抑制或下调转录因子Glis3表达和/或活性的物质在制备预防和/或治疗代谢相关肝纤维化疾病药物中的应用

本发明属于生物医药，特别涉及抑制或下调转录因子glis3表达和/或活性的物质在制备预防和/或治疗代谢相关肝纤维化疾病药物中的应用。

背景技术：

1、代谢相关脂肪性肝病（masld，旧称nafld）是当前最常见的慢性肝病，相当比例的masld患者会进展至代谢相关脂肪性肝炎（mash，旧称nash），并进一步发展为肝纤维化、肝硬化乃至肝细胞癌（hcc）。肝纤维化是决定疾病预后的核心病理事件，纤维化分期而非单纯脂肪性肝炎的存在，是nafld患者肝脏相关死亡及全因死亡的最强预测因子。

2、肝纤维化的发生发展是多细胞参与的复杂过程。其中，肝星状细胞（hsc）处于核心地位：在肝脏损伤信号的刺激下，静息hsc活化为具有增殖、收缩和产生细胞外基质（ecm）能力的肌成纤维细胞，是ecm沉积的主要来源。hsc的活化不是细胞自主行为，而是受损肝细胞通过旁分泌信号（细胞因子、趋化因子、损伤相关分子模式等）驱动的。然而，肝细胞-hsc旁分泌轴中具体的分子介质及其上游调控机制尚未完全阐明。

3、glis3属于gli-similar家族的krüppel样锌指转录因子，既往研究集中于其在胰岛β细胞发育、胰岛素基因调控及糖尿病易感性中的作用。全基因组关联研究（gwas）已将glis3基因座鉴定为1型和2型糖尿病的显著风险位点。此外，glis3在甲状腺激素生物合成及肾脏发育中也发挥重要作用。然而，目前尚无研究报道glis3参与肝纤维化的发生发展，其在肝脏疾病中的功能和机制完全未知。

4、现有抗肝纤维化治疗极为有限。虽然resmetirom（甲状腺激素受体β激动剂）近期获fda有条件批准用于伴中重度纤维化的非肝硬化nash/mash成人患者，但针对上游促纤维化分子驱动机制的治疗靶点仍然有限，这一重大未满足临床需求凸显了寻找新型分子靶点的迫切性。

技术实现思路

1、本发明提供抑制或下调转录因子glis3表达和/或活性的物质在制备预防和/或治疗代谢相关肝纤维化疾病药物中的应用，目的在于解决如下技术问题：

2、（1）迄今尚无研究揭示转录因子glis3在肝纤维化中的作用与机制，其作为抗纤维化治疗靶点的价值完全未知；

3、（2）肝细胞向hsc发出的关键促纤维化旁分泌信号分子尚未充分鉴定，缺乏能反映glis3-ccl6/ccl23-ccr1轴活跃纤维化信号的循环生物标志物；

4、（3）现有肝纤维化无创诊断工具（如肝脏硬度测定）缺乏能反映上游分子驱动机制的特异性生物标志物；

5、（4）masld/mash相关肝纤维化缺乏直接靶向核心纤维化驱动机制的有效治疗药物和干预策略。

6、本发明提供了抑制或下调转录因子glis3表达和/或活性的物质在制备预防和/或治疗代谢相关肝纤维化疾病药物中的应用。

7、优选地，所述物质包括核酸干扰分子、反义寡核苷酸、基因编辑系统、小分子化合物、多肽、抗体或其抗原结合片段、病毒载体、非病毒递送载体及其组合。

8、优选地，所述代谢相关肝纤维化疾病包括代谢相关脂肪性肝病/代谢相关脂肪性肝炎所致肝纤维化及肝硬化。

9、优选地，所述药物还包含药学上可接受的辅料。

10、优选地，所述药学上可接受的辅料包括稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂中的至少一种。

11、本发明还提供了检测glis3表达水平和/或ccl23水平的试剂在制备用于代谢相关肝纤维化疾病诊断、分期评估、疗效监测或预后评估产品中的应用。

12、优选地，所述药物通过抑制glis3-ccl6/ccl23-ccr1信号轴、降低ccl6和/或ccl23表达、抑制hsc活化并减少细胞外基质沉积发挥抗纤维化作用。

13、优选地，所述诊断评估产品包括rt-qpcr试剂、核酸探针、测序试剂、免疫检测试剂、elisa试剂盒中的至少一种。

14、英文缩写说明：

15、glis3：gli-similar 3，gli样家族3号，krüppel样锌指转录因子。

16、ccl6/ccl6：cc趋化因子配体6（小鼠），其人类同源体为ccl23（cc趋化因子配体23）。

17、ccr1：cc趋化因子受体1，为ccl6/ccl23的受体。

18、hsc：肝星状细胞（hepatic stellate cell）。

19、cbp/p300：creb结合蛋白/p300蛋白，组蛋白乙酰转移酶，分别由crebbp/ep300基因编码。

20、hdac11：第iv类组蛋白去乙酰化酶11。

21、h3k27ac：组蛋白h3第27位赖氨酸乙酰化，活性增强子和启动子的表观遗传标志。

22、aav：腺相关病毒（adeno-associated virus）；tbg启动子：甲状腺素结合球蛋白启动子，肝细胞特异性。

23、mcd饮食：蛋氨酸-胆碱缺乏饮食，诱导肝脂肪变性和纤维化的小鼠模型。

24、masld/mash：代谢相关脂肪性肝病/代谢相关脂肪性肝炎（旧称nafld/nash）。

25、有益效果

26、与现有技术相比，本发明具有如下优势：

27、（1）发现新型肝纤维化关键驱动因子：首次阐明转录因子glis3在肝纤维化中的关键促病作用，填补了该领域空白，为肝纤维化分子机制研究提供了新的理论框架。

28、（2）提供新型治疗靶点：glis3肝细胞特异性敲低（aav-si-glis3）在mcd饮食诱导的肝纤维化小鼠模型中显示出显著的治疗保护效果，证实glis3是可干预的抗纤维化治疗靶点。aav8介导的肝细胞特异性递送策略提供了精准靶向的技术途径。

29、（3）发现新型抗纤维化干预节点——ccl6/ccl23-ccr1轴：ccl6中和抗体和ccr1拮抗剂bx471均能有效阻断glis3过表达肝细胞激活hsc的旁分泌效应，提供了靶向治疗的备用途径，与现有广谱抗炎治疗相比更为精准。

30、（4）发现新型肝纤维化循环生物标志物：glis3肝脏表达水平在两个独立人类队列中均随纤维化分期进展而升高，具有较高诊断auroc；ccl23血浆水平与nafld患者肝脏硬度显著正相关，两者均可作为反映活跃纤维化进程的无创诊断生物标志物，有助于弥补现有无创评估工具的不足。

31、（5）揭示表观遗传-转录调控双层机制：阐明了cbp/p300缺失通过hdac11下调导致ccl6启动子h3k27高乙酰化、同时上调glis3驱动ccl6转录的双层调控机制，为设计多靶点联合干预策略（如hat激活剂联合glis3抑制剂）提供了机制依据。

1.抑制或下调转录因子glis3表达和/或活性的物质在制备预防和/或治疗代谢相关肝纤维化疾病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述物质选自抑制或下调glis3表达的核酸分子、抑制glis3转录活性或蛋白功能的小分子化合物、多肽、抗体或其抗原结合片段、基因编辑系统、递送上述物质的病毒或非病毒载体及其组合。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述代谢相关肝纤维化疾病包括代谢相关脂肪性肝病/代谢相关脂肪性肝炎所致肝纤维化及肝硬化。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物通过抑制glis3-ccl6/ccl23-ccr1信号轴、降低ccl6和/或ccl23表达、抑制肝星状细胞活化、减少细胞外基质沉积中的至少一种途径发挥抗纤维化作用。

5.一种用于预防和/或治疗代谢相关肝纤维化疾病的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1或2所述的物质以及药学上可接受的辅料。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包括稀释剂、粘合剂、表面活性剂、致湿剂、吸附载体、润滑剂、填充剂、崩解剂中的至少一种。

7.检测glis3表达水平和/或ccl23水平的试剂在制备用于代谢相关肝纤维化疾病诊断、分期评估、疗效监测或预后评估产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产品包括rt-qpcr试剂、核酸探针、测序试剂、免疫检测试剂、elisa试剂盒中的至少一种。