三七活性组分在制备抗大口黑鲈虹彩病毒药物或饲料中的应用的制作方法

本申请涉及水产养殖病害防控，尤其是涉及一种三七活性组分在制备抗大口黑鲈虹彩病毒药物或饲料中的应用。

背景技术：

1、大口黑鲈，俗称加州鲈，是重要的淡水经济鱼类。大口黑鲈虹彩病毒（lmbv）是严重危害其养殖产业的主要病毒性病原，病害暴发可造成鱼群大批量死亡，给养殖业造成重大经济损失。lmbv隶属于虹彩病毒科蛙病毒属，为有囊膜双链dna病毒。该病毒宿主范围广泛，可感染太阳鱼科、狗鱼科、鲤科等多科养殖及野生鱼类，主要经水平传播扩散，在28~30℃夏季高温环境极易暴发流行。患病鱼常出现体表溃疡、肌肉坏死、鳍基溃烂及脾肾肿大等症状，重症感染死亡率可达100%。

2、然而，目前尚无商业化疫苗或特效药物可用于lmbv的预防和治疗。养殖实践中主要依赖改善水质、降低养殖密度、加强饲养管理等非特异性防控措施，缺乏主动干预手段。现有研究表明，一些中草药如黄连（coptis chinensis）和紫花地丁（viola yedoensis）具有抗lmbv活性，但对大口黑鲈的保护率仅约40%（《海洋与湖沼》，2022），但难以满足养殖生产实际需求。近年来陆续有关于大蓟水提物、肉桂醇提物、赤芍提取物等抗lmbv的专利申请公开，但整体而言，抗lmbv的候选药物种类仍十分有限，且主要集中于少数植物科属，亟须拓展新型、高效、低毒的候选药物来源。

3、此外，现有技术多关注药物抗病毒活性本身，缺乏将药物开发为饲料添加剂的实际应用方案，不利于规模化推广。

技术实现思路

1、基于此，本申请的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种三七活性组分在制备抗大口黑鲈虹彩病毒药物或饲料中的应用，并进一步提供一种抗大口黑鲈虹彩病毒药物和鱼饲料。该三七活性组分低毒性，能够显著抑制大口黑鲈虹彩病毒的复制，对lmbv感染具有良好的预防和治疗效果。

2、为实现以上目的，本申请采用如下技术方案：

3、首先，本申请提供了一种三七活性组分在制备抗大口黑鲈虹彩病毒药物或饲料中的应用，所述三七活性组分为三七总皂苷，或所述三七活性组分为三七水提物和三七醇提物中的至少一种。

4、优选地，所述三七水提物的制备方法包括如下步骤：将三七粉末浸泡于水中，浸提8~16h，然后于96～100℃进行第一微沸煎煮1~3h，离心，收集上清液，减压浓缩并冷冻干燥。

5、优选地，所述三七水提物的制备方法还包括如下步骤：在离心收集上清液后，收集药渣，加水再次于96～100℃进行第二微沸煎煮1~2h，再次离心，合并两次上清液，减压浓缩并冷冻干燥。

6、优选地，将三七粉末浸泡于水中时，所述三七粉末与水的料液比为1:8~10。

7、优选地，收集药渣，加水再次于96～100℃进行第二微沸煎煮时，所述药渣与水的料液比为1:8~10。

8、优选地，所述三七醇提物的制备方法包括如下步骤：将三七粉末浸泡于醇溶剂中，浸提8~16h，然后于60~80℃条件下回流1~3h，过滤，收集滤液，减压浓缩并冷冻干燥；所述醇溶剂选自乙醇、甲醇、丙醇或丁醇。

9、优选地，所述三七醇提物的制备方法还包括如下步骤：在过滤收集滤液后，将滤饼加入醇溶剂中，再次于60~80℃条件下回流1~2h，再次过滤，合并两次滤液，减压浓缩并冷冻干燥。

10、优选地，将三七粉末浸泡于醇溶剂时，所述三七粉末与醇溶剂的料液比为1:8~10。

11、优选地，将滤饼加入醇溶剂时，所述滤饼与所述醇溶剂的料液比为1:6~8。

12、优选地，三七粉末的目数大于或等于40目。

13、优选地，三七总皂苷为市售常规三七总皂苷，或根据本领域常规方法提取的三七总皂苷。

14、基于一个总的发明构思，本申请还提供了一种抗大口黑鲈虹彩病毒药物，包括三七活性组分，所述三七活性组分包括为三七水提物、三七醇提物或三七总皂苷中的至少一种。

15、优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料；所述药物剂型为液体制剂、混悬剂、片剂、颗粒剂或散剂。

16、优选地，所述药物的剂型为液体制剂，所述液体制剂中，所述三七活性组分的浓度为0.1~50µg/ml。

17、优选地，所述液体制剂中，所述三七水提物的浓度为0.5～50µg/ml；具体可为0.5µg/ml、0.8µg/ml、1µg/ml、5µg/ml、10µg/ml、25µg/ml或50µg/ml；也可以为上述任意两个点值作为端值构成的范围值。更优选地，三七水提物的浓度为0.5～10µg/ml。

18、优选地，所述液体制剂中，所述三七醇提物的浓度为0.05～10µg/ml；具体可以为0.05µg/ml、0.1µg/ml、0.5µg/ml、1µg/ml、5µg/ml或10µg/ml；也可以为上述任意两个点值作为端值构成的范围值。更优选地，三七醇提物的浓度为0.05～1µg/ml；进一步优选地，三七醇提物的浓度为0.8～1µg/ml。

19、优选地，所述液体制剂中，所述三七总皂苷的浓度为0.5～20µg/ml；具体可为0.5µg/ml、1µg/ml、5µg/ml、10µg/ml、15µg/ml或20µg/ml；也可以为上述任意两个点值作为端值构成的范围值。更优选地，三七总皂苷的浓度为0.5～10µg/ml；进一步优选地，三七总皂苷的浓度为0.8～2µg/ml。

20、基于一个总的发明构思，本申请还提供了一种抗大口黑鲈虹彩病毒鱼饲料，包括饲料添加剂和基础饲料，饲料添加剂包括三七活性组分，所述三七活性组分为三七总皂苷，或所述三七活性组分为三七水提物和三七醇提物中的至少一种。

21、优选地，所述饲料中所述三七活性组分的质量含量为0.05~0.2%；具体可为0.05%、0.1%、0.15%或0.2%；也可以为上述任意两个点值作为端值构成的范围值。

22、与现有技术相比，本申请具有以下显著优势：

23、本申请首次将三七及其提取物/活性成分（水提物、醇提物、三七总皂苷）应用于抗lmbv，体外活性数据表明三种组分均可显著降低病毒拷贝数。三七为传统药食两用中药材，细胞毒性实验表明其在有效浓度范围内对epc细胞无明显毒性，尤其适用于食用鱼类的疾病防控。三七总皂苷兼具直接抑制病毒复制、增强宿主免疫功能和减轻炎症损伤的多重生物学活性，相较于单一靶点抗病毒药物，综合防控效果更具优势。

24、本申请同时涵盖药物制剂和饲料添加剂两种实施方式，既可拌饲投喂用于日常预防，也可制成药物用于感染后治疗，能够灵活适应不同养殖场景和防控阶段的需要。

1.一种三七活性组分在制备抗大口黑鲈虹彩病毒药物或饲料中的应用，其特征在于，所述三七活性组分为三七总皂苷；或所述三七活性组分为三七水提物和三七醇提物中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述三七水提物的制备方法包括如下步骤：将三七粉末浸泡于水中，浸提8~16h，然后于96～100℃进行第一微沸煎煮1~3h，离心，收集上清液，减压浓缩并冷冻干燥；或，

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述三七水提物的制备方法还包括如下步骤：在离心收集上清液后，收集药渣，加水再次于96～100℃进行第二微沸煎煮1~2h，再次离心，合并两次上清液，减压浓缩并冷冻干燥。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述三七醇提物的制备方法还包括如下步骤：在过滤收集滤液后，将滤饼加入醇溶剂中，再次于60~80℃条件下回流1~2h，再次过滤，合并两次滤液，减压浓缩并冷冻干燥。

5.一种抗大口黑鲈虹彩病毒药物，其特征在于，包括三七活性组分，所述三七活性组分包括为三七水提物、三七醇提物或三七总皂苷中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的抗大口黑鲈虹彩病毒药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料；所述药物剂型为液体制剂、混悬剂、片剂、颗粒剂或散剂。

7.根据权利要求5所述的抗大口黑鲈虹彩病毒药物，其特征在于，所述药物的剂型为液体制剂，所述液体制剂中，所述三七活性组分的浓度为0.1~50µg/ml。

8.根据权利要求7所述的抗大口黑鲈虹彩病毒药物，其特征在于，所述液体制剂中，所述三七水提物的浓度为1～50µg/ml，或，所述三七醇提物的浓度为0.1～10µg/ml，或，所述三七总皂苷的浓度为1～20µg/ml。

9.一种抗大口黑鲈虹彩病毒鱼饲料，其特征在于，包括饲料添加剂和基础饲料，饲料添加剂包括三七活性组分，所述三七活性组分为三七总皂苷，或所述三七活性组分为三七水提物和三七醇提物中的至少一种。

10.根据权利要求9所述的饲料，其特征在于，所述饲料中所述三七活性组分的质量含量为0.05~0.2%。