一株具有接触抑制细菌和真菌活性的假单胞菌的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种可以抑制猕猴桃溃疡病菌和链格孢菌生长的假单胞菌dma-1的分离、鉴定及其应用。

背景技术：

1、植物细菌和真菌病害严重影响经济作物的产量和质量，例如病原细菌丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(pseudomonas pv.actinidae、psa)可以侵染猕猴桃叶片，引起猕猴桃溃疡病；病原真菌链格孢菌(alternaria alternata、aa)可以侵染多种植物引发病害，如其可以侵染烟草叶片引起烟草赤星病。针对这些病害，目前主要通过田间管理和化学农药进行防控。生物防治是植物病害绿色防控的重要手段，然而目前在猕猴桃、烟草等经济作物上的生防细菌应用较少，其中一个重要原因是市面上大部分生防细菌分离于土壤，在植物上的定殖能力较差，导致其生防效果较弱。

2、生防细菌可以通过多种途径抑制病原细菌与真菌的生长，其中最具代表性的是生防细菌合成的抗菌代谢产物，比如芽孢杆菌合成的脂肽类抗菌物质、假单胞杆菌合成的吩嗪类抗菌化合物，这些抗菌代谢产物可以被生防细菌外泌到环境中抑制病原菌的生长，被认为是生防细菌的主要生防武器。目前主流的生防细菌筛选都是以能否产生抗菌代谢产物为鉴定标准，生防菌剂也大多是以活菌或抗菌代谢产物为主要成分。接触杀菌是近期报道的一种新型生防细菌抑菌机制，具体是指生防细菌在与病原细菌接触的过程中，通过iv型分泌系统(t4ss)、vi型分泌系统(t6ss)等接触型分泌系统向病原细菌体内注射效应蛋白进而杀死病原细菌。近期发现生防细菌也可以通过细胞接触抑制真菌的生长。这类接触杀菌活性依赖生防细菌与病原菌的细胞接触，对抗菌代谢产物没有依赖，是一种逐渐受到重视的植物病害绿色防控新资源。

技术实现思路

1、本发明目的是提供一株对猕猴桃溃疡病菌和链格孢菌具有接触杀菌效果的假单胞菌(pseudomonas)dma-1及其应用。

2、本发明的目的可以通过以下方案实现：

3、本发明提供一种假单胞菌dma-1，分类命名为pseudomonas syringae，于2025年4月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为cgmcc no.34154。

4、本发明所述的假单胞菌dma-1为从猕猴桃叶片中分离得到。

5、本发明还提供一种含有所述假单胞菌dma-1的菌液。

6、本发明所述的菌液可以按照本领域的常规方法制备，例如可以是直接培养获得的菌液，也可以菌体重悬形成菌液。在一种具体的实施例中，本发明菌液的制备为取dma-1单菌落接种到lb培养基中，28～32℃、200rpm过夜培养获得的菌液；菌液的菌体浓度可以根据杀菌需求调配，在一些实施例中，菌液的菌体浓度为1*107cfu/ml～1*109cfu/ml。

7、本发明还提供所述的假单胞菌dma-1的或含有该菌株的菌液在抑制猕猴桃溃疡病菌和/或链格孢菌中的应用。

8、本发明还提供所述的假单胞菌dma-1的或含有该菌株的菌液在防控或治疗猕猴桃溃疡病菌或链格孢菌引起的植物病害中的应用。

9、本发明所述的应用，具体为将假单胞菌dma-1或其菌液直接施用于病菌部位，使假单胞菌dma-1直接与病菌接触。

10、本发明的防控原理是直接与病菌接触从而杀死病菌，因此对植物的防控并不因为植物不同而有所区别，可以认为对猕猴桃溃疡病菌和/或链格孢菌在任何植物上造成的病害均有防治作用。在一些实施例中，所述病害为猕猴桃溃疡病或烟草赤星病。

11、本发明的技术方案相对于现有技术的优势：

12、dma-1可以通过细胞接触同时抑制病原细菌和真菌的生长，具有广谱的杀菌活性。与常规的生防细菌分泌代谢产物抑制病菌生长不同，本发明所述的假单胞菌dma-1具有接触抑菌机制。与细菌合成抗菌代谢产物相比，接触杀菌不依赖特定的环境条件，而是依赖生防细菌与病原菌的细胞接触，具有更好的环境适应性。

1.一株丁香假单胞菌dma-1，分类命名为pseudomonas syringae，菌种保藏号为cgmccno.34154。

2.权利要求1所述的假单胞菌dma-1在抑制猕猴桃溃疡病菌和/或链格孢菌中的应用。

3.权利要求1所述的假单胞菌dma-1在防控或治疗猕猴桃溃疡病菌或链格孢菌引起的植物病害中的应用；优选的，所述病害为猕猴桃溃疡病或烟草赤星病。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，具体为将假单胞菌dma-1直接施于病菌位置，使假单胞菌dma-1直接与病菌接触。

5.含有权利要求1所述的假单胞菌dma-1的菌液。

6.根据权利要求5所述的菌液，其特征在于，菌液的菌体浓度为1*107cfu/ml～1*109cfu/ml。

7.权利要求5或6所述的菌液在抑制猕猴桃溃疡病菌和/或链格孢菌中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，具体为将菌液直接施于病菌位置，使假单胞菌dma-1直接与病菌接触。

9.权利要求5或6所述的菌液在防控或治疗猕猴桃溃疡病菌或链格孢菌引起的植物病害中的应用；优选的，所述病害为猕猴桃溃疡病或烟草赤星病。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，具体为将菌液直接施于病菌位置，使假单胞菌dma-1直接与病菌接触。