支持胃肠稳态的方法与流程

支持胃肠稳态的方法
相关申请的交叉引用
1.本技术要求于2018年11月8日提交的美国临时专利申请号62/757,500和于2018年11月8日提交的美国临时专利申请号62/757,465的权益，将其中的每一个的公开内容通过引用以其整体特此并入。


背景技术：

2.动物的胃肠系统是动物的内部解剖结构与外界之间最大的表面积界面。它负责消化和吸收营养物，并提供抵抗环境病原体的有效屏障。胃肠道(git)与宿主动物的免疫系统强烈相互影响，并且是动物肠道微生物组的所在地，所述微生物组包括居住在消化道中的各种微生物(细菌、真菌、霉菌、病毒等)。
3.在健康动物中，胃肠系统经由宿主动物的免疫功能、肠粘膜层和内皮的生理学以及肠道微生物组的生物化学之间的复杂相互作用来维持稳态。肠杯状细胞的粘蛋白和粘液产生、非特异性免疫系统活性、趋化因子和细胞因子介导的炎症调节以及肠衬里细胞之间的紧密连接促进营养物的健康吸收和针对病原体和毒素的保护。
4.胃肠稳态的破坏对动物而言导致负面的健康和营养后果。例如，健康屏障功能的破坏使得肠内容物能够易位到宿主循环，例如从而允许病原体和毒素渗透粘膜和内皮层并对宿主动物产生负面影响。肠上皮细胞的炎症和/或损伤降低了动物吸收营养物的能力。对于生产动物，维持健康的胃肠稳态，胃肠系统表现出不良的营养和健康结果，从而导致增重减少、饲料效率降低、肉产量降低、肉品质更低和死亡率更高。对于伴侣动物，胃肠稳态的破坏可能会降低生活质量和整体健康。因此，非常需要提供预防和/或治疗胃肠屏障功能障碍的营养组合物，包括动物饲料。


技术实现要素：

5.在一个方面，本文提供了在有需要的动物中治疗或预防胃肠屏障功能障碍的方法，所述方法包括：向所述动物施用包含基础营养组合物和合成寡糖制剂的营养组合物，各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于3的整数；并且其中dp1和dp2级分中的每一种独立地包含如通过质谱法测定的按相对丰度计约0.5％至约15％的含脱水亚基寡糖，从而治疗或预防所述胃肠屏障功能障碍。
6.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的所述胃肠屏障的通透性降低。
7.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的所述通透性，所述降低是至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或30％的降低。在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的所述通透性，所述降低是约0.5％
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30％、0.5％
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20％、0.5％
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10％、0.5％
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1％、1％
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30％、1％
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20％、1％
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5％、10％
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4％、1％
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3％或1％
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2％的降低。
8.在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的可比对照动物的胃肠屏障通透性的降低相比，所述降低是更大的降低。在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的可比对照动物的胃肠屏障通透性的降低相比，所述降低是大至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％或60％的降低。
9.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的所述胃肠屏障的通透性降低。
10.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的通透性，所述降低是至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或30％的降低。在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的通透性，所述降低是约0.5％
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30％、0.5％
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20％、0.5％
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10％、0.5％
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5％、0.5％
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1％、1％
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5％、10％
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4％、1％
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3％或1％
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2％的降低。
11.在一些实施方案中，所述胃肠屏障的所述通透性从来自所述动物的所述胃肠屏障的样品来测定。在一些实施方案中，所述通透性通过组织学分析、染色或其任何组合来测量。
12.在一些实施方案中，所述方法还包括评价所述胃肠屏障的粘膜形态。在一些实施方案中，所述评价包括测定绒毛长度、隐窝长度、炎性细胞浸润水平或其任何组合。
13.在一些实施方案中，所述胃肠屏障的所述通透性从来自所述动物的血液、粪便或尿液样品来测定。在一些实施方案中，所述通透性通过测定所述样品中口服施用给所述动物的示踪剂的水平来测量。在一些实施方案中，所述示踪剂是不可消化的糖、聚乙二醇(peg)、荧光标记的右旋糖酐或放射性同位素。在一些实施方案中，所述通透性通过测定所述血液、粪便或尿液样品中至少一个微生物种类的水平来测量。
14.在一些实施方案中，所述通透性通过测定所述样品中结合至少一个微生物种类的抗体的水平来测量。在一些实施方案中，所述至少一个微生物种类存在于所述动物的胃肠道中。
15.在一些实施方案中，所述胃肠屏障的通透性的所述降低由所述合成寡糖制剂直接介导。在一些实施方案中，所述胃肠屏障的通透性的所述降低由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂在体内被加工成至少一种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂在体内被所述动物的胃肠微生物组的组分加工。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂在体内被存在于所述动物的胃肠道中的细菌加工。在一些实施方案中，胃肠通透性的所述降低由所述至少一种次级物质直接介导。
16.在一些实施方案中，所述胃肠屏障功能障碍是通透性过高的胃肠屏障。在一些实施方案中，所述通透性过高的胃肠屏障允许肠内容物从管腔内空间易位到所述动物的循环中。在一些实施方案中，所述肠内容物包括食物颗粒、微生物、毒素或其任何组合。
17.在一些实施方案中，与所述胃肠屏障功能障碍相关联的至少一种症状得到改善或预防。在一些实施方案中，所述至少一种症状是相对于缺乏所述胃肠屏障功能障碍的可比对照动物，粘液合成减少、粘蛋白合成减少、粘液分泌减少、粘蛋白分泌减少、营养物吸收减少、炎症增加、对感染的抗性降低、肠上皮细胞增殖减少、肠上皮细胞成熟减少、胃肠道中免
疫细胞增加、血液或胃肠道中促炎细胞因子或趋化因子水平增加、肠易激综合征、炎症性肠综合征、直肠炎症、系统感染、系统炎症、营养不良、增重减少、重量减轻、饲料转化率增加、饲料效率降低、毛发损失、粪便不一致或腹泻。
18.在一些实施方案中，所述动物患有感染。在一些实施方案中，所述胃肠屏障功能障碍与感染相关联或由感染引起。在一些实施方案中，所述感染是寄生虫、细菌、真菌或病毒感染。在一些实施方案中，所述感染是寄生虫感染。
19.在一些实施方案中，所述寄生虫感染是球虫病感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是艾美球虫属(eimeria)感染、弓形虫属(toxoplasma)感染、隐孢子虫属(cryptosporidium)感染、等孢子球虫属(isospora)感染或哈蒙德虫属(hammondia)感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是艾美球虫属感染。在一些实施方案中，所述艾美球虫属感染是变位艾美球虫(e.mivati)、柔嫩艾美球虫(e.tenella)、堆型艾美球虫(e.acervulina)或巨型艾美球虫(e.maxima)感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是弓形虫属感染。在一些实施方案中，所述弓形虫属感染是刚地弓形虫(toxoplasma gondii)。在一些实施方案中，所述球虫病感染是隐孢子虫属感染。在一些实施方案中，所述隐孢子虫属感染是小隐孢子虫(cryptosporidium parvum)、鼠隐孢子虫(cryptosporidium muris)或人隐孢子虫(cryptosporidium hominis)感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是等孢子球虫属感染。
20.在一些实施方案中，所述等孢子球虫属感染是犬等孢子球虫(isospora canis)、俄亥俄等孢子球虫(isospora ohioensis)、布罗斯等孢子球虫(isospora burrosi)或猫等孢子球虫(isospora felis)感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是哈蒙德虫属感染。在一些实施方案中，所述哈蒙德虫属感染是哈蒙德虫属物种感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、和缓艾美球虫(eimeria mitis)、柔嫩艾美球虫、刚地弓形虫、哈蒙德虫属物种、小隐孢子虫、鼠隐孢子虫、人隐孢子虫、犬等孢子球虫、俄亥俄等孢子球虫、布罗斯等孢子球虫或猫等孢子球虫感染。
21.在一些实施方案中，所述感染是细菌感染。在一些实施方案中，所述细菌感染是葡萄球菌感染、志贺氏菌属(shigella)感染、弯曲杆菌属(campylobacter)感染、沙门氏菌属(salmonella)感染、埃希氏菌属(escherichia)感染或耶尔森氏菌属(yersinia)感染。
22.在一些实施方案中，相对于没有所述感染的可比动物，所述感染引起胃肠道炎症的增加、所述动物的胃肠道中杯状细胞数量的减少、所述动物的胃肠道中粘液分泌的减少、所述动物的胃肠屏障的绒毛长度的减少、对所述动物的胃肠屏障的绒毛的损伤、所述动物的胃肠道中免疫细胞的水平增加、所述动物的胃肠道中cd8 t细胞的水平增加、肝蛋白apg(α糖蛋白)水平的增加、循环抗体水平的增加、循环iga抗体水平的增加、或循环二胺氧化酶水平的降低、或其任何组合。
23.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前胃肠屏障的炎症，所述动物具有降低的所述胃肠屏障的炎症。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的可比对照动物的胃肠屏障的炎症，所述动物具有降低的所述胃肠屏障的炎症。在一些实施方案中，所述炎症通过至少一种抗炎细胞因子水平的增加来测量。在一些实施方案中，所述抗炎细胞因子是il1b、il4、il10、il
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6、il
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11、il
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13、il1ra或tgf
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β。在一些实施方案中，所述抗炎细胞因子是il1b、il4或il10。
24.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前的所述动物，所述动物表现出cd8 t细胞的减少、cd4 t细胞的增加、循环二胺氧化酶水平的增加或循环抗体水平(例如，iga)的降低。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的可比对照动物，所述动物表现出cd8 t细胞的减少、cd4 t细胞的增加、循环二胺氧化酶水平的增加或循环抗体水平(例如，iga)的降低。
25.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前的胃肠屏障，所述动物表现出增加的经由所述胃肠屏障的营养物吸收。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的可比对照动物的胃肠屏障，所述动物表现出增加的经由胃肠屏障的营养物吸收。
26.在一些实施方案中，所述营养物吸收通过与营养物吸收相关联的至少一种胃肠蛋白水平的增加来测量。在一些实施方案中，所述蛋白质是si(蔗糖酶
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异麦芽糖酶)、slc5a10、slc34a1、slc2a2、slc34a2、slc23a1、slc23a2、slc5a8、slc16a3、slc4、slc4a9、slc4a2、slc4a3、npc1l1、c6orf58、ddc、mct1、mct4、nas1、dtdst、pat1、dra、cld、sat1、sut2、sglt1、glut2、b0at1、atb0 、sit1、taut、eaac1、asct2、sn1、sn2、pept1、snat2、glyt1、y lat1、y lat2、cd36、lfabp、npc1l1、abcg5、abcg8、svct1、svct2、smvt、gif、amn、cubl、mrp1、folt、pcft、folr1、oat10、rfvt1、rfvt2、thtr1、thtr2、vdr、dcytb、dmt1、hcp1、fpn1、heph、hamp、zip4、zip11、zip8、zip14a、zip14b、znt1、znt2、ctr1、slc3a1、slc1a4、alpi、c17orf78、muc17、defa5、rbp2、defa6、mln、mep1b、lct、tm4sf20或fabp6。在一些实施方案中，所述蛋白质是si、slc5a10或slc34a1。
27.在一些实施方案中，相对于在施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的体重，所述动物具有增加的体重。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述动物的所述体重，所述动物的所述体重增加至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述动物的所述体重，所述动物的所述体重增加约1％
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40％、1％
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30％、1％
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20％、1％
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10％、1％
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5％、1％
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4％、1％
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3％或1％
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2％。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物中体重的增加，体重的所述增加是更大的增加。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物中体重的增加，体重的所述增加是大至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的增加。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物中体重的增加，体重的所述增加是大了约1％
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40％、1％
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30％、1％
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20％、1％
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10％、1％
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5％、1％
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4％、1％
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3％或1％
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2％的增加。
28.在一些实施方案中，相对于在施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的饲料效率，所述动物具有增加的饲料效率。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述动物的所述饲料效率，所述动物的所述饲料效率增加至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述动物的所述体重，所述动物的所述饲料效率增加约1％
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40％、1％
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35％、1％
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30％、1％
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25％、1％
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20％、1％
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15％、1％
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10％、1％
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5％、1％
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4％、1％
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3％或1％
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2％。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物，饲料效率的所述增加是更大的增加。在一些实施方案中，相对
于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的所述可比营养组合物的所述可比对照动物中饲料效率的所述增加，饲料效率的所述增加是大至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的增加。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的所述可比营养组合物的所述可比对照动物中饲料效率的所述增加，饲料效率的所述增加是大了约1％
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40％、1％
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30％、1％
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20％、1％
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10％、1％
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5％、1％
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4％、1％
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3％或1％
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2％的增加。
29.在一些实施方案中，相对于在施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的饲料转化率(fcr)，所述动物具有降低的fcr。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述动物的饲料转化率，所述动物的所述饲料转化率降低至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述动物的所述体重，所述动物的所述饲料转化率(fcr)降低约1％
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40％、1％
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35％、1％
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30％、1％
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25％、1％
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20％、1％
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15％、1％
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10％、1％
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5％、1％
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4％、1％
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3％或1％
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2％。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物，所述动物所具有的饲料转化率的所述降低是更大的降低。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的所述可比营养组合物的所述可比对照动物中饲料转化率的所述降低，饲料转化率的所述降低是大至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％的降低。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的所述可比营养组合物的所述可比对照动物中饲料转化率的所述降低，饲料转化率的所述降低是大了约1％
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40％、1％
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30％、1％
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20％、1％
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10％、1％
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5％、1％
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4％、1％
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3％或1％
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2％的降低。
30.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物，所述动物的预期寿命或存活率增加。
31.在一些实施方案中，将包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物以足以治疗或预防所述胃肠屏障功能障碍的量施用给所述动物。
32.在一些实施方案中，将包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物施用给所述动物至少1、7、10、14、30、45、60、90或120天。在一些实施方案中，将包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物每天至少一次、两次、三次、四次或五次施用给所述动物。在一些实施方案中，所述施用包括向所述动物提供包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物以随意摄取。在一些实施方案中，所述动物在超过至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、90或120个二十四小时时段内摄取包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物的至少一部分。
33.在一些实施方案中，所述营养组合物包含至少100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm、900ppm、1000ppm、1500ppm或2000ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm、900ppm、1000ppm、1500ppm或2000ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约500ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约100ppm
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2000ppm、100ppm
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1500ppm、100ppm
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1000ppm、100ppm
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900ppm、100ppm
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800ppm、100ppm
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700ppm、100ppm
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600ppm、100ppm
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500ppm、100ppm
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400ppm、100ppm
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300ppm、100ppm
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200ppm、200ppm
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1000ppm、200ppm
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800ppm、200ppm
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700ppm、200ppm
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600ppm、200ppm
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500ppm、300ppm
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1000ppm、300ppm
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700ppm、300ppm
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600ppm或300ppm
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500ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约300ppm
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600ppm的
所述合成寡糖制剂。
34.在一些实施方案中，所述动物是家禽、海鲜、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鱼、虾或鸟。
35.在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述鸡是肉鸡、蛋鸡或种鸡。
36.在一些实施方案中，所述动物是猪。在一些实施方案中，所述猪是保育猪、生长猪或肥育猪。
37.在一些实施方案中，所述动物是鱼。在一些实施方案中，所述鱼是鲑鱼、罗非鱼或热带鱼。
38.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
39.在一些实施方案中，所述相对丰度通过lc
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ms/ms来测定。
40.在一些实施方案中，至少5、10、20或30种dp级分中寡糖的所述相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，所述n种级分中的每一种中寡糖的所述相对丰度随其聚合度单调降低。
41.在一些实施方案中，n是至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100。
42.在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。
43.在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。
44.在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
45.在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计少于15％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约0.5％至约
10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
46.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
47.在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计大于0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
48.在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计大于0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
49.在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计大于0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
50.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计大于0.5％、0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
51.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约1％至约40％的dp1级分含量。
52.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约1％至约35％的dp2级分含量。
53.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约1％至约30％的dp3级分含量。
54.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约0.1％至约20％的dp4级分含量。
55.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约0.1％至约15％的dp5级分含量。
56.在一些实施方案中，如通过液相色谱法测定的，dp2级分与dp1级分的比率是约0.02至约0.40。
57.在一些实施方案中，如通过液相色谱法测定的，dp3级分与dp2级分的比率是约0.01至约0.30。
58.在一些实施方案中，如通过液相色谱法测定的，所述寡糖制剂中dp1和dp2级分的合计含量少于50％、少于40％或少于30％。
59.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含至少103、至少104、至少105、至少106或至少109个不同的寡糖种类。
60.在一些实施方案中，两种或更多种独立的寡糖包含不同的脱水亚基。
61.在一些实施方案中，所述含脱水亚基寡糖中的每一种包含作为单糖的热脱水产物
的一个或多个脱水亚基。
62.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含选自以下的一个或多个脱水亚基：脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖、脱水阿洛糖、脱水阿卓糖、脱水古洛糖、脱水艾杜糖、脱水塔洛糖、脱水果糖、脱水核糖、脱水阿拉伯糖、脱水鼠李糖、脱水来苏糖和脱水木糖。
63.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含一个或多个脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖或脱水果糖亚基。
64.在一些实施方案中，所述dp1级分包含1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖或1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖脱水亚基。在一些实施方案中，所述dp1级分包含1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖两种脱水亚基。
65.在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1至1:10、约9:1至约1:10、约8:1至约1:10、约7:1至约1:10、约6:1至约1:10、约5:1至约1:10、约4:1至约1:10、约3:1至约1:10、约2:1至约1:10、约10:1至约1:9、约10:1至约1:8、约10:1至约1:7、约10:1至约1:6、约10:1至约1:5、约10:1至约1:4、约10:1至约1:3、约10:1至约1:2或约1:1至约3:1。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9或约1:10。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约2:1。
66.在一些实施方案中，所述dp2级分包含至少5个种类的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含约5至10个种类的含脱水亚基寡糖。
67.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含一种或多种糖焦糖化产物。在一些实施方案中，所述糖焦糖化产物选自：甲醇；乙醇；呋喃；甲基乙二醛；2
‑
甲基呋喃；乙酸乙烯酯；乙醇醛；乙酸；丙酮醇；糠醛；2
‑
呋喃甲醇；3
‑
呋喃甲醇；2
‑
羟基环戊
‑2‑
烯
‑1‑
酮；5
‑
甲基糠醛；2(5h)
‑
呋喃酮；2甲基环戊烯醇酮；左旋葡萄糖酮；环状羟基内酯；1,4,3,6
‑
二脱水
‑
α
‑
d
‑
吡喃葡萄糖；二脱水吡喃葡萄糖；和5
‑
羟基甲基糠醛(5
‑
hmf)。
68.在一些实施方案中，大于50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的所述含脱水亚基寡糖包含链端脱水亚基。
69.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过高效液相色谱法(hplc)测定的约300至约5000g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约300至约2500g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约2000g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约1500g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约300至约5000g/mol的数均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约300至约2500g/mol的数均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约2000g/mol的数均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约1500g/mol的数均分子量。
70.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有约2000至约2800g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有约1000至约2000g/mol的数均分子量。
71.在一个方面，本文提供了在有需要的动物中治疗或预防感染的方法，所述方法包
括：向所述动物施用包含基础营养组合物和合成寡糖制剂的营养组合物，各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于3的整数；并且其中dp1和dp2级分中的每一种独立地包含如通过质谱法测定的按相对丰度计约0.5％至约15％的含脱水亚基寡糖，从而治疗或预防所述感染。
72.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前来自所述动物的样品中至少一种免疫细胞的水平，来自所述动物的样品中所述至少一种免疫细胞的水平增加。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述至少一种免疫细胞的所述水平，所述增加是增加至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述至少一种免疫细胞的所述水平，所述增加是增加约1％
‑
40％、1％
‑
35％、1％
‑
30％、1％
‑
25％、1％
‑
20％、1％
‑
15％、1％
‑
10％、1％
‑
5％、1％
‑
4％、1％
‑
3％或1％
‑
2％。
73.在一些实施方案中，相对于来自已经被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物的样品中至少一种免疫细胞的水平，来自所述动物的样品中所述至少一种免疫细胞的水平增加。在一些实施方案中，相对于来自已经被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的所述可比对照动物的所述样品中所述至少一种免疫细胞的所述水平，所述增加是增加至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。在一些实施方案中，相对于来自已经被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的所述可比对照动物的所述样品中所述至少一种免疫细胞的所述水平，所述增加是增加约1％
‑
40％、1％
‑
35％、1％
‑
30％、1％
‑
25％、1％
‑
20％、1％
‑
15％、1％
‑
10％、1％
‑
5％、1％
‑
4％、1％
‑
3％或1％
‑
2％。
74.在一些实施方案中，所述至少一种免疫细胞是嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、t细胞、b细胞、巨噬细胞、单核细胞、粒细胞或树突细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是吞噬细胞。在一些实施方案中，所述吞噬细胞是嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、巨噬细胞、单核细胞或树突细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是t细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是粒细胞。
75.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物之前来自所述动物的样品中至少一种促炎细胞因子的水平，来自所述动物的样品中所述至少一种促炎细胞因子的水平增加。在一些实施方案中，相对于来自已经被施用缺乏所述合成寡糖制剂的可比营养组合物的可比对照动物的样品中至少一种促炎细胞因子的水平，来自所述动物的样品中所述至少一种促炎细胞因子的水平增加。在一些实施方案中，所述至少一种促炎细胞因子是il1、il
‑
12、il18、tnfa、ifng、gm
‑
csf、il
‑
1β、il6、rantes、mcp1、il8、mip
‑
1α、mip
‑
1β、淋巴细胞趋化因子、分形趋化因子或gro/kc。
76.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的所述胃肠屏障的通透性降低。在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的所述通透性，所述降低是至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或30％的降低；或者相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的所述通透性，所述降低是约0.5％
‑
30％、0.5％
‑
20％、0.5％
‑
10％、0.5％
‑
5％、0.5％
‑
4％、0.5％
‑
3％、0.5％
‑
2％、0.5％
‑
1％、
1％
‑
30％、1％
‑
20％、1％
‑
10％、1％
‑
5％、10％
‑
4％、1％
‑
3％或1％
‑
2％的降低。在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的可比对照动物的胃肠屏障通透性的降低相比，所述降低是更大的降低。在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的可比对照动物的胃肠屏障通透性的降低相比，所述降低是大至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％或60％的降低。
77.在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的所述胃肠屏障的通透性降低。在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的通透性，所述降低是至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或30％的降低。在一些实施方案中，相对于在所述施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的所述胃肠屏障的通透性，所述降低是约0.5％
‑
30％、0.5％
‑
20％、0.5％
‑
10％、0.5％
‑
5％、0.5％
‑
4％、0.5％
‑
3％、0.5％
‑
2％、0.5％
‑
1％、1％
‑
30％、1％
‑
20％、1％
‑
10％、1％
‑
5％、10％
‑
4％、1％
‑
3％或1％
‑
2％的降低。
78.在一些实施方案中，所述胃肠屏障功能障碍与感染相关联或由感染引起。在一些实施方案中，所述感染是寄生虫、细菌、真菌或病毒感染。
79.在一些实施方案中，所述感染是寄生虫感染。在一些实施方案中，所述寄生虫感染是球虫病感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是艾美球虫属感染、弓形虫属感染、隐孢子虫属感染、等孢子球虫属感染或哈蒙德虫属感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是艾美球虫属感染。在一些实施方案中，所述艾美球虫属感染是变位艾美球虫、柔嫩艾美球虫、堆型艾美球虫或巨型艾美球虫感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是弓形虫属感染。在一些实施方案中，所述弓形虫属感染是刚地弓形虫。在一些实施方案中，所述球虫病感染是隐孢子虫属感染。在一些实施方案中，所述隐孢子虫属感染是小隐孢子虫、鼠隐孢子虫或人隐孢子虫感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是等孢子球虫属感染。在一些实施方案中，所述等孢子球虫属感染是犬等孢子球虫、俄亥俄等孢子球虫、布罗斯等孢子球虫或猫等孢子球虫感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是哈蒙德虫属感染。在一些实施方案中，所述哈蒙德虫属感染是哈蒙德虫属物种感染。在一些实施方案中，所述球虫病感染是堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、和缓艾美球虫、柔嫩艾美球虫、刚地弓形虫、哈蒙德虫属物种、小隐孢子虫、鼠隐孢子虫、人隐孢子虫、犬等孢子球虫、俄亥俄等孢子球虫、布罗斯等孢子球虫或猫等孢子球虫感染。
80.在一些实施方案中，所述感染是细菌感染。在一些实施方案中，所述细菌感染是葡萄球菌感染、志贺氏菌属感染、弯曲杆菌属感染、沙门氏菌属感染、埃希氏菌属感染或耶尔森氏菌属感染。
81.在一些实施方案中，其中将包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物以足以治疗或预防所述感染的量施用给所述动物。在一些实施方案中，将包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物施用给所述动物至少1、7、10、14、30、45、60、90或120天。在一些实施方案中，将包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物每天至少一次、两次、三次、四次或五次施用给所述动物。在一些实施方案中，所述施用包括向所述动物提供包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物以随意摄取。在一些实施方案中，所述动物在超过至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、90或120个二十四小时时段内摄取包含所述合成寡糖制剂的所述营养组合物的至少一部分。
82.在一些实施方案中，所述营养组合物包含至少100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm、900ppm、1000ppm、1500ppm或2000ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm、900ppm、1000ppm、1500ppm或2000ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约500ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约100ppm
‑
2000ppm、100ppm
‑
1500ppm、100ppm
‑
1000ppm、100ppm
‑
900ppm、100ppm
‑
800ppm、100ppm
‑
700ppm、100ppm
‑
600ppm、100ppm
‑
500ppm、100ppm
‑
400ppm、100ppm
‑
300ppm、100ppm
‑
200ppm、200ppm
‑
1000ppm、200ppm
‑
800ppm、200ppm
‑
700ppm、200ppm
‑
600ppm、200ppm
‑
500ppm、300ppm
‑
1000ppm、300ppm
‑
700ppm、300ppm
‑
600ppm或300ppm
‑
500ppm的所述合成寡糖制剂。在一些实施方案中，所述营养组合物包含约300ppm
‑
600ppm的所述合成寡糖制剂。
83.在一些实施方案中，所述动物是家禽、海鲜、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鱼、虾或鸟。
84.在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述鸡是肉鸡、蛋鸡或种鸡。
85.在一些实施方案中，所述动物是猪。在一些实施方案中，所述猪是保育猪、生长猪或肥育猪。
86.在一些实施方案中，所述动物是鱼。在一些实施方案中，所述鱼是鲑鱼、罗非鱼或热带鱼。
87.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
88.在一些实施方案中，所述相对丰度通过lc
‑
ms/ms来测定。
89.在一些实施方案中，至少5、10、20或30种dp级分中寡糖的所述相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，所述n种级分中的每一种中寡糖的所述相对丰度随其聚合度单调降低。
90.在一些实施方案中，n是至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100。
91.在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。
92.在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。
93.在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％
的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
94.在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计少于15％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
95.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约2％至约12％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约1％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
96.在一些实施方案中，所述dp2级分包含按相对丰度计大于0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
97.在一些实施方案中，所述dp1级分包含按相对丰度计大于0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
98.在一些实施方案中，所述dp3级分包含按相对丰度计大于0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
99.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计大于0.5％、0.6％、大于0.8％、大于1.0％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％或大于12％的含脱水亚基寡糖。
100.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约1％至约40％的dp1级分含量。
101.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约1％至约35％的dp2级分含量。
102.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约1％至约30％的dp3级分含量。
103.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约0.1％至约20％的dp4级分含量。
104.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过液相色谱法测定的按重量计约0.1％至约15％的dp5级分含量。
105.在一些实施方案中，如通过液相色谱法测定的，dp2级分与dp1级分的比率是约0.02至约0.40。
106.在一些实施方案中，如通过液相色谱法测定的，dp3级分与dp2级分的比率是约0.01至约0.30。
107.在一些实施方案中，如通过液相色谱法测定的，所述寡糖制剂中dp1和dp2级分的合计含量少于50％、少于40％或少于30％。
108.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含至少103、至少104、至少105、至少106或至少109个不同的寡糖种类。
109.在一些实施方案中，两种或更多种独立的寡糖包含不同的脱水亚基。
110.在一些实施方案中，所述含脱水亚基寡糖中的每一种包含作为单糖的热脱水产物的一个或多个脱水亚基。
111.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含选自以下的一个或多个脱水亚基：脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖、脱水阿洛糖、脱水阿卓糖、脱水古洛糖、脱水艾杜糖、脱水塔洛糖、脱水果糖、脱水核糖、脱水阿拉伯糖、脱水鼠李糖、脱水来苏糖和脱水木糖。
112.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含一个或多个脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖或脱水果糖亚基。
113.在一些实施方案中，所述dp1级分包含1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖或1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖脱水亚基。在一些实施方案中，所述dp1级分包含1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖两种脱水亚基。
114.在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1至1:10、约9:1至约1:10、约8:1至约1:10、约7:1至约1:10、约6:1至约1:10、约5:1至约1:10、约4:1至约1:10、约3:1至约1:10、约2:1至约1:10、约10:1至约1:9、约10:1至约1:8、约10:1至约1:7、约10:1至约1:6、约10:1至约1:5、约10:1至约1:4、约10:1至约1:3、约10:1至约1:2或约1:1至约3:1。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1、约9:1、约8:1、约7:1、约6:1、约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9或约1:10。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约2:1。
115.在一些实施方案中，所述dp2级分包含至少5个种类的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述dp2级分包含约5至10个种类的含脱水亚基寡糖。
116.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含一种或多种糖焦糖化产物。在一些实施方案中，所述糖焦糖化产物选自：甲醇；乙醇；呋喃；甲基乙二醛；2
‑
甲基呋喃；乙酸乙烯酯；乙醇醛；乙酸；丙酮醇；糠醛；2
‑
呋喃甲醇；3
‑
呋喃甲醇；2
‑
羟基环戊
‑2‑
烯
‑1‑
酮；5
‑
甲基糠醛；2(5h)
‑
呋喃酮；2甲基环戊烯醇酮；左旋葡萄糖酮；环状羟基内酯；1,4,3,6
‑
二脱水
‑
α
‑
d
‑
吡喃葡萄糖；二脱水吡喃葡萄糖；和5
‑
羟基甲基糠醛(5
‑
hmf)。
117.在一些实施方案中，大于50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的所述含脱水亚基寡糖包含链端脱水亚基。
118.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过高效液相色谱法(hplc)测定的约300至约5000g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定
的约300至约2500g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约2000g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约1500g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约300至约5000g/mol的数均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约300至约2500g/mol的数均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约2000g/mol的数均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有如通过hplc测定的约500至约1500g/mol的数均分子量。
119.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有约2000至约2800g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有约1000至约2000g/mol的数均分子量。
120.本公开文本至少部分地基于以下发现：包含一个或多个脱水亚基的寡糖降低胃肠屏障的通透性。因此，本公开文本尤其涉及在动物中预防胃肠功能障碍的方法，所述方法包括施用本文所述的寡糖制剂。
121.在一些实施方案中，所述寡糖制剂的至少5、10、20或30种dp级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的n种级分中的每一种中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，n是至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100。
122.在一些实施方案中，所述寡糖制剂的至少一种级分包含按相对丰度计少于80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计少于80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计少于80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的至少一种级分包含按相对丰度计少于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计少于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计少于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖的至少一种级分包含按相对丰度计大于2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计大于2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计大于2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的至少
一种级分包含按相对丰度计大于20％、21％、22％、23％、24％或25％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计大于20％、21％、22％、23％、24％或25％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计大于20％、21％、22％、23％、24％或25％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，超过99％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％或30％的所述含脱水亚基寡糖仅具有一个脱水亚基。
123.在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有按相对丰度计1％至40％的dp1级分含量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有按相对丰度计1％至35％的dp2级分含量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有按相对丰度计1％至30％的dp3级分含量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂具有按相对丰度计0.1％至20％的dp4级分含量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含按相对丰度计0.1％至15％的dp5级分含量。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含dp2级分和dp1级分，其中所述dp2级分与所述dp1级分的比率按相对丰度计是0.02
‑
0.40。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含dp3级分和dp2级分，其中所述寡糖制剂中所述dp3级分与所述dp2级分的比率按相对丰度计是0.01
‑
0.30。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含dp1级分和dp2级分，其中所述寡糖制剂中所述dp1和所述dp2级分的合计含量按相对丰度计少于50％、30％或10％。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含至少25、50、75、100、103、104、105、106、109、110、120、150或200个不同的寡糖种类。
124.在一些实施方案中，所述寡糖制剂的至少两种独立的寡糖包含不同的脱水亚基。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含作为单糖的可逆热脱水产物的至少一个脱水亚基。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含至少一个脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖、脱水阿洛糖、脱水阿卓糖、脱水古洛糖、脱水艾杜糖、脱水塔洛糖、脱水果糖、脱水核糖、脱水阿拉伯糖、脱水鼠李糖、脱水来苏糖或脱水木糖亚基。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含至少一个脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖或脱水果糖亚基。
125.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含至少一个1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖或1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖亚基。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含至少一个1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖亚基和至少一个1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖脱水亚基。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1至1:10、9:1至1:10、8:1至1:10、7:1至1:10、6:1至1:10、5:1至1:10、4:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10、10:1至1:9、10:1至1:8、10:1至1:7、10:1至1:6、10:1至1:5、10:1至1:4、10:1至1:3、10:1至1:2或1:1至3:1。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:8、1:9或1:10。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约2:1。在一些实施方案中，在每种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1至1:10、9:1至1:10、8:1至1:10、7:1至1:10、6:1至1:10、5:1至1:10、4:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10、10:1至1:9、10:1至1:8、10:1至1:7、10:1至1:6、10:1至1:5、10:1至1:4、10:1至1:3、10:1至1:2或1:1至3:1。在一些实施方案中，在所述寡糖制剂的每种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:8、1:9或1:10。在一些实
施方案中，在所述寡糖制剂的每种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约2:1。在一些实施方案中，所述寡糖制剂中至少1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的所述脱水亚基选自1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖。
126.在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含作为糖焦糖化产物的至少一个脱水亚基。在一些实施方案中，所述糖焦糖化产物选自：甲醇；乙醇；呋喃；甲基乙二醛；2
‑
甲基呋喃；乙酸乙烯酯；乙醇醛；乙酸；丙酮醇；糠醛；2
‑
呋喃甲醇；3
‑
呋喃甲醇；2
‑
羟基环戊
‑2‑
烯
‑1‑
酮；5
‑
甲基糠醛；2(5h)
‑
呋喃酮；2甲基环戊烯醇酮；左旋葡萄糖酮；环状羟基内酯；1,4,3,6
‑
二脱水
‑
α
‑
d
‑
吡喃葡萄糖；二脱水吡喃葡萄糖；和5
‑
羟基甲基糠醛(5
‑
hmf)。在一些实施方案中，所述寡糖制剂中约0.1％至5％、0.1％至2％或0.1％至1％的所述脱水亚基是焦糖化产物。
127.在一些实施方案中，所述寡糖制剂中至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的含脱水亚基寡糖包含链端脱水亚基。
128.在一些实施方案中，所述寡糖制剂的重均分子量是约300至5000g/mol、500至5000g/mol、700至5000g/mol、500至2000g/mol、700至2000g/mol、700至1500g/mol、300至1500g/mol、300至2000g/mol、400至1300g/mol、400至1200g/mol、400至1100g/mol、500至1300g/mol、500至1200g/mol、500至1100g/mol、600至1300g/mol、600至1200g/mol或600至1100g/mol。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的数均分子量是约300至5000g/mol、500至5000g/mol、700至5000g/mol、500至2000g/mol、700至2000g/mol、700至1500g/mol、300至1500g/mol、300至2000g/mol、400至1000g/mol、400至900g/mol、400至800g/mol、500至900g/mol或500至800g/mol。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的重均分子量是约2000至2800g/mol、2100至2700g/mol、2200至2600g/mol、2300至2500g/mol或2320至2420g/mol。在一些实施方案中，所述寡糖制剂的数均分子量是约1000至2000g/mol、1100至1900g/mol、1200至1800g/mol、1300至1700g/mol、1400至1600g/mol或1450至1550g/mol。
129.在一个方面，本文提供了在动物中预防胃肠屏障功能障碍的方法，所述方法包括：向所述动物施用包含基础营养组合物和合成寡糖制剂的营养组合物，其中所述合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于2的整数；其中每种级分包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。
130.在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性更低。在一些实施方案中，所述胃肠屏障功能障碍是通透性过高(肠漏症)。
131.在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或30％。在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％
‑
40％、0.5％
‑
30％、0.5％
‑
20％、0.5％
‑
10％、0.5％
‑
5％、0.5％
‑
1％、1％
‑
40％、1％
‑
30％、1％
‑
20％、1％
‑
10％、1％
‑
5％、1％
‑
2％、5％
‑
40％、5％
‑
30％、5％
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20％、5％
‑
10％、10％
‑
40％、10％
‑
30％或10％
‑
20％。
132.在一些实施方案中，胃肠通透性的所述降低由所述合成寡糖制剂直接介导。在一些实施方案中，胃肠通透性的所述降低由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述寡糖制剂在体内被加工成一种或多种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂被所述动物的胃肠微生物群的组分加工。在一些实施方案中，所述组分是胃肠细菌。在一些实施方案中，胃肠通透性的所述降低由所述次级物质中的一种或多种直接介导。
133.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物，所述动物具有降低的发生胃肠屏障功能障碍的可能性。
134.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的体重，所述动物具有更高的体重。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料效率，所述动物具有更高的饲料效率。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料转化率，所述动物具有更低的饲料转化率。
135.在一些实施方案中，所述动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡(例如肉鸡、蛋鸡、种鸡)、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述动物是猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)。
136.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
137.本文提供了在动物中促进杯状细胞增殖的方法，所述方法包括：向所述动物施用包含基础营养组合物和寡糖制剂的营养组合物，其中所述合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于2的整数；其中每种级分包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。
138.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中杯状细胞的水平，所述动物的胃肠道中杯状细胞的水平更高。在一些实施方案中，与被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中杯状细胞的水平相比，所述动物的胃肠道中杯状细胞的水平大至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。在一些实施方案中，相对于缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物中杯状细胞的水平，所述动物的胃肠道中杯状细胞的水平大了约0.5％
‑
20％、0.5％
‑
15％、0.5％
‑
10％、0.5％
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5％、0.5％
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1％、1％
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20％、1％
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15％、1％
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10％、1％
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5％、1％
‑
2％、5％
‑
20％、5％
‑
15％或5％
‑
10％。
139.在一些实施方案中，杯状细胞水平的所述增加由所述合成寡糖制剂直接介导。在一些实施方案中，杯状细胞水平的所述增加由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述寡糖制剂在体内被加工成一种或多种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂被所述动物的胃肠微生物群的组分加工。在一些实施方案中，所述组分是胃肠细菌。在一些实施方案中，杯状细胞数量的所述增加由所述次级物质中的一种或多种直接介导。
140.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的体重，所述动物具有更高的体重。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料效率，所述动物具有更高的饲料效率。在一些实施方案中，相对
于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料转化率，所述动物具有更低的饲料转化率。
141.在一些实施方案中，所述动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡(例如肉鸡、蛋鸡、种鸡)、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述动物是猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)。在一些实施方案中，所述动物是家畜。在一些实施方案中，所述动物是伴侣动物。
142.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
143.本文提供了在动物的胃肠道中促进粘液产生的方法，所述方法包括：向所述动物施用包含基础营养组合物和寡糖制剂的营养组合物，其中所述合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于2的整数；其中每种级分包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。
144.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物，所述动物的胃肠道中粘液的水平更高。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中粘液的水平，粘液的水平高至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中粘液的水平，粘液的水平高至少约0.5％
‑
20％、0.5％
‑
15％、0.5％
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10％、0.5％
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5％、0.5％
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2％、0.5％
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1％、1％
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20％、1％
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15％、1％
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10％、1％
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5％、1％
‑
2％、5％
‑
20％、5％
‑
15％或5％
‑
10％。
145.在一些实施方案中，所述方法包括从所述动物获得胃肠样品。在一些实施方案中，所述样品是胃肠组织(例如，盲肠活检)或粪便样品。在一些实施方案中，所述方法包括检测所述样品中粘液的水平。在一些实施方案中，粘液的水平通过检测粘液的蛋白质组分来检测。在一些实施方案中，所述蛋白质是粘蛋白。
146.在一些实施方案中，粘液水平的所述增加由所述合成寡糖制剂直接介导。在一些实施方案中，粘液水平的所述增加由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述寡糖制剂在体内被加工成一种或多种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂被所述动物的胃肠微生物群的组分加工。在一些实施方案中，所述组分是胃肠细菌。在一些实施方案中，粘液水平的所述增加由所述次级物质中的一种或多种直接介导。
147.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的体重，所述动物具有更高的体重。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料效率，所述动物具有更高的饲料效率。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料转化率，所述动物具有更低的饲料转化率。
148.在一些实施方案中，所述动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡(例如肉鸡、蛋鸡、种鸡)、火鸡、鸭或
鹅。在一些实施方案中，所述动物是猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)。在一些实施方案中，所述动物是家畜。在一些实施方案中，所述动物是伴侣动物。
149.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
150.本文提供了预防动物的感染的方法，所述方法包括：向所述动物施用包含基础营养组合物和合成寡糖制剂的营养组合物，其中所述合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于2的整数；其中每种级分包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。
151.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种类型的免疫细胞的水平更高。
152.在一些实施方案中，所述免疫细胞是吞噬细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是粒细胞。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中粒细胞吞噬作用的水平更高。在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞活性的水平由所述合成寡糖制剂直接介导。
153.在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞活性的水平由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂在体内被加工成一种或多种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂被所述动物的胃肠微生物群的组分加工。在一些实施方案中，所述组分是胃肠细菌。在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞活性的水平由所述次级物质中的一种或多种直接介导。
154.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种促炎细胞因子或趋化因子的水平更高。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种抗炎细胞因子或趋化因子的水平更低。
155.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的胃肠屏障的通透性更低。
156.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中粘液的水平更高。
157.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中杯状细胞的水平更高。
158.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的体重，所述动物具有更高的体重。在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料效率，所述动物具有更高的饲料效率。
159.在一些实施方案中，相对于被施用缺乏所述合成寡糖制剂的营养组合物的动物的饲料转化率，所述动物具有更低的饲料转化率。
160.在一些实施方案中，所述动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡(例如肉鸡、蛋鸡、种鸡)、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述动物是猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)。在一些实施方案中，
所述动物是家畜。在一些实施方案中，所述动物是伴侣动物。
161.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
162.在一个方面，本公开文本至少部分地基于以下发现：包含一个或多个脱水亚基的寡糖降低胃肠屏障的通透性。因此，在一个方面，本公开文本尤其涉及在动物中治疗胃肠功能障碍的方法，所述方法包括施用本文所述的寡糖制剂。
163.本文提供了在动物中治疗胃肠屏障功能障碍的方法，所述方法包括：向患有胃肠屏障功能障碍的动物施用包含基础营养组合物和合成寡糖制剂的营养组合物，其中所述合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于2的整数；其中每种级分包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。
164.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的胃肠屏障的通透性更低。
165.在一些实施方案中，所述方法包括所述胃肠屏障功能障碍是通透性过高(肠漏症)。在一些实施方案中，胃肠屏障的通透性允许肠内容物(例如，食物颗粒、微生物、毒素)从管腔内空间易位到所述动物的循环中。在一些实施方案中，与在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小至少约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或30％。在一些实施方案中，与在施用包含合成寡糖制剂的所述营养组合物之前所述动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％
‑
40％、0.5％
‑
30％、0.5％
‑
20％、0.5％
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10％、0.5％
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5％、0.5％
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1％、1％
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40％、1％
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30％、1％
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20％、1％
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10％、1％
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5％、1％
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2％、5％
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40％、5％
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30％、5％
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20％、5％
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10％、10％
‑
40％、10％
‑
30％或10％
‑
20％。
166.在一些实施方案中，胃肠通透性的所述降低由所述合成寡糖制剂直接介导。在一些实施方案中，胃肠通透性的所述降低由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂在体内被加工成一种或多种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂被所述动物的胃肠微生物群的组分加工。在一些实施方案中，所述组分是胃肠细菌。在一些实施方案中，胃肠通透性的所述降低由所述次级物质中的一种或多种直接介导。
167.在一些实施方案中，所述胃肠屏障功能障碍的一种或多种症状得到改善。在一些实施方案中，所述一种或多种症状是粘液合成减少、粘蛋白合成减少、粘液分泌减少、粘蛋白分泌减少、营养物吸收减少、炎症增加、对感染的抗性降低、肠上皮细胞增殖减少、肠上皮细胞成熟减少、营养不良、增重减少、饲料转化率增加、饲料效率降低、死亡率增加。
168.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的体重，所述动物具有更高的体重。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的饲料效率，所述动物具有更高的饲料效率。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的饲料转化率，所述动物具有更低的饲料转化率。
169.在一些实施方案中，所述动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。在一些实施方案
中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡(例如肉鸡、蛋鸡、种鸡)、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述动物是猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)。
170.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
171.本文提供了治疗感染的方法，所述方法包括向所述动物施用包含基础营养组合物和合成寡糖制剂的营养组合物，其中所述合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于2的整数；其中每种级分包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。
172.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种类型的免疫细胞的水平更高。
173.在一些实施方案中，所述免疫细胞是吞噬细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是粒细胞。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中粒细胞吞噬作用的水平更高。在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞活性的水平由所述合成寡糖制剂直接介导。
174.在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞活性的水平由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂在体内被加工成一种或多种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂被所述动物的胃肠微生物群的组分加工。在一些实施方案中，所述组分是胃肠细菌。在一些实施方案中，粘液水平的所述增加由所述次级物质中的一种或多种直接介导。
175.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种促炎细胞因子或趋化因子的水平更高。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种抗炎细胞因子或趋化因子的水平更低。
176.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的胃肠屏障的通透性更低。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中粘液的水平更高。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中杯状细胞的水平更高。
177.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的体重，所述动物具有更高的体重。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的饲料效率，所述动物具有更高的饲料效率。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的饲料转化率，所述动物具有更低的饲料转化率。
178.在一些实施方案中，所述动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡(例如肉鸡、蛋鸡、种鸡)、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述动物是猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)。
179.在一些实施方案中，所述营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，所述基础营养组合物是基础动物饲料。
180.本文提供了增强或诱导免疫反应的方法，所述方法包括：向所述动物施用包含基础营养组合物和合成寡糖制剂的营养组合物，其中所述合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于2的整数；其中每种级分包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。
181.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种类型的免疫细胞的水平更高。
182.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种类型的免疫细胞的水平更高。
183.在一些实施方案中，所述免疫细胞是吞噬细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是粒细胞。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中粒细胞吞噬作用的水平更高。在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞活性的水平由所述合成寡糖制剂直接介导。
184.在一些实施方案中，免疫细胞或免疫细胞活性的水平由所述合成寡糖制剂间接介导。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂在体内被加工成一种或多种次级物质。在一些实施方案中，所述合成寡糖制剂被所述动物的胃肠微生物群的组分加工。在一些实施方案中，所述组分是胃肠细菌。在一些实施方案中，粘液水平的所述增加由所述次级物质中的一种或多种直接介导。
185.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种促炎细胞因子或趋化因子的水平更高。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中一种或多种抗炎细胞因子或趋化因子的水平更低。
186.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠屏障的通透性，所述动物的胃肠屏障的通透性更低。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中粘液的水平更高。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的胃肠道中的水平，所述动物的胃肠道中杯状细胞的水平更高。
187.在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的体重，所述动物具有更高的体重。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的饲料效率，所述动物具有更高的饲料效率。在一些实施方案中，相对于在施用包含所述合成寡糖制剂的营养组合物之前所述动物的饲料转化率，所述动物具有更低的饲料转化率。
188.在一些实施方案中，所述动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。在一些实施方案中，所述动物是家禽。在一些实施方案中，所述动物是鸡(例如肉鸡、蛋鸡、种鸡)、火鸡、鸭或鹅。在一些实施方案中，所述动物是猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)。
189.根据以下具体实施方式，本公开文本的另外的方面和优点对于本领域技术人员将容易地变得清楚，在以下具体实施方式中仅示出和描述了本公开文本的说明性实施方案。如将会理解的，本公开文本能够有其他的和不同的实施方案，并且其若干细节能够在各个明显的方面进行修改，这些都不背离本公开文本。相应地，附图和说明书应当被看作是说明性质的，而不是限制性的。通过引用并入
190.本说明书中所提到的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本文，并入程度如同指示每个单独出版物、专利或专利申请明确且单独地通过引用并入一般。就通过引用并入的出版物和专利或专利申请与本说明书中包含的公开文本相矛盾而言，本说明书旨在取代和/或优先于任何这种矛盾的材料。
附图说明
191.本发明的新颖特征在随附权利要求中具体阐述。将通过参考阐述了利用本发明原理的说明性实施方案的以下具体实施方式和附图(在本文中也称为“图(figure)”和“图(fig.)”)获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在所述附图中：
192.图1展示了实施例9.7的寡糖制剂的1h、
13
c
‑
hsqc nmr谱的一部分。
193.图2展示了来自实施例9.7的寡糖制剂的maldi
‑
ms谱，其证明了脱水亚基的存在。
194.图3展示了从实施例9的寡糖离析的脱水dp1级分的1d 1
h
‑
质子nmr谱。
195.图4展示了从实施例9的寡糖离析的脱水dp1级分的1d apt
13
c
‑
nmr谱。
196.图5展示了gc
‑
ms色谱图(tic和xic(m/z 229)图)，其示出了衍生化后寡糖制剂2.9的dp2和脱水dp2组分。
197.图6展示了具有焦糖化脱水亚基的寡糖制剂的1h、
13
c
‑
hsqc谱。
198.图7展示了在不同激光能量下比较来自实施例9的寡糖制剂的maldi
‑
ms谱的一部分。
199.图8a展示了对水中的寡糖制剂的脱水dp2种类(浓度为1
‑
80μg/ml)的lc
‑
ms/ms检测。图8b示出了由图8a的lc
‑
ms/ms检测产生的线性校准曲线。
200.图9展示了对各种对照和经处理的饮食组合物的脱水dp2含量的定量。
201.图10展示了含脱水亚基葡萄糖寡糖样品的2d
‑
1h jres nmr谱。
202.图11是含脱水亚基葡萄糖寡糖样品的代表性1h、
13
c
‑
hsqc nmr谱，其具有用于键联分布的相关共振和分配。
203.图12展示了三种含脱水亚基寡糖的1h dosy谱的叠加。
204.图13展示了1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖(dp1
‑
18)、1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
纤维二糖(dp2
‑
18)和含脱水亚基寡糖样品的比较。
205.图14展示了在选定的多反应监测(mrm)下含脱水亚基寡糖(顶部)和经消化的含脱水亚基寡糖(底部)的质量色谱图。
206.图15示出了实施例9的寡糖的相对丰度对聚合度(dp)的图。所述图显示寡糖制剂具有单调递减的dp分布。
207.图16示出了实施例9的寡糖的相对丰度对聚合度的图。所述图显示寡糖制剂具有非单调递减的dp分布。
208.图17示出了健康的胃肠屏障和渗漏的胃肠屏障的图形描绘。
209.图18示出了用于评价健康的肠道屏障完整性的装置的图形描绘。
210.图19是示出了具有和不具有摄入病原体的粒细胞的流式细胞图。
211.图20是示出了对于选定基因，派尔斑(peyer patch)组织中免疫和炎性细胞因子和趋化因子表达的倍数变化的图，其具有至少1.5倍的表达增加。
212.图21示出了用于体外评价寡糖制剂对由于鼠李糖脂顶端应激源而破坏的肠道屏障功能的直接和间接影响的室。
213.图22是条形图，其示出了与对照饮食(空心条)相比，在被饲喂含有500ppm的实施例9.3的寡糖的饮食(实心条)的鸟中il1b、il4、il10和slc5a10的表达的倍数变化。数据示出了被饲喂实施例9.3的寡糖的鸟的与免疫、抗炎反应和营养物吸收相关联的增加的基因表达。
214.图23是示出了如表26中详述的处理组a
‑
b中slc34a2的相对基因表达的条形图。数据证明，来自实施例9.2和9.3的寡糖导致磷的回肠吸收改善，如通过增加的slc34a2基因表达分析所表明的。
215.图24是来自处理组b和处理组d(如表26中所定义的组)中的鸟的回肠组织的显微镜图像。回肠组织学揭示，在被饲喂含有实施例9.2的寡糖的饮食的肉鸡中炎症损伤明显更少并且绒毛长度改善。
216.图25是示出了处理组a、b和d(如表26中所定义)中杯状细胞的百分比的条形图。数据显示，寡糖增加了遭受炎症攻击的肉鸡(b组)中的杯状细胞计数。
217.图26是示出了来自处理组a、b、c和d(如表26中所定义)中的鸟的淋巴细胞的百分比的条形图。数据显示，当遭受急性炎症攻击时，用实施例9的选定寡糖处理的肉鸡促进t辅助细胞增加(作为占总淋巴细胞的百分比来测量)。
218.图27a是来自被饲喂含有实施例9.3的寡糖的饮食的肉鸡的肝组织的显微镜图像，其具有健康的肝组织(左)和表现出炎性损伤的组织(右)。图27b示出了来自在处理组a、b或c(如表26中所定义)中饲喂的肉鸡的肝脏样品的组织学损伤评分的条形图。数据显示，处理组c(含有实施例9.3的寡糖的饲料)提供减少的肝损伤。图27c示出了处理组a、b和c(如表26中所定义)中的肉鸡中的apg水平。数据显示，当遭受炎症攻击时急性期肝蛋白agp降低。
219.图28a是示出了在第21天来自处理组a、b和d中的肉鸡的血液样品中的iga水平的条形图。数据显示，处理组d中的肉鸡在第21天表现出加速的免疫反应。图28b是示出了在第28天来自处理组a、b和d中的肉鸡的血液样品中的iga水平的条形图。数据显示，当在第14天遭受急性炎症攻击时，肉鸡表现出向对照组a基线的更快恢复(第28天)。
220.图29a是示出了在第21天来自处理组a、b和d中的肉鸡的血液样品中的二胺氧化酶水平的条形图。数据显示，当在第14天遭受急性炎症攻击时，与未被饲喂寡糖的鸟相比，肉鸡表现出向对照组a基线的更快恢复。图29b是示出了在第28天来自处理组a、b和d中的肉鸡的血液样品中的水平的条形图。数据显示，当在第14天遭受急性炎症攻击时，与未被饲喂寡糖的鸟相比，肉鸡表现出向对照组a基线的更快恢复。
221.图30展示了两种dp1含脱水亚基寡糖和一种dp2含脱水亚基寡糖。
222.图31展示了含脱水亚基寡糖(聚纤维三糖(cellotriosan))。
223.图32a展示了来自实施例2的寡糖制剂的maldi
‑
ms谱，其证明了脱水亚基的存在。
图32b展示了来自实施例2的寡糖制剂的maldi
‑
ms谱，其证明了脱水亚基的存在。
224.图33a展示了对实施例1的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图33b展示了对实施例1的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图33c展示了对实施例1的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。
225.图34a展示了对实施例3的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图34b展示了对实施例3的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图34c展示了对实施例3的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。
226.图35a展示了对实施例4的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图35b展示了对实施例4的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图35c展示了对实施例4的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。
227.图36a展示了对实施例7的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图36b展示了对实施例7的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。图36c展示了对实施例7的寡糖制剂的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的lc
‑
ms/ms检测。
228.图37a展示了对实施例1的寡糖制剂的dp1、脱水dp1、dp2和脱水dp2级分的gc
‑
ms谱检测。图37b展示了如图37a所示的dp2和脱水dp2级分的放大图。
229.图38a展示了对实施例3的寡糖制剂的dp1、脱水dp1、dp2和脱水dp2级分的gc
‑
ms谱检测。图38b展示了如图38a所示的dp2和脱水dp2级分的放大图。
230.图39a展示了对实施例4的寡糖制剂的dp1、脱水dp1、dp2和脱水dp2级分的gc
‑
ms谱检测。图39b展示了如图39a所示的dp2和脱水dp2级分的放大图。
231.图40a展示了对实施例7的寡糖制剂的dp1、脱水dp1、dp2和脱水dp2级分的gc
‑
ms谱检测。图40b展示了如图40a所示的dp2和脱水dp2级分的放大图。
232.图41展示了与根据实施例2的寡糖制剂相比，反应温度、水含量和反应时间对寡糖制剂中dp2含脱水亚基寡糖含量的影响。
233.图42展示了1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的nmr分配。
234.图43展示了在不同激光能量下比较来自实施例9的寡糖制剂的maldi
‑
ms谱。
具体实施方式
235.以下描述和实施例详细地说明了本公开文本的实施方案。应当理解，本公开文本不限于本文所述的特定实施方案，因为这些可以变化。本领域技术人员将认识到，存在本公开文本的许多实施方案和修改，其涵盖在本公开文本的范围内。
236.所有术语都旨在被理解为它们将被本领域技术人员理解。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本公开文本所涉及领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。
237.本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应当被解释为限制所描述的主题。
238.尽管本公开文本的各种特征可以在单个实施方案的上下文中描述，但所述特征也可以单独提供或以任何合适的组合提供。反过来，尽管为了清楚起见，本文可以在单独的实施方案的上下文中描述本公开文本，但本公开文本也可以在单个实施方案中实施。
239.以下定义补充了本领域中的定义，并且针对本技术，而不应当归于任何相关或不相关的情况，例如任何共同拥有的专利或申请。尽管在用于测试本公开文本的实践中可以
使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但本文描述了优选的材料和方法。因此，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不旨在是限制性的。i.定义
240.本文使用的术语仅用于描述特定情况的目的，而不旨在是限制性的。除非上下文另有明确指示，否则如本文所用，单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述(the)”旨在也包括复数形式。此外，就在具体实施方式和/或权利要求中使用术语“包括(including)”、“包括(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变体而言，此类术语旨在以与术语“包含(comprising)”相似的方式是包含性的。
241.应当理解，诸如“包含(comprises)”、“包含(comprised)”、“包含(comprising)”等术语具有美国专利法中归于其的含义；即，它们意指“包括(includes)”、“包括(included)”、“包括(including)”等，并且旨在是包含性的或开放式的，并且不排除另外的未叙述的元素或方法步骤；并且诸如“基本上由
……
组成(consisting essentially of)”和“基本上由
……
组成(consists essentially of)”等术语具有美国专利法中归于其的含义；即，它们允许未明确叙述的元素，但是排除了现有技术中发现的或影响本发明的基本或新颖特征的元素。
242.如在本文中以诸如“a和/或b”等短语使用的术语“和/或”旨在包括a和b两者；a或b；a(单独)；以及b(单独)。同样地，如以诸如“a、b和/或c”等短语使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方案中的每一个：a、b和c；a、b或c；a或b；a或c；b或c；a和b；a和c；b和c；a(单独)；b(单独)；以及c(单独)。
243.当本文针对物理特性(如分子量)或化学特性(如化学式)使用范围时，旨在包括范围的所有组合和子组合以及其中的具体实施方案。当提及数字或数值范围时，术语“约”意指所提及的数字或数值范围是在实验变异内(或在统计实验误差内)的近似值，并且因此，所述数字或数值范围在一些情况下将在所陈述的数字或数值范围的1％与15％之间变化。在一些实施方案中，术语“约”意指在给定值或范围的15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％或0.05％内。
244.如本文所用，术语“施用”包括向动物提供本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物，使得动物可以摄取合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物。在此类实施方案中，动物摄取合成寡糖制剂、营养组合物或动物饲料组合物的某一部分。在一些实施方案中，向所述动物提供合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物，使得所述动物可以随意摄取合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物。在一些实施方案中，将合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物作为规定饮食施用给所述动物。在一些实施方案中，将合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物经由人工饲喂(例如，口服注射器饲喂、管饲喂等)施用给所述动物。在一些实施方案中，将合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物例如随意或人工地口服施用给所述动物。在一些实施方案中，动物在每24小时的时间中或每隔24小时的时间中摄取合成寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物的某一部分，持续至少7天、14天、21天、30天、45天、60天、75天、90天或120天。在一些实施方案中，可以将寡糖制剂溶解于水或其他液体中，并且动物通过饮用液体来摄取寡糖制剂的某一部分。在一些实施方案中，将寡糖经由其饮用水提供给动物。在一些实施方案中，寡糖制剂、营养组合物、液体或动物饲料组合物是随意消耗的。
245.如本文所用，术语“饲料转化率(fcr)”是指饲料质量输入(例如由动物消耗的)与动物输出的比率，其中动物输出是目标动物产品。例如，乳畜的动物输出是奶，而为肉而饲养的动物的动物输出是体重。
246.如本文所用，“饲料效率”是指动物输出与饲料质量输入(例如由动物消耗的)的比率，其中动物输出是目标动物产品。
247.如本文所用，术语“脱水亚基”是指单糖(或单糖亚基)的热脱水产物或糖焦糖化产物。例如，“脱水亚基”可以是脱水单糖，如脱水葡萄糖。作为另一个例子，“脱水亚基”可以经由糖苷键联与一个或多个常规或脱水单糖亚基连接。
248.术语“寡糖”是指单糖或含有通过糖苷键连接的两个或更多个单糖亚基的化合物。因此，寡糖包括常规单糖；脱水单糖；或含有两个或更多个单糖亚基的化合物，其中一个或多个单糖亚基任选地独立地被一个或多个脱水亚基替换。寡糖可以被官能化。如本文所用，术语寡糖涵盖寡糖的所有种类，其中寡糖中单糖亚基中的每一个独立地且任选地被官能化和/或被其相应的脱水单糖亚基替换。
249.如本文所用，术语“寡糖制剂”是指包含至少一种寡糖的制剂。
250.如本文所用，术语“葡萄糖寡糖”是指葡萄糖或含有通过糖苷键连接的两个或更多个葡萄糖单糖亚基的化合物。因此，葡萄糖寡糖包括葡萄糖；脱水葡萄糖；或含有通过糖苷键连接的两个或更多个葡萄糖单糖亚基的化合物，其中所述葡萄糖单糖亚基中的一个或多个各自任选地且独立地被脱水葡萄糖亚基替换。
251.如本文所用，术语“半乳糖寡糖”是指半乳糖或含有通过糖苷键连接的两个或更多个半乳糖单糖亚基的化合物。因此，半乳糖寡糖包括半乳糖；脱水半乳糖；或含有通过糖苷键连接的两个或更多个半乳糖单糖亚基的化合物，其中至少一个单糖亚基任选地被脱水半乳糖亚基替换。
252.如本文所用，术语“葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂”是指由葡萄糖和半乳糖的完全或不完全糖缩合反应产生的组合物。因此，在一些实施方案中，葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂包含葡萄糖寡糖、半乳糖寡糖、含有通过糖苷键连接的一个或多个葡萄糖单糖亚基和一个或多个半乳糖单糖亚基的化合物或其组合。在一些实施方案中，葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂包含葡萄糖寡糖和含有通过糖苷键连接的一个或多个葡萄糖单糖亚基和一个或多个半乳糖单糖亚基的化合物。在一些实施方案中，葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂包含半乳糖寡糖和含有通过糖苷键连接的一个或多个葡萄糖单糖亚基和一个或多个半乳糖单糖亚基的化合物。在一些实施方案中，葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂包含含有通过糖苷键连接的一个或多个葡萄糖单糖亚基和一个或多个半乳糖单糖亚基的化合物。
253.如本文所用，术语“单糖单元”和“单糖亚基”可互换地使用。“单糖亚基”是指寡糖中的单糖单体。对于具有1的聚合度的寡糖，寡糖可以被称为单糖亚基或单糖。对于具有2或更高的聚合度的寡糖，其单糖亚基经由糖苷键连接。
254.如本文所用，术语“常规单糖”是指不含脱水亚基的单糖。术语“常规二糖”是指不含脱水亚基的二糖。因此，术语“常规亚基”是指不是脱水亚基的亚基。
255.如本文所用，术语“相对丰度”或“丰度”是指就种类存在的常见或稀有程度而言的种类的丰度。例如，包含按相对丰度计10％的含脱水亚基寡糖的dp1级分可以是指多种dp1寡糖，其中10％的dp1寡糖是脱水单糖。可以通过合适的分析仪器(例如，质谱法和液相色谱
法，如lc
‑
ms/ms、gc
‑
ms、hplc
‑
ms和maldi
‑
ms)来测定例如寡糖的某种dp级分的相对丰度。在一些实施方案中，相对丰度通过对对应于目的级分的色谱(例如，lc
‑
ms/ms、gc
‑
ms和hplc
‑
ms)的峰下面积进行积分来测定。在一些实施方案中，相对丰度通过峰强度(例如，maldi
‑
ms)来测定。在一些实施方案中，相对丰度通过分析方法的组合(如在通过液相色谱法分离后进行重量测定)来测定。
256.如本文所用，术语“脱水dpn寡糖”、“脱水dpn种类”或“dpn含脱水亚基寡糖”是指具有n的聚合度并且包含一个或多个脱水亚基的寡糖。因此，脱水葡萄糖是dp1含脱水亚基寡糖，并且聚纤维三糖是dp3含脱水亚基寡糖。
257.除非上下文另有明确规定，否则如本文所用，单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述(the)”包括复数指示物。因此，例如，提及“一种试剂”包括多种此类试剂，并且提及“所述寡糖”包括提及一种或多种寡糖(或多种寡糖)及其本领域技术人员已知的等效物，等等。ii.寡糖制剂
258.本文公开了适用于营养组合物的寡糖制剂。在一些实施方案中，所述寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)，其中n是大于或等于2的整数。在一些实施方案中，n是大于2的整数。在一些实施方案中，寡糖制剂中1至n级分中的每一种包含如通过质谱法测量的按相对丰度计1％至90％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，每种级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。
259.在一些实施方案中，n是大于或等于3的整数。在一些实施方案中，n是1至100范围内的整数，如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40或50。在一些实施方案中，寡糖制剂中1至n级分中的每一种独立地包含如通过质谱法或通过lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms测量的按相对丰度计0.1％至90％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂中1至n级分中的每一种独立地包含约0.1％至约15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂中1至n级分中的每一种独立地包含约0.5％至约15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，dp1和dp2级分各自独立地包含如通过质谱法(如maldi
‑
ms)或通过lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms测量的按相对丰度计约0.1％至约15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，dp1和dp2级分各自独立地包含约0.5％至约15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，dp1和dp2级分各自独立地包含如通过质谱法lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms测量的按相对丰度计约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.8％、1％、2％或3％至约8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，每种级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。
260.在一些实施方案中，寡糖制剂是合成寡糖制剂。在一些实施方案中，合成寡糖制剂是指通过不需要活生物体的方法产生的多种寡糖。在一些实施方案中，合成寡糖制剂是指通过不需要酶的方法产生的多种寡糖。在一些实施方案中，合成寡糖制剂是指通过化学方法产生的多种寡糖。在某些实施方案中，合成寡糖制剂是指通过糖的缩合产生的多种寡糖。a.寡糖的益生元效用
261.本文公开了包含脱水糖组分和/或糖脱水产物组分的寡糖制剂，所述寡糖制剂表现出对微生物群落(如动物肠道微生物组)的复杂功能调节。寡糖制剂提供了调节微生物区系对可发酵碳的利用的效用，并将代谢通量引导到有益物质，从而提供微生物组介导的健
康或营养益处。
262.难消化的碳水化合物可以通过向微生物群落提供可发酵碳源而充当益生元。例如，已经鉴定了富含可溶性植物纤维的饮食的滋养肠道微生物区系的能力。另外，双歧生成性益生元支持双歧杆菌(例如，双歧杆菌属(bifidobacterium)的成员)的生长，而乳生成性益生元支持乳杆菌属(lactobacillus)物种的生长。
263.益生元纤维可以发酵成有益的化学物质，如短链脂肪酸(scfa)。益生元纤维包括：抗性淀粉；纤维素；果胶，如鼠李半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯聚糖；半纤维素，如阿拉伯木聚糖、木葡聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖；木聚糖，如玉米芯寡糖；b
‑
葡聚糖，如谷物b
‑
葡聚糖、酵母b
‑
葡聚糖、细菌b
‑
葡聚糖；多聚果糖，如菊粉和果聚糖；和树胶，如藻酸盐。菊粉是一种常见的双歧生成性益生元纤维。
264.在其他情况下，益生元通过经由抗粘附机制(如细胞表面受体位点的竞争性结合)阻碍病原性细菌移入，从而感染宿主生物体的能力起作用。某些半乳糖寡糖提供对各种肠病原性生物体(如埃希氏菌属物种)的有效抗粘附。
265.益生元通常通过掺入饮食中来提供给宿主动物，在掺入饮食中后它们表现出剂量依赖性反应(至少至饱和阈值)。例如，提供更高剂量的双歧生成性益生元(如菊粉)往往提供双歧杆菌属物种群体的更大增加。更高剂量的菊粉对应于通过发酵对scfa的更高产生。这是因为益生元提供了代谢碳源，并且更多的碳转化为更多的发酵产品。类似地，提供更高剂量的抗粘附性益生元提供竞争性结合表面受体位点的可能性。
266.某些包含经修饰的单体亚基的碳水化合物种类可能影响微生物系统利用其他碳水化合物(其原本可作为益生元来源由所述微生物系统使用)的方式。例如，此类碳水化合物种类可以是调节细菌淀粉利用系统(sus)，即负责细胞表面识别、糖苷裂解和淀粉代谢物输入的蛋白质的经修饰的碳水化合物种类。
267.能够复杂调节动物微生物群的碳水化合物组合物具有作为经由其对动物微生物组的影响来改善动物健康和营养的饲料添加剂的效用。例如，对肠道微生物区系的丁酸产生的调节通过促进健康的肠道粘膜、屏障功能和经由抗炎作用来赋予动物健康益处。对丙酸产生的调节经由增加的糖异生影响从动物饮食中提取的代谢能。相关微生物群落包括例如家禽、猪、狗、猫、马中的回肠、空肠和盲肠和/或粪便微生物群，或家牛、母牛、绵羊的反刍微生物群，等等。其他微生物群落包括皮肤微生物区系、鼻微生物区系等。
268.此外，本文公开的寡糖制剂是有利的，因为由于脱水亚基的存在，它们可以在复杂的营养组合物(如完全动物饲料)中进行选择性分析和定量。它具有用于测定饲料添加剂(如寡糖制剂)的存在和/或浓度的商业效用。可以出于品质控制的目的进行这种测定，以确定添加剂是否与基础营养组合物一致地共混以提供包含预期剂量或包含水平的添加剂的最终营养组合物。
269.然而，营养组合物本身包含大量且多种多样的碳水化合物结构(例如，淀粉、植物纤维和果胶)。因此，将少量的基于寡糖的饲料添加剂与作为营养组合物的基础存在的浩瀚的其他碳水化合物区分开是特别具有挑战性的。因此，本文公开的寡糖制剂提供了通过脱水亚基将其自身与营养组合物中的其他碳水化合物来源区分开的手段。b.聚合度(dp)分布
270.在一些实施方案中，寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡
糖级分(dp1至dpn级分)。在一些实施方案中，寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的n种寡糖级分(dp1至dpn级分)。例如，在一些实施方案中，dp1级分包含一种或多种单糖和/或一种或多种脱水单糖。作为另一个例子，在一些实施方案中，dp1级分包含葡萄糖、半乳糖、果糖、1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖、1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖或其任何组合。作为又另一个例子，在一些实施方案中，dp2级分包含一种或多种常规二糖和一种或多种含脱水亚基二糖。在一些实施方案中，dp2级分包含乳糖。
271.在一些实施方案中，n是至少2、至少3、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、至少23、至少24、至少25、至少26、至少27、至少28、至少29、至少30、至少31、至少32、至少33、至少34、至少35、至少36、至少37、至少38、至少39、至少40、至少41、至少42、至少43、至少44、至少45、至少46、至少47、至少48、至少49、至少50、至少51、至少52、至少53、至少54、至少55、至少56、至少57、至少58、至少59、至少60、至少61、至少62、至少63、至少64、至少65、至少66、至少67、至少68、至少69、至少70、至少71、至少72、至少73、至少74、至少75、至少76、至少77、至少78、至少79、至少80、至少81、至少82、至少83、至少84、至少85、至少86、至少87、至少88、至少89、至少90、至少91、至少92、至少93、至少94、至少95、至少96、至少97、至少98、至少99或至少100。在一些实施方案中，n是2、3、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100。在一些实施方案中，n小于10、小于11、小于12、小于13、小于14、小于15、小于16、小于17、小于18、小于19、小于20、小于21、小于22、小于23、小于24、小于25、小于26、小于27、小于28、小于29、小于30、小于31、小于32、小于33、小于34、小于35、小于36、小于37、小于38、小于39、小于40、小于41、小于42、小于43、小于44、小于45、小于46、小于47、小于48、小于49、小于50、小于51、小于52、小于53、小于54、小于55、小于56、小于57、小于58、小于59、小于60、小于61、小于62、小于63、小于64、小于65、小于66、小于67、小于68、小于69、小于70、小于71、小于72、小于73、小于74、小于75、小于76、小于77、小于78、小于79、小于80、小于81、小于82、小于83、小于84、小于85、小于86、小于87、小于88、小于89、小于90、小于91、小于92、小于93、小于94、小于95、小于96、小于97、小于98、小于99或小于100。在一些实施方案中，n是2至100、5至90、10至90、10至80、10至70、10至60、10至50、10至40、10至30、15至60、15至50、15至45、15至40、15至35或15至30。
272.寡糖制剂的聚合度的分布可以通过任何合适的分析方法和仪器来测定，所述分析方法和仪器包括但不限于端基法、渗透压(渗透压测定法)、超速离心、粘度测量、光散射法、尺寸排阻色谱法(sec)、sec
‑
malls、场流分级法(fff)、非对称流场流分级法(a4f)、高效液相色谱法(hplc)和质谱法(ms)。例如，聚合度的分布可以通过质谱法(如基质辅助激光解吸/电离(maldi)
‑
ms、液相色谱法(lc)
‑
ms或气相色谱法(gc)
‑
ms)来测定和/或检测。对于另一个例子，聚合度的分布可以通过sec(如凝胶渗透色谱法(gpc))来测定和/或检测。作为又另一个例子，聚合度的分布可以通过hplc、fff或a4f来测定和/或检测。在一些实施方案中，聚合度的分布通过maldi
‑
ms来测定和/或检测。在一些实施方案中，聚合度的分布通过gc
‑
ms或lc
‑
ms来测定和/或检测。在一些实施方案中，聚合度的分布通过sec来测定和/或检测。
在一些实施方案中，聚合度的分布通过hplc来测定和/或检测。在一些实施方案中，聚合度的分布通过分析仪器(如maldi
‑
ms和sec)的组合来测定和/或检测。在一些实施方案中，寡糖制剂的聚合度可以基于其分子量和分子量分布来测定。例如，图2示出了maldi
‑
ms谱，其展示了各种级分的聚合度以及在所有观察到的级分中含脱水亚基寡糖(
‑
18g/mol mw偏移峰)的存在。
273.在一些实施方案中，大多数的级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，寡糖制剂的少于6、少于5、少于4、少于3或少于2种级分的寡糖的相对丰度不随其聚合度单调降低。
274.在一些实施方案中，至少5、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少50种dp级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，至少5、至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少50种连续dp级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，至少5、至少10、至少20或至少30种dp级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，至少5、至少10、至少20或至少30种连续dp级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。
275.在一些实施方案中，n种级分中的每一种中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。例如，图15提供了dp分布的例子，其中n种级分中的每一种中寡糖的相对丰度随其dp单调降低。例如，在一些实施方案中，只有dp3级分中寡糖的相对丰度不随其聚合度单调降低，即dp3级分中寡糖的相对丰度低于dp4级分中寡糖的相对丰度。在一些实施方案中，dp2级分中寡糖的相对丰度低于dp3级分中寡糖的相对丰度。例如，图16展示了聚合度分布，其中dp2级分中寡糖的相对丰度不随其聚合度单调降低。
276.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约1％至约50％、约1％至约40％、约1％至约35％、约1％至约30％、约1％至约25％、约1％至约20％、约1％至约15％、约5％至约50％、约5％至约40％、约5％至约35％、约5％至约30％、约5％至约25％、约5％至约20％、约5％至约15％、约10％至约50％、约10％至约40％、约10％至约35％、约10％至约30％、约10％至约25％、约10％至约20％或约10％至约15％的dp1级分含量。在一些实施方案中，寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约10％至约35％、约10％至约20％或约10％至约15％的dp1级分含量。在一些实施方案中，dp1级分的含量通过maldi
‑
ms来测定。在一些实施方案中，dp1级分的含量通过hplc来测定。在一些实施方案中，dp1级分的含量通过lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms来测定。
277.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约1％至约35％、约1％至约30％、约1％至约25％、约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约5％至约30％、约5％至约25％、约5％至约20％、约5％至约15％或约5％至约10％的dp2级分含量。在一些实施方案中，寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约5％至约25％、约5％至约20％、约5％至约15％或约5％至约10％的dp2级分含量。在一些实施方案中，dp2级分的含量通过maldi
‑
ms来测定。在一些实施方案中，dp2级分的含量通过hplc来测定。在一些实施方案中，dp2级分的含量通过lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms来测定。
278.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约1％至约30％、约1％至约25％、约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约5％至约30％、约5％至约25％、约5％至约20％、约5％至约15％或约5％至约10％的dp3级分含量。在一些
实施方案中，寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约1％至约15％、约1％至约10％、约5％至约15％或约5％至约10％的dp3级分含量。在一些实施方案中，dp3级分的含量通过maldi
‑
ms来测定。在一些实施方案中，dp3级分的含量通过hplc来测定。在一些实施方案中，dp3级分的含量通过lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms来测定。
279.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约0.1％至约20％、约0.1％至约15％、约0.1％至约10％、约0.1％至约5％、约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％或约1％至约5％的dp4级分含量。在一些实施方案中，寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约1％至约15％、约1％至约10％或约1％至约5％的dp4级分含量。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约0.1％至约15％、约0.1％至约10％、约0.1％至约5％、约1％至约15％、约1％至约10％或约1％至约5％的dp5级分含量。在一些实施方案中，寡糖制剂具有按重量计或按相对丰度计约1％至约10％或约1％至约5％的dp5级分含量。在一些实施方案中，dp4和/或dp5级分的含量通过maldi
‑
ms来测定。在一些实施方案中，dp4和/或dp5级分的含量通过hplc来测定。在一些实施方案中，dp4和/或dp5级分的含量通过lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms来测定。
280.在一些实施方案中，寡糖制剂中dp2级分与dp1级分的比率按其重量或相对丰度计是约0.01至约0.8、约0.02至约0.7、约0.02至约0.6、约0.02至约0.5、约0.02至约0.4、约0.02至约0.3、约0.02至约0.2、约0.1至约0.6、约0.1至约0.5、约0.1至约0.4或约0.1至约0.3。在一些实施方案中，寡糖制剂中dp2级分与dp1级分的比率按其重量或相对丰度计是约0.02至约0.4。
281.在一些实施方案中，寡糖制剂中dp3级分与dp2级分的比率按其重量或相对丰度计是约0.01至约0.7、约0.01至约0.6、约0.01至约0.5、约0.01至约0.4、约0.01至约0.3或约0.01至约0.2。在一些实施方案中，寡糖制剂中dp3级分与dp2级分的比率按其重量或相对丰度计是约0.01至约0.3。
282.在一些实施方案中，寡糖制剂中dp1和dp2级分的合计含量按重量计或按相对丰度计少于70％、少于60％、少于50％、少于40％、少于30％、少于20％或少于10％。在一些实施方案中，寡糖制剂中dp1和dp2级分的合计含量按重量计或按相对丰度计少于50％、少于30％或少于10％。
283.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有在2至10范围内的平均dp值。在一些实施方案中，寡糖制剂具有约2至约8、约2至约5或约2至约4的平均dp值。在一些实施方案中，寡糖制剂具有约3.5的平均dp值。平均dp值可以通过sec或通过元素分析来测定。c.脱水亚基水平
284.在一些实施方案中，n种寡糖级分中的每一种独立地包含脱水亚基水平。例如，在一些实施方案中，dp1级分包含按相对丰度计10％的含脱水亚基寡糖，并且dp2级分包含按相对丰度计15％的含脱水亚基寡糖。对于另一个例子，在一些实施方案中，dp1、dp2和dp3级分各自分别包含按相对丰度计5％、10％和2％的含脱水亚基寡糖。在其他实施方案中，两种或更多种寡糖级分可以包含类似水平的含脱水亚基寡糖。例如，在一些实施方案中，dp1和dp3级分各自包含按相对丰度计约5％的含脱水亚基寡糖。
285.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂中1至n级分中的每一种独立地包含如通过质谱法lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms测量的按相对丰度计约0.1％至15％的含脱水亚基寡糖。在一些
实施方案中，寡糖制剂中1至n级分中的每一种独立地包含如通过质谱法lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms测量的按相对丰度计约0.5％至15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，使用lc
‑
ms/ms来测定dp1、dp2和/或dp3级分中寡糖的相对丰度。在一些实施方案中，使用gc
‑
ms来测定dp1、dp2和/或dp3级分中寡糖的相对丰度。在一些实施方案中，使用maldi
‑
ms来测定dp4级分中或更高dp级分中寡糖的相对丰度。在一些实施方案中，某种级分的相对丰度通过对被指定为对应于该级分的lc
‑
ms/ms色谱图的峰下面积进行积分来测定。在一些实施方案中，某种级分的相对丰度通过对被指定为对应于该级分的gc
‑
ms色谱图的峰下面积进行积分来测定。
286.脱水亚基的水平可以通过任何合适的分析方法(如核磁共振(nmr)波谱法、质谱法、hplc、fff、a4f或其任何组合)来测定。在一些实施方案中，脱水亚基的水平至少部分地通过质谱法(如maldi
‑
ms)来测定。在一些实施方案中，脱水亚基的水平至少部分地通过nmr来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的水平至少部分地通过hplc来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的水平通过maldi
‑
ms来测定，如通过图2中的
‑
18g/mol mw偏移峰所展示。在一些实施方案中，脱水亚基的存在和种类类型可以通过nmr来测定和/或检测，如实施例11、图3和图4所展示。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过maldi
‑
ms来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过lc
‑
ms/ms来测定，如图33a至图33c、图34a至图34c、图35a至图35c和图36a至图36c中所展示。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过gc
‑
ms来测定，如图37a至图37b、图38a至图38b、图39a至图39b和图40a至图40b中所展示。
287.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的至少一种级分包含按相对丰度计少于80％、少于70％、少于60％、少于50％、少于40％、少于30％、少于20％、少于19％、少于18％、少于17％、少于16％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的至少一种级分包含按相对丰度计少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％或少于2％的含脱水亚基寡糖。在其他实施方案中，本文所述的寡糖制剂的至少一种级分包含按相对丰度计大于0.5％、大于0.8％、大于1％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％、大于12％、大于13％、大于14％、大于15％、大于16％、大于17％、大于18％、大于19％、大于20％、大于30％、大于40％、大于50％、大于60％、大于70％或大于80％的含脱水亚基寡糖。在其他实施方案中，本文所述的寡糖制剂的至少一种级分包含按相对丰度计大于20％、大于21％、大于22％、大于23％、大于24％、大于25％、大于26％、大于27％、大于28％、大于29％或大于30％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂的至少一种级分(如dp1、dp2和/或dp3)包含按相对丰度计约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％或约30％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂的至少一种级分(如dp1、dp2和/或dp3)包含按相对丰度计约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约1.5％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％
或约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂的至少一种级分(如dp1、dp2和/或dp3)包含按相对丰度计约0.1％至约90％、约0.5％至约90％、约0.5％至约80％、约0.5％至约70％、约0.5％至约60％、约0.5％至约50％、约0.5％至约40％、约0.5％至约30％、约0.5％至约20％、约0.5％至约10％、约0.5％至约9％、约0.5％至约8％、约0.5％至约7％、约0.5％至约6％、约0.5％至约5％、约0.5％至约4％、约0.5％至约3％、约0.5％至约2％、约1％至约10％、约2％至约9％、约2％至约8％、约2％至约7％、约2％至约6％、约2％至约5％、约2％至约4％、约2％至约3％或约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂的dp1和dp2级分各自独立地包含如通过质谱法lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms测量的按相对丰度计在约0.1％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％或1.5％至约8％、9％、10％、11％、12％或15％范围内的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，dp1和dp2级分各自独立地包含如通过质谱法或通过lc
‑
ms/ms或gc
‑
ms测量的按相对丰度计约0.5％至约15％的含脱水亚基寡糖。
288.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计少于80％、少于70％、少于60％、少于50％、少于40％、少于30％、少于20％、少于19％、少于18％、少于17％、少于16％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％或少于2％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计少于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在其他实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计大于2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％的含脱水亚基寡糖。在其他实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计大于20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％或约30％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分包含按相对丰度计约0.1％至约90％、约0.1％至约15％、约0.5％至约90％、约0.5％至约80％、约0.5％至约70％、约0.5％至约60％、约0.5％至约50％、约0.5％至约40％、约0.5％至约30％、约0.5％至约20％、约0.5％至约10％、约0.5％至约9％、约0.5％至约8％、约0.5％至约7％、约0.5％至约6％、约0.5％至约5％、约0.5％至约4％、约0.5％至约3％、约0.5％至约2％、约2％至约9％、约2％至约8％、约2％至约7％、约2％至约6％、约2％至约5％、约2％至约4％、约2％至约3％或约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
289.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含按相对丰度计少于80％、少于70％、少于60％、少于50％、少于40％、少于30％、少于20％、少于19％、少于18％、少于17％、少于16％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少
于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含按相对丰度计少于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％或2％的含脱水亚基寡糖。在其他实施方案中，寡糖制剂包含按相对丰度计大于0.5％、大于0.8％、大于1％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％、大于12％、大于13％、大于14％、大于15％、大于16％、大于17％、大于18％、大于19％、大于20％、大于30％、大于40％、大于50％、大于60％、大于70％或大于80％的含脱水亚基寡糖。在其他实施方案中，寡糖制剂包含按相对丰度计大于20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含按相对丰度计约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％或约30％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含按相对丰度计约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含按相对丰度计约0.1％至约90％、约0.1％至约15％、约0.5％至约90％、约0.5％至约80％、约0.5％至约70％、约0.5％至约60％、约0.5％至约50％、约0.5％至约40％、约0.5％至约30％、约0.5％至约20％、约0.5％至约10％、约0.5％至约9％、约0.5％至约8％、约0.5％至约7％、约0.5％至约6％、约0.5％至约5％、约0.5％至约4％、约0.5％至约3％、约0.5％至约2％、约2％至约9％、约2％至约8％、约2％至约7％、约2％至约6％、约2％至约5％、约2％至约4％、约2％至约3％或约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。
290.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp1级分包含按相对丰度计少于30％、少于20％、少于19％、少于18％、少于17％、少于16％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp1级分包含按相对丰度计大于0.1％、大于0.5％、大于0.8％、大于1％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％、大于12％、大于13％、大于14％或大于15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp1级分包含按相对丰度计约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％或约20％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp1级分包含按相对丰度计约0.1％至约15％、约0.1％至约20％、约0.5％至约20％、0.5％至约10％、约0.5％至约15％、约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约2％至约14％、约3％至约13％、约4％至约12％、约5％至约11％、约5％至约10％、约6％至约9％或约7％至约8％或其间的任何范围的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp1级分包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过质谱法(如maldi
‑
ms)来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过lc
‑
ms/ms来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过gc
‑
ms来测定。
291.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp2级分包含按相对丰度计少于30％、少于20％、少于19％、少于18％、少于17％、少于16％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp2级分包含按相对丰度计大于0.1％、大于0.5％、大于0.8％、大于1％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％、大于12％、大于13％、大于14％或大于15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp2级分包含按相对丰度计约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％或约20％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp2级分包含按相对丰度计约0.1％至约15％、约0.1％至约20％、约0.5％至约20％、0.5％至约10％、约0.5％至约15％、约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约2％至约14％、约3％至约13％、约4％至约12％、约5％至约11％、约0.5％至约10％、约6％至约9％或约7％至约8％或其间的任何范围的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp2级分包含按相对丰度计约5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过质谱法(如maldi
‑
ms)来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过lc
‑
ms/ms来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过gc
‑
ms来测定。
292.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp3级分包含按相对丰度计少于30％、少于20％、少于19％、少于18％、少于17％、少于16％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp3级分包含按相对丰度计大于0.1％、大于0.5％、大于0.8％、大于1％、大于1.5％、大于2％、大于3％、大于4％、大于5％、大于6％、大于7％、大于8％、大于9％、大于10％、大于11％、大于12％、大于13％、大于14％或大于15％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp3级分包含按相对丰度计约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％或约20％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp3级分包含按相对丰度计约0.1％至约15％、约0.1％至约20％、约0.5％至约20％、0.5％至约10％、约0.5％至约15％、约1％至约20％、约1％至约15％、约1％至约10％、约2％至约14％、约3％至约13％、约4％至约12％、约5％至约11％、约5％至约10％、约6％至约9％或约7％至约8％或其间的任何范围的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp3级分包含按相对丰度计约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过质谱法(如maldi
‑
ms)来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过lc
‑
ms/ms来测定。在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖的相对丰度通过gc
‑
ms来测定。
293.在一些实施方案中，含脱水亚基寡糖包含一个或多个脱水亚基。例如，dp1含脱水亚基寡糖包含一个脱水亚基。在一些实施方案中，dpn含脱水亚基寡糖可以包含1至n个脱水亚基。例如，在一些实施方案中，dp2含脱水亚基寡糖包含一个或两个脱水亚基。在一些实施
方案中，寡糖制剂中的每种寡糖独立地包含零个、一个或两个脱水亚基。在一些实施方案中，超过99％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％或30％的含脱水亚基寡糖仅具有一个脱水亚基。在一些实施方案中，超过99％、95％、90％、85％或80％的含脱水亚基寡糖仅具有一个脱水亚基。
294.在一些实施方案中，寡糖制剂中或寡糖制剂的每种级分中的一种或多种寡糖包含各自经由糖苷键连接的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个脱水亚基，其中连接每个脱水亚基的糖苷键是独立选择的。在一些实施方案中，寡糖制剂中或寡糖制剂的每种级分中的一种或多种寡糖包含各自经由糖苷键连接的1、2或3个脱水亚基，其中连接每个脱水亚基的糖苷键是独立选择的。在一些实施方案中，寡糖制剂中或每种级分中大于50％、60％、70％、80％、90％或99％的寡糖包含各自经由糖苷键连接的1、2或3个脱水亚基，其中连接每个脱水亚基的糖苷键是独立选择的。在一些实施方案中，寡糖制剂中或每种级分中的一种或多种寡糖包含经由糖苷键连接的1个脱水亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂中或每种级分中大于50％、大于60％、大于70％、大于80％、大于90％或大于99％的寡糖包含经由糖苷键连接的1个脱水亚基。d.脱水亚基种类
295.在一些实施方案中，寡糖制剂包含不同种类的脱水亚基。在一些实施方案中，示例性的含脱水亚基寡糖展示于图42、图30和图31中。在一些实施方案中，寡糖制剂包含作为单糖的热脱水产物的一个或多个脱水亚基，即脱水单糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂包含作为单糖的可逆热脱水产物的一个或多个脱水亚基。
296.应当理解，脱水单糖(或脱水单糖亚基)是指单糖的一个或多个种类的热脱水产物。例如，在一些实施方案中，脱水葡萄糖是指1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖(左旋葡聚糖)或1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖。在一些实施方案中，多个脱水葡萄糖是指多个1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖(左旋葡聚糖)、多个1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖、葡萄糖的多个其他热脱水产物或其任何组合。类似地，在一些实施方案中，多个脱水半乳糖是指半乳糖的多个任何热脱水产物或其任何组合。
297.在一些实施方案中，如本文所述的寡糖制剂包含一个或多个脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖、脱水阿洛糖、脱水阿卓糖、脱水古洛糖、脱水艾杜糖、脱水塔洛糖、脱水果糖、脱水核糖、脱水阿拉伯糖、脱水鼠李糖、脱水来苏糖、脱水木糖或这些亚基的任何组合。在一些实施方案中，寡糖制剂包含一个或多个脱水葡萄糖、脱水半乳糖、脱水甘露糖或脱水果糖亚基。在一些实施方案中，如本文所述的寡糖制剂包含以下中的一种或多种：1,6
‑
脱水
‑3‑
o
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡糖基
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖、1,6
‑
脱水
‑3‑
o
‑
α
‑
d
‑
吡喃葡糖基
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖、1,6
‑
脱水
‑2‑
o
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡糖基
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖、1,6
‑
脱水
‑2‑
o
‑
α
‑
d
‑
吡喃葡糖基
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖、1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
纤维二糖(聚纤维二糖)、1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
纤维三糖(聚纤维三糖)、1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
纤维四糖(聚纤维四糖(cellotetraosan))、1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
纤维五糖(聚纤维五糖(ellopentaosan))和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
麦芽糖(麦芽聚糖(maltosan))。
298.在一些实施方案中，寡糖制剂包含一个或多个1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂包含一个或多个1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖(左旋葡聚糖)亚基。例如，图42展示了两种dp1含脱水亚基寡糖(左旋葡聚糖和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖)和一种dp2含脱水亚基寡糖(脱水纤维二糖)。
299.脱水亚基种类的存在和水平可以根据用于制造寡糖的进料糖而变化。例如，在一些实施方案中，葡萄糖寡糖包含脱水葡萄糖亚基，半乳糖寡糖包含脱水半乳糖亚基，并且葡萄糖
‑
半乳糖寡糖包含脱水葡萄糖和脱水半乳糖亚基。
300.在一些实施方案中，寡糖制剂包含1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖两种脱水亚基。在一些实施方案中，至少0.1％、1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或99％的脱水亚基选自1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖和1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖。在一些实施方案中，至少1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的脱水亚基是1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖。在一些实施方案中，至少1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％或60％的脱水亚基是1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖。
301.在一些实施方案中，在所述制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1至1:10、9:1至1:10、8:1至1:10、7:1至1:10、6:1至1:10、5:1至1:10、4:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10、10:1至1:9、10:1至1:8、10:1至1:7、10:1至1:6、10:1至1:5、10:1至1:4、10:1至1:3、10:1至1:2或1:1至3:1。在一些实施方案中，在所述制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:8、1:9或1:10。在一些实施方案中，在所述制剂中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约2:1。
302.在一些实施方案中，在每种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1至1:10、9:1至1:10、8:1至1:10、7:1至1:10、6:1至1:10、5:1至1:10、4:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10、10:1至1:9、10:1至1:8、10:1至1:7、10:1至1:6、10:1至1:5、10:1至1:4、10:1至1:3、10:1至1:2或1:1至3:1。在一些实施方案中，在每种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:8、1:9或1:10。在一些实施方案中，在每种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约2:1。
303.在一些实施方案中，在至少一种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1至1:10、9:1至1:10、8:1至1:10、7:1至1:10、6:1至1:10、5:1至1:10、4:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10、10:1至1:9、10:1至1:8、10:1至1:7、10:1至1:6、10:1至1:5、10:1至1:4、10:1至1:3、10:1至1:2或1:1至3:1。在一些实施方案中，在至少一种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:8、1:9或1:10。在一些实施方案中，在至少一种级分中，1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率是约2:1。
304.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含dp2含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含脱水乳糖、脱水蔗糖、脱水纤维二糖或其组合。在一些实施方案中，寡糖制剂包含约2至20个、2至15个、5至20个、5至15个或5至10个种类的dp2含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂不包含聚纤维二糖或不包含可检测水平的聚纤维二糖。
305.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含作为糖焦糖化产物的一个或多个脱
水亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂包含作为选自以下的糖焦糖化产物的一个或多个脱水亚基：甲醇；乙醇；呋喃；甲基乙二醛；2
‑
甲基呋喃；乙酸乙烯酯；乙醇醛；乙酸；丙酮醇；糠醛；2
‑
呋喃甲醇；3
‑
呋喃甲醇；2
‑
羟基环戊
‑2‑
烯
‑1‑
酮；5
‑
甲基糠醛；2(5h)
‑
呋喃酮；2甲基环戊烯醇酮；左旋葡萄糖酮；环状羟基内酯；1,4,3,6
‑
二脱水
‑
α
‑
d
‑
吡喃葡萄糖；二脱水吡喃葡萄糖；和5
‑
羟基甲基糠醛(5
‑
hmf)。在一些实施方案中，寡糖制剂包含5
‑
hmf脱水亚基。
306.在一些实施方案中，在寡糖制剂中或在至少一种dp级分中，作为焦糖化产物的脱水亚基比作为单糖的热脱水产物的脱水亚基的丰度更低。在一些实施方案中，在寡糖制剂中或在至少一种级分中，作为焦糖化产物的脱水亚基比作为单糖的热脱水产物的脱水亚基的丰度更高。在一些实施方案中，在寡糖制剂中或在至少一种级分中，作为焦糖化产物的脱水亚基和作为单糖的热脱水产物的脱水亚基具有相似的丰度。
307.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂中约0.01％至约50％、约0.01％至约40％、约0.01％至约30％、约0.01％至约20％、约0.01％至约10％、约0.01％至约5％、约0.01％至约4％、约0.01％至约3％、约0.01％至约2％、约0.01％至约1％、约0.01％至约0.5％、约0.1％至约50％、约0.1％至约40％、约0.1％至约30％、约0.1％至约20％、约0.1％至约10％、约0.1％至约5％、约0.1％至约4％、约0.1％至约3％、约0.1％至约2％、约0.1％至约1％或约0.1％至约0.5％的脱水亚基是焦糖化产物。在一些实施方案中，寡糖制剂中约0.1％至约5％、约0.1％至约2％或约0.1％至约1％的脱水亚基是焦糖化产物。在一些实施方案中，寡糖制剂中少于50％、少于40％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的脱水亚基是焦糖化产物。
308.在一些实施方案中，本文所述的制剂的至少一种级分(例如，dp1、dp2和/或dp3)中约0.01％至约50％、约0.01％至约40％、约0.01％至约30％、约0.01％至约20％、约0.01％至约10％、约0.01％至约5％、约0.01％至约4％、约0.01％至约3％、约0.01％至约2％、约0.01％至约1％、约0.01％至约0.5％、约0.1％至约50％、约0.1％至约40％、约0.1％至约30％、约0.1％至约20％、约0.1％至约10％、约0.1％至约5％、约0.1％至约4％、约0.1％至约3％、约0.1％至约2％、约0.1％至约1％或约0.1％至约0.5％的脱水亚基是焦糖化产物。在一些实施方案中，所述制剂的至少一种级分(例如，dp1、dp2和/或dp3)中约0.1％至约5％、约0.1％至约2％或约0.1％至约1％的脱水亚基是焦糖化产物。在一些实施方案中，所述制剂的至少一种级分中少于50％、40％、30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的脱水亚基是焦碳化产物。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的dp1、dp2和/或dp3级分中少于20％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的脱水亚基是焦糖化产物。
309.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的每种级分中约0.01％至约50％、约0.01％至约40％、约0.01％至约30％、约0.01％至约20％、约0.01％至约10％、约0.01％至约5％、约0.01％至约4％、约0.01％至约3％、约0.01％至约2％、约0.01％至约1％、约0.01％至约0.5％、约0.1％至约50％、约0.1％至约40％、约0.1％至约30％、约0.1％至约20％、约0.1％至约10％、约0.1％至约5％、约0.1％至约4％、约0.1％至约3％、约0.1％至约2％、约0.1％至约1％或约0.1％至约0.5％的脱水亚基是焦糖化产物。在一些实施方案中，
所述制剂的每种级分中约0.1％至约5％、约0.1％至约2％或约0.1％至约1％的脱水亚基是焦糖化产物。在一些实施方案中，所述制剂的每种级分中少于50％、少于40％、少于30％、少于20％、少于25％、少于20％、少于15％、少于14％、少于13％、少于12％、少于11％、少于10％、少于9％、少于8％、少于7％、少于6％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％的脱水亚基是焦糖化产物。
310.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂中的每种寡糖独立地且任选地包含脱水亚基。在一些实施方案中，两种或更多种独立的寡糖包含相同或不同的脱水亚基。在一些实施方案中，两种或更多种独立的寡糖包含不同的脱水亚基。例如，在一些实施方案中，寡糖制剂包含dp1含脱水亚基寡糖，其包含1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖亚基；和dp2含脱水亚基寡糖，其包含1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂中的一种或多种寡糖包含两个或更多个相同或不同的脱水亚基。
311.在一些实施方案中，在寡糖制剂的聚合度等于或大于2的任何级分(即，dp2至dpn级分)中，脱水亚基可以与一个或多个常规或脱水亚基连接。在一些实施方案中，在dp2至dpn级分中，至少一个脱水亚基与一个、两个或三个其他常规或脱水亚基连接。在一些实施方案中，在dp2至dpn级分中，至少一个脱水亚基与一个或两个常规亚基连接。在一些实施方案中，在dp2至dpn级分中，至少一个脱水亚基与一个常规亚基连接。在一些实施方案中，在dp2至dpn级分中的任一种中，超过99％、90％、80％、70％、60％、50％、40％或30％的脱水亚基与一个常规亚基连接。在一些实施方案中，在dp2至dpn级分中的每一种中，超过99％、90％、80％、70％、60％、50％、40％或30％的脱水亚基与一个常规亚基连接。
312.在一些实施方案中，在寡糖制剂的聚合度等于或大于2的任何级分(即，dp2至dpn级分)中，脱水亚基可以位于寡糖的链端。在一些实施方案中，在寡糖制剂的聚合度等于或大于3的任何级分(即，dp3至dpn级分)中，脱水亚基可以位于不是寡糖的链端的位置。在一些实施方案中，在dp2至dpn级分中，至少一个脱水亚基位于寡糖的链端。在一些实施方案中，dp2至dpn级分中大于99％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％或30％的脱水亚基位于寡糖的链端。在一些实施方案中，寡糖制剂中大于95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或10％的脱水亚基位于寡糖的链端。在一些实施方案中，大于30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的含脱水亚基寡糖包含链端脱水亚基。在一些实施方案中，大于80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的含脱水亚基寡糖包含链端脱水亚基。e.糖苷键联
313.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含多种糖苷键联。糖苷键联的类型和分布可以取决于寡糖制剂的来源和制造方法。在一些实施方案中，各种糖苷键联的类型和分布可以通过本领域已知的任何合适的方法(如nmr)来测定和/或检测。例如，在一些实施方案中，糖苷键联通过1hnmr、
13
c nmr、2d nmr(如2d jres、hsqc、hmbc、dosy、cosy、ecosy、tocsy、noesy或roesy)或其任何组合来测定和/或检测。在一些实施方案中，糖苷键联至少部分地通过1h nmr来测定和/或检测。在一些实施方案中，糖苷键联至少部分地通过
13
c nmr来测定和/或检测。在一些实施方案中，糖苷键联至少部分地通过2d 1
h、
13
c
‑
hsqc nmr来测定和/或检测。
314.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含一个或多个α
‑
(1,2)糖苷键联、α
‑
(1,3)糖苷键联、α
‑
(1,4)糖苷键联、α
‑
(1,6)糖苷键联、β
‑
(1,2)糖苷键联、β
‑
(1,3)糖苷键联、β
‑
(1,4)糖苷键联、β
‑
(1,6)糖苷键联、α
‑
(1,1)
‑
α糖苷键联、α
‑
(1,1)
‑
β糖苷键联、β
‑
(1,1)
‑
β糖苷键联或其任何组合。
315.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约60mol％、约5％至约55mol％、约5％至约50mol％、约5％至约45mol％、约5％至约40mol％、约5％至约35mol％、约5％至约30mol％、约5％至约25mol％、约10％至约60mol％、约10％至约55mol％、约10％至约50mol％、约10％至约45mol％、约10％至约40mol％、约10％至约35mol％、约15％至约60mol％、约15％至约55mol％、约15％至约50mol％、约15％至约45mol％、约15％至约40mol％、约15％至约35mol％、约20％至约60mol％、约20％至约55mol％、约20％至约50mol％、约20％至约45mol％、约20％至约40mol％、约20％至约35mol％、约25％至约60mol％、约25％至约55mol％、约25％至约50mol％、约25％至约45mol％、约25％至约40mol％或约25％至约35mol％的α
‑
(1,6)糖苷键联的糖苷键类型分布。
316.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约50mol％、约0至约40mol％、约0至约35mol％、约0至约30mol％、约0至约25mol％、约0至约20mol％、约5％至约40mol％、约5％至约35mol％、约5％至约30mol％、约5％至约25mol％、约5％至约20mol％、约10％至约40mol％、约10％至约35mol％、约10％至约20mol％、约15％至约40mol％、约15％至约35mol％、约15％至约30mol％、约15％至约25mol％或约15％至约20mol％的α
‑
(1,3)糖苷键联的糖苷键类型分布。
317.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约40mol％、约0至约35mol％、约0至约30mol％、约0至约25mol％、约0至约20mol％、约0至约15mol％、约0至约10mol％、约2％至约30mol％、约2％至约25mol％、约2％至约20mol％、约2％至约15mol％、约2％至约10mol％、约3％至约30mol％、约3％至约25mol％、约3％至约20mol％、约3％至约15mol％、约3％至约10mol％、约5％至约30mol％、约5％至约25mol％、约5％至约20mol％、约5％至约15mol％或约5％至约10mol％的α
‑
(1,2)糖苷键联的糖苷键类型分布。
318.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约40mol％、约0至约30mol％、约0至约25mol％、约0至约20mol％、约0至约15mol％、约0至约10mol％或约0至约5mol％的α
‑
(1,4)糖苷键联的糖苷键类型分布。在一些实施方案中，寡糖制剂具有少于40mol％、少于30mol％、少于20mol％、少于15mol％、少于10mol％、少于9mol％、少于8mol％、少于7mol％、少于6mol％、少于5mol％、少于4mol％、少于3mol％或少于2mol％的α
‑
(1,4)糖苷键的糖苷键类型分布。
319.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约40mol％、约0至约35mol％、约0至约30mol％、约0至约25mol％、约0至约20mol％、约0至约15mol％、约0至约10mol％、约2％至约30mol％、约2％至约25mol％、约2％至约20mol％、约2％至约15mol％、约2％至约10mol％、约5％至约30mol％、约5％至约25mol％、约5％至约20mol％、约5％至约15mol％、约5％至约10mol％、约8％至约30mol％、约8％至约25mol％、约8％至约20mol％、约8％至约15mol％或约10％至约15mol％的β
‑
(1,6)糖苷键联的糖苷键类型分布。
320.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约40mol％、约0至约35mol％、约0至约30mol％、约0至约25mol％、约0至约20mol％、约0至约15mol％、约0至约10mol％、约2％至约30mol％、约2％至约25mol％、约2％至约20mol％、约2％至约15mol％、约2％至约10mol％、
约3％至约30mol％、约3％至约25mol％、约3％至约20mol％、约3％至约15mol％、约3％至约10mol％、约5％至约30mol％、约5％至约25mol％、约5％至约20mol％、约5％至约15mol％或约5％至约10mol％的β
‑
(1,4)糖苷键联的糖苷键类型分布。
321.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约40mol％、约0至约30mol％、约0至约25mol％、约0至约20mol％、约0至约15mol％、约0至约10mol％、约0至约5mol％、约1％至约20mol％、约1％至约15mol％、约1％至约10mol％、约1％至约5mol％、约2％至约20mol％、约2％至约15mol％、约2％至约10mol％或约2％至约5mol％的β
‑
(1,2)糖苷键联的糖苷键类型分布。在一些实施方案中，寡糖制剂具有少于40mol％、少于30mol％、少于20mol％、少于15mol％、少于10mol％、少于9mol％、少于8mol％、少于7mol％、少于6mol％、少于5mol％、少于4mol％、少于3mol％或少于2mol％的β
‑
(1,2)糖苷键的糖苷键类型分布。
322.在一些实施方案中，寡糖制剂具有约0至约40mol％、约0至约30mol％、约0至约25mol％、约0至约20mol％、约0至约15mol％、约0至约10mol％、约0至约5mol％、约1％至约20mol％、约1％至约15mol％、约1％至约10mol％、约1％至约5mol％、约2％至约20mol％、约2％至约15mol％、约2％至约10mol％或约2％至约5mol％的β
‑
(1,3)糖苷键联的糖苷键类型分布。在一些实施方案中，寡糖制剂具有少于40mol％、少于30mol％、少于20mol％、少于15mol％、少于10mol％、少于9mol％、少于8mol％、少于7mol％、少于6mol％、少于5mol％、少于4mol％、少于3mol％或少于2mol％的β
‑
(1,3)糖苷键的糖苷键类型分布。
323.在一些实施方案中，寡糖制剂具有不同于非合成寡糖制剂的糖苷键类型分布的糖苷键类型分布。例如，在一些实施方案中，寡糖制剂具有不同于基础营养组合物的糖苷键类型分布的糖苷键类型分布。在一些实施方案中，基础营养组合物包含天然碳水化合物来源，如淀粉和植物纤维。天然碳水化合物来源中的一些具有高百分比的α
‑
(1,4)、α
‑
(1,6)和/或β
‑
(1,6)糖苷键联。因此，在一些实施方案中，寡糖制剂具有比基础营养组合物更低百分比的α
‑
(1,4)糖苷键联。在一些实施方案中，寡糖制剂具有比基础营养组合物更低百分比的α
‑
(1,6)糖苷键联。在其他实施方案中，寡糖制剂具有比基础营养组合物更高百分比的α
‑
(1,6)糖苷键联。在一些实施方案中，寡糖制剂具有比基础营养组合物更低百分比的β
‑
(1,6)糖苷键联。在一些实施方案中，寡糖制剂包含不容易能被酶消化或水解的糖苷键联。
324.具体地，在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的糖苷键类型分布中的α
‑
(1,2)、α
‑
(1,3)、α
‑
(1,4)、α
‑
(1,6)、β
‑
(1,2)、β
‑
(1,3)、β
‑
(1,4)和/或β
‑
(1,6)糖苷键联比基础营养组合物低至少50mol％、至少40mol％、至少30mol％、至少20mol％、至少15mol％、至少10mol％、至少5mol％、至少2mol％或至少1mol％。在一些实施方案中，寡糖制剂的糖苷键类型分布中的α
‑
(1,2)、α
‑
(1,3)、α
‑
(1,4)、α
‑
(1,6)、β
‑
(1,2)、β
‑
(1,3)、β
‑
(1,4)和/或β
‑
(1,6)糖苷键联比基础营养组合物高至少50mol％、至少40mol％、至少30mol％、至少20mol％、至少15mol％、至少10mol％、至少5mol％、至少2mol％或至少1mol％。
325.本领域技术人员应该理解，某些类型的糖苷键联可能不适用于包含某些类型的单糖的寡糖。例如，在一些实施方案中，寡糖制剂包含α
‑
(1,2)糖苷键联和α
‑
(1,6)糖苷键联。在其他实施方案中，寡糖制剂包含α
‑
(1,2)糖苷键联和β
‑
(1,3)糖苷键联。在一些实施方案中，寡糖制剂包含α
‑
(1,2)糖苷键联、α
‑
(1,3)糖苷键联和β
‑
(1,6)糖苷键联。在一些实施方案中，寡糖制剂包含α
‑
(1,2)糖苷键联、α
‑
(1,3)糖苷键联、α
‑
(1,4)糖苷键联、α
‑
(1,6)糖苷键联、β
‑
(1,2)糖苷键联、β
‑
(1,3)糖苷键联、β
‑
(1,4)糖苷键联和β
‑
(1,6)糖苷键联。
f.分子量
326.寡糖制剂的分子量和分子量分布可以通过任何合适的分析手段和仪器(如端基法、渗透压(渗透压测定法)、超速离心、粘度测量、光散射法、sec、sec
‑
malls、fff、a4f、hplc和质谱法)来测定。在一些实施方案中，分子量和分子量分布通过质谱法(如maldi
‑
ms、lc
‑
ms或gc
‑
ms)来测定。在一些实施方案中，分子量和分子量分布通过尺寸排阻色谱法(sec)(如凝胶渗透色谱法(gpc))来测定。在其他实施方案中，分子量和分子量分布通过hplc来测定。在一些实施方案中，分子量和分子量分布通过maldi
‑
ms来测定。
327.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有约100至约10000g/mol、约200至约8000g/mol、约300至约5000g/mol、约500至约5000g/mol、约700至约5000g/mol、约900至约5000g/mol、约1100至约5000g/mol、约1300至约5000g/mol、约1500至约5000g/mol、约1700至约5000g/mol、约300至约4500g/mol、约500至约4500g/mol、约700至约4500g/mol、约900至约4500g/mol、约1100至约4500g/mol、约1300至约4500g/mol、约1500至约4500g/mol、约1700至约4500g/mol、约1900至约4500g/mol、约300至约4000g/mol、约500至约4000g/mol、约700至约4000g/mol、约900至约4000g/mol、约1100至约4000g/mol、约1300至约4000g/mol、约1500至约4000g/mol、约1700至约4000g/mol、约1900至约4000g/mol、约300至约3000g/mol、约500至约3000g/mol、约700至约3000g/mol、约900至约3000g/mol、约1100至约3000g/mol、约1300至约3000g/mol、约1500至约3000g/mol、约1700至约3000g/mol、约1900至约3000g/mol、约2100至约3000g/mol、约300至约2500g/mol、约500至约2500g/mol、约700至约2500g/mol、约900至约2500g/mol、约1100至约2500g/mol、约1300至约2500g/mol、约1500至约2500g/mol、约1700至约2500g/mol、约1900至约2500g/mol、约2100至约2500g/mol、约300至约1500g/mol、约500至约1500g/mol、约700至约1500g/mol、约900至约1500g/mol、约1100至约1500g/mol、约1300至约1500g/mol、约2000至约2800g/mol、约2100至约2700g/mol、约2200至约2600g/mol、约2300至约2500g/mol或约2320至约2420g/mol的重均分子量。在一些实施方案中，寡糖制剂的重均分子量是约2000至约2800g/mol、约2100至约2700g/mol、约2200至约2600g/mol、约2300至约2500g/mol或约2320至约2420g/mol。在一些实施方案中，寡糖制剂具有在从至少500g/mol、750g/mol、1000g/mol或1500g/mol至至多1750g/mol、2000g/mol、2250g/mol、2500g/mol或3000g/mol范围内的重均分子量。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的重均分子量根据实施例9通过hplc来测定。
328.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有约100至约10000g/mol、约200至约8000g/mol、约300至约5000g/mol、约500至约5000g/mol、约700至约5000g/mol、约900至约5000g/mol、约1100至约5000g/mol、约1300至约5000g/mol、约1500至约5000g/mol、约1700至约5000g/mol、约300至约4500g/mol、约500至约4500g/mol、约700至约4500g/mol、约900至约4500g/mol、约1100至约4500g/mol、约1300至约4500g/mol、约1500至约4500g/mol、约1700至约4500g/mol、约1900至约4500g/mol、约300至约4000g/mol、约500至约4000g/mol、约700至约4000g/mol、约900至约4000g/mol、约1100至约4000g/mol、约1300至约4000g/mol、约1500至约4000g/mol、约1700至约4000g/mol、约1900至约4000g/mol、约300至约3000g/mol、约500至约3000g/mol、约700至约3000g/mol、约900至约3000g/mol、约1100至约3000g/mol、约1300至约3000g/mol、约1500至约3000g/mol、约1700至约3000g/mol、约1900至约3000g/mol、约2100至约3000g/mol、约300至约2500g/mol、约500至约2500g/mol、约700
至约2500g/mol、约900至约2500g/mol、约1100至约2500g/mol、约1300至约2500g/mol、约1500至约2500g/mol、约1700至约2500g/mol、约1900至约2500g/mol、约2100至约2500g/mol、约300至约2000g/mol、约500至约300至2000g/mol、约700至约2000g/mol、约900至约2000g/mol、约1100至约2000g/mol、约300至约1500g/mol、约500至约1500g/mol、约700至约1500g/mol、约900至约1500g/mol、约1100至约1500g/mol、约1300至约1500g/mol、约1000至约2000g/mol、约1100至约1900g/mol、约1200至约1800g/mol、约1300至约1700g/mol、约1400至约1600g/mol或约1450至约1550g/mol的数均分子量。在一些实施方案中，寡糖制剂的数均分子量是约1000至约2000g/mol、约1100至约1900g/mol、约1200至约1800g/mol、约1300至约1700g/mol、1400至1600g/mol或1450
‑
1550g/mol。在一些实施方案中，寡糖制剂具有在从至少500g/mol、750g/mol、1000g/mol或1500g/mol至至多1750g/mol、2000g/mol、2250g/mol、2500g/mol或3000g/mol范围内的数均分子量。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂的数均分子量根据实施例9通过hplc来测定。g.寡糖的类型
329.存在于寡糖制剂中的寡糖的种类可以取决于所述一种或多种进料糖的类型。例如，在一些实施方案中，当进料糖包括葡萄糖时，寡糖制剂包含葡萄糖寡糖。例如，在一些实施方案中，当进料糖包括半乳糖时，寡糖制剂包含半乳糖寡糖。对于另一个例子，在一些实施方案中，当进料糖包括半乳糖和葡萄糖时，寡糖制剂包含葡萄糖
‑
半乳糖寡糖。
330.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含一个或多个种类的单糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂包含具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个不同种类的单糖亚基的寡糖。
331.在一些实施方案中，寡糖制剂包含具有1、2、3或4个不同种类的单糖亚基的寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含具有1、2或3个不同种类的单糖亚基的寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含具有3个不同种类的单糖亚基的寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含具有2个不同种类的单糖亚基的寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含一个种类的单糖亚基。
332.在一些实施方案中，寡糖制剂包含不同种类的寡糖，其中每个寡糖分子独立地包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个不同种类的单糖亚基。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含102、103、104、105或更多个不同种类的寡糖。在一些实施方案中，所述制剂中的一些寡糖包含一个种类的单糖亚基，并且相同制剂中的一些其他寡糖包含两个或更多个种类的单糖亚基。例如，在一些实施方案中，当进料糖是葡萄糖和半乳糖时，寡糖制剂可以包含仅包含葡萄糖亚基的寡糖、仅包含半乳糖亚基的寡糖、包含不同比率的葡萄糖和半乳糖亚基两者的寡糖或其任何组合。
333.在一些实施方案中，寡糖制剂的n种级分中的任一种或全部包含不同种类的寡糖亚基，其中每种寡糖独立地包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个不同种类的单糖亚基。在一些实施方案中，所述制剂的级分中的一些寡糖包含一个种类的单糖亚基，并且所述制剂的相同级分中的一些其他寡糖包含两个或更多个种类的单糖亚基。
334.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含选自以下的一个或多个单糖亚基：三糖、四糖、戊糖、己糖、庚糖及其任何组合，其中所述三糖、四糖、戊糖、己糖或庚糖亚基中的每一个独立地且任选地被官能化和/或被其相应的脱水亚基之一替换。在一些实施方案
中，相应的脱水亚基是单糖亚基的热脱水产物。在一些实施方案中，相应的脱水亚基是单糖亚基的焦糖化产物。
335.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含戊糖亚基、己糖亚基或其任何组合，其中所述戊糖或己糖亚基中的每一个独立地且任选地被官能化和/或被其相应的脱水亚基之一替换。在一些实施方案中，寡糖制剂包含己糖亚基，其中所述己糖亚基中的每一个独立地且任选地被其相应的脱水亚基之一替换。
336.如本文所用，四糖是指具有四个碳原子的单糖，如赤藓糖、苏糖和赤藓酮糖。如本文所用，戊糖是指具有五个碳原子的单糖，如阿拉伯糖、来苏糖、核糖和木糖。如本文所用，己糖是指具有六个碳原子的单糖，如阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔洛糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖和塔格糖。如本文所用，庚糖是指具有七个碳原子的单糖，如景天庚酮糖和甘露庚酮糖。
337.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含葡萄糖亚基，其中至少一个葡萄糖亚基任选地被脱水葡萄糖亚基替换。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含半乳糖亚基，其中至少一个半乳糖亚基任选地被脱水半乳糖亚基取代。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含半乳糖和葡萄糖亚基，其中至少一个半乳糖亚基或至少一个葡萄糖亚基任选地被其相应的脱水亚基之一替换。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含果糖和葡萄糖亚基，其中至少一个果糖亚基或至少一个葡萄糖亚基任选地被其相应的脱水亚基之一替换。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含甘露糖和葡萄糖亚基，其中至少一个甘露糖亚基或至少一个葡萄糖亚基任选地被其相应的脱水亚基之一替换。
338.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包括葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂、葡萄糖寡糖制剂、半乳糖寡糖制剂、果糖寡糖制剂、甘露糖寡糖制剂、阿拉伯糖寡糖制剂、木糖寡糖制剂、葡萄糖
‑
果糖寡糖制剂、葡萄糖
‑
甘露糖寡糖制剂、葡萄糖
‑
阿拉伯糖寡糖制剂、葡萄糖
‑
木糖寡糖制剂、半乳糖
‑
果糖寡糖制剂、半乳糖
‑
甘露糖寡糖制剂、半乳糖
‑
阿拉伯糖寡糖制剂、半乳糖
‑
木糖寡糖制剂、果糖
‑
甘露糖寡糖制剂、果糖
‑
阿拉伯糖寡糖制剂、果糖
‑
木糖寡糖制剂、甘露糖
‑
阿拉伯糖寡糖制剂、甘露糖
‑
木糖寡糖制剂、阿拉伯糖
‑
木糖寡糖制剂、半乳糖
‑
阿拉伯糖
‑
木糖寡糖制剂、果糖
‑
半乳糖
‑
木糖寡糖制剂、阿拉伯糖
‑
果糖
‑
甘露糖
‑
木糖寡糖制剂、葡萄糖
‑
果糖
‑
半乳糖
‑
阿拉伯糖寡糖制剂、果糖
‑
葡萄糖
‑
阿拉伯糖
‑
甘露糖
‑
木糖寡糖制剂、葡萄糖
‑
半乳糖
‑
果糖
‑
甘露糖
‑
阿拉伯糖
‑
木糖寡糖制剂或其任何组合；其中所述制剂内的单糖亚基中的每一个独立地且任选地被官能化和/或被其相应的脱水亚基之一替换。
339.在某些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含按重量计超过99％的葡萄糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂仅包含葡萄糖亚基。
340.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含按重量计约45％至55％的葡萄糖亚基和约55％至45％的半乳糖亚基。在一些具体实施方案中，寡糖制剂包含按重量计约50％的葡萄糖亚基和50％的半乳糖亚基。
341.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含按重量计约80％至95％的葡萄糖亚基和约20％至5％的甘露糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂包含按重量计约85％至90％的葡萄糖亚基和约15％至10％的甘露糖亚基。
342.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含按重量计约80％至95％的葡萄糖亚
基和约20％至5％的半乳糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂包含按重量计约85％至90％的葡萄糖亚基和约15％至10％的半乳糖亚基。
343.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含按重量计约80％至95％的葡萄糖亚基、0％至8％的半乳糖亚基和5％至20％的甘露糖亚基。在一些实施方案中，寡糖制剂包含按重量计约80％至90％的葡萄糖亚基、1％至5％的半乳糖亚基和10％至15％的甘露糖亚基。
344.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含约1wt％至约100wt％、约50wt％至约100wt％、约80wt％至约98wt％或约85wt％至约95wt％或其间的任何范围的葡萄糖亚基。在一些实施方案中，半乳糖亚基以约0wt％至约90wt％、约1wt％至约50wt％、约2wt％至约20wt％或约5wt％至约15wt％或其间的任何范围的量存在于本文所述的寡糖制剂中。在一些实施方案中，甘露糖亚基以约0wt％至约90wt％、约1wt％至约50wt％、约2wt％至约20wt％或约5wt％至约15wt％或其间的任何范围的量存在于本文所述的寡糖制剂中。
345.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有如表29所示的单糖亚基的组成。表29.寡糖制剂的示例性组成
h.d形式与l形式
346.在一些实施方案中，寡糖中的至少一个单糖亚基呈l形式。在一些实施方案中，寡糖中的至少一个单糖亚基呈d形式。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂中的单糖亚基呈其天然丰富的形式，例如d
‑
葡萄糖、d
‑
木糖和l
‑
阿拉伯糖。
347.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含l形式和d形式的单糖亚基的混合物。在一些实施方案中，l形式与d形式或d形式与l形式的单糖亚基比率是约1:1、约1:2、约1:3、约1:4、约1:5、约1:6、约1:7、约1:8、约1:9、约1:10、约1:12、约1:14、约1:16、约1:18、约1:20、约1:25、约1:30、约1:35、约1:40、约1:45、约1:50、约1:55、约1:60、约1:65、约1:70、约1:75、约1:80、约1:85、约1:90、约1:100或约1:150。i.官能化寡糖
348.在一些实施方案中，所述制剂中的一种或多种寡糖独立地被官能化。官能化寡糖可以通过例如在催化剂存在下将一种或多种糖与一种或多种官能化化合物合并来产生。产生官能化寡糖的方法在wo 2012/118767、wo 2014/031956和wo/2016/122887中有描述，将其通过引用以其整体且关于其公开内容特此并入。
349.在一些实施方案中，官能化化合物包含一个或多个酸基(例如，
‑
cooh)、羟基、或含n基团(例如，
‑
cn、
‑
no2和
‑
n(r
a
)2，其中r
a
是氢、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、杂烷基、环烷基、芳基、杂环烷基或杂芳基)、含s基团(例如，硫醇和硫酸盐)、卤化物(例如，
‑
cl)、含p基团(例如，磷酸盐)或其任何组合。在一些实施方案中，官能化化合物经由醚、酯、氧
‑
硫、胺或氧
‑
磷键与至少一个单糖亚基连接。在一些实施方案中，一种或多种官能化化合物经由单个键联与单糖亚基连接。在一些实施方案中，至少一种官能化化合物经由两个或更多个键联与一
种或两种寡糖连接。
350.应当理解，对于寡糖制剂中的每种寡糖，所描述的实施方案中的每一个是独立的并且可以组合，就如同每一个组合单独列出一样；因此，本公开文本涵盖了实施方案的任何组合。例如，各种实施方案可以被分成若干个类别，所述若干个类别包括但不限于(i)脱水亚基的存在或不存在；(ii)脱水亚基的数量和水平；(iii)脱水亚基的种类类型；(iv)脱水亚基的位置；(v)聚合度；(vi)分子量；(vii)任何官能团的存在或不存在；(viii)寡糖的类型；(ix)糖苷键联的类型；和(x)l形式与d形式。因此，所描述的寡糖制剂包含不同种类的多种寡糖。在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂包含至少10、102、103、104、105、106、107、108、109或10
10
个不同的寡糖种类。在一些实施方案中，所述制剂包含至少103、104、105、106或109个不同的寡糖种类。在一些实施方案中，所述制剂包含至少103个不同的寡糖种类。iii.制造寡糖制剂的方法
351.在一个方面，本文提供了制造寡糖制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供了制造适用于营养组合物(如动物饲料组合物)或直接饲喂给动物的寡糖制剂的方法。在一个方面，本文提供了制造寡糖制剂的方法，所述方法包括将包含一种或多种进料糖和催化剂的水性组合物加热至足以诱导聚合的温度并持续足以诱导聚合的时间，其中催化剂选自：( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸；2
‑
吡啶磺酸；3
‑
吡啶磺酸；8
‑
羟基
‑5‑
喹啉磺酸水合物；α
‑
羟基
‑2‑
吡啶甲烷磺酸；(β)
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸；丁基膦酸；联苯基次膦酸；己基膦酸；甲基膦酸；苯基次膦酸；苯基膦酸；叔丁基膦酸；ss)
‑
vapol磷酸氢酯；6
‑
喹啉磺酸；3
‑
(1
‑
吡啶并)
‑1‑
丙烷磺酸盐；2
‑
(2
‑
吡啶基)乙烷磺酸；3
‑
(2
‑
吡啶基)
‑
5,6
‑
联苯基
‑
1,2,4
‑
三嗪
‑
p,p'
‑
二磺酸单钠盐水合物；1,1'
‑
联萘
‑
2,2'
‑
二基
‑
磷酸氢盐；双(4
‑
甲氧基苯基)次膦酸；苯基(3,5
‑
二甲苯基)次膦酸；l
‑
磺基丙氨酸一水合物；聚(苯乙烯磺酸
‑
共
‑
二乙烯基苯)；赖氨酸；乙烷二磺酸；乙烷磺酸；羟乙磺酸；同型磺基丙氨酸；hepbs(n
‑
(2
‑
羟乙基)哌嗪
‑
n'
‑
(4
‑
丁烷磺酸))；hepes(4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙烷磺酸)；2
‑
羟基
‑3‑
吗啉代丙烷磺酸；2
‑
(n
‑
吗啉代)乙烷磺酸；甲烷磺酸；甲磺烟肼；萘
‑1‑
磺酸；萘
‑2‑
磺酸；全氟丁烷磺酸；6
‑
磺基奎诺糖；三氟甲磺酸；2
‑
氨基乙烷磺酸；苯甲酸；氯乙酸；三氟乙酸；己酸；庚酸；辛酸；壬酸；月桂酸；棕榈酸；硬脂酸；花生酸；天冬氨酸；谷氨酸；丝氨酸；苏氨酸；谷氨酰胺；半胱氨酸；甘氨酸；脯氨酸；丙氨酸；缬氨酸；异亮氨酸；亮氨酸；甲硫氨酸；苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸，并且其中寡糖制剂包含各自具有选自1(dp1级分)至n(dpn级分)的不同聚合度的至少n种寡糖级分，其中n是大于2的整数。
352.在一些实施方案中，n是大于或等于3的整数。在一些实施方案中，n是1至100范围内的整数，如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40或50。在一些实施方案中，进料糖的聚合通过逐步生长聚合来实现。在一些实施方案中，进料糖的聚合通过缩聚来实现。a.进料糖
353.在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法包括加热一种或多种类型的进料糖。在一些实施方案中，所述一种或多种类型的进料糖包括单糖、二糖、三糖、四糖或其任何混合物。
354.在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖和半乳糖。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖、木糖和半乳糖。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖和甘露糖。
在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖和果糖。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖、果糖和半乳糖。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖、半乳糖和甘露糖。
355.在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括二糖，如乳糖、蔗糖和纤维二糖。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括三糖，如麦芽三糖或棉子糖。在某些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、麦芽糊精、阿拉伯糖或半乳糖或其任何组合。在某些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括糖浆，如玉米糖浆。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖和乳糖。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖和蔗糖。
356.在一些实施方案中，进料糖的类型可以影响所得的制造的寡糖制剂。例如，在其中所述一种或多种进料糖全部为葡萄糖的一些变型中，所得的寡糖制剂包括葡萄糖寡糖制剂。在其他实施方案中，在所述一种或多种进料糖全部为甘露糖的情况下，所得的寡糖制剂包括甘露糖寡糖制剂。在一些实施方案中，其中所述一种或多种进料糖包括葡萄糖和半乳糖，所得的寡糖制剂包括葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂。在又其他实施方案中，在所述一种或多种进料糖包括木糖、葡萄糖和半乳糖的情况下，所得的寡糖制剂包括葡萄糖
‑
半乳糖
‑
木糖寡糖制剂。
357.在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖中的每一种可以独立地呈其脱水物或水合物形式。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括葡萄糖、半乳糖、果糖、甘露糖或其任何组合，并且其中葡萄糖、半乳糖、果糖或甘露糖中的每一种独立地呈其一水合物或脱水物形式。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括单糖一水合物，如葡萄糖一水合物。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括糖二水合物，如海藻糖二水合物。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括呈其脱水物形式的至少一种糖和呈其水合物形式的至少一种糖。
358.在一些实施方案中，可以将所述一种或多种进料糖作为糖溶液来提供，其中将糖与水合并，并且进料到反应器中。在一些实施方案中，可以将糖以固体形式进料到反应器中，并且在所述反应器中与水合并。在一些实施方案中，在添加水之前将所述一种或多种进料糖合并并混合。在其他实施方案中，将所述一种或多种进料糖合并到水中并在其后混合。
359.在一些实施方案中，所述方法包括将两种或更多种进料糖与催化剂合并以产生寡糖制剂。在一些实施方案中，所述两种或更多种进料糖包括葡萄糖、半乳糖、果糖、甘露糖、乳糖或其任何组合。在一些实施方案中，所述方法包括将糖(例如，单糖、二糖和/或三糖)的混合物与催化剂合并以产生寡糖制剂。在其他实施方案中，所述方法包括将糖和糖醇的混合物与催化剂合并以产生寡糖制剂。
360.在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括经官能化的或经修饰的糖。经官能化的或经修饰的糖可以包括氨基糖、糖酸、糖醇、糖酰胺、糖醚或其任何组合。在一些实施方案中，氨基糖是指其中羟基被胺基替换的糖分子。示例性氨基糖包括但不限于n
‑
乙酰基
‑
d
‑
葡糖胺、甘露糖胺、神经氨酸、胞壁酸、n
‑
乙酰基
‑
神经胺(neuramin)、n
‑
乙酰基
‑
胞壁酸(muramic)、n
‑
乙酰基
‑
半乳糖胺、n
‑
乙酰基
‑
甘露糖胺(mannosa)、n
‑
羟乙酰神经氨酸(n
‑
glycolylneuram)、阿卡维西辛(acarviosin)、d
‑
葡糖胺和d
‑
半乳糖胺。
361.在实施方案中，糖酸是指具有羧基的糖。示例性糖酸包括但不限于醛糖酸(如甘油
酸、木糖酸、葡糖酸和抗坏血酸)、酮糖酸(如神经氨酸和酮去氧辛酮糖酸)、糖醛酸(如葡糖醛酸、半乳糖醛酸和艾杜糖醛酸)和糖二酸(如酒石酸、粘液酸和糖质酸)。
362.在一些实施方案中，糖醇是指糖来源的多元醇。示例性糖醇包括但不限于乙二醇、阿拉伯糖醇、甘油、赤藓糖醇、苏糖醇、木糖醇、核糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、半乳糖醇、岩藻糖醇、艾杜糖醇、肌醇和倭勒米糖醇(volemitol)。
363.在一些实施方案中，糖酰胺是指含有
‑
c(＝o)
‑
n
‑
基团的糖分子。在实施方案中，糖醚是指含有醚键的糖分子，如葡糖苷。
364.在一些实施方案中，经官能化的或经修饰的糖包括葡糖胺、n
‑
乙酰基葡糖胺、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡糖醇、木糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇。在一些实施方案中，所述一种或多种进料糖包括脱氧糖，如岩藻糖、鼠李糖、脱氧核糖或墨角藻糖(fuculose)。
365.在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法以克规模进行。在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法以千克或更高规模进行。因此，在一些实施方案中，所述方法包括加热水性组合物，所述水性组合物包含超过0.5、超过1、超过2、超过3、超过4、超过5、超过6、超过7、超过9、超过10、超过100或超过1000kg的量的一种或多种进料糖。在一些实施方案中，所述方法包括加热水性组合物，所述水性组合物包含不超过0.5、1、2、3、4、5、6、7、9、10、100、1000或1500kg的量的一种或多种进料糖。在一些实施方案中，所述方法包括加热水性组合物，所述水性组合物包含超过1kg的量的一种或多种进料糖。b.催化剂
366.在一些实施方案中，本文提供的催化剂包括一种或多种酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂包括矿物酸；羧酸；氨基酸；磺酸；硼酸；膦酸；次膦酸；硫酸；磷酸；聚(苯乙烯磺酸
‑
共
‑
乙烯基苄基
‑
咪唑鎓硫酸盐
‑
共
‑
二乙烯基苯)；聚(苯乙烯磺酸
‑
共
‑
二乙烯基苯)；( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸；2
‑
吡啶磺酸；3
‑
吡啶磺酸；8
‑
羟基
‑5‑
喹啉磺酸水合物；α
‑
羟基
‑2‑
吡啶甲烷磺酸；(β)
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸；丁基膦酸；联苯基次膦酸；己基膦酸；甲基膦酸；苯基次膦酸；苯基膦酸；叔丁基膦酸；ss)
‑
vapol磷酸氢酯；6
‑
喹啉磺酸；3
‑
(1
‑
吡啶并)
‑1‑
丙烷磺酸盐；2
‑
(2
‑
吡啶基)乙烷磺酸；3
‑
(2
‑
吡啶基)
‑
5,6
‑
联苯基
‑
1,2,4
‑
三嗪
‑
p,p'
‑
二磺酸单钠盐水合物；1,1'
‑
联萘
‑
2,2'
‑
二基
‑
磷酸氢盐；双(4
‑
甲氧基苯基)次膦酸；苯基(3,5
‑
二甲苯基)次膦酸；l
‑
磺基丙氨酸一水合物；乙酸；丙酸；丁酸；谷氨酸；赖氨酸；乙烷二磺酸；乙烷磺酸；羟乙磺酸；同型磺基丙氨酸；hepbs(n
‑
(2
‑
羟乙基)哌嗪
‑
n'
‑
(4
‑
丁烷磺酸))；hepes(4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙烷磺酸)；2
‑
羟基
‑3‑
吗啉代丙烷磺酸；2
‑
(n
‑
吗啉代)乙烷磺酸；甲烷磺酸；甲磺烟肼；萘
‑1‑
磺酸；萘
‑2‑
磺酸；全氟丁烷磺酸；6
‑
磺基奎诺糖；三氟甲磺酸；2
‑
氨基乙烷磺酸；苯甲酸；氯乙酸；三氟乙酸；己酸；庚酸；辛酸；壬酸；月桂酸；棕榈酸；硬脂酸；花生酸；天冬氨酸；谷氨酸；丝氨酸；苏氨酸；谷氨酰胺；半胱氨酸；甘氨酸；脯氨酸；丙氨酸；缬氨酸；异亮氨酸；亮氨酸；甲硫氨酸；苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸；聚合酸；碳载酸；或其任何组合。
367.在一些实施方案中，本文提供的催化剂包括：( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸；2
‑
吡啶磺酸；3
‑
吡啶磺酸；8
‑
羟基
‑5‑
喹啉磺酸水合物；α
‑
羟基
‑2‑
吡啶甲烷磺酸；(β)
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸；丁基膦酸；联苯基次膦酸；己基膦酸；甲基膦酸；苯基次膦酸；苯基膦酸；叔丁基膦酸；ss)
‑
vapol磷酸氢酯；6
‑
喹啉磺酸；3
‑
(1
‑
吡啶并)
‑1‑
丙烷磺酸盐；2
‑
(2
‑
吡啶基)乙烷磺酸；3
‑
(2
‑
吡啶基)
‑
5,6
‑
联苯基
‑
1,2,4
‑
三嗪
‑
p,p'
‑
二磺酸单钠盐水合物；1,1'
‑
联萘
‑
2,2'
‑
二基
‑
磷酸氢盐；双(4
‑
甲氧基苯基)次膦酸；苯基(3,5
‑
二甲苯基)次膦酸；l
‑
磺基丙氨酸一水合物；聚(苯
乙烯磺酸
‑
共
‑
二乙烯基苯)；赖氨酸；乙烷二磺酸；乙烷磺酸；羟乙磺酸；同型磺基丙氨酸；hepbs(n
‑
(2
‑
羟乙基)哌嗪
‑
n'
‑
(4
‑
丁烷磺酸))；hepes(4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙烷磺酸)；2
‑
羟基
‑3‑
吗啉代丙烷磺酸；2
‑
(n
‑
吗啉代)乙烷磺酸；甲烷磺酸；甲磺烟肼；萘
‑1‑
磺酸；萘
‑2‑
磺酸；全氟丁烷磺酸；6
‑
磺基奎诺糖；三氟甲磺酸；2
‑
氨基乙烷磺酸；苯甲酸；氯乙酸；三氟乙酸；己酸；庚酸；辛酸；壬酸；月桂酸；棕榈酸；硬脂酸；花生酸；天冬氨酸；谷氨酸；丝氨酸；苏氨酸；谷氨酰胺；半胱氨酸；甘氨酸；脯氨酸；丙氨酸；缬氨酸；异亮氨酸；亮氨酸；甲硫氨酸；苯丙氨酸；酪氨酸；色氨酸；或其任何组合。
368.在一些实施方案中，本文提供的催化剂是( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是2
‑
吡啶磺酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是3
‑
吡啶磺酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是8
‑
羟基
‑5‑
喹啉磺酸水合物。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是α
‑
羟基
‑2‑
吡啶甲烷磺酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是(β)
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是丁基膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是联苯基次膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是己基膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是甲基膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是苯基次膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是苯基膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是叔丁基膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是ss)
‑
vapol磷酸氢酯。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是6
‑
喹啉磺酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是3
‑
(1
‑
吡啶并)
‑1‑
丙烷磺酸盐。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是2
‑
(2
‑
吡啶基)乙烷磺酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是3
‑
(2
‑
吡啶基)
‑
5,6
‑
联苯基
‑
1,2,4
‑
三嗪
‑
p,p'
‑
二磺酸单钠盐水合物。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是1,1'
‑
联萘
‑
2,2'
‑
二基
‑
磷酸氢盐。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是双(4
‑
甲氧基苯基)次膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是苯基(3,5
‑
二甲苯基)次膦酸。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是l
‑
磺基丙氨酸一水合物。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是聚(苯乙烯磺酸
‑
共
‑
二乙烯基苯)。在一些实施方案中，本文提供的催化剂是赖氨酸。
369.在一些实施方案中，催化剂是乙烷二磺酸。在一些实施方案中，催化剂是乙烷磺酸。在一些实施方案中，催化剂是羟乙磺酸。在一些实施方案中，催化剂是同型磺基丙氨酸。在一些实施方案中，催化剂是hepbs(n
‑
(2
‑
羟乙基)哌嗪
‑
n'
‑
(4
‑
丁烷磺酸))。在一些实施方案中，催化剂是hepes(4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙烷磺酸)。在一些实施方案中，催化剂是2
‑
羟基
‑3‑
吗啉代丙烷磺酸。在一些实施方案中，催化剂是2
‑
(n
‑
吗啉代)乙烷磺酸。在一些实施方案中，催化剂是甲烷磺酸。在实施方案中，催化剂是萘
‑1‑
磺酸。在一些实施方案中，催化剂是一些实施方案，催化剂是甲磺烟肼。在一些萘
‑2‑
磺酸。在一些实施方案中，催化剂是全氟丁烷磺酸。在一些实施方案中，催化剂是6
‑
磺基奎诺糖。在一些实施方案中，催化剂是三氟甲磺酸。在一些实施方案中，催化剂是2
‑
氨基乙烷磺酸。在一些实施方案中，催化剂是苯甲酸。在一些实施方案中，催化剂是氯乙酸。在一些实施方案中，催化剂是三氟乙酸。在一些实施方案中，催化剂是己酸。在一些实施方案中，催化剂是庚酸。在一些实施方案中，催化剂是辛酸。在一些实施方案中，催化剂是壬酸。在一些实施方案中，催化剂是月桂酸。在一些实施方案中，催化剂是棕榈酸。在一些实施方案中，催化剂是硬脂酸。在一些实施方案中，催化剂是花生酸。在一些实施方案中，催化剂是天冬氨酸。在一些实施方案中，催化剂是谷氨酸。在一些实施方案中，催化剂是丝氨酸。在一些实施方案中，催化剂是苏氨酸。在一些实施方
案中，催化剂是谷氨酰胺。在一些实施方案中，催化剂是半胱氨酸。在一些实施方案中，催化剂是甘氨酸。在一些实施方案中，催化剂是脯氨酸。在一些实施方案中，催化剂是丙氨酸。在一些实施方案中，催化剂是缬氨酸。在一些实施方案中，催化剂是异亮氨酸。在一些实施方案中，催化剂为亮氨酸。在一些实施方案中，催化剂是甲硫氨酸。在一些实施方案中，催化剂是苯丙氨酸。在一些实施方案中，催化剂是酪氨酸。在一些实施方案中，催化剂是色氨酸。
370.在一些实施方案中，本文提供的催化剂是wo 2016122887中公开的聚合催化剂或碳载催化剂，将其通过引用以其整体且关于其公开内容特此并入。
371.在一些实施方案中，本文提供的催化剂以按干重计为所述一种或多种进料糖的约0.01％至约5％、约0.02％至约4％、约0.03％至约3％或约0.05％至约2％的量存在。在一些实施方案中，本文提供的催化剂以按干重计为所述一种或多种进料糖的约1％至2％的量存在。在一些实施方案中，本文提供的催化剂以按干重计为所述一种或多种进料糖的约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％、约2.0％、约2.1％、约2.2％、约2.3％、约2.4％、约2.5％、约2.6％、约2.7％、约2.8％、约2.9％或约3.0％的量存在。
372.在一些实施方案中，本文提供的催化剂以按干重计为水性组合物的约0.01％至约5％、约0.02％至约4％、约0.03％至约3％或约0.05％至约2％的量存在。在一些实施方案中，本文提供的催化剂以按干重计为水性组合物的约1％至2％的量存在。在一些实施方案中，本文提供的催化剂以按干重计为水性组合物的约0.8％、约0.9％、约1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％、约2.0％、约2.1％、约2.2％、约2.3％、约2.4％、约2.5％、约2.6％、约2.7％、约2.8％、约2.9％或约3.0％的量存在。
373.在一些实施方案中，本文提供的催化剂是两种或更多种不同催化剂的组合。在一些实施方案中，催化剂包括可回收催化剂(如树脂和聚合催化剂)和不可回收催化剂。在一些实施方案中，在催化剂包括至少两种不同的催化剂的情况下，每种催化剂以本文提供的量存在。在其他实施方案中，在催化剂包括至少两种不同的催化剂的情况下，所述至少两种不同的催化剂合计以本文提供的量存在。
374.在一些实施方案中，将催化剂以干燥形式添加到水性组合物中。在其他实施方案中，将催化剂以湿形式(如在水性溶液中)添加到水性组合物中。在一些实施方案中，在添加水之前将催化剂与所述一种或多种进料糖合并。在其他实施方案中，将催化剂在其与所述一种或多种进料糖合并之前溶解于水中。在一些实施方案中，本文提供的方法包括通过将呈脱水物形式的所述一种或多种进料糖和呈湿形式的催化剂(例如，作为水性溶液)合并来产生水性组合物。c.水的添加
375.在一些实施方案中，制造寡糖制剂的方法包括添加水以形成水性组合物。在一些实施方案中，水性组合物中的全部或部分水作为游离水添加。在其他实施方案中，水性组合物中的全部水作为键合水(例如，在糖一水合物或二水合物中)添加。在一些实施方案中，水性组合物中的全部水作为单糖一水合物(如葡萄糖一水合物)中的键合水添加。在某些实施方案中，水性组合物中的全部或部分水随着催化剂(即，经由催化剂溶液)添加。d.水含量
376.随着制造寡糖制剂的方法的进行，可以通过反应产生水。例如，在一些实施方案中，水(i)随着糖苷键的形成，(ii)随着脱水亚基的形成，或(iii)通过其他机制或来源而产生。由于糖缩合反应和脱水反应两者都涉及水，因此在一些实施方案中，水含量影响寡糖制剂的组成。
377.此外，在一些实施方案中，水含量影响水性组合物的粘度，这进而可能影响水性组合物的混合有效性。例如，在一些实施方案中，过于粘的水性组合物可能导致水性组合物中不期望的不均匀催化剂分布。此外，在一些实施方案中，非常低的水含量可能导致水性组合物的固化，这阻止了有效混合。另一方面，在一些其他实施方案中，极高的水含量可能阻碍糖缩合反应并降低脱水亚基的水平。因此，本公开文本描述了用于制造寡糖制剂的合适的水含量。
378.在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法包括形成和/或加热水性组合物。在一些实施方案中，水性组合物包含按总重量计约0％至约80％、约0％至约70％、约0％至约60％、约0％至约50％、约0％至约40％、约0％至约35％、约0％至约30％、约0％至约25％、约0％至约20％、约0％至约19％、约0％至约18％、约0％至约17％、约0％至约16％、约0％至约15％、约0％至约14％、约0％至约13％、约0％至约12％、约0％至约11％、约0％至约10％、约0％至约9％、约0％至约8％、约0％至约7％、约0％至约6％、约0％至约5％、约0％至约4％、约0％至约3％、约0％至约2％或约0％至约1％的水。在一些实施方案中，水性组合物包含按总重量计约1％至约20％、约1％至约18％、约1％至约16％、约1％至约14％、约1％至约12％、约1％至约10％、约1％至约8％、约1％至约6％或约1％至约4％的水。在一些实施方案中，水性组合物包含按总重量计约3％至约16％、约3％至约14％、约3％至约12％、约3％至约10％、约3％至约8％、约3％至约6％、约5％至约16％、约5％至约14％、约5％至约12％、约5％至约10％、约7％至约16％、约7％至约14％、约7％至约12％、约7％至约10％或约8％至约10％的水。在一些实施方案中，水性组合物包含按总重量计约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％或约15％的水。在一些实施方案中，水性组合物包含按总重量计约9％的水。然而，应该理解，水性组合物中水的量可以基于反应条件和所使用的具体催化剂来调整。在一些实施方案中，在反应开始时(例如，在加热进料糖之前)测量如上所公开的水性组合物中的水含量。在一些实施方案中，在聚合反应或缩合反应结束时测量如上所公开的水性组合物中的水含量。在一些实施方案中，将如上所公开的水性组合物中的水含量作为反应开始和反应结束时的平均水含量来测量。
379.在某些实施方案中，本文所述的方法还可以包括在一段时间内监测水性组合物中存在的水的含量和/或水与糖或催化剂的比率。在一些实施方案中，所述方法还包括例如通过蒸馏除去水性组合物中的至少一部分水。可以使用本领域已知的任何方法从水性组合物中除去水，所述任何方法包括例如通过真空过滤、真空蒸馏、加热、蒸汽、热空气和/或蒸发。
380.在一些实施方案中，本文所述的寡糖制剂具有吸湿性。因此，在一些实施方案中，进料糖和聚合中形成的寡糖的吸湿性可能影响从水性组合物中除去水的速率。
381.在一些实施方案中，本文所述的方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得水性组合物中的水含量是按总重量计约1％至约20％、约1％至约18％、约1％至约16％、约1％至约14％、约1％至约12％、约1％至约10％、约1％至约8％、约2％至约16％、约2％至
约14％、约2％至约12％、约2％至约10％、约2％至约8％、约2％至约6％、约4％至约16％、约4％至约14％、约4％至约12％、约4％至约10％、约4％至约8％、约6％至约16％、约6％至约12％、约6％至约10％或约6％至约8％。在一些实施方案中，所述方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得水性组合物中的水含量是按总重量计约2％至约10％、约2％至约8％或约4％至约8％。在一些实施方案中，所述方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得水性组合物中的水含量是按总重量计约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％。在一些实施方案中，所述方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得水性组合物中的水含量是按总重量计约4％至约8％。在一些实施方案中，所述方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得在聚合反应和/或缩合反应结束时，水性组合物中的水含量是如上所公开的水含量。在一些实施方案中，所述方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得在聚合反应和/或缩合反应开始时，水性组合物中的水含量是如上所公开的水含量。在一些实施方案中，所述方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得在聚合反应和/或缩合反应开始和结束时的水性组合物中的平均水含量在如上所公开的范围内。在一些实施方案中，所述方法包括除去水性组合物中的至少一部分水，使得在整个聚合反应和/或缩合反应中，水性组合物中的水含量保持在如上所公开的范围内。
382.在一些实施方案中，本文所述的方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得水性组合物中的水含量是按总重量计约1％至约20％、约1％至约18％、约1％至约16％、约1％至约14％、约1％至约12％、约1％至约10％、约1％至约8％、约2％至约16％、约2％至约14％、约2％至约12％、约2％至约10％、约2％至约8％、约2％至约6％、约4％至约16％、约4％至约14％、约4％至约12％、约4％至约10％、约4％至约8％、约6％至约16％、约6％至约12％、约6％至约10％或约6％至约8％。在一些实施方案中，所述方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得水性组合物中的水含量是按总重量计约2％至约10％、约2％至约8％或约4％至约8％。在一些实施方案中，所述方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得水性中的水含量是按总重量计约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％。在一些实施方案中，所述方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得水性组合物中的水含量是按总重量计约4％至约8％。在一些实施方案中，所述方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得在聚合反应和/或缩合反应结束时，水性组合物中的水含量是如上所公开的水含量。在一些实施方案中，所述方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得在聚合反应和/或缩合反应开始时，水性组合物中的水含量是如上所公开的水含量。在一些实施方案中，所述方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得在聚合反应和/或缩合反应开始和结束时的水性组合物中的平均水含量在如上所公开的范围内。在一些实施方案中，所述方法包括在水性组合物中添加至少一部分水，使得在整个聚合反应和/或缩合反应中，水性组合物中的水含量保持在如上所公开的范围内。
383.在一些实施方案中，寡糖的聚合度和/或寡糖制剂内的脱水亚基的量和类型可以通过调整或控制在整个制造过程中存在于水性组合物中的水含量来调节。例如，在一些实施方案中，通过降低水含量来增加寡糖的聚合度和脱水亚基的量。
384.因此，在一些实施方案中，本文所述的方法包括水含量的过程中控制(ipc)，其可以包括监测水含量、维持水含量、增加水含量、降低水含量或其任何组合。在一些实施方案中，ipc工艺包括在将水性组合物加热至本文所述的温度的同时保持水含量。在一些实施方
案中，所述方法包括将水含量保持足以诱导聚合的时间。在一些实施方案中，所述方法包括通过添加水或从水性组合物中除去水或两者来将水含量保持在所公开的范围内。在一些实施方案中，所述方法包括通过蒸馏将水含量保持在所公开的范围内。在一些实施方案中，所述方法包括通过真空蒸馏将水含量保持在所公开的范围内。在一些实施方案中，所述方法包括通过在大气压下蒸馏将水含量保持在所公开的范围内。
385.在一些实施方案中，将水性组合物的水含量保持在按总重量计约1％至约20％、约1％至约18％、约1％至约16％、约1％至约14％、约1％至约12％、约1％至约10％、约1％至约8％、约2％至约16％、约2％至约14％、约2％至约12％、约2％至约10％、约2％至约8％、约2％至约6％、约4％至约16％、约4％至约14％、约4％至约12％、约4％至约10％、约4％至约8％、约6％至约16％、约6％至约12％、约6％至约10％或约6％至约8％的范围内。在一些实施方案中，将水性组合物的水含量保持在按总重量计约2％至约10％、约2％至约8％或约4％至约8％的范围内。在一些实施方案中，将水性组合物的水含量保持在按总重量计约2％至约8％的范围内。
386.水性组合物的水含量可以通过多种分析方法和仪器来测定。在一些实施方案中，水含量通过蒸发方法(例如，干燥失重技术)、蒸馏方法或化学反应方法(例如，卡尔
·
费歇尔滴定法)来测定。在一些实施方案中，水含量通过诸如水分分析仪等分析仪器来测定。在一些实施方案中，水含量通过卡尔
·
费歇尔滴定法来测定。
387.在一些实施方案中，在反应期间测量水性组合物的水含量，并且将其用于实施水含量的过程中控制(ipc)。在某些实施方案中，反应的水含量通过卡尔
‑
费歇尔滴定法、ir光谱法、nir光谱法、电导率、粘度、密度、混合扭矩或混合能来测量。在一些实施方案中，使用反应的水含量的测量来控制主动调整反应的水含量的装置，如水添加泵或流量阀。
388.不受理论的束缚，据信在糖聚合反应和/或缩合反应期间的水含量可以影响本文所述的寡糖制剂中脱水亚基的水平。例如，如图30中所展示，在一些实施方案中，较高的水含量与较低水平的脱水亚基相关联。在一些实施方案中，较低的反应温度可以与较低水平的脱水亚基含量相关联。e.温度
389.在一些实施方案中，寡糖的聚合度和/或寡糖制剂内的脱水亚基的量和类型可以通过调整水性组合物加热达到的温度来调节。在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法包括将水性组合物加热至约80℃至约250℃、约90℃至约200℃、约100℃至约200℃、约100℃至约180℃、约110℃至约170℃、约120℃至约160℃、约130℃至约150℃或约135℃至约145℃的温度。在一些实施方案中，制造寡糖制剂的方法包括将水性组合物加热至约100℃至约200℃、约100℃至约180℃、约110℃至约170℃、约120℃至约160℃、约130℃至约150℃或约135℃至约145℃的温度。在一些实施方案中，制造寡糖制剂的方法包括将水性组合物加热至约135℃至约145℃的温度。在其他实施方案中，制造寡糖制剂的方法包括将水性组合物加热至约125℃至约135℃的温度。f.反应时间
390.在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法包括将水性组合物加热足够的时间。在一些实施方案中，根据本文所述的方法制造的寡糖的聚合度可以通过反应时间来调节。
391.在一些实施方案中，足够的时间通过小时数来规定。例如，在一些实施方案中，足够的时间是至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时、至少4小时、至少5小时、至少6小时、至少7小时、至少8小时、至少9小时或至少10小时。在一些实施方案中，足够的时间是约1至约24小时、约1至约16小时、约1至约8小时、约1至约4小时、约1至约3小时、约1至约2小时、约2至约12小时、约2至约10小时、约2至约8小时、约2至约6小时、约2至约4小时、约3至约8小时、约3至约6小时、约3至约5小时或约3至约4小时。
392.在一些实施方案中，足够的时间通过测量寡糖制剂的一种或多种化学或物理特性(例如，水含量、粘度、分子量、脱水亚基含量和/或聚合度的分布)来确定。
393.在一些实施方案中，在聚合期间监测寡糖制剂的分子量。在一些实施方案中，所述方法包括将水性组合物加热足以使所述水性组合物达到如本文所述的数均分子量或重均分子量的时间。在某些实施方案中，所述方法包括将水性组合物加热足以使所述水性组合物达到在以下范围内的数均分子量的时间：约300至约5000g/mol、约500至约5000g/mol、约700至约5000g/mol、约500至约2000g/mol、约700至约2000g/mol、约700至约1500g/mol、约300至约1500g/mol、约300至约2000g/mol、约400至约1000g/mol、约400至约900g/mol、约400至约800g/mol、约500至约900g/mol或约500至约800g/mol。在某些实施方案中，所述方法包括将水性组合物加热足以使所述水性组合物达到约500至约2000g/mol的数均分子量的时间。在某些实施方案中，所述方法包括将水性组合物加热足以使所述水性组合物达到在以下范围内的重均分子量的时间：约300至约5000g/mol、约500至约5000g/mol、约700至约5000g/mol、约500至约2000g/mol、约700至约2000g/mol、约700至约1500g/mol、约300至约1500g/mol、约300至约2000g/mol、约400至约1300g/mol、约400至约1200g/mol、约400至约1100g/mol、约500至约1300g/mol、约500至约1200g/mol、约500至约1100g/mol、约600至约1300g/mol、约600至约1200g/mol或约600至约1100g/mol。在某些实施方案中，所述方法包括将水性组合物加热足以使所述水性组合物达到约700至约3000g/mol的重均分子量的时间。
394.在一些实施方案中，足够的时间是水性组合物在对应的反应温度下达到反应平衡所需的时间。因此，在一些实施方案中，所述方法包括将水性组合物加热足以使所述水性组合物达到平衡的时间。例如，在一些实施方案中，平衡通过测量水性组合物的分子量、粘度或dp分布来确定。
395.在某些实施方案中，平衡通过测量水性组合物的数均分子量或重均分子量来确定。在一些实施方案中，平衡通过随时间推移基本上保持不变的水性组合物的数均分子量或重均分子量来确定。在一些实施方案中，平衡通过在一段时间内小于一定百分比的水性组合物的数均分子量或重均分子量的变化来确定。在一些实施方案中，水性组合物的分子量通过hplc或sec来测量。
396.在一些实施方案中，平衡通过在一段时间内小于25％、小于20％、小于15％、小于10％或小于5％的水性组合物的数均分子量或重均分子量的变化来确定。在一些实施方案中，平衡通过在3小时、2小时、1小时、30分钟、20分钟或10分钟的时间段内水性组合物的数均分子量或重均分子量的变化来确定。在一些实施方案中，平衡通过在1小时的时间段内小于15％的水性组合物的重均分子量的变化来确定。
397.在某些实施方案中，平衡通过测量水性组合物的粘度来确定。在一些实施方案中，
平衡通过随时间推移基本上保持不变的水性组合物的粘度来确定。在一些实施方案中，平衡通过在一段时间内小于一定百分比的水性组合物的粘度的变化来确定。在一些实施方案中，水性组合物的粘度通过粘度计或流变仪来测量。
398.在一些实施方案中，平衡通过在一段时间内小于25％、小于20％、小于15％、小于10％或小于5％的水性组合物的粘度的变化来确定。在一些实施方案中，平衡通过在3小时、2小时、1小时、30分钟、20分钟或10分钟的时间段内水性组合物的粘度的变化来确定。在一些实施方案中，平衡通过在1小时的时间段内小于15％的水性组合物的粘度的变化来确定。
399.在某些实施方案中，平衡通过测量水性组合物的dp分布来确定。在一些实施方案中，平衡通过随时间推移基本上保持不变的水性组合物的dp分布来确定。在一些实施方案中，水性组合物的dp分布的变化通过计算一系列km来测定，其中其中[h2o]表示摩尔水浓度(mol/l)，并且[dp1]、[dpm
‑1]和[dpm]分别表示dp1、dpm
‑1和dpm级分中寡糖的摩尔浓度(mol/l)。例如，根据上式，k2等于[dp2][h2o]/[dp1][dp1]。在一些实施方案中，m是大于1且小于n的整数。在一些实施方案中，m是大于1且小于或等于n的整数。在一些实施方案中，m等于n。在一些实施方案中，m是2、3、4、5、6、7、8、9或10。
[0400]
在一些实施方案中，dp1、dpm
‑
1和dpm级分中寡糖的浓度通过sec、hplc、fff、a4f、质谱法或任何其他合适的方法来测定。在一些实施方案中，dp1、dpm
‑
1和dpm级分中寡糖的浓度通过sec(如gpc)来测定。在一些实施方案中，dp1、dpm
‑
1和dpm级分中寡糖的浓度通过质谱法(如gc
‑
ms、lc
‑
ms/ms和maldi
‑
ms)来测定。在一些实施方案中，dp1、dpm
‑
1和dpm级分中寡糖的浓度通过hplc来测定。在一些实施方案中，水浓度通过蒸发方法(例如，干燥失重技术)、蒸馏方法或通过化学反应方法(例如，卡尔
·
费歇尔滴定法)来测定。在一些实施方案中，水浓度通过任何合适的分析仪器(如水分分析仪)来测定。
[0401]
在一些实施方案中，所述方法包括计算一系列的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少15个、至少20个、至少30个、至少40个或至少50个km数。在一些实施方案中，所述方法包括计算一系列的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个或至少15个km数。在一些实施方案中，所述方法包括计算约3、4、5、6、7、8、9、10或15个km数。在一些实施方案中，所述方法包括计算k2至k4、k2至k5、k2至k6、k2至k7、k2至k8、k2至k9、k2至k10、k2至k11、k2至k12、k2至k13、k2至k14、k2至k15、k3至k5、k3至k6、k3至k7、k3至k8、k3至k9、k3至k10、k3至k11、k3至k12、k3至k13、k3至k14或k3至k15。在某些实施方案中，所述方法包括计算k2至k4或k3至k5。
[0402]
在一些实施方案中，km的值取决于温度、水浓度和/或进料糖的量和类型。在一些实施方案中，km是约0.1至约100、约0.1至约90、约0.1至约80、约0.1至约70、约0.1至约60、约0.1至约50、约0.1至约40、约0.1至约30、约0.1至约25、约0.1至约20或约0.1至约15。在一些实施方案中，km是约1至约100、约1至约90、约1至约80、约1至约70、约1至约60、约1至约50、约1至约40、约1至约30、约1至约25、约1至约20、约1至约15、约1至约10、约5至约50、约5至约40、约5至约30、约5至约20、约5至约15或约5至约10。在一些具体实施方案中，km是约1至约15或约5至约15。
[0403]
在一些实施方案中，确定所计算的一系列km的平均值、标准偏差和/或相对标准偏差。如本文所用，相对标准偏差以百分比表示，并且通过将标准偏差乘以100并将该乘积除
以平均值而获得。
[0404]
在一些实施方案中，平衡通过小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％的一系列km的相对标准偏差来确定。在一些实施方案中，平衡通过小于15％、小于10％或小于5％的一系列km的相对标准偏差来确定。g.反应后步骤
[0405]
在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法还包括在将水性组合物在一定温度和足够的时间下加热之后的一个或多个另外的处理步骤。在一些实施方案中，另外的处理步骤包括例如分离(如色谱分离)、稀释、浓缩、干燥、过滤、脱矿质、提取、脱色或其任何组合。例如，在一些实施方案中，所述方法包括稀释步骤和脱色步骤。在一些实施方案中，所述方法包括过滤步骤和干燥步骤。
[0406]
在一些实施方案中，所述方法包括稀释步骤，其中将水添加到寡糖制剂中以制备寡糖制剂的浆液。在一些实施方案中，浆液中寡糖制剂的浓度是约5％至约80％、约10％至约70％、约10％至约60％、约10％至约50％、约10％至约40％、约10％至约30％或约15％至约25％。在其他实施方案中，所述方法不包括稀释步骤，而是使寡糖制剂固化。在一些实施方案中，所述方法包括过滤步骤。在一些实施方案中，所述方法包括通过过滤使催化剂再循环。
[0407]
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括脱色步骤。在一些实施方案中，可以使用本领域已知的任何方法对寡糖制剂进行脱色步骤，所述任何方法包括例如用吸收剂活性炭处理、色谱法(例如，使用离子交换树脂)、氢化和/或过滤(例如，微滤)。
[0408]
在一些实施方案中，使寡糖制剂与材料接触以除去盐、矿物质和/或其他离子物质。在某些实施方案中，使寡糖制剂流动通过阴离子/阳离子交换柱对。在一个实施方案中，阴离子交换柱含有呈氢氧化物形式的弱碱交换树脂，并且阳离子交换柱含有呈质子化形式的强酸交换树脂。
[0409]
在一些实施方案中，所述方法包括浓缩步骤。在一些实施方案中，浓缩步骤产生具有增加的浓度的寡糖制剂。例如，在一些实施方案中，浓缩步骤包括蒸发(例如，真空蒸发)、干燥(例如，冷冻干燥和喷雾干燥)或其任何组合。
[0410]
在一些实施方案中，所述方法包括离析步骤，其中分离寡糖制剂的至少一部分。在一些实施方案中，离析步骤包括结晶、沉淀、过滤(例如，真空过滤)和离心或其任何组合。
[0411]
在一些实施方案中，所述方法包括分离步骤。在一些实施方案中，分离步骤包括将寡糖制剂的至少一部分与催化剂的至少一部分、与未反应的进料糖的至少一部分或与两者分离。在一些实施方案中，分离步骤包括过滤、色谱法、差别溶解度、沉淀、提取或离心。h.反应器
[0412]
考虑反应温度、ph、压力和其他因素，本文所述的方法可以包括使用适用于糖缩合的一个或多个反应器。在一些实施方案中，所述一个或多个合适的反应器包括分批补料搅拌反应器、分批搅拌反应器、连续流搅拌反应器、连续活塞流柱式反应器、研磨(attrition)反应器或具有由电磁场引起的搅拌的反应器。在一些实施方案中，所述一个或多个合适的反应器包括以下文献中所述的反应器：ryu,s.k.和lee,j.m.,bioconversion of waste cellulose by using an attrition bioreactor,biotechnol.bioeng.25:53
‑
65(1983)；
gusakov,a.v.和sinitsyn,a.p.,kinetics of the enzymatic hydrolysis of cellulose:1.a mathematical model for a batch reactor process,enz.microb.technol,7:346
‑
352(1985)；gusakov,a.v.,sinitsyn,a.p.,davydkin,i.y.,davydkin,v.y.,protas,o.v.,enhancement of enzymatic cellulose hydrolysis using a novel type of bioreactor with intensive stirring induced by electromagnetic field,appl.biochem.biotechnol.,56:141
‑
153(1996)；或fernanda de castilhos corazza,flavio faria de moraes,gisella maria zanin和ivo neitzel,optimal control in fed
‑
batch reactor for the cellobiose hydrolysis,acta scientiarum.technology,25:33
‑
38(2003)。
[0413]
在一些实施方案中，所述一个或多个合适的反应器包括用于水解和/或发酵的流化床、上流式污泥床(upflow blanket)、固定化或挤出机型反应器。在一些实施方案中，所述一个或多个合适的反应器包括开放式反应器、封闭式反应器或两者。在一些实施方案中，在所述方法包括连续过程的情况下，所述一个或多个合适的反应器可以包括连续混合器，如螺旋式混合器。i.工艺
[0414]
在一些实施方案中，本文所述的制造寡糖制剂的方法包括分批工艺、连续工艺或两者。在一些实施方案中，制造寡糖制剂的方法包括分批工艺。例如，在分批工艺的一些实施方案中，寡糖制剂的后续批次的制造直到完成当前批次才开始。在一些实施方案中，在分批工艺期间，从反应器中移除全部或大量的寡糖制剂。在一些实施方案中，在分批工艺期间，在将水性组合物加热至所描述的温度之前或在诱导聚合之前，将所有进料糖和催化剂在反应器中合并。在一些实施方案中，在分批工艺期间，在添加催化剂之前、之后或同时添加进料糖。
[0415]
在一些实施方案中，分批工艺是分批补料工艺，其中不将所有进料糖同时添加到反应器中。在分批补料工艺的一些实施方案中，在聚合期间或在将水性组合物加热至所描述的温度之后，将至少一部分进料糖添加到反应器中。在分批补料工艺的一些实施方案中，在聚合期间或在将水性组合物加热至所描述的温度之后，将按重量计至少10％、20％、30％、40％、50％或60％的进料糖添加到反应器中。
[0416]
在一些实施方案中，制造寡糖制剂的方法包括连续工艺。例如，在连续工艺的一些实施方案中，反应器的内容物连续地流动通过反应器。在一些实施方案中，同时进行进料糖与催化剂的合并和寡糖制剂的至少一部分的移除。
[0417]
在一些实施方案中，制造寡糖制剂的方法包括单锅或多锅工艺。例如，在单锅工艺的一些实施方案中，聚合在单一反应器中进行。对于另一个例子，在多锅工艺的一些实施方案中，聚合在多于一个反应器中进行。在多锅工艺的一些实施方案中，所述方法包括2个、3个或更多个反应器。在多锅工艺的一些实施方案中，所述方法包括合并步骤，其中将来自两个或更多个反应器的聚合产物合并。iv.包含寡糖制剂的营养组合物
[0418]
本文提供了包含寡糖制剂的营养组合物。在某些实施方案中，本文提供了包含所描述的寡糖制剂的营养组合物，其中可以选择性地测定和/或检测营养组合物内寡糖制剂的存在和/或浓度。表现出对微生物群落的复杂功能调节的寡糖制剂可以是营养组合物的
重要组分。因此，营养组合物内寡糖制剂的存在和/或浓度可以是在营养组合物的品质控制和制造过程中需要测量的因素之一。因此，所提供的营养组合物在品质控制和制造目的方面是有利的，因为可以选择性地测定和/或检测寡糖制剂的存在和/或浓度。例如，在一些实施方案中，寡糖制剂的存在和浓度可以通过测量与含脱水亚基寡糖相关联的信号来测定和/或检测。
[0419]
在一些实施方案中，营养组合物是动物饲料组合物。在一些实施方案中，营养组合物包含基础营养组合物。a.基础营养组合物
[0420]
在一些实施方案中，基础营养组合物包含不同于寡糖制剂的碳水化合物来源。例如，在一些实施方案中，基础营养组合物包含天然存在的碳水化合物来源，如淀粉和植物纤维。在一些实施方案中，基础营养组合物包含淀粉。在一些实施方案中，基础营养组合物包含植物纤维。
[0421]
在一些实施方案中，基础营养组合物包含来源于以下的一种或多种碳水化合物：种子、根、块茎、玉米、木薯淀粉、竹芋、小麦、稻、马铃薯、甘薯、西米、豆类(例如，蚕豆、小扁豆、绿豆、豌豆和鹰嘴豆)、玉蜀黍、木薯或其他淀粉食品(例如橡子、竹芋、秘鲁胡萝卜、香蕉、大麦、面包果、荞麦、美人蕉、芋属、猪牙花(katakuri)、野葛、黄肉芋、粟、燕麦、块茎酢浆草、波利尼西亚竹芋、高粱、黑麦、芋头、栗子、马蹄和山药)。
[0422]
在一些实施方案中，基础营养组合物包含来源于以下的一种或多种碳水化合物：豆科作物(例如，豌豆、大豆、羽扇豆、青豆和其他豆类)、燕麦、黑麦、芡欧鼠尾草、大麦、水果(例如，无花果、鳄梨、李子、西梅、浆果、香蕉、苹果皮、榅桲和梨)、蔬菜(例如，西兰花、胡萝卜、花椰菜、西葫芦、芹菜、胭脂仙人掌和洋姜)、块根、根用蔬菜(例如，甘薯和洋葱)、车前籽壳、种子(例如，亚麻籽)、坚果(例如，杏仁)、全谷物食品、小麦、玉米麸、木脂素或其任何组合。在一些实施方案中，基础营养组合物包含来源于以下的一种或多种植物纤维：麦麸、甜菜渣、带毛棉籽、大豆壳或其任何组合。
[0423]
在一些实施方案中，基础营养组合物包含少于500ppm、少于400ppm、少于300ppm、少于200ppm、少于100ppm、少于50ppm、少于10ppm、少于5ppm或少于1ppm的脱水亚基或含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，基础营养组合物包含少于50ppm、少于10ppm、少于5ppm或少于1ppm的脱水亚基或含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，基础营养组合物基本上不含脱水亚基。
[0424]
在一些实施方案中，基础营养组合物没有可检测水平的脱水亚基。根据检测或测定的方法，低于一定阈值的脱水亚基水平可能是检测不到的。例如，在一些实施方案中，脱水亚基的可检测水平可以是指基础营养组合物中的至少1000ppm、至少500ppm、至少400ppm、至少300ppm、至少200ppm、至少100ppm、至少50ppm、至少10ppm、至少5ppm或至少1ppm的脱水亚基或含脱水亚基寡糖。
[0425]
在一些实施方案中，基础营养组合物包含多种寡糖。在一些实施方案中，基础营养组合物包含不同于寡糖制剂的糖苷键类型分布。例如，在一些实施方案中，基础营养组合物包含比寡糖制剂更高百分比的α
‑
(1,4)糖苷键联。在一些实施方案中，基础营养组合物中的糖苷键联(如α
‑
(1,4)糖苷键联)能被一种或多种酶消化。在一些实施方案中，基础营养组合物中的糖苷键联比寡糖制剂中的糖苷键联更容易地能被消化和/或水解。
[0426]
在一些实施方案中，基础营养组合物中α
‑
(1,2)糖苷键联、α
‑
(1,3)糖苷键联、α
‑
(1,6)糖苷键联、β
‑
(1,2)糖苷键联、β
‑
(1,3)糖苷键联、β
‑
(1,4)糖苷键联或β
‑
(1,6)糖苷键联的水平比寡糖制剂中对应糖苷键联的水平低至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、至少13％、至少14％或至少15％。在一些实施方案中，基础营养组合物中α
‑
(1,2)糖苷键联、α
‑
(1,3)糖苷键联、α
‑
(1,6)糖苷键联、β
‑
(1,2)糖苷键联、β
‑
(1,3)糖苷键联、β
‑
(1,4)糖苷键联或β
‑
(1,6)糖苷键联的水平比寡糖制剂中对应糖苷键联的水平低至少10％。
[0427]
在一些实施方案中，基础营养组合物中α
‑
(1,4)糖苷键联的水平比寡糖制剂中α
‑
(1,4)糖苷键联的水平高至少50％、至少40％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％、至少15％、至少10％、至少5％或至少2％。在一些实施方案中，基础营养组合物中α
‑
(1,4)糖苷键联的水平比寡糖制剂中α
‑
(1,4)糖苷键联的水平高至少10％。b.动物饲料组合物
[0428]
根据动物的类型和年龄，营养组合物可以以不同的比率包含寡糖制剂和基础营养组合物。例如，可以以适合于动物的类型和年龄的各种比率将寡糖制剂与基础营养组合物合并。在一些实施方案中，寡糖制剂以下述浓度存在于营养组合物中：约1至约10000ppm、约1至约5000ppm、约1至约3000ppm、约1至约2000ppm、约1至约1500ppm、约1至约1000ppm、约1至约500ppm、约1至约250ppm、约1至约100ppm、约10至约5000ppm、约10至约3000ppm、约10至约2000ppm、约10至约1500ppm、约10至约1000ppm、约10至约500ppm、约10至约250ppm、约10至约100ppm、约50至约5000ppm、约50至约3000ppm、约50至约2000ppm、约50至约1500ppm、约50至约1000ppm、约50至约500ppm、约50至约250ppm、约50至约100ppm、约100至约5000ppm、约100至约3000ppm、约100至约2000ppm、约100至约1500ppm、约100至约1000ppm、约100至约500ppm、约100至约400ppm、约100至约300ppm、约100至约200ppm、约200至约5000ppm、约200至约3000ppm、约200至约2500ppm、约200至约2000ppm、约200至约1500ppm、约200至约1000ppm、约200至约500ppm、约500至约5000ppm、约500至约3000ppm、约500至约2500ppm、约500至约2000ppm、约500至约1500ppm或约500至约1000ppm。在一些实施方案中，寡糖制剂以下述浓度存在于营养组合物中：约1至约5000ppm、约1至约1000ppm、约1至约500ppm、约10至约5000ppm、约10至约2000ppm、约10至约1000ppm、约10至约500ppm、约10至约250ppm、约10至约100ppm、约50至约5000ppm、约50至约2000ppm、约50至约1000ppm、约50至约500ppm、约50至约250ppm或约50至约100ppm。在一些实施方案中，寡糖制剂以下述浓度存在于营养组合物中：约1至约5000ppm、约10至约1000ppm、约10至约500ppm或约50至约500ppm。
[0429]
在一些实施方案中，寡糖制剂以下述浓度存在于营养组合物中：大于10ppm、大于50ppm、大于100ppm、大于200ppm、大于300ppm、大于400ppm、大于500ppm、大于600ppm、大于1000ppm或大于2000ppm。在一些实施方案中，寡糖制剂以下述浓度存在于营养组合物中：大于10ppm、大于50ppm、大于100ppm、大于200ppm或大于500ppm。
[0430]
在一些实施方案中，根据动物的类型和年龄，营养组合物还可以包含蛋白质、矿物质(如铜、钙和锌)、盐、必需氨基酸、维生素和/或抗生素。
[0431]
本文还提供了向动物施用包含基础营养组合物和所公开的寡糖制剂的营养组合物的方法。在一些实施方案中，动物选自牛(例如，肉牛和奶牛)、猪、水生动物和家禽。在一些实施方案中，动物是猪，如母猪、仔猪和阉猪。在其他实施方案中，动物是家禽，如鸡、鸭、
火鸡、鹅、鹌鹑和母鸡。在实施方案中，家禽是肉鸡、种鸡或蛋鸡。在一些实施方案中，动物是水生动物，如鲑鱼、鲶鱼、鲈鱼、鳗鱼、罗非鱼、比目鱼、虾和螃蟹。在一些实施方案中，将营养组合物以干燥形式、液体形式、糊剂或其组合施用给动物。在一些实施方案中，施用形式、饲喂率和饲喂时间表可以根据动物的类型和年龄而变化。c.生产营养组合物的方法
[0432]
本发明提供了制造营养组合物的方法，所述方法包括：将寡糖制剂与基础营养组合物合并。在一些实施方案中，寡糖制剂包含含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂包含不同于基础营养组合物的糖苷键类型分布的糖苷键类型分布。
[0433]
在一些实施方案中，寡糖制剂是合成寡糖制剂。在一些实施方案中，合成寡糖制剂包含各自具有选自1至n的不同聚合度的至少n种寡糖级分(dp1至dpn级分)。在一些实施方案中，n是大于或等于2的整数。在一些实施方案中，n是大于2的整数。在一些实施方案中，n是大于或等于3的整数。在一些实施方案中，n是1至100范围内的整数，如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40或50。在一些实施方案中，dp1至dpn级分中的每一种包含如通过质谱法测量的按相对丰度计0.1％至90％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂的dp1和dp2级分各自独立地包含如通过质谱法测量的按相对丰度计约0.1％至约15％或约0.5％至约10％的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，寡糖制剂的dp1和dp2级分各自独立地包含如通过质谱法测量的按相对丰度计在约0.1％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％或1.5％至约8％、9％、10％、11％、12％、15％或20％范围内的含脱水亚基寡糖。在一些实施方案中，n种级分中的每一种中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。在一些实施方案中，至少5、10、20或30种dp级分中寡糖的相对丰度随其聚合度单调降低。
[0434]
在一些实施方案中，制造营养组合物的方法包括将寡糖制剂与基础营养组合物混合。例如，在一些实施方案中，混合可以通过工业共混器和/或混合器(如转鼓式共混器、双锥共混器、带式共混器、v形共混器、剪切混合器和桨式混合器)来进行。
[0435]
在一些实施方案中，制造营养组合物的方法还包括本文所述的品质控制步骤。在一些实施方案中，本文所述的品质控制步骤包括测定营养组合物的样品中信号的水平，并且基于所述信号的水平计算营养组合物中寡糖制剂的浓度。在一些实施方案中，本文所述的品质控制步骤包括通过分析仪器检测营养组合物的样品中的信号，并且基于所述信号的存在或不存在接受或拒绝营养组合物的批次。在一些实施方案中，本文所述的品质控制步骤包括通过分析仪器检测营养组合物的第一样品中的第一信号和营养组合物的第二样品中的第二信号的存在或不存在，并且将所述第一信号和所述第二信号进行比较。在一些实施方案中，所述信号、所述第一信号和/或所述第二信号(i)指示一种或多种含脱水亚基寡糖，(ii)与寡糖的聚合度(dp)分布相关联，或(iii)与寡糖的α
‑
(1,2)糖苷键联、α
‑
(1,3)糖苷键联、α
‑
(1,6)糖苷键联、β
‑
(1,2)糖苷键联、β
‑
(1,3)糖苷键联、β
‑
(1,4)糖苷键联或β
‑
(1,6)糖苷键联相关联。
[0436]
另外，在一些实施方案中，制造营养组合物的方法在进行品质控制步骤之后包括将寡糖制剂与基础营养组合物进一步混合、调整寡糖制剂的水平或其组合。在一些实施方案中，调整寡糖制剂的水平包括将另外的寡糖制剂添加到营养组合物中或从营养组合物中除去一部分寡糖制剂。在一些实施方案中，调整寡糖制剂的水平包括将另外的基础营养组
合物添加到营养组合物中或从营养组合物中除去一部分基础营养组合物。在一些特定实施方案中，调整寡糖制剂的水平包括将另外的寡糖制剂添加到营养组合物中。d.动物饲料预混合物
[0437]
在一些实施方案中，营养组合物包含含有所描述的寡糖制剂的动物饲料预混合物。
[0438]
在一些实施方案中，动物饲料预混合物包含载体材料，所述载体材料可以与寡糖制剂合并以产生动物饲料预混合物。在一些实施方案中，载体材料可以是适合于与营养组合物中的寡糖制剂合并的呈干燥或液体形式的任何材料。在一些实施方案中，载体材料包括干酒糟、粘土、蛭石、硅藻土、壳(如经研磨的稻壳和经研磨的燕麦壳)、二氧化硅(如饲料级硅胶和饲料级煅制二氧化硅)、玉米(如玉米麸质饲料、玉米麸质粉和经碾磨的玉米)或其任何组合。在一些实施方案中，载体材料是经碾磨的玉米。在其他实施方案中，载体材料是经研磨的稻壳或经研磨的燕麦壳。
[0439]
在一些实施方案中，动物饲料预混合物通过将载体材料与寡糖制剂(两者均呈干燥形式)合并而产生。在一些实施方案中，动物饲料预混合物通过将载体材料与寡糖制剂(两者之一呈干燥形式)合并而产生。在一些实施方案中，动物饲料预混合物通过将载体材料与寡糖制剂(两者均呈液体形式)合并而产生。例如，在一些实施方案中，呈液体形式的寡糖制剂是指在溶液中的寡糖，例如寡糖的水性溶液，如浆液。
[0440]
在一些实施方案中，动物饲料预混合物通过将载体材料与包含寡糖制剂的浆液合并而产生。在一些实施方案中，浆液中寡糖制剂的浓度是按重量计至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％。在一些实施方案中，浆液中寡糖制剂的浓度是按重量计约40％至80％、50％至75％或60％至70％。
[0441]
在一些实施方案中，动物饲料预混合物呈粉末(例如，可流动粉末)、泥浆、浆料、粒料形式或液体形式。在一些实施方案中，动物饲料预混合物具有按重量计少于40％、30％、20％、15％、10％或5％的水分含量。在一些实施方案中，动物饲料预混合物具有按重量计少于10％或5％的水分含量。在一些实施方案中，动物饲料预混合物具有按重量计高于5％、10％、15％、20％、25％或30％的水分含量。在另外的实施方案中，将动物饲料预混合物的水分含量调整至任何所描述的范围。例如，在一些实施方案中，将动物饲料预混合物干燥以将其水分含量增加到所描述的范围。
[0442]
在一些实施方案中，根据具体应用，动物饲料预混合物包含不同水平的寡糖制剂。在一些实施方案中，动物饲料预混合物包含按干重计至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的寡糖制剂。在一些实施方案中，动物饲料预混合物包含按干重计至多50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的寡糖制剂。
[0443]
在一些实施方案中，动物饲料预混合物或载体材料还包含其他动物营养，如矿物质、脂肪和蛋白质。在一些实施方案中，载体材料或动物饲料预混合物包含铜、锌或两者。在一些实施方案中，载体材料或动物饲料预混合物包含离子载体或其他抗球虫药。在一些实施方案中，载体材料或动物饲料预混合物包含抗生素。在一些实施方案中，载体材料包含碳水化合物来源。在一些实施方案中，载体材料中的碳水化合物来源不包含脱水亚基。在一些实施方案中，载体材料中的碳水化合物来源包含不同于寡糖制剂的糖苷键类型分布的糖苷键类型分布。
[0444]
因此，在一些实施方案中，制造营养组合物的方法包括将动物饲料预混合物与基础营养组合物合并。v.向动物提供寡糖制剂的方法
[0445]
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向动物提供寡糖制剂。在某些变型中，动物通过被饲喂或提供寡糖制剂来进行处理。在一些实施方案中，向动物提供预期的比剂量的寡糖制剂。可以将比剂量例如作为每单位时间由动物消耗的寡糖制剂质量(例如，克/天)，或作为每单位动物体重每单位时间由动物消耗的寡糖制剂质量(例如，mg寡糖/kg体重/天)来定量。在某些实施方案中，寡糖制剂的比剂量是1、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、350、400、450、500、1000、1500、2000、3000、4000、5000或10000mg/kg/天。在一些实施方案中，将寡糖制剂的质量作为基于干固体的dp1 含量来测量。在一些实施方案中，将寡糖制剂的质量作为基于干固体的dp2 含量来测量。
[0446]
在一些实施方案中，经由营养组合物通过口服施用向动物提供寡糖制剂。在一些实施方案中，将营养组合物配制为含有固定包含浓度或水平的寡糖制剂。营养组合物中的寡糖包含浓度或水平可以通过例如根据最终饲料或营养组合物的总质量的寡糖制剂的质量分数来定量。在一些实施方案中，包含浓度或水平以根据基于原样的最终营养组合物的基于干固体的寡糖的百万分率(ppm)来测量。在一些实施方案中，将寡糖制剂的浓度作为基于干固体的dp1 种类的质量分数来测量。在一些实施方案中，将寡糖制剂的浓度作为基于干固体的dp2 种类的质量分数来测量。
[0447]
本领域普通技术人员将知道用于测定营养组合物或最终饲料中寡糖制剂的浓度以达到预期的比剂量的各种方法和技术。例如，对于不同种类的肉鸡确立随年龄变化的平均每日饲料摄取量，并且所述平均每日饲料摄取量可以由营养师或兽医用于确定最终饲料中所需的包含水平。
[0448]
在一些实施方案中，经由消耗液体通过口服施用向动物提供寡糖制剂。在一些实施方案中，经由饮用水提供寡糖制剂。在一些实施方案中，选择饮用水中寡糖制剂的浓度以向动物提供预期的比剂量的寡糖制剂。vi.胃肠屏障功能障碍
[0449]
在一些实施方案中，本文所述的方法包括预防或治疗动物的胃肠屏障的功能障碍。动物的胃肠屏障包括一层粘液和一层上皮肠细胞(包括例如杯状细胞)。肠上皮充当屏障，以防止有害的管腔内实体通过，所述管腔内实体包括外来抗原、微生物及其毒素以及其他肠内容物(例如，食物颗粒)。肠上皮还充当选择性过滤器，从而允许必需的饮食营养物、电解质和水从肠腔易位到循环中。
[0450]
胃肠上皮经由以下两种主要途径介导选择性通透性：跨上皮/跨细胞和细胞旁。跨细胞通透性通常与通过上皮细胞的溶质转运相关联，并且主要由氨基酸、电解质、短链脂肪酸和糖的选择性转运蛋白调节。细胞旁通透性与上皮细胞之间的空间中的转运相关联，并且由位于顶端膜
‑
侧膜连接处且沿侧膜的细胞间复合物调节。肠上皮细胞之间的接触包括三个主要组分：桥粒、粘着连接和紧密连接。
[0451]
胃肠屏障的通透性由多种因素调节，所述多种因素包括例如外源因素、上皮细胞凋亡、细胞因子、免疫细胞和胃肠微生物组。微生物组的细菌和肠病原体可以通过与细胞表
面分子结合并诱导紧密连接蛋白表达的变化而直接破坏肠屏障。微生物组的细菌和肠病原体也可以产生毒素和蛋白酶，其可以促进细胞损伤和细胞凋亡、改变上皮离子转运并破坏紧密连接和细胞骨架。
[0452]
胃肠屏障的功能障碍使得肠内容物(包括例如病原体和毒素)能够易位到循环中，这可能对动物的健康产生负面影响并引起疾病。上皮细胞的炎症和/或损伤也可能降低动物吸收营养物的能力。因此，具有受损胃肠屏障的动物表现出不良的营养和健康结果，从而导致增重减少、重量减轻、饲料效率降低、肉产量降低、饲料转化率增加、肉品质更低和死亡率更高。a.预防胃肠屏障功能障碍的方法
[0453]
在一些实施方案中，本文所述的方法包括在动物中预防胃肠屏障的功能障碍的方法。在一些实施方案中，胃肠屏障的功能障碍是胃肠屏障的通透性高于健康状态的通透性的增加，这允许肠内容物(包括例如部分消化的食物、病原体和毒素)易位到循环中。在一些实施方案中，胃肠屏障功能障碍是胃肠屏障的通透性过高。通透性过高在本领域中也称为“肠漏症”。如上所述，肠漏症可以允许毒素、细菌和食物颗粒穿透胃肠道的衬里并进入身体的血流。肠漏症可以是指急性或慢性病症。肠漏症可以导致感染、败血症或肠衬里受损。
[0454]
肠漏症的症状可以包括但不限于粘液合成减少、粘蛋白合成减少、粘液分泌减少、粘蛋白分泌减少、营养物吸收减少、炎症增加、对感染的抗性降低、肠上皮细胞增殖减少、肠上皮细胞成熟减少、营养不良、增重减少、饲料转化率增加、饲料效率降低、死亡率增加。在一些实施方案中，本文所述的方法预防胃肠屏障功能障碍的一种或多种症状，如肠漏症的症状。
[0455]
在一些实施方案中，功能障碍通过降低动物中胃肠屏障的通透性来预防。在一些实施方案中，与在施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。在一些实施方案中，与在施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％
‑
40％、0.5％
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30％、0.5％
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20％、0.5％
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10％、0.5％
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3％、0.5％
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2％、0.5％
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40％、1％
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10％、10％
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40％、10％
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30％或10％
‑
20％。
[0456]
在一些实施方案中，功能障碍通过降低动物中胃肠屏障的通透性来预防。在一些实施方案中，与被施用缺乏合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。在一些实施方案中，与被施用缺乏合成寡糖制剂的营养组合物的动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％
‑
40％、0.5％
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30％、0.5％
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30％或10％
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20％。b.治疗胃肠屏障功能障碍的方法
[0457]
在一些实施方案中，本文所述的方法包括在动物中治疗胃肠屏障的功能障碍的方法。在一些实施方案中，胃肠屏障的功能障碍是胃肠屏障的通透性高于健康状态的通透性
的增加，这允许肠内容物(包括例如部分消化的食物、病原体和毒素)易位到循环中。
[0458]
在一些实施方案中，胃肠屏障功能障碍是胃肠屏障的通透性过高。通透性过高在本领域中也称为“肠漏症”。如上所述，肠漏症可以允许毒素、细菌和食物颗粒穿透胃肠道的衬里并进入身体的血流。肠漏症可以是指急性或慢性病症。肠漏症可以导致感染、败血症或肠衬里受损。
[0459]
肠漏症的症状可以包括但不限于粘液合成减少、粘蛋白合成减少、粘液分泌减少、粘蛋白分泌减少、营养物吸收减少、炎症增加、对感染的抗性降低、肠上皮细胞增殖减少、肠上皮细胞成熟减少、营养不良、增重减少、饲料转化率增加、饲料效率降低、死亡率增加。在一些实施方案中，肠漏症的一种或多种症状得到改善。
[0460]
在一些实施方案中，功能障碍通过降低动物中胃肠屏障的通透性来预防。在一些实施方案中，与在施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。在一些实施方案中，与在施用所述合成寡糖制剂之前所述动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％
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40％、0.5％
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20％。
[0461]
在一些实施方案中，功能障碍通过降低动物中胃肠屏障的通透性来治疗。在一些实施方案中，与在施用缺乏合成寡糖制剂的营养组合物之前动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或30％。在一些实施方案中，与在施用缺乏合成寡糖制剂的营养组合物之前动物的胃肠屏障的通透性相比，胃肠屏障的通透性小约0.5％
‑
40％、0.5％
‑
30％、0.5％
‑
20％、0.5％
‑
10％、0.5％
‑
5％、0.5％
‑
1％、1％
‑
40％、1％
‑
30％、1％
‑
20％、1％
‑
10％、1％
‑
5％、1％
‑
2％、5％
‑
40％、5％
‑
30％、5％
‑
20％、5％
‑
10％、10％
‑
40％、10％
‑
30％或10％
‑
20％。c.检测胃肠屏障通透性和营养物吸收的方法
[0462]
胃肠屏障通透性可以通过本领域已知的方法(如乳果糖
‑
甘露糖醇试验)来证明，其中向动物给予含有甘露糖醇和乳果糖的溶液，并且收集六小时内的尿液并进行测试。乳果糖(二糖)和甘露糖醇(单糖)是两种水溶性的非代谢糖分子。甘露糖醇易于吸收，从而被动穿透细胞；而具有更大分子量和大小的乳果糖仅被健康的胃肠屏障部分吸收。如果所收集的尿液样品中甘露糖醇和乳果糖的水平较高，则表明胃肠道的通透性过高。低水平的两种分子表明营养物吸收不良。高水平的甘露糖醇和低水平的乳果糖表明动物具有正常的胃肠屏障功能。
[0463]
还可以使用消化粪便分析来评估胃肠屏障通透性，所述消化粪便分析包括针对以下项测试粪便材料：消化功能，脂质、蛋白质、碳水化合物和其他营养物在小肠和结肠中吸收的程度，以及念珠菌属(candida)或其他细菌感染、生态失调(肠道细菌失衡)、寄生虫感染和消化功能障碍的其他指标的存在。由施用本文所述的合成寡糖制剂引起的肠功能的改善也可以通过以下来测量：腹泻减少、肠漏症的一种或多种症状减少、固体粪便增加、5
‑
羟基
‑
色氨酸以及5
‑
羟色胺和2
‑
甲基
‑5‑
羟色胺以及可以由细菌群体产生的其他神经递质前体(血清素前体)的产生增加。还可以使用荧光示踪剂进行胃肠屏障通透性评估(例如，如
droshow等人,“measurement of gut permeability using fluorescent tracer agent technology,”scientific reports,7:108888(2017)中所述)。其他方法包括例如在wang等人,“methods to determine intestinal permeability and bacterial translocation during liver disease,”j immunol methods,421:44
‑
53(2015)；galipeau等人,neurogastroenterology and motility,28:7(2016)中公开；并且在本文的实施例中描述的那些方法。胃肠通透性还可以使用本领域已知的多种不可消化的糖、标记的右旋糖酐和放射性同位素来测试。
[0464]
胃肠屏障通透性还可以通过所述胃肠屏障的组织样品或细胞样品的组织学分析来评估。在一些实施方案中，在本领域已知的这种分析中使用一种或多种染色剂或标签。这些包括例如h&e染色、免疫荧光染色、使用免疫荧光抗体或其他靶向剂。显微镜检查方法包括本领域已知的所有那些方法，例如光学显微镜检查、共聚焦显微镜检查、电子显微镜检查等。在一些实施方案中，本文所述的方法包括评价所述胃肠屏障的粘膜形态。在一些实施方案中，所述评价包括测定绒毛长度、隐窝长度、炎性细胞浸润水平或其任何组合。
[0465]
可以使用与上述那些方法相似的方法来评估胃肠道吸收营养物的能力。例如，可以在粪便样品中评估特定的常量或微量营养物(例如，脂肪)的水平。可以对汗液样品进行分析，以检测适当引导营养物所需的酶的水平。乳糖氢呼气试验可以用于测定在牛奶糖(例如，乳糖)溶液后动物呼气中有多少氢。为了评估营养物吸收，可以对胃肠屏障进行活检。用于测量胃肠道吸收营养物的能力的许多试验是本领域已知的并且并入本文。
[0466]
在一些实施方案中，分析由胃肠屏障表达的至少一种(例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9或10种)营养转运蛋白的水平，以确定胃肠屏障吸收一般营养物或特定常量或微量营养物的能力。这种分析的方法是本领域已知的并且通过引用并入本文。转运蛋白包括但不限于由以下表达的一种或多种蛋白质：si(蔗糖酶
‑
异麦芽糖酶)、slc5a10、slc34a1、slc2a2、slc34a2、slc23a1、slc23a2、slc5a8、slc16a3、slc4、slc4a9、slc4a2、slc4a3、npc1l1、c6orf58、ddc、mct1、mct4、nas1、dtdst、pat1、dra、cld、sat1、sut2、sglt1、glut2、b0at1、atb0 、sit1、taut、eaac1、asct2、sn1、sn2、pept1、snat2、glyt1、y lat1、y lat2、cd36、lfabp、npc1l1、abcg5、abcg8、svct1、svct2、smvt、gif、amn、cubl、mrp1、folt、pcft、folr1、oat10、rfvt1、rfvt2、thtr1、thtr2、vdr、dcytb、dmt1、hcp1、fpn1、heph、hamp、zip4、zip11、zip8、zip14a、zip14b、znt1、znt2、ctr1、slc3a1、slc1a4、alpi、c17orf78、muc17、defa5、rbp2、defa6、mln、mep1b、lct、tm4sf20或fabp6。
[0467]
胃肠屏障通透性可以使用多种样品例如如本文所述的来评估。例如，所述样品包括但不限于胃肠屏障的组织样品、胃肠屏障的活检、胃肠屏障的细胞样品、血液样品、血清样品、尿液样品、粪便样品、盲肠(例如，盲肠内容物)、汗液样品或唾液样品。
[0468]
胃肠屏障包括胃肠道的任何屏障，例如回肠、盲肠、小肠、结肠、胃、十二指肠、空肠。d.杯状细胞增殖和粘液产生
[0469]
在一些实施方案中，本文所述的方法包括增加动物的胃肠道中的杯状细胞增殖。杯状细胞是简单的柱状上皮细胞，其构成胃肠屏障上皮衬里的一部分。杯状细胞分泌粘液，其含有称为粘蛋白的大糖蛋白。胃肠屏障的粘液层起到保护上皮细胞并防止微生物、毒素等对上皮细胞的破坏的作用。
[0470]
熟练技术人员已知的标准测定可以用于评估杯状细胞增殖。例如，可以使用如本文实施例中所述的体外测定。也可以使用多种分子或生化标记来评估杯状细胞增殖，包括但不限于杯状细胞的基因表达或蛋白质表达特征，例如粘蛋白。某些粘蛋白基因(例如，muc5b)在胃肠道中表达，并具有在粘液中高度表现的基因产物。因此，粘蛋白基因的表达提供了用于测定粘液的产生的合适标记。
[0471]
粘蛋白基因表达可以通过常规技术(如rna印迹分析、聚合酶链反应(pcr)、粘蛋白基因启动子检查或原位分析)来评估。可替代地，使用可检测标记的抗体通过常规方法(如蛋白质印迹分析、elisa、免疫化学等)来评估粘蛋白。也可以使用形态学标准来确定培养物中杯状细胞的存在或不存在；如使用阿尔新蓝/pas染色对粘蛋白进行染色(lou等人(1998)am.j.respir.crit.care med.157:1927
‑
1934)。可以使用elisa测定检查针对粘蛋白的抗体。
[0472]
也可以使用体内测定来评估动物中的杯状细胞增殖。可以评估动物的胃肠组织的杯状细胞丰度。也可以评估动物的胃肠组织样品的针对以上体外测定所述的相同分子和生化标记。e.对感染的易感性
[0473]
在一些实施方案中，本文所述的方法包括降低动物对感染的易感性。方法还包括在动物或动物群体中预防感染。如上所述，导致胃肠屏障通透性增加的胃肠屏障功能障碍允许病原性微生物从管腔内空间易位到循环。本文所述的方法通过降低胃肠屏障通透性来在动物中预防感染。本文所述的方法还通过降低胃肠屏障通透性来降低动物对感染的易感性。感染可能是胃肠道腔内存在的任何病原性微生物的结果。病原体可能通过受污染的食物进入胃肠道。在一些实施方案中，病原体是微生物。在一些实施方案中，病原体是细菌、病毒、寄生虫或真菌。在一些实施方案中，病原体属于变形菌门(proteobacteria)。在一些实施方案中，病原体是细菌，并且被分类为螺杆菌属(helicobacter)、埃希氏菌属、沙门氏菌属、弧菌属(vibrio)或耶尔森氏菌属。在一些实施方案中，病原体是细菌，并且被分类为密螺旋体属(treponema)、链球菌属(streptococcus)、葡萄球菌属(staphylococcus)、志贺氏菌属、立克次氏体属(rickettsia)、东方体属(orientia)、假单胞菌属(pseudomonas)、奈瑟氏菌属(neisseria)、支原体属(mycoplasma)、分枝杆菌属(mycobacterium)、李斯特菌属(listeria)、钩端螺旋体属(leptospira)、军团菌属(legionella)、克雷伯氏菌属(klebsiella)、嗜血杆菌属(haemophilus)、弗朗西斯氏菌属(francisella)、埃利希氏体属(ehrlichia)、肠球菌属(enterococcus)、柯克斯氏体属(coxiella)、棒状杆菌属(corynebacterium)、梭菌属(clostridium)、衣原体属(chlamydia)、嗜衣原体属(chlamydophila)、弯曲杆菌属、伯克霍尔德菌属(burkholderia)、布鲁氏菌属(brucella)、包柔氏螺旋体属(borrelia)、博代氏杆菌属(bordetella)、双歧杆菌属和芽孢杆菌属(bacillus)。细菌种类包括但不限于幼禽螺杆菌(helicobacter pullorum)、约氏变形菌(proteobacteria johnsonii)、大肠杆菌(escherichia coli)、空肠弯曲杆菌(campylobacter jejuni)和卷曲乳杆菌(lactobacillus crispatus)。在一些实施方案中，病原体是嗜水气单胞菌(aeromonas hydrophila)、胎儿弯曲杆菌(campylobacter fetus)、类志贺邻单胞菌(plesiomonas shigelloides)、蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)、空肠弯曲杆菌、肉毒梭菌(clostridium botulinum)、艰难梭菌(clostridium difficile)、产气荚
膜梭菌(clostridium perfringens)、肠聚集性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、产肠毒素性大肠杆菌、幽门螺杆菌(helicobacter pylori)、肺炎克雷伯氏菌(klebsiellia pneumonia)、单核细胞增多性李斯特菌(lysteria monocytogenes)、类志贺邻单胞菌、沙门氏菌属物种、伤寒沙门氏菌(salmonella typhi)、副伤寒沙门氏菌(salmonella paratyphi)、志贺氏菌属物种、葡萄球菌属物种、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、耐万古霉素肠球菌属物种、弧菌属物种、霍乱弧菌(vibrio cholerae)、副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)、创伤弧菌(vibrio vulnificus)和小肠结肠炎耶尔森氏菌(yersinia enterocolitica)。在一些实施方案中，病原体是耐单药或耐多药的。一种或多种病原体对动物的感染可以通过熟练技术人员已知的标准方法来评估。
[0474]
在一些实施方案中，病原体是寄生虫。在一些实施方案中，所述寄生虫是艾美球虫属寄生虫。在一些实施方案中，所述寄生虫是堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、和缓艾美球虫、柔嫩艾美球虫、刚地弓形虫、哈蒙德虫属物种、小隐孢子虫、鼠隐孢子虫、人隐孢子虫、犬等孢子球虫、俄亥俄等孢子球虫、布罗斯等孢子球虫、猫等孢子球虫。在一些实施方案中，所述病原体是球虫原生动物。在一些实施方案中，所述球虫原生动物是堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、和缓艾美球虫、柔嫩艾美球虫、刚地弓形虫、哈蒙德虫属物种、小隐孢子虫、鼠隐孢子虫、人隐孢子虫、犬等孢子球虫、俄亥俄等孢子球虫、布罗斯等孢子球虫或猫等孢子球虫。
[0475]
在一些实施方案中，动物的胃肠道中至少一种促炎细胞因子或趋化因子的水平增加。示例性细胞因子和趋化因子包括但不限于肿瘤坏死因子(tnf)(如tnf
‑
α和tnf
‑
β)、tnf超家族分子(如fasl、cd27l、cd30l、cd40l、ox40l、4
‑
1bbl、trail、tweak和apo3l)、白介素
‑
1(il
‑
1)(包括il
‑
1α和il
‑
1β)、il
‑
2、干扰素
‑
γ(ifn
‑
γ)、ifn
‑
α/β、il
‑
6、il
‑
8、il
‑
12、il
‑
15、il
‑
17、il
‑
18、il
‑
21、lif、ccl5、groα、mcp
‑
1、mip
‑
1α、mip
‑
1β、rantes、巨噬细胞集落刺激因子(mcsf)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm
‑
csf)、cxcl2、ccl2、淋巴细胞趋化因子、分形趋化因子或gro/kc等。
[0476]
在一些实施方案中，动物的胃肠道中至少一种抗炎细胞因子或趋化因子的水平降低。示例性抗炎细胞因子和趋化因子包括但不限于白介素(il)
‑
1受体拮抗剂、il
‑
4、il
‑
6、il
‑
10、il
‑
11、il
‑
13和tgfβ。
[0477]
在一些实施方案中，至少一种免疫细胞的水平在动物的胃肠道中增加。在其他实施方案中，至少一种免疫细胞的水平在动物的淋巴系统中增加。在一些实施方案中，免疫细胞是固有免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞是适应性免疫细胞。示例性免疫细胞包括但不限于t细胞、b细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突细胞、粒细胞(包括例如嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞)、肥大细胞和单核细胞。在一些实施方案中，免疫细胞是吞噬细胞。吞噬免疫细胞包括但不限于嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、肥大细胞和树突细胞。在一些实施方案中，免疫细胞的吞噬活性增加。在某些实施方案中，免疫细胞分化发生在派尔斑中。f.胃肠样品
[0478]
在某些实施方案中，本文所述的方法包括检测动物的胃肠道中的特性(包括例如粘液水平、免疫细胞水平、细胞因子水平、趋化因子水平等)。在某些实施方案中，在来自动物的胃肠样品中检测或定量所述特性。胃肠样品可以从动物以任何标准形式获得，所述标
准形式反映了动物胃肠道的代谢内容物。胃肠样品包括例如通过内窥镜活检获得的胃肠组织样品。胃肠组织包括例如口腔组织、食道、胃、肠、回肠、盲肠、结肠或直肠。样品还包括粪便、唾液、尿液和胃肠腹水。获得胃肠样品的方法是标准的，并且是熟练技术人员已知的。在一些实施方案中，所述样品是血液或血清样品。
[0479]
在一些实施方案中，样品是来自单一动物的单一样品。在一些实施方案中，样品是来自单一动物的多个样品的组合。在一些实施方案中，在分析之前从样品中纯化细胞或蛋白质。在一些实施方案中，纯化来自单一样品的细胞或蛋白质。在一些实施方案中，纯化来自单一动物的多个样品的细胞或蛋白质，随后将其合并，之后进行分析。vii.增强动物性能的方法a.饲料转化率
[0480]
在一些实施方案中，本文所述的方法包括降低动物的饲料转化率。在一些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物相比，被施用如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物具有更低的饲料转化率。如本文所用，术语“饲料转化率(fcr)”是指饲料质量输入(例如由动物消耗的)与动物输出的比率，其中动物输出是目标动物产品。例如，乳畜的动物输出是奶，而为肉而饲养的动物的动物输出是体重。
[0481]
在一些实施方案中，动物是为肉而饲养的，并且目标动物输出是体重。因此，在一些实施方案中，fcr是指所消耗的饲料的重量与在加工之前动物的最终体重的比率。在一些实施方案中，fcr是指所消耗的饲料的重量与在加工之前动物的最终体重增加的比率。应该理解，可以在不同的时间段内测量动物或动物群体的fcr。例如，在一些实施方案中，fcr是在动物的整个生命期内的fcr。在其他实施方案中，fcr是每日fcr、或每周fcr、或直到特定时刻(例如，特定的一天)为止测量的累积fcr。
[0482]
本领域技术人员将认识到，性能目标最小fcr(最佳fcr)对于不同类型的动物可以是不同的，并且对于一种类型的动物的不同品种(例如，肉鸡的不同品种或猪的不同品种)可以是不同的。性能目标最小fcr也可以根据动物的年龄(例如，处于生长阶段的鸡或猪与肥育阶段相比)或动物的性别而是不同的。应该清楚，最佳fcr可以根据这些因素的任何组合而是不同的。
[0483]
性能目标最小值通常是指在理想的生长条件、理想的动物健康状态和理想的饮食营养下，对于给定的动物和品种所观察到的最低饲料效率。本领域技术人员熟知的是，在常见的生长条件下，动物可能无法达到性能目标最小fcr。动物可能由于多种健康、营养、环境和/或群落影响而无法达到其性能目标最小fcr。动物可能当在受挑战的环境中饲养时无法达到其性能目标最小fcr，所述受挑战的环境可以包括例如环境病原应激、过度的环境温度(热应激)、过度的环境湿度、拥挤或其他群居相互作用效应(如获取饲料或饮用水困难)。在一些实施方案中，动物可能由于疾病或环境病原应激而无法达到其性能目标最小fcr。在其他实施方案中，动物可能由于过度的环境温度(热应激)或过度的环境湿度而无法达到其性能目标最小fcr。在又其他实施方案中，动物可能由于拥挤或其他群居相互作用效应(如获取饲料或饮用水困难)而无法达到其性能目标最小fcr。
[0484]
在一些实施方案中，被提供不包括本文所述的合成寡糖制剂的饮食的动物具有的fcr比性能目标最小fcr高至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％。在某些实
施方案中，被提供不包括本文所述的合成寡糖制剂的饮食的动物具有的fcr比性能目标最小值高1％至10％、比性能目标最小值高2％至10％或比性能目标最小值高5％至10％。
[0485]
在一些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物相比，被提供如本文所述的包含合成寡糖制剂的营养组合物、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物具有的fcr更接近于性能目标最小值。在特定实施方案中，被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物具有的fcr比性能目标最小值高0至10％之间、比性能目标最小值高0至5％之间或比性能目标最小值高0至2％之间。
[0486]
在一些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物相比，被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物具有更低的饲料转化率。例如，在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物相比，被提供包含合成寡糖制剂的饮食的动物消耗更少的食物，但是具有相同的动物输出。在其他实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物相比，被提供包含合成寡糖制剂的饮食的动物消耗相同量的食物，但是具有更高的动物输出。在又其他实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物相比，被提供包含合成寡糖制剂的饮食的动物消耗更少的食物且具有更高的动物输出。
[0487]
在一些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物相比，被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物的fcr降低至少1％、至少2％、至少4％、至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、1％至10％之间、4％至10％之间、1％至8％之间、4％至8％之间、1％至6％之间或4％至6％之间。在一些实施方案中，动物是家禽。在某些实施方案中，家禽的fcr在0至14日龄内、在15至28日龄内、在29至35日龄内、在35天内、在42天内、在6周内、在6.5周内、在0至35日龄内、在0至42日龄内、在0至6周龄内、在0至6.5周龄内、在15至35日龄内、在36至42日龄内、在15至39日龄内或在40至46日龄内降低。
[0488]
在一个实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽在35天内的fcr降低4％至6％之间。例如，在某个实施方案中，被提供如本文所述的描述合成寡糖制剂的营养组合物、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽在35天内的fcr是1.53，被提供没有合成寡糖制剂的饮食的家禽在35天内的fcr是1.61，并且与被提供没有合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，被提供包含寡糖制剂的营养组合物、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的fcr降低约5％。在一个实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽在42天内、在6周内或在6.5周日内的fcr降低4％至6％之间。
[0489]
在一些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的动物群体相比，被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物群体具有更低的fcr，其中将fcr针对动物群体中的死亡进行校正。
[0490]
在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂但包括一种或多种抗生素、一种或多种离子载体、可溶性玉米纤维、改性小麦淀粉或酵母甘露聚糖或其任何组合的饮食
的动物相比，被提供合成寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物具有更低的fcr。
[0491]
本领域技术人员已知的是，当确定fcr时，可以将fcr针对死亡进行调整，以减少由于少量统计而引起的噪声。用于针对死亡调整fcr的方法是本领域技术人员熟知的。
[0492]
在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，家禽是单独家禽，而在其他实施方案中，家禽是家禽群体。
[0493]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且动物饲料组合物是家禽饲料，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的家禽相比，合成寡糖制剂、家禽营养组合物、家禽饲料预混合物或家禽饲料组合物饲料当饲喂给家禽时将饲料转化率(fcr)降低多达约10％或约5％、或者1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0494]
在某些实施方案中，家禽患有疾病或障碍，或者在受挑战的环境中饲养，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的家禽相比，合成寡糖制剂、家禽营养组合物、家禽饲料预混合物或家禽饲料组合物饲料当饲喂给家禽时将饲料转化率(fcr)降低多达约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％、或者1％与30％之间、5％与30％之间、10％与30％之间、5％与20％之间、10％与20％之间、1％与20％之间、1％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0495]
在一些实施方案中，动物是猪，并且动物饲料组合物是猪饲料，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的猪相比，合成寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物当饲喂给猪时将饲料转化率(fcr)降低多达约15％、约10％或约5％、或者1％与15％之间、2％与15％之间、3％与15％之间、4％与15％之间、5％与15％之间、10％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0496]
在某些实施方案中，猪患有疾病或障碍，或者在受挑战的环境中饲养，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的猪相比，合成寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物当饲喂给猪时将饲料转化率(fcr)降低多达约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％、或者1％与40％之间、5％与40％之间、10％与40％之间、15％与40％之间、20％与40％之间、25％与40％之间、30％与40％之间、1％与30％之间、5％与30％之间、10％与30％之间、5％与20％之间、10％与20％之间、1％与20％之间、1％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。b.体重
[0497]
在一些实施方案中，与未被饲喂本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的对照动物相比，被饲喂所述寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的受试动物可能经历增重的增加。在某些实施方案中，受试动物和对照动物两者都消耗基于重量相同量的饲料，但是与被饲喂不包括合成寡糖制剂的饮
食的对照动物相比，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的受试动物经历增重的增加。
[0498]
动物的增重可以通过本领域已知的任何合适的方法来测定。例如，为了测定经受合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的饲喂方案的动物的增重，本领域技术人员可以在饲喂方案之前测量动物的质量，在给动物饲喂合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物之后测量动物的质量，并确定这两次测量之间的差异。
[0499]
在一些实施方案中，增重可以是平均每日增重(也称为平均日增重(adg))、平均每周增重(awg)或最终体重增加(bwg)。c.平均每日增重
[0500]
在一些实施方案中，与被提供没有合成寡糖制剂的饲料的动物相比，向动物提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的平均每日增重。在一些实施方案中，与被提供没有合成寡糖制剂的饲料的动物群体相比，向动物群体提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的平均每日增重。
[0501]
在一个实施方案中，动物的平均每日增重是在给定的时间段上求平均的单独动物每天增加的重量。在一些实施方案中，动物群体的平均每日增重是在群体上求平均的每只单独动物的平均每日增重；其中平均每日增重是在给定的时间段上求平均的单独动物每天增加的重量。在又其他实施方案中，动物群体的平均每日增重是在给定的时间段上求平均的除以群体中单独动物的数量的群体每天增加的总重量。应该理解，可以对每日增重或平均每日增重进一步求平均，例如以提供跨动物群体的平均每日增重。
[0502]
在某些实施方案中，动物是家禽，并且被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少20克/天、至少30克/天、至少40克/天、至少50克/天、至少60克/天、至少70克/天、至少80克/天、至少90克/天、20至100克/天之间、20至80克/天之间、30至50克/天之间、40至60克/天之间、50至70克/天之间或70至90克/天之间的平均每日增重。在一个实施方案中，动物是家禽，并且被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少50克/天的平均每日增重。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽的平均每日增重相比，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的平均每日增重。
[0503]
在某些实施方案中，动物是家禽，并且所述家禽在0至14日龄之间，并且平均每日增重是至少30克、至少40克或至少50克/天。
[0504]
在其他实施方案中，动物是家禽，所述家禽在14至28日龄之间，并且平均每日增重是至少70克、至少80克或至少90克/天。
[0505]
在仍其他实施方案中，动物是家禽，所述家禽在29至35日龄之间，并且平均每日增重是至少50克、至少60克或至少70克/天。
[0506]
在可以与前述组合的一些实施方案中，动物是家禽，并且动物饲料组合物是家禽饲料，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的家禽相比，合成寡糖制剂、家禽营养
组合物、家禽饲料预混合物或家禽饲料组合物当饲喂给家禽时将家禽的平均日增重增加多达约10％或约5％、或者1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0507]
在某些实施方案中，家禽患有疾病或障碍，或者在受挑战的环境中饲养，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的家禽相比，合成寡糖制剂、家禽营养组合物、家禽饲料预混合物或家禽饲料组合物当饲喂给家禽时将家禽的平均日增重增加多达约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％、或者1％与30％之间、5％与30％之间、10％与30％之间、5％与20％之间、10％与20％之间、1％与20％之间、1％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0508]
在可以与前述组合的一些实施方案中，动物是猪，并且动物饲料组合物是猪饲料，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的猪相比，合成寡糖制剂、猪营养制剂、猪饲料预混合物或猪饲料组合物当饲喂给猪时将猪的平均日增重增加多达约15％、约10％或约5％、或者1％与15％之间、2％与15％之间、3％与15％之间、4％与15％之间、5％与15％之间、10％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0509]
在某些实施方案中，猪患有疾病或障碍，或者在受挑战的环境中饲养，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的猪相比，寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物当饲喂给猪时将猪的平均日增重增加多达约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％、或者1％与40％之间、5％与40％之间、10％与40％之间、15％与40％之间、20％与40％之间、25％与40％之间、30％与40％之间、1％与30％之间、5％与30％之间、10％与30％之间、5％与20％之间、10％与20％之间、1％与20％之间、1％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0510]
在某些实施方案中，动物是猪，并且与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的猪的平均每日增重相比，被提供合成寡糖制剂、猪营养制剂、猪饲料预混合物或猪饲料组合物的猪具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的平均每日增重。d.平均每周增重
[0511]
在一些实施方案中，与被提供没有合成寡糖制剂的饲料的动物相比，向动物提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的平均每周增重。在一些实施方案中，与被提供没有合成寡糖制剂的饲料的动物群体相比，向动物群体提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的平均每周增重。
[0512]
在一个实施方案中，动物的平均每周增重是在给定的时间段上求平均的单独动物
每周增加的重量。在一些实施方案中，动物群体的平均每周增重是在群体上求平均的每只单独动物的平均每周增重；其中平均每周增重是在给定的时间段上求平均的单独动物每周增加的重量。在又其他实施方案中，动物群体的平均每周增重是在给定的时间段上求平均的除以群体中单独动物的数量的群体每周增加的总重量。应该理解，可以对平均每周增重进一步求平均，例如以提供跨动物群体的平均每周增重。
[0513]
在某些实施方案中，动物是家禽，并且被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少100克/周、至少200克/周、至少300克/周、至少400克/周、至少500克/周、至少600克/周、至少700克/周、至少800克/周、100至800克/周之间、100至400克/周之间、300至600克/周之间、500至800克/周之间或350至550克/周之间的平均每周增重。在一个实施方案中，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少400克/周的平均每周增重。在某些实施方案中，与被提供不包括寡糖制剂的饮食的家禽的平均每周增重相比，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的平均每周增重。
[0514]
在某些实施方案中，动物是猪，并且与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的猪的平均每周增重相比，被提供合成寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物的猪具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的平均每周增重。e.最终体重增加
[0515]
在一些实施方案中，与被提供没有合成寡糖制剂的饲料的动物相比，向动物提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的最终体重增加。在一些实施方案中，与被提供没有合成寡糖制剂的饲料的动物群体相比，向动物群体提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的平均最终体重增加。
[0516]
在一些实施方案中，与被提供没有合成寡糖制剂的饲料的动物或动物群体相比，向动物或动物群体提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致更接近于性能目标最大值的最终体重增加或平均最终体重增加。性能目标最大值通常是指在理想的生长条件、理想的动物健康状态和理想的饮食营养下，对于给定类型的动物和品种所观察到的最高实际体重增加。
[0517]
在一个实施方案中，最终体重增加是单独动物在一段时间内增加的重量量。例如，在一个实施方案中，总体重增加是单独动物从0日龄直到在加工动物之前获取的最终重量、或在加工动物的当天获取的最终重量增加的重量量。例如，在一个实施方案中，动物的第0天至第28天的总体重增加是单独动物从0日龄直到28日龄增加的重量量。
[0518]
在另一个实施方案中，平均总体重增加是跨动物群体求平均的单独动物在一段时间内增加的重量量。例如，在一个实施方案中，平均总体重增加是跨动物求平均的单独动物从0日龄直到在加工动物之前获取的最终重量、或在加工动物的当天获取的最终重量增加的重量量。在又另一个实施方案中，平均总体重增加是除以群体中单独动物的数量的动物
群体在一段时间内增加的重量量。例如，在一个实施方案中，平均总体重增加是除以群体中单独动物的数量的动物群体从0日龄直到在加工动物群体之前获取的最终重量、或在加工动物的当天获取的最终重量增加的重量量。
[0519]
应该理解，可以对总体重增加和平均总体重增加的值进一步求平均。例如，可以对相同类型动物的不同群体的平均总体重增加求平均，以获得跨群体的平均总体重增加。
[0520]
在某些实施方案中，动物是家禽，并且被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少3kg、至少2.5kg、至少2kg、至少1.5kg、至少1kg、1至3kg之间或1.5至2.5kg之间的最终体重增加。在一个实施方案中，被提供合成寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少2kg的最终体重增加。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽的最终体重增加相比，被提供合成寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的最终体重增加。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽的最终体重增加相比，被提供合成寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有大至少0.01kg、至少0.02kg、至少0.03kg、至少0.04kg、至少0.05kg、至少0.06kg、至少0.07kg、至少0.08kg、至少0.09kg、至少0.1kg、0.01至0.1kg之间、0.03至0.07kg之间或0.04至0.06kg之间的最终体重增加。
[0521]
在某些实施方案中，动物是家禽，并且被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少3kg、至少2.5kg、至少2kg、至少1.5kg、至少1kg、1至3kg之间或1.5至2.5kg之间的平均最终体重增加。在一个实施方案中，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有至少2kg的平均最终体重增加。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽的平均最终体重增加相比，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的平均最终体重增加。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽的平均最终体重增加相比，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽具有大至少0.01kg、至少0.02kg、至少0.03kg、至少0.04kg、至少0.05kg、至少0.06kg、至少0.07kg、至少0.08kg、至少0.09kg、至少0.1kg、0.01至0.1kg之间、0.03至0.07kg之间或0.04至0.06kg之间的平均最终体重增加。
[0522]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且所述家禽在0至14日龄之间、在15至28日龄之间、在29至35日龄之间、在0至42日龄之间、在0至6周龄之间或在0至6.5周龄之间。在一些实施方案中，开食阶段是0至14日龄，生长阶段是15至28日龄，并且肥育阶段是29至35日龄。在其他实施方案中，开食阶段是0至14日龄，生长阶段是15至35日龄，并且肥育阶段是36至42日龄。在又其他实施方案中，开食阶段是0至14日龄，生长阶段是15至39日龄，并且肥育阶段是40至46日龄。应该理解，家禽的开食阶段、生长阶段和肥育阶段的长度可以根据家禽或家禽产品的预期用途而改变。例如，在一些实施方案中，如果家禽的预期用途是作为肉鸡，则开食阶段、生长阶段和肥育阶段的长度与用于托盘包装鸡肉的加工相比可以是不同的。
[0523]
在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，家禽是单独家禽，而在其他
实施方案中，家禽是家禽群体。
[0524]
在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的猪的最终体重增加相比，被提供合成寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物的猪具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的最终体重增加。
[0525]
在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的猪的平均最终体重增加相比，被提供合成寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物的猪具有大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间的平均最终体重增加。
[0526]
在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，猪是单独猪，而在其他实施方案中，猪是猪群体。f.动物产品产量
[0527]
在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饲料的动物相比，向动物提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的动物产品产量。在一些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饲料的动物相比，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物产生多至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、1％至10％之间、4％至10％之间、6％至10％之间或2％至8％之间的动物产品。例如，在一些实施方案中，动物产品是动物的肉，并且与未被提供如本文所述的合成寡糖制剂的动物相比，被提供所述寡糖制剂的动物产生更大量的肉。在一些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饲料的动物群体相比，向动物群体提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的平均动物产品产量。在一些实施方案中，平均动物产品产量是跨动物群体求平均的从每只单独动物产生的动物产品量。
[0528]
在一些实施方案中，动物产品是动物的肉(例如，其可以出售给消费者、被加工以产生食物产品或由人食用)。在某些实施方案中，动物是家禽，并且动物产品是家禽去脏屠体、来自家禽去脏屠体的腿肉、来自家禽去脏屠体的胸肉、来自家禽去脏屠体的鼓槌肉、来自家禽去脏屠体的脂肪、来自家禽去骨屠体的胸肉或来自家禽去骨屠体的腿肉。在其他实施方案中，动物是家禽，并且动物产品是白肉、胸肉里脊和胸肉嫩肉。在另一个实施方案中，动物是家禽，并且产品是托盘包装鸡肉。在又另一个实施方案中，动物是家禽，并且产品是无内脏整鸟(wog)。
[0529]
在一些实施方案中，动物产品产量是从单独动物获得的产量。在一些实施方案中，平均动物产品产量是跨群体求平均的从动物群体中每只单独动物获得的产量。在又另一个实施方案中，平均动物产品产量是除以动物群体中单独动物的数量的从动物群体产生的动物产品总产量。
[0530]
在一些实施方案中，动物是家禽，对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的腿肉产量是活重的至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、6％至12％之间、8％至12％之间、10％至18％之间、12％至16％之间或12％至14％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料
组合物的家禽的家禽去脏屠体的腿肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0531]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的平均腿肉产量是活重的至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、6％至12％之间、8％至12％之间、10％至18％之间、12％至16％之间或12％至14％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体的平均腿肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0532]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的胸肉产量是活重的至少10％、至少12％、至少15％、至少16％、至少18％、至少20％、至少22％、至少24％、至少28％、10％至18％之间、12％至16％之间、18％至29％之间、20％至27％之间或20％至25％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体的胸肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0533]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的平均胸肉产量是活重的至少10％、至少12％、至少15％、至少16％、至少18％、至少20％、至少22％、至少24％、至少28％、10％至18％之间、12％至16％之间、18％至29％之间、20％至27％之间或20％至25％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体的平均胸肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0534]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的鼓槌肉产量是活重的至少5％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、5％至14％之间、7％至10％之间、7％至15％之间、9％至13％之间或9％至11％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体的鼓槌肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0535]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的平均鼓槌肉产量是活重的至少5％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、5％至14％之间、7％
至10％之间、7％至15％之间、9％至13％之间或9％至11％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体的平均鼓槌肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0536]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去骨屠体的胸肉产量是活重的至少14％、至少16％、至少18％、至少20％、至少22％、至少24％、14％至16％之间、18％至30％之间、20％至28％之间或20％至26％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去骨屠体的胸肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0537]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去骨屠体的平均胸肉产量是活重的至少14％、至少16％、至少18％、至少20％、至少22％、至少24％、14％至16％之间、18％至30％之间、20％至28％之间或20％至26％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去骨屠体的平均胸肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0538]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去骨屠体的腿肉产量是活重的至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、至少14％、至少16％、至少18％、6％至18％之间、8％至16％之间、12％至21％之间、14％至19％之间或14％至17％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去骨屠体的腿肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0539]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去骨屠体的平均腿肉产量是活重的至少6％、至少8％、至少10％、至少12％、至少14％、至少16％、至少18％、6％至18％之间、8％至16％之间、12％至21％之间、14％至19％之间或14％至17％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去骨屠体的平均腿肉产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0540]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的脂肪产量是活重的至少
0.1％、至少0.2％、至少0.3％、至少0.4％、至少0.5％、至少0.6％、至少0.7％、至少0.8％、至少0.9％、至少1％、至少1.2％、至少1.4％、至少1.6％、0.1％至2％之间、0.2％至1％之间、0.5％至2％之间或0.3％至0.7％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体的脂肪产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0541]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，来自家禽去脏屠体的平均脂肪产量是活重的至少0.1％、至少0.2％、至少0.3％、至少0.4％、至少0.5％、至少0.6％、至少0.7％、至少0.8％、至少0.9％、至少1％、至少1.2％、至少1.4％、至少1.6％、0.1％至2％之间、0.2％至1％之间、0.5％至2％之间或0.3％至0.7％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体的平均脂肪产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0542]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，家禽去脏屠体产量是活重的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、50％至95％之间、60％至85％之间或65％至75％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的家禽去脏屠体产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0543]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且对于被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽，平均家禽去脏屠体产量是活重的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、50％至95％之间、60％至85％之间或65％至75％之间。在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饮食的家禽相比，来自被提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的家禽的平均家禽去脏屠体产量大至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、1％至10％之间、2％至8％之间或3％至5％之间。
[0544]
用于对家禽屠体进行去骨的方法是家禽加工领域的技术人员熟知的。应该理解，从家禽产生的肉可以例如作为回收肉的质量与在加工之前鸟的最终重量的比率来测量。在一些实施方案中，动物是家禽，并且所述家禽是至少35天大、至少42天大、至少6周大、至少6.5周大，之后加工所述家禽以产生家禽去脏屠体、家禽去骨屠体、白肉、胸肉里脊、和胸肉嫩肉、托盘包装鸡肉、无内脏整鸟(wog)或如上所述的肉。
[0545]
在其他实施方案中，动物是家禽，并且动物产品是蛋。在一些实施方案中，动物是猪，并且猪产品是猪的肉(例如，其可以出售给消费者、被加工以产生食物产品或由人食
用)。在一些实施方案中，猪产品产量是从单独猪获得的产量。在一些实施方案中，平均猪产品产量是跨群体求平均的从猪群体中每头单独猪获得的产量。在又另一个实施方案中，平均猪产品产量是除以猪群体中单独猪的数量的从猪群体产生的猪产品总产量。
[0546]
在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂但包括一种或多种抗生素、一种或多种离子载体、可溶性玉米纤维、改性小麦淀粉或酵母甘露聚糖或其任何组合的饮食的动物或动物群体相比，被提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物的动物或动物群体具有更高的平均每日增重、更高的平均每周增重、更高的最终体重增加、更高的平均最终体重增加或增加的平均动物产品产量或其任何组合。
[0547]
本领域技术人员将认识到，最大理论增重对于不同类型的动物可以是不同的，并且对于相同类型动物的不同品种(例如，不同类型的肉鸡或不同类型的猪)可以是不同的。
[0548]
本领域技术人员将认识到，最大理论增重对于不同类型的动物可以是不同的，并且对于相同类型动物的不同品种(例如，不同类型的肉鸡或不同类型的猪)可以是不同的。
[0549]
在一些实施方案中，动物是家禽。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，家禽是单独家禽，而在其他实施方案中，家禽是家禽群体。在其他实施方案中，动物是猪。在可以与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，猪是单独猪，而在其他实施方案中，猪是猪群体。g.饲料摄取量
[0550]
在某些实施方案中，与被提供不包括合成寡糖制剂的饲料的动物相比，向动物提供如本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物导致增加的平均每日饲料摄取量。
[0551]
平均每日饲料摄取量(adfi)是指动物在指定时间段内消耗的平均饲料质量。在某些实施方案中，平均每日饲料摄取量通过以下方式来测量：将已知质量的饲料分配给一组固定数量的动物，从而允许组中的动物在指定的天数内自由(随意)消耗所分配的饲料，在所述时间段结束时称量未消耗的饲料的质量，并将平均每日饲料摄取量(adfi)计算为除以组中动物的数量并且除以所述时间段内的天数的分配的饲料质量减去剩余饲料质量之间的差。在其他实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的方法，将平均每日饲料摄取量针对死亡或从组中剔除的任何动物进行校正。
[0552]
在一些实施方案中，动物是家禽，并且动物饲料组合物是家禽饲料，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的家禽相比，合成寡糖制剂、家禽饲料预混合物或家禽饲料组合物饲料当饲喂给家禽时将平均每日饲料摄取量增加多达约10％或约5％、或者1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0553]
在某些实施方案中，家禽患有疾病或者在受挑战的环境中饲养，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的家禽相比，合成寡糖制剂、家禽营养组合物、家禽饲料预混合物或家禽饲料组合物当饲喂给家禽时将平均每日饲料摄取量增加多达约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％、或者1％与30％之间、5％与30％之间、10％与30％之间、5％与20％之间、10％与20％之间、1％与20％之间、1％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0554]
在可以与前述组合的一些实施方案中，动物是猪，并且动物饲料组合物是猪饲料，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的猪相比，寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物当饲喂给猪时将平均每日饲料摄取量增加多达约15％、约10％或约5％、或者1％与15％之间、2％与15％之间、3％与15％之间、4％与15％之间、5％与15％之间、10％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0555]
在某些实施方案中，猪患有疾病或者在受挑战的环境中饲养，其中与被饲喂没有合成寡糖制剂的饲料组合物的猪相比，合成寡糖制剂、猪营养组合物、猪饲料预混合物或猪饲料组合物当饲喂给猪时将平均每日饲料摄取量增加多达约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％或约5％、或者1％与40％之间、5％与40％之间、10％与40％之间、15％与40％之间、20％与40％之间、25％与40％之间、30％与40％之间、1％与30％之间、5％与30％之间、10％与30％之间、5％与20％之间、10％与20％之间、1％与20％之间、1％与15％之间、1％与10％之间、2％与10％之间、3％与10％之间、4％与10％之间、5％与10％之间、2％与5％之间、2％与6％之间、2％与7％之间、2％与8％之间、2％与9％之间或1％与5％之间。
[0556]
本文所述的增强动物或动物群体的生长的方法包括向所述动物或动物群体提供寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料。可以使用增强动物或动物群体的生长的任何合适的饲喂时间表将寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料以任何合适的形式提供给任何合适类型的动物。h.动物产品品质
[0557]
在一些实施方案中，动物产品(如动物肉)具有提高的品质。本文所述的动物产品包括非肉产品，如乳和蛋。动物肉的品质包括例如颜色、完整性、质地、风味、口感、香味和嫩度。熟练技术人员清楚的是，动物肉的品质将取决于动物的类型。可以使用熟练技术人员已知的标准测定来评估动物肉的品质，包括例如颜色、风味、嫩度和香味。本文所述的动物肉可以使用受过训练的人小组成员进行评估。评价可以包括对产品的观察、感觉、咀嚼和品尝，以判断产品的外观、颜色、完整性、质地、风味和口感等。可以在红光下或在白光下为小组成员上样品。可以为样品分配随机的三位数，并在投票位置旋转以防止偏见。感官判断可以针对“接受性”或“喜欢程度”进行标度，或使用特殊术语。例如，可以使用字母标度(a用于优异；b用于良好；c用于较差)或数字标度(1＝不喜欢；2＝一般；3＝良好；4＝非常好；5＝优异)。可以使用量表对动物肉的总体可接受性或品质或者特定品质属性(如质地和风味)进行评定。可以鼓励小组成员在样品之间用水漱口，并给予小组成员对每个样品发表评论的机会。viii.动物
[0558]
可以将合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物提供给任何合适的动物。在一些实施方案中，动物是单胃的。通常理解，单胃动物具有单室胃。在其他实施方案中，动物是反刍动物。通常理解，反刍动物具有多室胃。在一些实施方案中，动物是处于反刍前期的反刍动物。处于反刍前期的此类反刍动物的例子包括保育小牛。
[0559]
在一些实施方案中，动物是家畜。在一些实施方案中，动物是伴侣动物。在一些实
施方案中，动物是鱼(例如鲑鱼、罗非鱼、热带鱼)、家禽(例如鸡、火鸡)、海鲜(例如虾)、绵羊、母牛、家牛、水牛、野牛、猪(例如保育猪、生长猪/肥育猪)、猫、狗、兔、山羊、豚鼠、驴、骆驼、马、鸽子、雪貂、沙鼠、仓鼠、小鼠、大鼠、鸟或人。
[0560]
在一些实施方案中，动物是家禽。家禽的例子包括鸡、鸭、火鸡、鹅、鹌鹑或童子鸡(cornish game hen)。在一种变型中，动物是鸡。在一些实施方案中，家禽是蛋鸡、肉鸡或火鸡。在其他实施方案中，动物是哺乳动物，包括例如母牛、猪、山羊、绵羊、鹿、野牛、兔、羊驼、美洲驼、骡、马、驯鹿、水牛、牦牛、豚鼠、大鼠、小鼠、羊驼、狗、猫或人。在一种变型中，动物是母牛。在另一种变型中，动物是猪。动物饲料组合物也可以用于水产养殖中。在一些实施方案中，动物是水生动物。水生动物的例子可以包括鳟鱼、鲑鱼、鲈鱼、罗非鱼、虾、牡蛎、贻贝、蛤蜊、龙虾或小龙虾。在一种变型中，动物是鱼。ix.施用
[0561]
在一些实施方案中，施用包括向动物提供本文所述的合成寡糖制剂、营养组合物或动物饲料组合物，使得所述动物可以随意摄取合成寡糖制剂、营养组合物或动物饲料组合物。在此类实施方案中，动物摄取合成寡糖制剂、营养组合物或动物饲料组合物的某一部分。
[0562]
可以根据任何适当的时间表将合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物提供给动物。在一些实施方案中，基于每日、基于每周、基于每月、基于每隔一天、每周中持续至少三天或每月中持续至少七天向动物提供合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物。在一些实施方案中，在某些饮食阶段期间向动物提供寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物。
[0563]
例如，在0至14日龄之间向一些动物提供开食饮食。在其他实施方案中，在15至28日龄之间、在15至35日龄之间或在15至39日龄之间向动物提供生长饮食。在仍其他实施方案中，在29至35日龄之间、在36至42日龄之间或在40至46日龄之间向动物提供肥育饮食。
[0564]
在某些实施方案中，在开食饮食阶段、生长饮食阶段或肥育饮食阶段或其任何组合期间将合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物提供给动物。
[0565]
在某些实施方案中，动物是家禽，并且在0至15日龄之间向所述家禽提供开食饮食，在16至28日龄之间提供生长饮食，并且在29至35日龄之间提供肥育饮食。在其他实施方案中，动物是家禽，并且在0至14日龄之间向所述家禽提供开食饮食，在15至35日龄之间提供生长饮食，并且在36至42日龄之间提供肥育饮食。在仍其他实施方案中，动物是家禽，并且在0至14日龄之间向所述家禽提供开食饮食，在15至39日龄之间提供生长饮食，并且在20至46日龄之间提供肥育饮食。
[0566]
在一些实施方案中，在开食饮食阶段、生长饮食阶段或肥育饮食阶段或其任何组合期间将合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物提供给家禽。
[0567]
可以将本文所述的寡糖制剂饲喂给单独动物或动物群体。例如，在动物是家禽的一种变型中，可以将寡糖制剂饲喂给单独家禽或家禽群体。
[0568]
可以将合成寡糖制剂、营养组合物、动物饲料预混合物或动物饲料组合物以任何适当的形式(包括例如以固体形式、以液体形式或其组合)提供给动物。在某些实施方案中，寡糖制剂或动物饲料组合物是液体，如浆液或溶液。在其他实施方案中，寡糖制剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物是固体，如粒料或粉末。在又其他实施方案中，可以将寡糖制
剂、动物饲料预混合物或动物饲料组合物以液体和固体两种组分(如以糊状物)饲喂给动物。实施例实施例1葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂的合成
[0569]
在三升反应容器中使用经选择以实现kg规模下的合适生产的催化剂负载量、反应时间和反应温度进行葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂的合成。
[0570]
将d
‑
葡萄糖一水合物(825.16g)、d
‑
乳糖一水合物(263.48g)和2
‑
吡啶磺酸(1.0079g，sigma
‑
aldrich，美国圣路易斯)添加到具有中心29/42磨口玻璃接头和两个24/40侧磨口玻璃接头的三升三颈圆底烧瓶中。使用ptfe带将133mm特氟龙搅拌叶片附连至玻璃搅拌轴上。将搅拌棒使用特氟龙轴承适配器通过中心点固定，并且经由挠性联接器附接到顶置式高扭矩机械混合器。将烧瓶固定在半球形电加热罩的内部，所述半球形电加热罩通过温度控制单元经由通过侧面端口之一中的橡胶隔片插入的j型棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。还通过相同的手段插入并固定连接到辅助温度监测器的辅助温度探针。烧瓶的第二侧端口配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0571]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。当反应混合物达到120℃时，将回流冷凝器重新定位成蒸馏配置，其中将蒸馏物收集在置于冰浴中的250ml圆底烧瓶中。在连续混合下，将混合物在130℃下保持6小时，之后将热电偶箱断电。移除蒸馏装置，并且将390g的60℃蒸馏水逐渐添加到三颈烧瓶中。将所得的混合物在40rpm下搅拌10小时。收集大约1,250g粘性浅琥珀色材料，并且通过折射率测量其具有71.6白利糖度的浓度。
[0572]
通过对在反应结束时抽取的反应器内容物的代表性等分试样进行卡尔
·
费歇尔滴定来测量反应器产物的最终水含量。在130℃的反应温度下，测定反应产物的水含量为基于原样的5.8wt％水。实施例2葡萄糖寡糖制剂的合成
[0573]
在三升反应容器中使用经选择以实现kg规模下的合适生产的催化剂负载量、反应时间和反应温度进行葡萄糖寡糖制剂的合成。
[0574]
将d
‑
葡萄糖一水合物(1,150g)添加到具有一个中心29/42磨口玻璃接头和两个侧24/40磨口玻璃接头的三升三颈圆底烧瓶中。使用ptfe带将133mm特氟龙搅拌叶片附连至玻璃搅拌轴上。将搅拌棒使用特氟龙轴承适配器通过烧瓶的中心端口固定，并且经由挠性联接附接到顶置式高扭矩机械混合器。将烧瓶固定在半球形电加热罩的内部，所述半球形电加热罩通过温度控制单元经由通过侧面端口之一中的橡胶隔片插入的j型棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。还通过相同的手段插入并固定连接到辅助温度监测器的辅助温度探针。烧瓶的第二侧端口配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0575]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。当反应温度升高至120℃与130℃之间时，将( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸(1.16g，sigma
‑
aldrich，圣
路易斯)添加到三颈烧瓶中，并且将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底收集烧瓶的蒸馏配置。将该设置保持1个半小时，之后将热电偶箱断电，移除蒸馏装置，并且将390g的23℃蒸馏水逐渐添加到三颈烧瓶中。将所得的混合物在40rpm下搅拌10小时，直到收集的时刻。收集大约1300g粘性深琥珀色材料，并且测量其具有72.6白利糖度的浓度。实施例3葡萄糖
‑
半乳糖
‑
甘露糖寡糖制剂的合成
[0576]
在三升反应容器中使用经选择以实现kg规模下的合适生产的催化剂负载量、反应时间和反应温度进行葡萄糖
‑
半乳糖
‑
甘露糖寡糖制剂的合成。
[0577]
将葡萄糖
‑
半乳糖
‑
甘露糖寡糖制备为独立收集的在单独反应容器中合成的两种单独组分。每种合成使用不同的起始反应物，但是遵循相同的程序和方法来完成。最终的葡萄糖
‑
半乳糖
‑
甘露糖寡糖是由两种合成产物混合形成的均质浆液。
[0578]
为了合成第一组分，将990.54g葡萄糖一水合物、105.58g乳糖一水合物和1.00g的2
‑
吡啶磺酸添加到三升三颈圆底烧瓶中，所述三颈圆底烧瓶具有一个中心29/42磨口接头，其两侧是两个24/40磨口接头。使用ptfe带将133mm特氟龙搅拌叶片附连至440mm玻璃搅拌轴上。将搅拌棒使用特氟龙轴承适配器通过中心点固定，并且经由挠性联接器附接到顶置式高扭矩机械混合器。将烧瓶置于半球形电加热罩的内部，所述半球形电加热罩通过温度控制单元经由通过侧面端口之一中的橡胶隔片插入的j型棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。还通过相同的手段插入并固定连接到辅助温度监测器的辅助温度探针。烧瓶的第二侧端口配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0579]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。一旦观察到温度控制箱读数在120℃与130℃之间，便将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底收集烧瓶的蒸馏配置。将该设置保持大约6小时10分钟，之后将加热套断电，移除蒸馏装置，并且将390g的60℃蒸馏水逐渐添加到三颈烧瓶中。将所得的混合物在40rpm下搅拌10小时，直到收集的时刻。收集大约1250g粘性浅琥珀色材料，并且通过折射率测量其具有73.1白利糖度的浓度。
[0580]
为了合成第二组分，将825.04g葡萄糖一水合物、251.16g来自木材的纯甘露糖、25.10g蒸馏水和1.00g的2
‑
吡啶磺酸添加到三升三颈圆底烧瓶中，所述三颈圆底烧瓶具有一个中心29/42磨口接头，其两侧是两个24/40磨口接头。第二组分的合成的其余部分遵循与第一组分相同的程序和方法，直到收集的时刻。收集大约1250g粘性深琥珀色材料，并且测量其具有72.3白利糖度的浓度。
[0581]
将第一组分和第二组分的全部转移到适当大小的hdpe容器中，并且用手充分混合直至均匀。最终的浆液混合物是大约2.5kg、深琥珀色、粘性的，并且测量其具有大约72白利糖度的浓度。实施例4葡萄糖
‑
甘露糖寡糖制剂的合成
[0582]
在三升反应容器中使用经选择以实现kg规模下的合适生产的催化剂负载量、反应时间和反应温度进行葡萄糖寡糖制剂的合成。
[0583]
将葡萄糖
‑
甘露糖寡糖制备为独立收集的在单独反应容器中合成的两种单独组
分。每种合成使用不同的起始反应物，但是遵循相同的程序和方法来完成。最终的葡萄糖
‑
甘露糖寡糖是由两种合成产物混合形成的均质浆液。
[0584]
为了合成第一组分，将1264.80g葡萄糖一水合物添加到三升三颈圆底烧瓶中，所述三颈圆底烧瓶具有一个中心29/42磨口接头，其两侧是两个24/40磨口接头。使用ptfe带将133mm特氟龙搅拌叶片附连至440mm玻璃搅拌轴上。将搅拌棒使用特氟龙轴承适配器通过中心点固定，并且经由挠性联接器附接到顶置式高扭矩机械混合器。将烧瓶置于半球形电加热罩的内部，所述半球形电加热罩通过温度控制单元经由通过侧面端口之一中的橡胶隔片插入的j型棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。还通过相同的手段插入并固定连接到辅助温度监测器的辅助温度探针。烧瓶的第二侧端口配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0585]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。一旦观察到温度控制箱读数在120℃与130℃之间，便将1.15g的( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸添加到三颈烧瓶中，并且将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底收集烧瓶的蒸馏配置。将该设置保持大约1小时，之后将热电偶箱断电，移除蒸馏装置，并且将390g的23℃蒸馏水逐渐添加到三颈烧瓶中。将所得的混合物在40rpm下搅拌10小时，直到收集的时刻。收集大约1350g粘性浅琥珀色材料，并且测量其具有71.8白利糖度的浓度。
[0586]
为了合成第二组分，将949.00g葡萄糖一水合物、288.00g来自木材的纯甘露糖、27.94g蒸馏水和1.15g的2
‑
吡啶磺酸添加到三升三颈圆底烧瓶中，所述三颈圆底烧瓶具有一个中心29/42磨口接头，其两侧是两个24/40磨口接头。第二组分的合成的其余部分遵循与第一组分相同的程序和方法，直到收集的时刻，不同的是在将回流冷凝器转换为蒸馏配置时没有添加( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸，并且将所得的设置保持大约6小时。收集大约1350g粘性深琥珀色材料，并且测量其具有72.0白利糖度的浓度。
[0587]
将第一组分和第二组分的全部转移到适当大小的hdpe容器中，并且用手充分混合直至均匀。最终的浆液混合物是大约2.7kg、深琥珀色、粘性的，并且通过折射率测量其具有大约72白利糖度的浓度。实施例5葡萄糖
‑
甘露糖寡糖制剂的合成
[0588]
在三升反应容器中使用发现适合于以1kg规模生产的催化剂负载量、反应时间和反应温度进行寡糖制剂的千克规模生产。
[0589]
将葡萄糖
‑
甘露糖寡糖制备为独立收集的在单独反应容器中合成的两种单独组分。每种合成使用不同的起始反应物，但是遵循相同的程序和方法来完成。最终的葡萄糖
‑
甘露糖寡糖是由两种合成产物混合形成的均质浆液。
[0590]
为了合成第一组分，将1261.00g葡萄糖一水合物和1.15g的2
‑
吡啶磺酸添加到三升三颈圆底烧瓶中，所述三颈圆底烧瓶具有一个中心29/42磨口接头，其两侧是两个24/40磨口接头。使用ptfe带将133mm特氟龙搅拌叶片附连至440mm玻璃搅拌轴上。将搅拌棒使用特氟龙轴承适配器通过中心点固定，并且经由挠性联接器附接到顶置式高扭矩机械混合器。将烧瓶固定在半球形电加热罩的内部，所述半球形电加热罩通过温度控制单元经由通过侧面端口之一中的橡胶隔片插入的j型棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反
应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。还通过相同的手段插入并固定连接到辅助温度监测器的辅助温度探针。烧瓶的第二侧端口配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0591]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。一旦观察到温度控制箱读数在120℃与130℃之间，便将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底收集烧瓶的蒸馏配置。将该设置保持大约6小时，之后将热电偶箱断电，移除蒸馏装置，并且将390g的23℃蒸馏水逐渐添加到三颈烧瓶中。将所得的混合物在40rpm下搅拌10小时，直到收集的时刻。收集大约1250g粘性浅琥珀色材料，并且测量其具有73.5白利糖度的浓度。
[0592]
为了合成第二组分，将949.00g葡萄糖一水合物、288.00g来自木材的纯甘露糖、28.94g蒸馏水和1.15g的2
‑
吡啶磺酸添加到三升三颈圆底烧瓶中，所述三颈圆底烧瓶具有一个中心29/42磨口接头，其两侧是两个24/40磨口接头。第二组分的合成的其余部分遵循与第一组分相同的程序和方法，直到收集的时刻。收集大约1250g粘性深琥珀色材料，并且测量其具有73.3白利糖度的浓度。
[0593]
将第一组分和第二组分的全部转移到适当大小的hdpe容器中，并且用手充分混合直至均匀。最终的浆液混合物是大约2.5kg、深琥珀色、粘性的，并且测量其具有大约73白利糖度的浓度。实施例6葡萄糖
‑
半乳糖寡糖制剂的合成
[0594]
在三升反应容器中使用发现适合于以1kg规模生产的催化剂负载量、反应时间和反应温度进行寡糖制剂的千克规模生产。
[0595]
将3l三颈烧瓶配备有经由10mm直径的玻璃搅拌轴连接到14cm新月形混合元件的顶置式混合器。将混合元件定位成距烧瓶的壁具有大约5mm间隙。将烧瓶经由半球形电加热罩加热，所述电加热罩由温度控制单元供电，所述温度控制单元连接到插入反应烧瓶中的棒型热电偶探针。将热电偶探针放置成在混合元件上方提供5
‑
10mm间隙。向烧瓶中装入576克食品级右旋糖一水合物和577克食品级d
‑
半乳糖一水合物，并且加热至大约115℃，以获得熔融糖浆。一旦获得浆液，便为烧瓶配备上通过循环冷却的乙二醇/水冷却至4℃的夹套式回流冷凝器并且温度。将31克dowex marathon c(水分含量0.48g h2o/g树脂)添加到混合物中以形成搅拌悬浮液。将冷凝器重新定位成蒸馏配置，并且将悬浮液加热至145℃。
[0596]
将大约80rpm的混合速度和145℃的温度保持3.8小时，之后将温度控制单元上的设定点降低到80℃，并且将119ml的60℃去离子水逐渐添加到烧瓶中，以获得含有残留dowex树脂的深琥珀色浆液。将所得的悬浮液进一步稀释至60白利糖度，冷却至室温并通过0.45微米过滤器真空过滤以除去树脂。获得1,200克的60白利糖度浓度的浅琥珀色浆液。实施例7葡萄糖寡糖制剂的合成
[0597]
在三升反应容器中使用发现适合于以1kg规模生产的催化剂负载量、反应时间和反应温度进行寡糖制剂的千克规模生产。
[0598]
将3l三颈烧瓶配备有经由10mm直径的玻璃搅拌轴连接到14cm新月形混合元件的顶置式混合器。将混合元件定位成距烧瓶的壁具有大约5mm间隙。将烧瓶经由半球形电加热
罩加热，所述电加热罩由温度控制单元供电，所述温度控制单元连接到插入反应烧瓶中的棒型热电偶探针。将热电偶探针放置成在混合元件上方提供5
‑
10mm间隙。向烧瓶中逐渐装入1,148克食品级右旋糖一水合物，并且加热至大约115℃，以获得熔融糖浆。一旦获得浆液，便为烧瓶配备上通过循环冷却的乙二醇/水冷却至4℃的夹套式蒸馏冷凝器。使反应温度逐渐升高至145℃。一旦获得所述温度并且其稳定，便将31克dowex marathon c(水分含量0.48g h2o/g树脂)添加到混合物中，并且将大约80rpm的混合速度和145℃的温度保持3.8小时。
[0599]
3.8小时后，将温度控制单元上的设定点降低到80℃，并且将119ml的60℃去离子水逐渐添加到烧瓶中，以获得含有残留dowex树脂的深琥珀色浆液。将所得的悬浮液进一步稀释至60白利糖度，冷却至室温并通过0.45微米过滤器真空过滤以除去树脂。获得1,113克的60白利糖度浓度的深琥珀色葡萄糖寡糖浆液。实施例8寡糖制剂的单锅合成
[0600]
在一升反应容器中使用发现适合于单锅反应的催化剂负载量、反应时间和反应温度以300克规模展示来自实施例3的寡糖的单锅(单组分)合成。
[0601]
将来自玉米的30g食品级d
‑
葡萄糖一水合物、来自木材的37.50g食品级d
‑
甘露糖、15.60g食品级d
‑
乳糖一水合物、3.96g蒸馏水和0.270g的2
‑
吡啶磺酸(sigma
‑
aldrich，圣路易斯)添加到一升三颈圆底烧瓶中，所述三颈圆底烧瓶具有一个中心29/42磨口接头，其两侧是两个24/40磨口接头。使用ptfe带将特氟龙搅拌叶片附连至220mm玻璃搅拌轴上。将搅拌棒使用特氟龙轴承适配器通过中心点固定，并且经由挠性联接器附接到顶置式高扭矩机械混合器。将烧瓶固定在半球形电加热罩的内部，所述半球形电加热罩通过温度控制单元经由通过侧面端口之一中的橡胶隔片插入的j型棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。还通过相同的手段插入并固定连接到辅助温度监测器的辅助温度探针。烧瓶的第二侧端口配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0602]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。一旦观察到温度控制箱读数在120℃与130℃之间，便将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底收集烧瓶的蒸馏配置。在连续搅拌下，将混合物在130℃下保持大约5小时40分钟，之后移除加热罩和蒸馏装置。将大约40g的23℃蒸馏水逐渐添加到三颈烧瓶中。将所得的混合物在40rpm下搅拌10小时，直到收集的时刻。收集大约389g粘性深琥珀色材料，并且测量其具有67.0白利糖度的浓度。通过sec色谱法和2d hsqc nmr波谱法来确认与来自实施例3的寡糖制剂的一致性。实施例9对寡糖制剂的表征
[0603]
使用来自实施例1
‑
8的方法和程序来制备实施例1
‑
7的寡糖的重复批次和共混物。在制备实施例9.1
‑
9.7的不同批次中，采用对应合成方案的多锅(多组分)变型和单锅变型。将所得的材料通过hplc尺寸排阻色谱法(sec)进行分析以表征分子量分布，通过lc
‑
ms/ms分析进行分析以定量dp2脱水糖含量，并且通过2d 1
h、
13
c
‑
hsqc nmr进行分析以指纹分析相应寡糖制剂的分子结构。如下制备材料：
[0604]
实施例9.1：制备十一批来自实施例1的寡糖制剂，并且将其共混成四个单独份以产生寡糖9.1。
[0605]
实施例9.2：制备七批来自实施例2的寡糖制剂，并且将其共混成两个单独份以产生寡糖9.2。
[0606]
实施例9.3：制备十二批来自实施例3的寡糖制剂，并且将其共混成五个单独份以产生寡糖9.3。
[0607]
实施例9.4：制备四批来自实施例4的寡糖制剂，并且将其共混成单份以产生寡糖9.4。
[0608]
实施例9.5：制备四批来自实施例5的寡糖制剂，并且将其共混成单份以产生寡糖9.5。
[0609]
实施例9.6：制备两批来自实施例6的寡糖制剂，并且将其共混成单份以产生寡糖9.6。
[0610]
实施例9.7：制备两批来自实施例7的寡糖制剂，并且将其共混成单份以产生寡糖9.7。
[0611]
通过以下方式以300克规模合成实施例1
‑
7的寡糖制剂的其他结构变型：使用实施例1
‑
7的方法，但是改变起始糖组成、酸、酸负载量、时间和反应温度。如下合成寡糖制剂：
[0612]
实施例9.8：使300克蔗糖、3克磷酸和27克水在125℃下反应约一小时，以获得深棕色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0613]
实施例9.9：使270克葡萄糖、30克蔗糖、0.3克苯基膦酸和27克水在130℃下反应一与四小时之间，以获得深棕色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0614]
实施例9.10：使225克葡萄糖、75克乳糖、3克丁基膦酸和27克水在130℃下反应一与四小时之间，以获得深琥珀色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0615]
实施例9.11：使225克葡萄糖、75克乳糖、3克苯基膦酸和27克水在130℃下反应一与五小时之间，以获得深琥珀色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0616]
实施例9.12：使270克葡萄糖、30克乳糖、3克苯基次膦酸和27克水在130℃下反应三与五小时之间，以获得深棕色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0617]
实施例9.13：使300克葡萄糖、3克苯基次膦酸和27克水在130℃下反应一至三小时，以获得深琥珀色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0618]
实施例9.14：使300克葡萄糖、2克丙酸和27克水在130℃下反应一至四小时，以获得琥珀色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0619]
实施例9.15：使300克葡萄糖、0.15克8
‑
羟基
‑5‑
喹啉磺酸水合物和27克水在130℃下反应两至四小时，以获得琥珀色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0620]
在上述反应中，所有质量都是指纯组分质量，并且反应物水的总质量包括由反应物糖的水分含量和/或水合水提供的任何携带水。
[0621]
实施例9.16：使10克葡萄糖、0.01克8
‑
羟基
‑5‑
喹啉磺酸水合物和1克水在130℃下反应，以获得琥珀色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0622]
实施例9.17：使大约8克葡萄糖、大约2克乳糖、0.01克2
‑
吡啶磺酸和1克水在130℃下反应，以获得琥珀色寡糖浆液，然后将其用蒸馏水稀释至60白利糖度。
[0623]
对寡糖制剂的表征：
[0624]
将所得的材料通过hplc尺寸排阻色谱法(sec)进行分析以表征分子量分布，通过lc
‑
ms/ms分析进行分析以定量dp2脱水糖含量，并且通过2d 1
h、
13
c
‑
hsqc nmr进行分析以指纹分析相应寡糖制剂的分子结构。
[0625]
通过hplc测定的聚合物分子量：
[0626]
通过hplc测定实施例9.1
‑
9.7的寡糖制剂的数均分子量(mwn)和重均分子量(mww)。以0.45ml/min的蒸馏水作为流动相，使用agilent pl aquagel
‑
oh 20柱在40℃下在具有折射率检测的agilent 1100系列hplc上进行sec分析。使用具有已知分子量的标准溶液进行保留时间对mw校准，并且使用本领域的标准方法从sec色谱图测定各种分布特性。在多份的情况下寡糖制剂的mwn和mww示出于下表1中。表1.寡糖制剂的mwn和mww寡糖制剂mwn(g/mol)mww(g/mol)9.1719
±
111,063
±
239.2808
±
301,336
±
1229.3757
±
151,186
±
499.47611,1969.57551,1779.65057099.7762
±
121,154
±
14
[0627]
通过gc
‑
ms进行的脱水dp2含量分析：
[0628]
在水/乙腈35/65的等度条件下，在1ml/min的流速下，使用capcell pak nh2(shiseido；250x4.6 mm，5μm)柱通过lc
‑
ms/ms测定寡糖制剂的脱水dp2含量。在ms之前，将流1:4分开，并且添加50μl 0.05％nh4oh的补充流以增强电离。对于ms检测，以阴性模式使用esi探针，并且mrm方法允许靶向分析。
[0629]
首先相对于作为参考组合物的实施例9.7的寡糖制剂的脱水dp2含量测定寡糖制剂的脱水dp2含量。然后通过hplc
‑
ms/ms测定实施例9.7的参考寡糖制剂的绝对脱水dp2含量为约10％，然后通过计算获得实施例9.1至9.6的寡糖制剂的脱水dp2含量。相对和绝对dp2含量测定为如表2中所述的。表2.在多份的情况下寡糖制剂的脱水dp2含量
[0630]
通过2d 1
h、
13
c
‑
hsqc nmr所得的分子指纹：
[0631]
通过2d 1
h、
13
c
‑
hsqc nmr波谱法表征实施例9的寡糖制剂的分子结构。通过以下方式来制备样品：在40℃下干燥125mg(基于干固体)寡糖制剂，并且将其再溶解于含有0.1％丙酮的d2o中。在于400mhz的质子频率下操作的bruker avance nmr波谱仪上或在配备有低温冷却的5mm tci探针的于600mhz的质子频率下操作的bruker avance iii nmr波谱仪上在300k下采集nmr谱。图1提供了寡糖制剂9.7的寡糖制剂的说明性2d 1
h、
13
chsqc nmr谱。
[0632]
使用1h、
13
c
‑
hsqc谱的异头区f2(δ1h)＝4.2
‑
6.0ppm和f1(δ
13
c)＝90
‑
120ppm来指纹分析寡糖制剂的键联分布。对异头区中的每个峰进行积分，并且相对于总异头区的相对丰度测定其相对丰度。对四份的寡糖制剂9.1进行2d 1
h、
13
c hsqc指纹分析。表3.寡糖制剂9.1的f2和f1峰的相对丰度
实施例10对寡糖制剂的脱水糖亚基的测定
[0633]
在bruker ultraflex仪器上通过maldi
‑
ms测定实施例9的寡糖制剂中脱水糖亚基的相对丰度。将样品溶解于水中至10mg/ml的浓度，将来自其中的5μl与基质溶液(在比率为1:10的80％乙醇和水中的30mg/ml dhb)混合。通过将1μl分析物溶液施加到目标板来制备板，并且将其在环境空气下干燥。在一些情况下，在ms分析之前通过施加1μl乙醇使样品重新结晶。
[0634]
图2提供了来自实施例9的寡糖制剂的说明性maldi谱。清楚地观察到脱水糖亚基
为偏移峰，所述偏移峰相对于其对应的主dp母体移位了
‑
18g/mol。在dp的所有值下都观察到偏移峰，这表明在所有寡糖大小下都检测到脱水糖亚基。对于每种dp，确定脱水亚基峰的相对强度为总峰强度的约10％，由此确定总脱水亚基相对丰度为约10％。图32a和图32b展示了来自实施例2的寡糖制剂的maldi谱。在每种dp水平下都观察到脱水糖亚基，其相对强度在5％
‑
10％的范围内。实施例11对寡糖制剂的脱水亚基的表征
[0635]
使用lc
‑
ms、gc
‑
ms、lc
‑
ms/ms和nmr方法的组合表征实施例9的寡糖制剂的脱水糖亚基。
[0636]
对脱水dp1组分的表征：
[0637]
通过制备型液相色谱法离析来自实施例9的寡糖制剂的脱水dp1组分。通过以下方式来制备所离析的脱水dp1组分以用于nmr：将其溶解于0.75ml d2o中。图3提供了从实施例9的寡糖离析的脱水dp1级分的说明性1d 1
h
‑
nmr谱，并且图4提供了相同的所离析的脱水dp1级分的说明性apt 13
c
‑
nmr谱。
[0638]
使用表4中的以下峰分配，通过nmr测定1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
呋喃葡萄糖与1,6
‑
脱水
‑
β
‑
d
‑
吡喃葡萄糖的比率为2:1。表4.nmr峰分配表4.nmr峰分配
a ov指示重叠信号
[0639]
对脱水dp2组分的表征
[0640]
使用lc
‑
ms、gc
‑
ms、lc
‑
ms/ms和nmr方法的组合表征实施例9的寡糖制剂的脱水糖亚基。通过gc
‑
ms和lc
‑
ms/ms分析来测定实施例9的寡糖制剂的脱水dp2含量。使用含有hp
‑
5ms固定相的30m x 0.25mm熔融石英柱以21.57psi恒压氦气作为载气进行气相色谱法。通过以下方式来通过乙酰化预衍生化等分试样：在60℃下将20mg样品溶解于0.5ml吡啶和0.5ml乙酸酐中，持续30分钟。在300℃下注射1ul样品，且烘箱温度程序从70℃开始并按10℃/分钟升温至315℃。在agilent 5975c msd上以70ev的电子能进行检测。
[0641]
图5展示了寡糖制剂9.7的gc
‑
ms色谱图的放大图。tic和xic(m/z 229)图证明，dp2和脱水dp2组分被清楚地解析。图37a至图37b、图38a至图38b、图39a至图39b和图40a至图40b分别展示了在实施例1、实施例3、实施例4和实施例7的寡糖制剂中如通过gc
‑
ms检测到的dp1、脱水dp1、dp2和脱水dp2级分的存在。如图37a至图37b、图38a至图38b、图39a至图39b和图40a至图40b所示，脱水dp1和dp1级分的保留时间为约12
‑
17分钟，并且脱水dp2和dp2级分的保留时间为约22
‑
25分钟。
[0642]
图43展示了在不同激光能量下比较来自实施例9的寡糖制剂的maldi
‑
ms谱。信号的相对丰度几乎没有变化，这证明不会因激光电离而引入水损失。因此，证明了寡糖制剂中脱水糖亚基的存在。实施例12对寡糖制剂中焦糖化亚基的观察
[0643]
通过hplc分析和2d 1
h、
13
c hsqc nmr的组合展示了包含5
‑
羟甲基糠醛焦糖化亚基的寡糖制剂。将来自实施例9的寡糖制剂的50mg等分试样溶解于0.8ml d2o中。分析所得的2d 1
h、
13
c hsqc谱中5
‑
hmf与葡萄糖的异头碳之间糖苷键联的存在，所述谱具有以下峰分配：1h nmr:δ＝9.39ppm(cho,m),7.44ppm(ar
‑
h,m),6.68ppm(ar
‑
h,m),4.60ppm(ch2,m)；和
13
c nmr:δ＝180.0,150.6,126.2,112.7,159.9,64.5。在0.65ml/min等度洗脱和uv检测下，使用25mm硫酸水溶液，使用配备有3000mm bio
‑
rad aminex87h的agilent 1100hplc系统通过hplc确认游离5
‑
hmf的不存在。5
‑
hmf是针对真实样品进行定量的。在实施例9的寡糖制剂中没有观察到5
‑
hmf峰，但是在预期不会在水解产物中产生游离5
‑
hmf的条件下低温酸水解寡糖制剂后观察到5
‑
hmf峰。图6提供了掺入焦糖化亚基的寡糖制剂的说明性2d 1
h、
13
c
‑
hsqc nmr谱。实施例13比较实施例
[0644]
通过maldi
‑
ms分析商业5kda右旋糖酐中脱水糖亚基的存在。图7示出了从主dp峰(851.268g/mol下的na 加合物)偏移
‑
18g/mol的偏移峰的明显存在。相比之下，发现右旋糖酐样品基本上不含脱水糖亚基。实施例14通过lc
‑
ms/ms对脱水dp组分的定量
[0645]
通过液相色谱法离析寡糖制剂的dp2级分。将样品溶解于水中，并且在水/乙腈35/65的等度条件下，在1ml/min的流速下，使用capcell pak nh2(shiseido；250x 4.6mm,5μm)柱分离。在一些情况下，在色谱分离后，添加50μl 0.05％nh4oh以增强电离。通过ms/ms检测来测定脱水dp2含量。对于ms检测，以阴性模式使用esi探针，并且mrm方法允许靶向分析。图8a展示了在水中的1
‑
80μg/ml的浓度范围上对来自实施例9的寡糖制剂的检测，且lc
‑
ms/ms色谱图下面积对浓度的校准曲线呈线性(如图8b所示)。
[0646]
图33a至图33c、图34a至图34c、图35a至图35c和图36a至图36c分别展示了在实施例1、实施例3、实施例4和实施例7的寡糖制剂中通过lc
‑
ms/ms检测到的脱水dp2、脱水dp1和dp2种类的存在。实施例15包含寡糖制剂的饲料的制备
[0647]
制备家禽和猪饮食以展示寡糖制剂向饮食中的掺入。如下制备表现出多种成分组成的对照饲料和通过用实施例9的寡糖制剂增补对应对照饲料而获得的相应经处理饲料：
[0648]
实施例饲料15.1：使用62％玉米粉和32％大豆粉制备对照饲料15.1(ctr)。通过用500mg/kg的来自实施例9的寡糖制剂增补对照饲料15.1(ctr)来制备经处理饲料15.1(trt)。对于经处理饮食，通过以下方式来以粉末形式提供寡糖制剂：将寡糖干燥到作为载体的经研磨的稻壳上，并且使用微量成分天平将粉末添加到混合器中，之后进行造粒。
[0649]
实施例饲料15.2：使用62％玉米粉、3％大豆浓缩物和26％大豆粉制备对照饲料15.2(ctr)。通过用500mg/kg的来自实施例9的寡糖制剂增补对照饲料15.2(ctr)来制备经处理饲料15.2(trt)。对于经处理饮食，通过以下方式来以粉末形式提供寡糖制剂：将寡糖干燥到作为载体的经研磨的稻壳上，并且使用微量成分天平将粉末添加到混合器中，之后进行造粒。
[0650]
实施例饲料15.3：使用52％玉米粉、6％玉米淀粉、5％大豆浓缩物、26％大豆粉和氧化钛微量示踪剂制备对照饲料15.3(ctr)。通过用500mg/kg的寡糖制剂增补对照饲料15.3(ctr)来制备经处理饲料15.3(trt)。对于经处理饮食，通过以下方式来以粉末形式提供寡糖制剂：将寡糖干燥到作为载体的经研磨的稻壳上，并且使用微量成分天平将粉末添加到混合器中，之后进行造粒。
[0651]
实施例饲料15.4：使用55％玉米粉和39％大豆粉制备对照饲料15.4(ctr)。通过用1,000mg/kg的寡糖制剂增补对照饲料15.4(ctr)来制备经处理饲料15.4(trt)。对于经处理饮食，通过以下方式来以粉末形式提供寡糖制剂：将寡糖干燥到作为载体的经研磨的稻壳上，并且使用微量成分天平将粉末添加到混合器中，之后进行造粒。
[0652]
实施例饲料15.5：使用62％玉米粉、3％大豆浓缩物和26％大豆粉制备对照饲料15.5(ctr)。通过用500mg/kg的来自实施例9的寡糖制剂增补对照饲料15.5(ctr)来制备经处理饲料15.5(trt)。对于经处理饮食，以粉末形式提供寡糖制剂，并且使用微量成分天平将粉末添加到混合器中，之后进行造粒。
[0653]
实施例饲料15.6：对照饲料15.6(ctr)是商业美国玉米
‑
大豆开食家禽饲料。经处理饲料15.6(trt)是含有500ppm寡糖制剂的商业美国玉米
‑
大豆开食家禽饲料。对于经处理饮食，以粉末形式提供寡糖制剂，并且使用微量成分天平将粉末添加到混合器中，之后进行造粒。
[0654]
实施例饲料15.7：对照饲料15.7(ctr)是具有以下饮食组成的研究玉米
‑
大豆家禽饲料：玉米粉62.39％、大豆粉31.80％、碳酸钙0.15％、磷酸氢钙2.2％、氯化钠0.15％、dl
‑
甲硫氨酸0.15％、l
‑
赖氨酸0.10％、大豆油2.00％、维生素
‑
矿物质预混合物1.00％和抗球虫药0.06％。通过用1000ppm的实施例9.1的寡糖制剂补充对照饲料15.7(ctr)来获得经处理饲料15.7(trt)。对于经处理饮食，将寡糖制剂作为在水中的60％浆液来提供，并且通过将浆液喷射在造粒后的饲料上来施加。
[0655]
实施例饲料15.8：对照饲料15.8(ctr)是具有以下组成的研究玉米
‑
大豆家禽饲料：小麦粉48.45％、大豆粉32.00％、黑麦12％、碳酸钙0.20％、磷酸氢钙2.00％、氯化钠0.20％、dl
‑
甲硫氨酸0.15％、大豆油4.00％、维生素
‑
矿物质预混合物1.00％。通过用1000ppm的实施例9.3的寡糖制剂补充对照饲料15.7(ctr)来获得经处理饲料15.7(trt)。对于经处理饮食，将寡糖制剂作为在水中的60％浆液来提供，并且通过将浆液喷射在造粒后
的饲料上来施加。
[0656]
如本领域技术人员将理解的，15.1
‑
15.6还含有工业标准水平的脂肪、维生素、矿物质、氨基酸、其他微量营养物和饲料酶。在一些情况下，饲料含有抗球虫药，但是在所有情况下都不含抗生素生长促进剂。根据标准实践，将饲料作为糊状、造粒或粉碎饮食来提供。实施例16饲料样品的提取
[0657]
通过提取加工根据实施例15的程序制备的饮食。将饲料样品用磨机研磨。将五克所得的经碾磨饲料称重到50ml容量瓶中，并且添加热水(大约80℃)。摇荡后，将混合物在80℃下的超声波水浴中孵育30分钟。冷却后，将溶液以3000xg离心20min，并且将上清液通过1.2μm过滤器过滤，之后通过0.45μm过滤器(并且在一些情况下通过0.22μm过滤器)过滤。用旋转蒸发器将所得的过滤溶液蒸干。
[0658]
在一些情况下，使用在水中的50wt％乙醇作为替代性提取溶剂进行提取。在一些情况下，使用5,000道尔顿分子量截止膜过滤器进行过滤步骤。实施例17饲料提取物的酶促加工
[0659]
对实施例16的饲料提取物进行一个或多个酶促水解步骤以消化天然存在于饲料中的寡糖。使用α
‑
淀粉酶和淀粉糖苷酶的混合物来消化葡萄糖寡糖和淀粉的α(1,4)键联。使用转化酶和α
‑
半乳糖苷酶来除去蔗糖、棉子糖和其他常见的纤维糖。
[0660]
如下制备酶溶液：以800u/ml在乙酸铵缓冲液(含有0.5mm mgcl2和200mm cacl2的乙酸铵0.2m ph 5)中的淀粉葡糖苷酶(黑曲霉(a.niger))36000u/g溶液；α
‑
淀粉酶(猪胰腺)100000u/g megazyme：以800u/ml在乙酸铵中的溶液；来自面包酵母(酿酒酵母(s.cerevisiae))的转化酶300u/mg sigma：以600u/ml在乙酸铵缓冲液中的溶液；来自黑曲霉的α
‑
半乳糖苷酶megazyme 1000u/ml。
[0661]
将实施例16的干饲料提取物重悬浮于10ml乙酸铵缓冲液中。添加50μlα
‑
淀粉酶(最终4u/ml)、50μl淀粉葡糖苷酶(最终4u/ml)、50μl转化酶(最终3u/ml)。任选地添加20μlα
‑
半乳糖苷酶(最终2u/ml)。将溶液在60℃下孵育4小时。然后将经消化的提取物通过超滤过滤器(vivaspin turbo 4，5000mwco，sartorius)过滤，之后在氮气蒸发系统上蒸干。在酶促消化的变型中，组合使用上述酶中的一种或多种，并且消化时段在4小时至过夜消化之间变化。将酶浓度最高变化为上述负载量的两倍，并且将完整的酶促消化程序在同一饲料上依序重复多次。表5.用于提取和消化的饲料样品列表
脱水寡聚物是指含脱水亚基寡糖。空白饲料是指不具有添加的脱水寡聚物的营养组合物。酶a＝淀粉葡糖苷酶(黑曲霉)36000u/g megazyme酶b＝α
‑
淀粉酶(猪胰腺)100000u/g megazyme酶c＝来自面包酵母(酿酒酵母)的转化酶300u/mg sigma酶d＝来自黑曲霉的α
‑
半乳糖苷酶620u/mg megazyme实施例18对饲料中寡糖制剂的检测
[0662]
测定根据实施例15的对照饮食和经处理饮食，以检测寡糖制剂的不存在或存在。在制造饮食后，从最终饲料中抽取1kg样品。使用实施例16的程序通过水提取获得饲料的可提取固体含量。根据实施例14的程序，通过lc
‑
ms/ms分析所得的提取物中脱水dp种类的存在。
[0663]
图9示出了实施例15.1(ctr)
‑
15.6(ctr)的对照饲料中脱水dp2种类的不存在与实施例15.1(trt)
‑
15.6(trt)的经处理饲料中脱水dp2种类的存在。使用对所得的lc
‑
ms/ms色谱图的积分来确定在最终饲料中实施例9的寡糖制剂的存在。具体地，如果脱水dp2峰下面积超过检出限(或在所述方法中建立的任何其他合适的阈值)，则确定饲料含有对应的寡糖制剂。实施例19对饲料中寡糖制剂的定量
[0664]
测定根据实施例15的对照饮食和经处理饮食，以测定最终饲料中寡糖制剂的浓度。在制造饮食后，从最终饲料中抽取1kg样品。使用实施例16的程序通过水提取获得饲料的可提取固体含量。根据实施例14的程序通过lc
‑
ms/ms分析所得的提取物中脱水dp种类的存在，并且将脱水dp2峰的面积与标准校准曲线进行比较，以测定饲料中寡糖制剂的浓度
(表6)。表6.饲料中寡糖制剂的浓度饲料对照饲料中的寡糖含量(ppm)经处理饲料中的寡糖含量(ppm)实施例15.1未检测到1642实施例15.2未检测到953实施例15.3未检测到1912实施例15.4未检测到549实施例15.5未检测到406实施例15.6痕量401实施例20对含脱水亚基寡糖的nmr表征
[0665]
将包含脱水亚基的葡萄糖寡糖制剂通过以下进行表征：i)聚合度和ii)葡萄糖单元的糖苷键联分布。
[0666]
通过nmr波谱法鉴定α(1,1)α、α(1,1)β、β(1,1)β、α(1,2)、β(1,2)、α(1,3)、β(1,3)、α(1,4)、β(1,4)、α(1,6)和β(1,6)键联的相对摩尔丰度。如下确定异头质子的1h nmr化学位移：考虑区域d＝4.5
‑
5.5ppm，且共价键合的c
‑
2至c
‑
6的共振聚集在约d 3.2和3.9ppm处。由于在c
‑
2处与h原子耦合，因此异头质子显现为双峰并且轴向位置显现在比赤道位置更高的场处。糖构象根据相邻质子的耦合常数来阐明：赤道
‑
赤道，赤道
‑
轴向(小耦合常数)或轴向
‑
轴向(更大的耦合常数)。
[0667]
还通过
13
c nmr进行了对糖苷键联的阐明。通过质子偏共振去耦或极化转移来区分伯碳、仲碳、叔碳和季碳。与甲氧基附接的碳在比具有游离羟基的相应碳原子更低的场处共振，并且具有轴向羟基的环碳原子通常在比具有赤道羟基的相应碳更高的场处吸收。因此，遵循这些准则，并且与文献中对于类似糖的1h和
13
c两者所报道的化学位移进行比较，分配了大多数信号。
[0668]
为了测定键联分布，使用j
‑
res和1h、
13
c
‑
hsqc。对于一些样品，hsqc方法显示出优异的性能。对于每次分析，将大约50mg冷冻干燥产物溶解于d2o中并转移到5mm nmr管中。通过过滤除去任何残留的催化剂或固体。在于对应于150mhz碳拉莫尔频率的600mhz质子下操作的bruker avance iii nmr波谱仪上进行nmr实验。所述仪器配备有低温冷却的5mm tci探针。所有实验都在298k下进行。在氘化水(4.75ppm)中记录并校准1h nmr谱。用丙酮(30.9ppm)校准
13
c nmr谱。使用topspin 3.5采集数据，并且将其用在个人计算机上运行的acd/labs进行处理。
[0669]
图10提供了在溶剂预饱和的情况下含脱水亚基葡萄糖寡糖的样品的代表性2d
‑
1h jres nmr谱。根据表7进行不同糖苷键联的分配。表7.含脱水亚基葡萄糖寡糖样品中糖苷键联的相对摩尔丰度(2d
‑
1hjres nmr方法)
[0670]
如表7所示，对于一些样品，在通过不同实验室使用用于2d
‑1hjres nmr分析的不同仪器进行的实验之间观察到差异。
[0671]
图11提供了含脱水亚基葡萄糖寡糖样品的代表性1h、
13
c
‑
hsqc nmr谱，其具有用于键联分布的相关共振和分配。相比之下，发现通过1h、
13
c
‑
hsqc nmr进行的测定在两个不同的实验室和仪器之间是一致的，如表8所示。表8.四种含脱水亚基葡萄糖寡糖样品中糖苷键联的相对摩尔丰度(1h、
13
c
‑
hsqc mmr方法)
[0672]
进行扩散排序nmr波谱法(dosy)，以根据扩散系数并因此根据mw分离不同种类的nmr信号。图12中dosy谱的上部处的信号对应于高dp种类，而较低的dp种类显现在下方。图12展示了表8中的三种含脱水亚基寡糖的1h dosy谱的叠加。实施例21dp1和dp2级分的半制备性离析
[0673]
使用waters beh酰胺19x 150mm柱通过制备型hplc进行对dp1级分的制备性离析。
作为流动相，使用水作为溶剂a并且使用乙腈作为溶剂b，各自具有0.1％氨。所应用的梯度示出于表9中。将8次分离的收集dp1级分合并，干燥并再溶解于0.75ml d2o中以如前所述进行nmr分析。
[0674]
为了表征dp2级分，进行2步纯化。第一步是在快速色谱法系统上使用elsd(蒸发光散射检测器)进行。用1ml dmso、0.5ml水和0.5ml乙腈稀释2ml(2.65g)寡糖制剂。将溶液混合并超声处理15min。将1ml溶液注射在使用的ymc dispopackat、nh2、球形、25μm、120g柱上。以40ml/min用在水中的75％乙腈运行等度梯度法来分离寡糖制剂。将含dp2的级分用氮气干燥，并且再溶解于dmso/水(80:20，v/v)中。
[0675]
对于第2个纯化步骤，在40
°
下使用具有ymc nh
2 4.6x 250mm(5μm)柱的分析型uplc系统。用等度梯度(表10)和1ml/min的流速纯化dp2级分。为了触发elsd的收集，使用1:5柱后分流。将来自12次色谱运行的dp2级分合并，通过加热的氮气除去乙腈，并且通过冷冻干燥除去残留水。将干级分再溶解以用于随后的lc
‑
ms/ms和nmr分析。表9.梯度法时间(min)流速(ml/min)溶剂a溶剂b02510902.52510902325257523.125109047251090表10.等度法时间(min)流速(ml/min)水(％)acn(％)0125751512575实施例22具有单调递减的dp分布的寡糖制剂的合成
[0676]
将330克d
‑
葡萄糖一水合物和0.3克( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸添加到一升三颈烧瓶中，所述三颈烧瓶具有通过柔性联接由高扭矩机械混合器提供的顶置式机械混合。将烧瓶固定在半球形电加热罩的内部，所述电加热罩由温度控制单元经由插入反应混合物中的棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。烧瓶配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0677]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。当反应温度升高至在120℃与130℃之间时，将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底接收烧瓶的蒸馏配置。在120rpm混合下，将反应在130℃下保持六十分钟，并且以10分钟间隔随时间的变化记录收集在接收烧瓶中的冷凝物的质量。通过添加蒸馏水并除去加热来使反应淬灭。在将产物混合物冷却至室温后，将产物浆液的等份试样稀释至约1白利糖度，如通过折射率测定的。将经稀释的等分试样使用0.2微米注射器式过滤器进行微过滤，并且通过hplc尺寸排阻色谱法(sec)进行分析。以0.45ml/min的蒸馏水作为流动相，使用agilent pl aquagel
‑
oh 20柱在40℃下在具有折射率检测的agilent 1100系列hplc上进
行sec分析。使用具有已知分子量的标准溶液进行保留时间对mw校准。测定dp平衡常数为k＝3.3，并且发现dp分布是单调递减的。图15和图16示出了如通过hplc
‑
sec测定的实施例9的不同寡糖制剂的dp分布的形状。实施例23具有非单调dp分布的寡糖制剂的合成
[0678]
将330克d
‑
葡萄糖一水合物和0.3克( )
‑
樟脑
‑
10
‑
磺酸添加到一升三颈烧瓶中，所述三颈烧瓶具有通过柔性联接由高扭矩机械混合器提供的顶置式机械混合。将烧瓶固定在半球形电加热罩的内部，所述电加热罩由温度控制单元经由插入反应混合物中的棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。烧瓶配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0679]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至135℃。当反应温度升高至130℃时，将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底接收烧瓶的蒸馏配置。在120rpm混合下，将反应在135℃下保持三十五分钟。通过添加蒸馏水并除去加热来使反应淬灭。在将产物混合物冷却至室温后，将产物浆液的等份试样稀释至约1白利糖度，如通过折射率测定的。将经稀释的等分试样使用0.2微米注射器式过滤器进行微过滤，并且通过hplc尺寸排阻色谱法(sec)进行分析。以0.45ml/min的蒸馏水作为流动相，使用agilent pl aquagel
‑
oh 20柱在40℃下在具有折射率检测的agilent 1100系列hplc上进行sec分析。使用具有已知分子量的标准溶液进行保留时间对mw校准。发现dp分布是非单调递减的。图16展示出，dp3含量大于dp2含量，并且dp4和dp5含量基本上相等。实施例24寡糖制剂的分批补料合成
[0680]
将330克d
‑
葡萄糖一水合物和0.3克2
‑
吡啶磺酸添加到一升三颈烧瓶中，所述三颈烧瓶具有通过柔性联接由高扭矩机械混合器提供的顶置式机械混合。将烧瓶固定在半球形电加热罩的内部，所述电加热罩由温度控制单元经由插入反应混合物中的棒热电偶操作。将热电偶的尖端调整为驻留于反应混合物内，且在混合元件上方具有数mm间隙。烧瓶配备有回流冷凝器，所述回流冷凝器由通过再循环浴冷却器保持低于4℃的水
‑
乙二醇混合物冷却。
[0681]
在以80
‑
100rpm的搅拌速度进行的连续混合下，将反应混合物逐渐加热至130℃。当反应温度升高至在120℃与130℃之间时，将装置从回流冷凝器转换为具有置于冰浴中的圆底接收烧瓶的蒸馏配置。在120rpm下，将反应保持在130℃下，并且以20分钟间隔随时间的变化记录收集在接收烧瓶中的冷凝物的质量。210分钟后，向反应中再添加110克d
‑
葡萄糖一水合物。420分钟后，通过添加蒸馏水并除去加热来使反应淬灭。在将产物混合物冷却至室温后，将产物浆液的等份试样稀释至约1白利糖度，如通过折射率测定的。将经稀释的等分试样使用0.2微米注射器式过滤器进行微过滤，并且通过hplc尺寸排阻色谱法(sec)进行分析。以0.45ml/min的蒸馏水作为流动相，使用agilent pl aquagel
‑
oh 20柱在40℃下在具有折射率检测的agilent 1100系列hplc上进行sec分析。使用具有已知分子量的标准溶液进行保留时间对mw校准。测定dp平衡常数为k＝0.8，并且发现dp分布是单调递减的。实施例25
被饲喂寡糖制剂的商业肉鸡的生长性能
[0682]
使肉鸡接受实施例15.6的饮食而生长以确定寡糖制剂对动物的生长性能的影响。具体地，根据行业实践和三阶段饲喂程序，制造了含有干酒糟及可溶物(ddgs)、抗球虫药和标准微量营养物共混物的商业玉米
‑
大豆粉家禽饲料。通过近似分析，饲料组成测定为如表11所示的。表11.饲料组成
[0683]
如实施例15.6中所述，针对每个阶段制备对照饮食(ctr)和经处理饮食(trt)，其中通过使用实施例9.7的寡糖制剂以1磅/经处理短吨增补对照饮食来制备经处理饮食。总共制造了约50短吨的每种饮食。
[0684]
从商业家禽孵化场获得孵化日哈伯德(hubbard)m99
×
科宝(cobb)500未鉴别小鸡，并且将其随机置于36ft
×
40ft围栏中，所述围栏被构造成隧道通风的泥地面禽舍。总共放置了大约30,000只鸟，每个围栏中具有相等数量的鸟。舍垫料由上面铺有新鲜木刨花的堆积褥草组成。采用标准的商业环境和照明程序。每日检查动物和舍设施，包括记录总体健康状态、饲料消耗、设施的水供应和温度。每日记录任何死亡。
[0685]
向奇数围栏中的鸟饲喂经处理饮食(即，以2磅/吨包含量含有饲料添加剂)，并且使偶数围栏中的鸟接受对照饮食。从第一天到第7天，所有饮食都经由每个围栏中的自动饲喂器并在饲喂器托盘上随意提供。从奶嘴饮水管线随意提供水。
[0686]
开食阶段发生于第0天至第13天，生长阶段发生于第14天到第27天，并且休药阶段发生于第28天到研究结束，即第31天。在第0天和第31天按围栏记录鸟重量。记录每个围栏的消耗饲料的总质量。然后根据标准行业实践测定每个围栏的增重和fcr。
[0687]
在第31天，从每个围栏中随机选择六只雄鸟用于血液和盲肠取样。记录每只取样鸟的活重。经由翅膀穿刺将血液样品收集到vacutainer管中，并且在凝固和血清分离后冷冻。然后经由颈椎脱位法对每只取样鸟实施安乐死，之后使用标准兽医方法提取盲肠。解剖后，将盲肠内容物转移到15ml锥形管中，记录盲肠内容物的重量，并且将内容物快速冷冻至
‑
80℃。
[0688]
从取样鸟的重量来看，处理组表现出体重的11分增加，其在p<0.05下是显著的(通过anova)。实施例26对家禽盲肠微生物群的鸟枪法测序
[0689]
对于从实施例25的研究获得的总共96只取样鸟，测定所鉴定的分类群的相对丰度。对于实施例25中获得的每种微生物群样品，将盲肠内容物解冻，并且使用标准方法提取dna。在illumina hiseq
‑
x仪器上以2x150 bp读段分析所提取的dna。进行标准分析以处理原始测序数据，包括：修整(衔接子，bbduk)、熵过滤(k＝5，窗口＝20，min＝50，bbduk)、质量过滤(平均值q20，bbduk)、原鸡属(gallus)过滤(bowtie2)。分类学分配是相对于metaphlan2(db_v20)数据库进行的。实施例27未消化饲料和寡糖制剂的微生物转化
[0690]
在从实施例25的取样鸟获得的家禽盲肠微生物群中，离体评估寡糖制剂对通过未消化饲料的微生物发酵产生的代谢物概况的影响。
[0691]
将待测试的寡糖制剂的等分试样在水中稀释至20wt％寡糖，通过0.22微米pes注射器式过滤器进行微过滤，并且在厌氧条件下脱气。通过以下方式制备并同时灭菌家禽饲料消化物(模拟盲肠消化物)：将商业玉米
‑
大豆肉鸡饲料的10g样品悬浮于50ml水中，然后使其在120℃下经受两个高压灭菌循环持续5分钟，之后进行水提取和重悬浮。将所得的饲料消化物在厌氧条件下脱气。
[0692]
将所提取的盲肠样品在厌氧条件下解冻，并且用于在含有15％甘油的ph 7.4磷酸盐缓冲盐水(pbs)中制备20％w/v悬浮液。对所得的盲肠浆料进行分析，以确认其系统发育组成紧密地代表了最初取样的微生物群(在实施例24中测序)的系统发育组成。根据标准16s rrna管线(usearch和silva(v4)db)，通过16s rrna分析(以2s250 bp进行16sv4 pcr/illumina miseq测序)以12,230个读段/样品的稀疏截止值评估盲肠浆料。按门丰度，盲肠浆料被测定为包含大约70％厚壁菌门(firmicutes)、20％拟杆菌门(bacteroidetes)、7％软壁菌门(tenericutes)，并且其余为变形菌门(proteobacteria)、蓝细菌门(cyanobacteria)、放线菌门(actinobacteria)和疣微菌门(verrucomicrobia)。
[0693]
在厌氧条件下工作，将悬浮液的等分试样以2,000xg离心，通过移液管除去上清液，并且将沉淀物重悬以在基本生长培养基中形成1％w/v盲肠浆料，所述基本生长培养基由以下项的无菌水性混合物组成：900mg/l氯化钠、26mg/l二水氯化钙、20mg/l六水氯化镁、10mg/l四水氯化锰、40mg/l硫酸铵、4mg/l七水硫酸铁、1mg/l六水氯化钴、300mg/l磷酸氢二钾、1.5g/l磷酸氢二钠、5g/l碳酸氢钠、0.125mg/l生物素、1mg/l吡哆醇、1m/l泛酸、75mg/l组氨酸、75mg/l甘氨酸、75mg/l色氨酸、150mg/l精氨酸、150mg/l甲硫氨酸、150mg/l苏氨酸、225mg/l缬氨酸、225mg/l异亮氨酸、300mg/l亮氨酸、400mg/l半胱氨酸和450mg/l脯氨酸。
[0694]
对于实施例9中的每种寡糖制剂，将20wt％寡糖溶液的25ul等分试样、饲料消化物的225ul等分试样和250ul的1％盲肠浆料一式三份加载至96孔深孔微量滴定板(例如，costar 3958板)中。每个板含有一组空白孔，所述空白孔通过将25ul水、225ul饲料消化物和250ul的1％盲肠浆料合并而制备。然后将经加载的板在厌氧条件下在37℃下孵育45小时。孵育后，将孔的内容物移取到1.5ml eppendorf管中，以2000xg微离心至少5分钟，并且收集所得的上清液。实施例28寡糖制剂对杯状细胞增殖的刺激
[0695]
在体外评价在来自实施例9的寡糖制剂存在下的杯状细胞增殖。用200ul生长培养
基和40,000个杯状细胞接种96孔falcon板中的孔，并且生长三天。相对于对照(仅生长培养基)，以0.1mg/ml的浓度平行(n＝6个孔/寡糖)测试来自实施例9的寡糖制剂。使细胞分化四天，其中两天后完全更换生长培养基。然后将板用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤，并且通过用4％多聚甲醛(cellomics#28906，用pbs 1:4稀释)处理细胞30分钟进行固定。然后将板用pbs洗涤两次，并且用阿尔新蓝(abcam ab150662ph 2.5)粘蛋白染色剂进行染色。通过以下方式进行染色：将细胞在乙酸溶液中孵育3分钟，之后在室温下将细胞在阿尔新蓝溶液中孵育30分钟，然后用水洗涤2分钟，并且用蒸馏水进行两次最终冲洗。
[0696]
通过hoechst染色和自动显微镜(10倍物镜，49个视野)对细胞核进行定量，其中视野大小为641x 641微米。在0.1mg/ml下，各种寡糖制剂产生杯状细胞增殖的约1％至约5％之间的增加(表12)。表12.杯状细胞计数实施例29寡糖制剂对粘液产生的刺激
[0697]
在体外评价寡糖制剂对杯状细胞的粘液产生的影响。用200ul生长培养基和40,000个杯状细胞接种96孔falcon板中的孔，并且生长三天。通过以下方式平行(n＝6个孔/寡糖)测试寡糖制剂：用实施例27中的寡糖制剂的离体发酵获得的上清液增补细胞生长培养基。对于每种寡糖制剂，将来自实施例27的相应上清液用培养基1:20稀释并微过滤。通过1:20稀释发酵培养基给出对照。使细胞分化四天，其中两天后完全更换生长培养基。然后将板用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤，并且通过用4％多聚甲醛(cellomics#28906，用pbs 1:4稀释)处理30分钟进行固定。然后将板用pbs洗涤两次，并且用阿尔新蓝(abcam ab150662ph 2.5)粘蛋白染色剂进行染色。通过以下方式进行染色：将细胞在乙酸溶液中孵育3分钟，之后在室温下将细胞在阿尔新蓝溶液中孵育30分钟，然后用水洗涤2分钟，并且用蒸馏水进行两次最终冲洗。通过hoechst染色和自动显微镜(10倍物镜，49个视野)对细胞核进行定量，其中视野大小为641x 641微米。
[0698]
在spectramax读板仪上通过600nm处的吸光度来定量粘蛋白产生。为了考虑孔之
间细胞计数的差异，将吸光度针对每100,000个细胞的od600进行归一化。观察到对杯状细胞粘液产生的明显且统计学上显著的影响，如表13所示。表13.粘液产生实施例30对健康肠道屏障完整性的刺激
[0699]
在体外评价寡糖制剂对健康肠道屏障功能的影响。将caco
‑
2细胞与杯状细胞在半透膜上共培养，分化，然后用使用实施例25的取样盲肠微生物群获得的实施例27的微生物组上清液处理。相对于对照，测量跨内皮电阻(teer)的变化。具体地，将caco
‑
2和杯状细胞接种在半透插入物上并置于含有合适生长培养基的室中，如图18所展示。使细胞生长13天以获得表现出紧密连接的分化单层，这通过进行基线teer测量来确认。
[0700]
以n＝6个重复分析实施例9的多种寡糖制剂。对于每种寡糖制剂，将来自实施例27的相应上清液用生长培养基1:20稀释，通过0.2微米过滤器进行微过滤，并且施加到室的顶端侧。通过施加生长培养基的1:20稀释液来提供对照。24小时后，对每种寡糖制剂进行teer测量。对于每一种，测定处理后与处理前teer的变化。将对照的teer的变化归一化为100％。
[0701]
对于某些寡糖制剂，观察到如通过teer测量的健康肠道屏障功能的统计学上显著的改善。相对于对照，各种寡糖制剂的teer的改善从约0％至约15％变化。特别地，实施例9.2的寡糖制剂相对于对照提供了teer的14％增加。结果示出于表14中。表14.合成寡糖制剂的相对于对照的teer增加寡糖制剂相对于对照的teer增加ex.9.18％
±
2％ex.9.214％
±
1％ex.9.32％
±
1％ex.9.49％
±
2％ex.9.615％
±
1％ex.9.72％
±
1％实施例31对非特异性免疫功能的刺激
[0702]
在体外测定寡糖制剂对非特异性吞噬作用的影响。通过流式细胞术针对在两种差异浓度(1mg/ml和2mg/ml)下的ex.9.3的寡糖制剂存在下受调理的大肠杆菌细胞的摄入分析仔猪粒细胞。将具有摄入病原体的粒细胞数量与未摄入病原体的粒细胞数量进行比较，以测定吞噬指数。
[0703]
在1mg/ml寡糖制剂ex.9.3存在下，测定吞噬指数为82，而在2mg/ml的浓度下，测定吞噬指数为106，这反映了病原体摄入的29％增加。图19提供了示例性流式细胞图，其展示了对具有和不具有摄入病原体的粒细胞的鉴定。
[0704]
对于遭受常见病原体的肉鸡，在体内测定寡糖制剂对免疫和炎症反应的影响。
[0705]
在处理组中使用如表15中所述的两种背景饮食类型饲喂鸟。在表16中所述的处理组中提供了包含寡糖制剂的饮食。表15.背景饮食类型表15.背景饮食类型表16.处理组处理组背景饮食寡糖制剂剂量(ppm)对照1类型1无 对照2类型2无 处理1类型2实施例9.171,000处理2类型2实施例9.61,000处理3类型2实施例9.11,000处理4类型2实施例9.41,000处理5类型2实施例9.81,000处理6类型2实施例9.31,000
[0706]
初生雄性科宝500肉鸡由商业孵化场提供。在到达当天(第
‑
8天)，将鸡以50只为一组放置，持续8天的导入期。在导入期期间，用对照饮食饲喂动物。在第0天，按体重将动物分组(每组8只鸟)，并且通过单独灌胃向接受饮食类型2的所有鸟施用10倍剂量的paracox
‑
5(msd animal health)减毒口服球虫病疫苗(堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、和缓艾美球虫和柔嫩艾美球虫的混合物)。然后将每组置于层架式鸡笼中，并且随机分成处理组，每组各自有两个重复。
[0707]
将动物饲养在温度与鸟龄相适应的环境受控房间中。随意提供水和所有饮食。在第7天和第14天，从每个重复随机选择鸟并对其实施安乐死。将取样鸟立即解剖。使用标准实践来获得回肠消化物、盲肠消化物、回肠组织和派尔斑组织的样品。通过pcr阵列分析组织样品中对应于炎症和免疫系统细胞因子和趋化因子的基因表达。
[0708]
与对照1处理组(饮食类型1)中的鸟相比，对照2处理组(饮食类型2)中的鸟的il12β、il18、ifnγ、il10、il22、il1β、il21和il6的第7天派尔斑表达增加了至少1.5倍，如图20所展示。在对照2处理组中，il12β、ifnγ、il17α、il16、il21、il8l1和tnfsf13β的回肠表达也增加了至少1.5倍。细胞因子和趋化因子表达数据指示2型饮食中暴露于艾美球虫属病原体的鸟的炎症和免疫反应。
[0709]
对于分别被饲喂实施例9.1和9.3的寡糖制剂的处理组3和6中的鸟，观察到改善的免疫反应。根据细胞因子和趋化因子表达数据，在第7天观察到对应于2型t辅助细胞以及粒细胞和干细胞刺激的适应性免疫系统活性增加。表达数据与多能造血干细胞向骨髓祖细胞的分化增加、粒细胞增殖增加以及t细胞、b细胞和肥大细胞的整体激活一致。
[0710]
到第14天，白介素表达数据指示免疫系统调节和抗炎途径，包括来自调节性t细胞的il9信号传导和il6抗炎肌细胞因子活性。表达数据表明，与对照组2中暴露于病原攻击但未被提供寡糖制剂的鸟相比，对饮食类型2相关病原体的适应性免疫反应增加，之后更快恢复至稳态。实施例32受攻击的肠道屏障完整性的恢复
[0711]
以n＝6个重复分析实施例9的多种寡糖制剂。对于每种寡糖制剂，将来自实施例27的相应上清液用生长培养基1:20稀释，通过0.2微米过滤器进行微过滤，并且施加到室的顶端侧。通过施加生长培养基的1:20稀释液来提供对照。24小时后，对每种寡糖制剂进行teer测量。对于每一种，测定处理后与处理前teer的变化。将对照的teer的变化归一化为100％。
[0712]
在体外评价寡糖对肠漏症屏障功能的影响。既评价了寡糖制剂本身的直接影响，又评价了从寡糖制剂获得的微生物组产物的间接影响。将caco
‑
2和杯状细胞接种在半透插入物上并插入含有合适生长培养基的室中，并且用来自实施例2的各种寡糖制剂或来自实施例3的相应上清液处理。使用跨内皮电阻并通过测量荧光染料的通透性来评估屏障完整性。
[0713]
将caco
‑
2和杯状细胞接种在半透插入物上并置于含有合适生长培养基的室中，如图21所展示。以n＝6个重复评估寡糖制剂、仅包含培养基的阴性对照和仅包含培养基的阳性对照。对于每一种，使细胞生长13天以获得分化单层。洗涤细胞并进行teer测量以建立基线读数。将对照归一化为100％。
[0714]
以n＝6个重复分析实施例9的多种寡糖制剂。对于所测试的每种寡糖制剂，将来自
实施例9的相应浆液用蒸馏水稀释至5％，用蒸馏水进一步1:20稀释，通过0.2微米过滤器进行微过滤，并且施加到室的顶端侧。为了评估所测试的每种寡糖制剂的间接影响，将来自实施例25的相应上清液用蒸馏水1:20稀释，通过0.2微米过滤器进行微过滤，并且施加到室的顶端侧。通过施加生长培养基的1:20稀释液来提供对照。
[0715]
在读取基线teer后，对于寡糖制剂中的每一种和阳性对照，将鼠李糖脂顶端应激源施加到顶端室。对于寡糖制剂中的每一种、阳性对照和阴性对照，将荧光染料荧光黄施加到顶端室。在顶端应激源和荧光黄染料存在三小时后，进行第二次teer测量以评估应激源对屏障完整性的影响。通过测量从细胞层和膜的顶端侧到基底侧的荧光黄渗透程度来评估屏障通透性。
[0716]
对于某些寡糖制剂，观察到如通过teer和染料渗透性测量的受破坏肠道屏障功能的统计学上显著的改善。相对于对照，各种寡糖制剂的teer的改善从约0％至约30％变化。观察到寡糖制剂的直接和间接两种影响。
[0717]
特别地，实施例9.3的寡糖制剂相对于对照提供了染料渗透性的显著直接降低，而实施例9.2的寡糖相对于对照提供了染料渗透性的显著间接降低。实施例9.7的寡糖既不提供染料渗透性的直接降低也不提供其间接降低，并且实施例9.6的寡糖的直接施加加剧了由于顶端应激源而引起的屏障功能破坏。实施例33在肉鸡中活体生长性能研究的荟萃分析
[0718]
通过跨多个地区、一年中的时间、背景饮食类型、鸟遗传学和管理实践(包括褥草处理和球虫病控制计划)进行的一系列独立研究，在体内评估寡糖制剂对商业肉鸡的活体生长性能的影响。在每项研究中，将鸟分配到处理组，包括一个对照组和一个或多个经处理组。仅向对照组饲喂背景饮食。向经处理组饲喂补充有指定剂量的实施例9的寡糖制剂的背景饮食。在选定的研究中，包括用于养禽业的商业饲料添加剂作为比较实施例。
[0719]
对于每项研究，将鸟饲养在位于典型肉鸡舍的围栏中，每个围栏中具有指定数量(hd/rep)的鸟。通过将围栏随机分配到处理组来实施统计重复，每种处理有指定数量(reps/trt)的重复。表17汇总了分析中所包括的每项研究的方案细节。表17.每项研究的方案细节
[0720]
研究结果包括鸟重量(bw)、饲料摄取量(fi)、饲料转化率(fcr)、死亡百分比(按头)和死亡重量。围栏是统计单元。在可能的情况下，实施空间阻断，并且将处理组随机分配到街区。
[0721]
背景饮食：
[0722]
根据当地行业实践，在饮食阶段饲喂鸟，总研究长度在35与49天之间。将开食阶段饮食通常从鸟放置到研究第15天作为粉碎物来提供。所有饮食都不含抗生素生长促进剂。开食对照饮食构建描述于表18中(na＝数据无法从站点获得)。表18.开食对照饮食构建
[0723]
将生长阶段饮食从第16天到第24天作为粒料来提供。生长对照饮食构建详见于表19中(na＝数据无法从站点获得)。表19.生长阶段对照饮食构建
[0724]
将肥育阶段饮食从第16天到第24天作为粒料来提供。肥育对照饮食构建详见于表20中(na＝数据无法从站点获得)。表20.肥育阶段对照饮食构建
[0725]
处理组：
[0726]
对于每项研究，设计处理组以比较寡糖制剂与对照饮食的效应。对于选定的研究，设计处理组以评估寡糖制剂的剂量
‑
反应曲线。通过以下方式获得经处理饮食：共混足够量的来自实施例9的相应寡糖制剂，使得最终寡糖含量达到指定剂量(基于干固体的ppm单位)。在选定的研究中，比较实施例(comp.ex 36)由商业全酵母产品(diamond v xpc original)提供。根据表21分配处理。表21.处理组分配
[0727]
使用本领域已知的标准设备和方法来制备背景饮食和经处理饮食两者。对于经处理饮食，在背景饮食之上配制寡糖制剂和比较产品，并且在造粒前将其添加到混合器中。通过饲料中(in
‑
feed)测定来确认寡糖包含量。
[0728]
活体生长阶段和取样：
[0729]
随意提供饲料和水。在每项研究中都根据相应地区的当地行业实践实施商业照明和温度程序。每日检查围栏，并且在研究日志中记录任何死亡的计数和重量。不需要兽医干预。
[0730]
对于每个饮食阶段，对于每个围栏测量总围栏增重、鸟的起始数量和结束数量以及总饲料消耗量。对于每个围栏，通过将总围栏重量除以称重时围栏中的鸟数量来计算平均鸟重量(bw)。对于每个围栏，通过将间隔内的总饲料摄取量除以相应围栏的总增重来计
算饲料转化率(fcr)。通过加回在此期间死亡的总重量，将fcr针对死亡进行调整(fcrma)。为了考虑围栏重量的差异，使用本领域已知的方法将fcrma针对共同体重进行校正，以获得每个围栏的经校正fcr(cfcr)。对于各种鸟遗传学，使用对于相应遗传学已公布的随生长天数变化的bw和fcr性能目标测定校正因子。
[0731]
在选定的研究中，在第15天和/或在最后研究日从每个围栏中随机选择一只鸟进行取样。对于每只取样鸟，将5ml血液从翅膀静脉抽入血清vacutainer中。凝固后，通过离心回收血清，移取出，并且在干冰上冷冻以用于以后的处理。然后根据当地伦理程序对每只取样鸟实施安乐死，并且进行解剖。将盲肠内容物移取到5ml锥形管中，并且立即快速冷冻以进行微生物组全基因组测序和盲肠代谢组学。获取少量切除的回肠组织，对其进行处理以使rna失活并冷冻以用于以后的基因表达分析。实施例34研究荟萃分析
[0732]
进行实施例36的体内研究的统计荟萃分析，以相对于被饲喂对照饮食的鸟评估寡糖饲料添加剂和比较产品对鸟性能的影响。所述分析采用处理组作为固定效应和随机效应的混合线性模型用于嵌套块的研究。在r版本3.4.4(2018
‑
03
‑
15)中进行统计分析。将结果通过最小二乘均值与p<0.05下的统计显著性进行评估。根据tukey方法进行成对比较，并且为其分配字母标签：a、b、c、d
…
。在其tukey分组标签中没有共同字母的处理在成对比较下在p<0.05下显著不同。
[0733]
饲料转化率：
[0734]
cfcr的研究效应在p<0.05下是显著的。相对于对照饮食，寡糖处理在500ppm包含量下提供cfcr的至少2.7pt改善，而比较实施例在1250ppm包含量下提供cfcr的2.2pt改善。实施例9.4的寡糖在500ppm包含量下提供cfcr的6.4pt改善。cfcr的荟萃分析结果呈现于表22中。表22.cfcr的荟萃分析
[0735]
相对于比较实施例comp.ex.36，寡糖处理组表现出更高的效应一致性。对于多项研究中所包括的每种寡糖，通过以下方式来评估其对cfcr影响的一致性：确定其中相对于
对照观察到给定值的cfcr改善的研究的分数。例如，实施例9.2的寡糖在500ppm包含量下在80％研究中提供至少3pt cfcr益处，在60％研究中提供至少4pt cfcr益处，在40％研究中提供至少5pt cfcr益处，并且在40％研究中提供至少6pt cfcr益处。比较实施例在1250ppm包含量下仅在25％研究中提供3pt cfcr益处，并且未在任何研究中提供4pt cfcr益处或更高益处。表23.处理组对cfcr影响的一致性
[0736]
观察到cfcr与饮食中寡糖的包含率之间的明显剂量反应。对于ex.9.2的寡糖，在100ppm包含量下观察到2.4pt cfcr益处(p>0.05)，在250ppm包含量下观察到3.7pt cfcr益处(p<0.05)，在1000ppm包含量下观察到6.4pt cfcr益处(p<0.05)。
[0737]
鸟重量：
[0738]
bw的研究效应在p<0.05下是显著的。相对于对照饮食，寡糖处理在500ppm包含量下提供至少48.9克增加的体重，而比较实施例在1250ppm包含量下提供39.6克增加的体重。相对于对照，实施例9.5的寡糖在500ppm包含量下提供81.8克增加的bw。鸟重量的荟萃分析结果呈现于表24中。表24.鸟重量的荟萃分析
[0739]
群均匀度：
[0740]
相对于被饲喂对照饮食的鸟，被饲喂500ppm包含量的寡糖制剂的鸟表现出改善的群均匀度。对于每个处理组，通过以下方式来评估群均匀度：计算落在其相应研究的平均鸟重量的
±
5％左右范围内的鸟重量的分数。跨所有研究36.1
‑
36.15求平均，被饲喂对照饮食的鸟中有81.7％落在平均鸟重量的
±
5％内，而被饲喂用ex.9.2的寡糖处理的饮食的鸟中有91.3％落在平均鸟重量的
±
5％内。均匀度效应在p<0.01下是显著的，如通过非参数ansari
‑
bradley检验测量的。实施例35被饲喂寡糖的肉鸡中的炎症减少且营养物吸收改善
[0741]
在商业肉鸡中体内评估寡糖对炎症反应和营养物吸收的影响。初生雄性肉鸡(科宝500)从商业孵化场(joseph grelier s.a.，elevage avicole de la bohadi
è
re，f
‑
49290saint
‑
laurent de la plaine，法国)获得。
[0742]
处理和饮食：
[0743]
向鸟饲喂含有ddgs但不含抗生素生长促进剂和抗球虫药的标准商业玉米/大豆粉饮食。将饮食分两个饮食阶段饲喂：从第1天至第22天饲喂开食阶段饮食，并且将其配制成提供210g/kg粗蛋白和12.5mj/kg me。从第23天至第36天饲喂生长阶段饮食，并且将其配制成提供190g/kg粗蛋白和12.9mj/kg me。为所有饮食以100mg/kg饲料的标准剂量补充植酸酶饲料酶(ronozyme hiphos)。
[0744]
在到达当天(第1天)，将鸟置于地面围栏中，所述地面围栏具有18只鸟/围栏和提供有木刨花的褥草。将围栏随机分配到四个处理组之一，每种处理有12个重复。向对照组饲喂不含有添加寡糖的饮食，而向经处理组饲喂通过在对照饮食之上添加寡糖而获得的饮食。不同的处理组呈现于表25中。表25.处理组构建处理组寡糖处理a(对照)无b实施例9.1(500ppm)
c实施例9.3(500ppm)d实施例9.7(500ppm)
[0745]
生长和取样：
[0746]
将鸟饲养在温度和照明与鸟龄相适应的环境受控房间中。在研究的前几天期间，在每个围栏中放置红外电加热灯。随意提供饲料和水，其中饲料在研究的前十天内作为粉碎粒料来提供，并且在生长的其余时间内作为造粒饲料来提供。在第1天、第22天和第26天记录围栏重量和饲料摄取量。每日记录死亡。
[0747]
在第36天，从每个围栏中随机选择一只鸟，对其实施安乐死并解剖。收集回肠内容物和盲肠内容物，并且将其立即冷冻以用于分析。在空肠起始处下方约10cm处收集大约1平方cm的回肠组织，并且对进行处理以保存rna和遗传材料，以便用于基因表达分析。
[0748]
基因表达分析：
[0749]
使用肠道健康阵列分析回肠组织，以定量与炎症反应和免疫相关联的18个基因、与肠道完整性相关联的5个基因和与营养物吸收相关联的4个基因的表达水平。在被饲喂含有寡糖的饮食的鸟与被饲喂对照饮食的鸟之间比较基因表达水平。在被饲喂含有500ppm的实施例9.3的寡糖的饲料的鸟中，观察到对四个基因的统计学显著影响，如图22所展示。观察到免疫和抗炎基因il1b、il4、il10的表达的1.5倍至2倍增加。观察到碳水化合物转运蛋白基因slc5a10的两倍增加。这些数据表明，相对于被饲喂对照饮食的鸟，被饲喂实施例9.3的寡糖的鸟的回肠炎症减少并且营养物吸收改善。相比之下，被饲喂含有实施例9.1的寡糖的饮食的鸟表现出与促炎反应相关联的基因ifng和il17b的表达增加。实施例36寡糖对遭受炎症攻击的鸟的影响
[0750]
在肉鸡中体内评估寡糖对局部和全身免疫反应、炎症反应、器官健康状态和肠道形态的影响。
[0751]
处理、饮食和炎症攻击
[0752]
将初生雄鸟(科宝500)分配到层架式鸡笼中，每个鸡笼有十只鸟。在研究的前八天，向所有鸟饲喂相同的对照饮食，所述对照饮食包含常规的玉米
‑
大豆家禽饮食，其以100mg/kg饲料的标准剂量补充有植酸酶(ronozyme hiphos)，但不含抗生素生长促进剂和抗球虫药。
[0753]
在第9天开始，将鸡笼分配到四个处理组之一，每个处理组有两个鸡笼。每个处理组的细节呈现于表26中。表26.处理组构建表26.处理组构建
[0754]
使处理a(对照组)继续接受与到第8天一直饲喂的相同的饮食。向处理b(受攻击组)饲喂补充有1％马铃薯蛋白的对照饮食，以在消化道上诱导轻度饮食应激。向处理c饲喂补充有500ppm的实施例9.3的寡糖的受攻击饮食。向处理d饲喂补充有500ppm的实施例9.2的寡糖的受攻击饮食。
[0755]
将鸟饲养在随意提供饲料和水的环境受控房间中。在第14天，使处理组b、c和d中的所有鸟接受10倍剂量的球虫病疫苗(
‑
5，msd animal health)，以通过暴露于减毒堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、和缓艾美球虫和柔嫩艾美球虫的孢子化卵囊来诱导肠道炎症反应。
[0756]
生物取样：
[0757]
在第21天和第28天中的每一天，从每个处理组中移取出一个鸡笼。对来自每个鸡笼的鸟实施安乐死并解剖以进行生物取样和分析。收集回肠组织和派尔斑，并且对其进行处理以用于基因表达和组织学分析。抽取血液样品以经由淋巴细胞分型(派尔斑)来分析局部免疫反应，并且经由测量免疫球蛋白(iga)和α
‑
糖蛋白(急性期肝反应蛋白)来分析全身免疫和炎症反应。还分析血液中的二胺氧化酶(dao)水平，并且收集肝组织用于组织学。
[0758]
通过在施用炎症攻击后的一周和两周进行分析，提供了对寡糖对动物免疫和炎症反应的幅度和时间依赖性的影响的评估。
[0759]
回肠营养物吸收
[0760]
回肠基因表达分析揭示，处理b的炎症攻击显著降低了回肠对碳水化合物、蛋白质和磷营养物的吸收。在第21天，相对于处理a的对照组，对于处理b的受攻击组观察到转运蛋白基因si、slc34a2和scl15a1的表达的2至3倍之间的降低。
[0761]
相比之下，分别含有实施例9.3和9.2的寡糖的处理组c和d表现出不到一半的回肠吸收减少。在第28天，处理c和d的通过slc34a2表达指示的磷吸收在统计学上与对照相似，并且得到改善，如图23所示。
[0762]
回肠绒毛品质和杯状细胞计数
[0763]
从处理组d中的鸟与处理组b中的鸟取样的回肠组织图像描绘于图24中。处理组d中的鸟表现出显著增加的绒毛长度和较少的炎性损伤，如通过回肠组织学揭示的。因此，与未被饲喂实施例9的寡糖的鸟相比，被饲喂实施例9的某些寡糖的鸟表现出改善的对由于急性炎症攻击而致的回肠组织损伤的抗性。
[0764]
与组b中的受攻击鸟相比，在组d中观察到回肠杯状细胞计数的显著(p<0.05)增加(图25)。杯状细胞负责粘蛋白产生以及回肠的其他关键功能。因此，与未被饲喂实施例9的寡糖的鸟相比，被饲喂实施例9的某些寡糖的鸟表现出改善的维持由于急性炎症攻击而致的健康回肠功能的能力。
[0765]
t细胞分化：
[0766]
如图26所展示，与受攻击组b中的鸟相比，处理组c和d中的鸟表现出增加的t辅助细胞增殖。组d中的鸟表现出与组a中未受攻击鸟在统计学上没有区别的t辅助细胞水平，如作为占总派尔斑淋巴细胞的百分比测量的。此外，当与受攻击组b中的鸟相比时，组c和组d鸟表现出更低百分比的分化为t细胞毒性细胞的淋巴细胞。
[0767]
肝组织学和急性期肝蛋白：
[0768]
肝组织学和血液分析表明，与b组中的鸟相比，处理组c中的鸟表现出减少的炎性
损伤，这表明实施例9.3的寡糖提供针对肝损伤的保护(图27a)。组织学评分如图27b所展示的进行。相对于未受攻击对照组a，组c中的鸟表现出比组b中的鸟约低50％的肝损伤增加。组b中的鸟表现出循环急性期肝α
‑
糖蛋白(agp)的显著增加(图27c)。到研究的第28天，被饲喂实施例9.3的寡糖的鸟表现出与组a中未受攻击对照鸟在统计学上没有区别的血液agp水平。
[0769]
增强的免疫球蛋白和二胺氧化酶水平恢复：
[0770]
测量免疫球蛋白a(iga)的血清水平，以观察寡糖制剂对遭受炎症攻击的鸟的免疫反应和恢复速度的影响。iga是参与尤其是膜的免疫功能和炎症反应的抗体。在第21天，即施用炎症攻击后一周，组b中的鸟表现出约2.25mg/ml的血清iga浓度增加，而组a中的未受攻击对照鸟为约1.85mg/ml。相比之下，被饲喂实施例9.2的寡糖制剂的组d中的鸟表现出约4.4mg/ml的增加的iga反应。在第28天，即施用炎症攻击后两周，组b中的鸟表现出约4.35mg/ml的血清iga浓度，而组d中的鸟表现出已降至约2.1mg/ml的血清iga浓度。结论是，被饲喂实施例9.2的寡糖制剂的鸟表现出对炎症攻击的更快免疫反应和自炎症攻击的更快恢复。与未被饲喂寡糖制剂的组b中的受攻击鸟相比，血清iga水平上升得更快，并且更快速地下降回到组a的基线对照水平。
[0771]
测量二胺氧化酶(dao)的血清水平，以观察寡糖制剂对遭受炎症攻击的鸟的炎症反应和恢复速度的影响。dao参与组胺调节和炎症途径。在第21天，即施用炎症攻击后一周，相对于组a中未受攻击对照鸟的约28.5微克/毫升的浓度，组b和d中的鸟表现出血清dao浓度的约25％
‑
30％降低。被饲喂实施例9.2的寡糖的组d鸟的dao浓度的降低在数值上大于未被饲喂寡糖制剂的组b中的鸟。在第28天，即施用炎症攻击后两周，在实验误差范围内，组d中的鸟表现出返回至如在组a的未受攻击鸟中观察到的基线dao浓度。结论是，与未被饲喂寡糖的鸟相比，被饲喂实施例9.2的寡糖制剂的鸟表现出相似的炎症反应和至稳态的更快恢复。实施例37微阵列基因表达分析
[0772]
通过微阵列分析对肉鸡回肠中所有已知基因的回肠基因表达进行分析。对来自实施例36.4的肉鸡的回肠组织进行分析，以相对于未被饲喂寡糖制剂的对照鸟测定寡糖制剂和剂量对回肠基因表达的影响。根据实施例33和36的方法获得组织样品。
[0773]
为了准备进行微阵列分析，在基于t7 rna聚合酶的反应中扩增并标记rna样品。使用单色agilent低输入快速amp标记试剂盒产生荧光crna(互补rna)，其中将100ng总rna的样品输入rna用于单色处理。所述方法采用t7 rna聚合酶共混物，所述共混物同时扩增靶材料和掺入的花菁3
‑
ctp。从总rna到crna的扩增通常是至少100倍。
[0774]
在经标记的核糖核苷酸存在下进行通过逆转录产生双链cdna，从而产生微克量的经标记rna用于阵列杂交。将经标记crna以1.65μg/样品的浓度杂交到微阵列载玻片上过夜。杂交(至少17小时)后，将载玻片洗涤并在agilent surescan微阵列扫描仪上扫描。使用partek基因组学套件对数据进行分析。机械论和本体论分组如表27中所呈现的进行。
[0775]
表27.机械论和本体论分组
[0776]
此外，如下使用多步方法进行非靶向分析。鉴定出在被饲喂寡糖的动物相对于对照组之间观察到的具有最高倍数变化的十个注释基因。还鉴定出在被饲喂寡糖的动物相对于对照组之间观察到的具有最低倍数变化的十个注释基因。最后，对在被饲喂寡糖的动物与对照组之间具有最高差异统计置信度的十个注释基因进行分析。使用基因组和基因表达分析软件(partek，圣路易斯)对原鸡(gallus gallus)kegg途径进行途径分析。实施例38促进自球虫病中恢复的方法
[0777]
球虫病是由暴露于球虫原生动物而引起的动物肠道的寄生虫病，所述球虫原生动物包括例如堆型艾美球虫、巨型艾美球虫、和缓艾美球虫、柔嫩艾美球虫、刚地弓形虫、哈蒙德虫属物种、小隐孢子虫、鼠隐孢子虫、人隐孢子虫、犬等孢子球虫、俄亥俄等孢子球虫、布罗斯等孢子球虫、猫等孢子球虫等等。
[0778]
将实施例36的肉鸡暴露于以下水平的源自球虫亚纲的早熟系的孢子化卵囊：来自堆型艾美球虫hp的5,000
‑
6,000个卵囊、巨型艾美球虫cp的2,000
‑
2,300卵囊、巨型艾美球虫mfp的1,000
‑
1,300个卵囊、和缓艾美球虫hp的10,000
‑
13,000个卵囊和柔嫩艾美球虫hp的5,000
‑
6,500个卵囊。如通过实施例36的血清iga、血清dao、肝组织学和肠腔组织学观察到的，受暴露的鸟表现出强烈的炎症反应。
[0779]
与未经处理的鸟相比，被饲喂500ppm的实施例9.2的寡糖制剂的实施例36的组d中的鸟表现出显著减少的肠和肝损伤以及至稳态的更快恢复。与组b的未经处理的受攻击鸟相比，被饲喂寡糖处理的鸟还表现出改善的营养物吸收和改善的t细胞分化。实施例39改善对球虫病疫苗的耐受性的方法
[0780]
实施例35的鸟当暴露于10倍剂量的肉鸡产业中使用的商业球虫病疫苗时表现出减少的肝损伤、改善的肠道组织学、改善的营养物吸收和更快的炎症恢复。实施例40按比例放大进行制造的重复批次
[0781]
将寡糖制剂的生产规模增加到720l顶置式搅拌釜反应器的生产规模。以720l规模
进行使用源自实施例9.2的按比例放大程序的十二个批次反应。对照预先确定的qc接受标准表征所得的寡糖制剂，以进行批次合格性鉴定并评估工艺稳定性。
[0782]
对于十二个批次，在实施例9.2的标称条件附近的范围内有意地改变诸如温度、反应时间和反应压力等工艺条件，以评估所得的产物对在典型制造环境中可能预期的工艺条件的合理变化的敏感性。对于选定的批次，使用原位粘度探针来监测反应器内容物粘度的时间依赖性。在某些批次中，反应停止时间采用基于连续粘度测量的过程中控制(ipc)。通过经由反应器和辅助釜上的负荷传感器的质量或通过体积流量和时间来测量材料量，包括反应物、蒸馏水和逐步形成的冷凝物的分配量。
[0783]
通过对在反应结束时(即，在ph中和和稀释之前)抽取的反应器内容物的代表性等分试样进行卡尔
·
费歇尔滴定来测量反应器产物的最终水含量。在120℃的反应温度下，测定反应产物的水含量为基于原样的8wt％和9wt％水。在130℃的反应温度下，测定反应产物的水含量为在基于原样的5wt％与7wt％水之间。
[0784]
通过目视检查确定所有批次的所得的寡糖浆液外观为焦糖浆液。通过卡尔
‑
费歇尔滴定法测定总溶解固体含量，通过hplc/gpc色谱法测定残留单体含量、mwn和mww，通过经校准的ph计测定ph，并且通过lc
‑
ms/ms测定脱水dp2含量。如表28所示，获得以下批次的表征数据(n/r＝“数据未报告”)：表28.对寡糖制剂的表征实施例41寡糖制剂的ph调整
[0785]
通过以下方式一式三份测定实施例9.2的寡糖制剂在50wt％固体含量下的ph：用1.80
±
0.02ml去离子水稀释5.00
±
0.05克等分试样并通过涡旋搅拌进行混合以获得均匀浓度。用经校准的ph计(vwr，symphony b30pci)测量每个等分试样的ph，以获得2.4个ph单
位的平均读数。
[0786]
向1.2kg实施例9.2的寡糖制剂中添加6.53ml的1.0摩尔氢氧化钠水溶液。将所得的混合物剧烈混合以获得均匀的ph经调整的浆液。然后如上所述一式三份测定所得的经调整浆液在50wt％固体含量下的ph，以获得4.1个ph单位的平均值。
[0787]
对于各种规模下的重复批次合成重复ph调整程序，但是在向产物寡糖组合物中提供碱的程序中具有某些变化。对于一个批次，在反应水的稀释之前，作为反应的最后步骤进行ph调整。在另一个批次中，通过首先将所需量的碱溶解于稀释水中来将ph调整与稀释步骤同时进行；因此，以单个步骤将碱和稀释水一起添加使反应淬灭，从而产生在所需ph下的最终浆液。在另一个批次中，将碱作为食品级氢氧化钠粒料来提供。在另一个批次中，在稀释和ph调整之前，将10ppm的食品级硅氧烷乳剂(dow xiameter afe
‑
0100)添加到反应中。实施例42寡糖制剂的玻璃粉配制品的制备
[0788]
将大约50克实施例9.1的寡糖制剂分配到干燥托盘上，并且置于在60℃下的强制空气对流加热器中以产生焦糖色脆性玻璃。将玻璃从干燥托盘中移取出，并且用剪切旋转磨机研磨，以产生浅橙色的可流动粉末。通过筛分测定粉末的粒度在100与2000微米之间，其中90％的质量低于1350微米。通过氦气测比重术测定粗磨粉末的真密度为1.3063g/ml。观察到所得的粉末是可流动的。
[0789]
使用锤磨机重复配制程序以获得细粉，其中90％的粉末质量表现出低于196微米的粒度。测定细磨粉末的真密度为1.5263g/ml。所得的粉末既不是稳定的也不是可流动的。
[0790]
使用两个温度循环程序对粉末进行dsc测量。在第一程序中，温度以5℃/min的速率从0℃斜升到160℃，然后以
‑
5℃/min的速率退火回到0℃，之后最后加热回到160℃。在第二程序中，温度以5℃/min的速率从
‑
50℃斜升到50℃，以
‑
5℃/min的速率退火到
‑
60℃，然后以5℃/min的速率加热到60℃。观察到粉末表现出在20℃与40℃之间的玻璃化转变温度，这取决于在5wt％与10wt％水分之间的固体的残留水含量。
[0791]
对于实施例9.2、实施例9.3、实施例9.4和实施例9.5的寡糖制剂中的每一种，重复碾磨配制过程。粉末容易地再溶解于水和醇
‑
水混合物中，但是不溶于丙酮、甲醇和无水乙醇中。实施例43载体负载的粉末配制品的制备
[0792]
在室温下将等质量的实施例9.2的寡糖制剂的70wt％水性浆液和硅藻土合并以产生稳定的可流动粉末。所得的粉末包含约35wt％的吸附寡糖(基于干固体)和约50wt％的载体。通过筛分测量粉末的粒度分布。按重量计10％的粉末表现出低于290微米的粒度，按重量计50％的粉末表现出低于511微米的粒度，并且按重量计90％的粉末表现出低于886微米的粒度。如使用标准曝气和可压缩性测试测定的，粉末对偏析和内聚而言是稳定的。通过氦气测比重术测定所得的粉末的真密度为1.8541g/ml。
[0793]
使用饲料级二氧化硅重复载体负载配制以产生稳定的可流动粉末，相对于最终粉末，负载量为至少50wt％的寡糖制剂(基于干固体)。测量所得的粉末的真密度为1.5562g/ml。实施例44
assay)的方法，确认作为d
‑
葡萄糖的还原糖含量基于干重小于50％。使用fcc附录ii：物理测试和测定：c.其他：炽灼残渣(硫酸盐灰分)方法ii(用于液体)(physical tests and determinations:c.others:residue on ignition(sulfated ash)method ii(for liquids))的方法，确认硫酸盐灰分基于干重小于1％。使用优化的monier williams方法确认二氧化硫含量低于40mg/kg。用aoac国际官方方法2013.06的方法确认铅含量低于1mg/kg。使用cmmef第7章的方法确认总需氧菌平板计数低于1000cfu/g。使用aacc国际认可方法42
‑
50的方法确认总酵母和霉菌低于100cfu/g。使用fdabam第4章的方法确认大肠杆菌群低于10mpn/g。使用fda bam第4章的方法确认大肠杆菌(e.coli)低于3mpn/g。根据fdabam第5章的方法，确认每25克样品未检测到沙门氏菌(salmonella)。使用fda bam第12章的方法确认金黄色葡萄球菌低于10cfu/g。通过目视检查确认颜色为焦糖色。将容器密封，将剩余的保留样品冷冻并储存以便将来参考，并且为所得的批次发行分析证书。实施例49经处理饮用水的制备
[0801]
如下制备含有250ppm的实施例9.7的寡糖制剂的饮用水。将37ml实施例41的寡糖浆液和40克山梨酸钾逐渐添加到在55加仑blue
‑
poly桶中的50加仑可饮用自来水中。在室温下使用桨叶将溶液手动混合10分钟。
[0802]
在不掺入山梨酸钾的情况下重复所述方法。
[0803]
虽然在本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员而言将明显的是，此类实施方案仅通过举例的方式来提供。本发明并不旨在受本说明书内提供的具体实施例的限制。虽然已经参考上述说明书描述了本发明，但本文的实施方案的描述和说明并不意味着以限制的意义来解释。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。此外，应该理解，本发明的所有方面并不限于本文所阐述的取决于多种条件和变量的具体描述、配置或相对比例。应该理解，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可以用于实践本发明。因此，预期本发明还应该涵盖任何此类替代方案、修改、变型或等同方案。