术后疲乏动物模型和构建方法及应用

本发明属于生物，具体涉及恶性肿瘤术后疲乏动物模型、构建方法及其应用。

背景技术：

1、术后疲劳综合征（postoperative fatigue syn⁃drome，pofs）由merton首次提出（merton pa. voluntary strength and fatigue [j]. j physiol, 1954, 123(3): 553-564.），是指外科手术尤其是腹部大手术后，患者在康复过程中出现的以疲倦、肌无力、嗜睡、注意力和活动力下降为主的一系列临床症状（zargar-shoshtari k, hill ag.postoperative fatigue:a review [j]. world j surg, 2009, 33(4):738-745.）。非复杂性大手术即可导致65%患者在术后首月出现pofs，复杂大手术患者pofs的发生率更高，持续时间长达 3 个月（petersson b, wernerman j, waller so, et al. electiveabdominal surgery depresses muscle protein synthesis and increases subjectivefatigue: effects lasting more than 30 days [j]. br j surg, 1990, 77 (7):796-800.）。pofs 的发生率和持续时间甚至超过术后疼痛（bisgaard t, klarskov b,rosenberg j, et al. factors determining convalescence after uncomplicatedlaparoscopic cholecystectomy [j]. arch surg, 2001, 136 (8):917-921.），延长了患者恢复时间并降低患者生活质量，造成严重的经济和社会负担。国内外对pofs的研究起步较晚，pofs的发病机制和治疗靶标尚不明确，目前以对症治疗为主，治疗方法有限。

2、pofs病理机制研究和新药评价依赖于理想的动物模型和可靠的评价指标，理想动物模型应满足表观有效性、预测有效性和结构有效性3个基本要求。表观有效性指动物模型应尽可能复制人类疾病的行为学表现；预测有效性指药物或治疗手段在模型动物和临床患者中的有效性应具有一致性；结构有效性是指模型动物与临床患者具有相似的病因、病程发展和病理生理机制。

3、目前用于术后疲乏或癌因性疲乏研究的动物模型主要包括单纯手术创伤模型、化疗药物诱导疲乏模型以及复合应激模型。手术创伤模型可模拟术后状态，但创伤程度、操作方式、疼痛和感染等混杂因素较多，单纯手术模型操作复杂、创伤程度不易统一，模型稳定性不足；顺铂、5-氟尿嘧啶等化疗药物诱导的模型具有操作相对简便、周期较短、重复性较好的特点，但多数用于癌因性疲乏研究，单纯化疗疲乏模型缺乏肿瘤负荷及术后状态背景，与恶性肿瘤术后疲乏临床特征的相似性有限，尚不能充分体现“恶性肿瘤切除术后”这一特定临床场景。此外，部分模型观察周期较长、动物死亡率或变异度较高，不利于大规模药物筛选和机制研究；既往模型评价指标较分散，缺少将体重、运动功能、自主活动能力以及肝/肌糖原能量储备相结合的系统评价体系。

4、综上所述，目前术后疲乏或癌因性疲乏研究的动物模型研究严重滞后，进一步制约了其病理机制和新药的研究。亟需提出一种恶性肿瘤术后疲乏动物模型。

技术实现思路

1、本发明在免疫健全动物中建立肿瘤切除术后状态，通过标准化顺铂给药，形成可重复、可量化的术后疲乏动物模型，基于此，完成了本发明。

2、第一方面，本发明提供一种恶性肿瘤术后疲乏小鼠模型，所述恶性肿瘤术后疲乏小鼠模型先在动物体中建立肿瘤切除术后状态，再通过标准化给药形成可重复、可量化的恶性肿瘤术后疲乏小鼠模型；所述恶性肿瘤术后疲乏小鼠模型制备方法包括如下步骤：

3、s1.选用6-8周龄雄性c57bl/6小鼠，建立右腋下lewis肺癌皮下移植瘤；

4、s2.待瘤体积达500-800 mm3后实施完整肿瘤切除手术，缝合切口；

5、s3.术后第1天和第4天在小鼠腹腔注射顺铂进行诱导；

6、s4.术后第7天造模成功，为恶性肿瘤术后疲乏小鼠模型。

7、进一步，所述步骤s1中右腋下lewis肺癌皮下移植瘤构建方法为在小鼠右腋下注射lewis肺癌细胞悬液，注射量为0.1 ml/只，形成圆形小皮丘。

8、进一步，所述步骤s2中瘤体积为700 mm3。

9、进一步，所述步骤s2中缝合切口使用4-0缝线。

10、进一步，所述步骤s3中注射顺铂的浓度为2 mg/kg。

11、进一步，所述步骤s4中造模成功的小鼠出现精神萎靡、活动减少、运动耐力下降、肝糖原和肌糖原下降等术后疲乏表现。

12、第二方面，本发明提供一种恶性肿瘤术后疲乏动物模型的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

13、s1.选用6-8周龄雄性c57bl/6小鼠，在小鼠右腋下注射lewis肺癌细胞悬液，注射量为0.1 ml/只，形成圆形小皮丘，建立右腋下lewis肺癌皮下移植瘤；

14、s2.待瘤体积达500-800 mm3后实施完整肿瘤切除手术，4-0缝线缝合切口；

15、s3.术后第1天和第4天在小鼠腹腔注射顺铂进行诱导，注射顺铂的浓度为2 mg/kg；

16、s4.术后第7天造模成功，为恶性肿瘤术后疲乏小鼠模型。

17、进一步，所述步骤s2中瘤体积为700 mm3。

18、进一步，所述步骤s4中造模成功的小鼠出现精神萎靡、活动减少、运动耐力下降、肝糖原和肌糖原下降等术后疲乏表现。

19、第三方面，本发明提供恶性肿瘤术后疲乏动物模型在筛选缓解或治疗术后疲乏药物中的用途，通过给药减轻恶性肿瘤术后疲乏动物模型的疲乏程度，筛选出具有缓解或治疗效果的药物，所述恶性肿瘤术后疲乏动物模型制备方法包括如下步骤：

20、s1.选用6-8周龄雄性c57bl/6小鼠，建立右腋下lewis肺癌皮下移植瘤；

21、s2.待瘤体积达500-800 mm3后实施完整肿瘤切除手术，缝合切口；

22、s3.术后第1天和第4天在小鼠腹腔注射顺铂进行诱导；

23、s4.术后第7天造模成功，为恶性肿瘤术后疲乏小鼠模型。

24、进一步，所述步骤s1中右腋下lewis肺癌皮下移植瘤构建方法为在小鼠右腋下注射lewis肺癌细胞悬液，注射量为0.1 ml/只，形成圆形小皮丘。

25、进一步，所述步骤s2中瘤体积为700 mm3。

26、进一步，所述步骤s2中缝合切口使用4-0缝线。

27、进一步，所述步骤s3中注射顺铂的浓度为2 mg/kg。

28、进一步，所述步骤s4中造模成功的小鼠出现精神萎靡、活动减少、运动耐力下降、肝糖原和肌糖原下降等术后疲乏表现。

29、有益效果

30、（1）本发明动物模型临床相似性较好：模型兼具恶性肿瘤切除术后状态和化疗诱导因素，更贴近恶性肿瘤术后疲乏的临床场景。

31、（2）本发明动物模型造模周期短：从术后诱导到造模成功完成模型评价仅需约7天，便于快速获得稳定疲乏表型；从接种、成瘤、手术、诱导到造模成功并完成模型评价的总体实验周期约21天。

32、（3）本发明动物模型发病率高且稳定：模型小鼠在造模后2-7天出现一致的活动减少、运动能力下降和糖原下降，本实施例中模型成功率可达90%以上。

33、（4）本发明动物模型操作简便、可重复性强：关键步骤为皮下瘤切除和两次腹腔注射顺铂，操作流程清晰，适合不同实验室复制。

34、（5）本发明动物模型评价体系完整：联合一般状态、体重、外周运动功能、自主活动能力和组织糖原指标，可用于术后疲乏机制研究、药物筛选和干预策略评价。