑4‑
[(4
‑
甲基
‑
苯磺酰基)氧基]
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑5‑
基]乙酸甲酯(中间体43)和(3s，4s)
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑4‑
胺(pharmablock)为起始材料，依据化合物21步骤1描述的程序制备标题化合物，为黄色固体。lc/ms(m 1)：495.2。
[0816]
步骤2：6
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
(2
‑
羟基乙基)
‑2‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮盐酸盐
[0817]
[0818]
保持在0℃和氮气气氛下，将硼氢化锂(6mg，0.24mmol)加入到2
‑
[4
‑
[(3s，4s)
‑4‑
氨基
‑3‑
甲基
‑2‑
氧杂
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑2‑
甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑5‑
基]乙酸甲酯(30mg，0.060mmol)在thf(2.10ml)中的溶液中。然后将反应混合物在同一温度下搅拌4小时，用甲醇淬灭。在减压下除去溶剂，通过制备型hplc(xbridge prep c18 obd柱，19x150mm，5μm；水(0.05％hcl)和acn，梯度：20至50％)纯化残留物，得到标题化合物，为乳白色固体(10mg，31％)。1h nmr(300mhz，甲醇
‑
d4)：7.75(d，j＝8.0hz，1h)，7.53(t，j＝7.8hz，1h)，7.43(d，j＝7.9hz，1h)，4.31(s，1h)，3.99(d，j＝9.2hz，1h)，3.87(d，j＝9.2hz，1h)，3.80(s，3h)，3.49(s，1h)，3.21(d，j＝13.1hz，1h)，2.79(t，j＝6.6hz，2h)，2.12(s，3h)，1.98(d，j＝14.9hz，4h)，1.33(d，j＝6.3hz，3h)；lc/ms(m 1)：467.00；熔点：102
‑
103℃。
[0819]
化合物77：(3m)
‑6‑
[(1r，3r)
‑1‑
氨基
‑3‑
甲基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0820][0821]
将(1m)
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐(中间体36；150mg；0.36mmol)、(1r，3r)
‑3‑
甲基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
胺二盐酸盐(pharmablock；108mg；0.45mmol)和diea(0.25ml，1.44mmol)在乙醇(1.5ml)中的溶液在60℃搅拌过夜。减压除去溶剂，残留物被分隔在dcm(10ml)和naoh(2.2ml，0.5n水溶液)之间。将混合物搅拌30分钟。有机相用盐水(3ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(乙酸乙酯∶甲醇，梯度：95∶5至60∶40)，获得标题化合物，为白色固体(116mg，74％)。1h nmr(bruker 400mhz，dmso
‑
d6)：7.84
‑
7.75(m，1h)，7.57
‑
7.50(m，2h)，3.79
‑
3.62(m，2h)，3.11
‑
2.93(m，2h)，2.73(dd，j＝8.9，6.0hz，1h)，2.09
‑
1.93(m，5h)，1.89(s,3h)，1.81
‑
1.63(m，2h)，1.63
‑
1.51(m，1h)，1.33
‑
1.16(m，3h)，1.09
‑
0.91(m，4h)；lc/ms(m 1)：435；ed＝100％(手性sfc，柱ia，甲醇 20mm nh4oh)。
[0822]
化合物78a，78b，78c，78d：(3p)
‑2‑
氨基
‑6‑
[(1s)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺
‑
[4.5]癸
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二甲基苯基)
‑5‑
甲基
‑
3，4
‑
二二氢嘧啶
‑4‑
酮；(3p)
‑2‑
氨基
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二甲基
‑
苯基)
‑5‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮；(3m)
‑2‑
氨基
‑6‑
[(1s)
‑1‑
氨基
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮；(3m)
‑2‑
氨基
‑6‑
[(1r)
‑1‑
氨基
‑
氮杂螺[4.5]癸
‑8‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0823]
步骤1：n
‑
{8
‑
[2
‑
氨基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢
‑
嘧啶
‑4‑
基]
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基}氨基甲酸叔丁酯
[0824]
[0825]
采用2
‑
氨基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐(中间体37)和n
‑
{8
‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基}氨基甲酸叔丁酯(chembridge)为起始材料，依据化合物77描述的程序制备标题化合物，为白色固体。lc/ms(m 1)：522.2.
[0826]
步骤2：异构体分离和boc脱保护
[0827][0828]
通过制备型手性hplc分离n
‑
{8
‑
[2
‑
氨基
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑5‑
甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑8‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑1‑
基}氨基甲酸叔丁酯的四种非对映异构体。用三氟乙酸处理后，得到所述四种非对映异构体。
[0829]
第一次纯化(chiralpak ia，3x25cm，5μm；己烷 8mm nh3.甲醇和乙醇，30∶70％)，获得两个馏分a和b。
[0830]
分离出馏分a(rt＝4.5min，100mg，两种异构体的混合物)(chiralpak ig，2x25cm，5um；己烷 8mm nh3.甲醇和乙醇，15：85％)，得到：
[0831]
第一洗脱异构体(boc)：rt＝3.61min；ed＝100％.
[0832]
boc脱保护后的第一洗脱异构体(化合物78a)：rt＝5.73min (柱：cellulose sb4，己烷 0.1％dea：ipa，70∶30)；ed＝100；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.72(dd，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.46(t，j＝8.0hz，1h)，7.34(dd，j＝7.9，1.6hz，1h)，6.36(s，2h)，3.65
‑
3.54(m，2h)，2.90(t，j＝12.1hz，2h)，2.73(s，1h)，1.79(s，5h)，1.62(td，j＝32.2，30.1，11.8hz，5h)，1.36(s，2h)，1.21(dd，j＝26.8，13.5hz，2h)；lc/ms(m 1)：422.2；熔点：140
‑
141℃。
[0833]
第二洗脱异构体：rt＝4.5min；ed＝98.9％
[0834]
boc脱保护后的第二洗脱异构体(化合物78b)：rt＝5.01min(柱：cellulose sb4，己烷 0.1％dea：ipa，70：30)；ed＝100；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.72(dd，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.46(t，j＝8.0hz，1h)，7.34(dd，j＝7.9，1.5hz，1h)，6.36(s，2h)，3.69
‑
3.53(m，2h)，2.90(q，j＝12.3hz，2h)，2.70(t，j＝7.3hz，1h)，1.89
‑
1.68(m，5h)，1.68
‑
1.44(m，4h)，1.42
‑
1.09(m，4h)；lc/ms(m 1)：422.1；熔点：117
‑
118℃。
[0835]
分离出馏分b(100mg，rt＝6.1min)(chiralpak ig，2x25cm，5um；己烷 8mm nh3.甲醇和乙醇，25：75％)，得到：
[0836]
第三洗脱异构体：rt＝2.0min；ed＝100％
[0837]
boc脱保护后的第三洗脱异构体(化合物78c)：rt＝6.52min(柱：chiralpak ic
‑
3，己烷
‑
dcm 3∶1 0.1％dea：乙醇，90：10)；ed＝100；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.72(dd，j＝8.2，1.5hz，1h)，7.46(t，j＝8.0hz，1h)，7.34(dd，j＝7.9，1.5hz，1h)，6.36(s，2h)，3.65
‑
3.55(m，2h)，2.90(q，j＝12.4hz，3h)，2.70(t，j＝7.3hz，1h)，1.89
‑
1.68(m，5h)，1.68
‑
1.44(m，4h)，1.41
‑
1.26(m，2h)，1.19(dd，j＝28.1，12.8hz，2h)；lc/ms(m 1)：422.1；熔点：120
‑
121℃。
[0838]
第四洗脱异构体：rt＝2.78min；ed＝97.8％
[0839]
boc脱保护后的第四四洗脱异构体(化合物78d)：rt＝7.49min(柱：chiralpak ic
‑
3，己烷
‑
dcm 3：1 0.1％dea：乙醇，90：10)；ed＝96.9；1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：7.72(dd，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.46(t，j＝8.0hz，1h)，7.34(dd，j＝7.9，1.5hz，1h)，6.36(s，2h)，3.59(t，j＝12.4hz，2h)，2.90(t，j＝12.5hz，2h)，2.71(s，1h)，1.79(s，5h)，1.68
‑
1.44(m，4h)，1.33(s，2h)，1.19(dd，j＝25.4，12.9hz，2h)；lc/ms(m 1)：422.1；熔点：110
‑
112℃。
[0840]
化合物79a和79b：(3m)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮(ph
‑
ms
‑
pmc608
‑
722
‑
0)和(3m)
‑6‑
[(3s)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮
[0841]
步骤1：(3m)
‑6‑
[3
‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮
[0842][0843]
将(1m)
‑1‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐(中间体36b，2.20g，4.32mmol)、3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑3‑
胺(中间体37，1.43g，6.62mmol)和diea(1.40ml，8.09mmol)在乙醇(20ml)中的溶液在60℃搅拌4小时。将所得混合物真空浓缩并通过硅胶快速色谱法纯化(dcm∶甲醇，1∶1)，得到标题化合物，为乳白色固体(2.0g，97％)。lc/ms(m 1)：472。
[0844]
步骤2：(3m)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮和(3m)
‑6‑
[(3s)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮
[0845][0846]
通过制备型hplc(柱：chiralpakig，2x25cm，5μm；mtbe 10mm甲醇
‑
nh3：乙醇；85：15)分离(3m)
‑6‑
[3
‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
b]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮(2.0g)。
[0847]
第一洗脱异构体(化合物79a)：750mg，乳白色固体，rt1：1.361min，ed＝94.1％(柱：chiralpak ie
‑
3，4.6x50mm，3μm；甲醇 0.1％dea：co2；1∶1)，1h
‑
nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：8.00(dd，j＝4.8，1.2hz，1h)，7.83
‑
7.80(m，1h)，7.79(j＝4.0hz，1h)，7.57
‑
7.50(m，2h)，6.91(dd，j＝7.2，5.2hz，1h)，4.14(s，1h)，3.85
‑
3.75(m，2h)，3.39
‑
3.31(m，3h)，2.15(br s，2h)，2.10
‑
1.92(m，7h)，1.79
‑
1.73(m，3h)；lc/ms(m 1)：472,474。
[0848]
第二洗脱异构体（化合物79b)：850mg，乳白色固体，rt1：2.01min，ed＝96.9％(柱：chiralpak ie
‑
3，4.6x50mm，3μm；甲醇 0.1％dea：co2；1∶1)，1h
‑
nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：8.00(dd，j＝5.2，1.6hz，1h)，7.82
‑
7.80(m，1h)，7.79(j＝4.4hz，1h)，7.57
‑
7.53(m，2h)，6.91(dd，j＝6.8，4.8hz，1h)，4.14(s，1h)，3.84
‑
3.76(m，2h)，3.40
‑
3.34(m，3h)，2.15(brs，1h)，
2.07
‑
1.91(m，7h)，1.89
‑
1.78(m，3h)；lc/ms (m 1)：472,474。
[0849]
化合物80a；80b；80c；80d：(3p)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2,5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮；(3m)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮；(3p)
‑6‑
[(3s)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮；(3m)
‑6‑
[(3s)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮
[0850]
步骤1：(s)
‑
n
‑
[1
′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基]螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
亚基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺
[0851][0852]
将(s)
‑2‑
甲基
‑
n
‑
[螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑3‑
亚基]
‑
丙烷
‑2‑
亚磺酰胺三氟乙酸(中间体39；115mg，0.364mmol)、1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐(中间体36；150mg，0.359mmol)和diea(0.192ml，1.10mmol)在乙醇(5.0ml)中的溶液在60℃搅拌16小时。所得混合物降至室温，减压并通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶3)，得到标题化合物，为黄色固体(208mg，99％)。lc/ms(m 1)：574,576。
[0853]
步骤2：(s)
‑
n
‑
[1
′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺
[0854][0855]
在0℃下，将nabh4(75mg，1.89mmol)加入到(s)
‑
n
‑
[1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基]螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑3‑
亚基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺(200mg，0.348mmol)在thf(10ml)和h2o(1.0ml)中的溶液中。所得混合物在25℃搅拌1小时。将反应物倒入水(15ml)中，用乙酸乙酯(3x20ml)萃取。有机层合并，用盐水(1x40ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶快速色谱纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为乳白色固体(200mg，73％产率)。lc/ms (m 1)：576，578。
[0856]
步骤3：6
‑
[3
‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮
[0857]
[0858]
将(s)
‑
n
‑
[1
‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2,4
‑
哌啶]
‑3‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺(190mg，0.242mmol)和hcl在甲醇(5.0ml，6m)中的混合物在25℃搅拌1小时。所得混合物减压浓缩，通过反相色谱纯化(柱：c18硅胶；流动相，a：水(含有10mmol/l nh4hco3)和b：acn(3％至50％，40min)；检测器：uv 220/254nm)，得到6
‑
[3
‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮(120mg，95％)，为乳白色固体。
[0859]
步骤4：四种异构体的分离，(3p)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮；(3p)
‑6‑
[(3s)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮；(3m)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮；(3m)
‑6‑
[(3s)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮
[0860][0861]
通过制备型hplc(柱：chiralpak id，3x25cm，5μm；mtbe 10mm nh3‑
甲醇∶乙醇，85∶15)分离6
‑
[3
‑
氨基
‑
3h
‑
螺[呋喃并[2，3
‑
c]吡啶
‑
2，4
‑
哌啶]
‑1‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基嘧啶
‑4‑
酮。
[0862]
收集第一洗脱馏分(rt1：14.23min)，真空浓缩，得到馏分a(50mg)。收集第二洗脱馏分(rt2：20.5min)，真空浓缩，得到馏分b(50mg)。
[0863]
通过制备型hplc(柱：chiralpakia，2x25cm，5um；hex
‑
dcm，3：1 10mm nh3‑
甲醇∶乙醇，95∶5)重新分离馏分a(50mg)。
[0864]
第一洗脱异构体（化合物80a)：乳白色固体，16.5mg，rt＝5.08min，ed＝95.6，(柱：chiralpak ia
‑
3，4.6x50mm，3μm；hex/dcm，3/1 10mm nh3‑
甲醇：乙醇，98：2)；1h
‑
nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ8.13(d，j＝4.8hz，2h)，7.83
‑
7.79(m，1h)，7.57
‑
7.53(m，2h)，7.38(d，j＝4.8hz，1h)，4.16(s，1h)，3.83
‑
3.74(m，2h)，3.35
‑
3.30(m，2h)，2.03
‑
1.95(m，4h)，1.93(s，3h)，1.88
‑
1.75(m，3h)。lc/ms(m 1)：472,474。
[0865]
第二洗脱异构体（化合物80b)：乳白色固体；9.8mg；rt＝5.7min，ed＝97.6，(柱：chiralpak ia
‑
3，4.6x50mm，3μm；hex/dcm，3/1 10mm nh3‑
甲醇：乙醇，98：2)；1h
‑
nmr(400mhz，dmso
‑
d6)δ8.15(t，j＝4.8hz，2h)，7.83
‑
7.78(m，1h)，7.57
‑
7.52(m，2h)，7.39(d，j＝4.8hz，1h)，4.17(s，1h)，3.83
‑
3.74(m，2h)，3.35
‑
3.30(m，2h)，2.04
‑
1.97(m，4h)，1.93(s，3h)，1.88
‑
1.73(m，3h)；lc/ms(m 1)：472，474。
[0866]
通过制备型手性hplc(柱：chiralpak ia，2x 25cm，5um；mtbe 2mm nh3‑
甲醇∶乙醇，65∶35)重新分离馏分b(50mg)。
[0867]
第一洗脱异构体(化合物80c)：乳白色固体；24.5mg；rt＝3.8min，ed＝95.1
(chiralpakia，4.6x50mm，3um；mtbe 0.1％dea∶乙醇，65∶35)；1h
‑
nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：8.14(d，j＝4.8hz，2h)，7.83
‑
7.79(m，1h)，7.57
‑
7.53(m，2h)，7.38(d，j＝4.8hz，1h)，4.18(s，1h)，3.82
‑
3.74(m，2h)，3.35
‑
3.30(m，2h)，2.04
‑
1.95(m，4h)，1.93(s，3h)，1.89
‑
1.75(m，3h)。lc/ms(m 1)：472,474。
[0868]
第二洗脱异构体(化合物80d)：乳白色固体；11.8mg；rt＝4.6min，ed＝98.8(chiralpakia
‑
3，4.6x50mm，3um；mtbe 0.1％dea：乙醇，65：35)；1h
‑
nmr(400mhz，dmso
‑
d6)：8.14(d，j＝4.8hz，2h)，7.83
‑
7.79(m，1h)，7.57
‑
7.53(m，2h)，7.38(d，j＝4.8hz，1h)，4.16(s，1h)，3.83
‑
3.74(m，2h)，3.35
‑
3.30(m，2h)，2.04
‑
1.95(m，4h)，1.93(s，3h)，1.88
‑
1.75(m，3h)。lc/ms(m 1)：472，474。
[0869]
化合物81a(3p)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮和81b(3m)
‑6‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0870]
步骤1：1
′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
酮
[0871][0872]
采用1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基三氟甲烷磺酸盐(中间体36)和3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
酮(pharmablock)为起始材料，依据化合物77描述的程序制备标题化合物，为黄色固体。lc/ms(m 1)：470.1。
[0873]
步骤2：(r)
‑
n
‑
{1
′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
亚基}
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺
[0874][0875]
采用1
′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
酮为起始材料，依据化合物77描述的程序制备标题化合物，为乳白色固体。lc/ms(m 1)：573.2。
[0876]
步骤3：(r)
‑
n
‑
[(3r)
‑1′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺
[0877][0878]
采用1(r)
‑
n
‑
{1
′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
亚基}
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺为起始材料，依据化合物80步骤2描述的程序制备标题化合物，为乳白色固体。lc/ms(m 1)：575.1。
[0879]
步骤4：6
‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮
[0880][0881]
采用(r)
‑
n
‑
[(3r)
‑1′‑
[1
‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑6‑
氧代
‑
1，6
‑
二氢嘧啶
‑4‑
基]
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑3‑
基]
‑2‑
甲基丙烷
‑2‑
亚磺酰胺为起始材料，依据化合物80步骤3描述的程序制备标题化合物，为乳白色固体。lc/ms(m 1)：471.1。
[0882]
步骤5：两种阻转异构体的分离
[0883][0884]
通过制备型hplc(柱chiralpak ia
‑
3，mtbe 0.1％dea：乙醇，70：30)分离6
‑
[(3r)
‑3‑
氨基
‑
3h
‑
螺[1
‑
苯并呋喃
‑
2，4
′‑
哌啶]
‑1′‑
基]
‑3‑
(2，3
‑
二氯苯基)
‑
2，5
‑
二甲基
‑
3，4
‑
二氢嘧啶
‑4‑
酮(200mg)的阻转异构体。
[0885]
第一洗脱异构体（化合物81a)：68mg，白色固体，rt＝1.0min，ed＝100％；熔点：175
‑
176℃。
[0886]
第二洗脱异构体(化合物81b)：76mg，白色固体，rt＝3.24min，ed＝99％；1hnmr(400mhz，dmso
‑
d6)d7.87
‑
7.74(m，1h)，7.65
‑
7.49(m，2h)，7.32(d，j＝7.4hz，1h)，7.14(td，j＝7.7，1.4hz，1h)，6.86(td，j＝7.4，1.0hz，1h)，6.76(d，j＝7.9hz，1h)，4.10(s，1h)，3.89
‑
3.66(m，2h)，3.48
‑
3.24(m，2h)，2.28
‑
2.06(m，2h)，2.00(s，3h)，1.93(s，3h)，1.88
‑
1.64(m，3h)，0.93
‑
0.79(m，1h)；lc/ms(m 1)：470.1；熔点：170
‑
173℃。
[0887]
按照上述类似的合成路线已经制备表2中的化合物：
[0888]
表2
[0889]
[0890]
[0891]
[0892]
[0893]
[0894]
[0895]
[0896]
[0897]
[0898]
[0899]
[0900]
[0901]
[0902]
[0903][0904]
实施例3：测试本发明化合物针对shp2和erk1 2的抑制活性
[0905]
shp2生物化學测定：
[0906]
在蛋白质被带有两个适当间隔开的磷酸酪氨酸的肽激活后，使用替代底物difmup监测本发明的化合物对shp2的抑制。全长shp2蛋白(重组人shp
‑
2，大肠杆菌衍生的ser2arg593，来自r&d系统的n端6his标记；0.0.24nm)与激活肽irsi_2py(new england peptide，140nm)和difmup(分子探针，80um))在化合物(10个浓度范围，最高浓度50μm)存在下于缓冲液(hepes ph 7.2 60mm，ddt 5mm，kcl 75mm，nacl 75mm，edta 1mm，吐温200.05％)中一起室温孵育60分钟。通过使用perkinelmer envision读板器测量荧光来监测由激活shp2产生的difmu产物。使用genedata screener分析抑制剂剂量反应曲线。本发明化合物的ic
50
范围显示在下表3中。
[0907]
在kyse520中的p
‑
erk的细胞测定：
[0908]
使用mesoscale量化平台以磷酸化特异性抗体评估shp2抑制剂对perk水平的影响。为了使用中尺度测量perk水平的变化，将30,000个kyse520细胞接种在96孔组织培养板中，所述孔板被置于体积为175μl的培养基中。在37℃下孵育过夜后，将不同浓度的各种shp2抑制剂添加到每个孔中，在孔板上保持重复孔，并在37℃下与化合物一起孵育2小时，再用冰冻的pbs缓冲液洗涤。然后将细胞在裂解缓冲液中裂解并按照制造商的指示(mesoscale discovery，cat no.k15107d
‑
3)处理和分析p
‑
erk/erk。本发明化合物的ic
50
范围显示在下表3中。
[0909]
表3
[0910]
[0911]
[0912]
[0913]
[0914][0915]
实施例4：体外安全性
‑
测试对herg的选择性
[0916]
抑制离子通道herg(或kv11.1)电流会导致qt间期延长，从而导致潜在的致命性心室性快速性心律失常，称为尖端扭转型室性心动快速(torsade
‑
de
‑
point)。这是心脏毒性的主要原因之一，通常在药物开发过程的早期评估herg通道活性，以减轻心脏毒性风险。
[0917]
使用膜片钳技术在稳定的kv11.1(herg)转染的人胚胎肾细胞系(hek293)中评估herg离子通道活性。按照制造商的建议，使用来自慕尼黑的nanion technologies的自动膜片钳装置patchlinertm进行全细胞记录。将不同浓度的测试化合物或参考物奎纳定(quinidine)施加至全细胞悬浮液中，并使用具有固定幅度的脉冲模式测量电流。根据尾电流强度和kv11.1(herg)离子通道活性在对照值(定义为100％)和测试化合物之间的变化来判断对kv11.1(herg)离子通道活性的影响，并表示为coi对照值的百分比变化。
[0918]
表4
‑
体外安全性概况
[0919][0920]
结果
[0921]
与已知的shp2抑制剂shp
‑
099和rmc
‑
4550相比，本发明的化合物在herg活性(膜片钳试验中的ki值)和细胞活性(kyse中的ic
50
值)之间表现出更好的分裂。当对受试者给药时，这应该转化为降低心脏毒性的可能性。
[0922]
实施例5：测试小鼠中本发明化合物的药代动力学性质
[0923]
雌性cd1小鼠(n＝3)接受化合物的单次口服施用(通过管饲法)或静脉内(推注)注射。通常通过口服或静脉内施用给予给药媒介物，对口服给药作为在柠檬酸钠缓冲液中的0.5％methocel k4m/0.25％吐温20，0.1m，ph 3.0；对静脉内施用作为在乙酸钠缓冲液中的10％kolliphor hs15溶液，0.01m，ph4.5。在0.083(静脉注射)、0.25、0.5、1、2、4、6和24小时
后，从动物在异氟烷吸入下舌下获得连续血样，并进一步处理得到血浆。通过lc/ms/ms对样品进行蛋白质沉淀和分析。
[0924]
表5
‑
小鼠的pk数据
[0925][0926]
结果
[0927]
在小鼠pk中，与参考化合物shp
‑
099和rmc
‑
4550相比，本发明的化合物显示出较低的清除率和较高的暴露量。
[0928]
实施例6：测试本发明化合物在存在和不存在活化肽时对shp2活性突变体e76k的抑制活性
[0929]
使用与实施例3中所述相同的条件，在添加和不添加激活肽irsi_2py(new england peptide，140nm)的情况下在生物化学测定中使用自动激活突变蛋白shp2 e76k测试了一系列化合物。
[0930]
表6
[0931][0932]
*来自larochelle j.r.et al.，nature comm.，2018，9：4508，1
‑
10。
[0933]
在强shp2激活条件下，本发明的化合物保持nm范围的效力，而已知抑制剂shp099在类似条件下失去效力。这可能是通过激活shp2突变治疗癌症的优势。
[0934]
实施例7：spr结合测定
[0935]
已经使用了具有不同蛋白质密度的四个shp2(r&d systems)表面与一个参考点。从大肠杆菌表达的重组人shp2蛋白(2
‑
593)在25℃通过胺偶联共价固定在nta芯片上，固定水平为2,500至5,000ru。固定缓冲液含有20mm hepes/naoh(ph 7.4)、150mm nacl、0.05％tween 20。抑制剂(在100％dmso中储存为10mm储备溶液)用运行缓冲液(20 mm hepes/naoh ph 7.4，150mm nacl，1mm dtt，5mm mgcl2 0.1mm egta，0.05％tween 20，2％dmso，25℃)稀释，以2倍稀释系列使用biacore 4000(biacore ab，ge healthcare life sciences，uppsala，瑞典)分析。最高化合物浓度随预期的解离常数而变化，但所有化合物均在10种不同浓度下进行测试。
[0936]
相互作用分析循环以30μl/min运行，包括140秒样品注射，然后是600秒缓冲液流(解离阶段)。
[0937]
所有传感图的评估按照以下方法进行：首先减去对照表面(参考点)记录的结合响应，然后减去缓冲液空白注射。为了确定动力学速率常数，使用数值积分和非线性曲线拟合将数据集拟合到一个简单的1∶1相互作用模型，所述模型包含用于传质的项。将结合阶段结束时的响应与单点结合等温线拟合来进行平衡分析。
[0938]
表7：在shp2 spr表面上的kd、动力学曲线和停留时间
[0939]
编号kd[m]kon[1/ms]koff[1/s]停留时间[min]23b7.14e
‑
092490000.00189.374andnd＜0.0001＞160
[0940]
实施例8：u937细胞中的活性
[0941]
在细胞因子释放测定中使用单核细胞(u937)测试了选定的化合物，以测试它们的抗炎特性。使用无血清培养基将细胞接种在96孔细胞培养板中。将细胞用指定浓度的shp
‑
2抑制剂处理30分钟，然后用重组il
‑
6(50ng/ml)刺激过夜。使用mcp
‑
1 alphalisa试剂盒(perkin elmer)测量培养上清液中的mcp
‑
1产量。
[0942]
化合物77抑制了在用il
‑
6刺激了的u937细胞中产生mcp
‑
1，ic
50
＝731nm(图1)。这些结果表明本发明的化合物可用于治疗除癌症以外的增生性病症，也包括与免疫系统相关的疾病和病症。
[0943]
实施例9：注射液瓶
[0944]
将100g本发明化合物与5g磷酸二氢钠在3l再蒸馏水中的溶液用2n盐酸调它的ph至6.5，无菌过滤，转移到注射瓶中，无菌条件下冻干，并在无菌条件下密封。每个注射液瓶含有5mg本发明化合物。
[0945]
实施例10：溶液制剂
[0946]
由1g本发明化合物、9.38g nah2po4·
2h2o、28.48g na2hpo4·
12h2o和0.1g苯扎氯铵在940ml再蒸馏水中制成一种溶液。将该溶液的ph调至6.8，再将该溶液配至1l，放射灭菌。
[0947]
实施例11：安瓿剂
[0948]
将1kg本发明化合物在60l再蒸馏水中的溶液无菌过滤，转移到安瓿中，无菌条件下冻干，并在无菌条件下密封。每个安瓿含有10mg本发明化合物。
[0949]
实施例12：体内研究
‑
单一疗法
[0950]
在不同的体内模型中评估了本发明的选定化合物。
[0951]
kyse
‑
520(食道癌)
[0952]
在kyse
‑
520异种移植中研究了化合物23b在egfr扩增环境中的体内功效。h2d rag2小鼠接种了5百万个与基质胶混合的kyse
‑
520细胞。肿瘤移植后，小鼠每天经口管饲法施用剂量水平为10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg的载体对照物或化合物23b。所有剂量均耐受良好。观察到剂量依赖性明显的肿瘤生长抑制(图2)。
[0953]
在kyse
‑
520异种移植中研究了化合物74a在egfr扩增环境中的体内功效。h2d rag2小鼠接种了5百万个与基质胶混合的kyse
‑
520细胞。肿瘤移植后，小鼠每天经口管饲法施用剂量水平为0.8mg/kg、2.5mg/kg或8mg/kg的载体对照物或化合物74a。
[0954]
所有剂量均耐受良好。观察到剂量依赖性明显的肿瘤生长抑制(图3)。可以使用该方法学测试本发明的其他化合物并根据各自的ic
50
调整给药剂量。
[0955]
miapaca
‑
2(胰腺癌)
[0956]
在miapaca
‑
2异种移植中研究了化合物23b在kras g12c突变环境中的体内功效。h2d rag2小鼠接种了3百万个miapaca
‑
2细胞。肿瘤移植后，小鼠每天经口管饲法施用载体对照物或50mg/kg或100mg/kg化合物23b。所有剂量均耐受良好。观察到明显的肿瘤生长抑制(图4)。可以使用该方法学测试本发明的其他化合物并根据各自的ic
50
调整给药剂量。
[0957]
hpaf
‑
2(胰腺腺癌)
[0958]
在hpaf
‑
2异种移植中研究了化合物23b在kras g12d突变环境中的体内功效。cb17.scid小鼠接种了5百万个hpaf
‑
2细胞。肿瘤移植后，小鼠每天经口管饲法施用载体对照物或50mg/kg化合物23b或60mg/kg参考化合物rmc
‑
4550。所有剂量均耐受良好。观察到明
显的肿瘤生长抑制(图5)。可以使用该方法学测试本发明的其他化合物并根据各自的ic
50
调整给药剂量。
[0959]
u87
‑
mg(胶质母细胞瘤)
[0960]
在u87
‑
mg异种移植中研究了化合物23b在ptenlof环境中的体内功效。cd
‑
1裸鼠接种了1千万个u87
‑
mg细胞。肿瘤移植后，小鼠每天经口管饲法施用载体对照物或50mg/kg化合物23b。观察到肿瘤消退(图6)。可以使用该方法学测试本发明的其他化合物并根据各自的ic
50
调整给药剂量。
[0961]
ebc
‑
1(非小细胞肺癌)
[0962]
在ebc
‑
1异种移植中研究了化合物23b在cmet扩增环境中的体内功效。cd
‑
1裸鼠接种了5百万个ebc
‑
1细胞。肿瘤移植后，小鼠每天经口管饲法施用载体对照物或100mg/kg化合物23b。所有剂量均耐受良好。观察到明显的肿瘤生长抑制(图7)。可以使用该方法学测试本发明的其他化合物并根据各自的ic
50
调整给药剂量。