一种淡紫紫孢菌及其生产的赭曲霉毒素A降解酶和应用

本发明涉及微生物，尤其涉及一种淡紫紫孢菌及其生产的赭曲霉毒素a降解酶和应用。

背景技术：

1、赭曲霉毒素a（ota）是由曲霉属、青霉属等真菌产生的次级代谢产物，广泛污染葡萄、果汁、啤酒、咖啡等液体食品及农产品加工制品。ota具有强肝毒性、肾毒性及致癌性（iarc归类为2b类致癌物），可通过食物链生物蓄积，严重威胁人类健康。目前食品中ota脱除技术主要包括物理吸附法、化学降解法和生物酶解法。

2、但是物理吸附法（如活性炭、膨润土吸附）存在非特异性吸附问题，易导致食品营养成分流失、感官品质下降；化学降解法（如臭氧、碱性水解）易产生二次污染，且破坏食品原有理化性质，应用受限。生物酶解法因特异性强、脱毒彻底、环境友好，成为ota脱除的核心研究方向，但现有ota降解酶存在明显技术瓶颈：例如已报道的脱毒酶（如枯草芽孢杆菌来源的daca、酸氨基单胞菌来源的adh3）催化效率有限，部分酶需24h以上才能实现ota有效降解，且对食品体系适应性差。

3、因此，挖掘新型高效ota降解酶资源有利于突破现有脱毒技术的瓶颈，实现食品体系内的高效特异性脱毒，对保障食品产业的高质量发展具有重要的应用价值。

技术实现思路

1、为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种淡紫紫孢菌及其生产的赭曲霉毒素a降解酶和应用。

2、第一方面，本发明提供一种淡紫紫孢菌（purpureocillium lilacinum）pl-72，所述淡紫紫孢菌pl-72的保藏编号为cgmcc no.42549。

3、该菌株的其他保藏信息如下：分类命名：淡紫紫孢菌

purpureocillium

lilacinum；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所；保藏日期：2026年4月1日。

4、第二方面，本发明提供一种菌剂，包括前述的淡紫紫孢菌pl-72或其发酵上清液。

5、第三方面，本发明提供一种蛋白质，包括如下任一所示的氨基酸序列：

6、（1）如seq id no.1所示的氨基酸序列；

7、（2）如（1）所示的氨基酸序列经过取代、缺失和/或添加一个或几个氨基酸，且具有赭曲霉毒素a降解能力的氨基酸序列；

8、（3）与如（1）所示氨基酸序列至少具备70%、75%、80%、85%、90%、95%或98%同一性，且具有赭曲霉毒素a降解能力的氨基酸序列。

9、本发明分离得到一种新的赭曲霉毒素a降解酶，其具有较高的赭曲霉毒素a降解效率，15 μg赭曲霉毒素a降解酶可以在3分钟内完全降解10 ng ota（终浓度1 μg/ml），具有重要的应用价值。

10、如seq id no.1所示的氨基酸序列：

11、mtrrvvpdfpertgradelparifstglgiavrtgkpdgdedgddvsaskkvfytivtadllipgdgdplphaalvardklivwvgkqsdlpseytqqphkthsvpylmpglwdchvhfggeneqtaieegttgigfiadnpatagarlargcwealqrgytslrdvagfgcevakaiedgtivgpnvysagaclsqlaghgdifalpagdallnlgvtnitaghfgsgmsclvdgpdecrravrlqirrgakcikvmasggvlsrddnplyaqfsaeeldtivseagrmgravaahvhgkpgilqavragvasvehvtfadqecvdlirekgtiyvatrtivkllletggkgmpriiwdkaklcganhlkayklaienggitfalgtdtppgfnmamelefaveaglsnleairaatangpltlreqapktgqlkagyeadmigvcenpvddvrvlqkrsnigwvwkggrlykgpgigpwgeeldghhhhhh。

12、第四方面，本发明提供一种核酸，用于编码前述的蛋白质。

13、进一步地，所述核酸包括如下任一所示的核苷酸序列：

14、（1）如seq id no.2所示的核苷酸序列；

15、（2）与如（1）所示核苷酸序列的互补序列；

16、（3）由于密码子的简并性，与（1）或（2）简并的核苷酸序列。

17、如seq id no.2所示的核苷酸序列：

18、atgacgagacgcgtggtccccgacttcccagagcgcaccgggcgggcggacgagctacccgctcgcatcttctcgaccggccttggtatcgcggtccgcaccgggaagccagacggcgatgaagacggcgacgacgtctccgcgtccaaaaaggtcttctacaccatcgtcaccgccgacctcctcatccctggcgacggcgacccgctgccgcatgccgccctcgtggcccgcgacaagctcatcgtctgggtcggcaagcagagcgacctgccgagcgagtacacgcagcagccgcacaagacgcactcggtgccgtacctgatgcccggcctgtgggactgccacgtgcactttggcggcgagaacgaacagaccgccatcgaagaaggcactacgggcatcggcttcatcgccgacaacccggccacggcgggcgcgcgccttgctcgcggctgctgggaggccctccagcgcggctacacgtcgctgcgggacgttgccggcttcggctgcgaggtggccaaggccatcgaggacggcaccattgtcggccccaatgtctatagcgccggcgcctgcctcagccagctcgctggccacggcgacatctttgccctgcccgccggcgacgccctactcaacctcggcgtcaccaacatcacggcggggcacttcggctccggcatgagctgcctggtcgacggccctgacgagtgccgccgggccgtgcgcctgcagatccgccgcggcgcaaagtgcatcaaggtgatggcctcgggcggcgtgctctcgcgtgacgacaacccgctctacgcgcagttcagcgccgaggagctcgacaccatcgtctccgaggccggccgcatgggccgcgccgttgccgcccacgtccacggcaagccaggcatcctgcaggccgtgcgggcgggcgtcgcctccgtcgagcacgtcacctttgcggaccaggagtgcgtagacctcatccgcgaaaagggcaccatctacgtggcgacacgcaccatcgtcaagctgctgctcgagacgggcggcaagggcatgccgcgcatcatctgggacaaggccaagctgtgcggcgcgaaccacctcaaggcgtacaagctggccattgaaaacggcggcatcacgttcgcgcttggcaccgacacgccgcccgggttcaacatggccatggagctcgagttcgccgtcgaggccggcctgagcaacctcgaggccatccgcgcggccacggccaacgggcccctgacgctgcgcgagcaggcgcccaagacgggccagctcaaggccgggtacgaggccgacatgattggcgtgtgcgagaaccccgtcgacgacgtccgcgtgctgcagaagaggagcaacatcggctgggtgtggaagggcggccgtctgtacaagggcccgggcatcggcccgtggggagaggagctggacggctga。

19、第五方面，本发明提供一种生物材料，包括前述的核酸；

20、所述生物材料为表达盒、载体、细胞、重组病毒颗粒、组织或器官。

21、第六方面，本发明提供一种固定化酶，包括：前述的蛋白质，以及固定化载体。

22、进一步地，所述固定化载体选自：无机材料、高分子材料或复合材料；

23、优选地，所述固定化材料为磁性复合材料，包括磁性内核、包覆于所述磁性内核外的无机氧化物中间层、以及包覆于所述中间层表面的改性多糖外层。

24、作为一种优选的具体实施方式，所述磁性内核为fe3o4纳米颗粒；

25、所述无机氧化物中间层为sio2层；

26、所述改性多糖外层为羧甲基壳聚糖（cmcs）层；

27、优选地，所述蛋白质通过共价结合或吸附作用固定于所述羧甲基壳聚糖层。

28、优选地，所述蛋白质和所述固定化载体的质量比为：1:（5~20）。

29、本发明提供的核壳型fe3o4@sio2@cmcs载体兼具良好磁响应性、生物相容性与高酶负载量，固定化后酶的环境适应性显著提升：最适温度升至75℃，ph耐受范围拓宽至4-8，重复使用10次后仍保持80%以上降解活性，4℃储存90 d后活性保留90%以上。本发明提供的固定化酶可通过磁场快速分离回收，避免酶残留对食品的影响，大幅降低脱毒成本，解决游离酶工业化应用的核心瓶颈，为液体食品中ota的高效、绿色脱除提供新型技术方案。

30、第七方面，本发明提供一种产品，包括：前述的淡紫紫孢菌pl-72，或前述的菌剂，或前述的蛋白质，或前述的核酸，或前述的生物材料，或前述的固定化酶；

31、所述产品为试剂盒、酶制剂或食品添加剂。

32、第八方面，本发明提供前述的淡紫紫孢菌pl-72，或前述的菌剂，或前述的蛋白质，或前述的核酸，或前述的生物材料，或前述的固定化酶在如下任一中的应用：

33、（1）降解赭曲霉毒素a，或制备用于降解赭曲霉毒素a的试剂或试剂盒；

34、（2）检测赭曲霉毒素a，或制备用于检测赭曲霉毒素a的试剂或试剂盒。

35、第九方面，本发明提供一种食品的脱毒处理方法，包括：采用前述淡紫紫孢菌pl-72或前述的菌剂处理所述食品，或，

36、将前述蛋白质，或前述的固定化酶置于食品中，在60~70℃条件下处理3~10分钟。

37、本发明具备如下有益效果：

38、本发明筛选分离得到一株新的淡紫紫孢菌，并在其代谢产物中分离得到了一种具有显著赭曲霉毒素a降解活性的酰胺水解酶，其针对赭曲霉毒素a有着较高的降解效率，可以在短时间内降解大量赭曲霉毒素a。本发明提供的赭曲霉毒素a降解酶可以应用于食品、饲料或环境等多个领域的毒素降解中，尤其是食品安全相关领域，具有重要的应用价值。