一种泰拉霉素半抗原及其抗体与试纸条的制作方法

1.本发明涉及食品检测技术领域，更具体地，涉及一种泰拉霉素半抗原及其抗体与试纸条。


背景技术：

2.泰拉霉素(tulathromycin)，又名土拉霉素，是一种新型的大环内酯类抗生素，其因药效高而逐渐取代了市场上广泛使用却已出现不同程度耐药性的其他大环内酯类药物，主要用于治疗由胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌和支原体等引起的家畜呼吸系统疾病。泰拉霉素给药后具有药物吸收迅速、半衰期长、生物利用度高等优点，我国农业部在2008年第957号公告中首次允许其在动物生产中使用。但有研究表明，随着用药时间的延长以及用药量的不断增大，泰拉霉素在动物性组织中会出现不同程序的药物残留，因此加强该药物的残留检测，对保障动物源性食品安全具有重要意义。
3.目前，检测泰拉霉素主要采用高效液相色谱法、液相色谱
‑
质谱联用法等分析方法，这些方法均须在实验室条件下操作，样品前处理繁琐费时，还需配备昂贵的仪器设备，检测成本较高、耗时长、操作复杂，在实际应用过程中有很大的限制性，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适用于食品中泰拉霉素检测的胶体金试纸条，可满足大量样品现场筛选和监控，能够更好地满足我国食品监管部门等开展检测工作。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种简单快速、适用于食品中泰拉霉素检测泰拉霉素半抗原、抗原、抗体以及胶体金试纸条。
5.本发明所采取的技术方案是：
[0006][0007]
本发明的第一个方面，提供一种泰拉霉素半抗原，其结构式如式(ⅰ)所示。
[0008]
本发明的第二个方面，提供本方明第一个方面所述泰拉霉素半抗原的制备方法，由泰拉霉素与n
‑
(p
‑
马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯反应制得。
[0009]
更具体地，泰拉霉素加乙腈搅拌溶解，加三乙胺充分搅拌后，再加入n
‑
(p
‑
马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯，室温搅拌反应制得。
[0010]
在本发明的部分实施例中，取泰拉霉素0.806g加乙腈50ml搅拌溶解，加三乙胺0.6ml 充分搅拌后，再加入n
‑
(p
‑
马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯0.214g，室温搅拌反应2h，减压蒸干，得到黄色油状物，加乙醇10ml，重结晶，得到泰拉霉素半抗原0.76g。
[0011]
本方明的第三个方面，提供一种泰拉霉素抗原，由本发明第一个方面所述泰拉霉素半抗原与载体蛋白偶联得到。
[0012]
优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白的一种。
[0013]
更优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白。
[0014]
在本发明的部分实施例中，取牛血清白蛋白(bsa)100mg，加0.05mol/l碳酸氢钠缓冲液4ml溶解，再加入含有13.91mg n
‑
琥珀酰
‑3‑
(2
‑
吡啶
‑
二硫)丙酸盐(spdp)的n,n
‑
二甲基甲酰胺溶液0.5ml，室温反应4h，得到a液；向a液中滴入含有12.83mg三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐(tcep
‑
hcl)的0.5mol/l pbs缓冲液3ml，反应30min，过凝胶柱，洗脱收集，得到巯基化bsa蛋白溶液，记为b液；取泰拉霉素半抗原30mg，加n,n
‑
二甲基甲酰胺溶液1ml 溶解，加入到b液中，4℃反应过夜，用0.02mol/l pbs透析纯化，得到与bsa偶联的泰拉霉素人工抗原，即为免疫原，分装，
‑
20℃保存。
[0015]
在本发明的部分实施例中，取卵清白蛋白(ova)70mg，加0.05mol/l碳酸氢钠缓冲液 3ml溶解，再加入含有9.71mg spdp的n,n
‑
二甲基甲酰胺溶液0.5ml，室温反应4h，得到a 液；向a液中滴入含有12.83mg tcep
‑
hc1的0.5mol/l pbs缓冲液3ml，反应30min，过凝胶柱，洗脱收集，得到巯基化ova蛋白溶液，记为b液；取泰拉霉素半抗原22.1mg，加n,n
‑ꢀ
二甲基甲酰胺溶液1ml溶解，加入到b液中，4℃反应过夜，用0.02mol/l pbs透析纯化，得到与ova偶联的泰拉霉素人工抗原，即为包被原，分装，
‑
20℃保存。
[0016]
本发明的第四个方面，提供本发明第一个方面所述的泰拉霉素半抗原或本发明第三个方法所述的泰拉霉素抗原在以下(1)至(3)任一方面的应用：
[0017]
(1)制备泰拉霉素抗体；
[0018]
(2)制备泰拉霉素检测试剂；
[0019]
(3)制备泰拉霉素检测试剂盒。
[0020]
本方明的第五个方面，提供一种泰拉霉素抗体，由本发明第一个方面所述的泰拉霉素半抗原或本方明第三个方面所述的泰拉霉素抗原制备得到。
[0021]
进一步地，所述抗体为泰拉霉素单克隆抗体、泰拉霉素多克隆抗体、泰拉霉素基因工程抗体或泰拉霉素纳米抗体。
[0022]
优选地，所述抗体为泰拉霉素单克隆抗体。
[0023]
进一步地，所述抗体的制备方法为通过动物免疫将泰拉霉素半抗原或泰拉霉素抗原注入小鼠体内，使其产生抗血清。
[0024]
在本发明的部分实施例中，泰拉霉素单克隆抗体的具体制备方法包括以下步骤：
[0025]
(1)动物免疫
[0026]
将步骤2得到的免疫原注入balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。
[0027]
(2)细胞融合和克隆化
[0028]
取免疫balb/c小鼠脾细胞，按8:1(数量配比)比例与sp2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争elisa测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0029]
(3)细胞冻存和复苏
[0030]
将杂交瘤细胞用冻存液制成1
×
106个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。
[0031]
(4)单克隆抗体的制备与纯化
[0032]
增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸
‑
饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，
‑
20℃保存。
[0033]
所述细胞培养基为向rpmi1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20％(质量分数)，使碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2％(质量分数)；所述细胞培养基的ph为7.4。
[0034]
本发明的第六个方面，提供本发明第五个方面所述的泰拉霉素抗体在以下(1)至(3) 任一方面的应用：
[0035]
(1)制备泰拉霉素检测试剂；
[0036]
(2)制备泰拉霉素检测试剂盒；
[0037]
(3)检测泰拉霉素。
[0038]
本发明的第七个方面，提供一种泰拉霉素试纸条，包括底板、样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫；所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘附在底板上，所述结合物释放垫含有本发明第五个方面所述的抗体；所述反应膜上设有泰拉霉素抗原的检测线和包被有第二抗体的质控线。
[0039]
进一步地，所述泰拉霉素抗原为本发明第三个方面所述的泰拉霉素抗原；所述第二抗体为本发明第二个方面所述泰拉霉素抗体的二抗。
[0040]
根据本发明第七个方面所述的试纸条，优选地，所述底板为pvc底板或其他硬质不吸水的材料；
[0041]
优选地，所述样品吸收垫为聚酯纤维或玻璃纤维材质；
[0042]
优选地，所述结合物释放垫为聚酯纤维素膜或玻璃纤维素膜；
[0043]
优选地，所述吸水垫为吸水滤纸；
[0044]
优选地，所述反应膜优选为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。
[0045]
进一步地，所述试纸条优选还包括外壳，所述外壳上设有加样孔和观察孔。
[0046]
本方明的第八个方面，提供本发明第七个方面所述的试纸条的制备方法，包括以下步骤：
[0047]
s1.将第一抗体
‑
胶体金标记物喷涂于结合物释放垫；
[0048]
s2.制备具有泰拉霉素抗原的检测线和包被有第二抗体的质控线的反应膜；
[0049]
s3.将步骤s1和s2中制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条；
[0050]
其中，所述第一抗体为泰拉霉素抗体；
[0051]
优选地，所述第一抗体为本发明第五个方面所述的泰拉霉素抗体；
[0052]
优选地，所述泰拉霉素抗原为本发明第三个方面所述的泰拉霉素抗原。
[0053]
本发明的第九个方面，提供本发明第七个方面所述的试纸条在以下(1)至(3)任一方面的应用：
[0054]
(1)制备泰拉霉素检测试剂盒；
[0055]
(2)制备泰拉霉素检测装置；
[0056]
(3)检测泰拉霉素。
[0057]
本发明的第十个方面，提供一种检测泰拉霉素的方法，采用本发明第九个方面所述的试纸条。
[0058]
进一步地，该方法可用于检测动物组织中泰拉霉素的含量。
[0059]
更具体地，该方法包括以下步骤：
[0060]
1.样品前处理
[0061]
取已去脂肪的组织样本于均质器中均质即为待测样本液。
[0062]
2.用试纸条检测
[0063]
用微量移液器吸取待测样本液垂直滴于加样孔中；液体流动开始计时，反应约5min，判定结果。
[0064]
3.分析检测结果
[0065]
阴性(－)：t线显色比c线显色深或与c线显色一致，表示样品中泰拉霉素浓度低于检测限。
[0066]
阳性( )：t线显色比c线显色浅或t线不显色，表示样品中泰拉霉素浓度等于或高于检测限。
[0067]
无效：未出现c线，表明不正确的操作过程或试纸条已变质失效。
[0068]
在本发明部分实施例中，具体的操作方法包括以下步骤：
[0069]
1.样品前处理
[0070]
取已去脂肪的组织样本于均质器中均质；称取(2.00
±
0.05)g均质好的组织样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入2ml样本提取液，用涡旋仪涡动2min，以不低于3000r/min室温(20～ 25℃)离心5min；避开上层脂肪层取70μl上层液体加入430μl样本稀释液，用涡旋仪涡动 30s后即为待测样本液。
[0071]
2.用试纸条检测
[0072]
用微量移液器吸取待测样本液100μl垂直滴于加样孔中；液体流动开始计时，反应5min，判定结果。
[0073]
3.分析检测结果
[0074]
阴性(－)：t线显色比c线显色深或与c线显色一致，表示样品中泰拉霉素浓度低于检测限。
[0075]
阳性( )：t线显色比c线显色浅或t线不显色，表示样品中泰拉霉素浓度等于或高于检测限。
[0076]
无效：未出现c线，表明不正确的操作过程或试纸条已变质失效。
[0077]
本发明的有益效果是：
[0078]
本发明提供一种泰拉霉素半抗原，由由泰拉霉素与n
‑
(p
‑
马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯反应制得。可以用于制备泰拉霉素抗原、泰拉霉素抗体以及泰拉霉素检测试剂。
[0079]
本发明还提供了一种泰拉霉素抗原，为泰拉霉素与载体蛋白的偶联物，该抗原可以用于制备泰拉霉素抗体、泰拉霉素检测试剂。
[0080]
本发明还提供了一种泰拉霉素抗体，由上述泰拉霉素半抗原或泰拉霉素抗原制备得到，可用于泰拉霉素的检测或泰拉霉素检测试剂的制备。
[0081]
本发明还提供了一种泰拉霉素胶体金试纸条，该试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本发明试纸条检测泰拉霉素的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。该试纸条检测克拉霉素、阿奇霉素、螺旋霉素、泰乐菌素、替米考星、吉他霉素等其他大环内酯类抗生素时，无交叉反应，可以用于动物组织中泰拉霉素进行快速检测，检测限为300μg/kg。
附图说明
[0082]
图1为泰拉霉素半抗原合成图。
[0083]
图2为试纸条剖面结构示意图。其中，将样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜 (3)、吸水垫(4)、检测线(5)、质控线(6)、底板(7)。
[0084]
图3为试纸条检测结果判定图。
具体实施方式
[0085]
以下结合具体的实施例及附图对本发明的内容作进一步详细的说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或常规检测方法。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
[0086]
实施例1泰拉霉素半抗原、抗原的制备
[0087]
1.泰拉霉素半抗原的合成
[0088]
取泰拉霉素0.806g加乙腈50ml搅拌溶解，加三乙胺0.6ml充分搅拌后，再加入n
‑
(p
‑ꢀ
马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯0.214g，室温搅拌反应2h，减压蒸干，得到黄色油状物，加乙醇 10ml，重结晶，得到泰拉霉素半抗原0.76g，拉霉素半抗原的结构式如式(ⅰ)所示：
[0089]089][0090]
合成路线如下所示：
[0091][0092]
2.1免疫原的制备
[0093]
取牛血清白蛋白(bsa)100mg，加0.05mol/l碳酸氢钠缓冲液4ml溶解，再加入含有 13.91mg n
‑
琥珀酰
‑3‑
(2
‑
吡啶
‑
二硫)丙酸盐(spdp)的n,n
‑
二甲基甲酰胺溶液0.5ml，室温反应4h，得到a液；向a液中滴入含有12.83mg三(2
‑
羧乙基)膦盐酸盐(tcep
‑
hcl)的0.5mol/l pbs缓冲液3ml，反应30min，过凝胶柱，洗脱收集，得到巯基化bsa蛋白溶液，记为b液；取泰拉霉素半抗原30mg，加n,n
‑
二甲基甲酰胺溶液1ml溶解，加入到b液中，4℃反应过夜，用0.02mol/l pbs透析纯化，得到与bsa偶联的泰拉霉素人工抗原，即为免疫原，分装，
ꢀ‑
20℃保存。
[0094]
牛血清蛋白还可以替换为卵清白蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白的任意一种。
[0095]
2.2包被原的制备
[0096]
取卵清白蛋白(ova)70mg，加0.05mol/l碳酸氢钠缓冲液3ml溶解，再加入含有9.71mgspdp的n,n
‑
二甲基甲酰胺溶液0.5ml，室温反应4h，得到a液；向a液中滴入含有12.83mgtcep
‑
hc1的0.5mol/l pbs缓冲液3ml，反应30min，过凝胶柱，洗脱收集，得到巯基化ova 蛋白溶液，记为b液；取泰拉霉素半抗原22.1mg，加n,n
‑
二甲基甲酰胺溶液1ml溶解，加入到b液中，4℃反应过夜，用0.02mol/l pbs透析纯化，得到与ova偶联的泰拉霉素人工抗原，即为包被原，分装，
‑
20℃保存。
[0097]
实施例2泰拉霉素单克隆抗体的制备
[0098]
(1)动物免疫
[0099]
将实施例1中制备得到的免疫原注入balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。
[0100]
(2)细胞融合和克隆化
[0101]
取免疫balb/c小鼠脾细胞，按8:1(数量配比)比例与sp2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争elisa测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0102]
(3)细胞冻存和复苏
[0103]
将杂交瘤细胞用冻存液制成1
×
106个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。
[0104]
(4)单克隆抗体的制备与纯化
[0105]
增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸
‑
饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，
‑
20℃保存。
[0106]
所述细胞培养基为向rpmi1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20％(质量分数)，使碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2％(质量分数)；所述细胞培养基的ph为7.4。
[0107]
第二抗体可购买商业二抗或制备羊抗鼠抗抗体
[0108]
制备方法：以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。
[0109]
实施例3泰拉霉素胶体金试纸条的制备
[0110]
1.泰拉霉素单克隆抗体
‑
胶体金标记物的制备
[0111]
(1)胶体金的制备
[0112]
用双蒸去离子水将1％氯金酸稀释成0.01％(质量分数)，取100ml置于锥形瓶中，用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，在持续高温、持续搅拌下加入1.5ml 1％柠檬酸三钠，继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止，冷却至室温后用去离子水恢复到原体积，4℃保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物，在日光下观察颜色为酒红色。
[0113]
(2)泰拉霉素单克隆抗体
‑
胶体金标记物的制备
[0114]
在磁力搅拌下，用0.2mol/l碳酸钾溶液调胶体金的ph值至7.2，按每毫升胶体金溶液中加入5～50μg抗体的标准向胶体金溶液中加入上述泰拉霉素单克隆抗体，继续搅拌混匀30min；静置10min后加入10％bsa，使其在胶体金溶液中的终浓度为1％，静置10min。12000r/min、 4℃离心40min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬，置4℃备用。
[0115]
复溶缓冲液：含bsa的质量分数为0.1％～0.5％、蔗糖的质量分数2％～4％、ph 7.2的 0.02mol/l磷酸盐缓冲液。
[0116]
2.结合物释放垫的制备
[0117]
将结合物释放垫浸泡于含0.5％bsa、5％蔗糖、ph 7.4的0.02mol/l磷酸盐缓冲液中，均匀浸湿2h，37℃烘干备用。用bio dot划膜仪将制备好的泰拉霉素单克隆抗体
‑
胶体金标记物均匀喷涂在结合物释放垫上，每1cm结合物释放垫喷涂0.01ml泰拉霉素单克隆抗体
‑
胶体金标记物后，置于37℃环境(湿度＜20％)中2h后取出，置于干燥环境(湿度＜20％)中保存备用。
[0118]
3.样品吸收垫的制备
[0119]
将样品吸收垫用含1％bsa、ph为7.2的0.02mol/l磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃烘干2h 备用。
[0120]
4.反应膜的制备
[0121]
将泰拉霉素半抗原
‑
卵清白蛋白偶联物包被到反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线。
[0122]
包被过程：用0.01mol/l、ph 7.2的磷酸缓冲液将泰拉霉素半抗原
‑
卵清白蛋白偶联物稀释到1mg/ml，用bio dot划膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测线(t线)，包被量为 1.0μl/cm；用0.01mol/l、ph 7.2的磷酸盐缓冲液将羊抗鼠抗抗体稀释到200μg/ml，用bio dot 划膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线(c线)，包被量为1.0μl/cm。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥16h，备用。
[0123]
5.试纸条的组装
[0124]
根据附图2所示试纸条剖面结构，将样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次按顺序粘贴在pvc底板(7)上；结合物释放垫从起始端有1/3区域被样品吸收垫覆盖，结合物释放垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与pvc底板的始端对齐，吸水垫的末端与pvc底板的末端对齐；所述反应膜上有检测线(5)和质控线(6)，检测线(t线)和质控线(c线)均为与所述试纸条的长相垂直的条状带；检测线位于靠近结合物释放垫的末端的一侧；质控线位于远离结合物释放垫的末端的一侧；将试纸条用机器切成3.95mm宽的小条，装在特制的塑料制卡壳中，卡壳上设有加样孔和观察孔，以铝箔袋密封，4～30℃的环境中贮存，有效期长达12个月。
[0125]
实施例4动物组织中泰拉霉素的检测
[0126]
1.样品前处理
[0127]
取已去脂肪的组织样本于均质器中均质；称取(2.00
±
0.05)g均质好的组织样本至10ml聚苯乙烯离心管中，加入2ml样本提取液，用涡旋仪涡动2min，以不低于3000r/min室温(20～ 25℃)离心5min；避开上层脂肪层取70μl上层液体加入430μl样本稀释液，用涡旋仪涡动 30s后即为待测样本液。
[0128]
2.用试纸条检测
[0129]
用微量移液器吸取待测样本液100μl垂直滴于加样孔中；液体流动开始计时，反应5min，判定结果。
[0130]
3.分析检测结果
[0131]
阴性(－)：t线显色比c线显色深或与c线显色一致，表示样品中泰拉霉素浓度低于检测限，如图3中a、b。
[0132]
阳性( )：t线显色比c线显色浅或t线不显色，表示样品中泰拉霉素浓度等于或高于检测限，如图3中c、d。
[0133]
无效：未出现c线，表明不正确的操作过程或试纸条已变质失效，如图3中e、f。
[0134]
实施例5样品检测应用实施例
[0135]
1.检测限试验
[0136]
取空白猪肉、鸡肉、牛肉样本，在其中分别添加泰拉霉素至终浓度为150μg/kg、300μg/kg、 600μg/kg，取实施例3中试纸条进行检测，每个样本重复测定三次。
[0137]
用试纸条检测猪肉、鸡肉、牛肉样本时，当其中无泰拉霉素和其添加浓度为150μg/kg时，试纸条上显示出t线显色比c线显色深或与c线显色一致，呈阴性；当其中泰拉霉素添加浓度为300μg/kg、600μg/kg时，试纸条上显示出t线显色比c线显色浅或t线不显色，呈阳性，表明本试纸条对动物组织中泰拉霉素的检测限为300μg/kg。
[0138]
2.假阳性率、假阴性率试验
[0139]
取空白猪肉、鸡肉、牛肉样本及添加泰拉霉素至终浓度为300μg/kg的阳性猪肉、鸡肉、牛肉样本各20份，用3个批次生产的试纸条分别进行检测，计算其阴阳性率。
[0140]
结果表明：用3个批次生产的试纸条检测阳性样本时，结果全为阳性，可知阳性符合率为100％，假阴性率为0；检测阴性样本时，结果全为阴性，可知阴性符合率为100％，假阳性率为0。说明本发明的检测泰拉霉素的试纸条可以对动物组织中泰拉霉素进行快速检测。
[0141]
3.特异性试验
[0142]
用本试纸条检测1mg/kg克拉霉素、阿奇霉素、螺旋霉素、泰乐菌素、替米考星、吉他霉素等其他大环内酯类抗生素时，试纸条上显示出t线显色比c线显色深或与c线显色一致，呈阴性，说明本试纸条对这些药物无交叉反应。
[0143]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。