一种花生种质资源创制方法与流程

技术特征：
1.一种花生种质资源创制方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)快中子辐照、航天诱变的花生种子，取出种胚进行表面消毒；(2)经表面消毒的花生种胚在无菌水中浸泡8～12小时；(3)浸泡的种胚取出，放入经高压灭菌的培养皿中，剥离胚小叶，随即接种于体细胞胚诱导培养基中进行培养；(4)接种胚小叶培养的体细胞胚诱导培养基为：ms 5～15mg/l2,4
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d；调整培养基ph并灭菌；(5)在体细胞胚诱导培养基上培养，胚小叶外植体开始形成体细胞胚，之后逐渐有体细胞胚形成；将存活的形成体细胞胚的胚小叶外植体转移到体细胞胚萌发培养基上培养，诱导体细胞胚萌发成苗；(6)体细胞胚萌发培养基为：ms 4～6mg/lbap；调整培养基ph并灭菌；(7)在体细胞胚萌发培养基上培养，每4周继代培养一次，促使体细胞胚萌发成苗；当小苗长到1.5cm以上时，即可作为接穗嫁接；(8)以灭菌的沙子中无菌催芽的8～10日龄花生种子实生苗作为砧木，体细胞胚萌发长成的高1.5cm以上的小苗作为接穗，采用插接法在超净工作台中进行无菌嫁接，用封口膜包扎好嫁接口；嫁接苗在沙子中再培养3～5天，促使嫁接伤口愈合，然后移栽田间；(9)嫁接苗移栽田间前2个周注意保湿，之后按常规进行田间管理；成熟后按单株收获m2代种子；(10)收获的m2代种子按单株种成株行，以诱变亲本作为对照。2.根据权利要求1所述的一种花生种质资源创制方法，其特征在于：步骤(1)中，消毒方法：用70～75％的酒精浸泡20秒，再用0.1％升汞溶液侵泡8～10分钟，之后用高压灭菌的无菌水清洗3～5次。3.根据权利要求2所述的一种花生种质资源创制方法，其特征在于：步骤(1)中，消毒操作在超净工作台中进行，操作用的器具需高压灭菌或酒精灯灼烧。4.根据权利要求1所述的一种花生种质资源创制方法，其特征在于：步骤(3)中，每粒种子8个胚小叶，也即种子出苗时的第一对真叶，每个真叶有4个小叶，一对真叶有8个小叶，这8个小叶是由8个胚小叶发育而成。5.根据权利要求4所述的一种花生种质资源创制方法，其特征在于：步骤(3)中，选用胚小叶的理由是：与幼叶或成熟叶片相比，胚小叶分化程度低，再生能力强。6.根据权利要求1所述的一种花生种质资源创制方法，其特征在于：步骤(4)和步骤(6)中，调整培养基的ph5.8，在高压灭菌锅120℃灭菌20分钟。7.根据权利要求1所述的一种花生种质资源创制方法，其特征在于：步骤(5)在体细胞胚诱导培养基上培养2周后，胚小叶外植体开始形成体细胞胚，之后逐渐有体细胞胚形成；由于辐照诱变作用，使部分胚小叶外植体褐化凋亡；一般适宜诱变剂量为半致死量或半再生率时的剂量，即一半外植体不能形成体细胞胚；培养4周后，将存活的形成体细胞胚的胚小叶外植体转移到体细胞胚萌发培养基上培养，诱导体细胞胚萌发成苗。8.根据权利要求1所述的一种花生种质资源创制方法，其特征在于：步骤(10)中，生育期及收获期田间观察，与亲本一样、无变异和分离的株行淘汰；同一株行的单株间表现不一样、有明显分离，并且不同于诱变亲本，说明再生植株的胚性细胞为发生突变的细胞，由此
再生的植株后代经自交，性状发生变异和分离；选择变异植株，再经过自交2～3代，使决定变异性状的基因纯合，创造花生新的种质资源。

技术总结
本发明提供一种花生种质资源创制方法，属于花生新品种培育技术领域，经快中子辐照、航天诱变的花生种子，取出种胚进行表面消毒；经表面消毒的花生种胚在无菌水中浸泡然后放入灭菌的培养皿中，剥离胚小叶，随即接种于体细胞胚诱导培养基中进行培养；然后在体细胞胚萌发培养基上培养；以灭菌的沙子中无菌催芽的8～10日龄花生种子实生苗作为砧木，体细胞胚萌发长成的高1.5cm以上的小苗作为接穗，嫁接苗移栽田间前2个周注意保湿，之后按常规进行田间管理；成熟后按单株收获M2代种子，以诱变亲本作为对照。本发明能克服常规诱变技术突变体嵌和现象、大部分突变细胞不能遗传的瓶颈。大部分突变细胞不能遗传的瓶颈。


技术研发人员：王晶珊 刘斌
受保护的技术使用者：山东青农产业发展有限公司
技术研发日：2021.09.14
技术公布日：2021/11/2