一种基于Au/CdS/CdIn2S4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法与流程

技术特征：
1.一种基于au/cds/cdin2s4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、制备cds/cdin2s4纳米粒子；a.在50ml乙二醇中制备四水合硝酸镉(cd(no3)2·
4h2o)和硫代乙酰胺的前驱体溶液，并以1:1的摩尔比例混合，然后使用磁力搅拌器剧烈搅拌40分钟。将获得的均相溶液转移到100ml反应釜中，保持在160℃反应12小时，自然冷却至室温。通过离心收集产物，用去离子水和乙醇洗涤2次以除去残留的有机溶剂和无机盐，然后在70℃下在空气中干燥8小时，研磨后得到cds粉体。b.在70ml乙二醇中制备cd(no3)2·
4h2o，incl3.4h2o和硫代乙酰胺的前驱体溶液，并以1:2:4的摩尔比例混合，然后加入一定量步骤1a制备的cds粉末，使用磁力搅拌器剧烈搅拌40分钟。将获得的均相溶液转移到100ml反应釜中，保持在160℃反应12小时，然后自然冷却至室温。通过离心收集产物，用去离子水和乙醇洗涤2次以除去残留的有机溶剂和无机盐，然后在70℃下在空气中干燥8小时，研磨后置于300℃的马弗炉中煅烧2h，随炉自然冷却至室温后再次研磨所得到的产物为cds/cdin2s4粉体。步骤2、制备纳米金溶液将98ml去离子水加入双颈烧瓶中，再加入2ml浓度为50mmol/l的haucl4溶液使最终haucl4溶液的浓度为1mmol/l；将冷凝器、玻璃塞分别连接到双颈烧瓶的两个颈上，在120℃的油浴锅中边搅拌边回流；当溶液开始回流时，取下玻璃塞迅速加入10ml浓度为38.8mmol/l的柠檬酸钠溶液，使溶液颜色在1min内由浅黄色变为酒红色，随后继续回流20min，最后关闭加热源使其在搅拌中冷却至室温，存放4℃冰箱中以备待用；步骤3、制备辣根过氧化物酶(hrp)
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cdna复合物取5μl 100μmol/l的cdna，然后将其加入到1ml的5mmol/l pbs缓冲液。继续往该pbs中加入50μl 1mg/ml的hrp，孵育1h，于12000rpm离心分离，去除未结合的hrp，用5mmol/l pbs清洗沉淀，并将清洗过的沉淀重新分散在含有0.1％牛血清白蛋白(bsa)的5mmol/l pbs中，4℃保存，备用。步骤4、构建传感器工作电极a.称取一定量的步骤1b制备的cds/cdin2s4样品，加入2ml去离子水配置成一定浓度的cds/cdin2s4溶液，常温下磁力搅拌30min，在40℃条件下超声溶解30min，之后在研钵中研磨30min使cds/cdin2s4粉体形成均匀的悬浮液，无细小颗粒感；取25μl所述的均匀悬浮液滴涂于fto电极上，在常温无风处自然干燥，然后300℃条件下煅烧2h，煅烧完毕后样品随炉自然冷却，得到cds/cdin2s4/fto电极；b.将20μl制备好的纳米au溶液滴涂到cds/cdin2s4/fto电极表面，然后用玻璃棒涂匀，干燥后得到au/cds/cdin2s4/fto电极；随后将20μl一定浓度的沙门氏菌适配体溶液滴涂到得到的au/cds/cdin2s4/fto电极表面，在4℃下孵化过夜；适配体与au nps通过au
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s键的强相互作用力牢牢固定在了au nps的表面，用tris
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hcl缓冲液冲洗电极表面去除未被固定的适配体分子，得到aptamer/au/cds/cdin2s4/fto电极。之后取20μl步骤3制备的hrp
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cdna复合物溶液滴涂到aptamer/au/cds/cdin2s4/fto电极表面，在4℃下孵化过夜；hrp
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cdna复合物与aunps通过au
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s键的强相互作用力牢牢固定在了au nps的表面，用tris
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hcl缓冲液冲洗电极表面，去除未被固定的适配体分子，得到hrp
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cdna/aptamer/au/cds/cdin2s4/fto电
极。步骤5、构建光电化学适配体传感器用于沙门氏菌的检测将步骤4b制备的hrp
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cdna/aptamer/au/cds/cdin2s4/fto电极作为工作电极，铂丝电极为对电极，饱和甘汞电极为辅助电极，分别置于pbs溶液中构建三电极体系，aa(抗坏血酸)作为电子供体，氙灯作为光源，构建基于au/cds/cdin2s4的的光电化学适配体传感器，用于沙门氏菌的检测。2.根据权利要求1所述的一种基于au/cds/cdin2s4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，其特征在于，步骤1b中，cds纳米颗粒复合在cdin2s4纳米片上，cds与cdin2s4最适配比为1:1。3.根据权利要求1所述的一种基于au/cds/cdin2s4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，其特征在于，步骤4a中，cds/cdin2s4浓度为20～40mg/ml(指“称取一定量的步骤1b制备的cds/cdin2s4样品，加入2ml去离子水配置成一定浓度的cds/cdin2s4溶液”的浓度)；步骤4b中，沙门氏菌适配体溶液浓度为1～5μmol/l。4.根据权利要求1所述的一种基于au/cds/cdin2s4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，其特征在于，步骤5中，aa浓度为0.05～0.2mol/l，pbs溶液ph值为5～11，孵育时间为30～80min。5.根据权利要求1所述的一种基于au/cds/cdin2s4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，其特征在于，步骤5中，检测的食源性致病菌为沙门氏菌，但不局限于沙门氏菌。6.根据权利要求1
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5任一项所述的一种基于au/cds/cdin2s4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，其特征在于，沙门氏菌含量确定方式为：
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i＝11.31log c
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14.843
ꢀꢀ
(1)式中，
△
i为检测时的光电流变化值，单位为毫安，c为沙门氏菌浓度，单位为cfu/ml。7.根据权利要求6任一项所述的一种基于au/cds/cdin2s4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，其特征在于，检测液ph值为7.2～7.8，优选为7.4，氙灯光源照射时的功率为500w。

技术总结
本发明公开基于Au/CdS/CdIn2S4的光电化学适配体传感器检测沙门氏菌的方法，将CdS/CdIn2S4粉体超声溶于水中，滴于FTO上，煅烧后冷却，AuNPs溶液滴于修饰CdS/CdIn2S4的FTO上煅烧得Au/CdS/CdIn2S4/FTO电极，将活化致病菌适配体滴在CdS/CdIn2S4/Au/FTO电极上，孵化过夜用Tris


技术研发人员：郝洪顺 丁超 赵一睿 朱良良 甘寒薇 侯红漫 张公亮 毕景然 闫爽
受保护的技术使用者：大连工业大学
技术研发日：2021.08.09
技术公布日：2021/11/9