重组血清1型马立克氏病病毒的制作方法

本发明涉及动物健康领域。具体而言，本发明涉及一种重组血清1型马立克氏病病毒（rmdv1），其基因组中包含一个表达盒，其中所述表达盒包含新城疫病毒（ndv）的至少一种抗原蛋白的编码序列。此外，本发明提供了一种包含本发明rmdv1的免疫原性组合物以及该免疫原性组合物用于预防和/或治疗动物疾病的用途。

背景技术：

1、马立克氏病病毒（mdv）属于疱疹病毒科（herpesviridae）的α疱疹病毒亚科（alphaherpesvirinae）的马立克病毒属（mardivirus）。该病毒的基因组为双链线性dna，全长约180 kb，编码103种蛋白质。马立克氏病病毒可分为3种血清型。其中，血清型1病毒对鸡宿主具有致病性和致癌性。根据致病性和毒力，该病毒可进一步分为温和型mdv（mmdv）、强毒型mdv（vmdv）、超强毒型mdv（vvmdv）和超强毒+型mdv（vv+mdv）。血清型2马立克氏病病毒无致癌性，血清型3马立克氏病病毒对鸡无致病性。目前用于预防md的疫苗主要是血清型1减毒疫苗，包括荷兰cvi988株（rispens）和中国814株。

2、重组疱疹病毒活载体疫苗是一种经过深入研究的基因工程疫苗，具有广泛的应用前景。其原理是通过基因工程技术将某种病原体的保护性抗原基因插入到病毒载体的非复制必需区域，随着载体的复制，抗原持续表达，诱导机体产生相应的抗体，从而发挥免疫保护作用。重组活病毒疫苗的病毒载体可以自我复制，因此通常较低的剂量即可在体内产生足够的外源蛋白，产生持久且良好的免疫保护。重组病毒载体疫苗不仅可以诱导体液免疫，还可以诱导细胞免疫和黏膜免疫。与传统的灭活疫苗或减毒活疫苗相比，不同的重组病毒已被证明可以显著降低感染后的病毒脱落水平，并减少环境中的病毒载量。

3、对于mdv，血清型3火鸡疱疹病毒（hvt）和血清型1 mdv被认为是构建活载体疫苗的理想载体。这些病毒已被用作载体构建不同的重组病毒。li等人使用mdv 814疫苗株作为载体，成功构建了表达传染性法氏囊病病毒vp2基因的重组mdv。研究表明，该重组病毒安全稳定，能够很好地保护鸡免受马立克氏病和传染性法氏囊病的侵害。

4、新城疫（nd）是一种高度传染性的病毒性疾病，影响着世界各地的家禽和野生鸟类。该疾病由新城疫病毒（ndv）引起，ndv属于副黏病毒科（paramyxoviridae）副黏病毒属（paramyxovirus）。ndv是一种有包膜的、单链、负义、非分段基因组核糖核酸（ssrna）病毒。强毒株可导致全群毁灭。减毒株可引起鸡的呼吸道感染和产蛋量下降，但鸡可快速恢复。ndv在世界各地造成巨大的经济损失，是最有害的禽类病毒性疾病之一。ndv基因组编码六种病毒蛋白：l蛋白（大蛋白）、np（核蛋白）、p蛋白（磷蛋白）、m蛋白（基质蛋白）、hn（血凝素-神经氨酸酶）、f蛋白（融合蛋白）。其中，f蛋白主要参与病毒穿入、细胞融合、溶血等过程，同时具有较强的免疫原性，是制备新城疫疫苗的重要保护性蛋白。

技术实现思路

1、在一个方面，本发明提供了一种重组血清1型马立克氏病病毒（rmdv1），其基因组中包含一个表达盒，其中所述表达盒包含新城疫病毒（ndv）的至少一种抗原多肽的编码序列。

2、在一个方面，本发明提供了一种表达本发明rmdv1的宿主细胞。

3、在一个方面，本发明提供了一种免疫原性组合物，包含本发明的rmdv1，以及可选的药学或兽医学上可接受的载体或赋形剂。

4、在一个方面，本发明提供了本发明的rmdv1在制备用于诱导宿主动物对病原体产生保护性免疫反应的免疫原性组合物中的用途，优选所述动物为禽类，更优选为家禽，如鸡。

5、在一个方面，本发明提供了本发明的rmdv1或本发明的免疫原性组合物用于在宿主动物中诱导对病原体的保护性免疫反应的方法，优选所述动物为禽类，更优选为家禽，如鸡。

6、在一个方面，本发明提供了一种在宿主动物中诱导对病原体的保护性免疫反应的方法，所述方法包括向动物施用本发明的rmdv1或本发明的免疫原性组合物，优选所述动物为禽类，更优选为家禽，如鸡。

1.一种重组血清1型马立克氏病病毒（rmdv1），其基因组中包含表达盒，

2.根据权利要求1所述的重组病毒，其中所述重组病毒源自血清型1 mdv株，优选为减毒的血清型1 mdv株。

3.根据权利要求2所述的重组病毒，其中所述血清型1 mdv株选自：荷兰cvi988株（rispens）、中国814株和sc9-2株。

4.根据权利要求3所述的重组病毒，其中所述重组病毒源自sc9-2株。

5.根据权利要求4所述的重组病毒，其中所述重组病毒源自2023年12月15日保藏于cctcc、保藏号为cctcc no: v2023114的sc9-2株。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的rmdv1，其中所述ndv的至少一种抗原多肽是ndv的f蛋白。

7.根据权利要求6所述的rmdv1，其中所述表达盒包含与启动子，优选sv40启动子可操作地连接的ndv的f蛋白的编码序列。

8.根据权利要求6-7中任一项所述的rmdv1，其中所述f蛋白包含与seq id no:11至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的氨基酸序列。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的rmdv1，其中所述f蛋白的编码序列包含与seq idno:12至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的核苷酸序列。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的rmdv1，其中所述表达盒包含与seq id no:13至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的核苷酸序列。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的rmdv1，其中所述表达盒位于ul55和lorf10之间的位置，或us10和sorf3之间的位置；优选地，所述表达盒位于ul55和lorf10之间的位置。

12.一种免疫原性组合物，包含根据权利要求1-11中任一项所述的重组病毒，以及可选的药学或兽医学上可接受的载体或赋形剂。

13.根据权利要求12所述的免疫原性组合物，其为疫苗，并且可选地包含佐剂。

14.根据权利要求1-11中任一项所述的重组病毒在制备用于诱导宿主动物对病原体的保护性免疫反应的免疫原性组合物中的用途，优选所述动物为禽类，更优选为家禽，如鸡。

15.根据权利要求14所述的用途，其中所述病原体为mdv和/或ndv。

16.根据权利要求1-11中任一项所述的重组病毒或根据权利要求12或13所述的免疫原性组合物，用于在宿主动物中诱导对病原体的保护性免疫反应的方法，优选所述动物为禽类，更优选为家禽，如鸡。

17.根据权利要求16所述的用途的重组病毒或免疫原性组合物，其中所述病原体为mdv和/或ndv。

18.一种在宿主动物中诱导对病原体的保护性免疫反应的方法，所述方法包括向动物施用根据权利要求1-11中任一项所述的重组病毒或根据权利要求12或13所述的免疫原性组合物，优选所述动物为禽类，更优选为家禽，如鸡。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述病原体为mdv和/或ndv。