基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法

本发明涉及医药制药，具体为基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法。

背景技术：

1、急性肺损伤（ali）及其严重形式急性呼吸窘迫综合征（ards）是临床常见的危重症，病死率高达30%～40%。其核心病理机制包括肺泡上皮与肺微血管内皮损伤、肺泡-毛细血管屏障破坏、非心源性肺水肿、炎症细胞过度募集以及进行性低氧血症。目前临床治疗以支持治疗为主，如肺保护性通气、限制性液体管理、俯卧位通气等，缺乏特异性的药物治疗。

2、现有药物治疗存在以下主要问题：

3、其一：糖皮质激素等广谱抗炎药虽可抑制炎症反应，但存在免疫抑制与继发感染的风险，且疗效证据不一致，无法针对ali的多环节网络性病理进行有效干预。

4、其二：针对单一炎症因子（如tnf-α、il-1β等）的靶向拮抗剂在临床试验中屡屡失败，原因在于ali并非由单一通路驱动，而是炎症放大、屏障破坏、基质重塑与修复障碍多环节交织的网络性病理过程，抑制单个节点无法逆转整体病理进程。

5、其三：近年来研究发现，ali时肺泡上皮、内皮及免疫细胞在炎症与氧化应激下发生p53/p16介导的衰老样激活，并释放衰老相关分泌表型（sasp）因子，进一步放大炎症、加剧屏障破坏与修复延迟。然而现有的衰老干预药物多以促衰老细胞凋亡为机制，存在血液学毒性、细胞选择性不足等问题，且尚未见用于ali的成熟方案。此外，ali属急性病程，大规模清除衰老细胞可能同时损伤修复所需的细胞，所需的是抑制衰老样程序的激活而非清除细胞，现有技术缺乏这类温和调控手段。

6、其四：羌活为传统中药，其干燥根茎及根具有祛风散寒、除湿止痛的功效，现代药理研究集中于镇痛、抗炎、解热与抗氧化，主要用于类风湿关节炎、骨关节炎等。现有技术中不存在将羌活来源的自组装颗粒用于治疗急性肺损伤的技术方案，亦不存在通过抑制p53/p16-sasp程序实现肺保护的中药来源药物。

7、鉴于此，我们提出基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，该方法通过特定的冻融自组装工艺，从羌活饮片中提取出具有纳米级类球形颗粒形态的自组装颗粒，该颗粒能够通过抑制p53/p16通路介导的细胞衰老激活及sasp分泌，实现多环节、网络性的肺保护作用。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，所述方法包括：

4、s1、将羌活饮片加水浸泡，然后加热煎煮，得到煎液；

5、s2、将步骤s1得到的煎液进行第一次离心，收集上清液；

6、s3、将步骤s2得到的上清液进行冷冻处理，随后自然解冻，得到解冻液；

7、s4、将步骤s3得到的解冻液进行第二次离心，收集沉淀，并用纯化水洗涤沉淀，得到羌活自组装颗粒。

8、优选的，步骤s1中所述羌活饮片与水的重量比为1:5～1:15，浸泡时间为0.5～2小时，煎煮时间为0.5～2小时。

9、优选的，步骤s1中所述煎煮为文火微沸煎煮，煎煮温度为95～105℃。

10、优选的，步骤s2中所述第一次离心的离心力为8,000～12,000×g，离心时间为10～20分钟。

11、优选的，步骤s3中所述冷冻处理的温度为-25℃～-15℃，冷冻时间为12～24小时；所述自然解冻的温度为18～30℃，解冻时间为1～4小时。

12、优选的，步骤s4中所述第二次离心的离心力为8,000～12,000×g，离心时间为10～20分钟；所述洗涤的次数为2～4次。

13、优选的，步骤s4之后还包括将所得羌活自组装颗粒进行干燥的步骤，所述干燥为冷冻干燥或真空干燥，干燥后颗粒的水分含量≤5%。

14、优选的，步骤s4所得羌活自组装颗粒的平均粒径为50～500nm，zeta电位为-30mv～-10mv。

15、优选的，步骤s4所得羌活自组装颗粒中多糖含量≥40%，总酚含量≥5%，且包含绿原酸、阿魏酸、异欧前胡素中的至少两种活性成分。

16、优选的，步骤s4所得羌活自组装颗粒用于制备抑制p53/p16通路介导的细胞衰老激活及衰老相关分泌表型的药物。

17、借由上述技术方案，本发明提供了基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法。至少具备以下有益效果：

18、本发明通过特定冻融自组装工艺，从羌活饮片中成功制备出纳米级类球形颗粒，该颗粒平均粒径为50～500nm，具有良好的分散性和稳定性，解决了传统中药提取物成分复杂、难以标准化的问题，实现了活性成分的高效富集和可控生产。

19、通过抑制p53/p16通路介导的细胞衰老激活及sasp分泌，实现了对急性肺损伤的多环节整体保护。解决模型组肺功能严重下降、气道阻力异常升高、肺水肿等问题，使肺组织病理学显示肺泡间隔增厚、炎症细胞浸润、肺泡腔出血等病变显著减轻，这些效果是糖皮质激素等广谱抗炎药所不具备的，因为本发明不依赖免疫抑制，而是通过网络性调控发挥作用，解决了现有广谱抗炎药免疫抑制与继发感染风险的问题。

20、通过转录组测序发现，纳米级类球形颗粒反向调控536个差异表达基因，显著富集于细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞黏附分子、趋化作用、免疫应答与炎症应答等多条通路，实现了对免疫-炎症网络的整体重塑，这与单一细胞因子拮抗剂只能抑制单个靶点不同，解决了单靶点药物无法逆转ali网络性病理的缺陷。

21、本发明通过抑制p53/p16相关细胞衰老激活及sasp炎症分泌程序，而非通过清除衰老细胞，这不同于senolytics类药物的促凋亡机制，解决了senolytics类药物存在的血液学毒性、细胞选择性不足以及在急性病程中可能损伤修复所需细胞的问题。

1.基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s1中所述羌活饮片与水的重量比为1:5～1:15，浸泡时间为0.5～2小时，煎煮时间为0.5～2小时。

3.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s1中所述煎煮为文火微沸煎煮，煎煮温度为95～105℃。

4.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s2中所述第一次离心的离心力为8,000～12,000×g，离心时间为10～20分钟。

5.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s3中所述冷冻处理的温度为-25℃～-15℃，冷冻时间为12～24小时；所述自然解冻的温度为18～30℃，解冻时间为1～4小时。

6.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s4中所述第二次离心的离心力为8,000～12,000×g，离心时间为10～20分钟；所述洗涤的次数为2～4次。

7.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s4之后还包括将所得羌活自组装颗粒进行干燥的步骤，所述干燥为冷冻干燥或真空干燥，干燥后颗粒的水分含量≤5%。

8.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s4所得羌活自组装颗粒的平均粒径为50～500nm，zeta电位为-30mv～-10mv。

9.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s4所得羌活自组装颗粒中多糖含量≥40%，总酚含量≥5%，且包含绿原酸、阿魏酸、异欧前胡素中的至少两种活性成分。

10.根据权利要求1所述的基于p53或p16通路调控肺细胞衰老的羌活自组装颗粒制备方法，其特征在于，步骤s4所得羌活自组装颗粒用于制备抑制p53/p16通路介导的细胞衰老激活及衰老相关分泌表型的药物。