莨菪碱作为非洲猪瘟病毒抑制剂的应用的制作方法

本发明属于兽药及抗病毒，具体涉及莨菪碱作为非洲猪瘟病毒抑制剂的应用。

背景技术：

1、非洲猪瘟（african swine fever，asf）是由非洲猪瘟病毒（african swine fevervirus，asfv）引起的，猪以急性、热性、出血性、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病，为世界动物卫生组织法定报告疫病，我国将其列为一类动物病原。目前缺乏能够被广泛使用且安全有效的疫苗，因此主要采用严格的生物安全手段和扑杀来防控该病。2018年asf传入我国以来，给养猪业带来了巨大且持续的经济损失。因此，对于抗asfv药物的开发意义重大。

2、莨菪碱（英文名hyoscyamine）是一种achr抑制剂。体外研究活性：在稳态动力学测量中，l-hyoscyamine使tpase活性的转化数从0.19 min-1增加到2.11 min-1。r-(+)-hyoscyamine导致[3h]nms位移与毒蕈碱乙酰胆碱受体亚型(m1-m5)结合，pki值分别8.67，8.51，7.46，8.56和8.53。在cho细胞中，hyoscyamine防止兴奋剂诱导的camp产生，ec50为7.8 nm。s-(-)-hyoscyamine使小鼠心脏(心房和心室)膜中forskolin刺激的环amp的合成增强24%。体内研究活性：在清醒大鼠体内，l-hyoscyamine (20 毫克/千克)使移行性肌电复合波(mmc)循环周期从17.6分钟延长到29.0分钟。莨菪碱分子式：c17h23no3，相对分子质量：289.37。cas登录号101-31-5，化学结构式如下：

3、

4、目前未见莨菪碱关于非洲猪瘟病毒相关作用的研究和技术公开。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供莨菪碱作为非洲猪瘟病毒抑制剂的应用。

2、为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案予以实现：

3、莨菪碱或其药学上可接受的盐在制备抗非洲猪瘟病毒的药物中的应用。

4、进一步地，所述药物用于抑制非洲猪瘟病毒在宿主细胞中的复制和/或蛋白合成。

5、进一步地，所述药物为以莨菪碱或其药学上可接受的盐为活性成分，并辅以兽药学上可接受的辅料或载体所制成的制剂。

6、进一步地，所述辅料或载体选自稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂中的至少一种。

7、进一步地，所述制剂为注射剂、粉剂、颗粒剂或片剂。

8、进一步地，所述非洲猪瘟病毒为基因ⅱ型非洲猪瘟病毒。

9、进一步地，所述宿主细胞为猪肺泡巨噬细胞。

10、术语解释

11、1.药学上可接受的盐

12、所述“药学上可接受的盐”是指莨菪碱与无机酸或有机酸形成的、在兽医学或药学上可接受的酸加成盐。所述盐保留了莨菪碱的生物活性，且在施用剂量下对宿主动物无毒或低毒。

13、优选地，所述盐包括但不限于：

14、无机酸盐：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐；

15、有机酸盐：醋酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、乳酸盐、苹果酸盐；

16、磺酸盐：甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。

17、2. 宿主细胞

18、所述“宿主细胞”是指非洲猪瘟病毒在体内或体外能够感染并支持其复制的细胞。在本发明中，宿主细胞特指猪源巨噬细胞，尤其是猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolarmacrophages, pams）。非洲猪瘟病毒具有严格的巨噬细胞嗜性，猪肺泡巨噬细胞是asfv在猪体内最主要的天然靶细胞，因此在本发明的体外药效评价中选用pam作为模型细胞。

19、3. 猪肺泡巨噬细胞（pam）

20、所述猪肺泡巨噬细胞来源于健康猪的支气管肺泡灌洗液，经体外贴壁纯化获得。在本发明实施例中，pam细胞培养于含9%胎牛血清的rpmi-1640培养基中，于37℃、5% co2培养箱中培养。

21、4. 兽药学上可接受的辅料或载体

22、所述“兽药学上可接受的辅料或载体”是指在兽药制剂中常规使用的、对靶动物（猪）无毒或低毒、且不影响莨菪碱抗病毒活性的非活性成分。具体包括但不限于：

23、稀释剂：淀粉、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、糊精；

24、粘合剂：羟丙甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠；

25、润滑剂：硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇；

26、崩解剂：交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲淀粉钠；

27、表面活性剂：吐温-80、司盘-80、聚氧乙烯蓖麻油；

28、防腐剂：苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、山梨酸钾；

29、抗氧化剂：维生素c、维生素e、丁基羟基茴香醚（bha）。

30、5. 基因ⅱ型非洲猪瘟病毒

31、所述“基因ⅱ型非洲猪瘟病毒”是指基于asfv b646l基因（编码p72蛋白）序列分型，归属于基因ⅱ型的asfv毒株。本发明实施例中所用asfv为基因ⅱ型毒株，但并不因此限定本发明的保护范围，本发明同样适用于其他基因型（如基因ⅰ型）asfv毒株的抗病毒应用。

32、6. 关于“制剂剂型”

33、所述“注射剂”包括注射液、注射用冻干粉针，给药途径为静脉、肌肉或皮下注射。

34、所述“粉剂”包括拌料粉剂或饮水添加粉剂。

35、所述“颗粒剂”包括可溶性颗粒或混悬颗粒。

36、所述“片剂”包括普通片、分散片、泡腾片或咀嚼片。

37、上述剂型的制备方法均为本领域技术人员公知的常规制剂工艺。

38、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

39、本发明首次揭示了莨菪碱作为非洲猪瘟病毒抑制剂的新用途，具有抗病毒活性强、作用机制明确、细胞毒性低、原料易得、制剂成熟等综合优势，莨菪碱原材料来源广泛、成本低廉、安全可靠，在开发防治非洲猪瘟新药中具有巨大的潜在价值，为非洲猪瘟的临床防控提供了切实可行的新方案，具有较好的应用前景。

1.莨菪碱或其药学上可接受的盐在制备抗非洲猪瘟病毒的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于抑制非洲猪瘟病毒在宿主细胞中的复制和/或蛋白合成。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物为以莨菪碱或其药学上可接受的盐为活性成分，并辅以兽药学上可接受的辅料或载体所制成的制剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述辅料或载体选自稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂中的至少一种。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述制剂为注射剂、粉剂、颗粒剂或片剂。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒为基因ⅱ型非洲猪瘟病毒。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述宿主细胞为猪肺泡巨噬细胞。