重组人胰岛素在制备用于治疗角膜上皮病变药物中的应用的制作方法

本技术涉及眼科药物的，尤其是涉及重组人胰岛素在制备用于治疗角膜上皮病变药物中的应用。

背景技术：

1、哺乳动物的眼表角膜上皮维持完整性受高频瞬目剪切力及泪液极速清除等微流体力学环境支配。在病理状态下，角膜上皮细胞代谢发生障碍，导致上皮持续缺损。重组人胰岛素具备激活角膜上皮细胞受体并促进细胞增殖迁移的生物学功能。将蛋白质药物直接施用于眼表面对严苛的静态屏障和动态屏障，受制于泪液持续冲刷和鼻泪管引流，游离的水溶性多肽分子在眼表的滞留时间极短，跨膜吸收渗透通量处于低谷，常规配方难以在病灶组织界面维持有效的治疗浓度。

2、中国发明专利申请cn114099645a一种胰岛素纳米系统对角膜组织修复的药物组合物及其应用公开了一种以纳米脂质体作为载药体系的技术方案。该方案将大豆卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000与胆固醇溶解于三氯甲烷，经旋蒸成膜及磷酸盐缓冲液洗脱形成脂质体薄膜洗脱液。胰岛素被溶解于ph值为2的稀盐酸中，混入磷酸盐缓冲液与全氟溴辛烷进行超声乳化形成水包油型乳液。该乳液最终并入薄膜洗脱液中进行超声与离心，形成包裹胰岛素的纳米级脂质体。该方案通过脂质体的内水相物理容纳胰岛素分子，并利用外部亲脂层结构增加跨膜吸收性能。

3、在眼表高频瞬目剪切及泪液极速清除的流体力学工况下，依赖脂质双分子层物理包裹的技术方案发生固有的相界面释放阻碍。角膜上皮组织的修复依赖于游离状态的胰岛素分子与靶细胞表面受体的直接对接与识别。该现有技术将胰岛素强制封锁于由卵磷脂和胆固醇构建的封闭水相核心中，脂质外壳构成物理空间壁垒，阻断蛋白质配体与受体间的直接接触通路。在脂质体骨架发生水解或相界面降解以释放内部药物之前，绝大多数完整的载药纳米颗粒已被泪液动力学机制清除。受限于磷脂双分子层的物理隔绝作用，内部胰岛素分子在泪膜层中的自由扩散能力被剥夺，使得药物释放动力学极度滞后于眼表的物理清除速率，导致游离态胰岛素在靶向受体界面的可用浓度发生断崖式缺失。

技术实现思路

1、为了解决无电荷屏蔽致药物释放受阻的缺陷，实现药物自由扩散，本技术提供重组人胰岛素在制备用于治疗角膜上皮病变药物中的应用。

2、本技术提供的重组人胰岛素在制备用于治疗角膜上皮病变药物中的应用，采用如下的技术方案：重组人胰岛素在制备用于治疗角膜上皮病变药物中的应用，药物为眼用液体制剂，所述药物中所述重组人胰岛素的浓度为0.5iu/ml至5.0iu/ml；

3、所述药物不包含脂联素、神经生长因子成分和自体血清成分；

4、角膜上皮病变为持续性角膜上皮缺损或神经营养性角膜炎；

5、所述药物还包含眼科可接受的辅料，且所述药物的ph值为6.5至7.8，所述药物的渗透压为250mosm/l至350mosm/l；

6、所述眼科可接受的辅料至少包含：玻璃酸钠和泊洛沙姆188。

7、可选的，所述药物为滴眼液；

8、其中，所述滴眼液中所述重组人胰岛素的浓度为0.5iu/ml至2.0iu/ml，且所述辅料包含所述泊洛沙姆188以及选自由甘油和甘露醇组成的组中的至少一种。

9、可选的，所述滴眼液还包含锌离子螯合剂，所述重组人胰岛素与所述锌离子螯合剂的摩尔比为1:2至1:3。

10、可选的，所述滴眼液还包含糖类水合保护剂，所述糖类水合保护剂选自由海藻糖、乳糖和蔗糖组成的组中的至少一种；所述滴眼液中，所述糖类水合保护剂的质量分数为1.0%至1.5%，且所述泊洛沙姆188的质量分数为0.01%至0.05%。

11、可选的，所述辅料包含所述玻璃酸钠，且所述滴眼液还包含碱性氨基酸；

12、所述玻璃酸钠的重均分子量为1.5×106至2.0×106；

13、所述碱性氨基酸与所述玻璃酸钠中的羧基的摩尔比为0.95:1至1.10:1。

14、可选的，所述碱性氨基酸选自由l-精氨酸、l-赖氨酸和l-组氨酸组成的组中的至少一种；

15、所述锌离子螯合剂选自由乙二胺四乙酸二钠、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸和植酸组成的组中的至少一种。

16、可选的，所述滴眼液中，所述玻璃酸钠的质量分数为0.15%至0.25%；

17、所述滴眼液由单体前体液与静电钝化基质相在2℃至5℃的温度下混合制得；

18、其中，所述静电钝化基质相包含所述玻璃酸钠和所述碱性氨基酸，所述单体前体液包含所述重组人胰岛素、所述锌离子螯合剂、所述糖类水合保护剂和所述泊洛沙姆188。

19、可选的，所述静电钝化基质相通过将所述玻璃酸钠分散于等渗缓冲液中，在高于100℃的温度下湿热灭菌，并降温至18℃至22℃后与所述碱性氨基酸混合制得；

20、所述单体前体液通过将所述重组人胰岛素与所述锌离子螯合剂在18℃至22℃下混合解聚后，再与所述糖类水合保护剂和所述泊洛沙姆188混合制得。

21、可选的，所述单体前体液与所述静电钝化基质相的体积比为1:10至1:8；

22、所述单体前体液与所述静电钝化基质相的混合过程为：将所述单体前体液滴加至所述静电钝化基质相中，并在2℃至5℃的温度下密闭静置平衡12h至48h。

23、可选的，所述等渗缓冲液为浓度为0.01mol/l至0.10mol/l且ph值为7.0至7.4的磷酸盐缓冲液；

24、所述单体前体液中所述重组人胰岛素的浓度为所述滴眼液中所述重组人胰岛素浓度的8倍至12倍；

25、将所述单体前体液滴加至所述静电钝化基质相中的过程在50r/min至80r/min的搅拌条件下进行，且控制所述单体前体液在10min至30min的时间内匀速滴加完毕。

26、综上所述，本技术包括以下有益技术效果：

27、1、通过在滴眼液中限定重组人胰岛素的浓度为0.5iu/ml至5.0iu/ml，并排除脂联素、神经生长因子成分和自体血清成分，同时将ph值调控至6.5至7.8以及渗透压调控至250mosm/l至350mosm/l，使重组人胰岛素在角膜表面以游离单体形式稳定存在，并利用辅料中玻璃酸钠、羧甲纤维素钠、羟丙甲纤维素或泊洛沙姆188提供的适宜黏度和界面保护作用，避免了纳米脂质体物理包裹所致的相界面释放阻碍，实现了游离态胰岛素分子在泪膜层中的自由扩散及其与角膜上皮细胞表面受体的直接对接。

28、2、通过将滴眼液中重组人胰岛素的浓度进一步限定为0.5iu/ml至2.0iu/ml，并引入锌离子螯合剂使重组人胰岛素与该螯合剂的摩尔比为1:2至1:3，利用螯合剂对重组人胰岛素六聚体中锌离子的配位竞争作用，使六聚体解聚为单体并维持单体比例，同时配合糖类水合保护剂中1.0%至1.5%质量分数的海藻糖、乳糖或蔗糖对蛋白质水合层的稳定作用，有效抑制了重组人胰岛素在溶液中的自缔合和界面聚集，提升了药物在25℃放置30天后的含量保持率。

29、3、通过使滴眼液包含玻璃酸钠和碱性氨基酸，且限定碱性氨基酸与玻璃酸钠中羧基的摩尔比为0.95:1至1.10:1，利用碱性氨基酸对玻璃酸钠羧基的竞争性占位作用，有效钝化了玻璃酸钠分子链上羧基对重组人胰岛素表面局部正电荷区域的非特异性静电结合，降低了重组人胰岛素在玻璃酸钠网络中的可逆吸附概率，并结合将含重组人胰岛素的单体前体液滴加至含玻璃酸钠与碱性氨基酸的静电钝化基质相中、在2℃至5℃下静置平衡的制备方式，实现了重组人胰岛素在玻璃酸钠基质中由浓度梯度驱动的充分扩散和自由释放。