针对SARS-CoV-2的抗体及其用途的制作方法

技术特征：
1.抗体或其抗原结合片段，其特异性结合sars
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cov
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2的s蛋白的受体结合区(rbd)，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：(i)vh cdr1，其由下述序列组成：seq id no:3，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(ii)vh cdr2，其由下述序列组成：seq id no:4，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(iii)vh cdr3，其由下述序列组成：seq id no:5，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或，(b)包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：(iv)vl cdr1，其由下述序列组成：seq id no:6，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(v)vl cdr2，其由下述序列组成：seq id no:7，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(vi)vl cdr3，其由下述序列组成：seq id no:8，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；优选地，(i)
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(vi)任一项中所述的cdr根据kabat编号系统定义；优选地，(i)
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(vi)任一项中所述的置换为保守置换。2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)如下3个重链cdrs：序列为seq id no：3的vh cdr1，序列为seq id no：4的vh cdr2，序列为seq id no：5的vh cdr3；和/或，如下3个轻链cdrs：序列为seq id no：6的vl cdr1，序列为seq id no：7的vl cdr2，序列为seq id no：8的vl cdr3；或，(b)如seq id no:1所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seq id no:2所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr；优选地，所述vh中含有的3个cdr和/或所述vl中含有的3个cdr由kabat、imgt或chothia编号系统定义。3.抗体或其抗原结合片段，其特异性结合sars
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cov
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2的s蛋白的受体结合区(rbd)，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：(i)vh cdr1，其由下述序列组成：seq id no:11，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(ii)vh cdr2，其由下述序列组成：seq id no:12，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(iii)vh cdr3，其由下述序列组成：seq id no:13，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或，(b)包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：(iv)vl cdr1，其由下述序列组成：seq id no:14，或与其相比具有一个或几个氨基酸
的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(v)vl cdr2，其由下述序列组成：seq id no:15，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(vi)vl cdr3，其由下述序列组成：seq id no:16，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；优选地，(i)
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(vi)任一项中所述的cdr根据kabat编号系统定义；优选地，(i)
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(vi)任一项中所述的置换为保守置换。4.权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)如下3个重链cdrs：序列为seq id no：11的vh cdr1，序列为seq id no：12的vh cdr2，序列为seq id no：13的vh cdr3；和/或，如下3个轻链cdrs：序列为seq id no：14的vl cdr1，序列为seq id no：15的vl cdr2，序列为seq id no：16的vl cdr3；或，(b)如seq id no:9所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seq id no:10所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr；优选地，所述vh中含有的3个cdr和/或所述vl中含有的3个cdr由kabat、imgt或chothia编号系统定义。5.抗体或其抗原结合片段，其特异性结合sars
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cov
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2的s蛋白的受体结合区(rbd)，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含下述3个互补决定区(cdrs)的重链可变区(vh)：(i)vh cdr1，其由下述序列组成：seq id no:19，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(ii)vh cdr2，其由下述序列组成：seq id no:20，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(iii)vh cdr3，其由下述序列组成：seq id no:21，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；和/或，(b)包含下述3个互补决定区(cdrs)的轻链可变区(vl)：(iv)vl cdr1，其由下述序列组成：seq id no:22，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，(v)vl cdr2，其由下述序列组成：seq id no:23，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列，和(vi)vl cdr3，其由下述序列组成：seq id no:24，或与其相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；优选地，(i)
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(vi)任一项中所述的cdr根据kabat编号系统定义；优选地，(i)
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(vi)任一项中所述的置换为保守置换。6.权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)如下3个重链cdrs：序列为seq id no：19的vh cdr1，序列为seq id no：20的vh cdr2，序列为seq id no：21的vh cdr3；和/或，如下3个轻链cdrs：序列为seq id no：22的vl cdr1，序列为seq id no：23的vl cdr2，序列为seq id no：24的vl cdr3；或，
(b)如seq id no:17所示的重链可变区(vh)中含有的3个cdr；和/或，如seq id no:18所示的轻链可变区(vl)中含有的3个cdr；优选地，所述vh中含有的3个cdr和/或所述vl中含有的3个cdr由kabat、imgt或chothia编号系统定义。7.权利要求1
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6任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含来源于人免疫球蛋白的框架区序列；优选地，所述人免疫球蛋选自人重排抗体序列或人胚系抗体序列；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：来源于人重排抗体序列的重链框架区序列，以及来源于人重排抗体序列的轻链框架区序列；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：来源于人重链胚系序列的重链框架区序列，以及来源于人轻链胚系序列的轻链框架区序列。8.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seq id no：1所示的序列；(ii)与seq id no：1所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seq id no：1所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seq id no：2所示的序列；(v)与seq id no：2所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seq id no：2所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；优选地，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seq id no:1所示的序列的vh和包含如seq id no:2所示的序列的vl。9.权利要求3或4所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seq id no：9所示的序列；(ii)与seq id no：9所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seq id no：9所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seq id no：10所示的序列；(v)与seq id no：10所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如
1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seq id no：10所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；优选地，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seq id no:9所示的序列的vh和包含如seq id no:10所示的序列的vl。10.权利要求5或6所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)重链可变区(vh)，其包含选自下列的氨基酸序列：(i)seq id no：17所示的序列；(ii)与seq id no：17所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(iii)与seq id no：17所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；和(b)轻链可变区(vl)，其包含选自下列的氨基酸序列：(iv)seq id no：18所示的序列；(v)与seq id no：18所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或(vi)与seq id no：18所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；优选地，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：包含如seq id no:17所示的序列的vh和包含如seq id no:18所示的序列的vl。11.权利要求1
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10任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含来源于人免疫球蛋白的恒定区；优选地，所述抗体或其抗原结合片段的重链包含来源于人免疫球蛋白(例如igg1、igg2、igg3或igg4)的重链恒定区，所述抗体或其抗原结合片段的轻链包含来源于人免疫球蛋白(例如κ或λ)的轻链恒定区；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)人免疫球蛋白的重链恒定区(ch)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合)；和/或(b)人免疫球蛋白的轻链恒定区(cl)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合；例如1个，2个，3个，4个或5个
氨基酸的置换、缺失或添加或其任意组合)；优选地，所述重链恒定区是igg重链恒定区，例如igg1、igg2、igg3或igg4重链恒定区；优选地，所述轻链恒定区是κ轻链恒定区；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含如seq id no:25所示的重链恒定区(ch)；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含如seq id no:26所示的轻链恒定区(cl)。12.权利要求1
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11任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自fab、fab’、(fab’)2、fv、二硫键连接的fv、scfv、双抗体(diabody)和单域抗体(sdab)；和/或，所述抗体为人源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。13.权利要求1
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12任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段具备以下特征中的一项或多项：(a)特异性结合sars
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2的s蛋白的rbd；(b)阻断或抑制sars
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cov
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2对ace2受体的结合，和/或阻断或抑制sars
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2对细胞的感染；(c)不影响或基本上不影响sars
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1对ace2受体的结合；(d)在体外或受试者(例如人)体内中和sars
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2；(e)预防和/或治疗sars
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2感染或与sars
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2感染相关的疾病(例如covid
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19)。14.分离的核酸分子，其编码权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区。15.载体，其包含权利要求14所述的核酸分子；优选地，所述载体为克隆载体或表达载体。16.宿主细胞，其包含权利要求14所述的核酸分子或权利要求15所述的载体。17.制备权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求16所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。18.试剂盒，其包括权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段；例如，所述抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物)、荧光染料(例如异硫氰酸素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素；例如，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别所述抗体或其抗原结合片段；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物)、荧光染料(例如异硫氰酸素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素。19.用于检测sars
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cov
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2或其s蛋白或s蛋白的rbd在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述检测是免疫学检测，例如酶免疫测定法(例如elisa)、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法或放射免疫测定法；例如，所述抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物)、荧光染料(例如异硫氰酸荧光素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素；
例如，所述方法还包括，使用携带可检测的标记(例如酶(例如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)、化学发光试剂(例如吖啶酯类化合物)、荧光染料(例如异硫氰酸荧光素或荧光蛋白)、放射性核素或生物素的第二抗体来检测所述抗体或其抗原结合片段。20.权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测sars
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2或其s蛋白或s蛋白的rbd在样品中的存在或其水平，或用于诊断受试者是否感染了sars
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2；优选地，所述试剂盒通过权利要求19所述的方法来检测sars
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cov
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2在样品中的存在或其水平；优选地，所述样品为来自受试者(例如哺乳动物，优选人)的血液样品(例如，全血、血浆或血清)、排泄物、口腔或鼻腔分泌物、或肺泡灌洗液。21.药物组合物，其包含权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂；优选地，所述药物组合物还包含另外的药学活性剂，例如法匹拉韦，瑞德西韦，干扰素等。22.用于中和样品中sars
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2的毒力的方法，其包括，将包含sars
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cov
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2的样品与权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段接触。23.权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于制备药物的用途，所述药物用于中和样品中sars
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2的毒力，或用于预防或治疗受试者的sars
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2感染或与sars
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2感染相关的疾病(例如covid
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19)；优选地，所述受试者是哺乳动物，例如人；优选地，所述抗体或其抗原结合片段单独使用，或与另外的药学活性剂(例如另外的抗病毒剂，如干扰素、洛匹那韦、利托那韦、磷酸氯喹、法匹拉韦、瑞德西韦等)联合使用。24.用于预防或治疗受试者(例如人)的sars
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2感染或与sars
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2感染相关的疾病(例如covid
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19)的方法，其包括：给有此需要的受试者施用有效量的权利要求1
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13任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求21所述的药物组合物。

技术总结
本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是SARS


技术研发人员：郑子峥 王思令 陈子豪 汪毅祯 唐自闽 张天英 王娟 谯孝扬 张雅丽 袁权 夏宁邵
受保护的技术使用者：厦门大学
技术研发日：2021.04.29
技术公布日：2021/11/2