一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶及其制备方法与流程

本发明属于保健茶，尤其涉及一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶及其制备方法。

背景技术：

1、桑叶（morus alba l.）是桑科桑树属植物的叶片，具有悠久的药用和食用历史。桑叶在《神农本草经》中被称为“神仙叶”，其性寒、味甘苦，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目之功效。现代研究表明，桑叶含有丰富的生物活性成分，包括黄酮类化合物（如芦丁、木犀草素、杨梅素等）、生物碱类（如1-脱氧野尻霉素dnj）、多糖类、多酚类及γ-氨基丁酸等，具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗炎等多种生理功效。其中，1-脱氧野尻霉素（dnj）是一种多羟基哌啶类小分子生物碱，具有良好的降血糖、抗病毒感染等生物活性，是桑叶及其提取物的重要质量指标。

2、然而，传统桑叶茶加工存在诸多技术瓶颈。首先，桑叶中活性成分含量偏低，且受品种、采集季节、种植基地等因素影响显著，导致产品品质不稳定。其次，传统桑叶茶加工多采用高温杀青、炒干、烘干等热加工方法，高温处理会导致桑叶中热敏性活性成分大量流失，无法充分发挥桑叶的保健功效。此外，现有桑叶茶制备方法主要针对成熟桑叶进行直接加工，未能充分挖掘桑叶中干细胞级活性物质的巨大潜力。

3、植物干细胞具有多个小液泡、线粒体活性高、细胞壁无木质素沉积等特点，在悬浮培养过程中大部分以单细胞形式存在，能维持稳定的增殖速度，可长期保持活性。植物干细胞培养技术可在体外规模化生产植物干细胞及其衍生物，减少对野生植株的依赖。然而，目前将桑叶干细胞活性物质与养生茶制备相结合的工艺研究尚属空白。

4、因此，开发一种能够高效富集桑叶干细胞活性物质、同时最大限度保留其生物活性的养生茶制备方法，具有重要的现实意义和市场价值。

技术实现思路

1、本发明针对现有桑叶茶制备方法中活性成分含量低、热敏性成分损失严重、产品品质不稳定等技术问题，提供一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶及其制备方法。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，包括以下步骤：

3、s1：桑叶干细胞诱导与悬浮培养：

4、s11、选取桑树幼嫩叶片、叶柄或茎段作为外植体，经消毒处理后接种于愈伤组织诱导培养基上，于温度24-28℃、暗培养条件下诱导培养15-25天，获得桑叶愈伤组织；

5、s12、将桑叶愈伤组织转移至液体悬浮培养基中，于温度25-27℃、转速100-140rpm、光照强度1500-2500lux、光周期12h光照/12h黑暗的条件下进行悬浮培养，每7-10天继代一次，连续继代培养3-5次，获得性状稳定的桑叶干细胞悬浮培养物；

6、液体悬浮培养基的组成为：ms培养基为基础培养基，添加蔗糖20-40g/l、6-苄氨基嘌呤0.3-1.0mg/l、2,4-二氯苯氧乙酸0.5-1.5mg/l、萘乙酸0.5-1.5mg/l、甲基茉莉酮酸酯0.5-2.0mg/l，ph调节至5.6-5.9。

7、s2：桑叶干细胞活性物质的低温差相萃取：

8、s21、收集s1中悬浮培养至对数生长期的桑叶干细胞培养物，于4℃条件下以8000-12000rpm离心10-20min，收集细胞沉淀；

9、s22、将细胞沉淀重悬于预冷的磷酸盐缓冲液中，采用低温高压微射流破碎处理，破碎压力为80-120mpa，循环处理2-4次，获得细胞破碎液；

10、s23、向细胞破碎液中加入超声辅助低共熔溶剂进行萃取，低共熔溶剂由氯化胆碱和果糖按摩尔比1-2:1组成，低共熔溶剂与细胞破碎液的体积比为1:2-5，于0-4℃条件下超声萃取20-40min，超声功率为200-400w，萃取后离心取上清液，获得桑叶干细胞活性物质萃取液。

11、s3：活性物质的纳米脂质体包埋与稳态化处理：

12、s31、将s2所得桑叶干细胞活性物质萃取液经超滤浓缩至原体积的1/5~1/3，获得活性物质浓缩液；

13、s32、采用薄膜分散法制备纳米脂质体：将大豆卵磷脂和胆固醇按质量比5-10:1溶于无水乙醇中，旋转蒸发成膜后，加入活性物质浓缩液进行水化，依次经高压均质和挤出成型，获得粒径为80-200nm的活性物质纳米脂质体包埋物；

14、s33、将纳米脂质体包埋物与冻干保护剂按质量比1:1-3混合，冻干保护剂为海藻糖和甘露醇按质量比2-3:1的混合物，经冷冻干燥处理，获得活性物质纳米脂质体冻干粉。

15、s4：桑叶基茶坯的低温制备：

16、s41、选取新鲜桑叶，经清水漂洗、沥干后，于-18至-25℃深度冷冻处理12-24h；

17、s42、将深度冷冻后的桑叶置于4℃条件下缓慢解冻，解冻后切丝或切条；

18、s43、将切好的桑叶于40-60℃低温真空干燥至含水量为8%-12%，获得桑叶基茶坯。

19、s5、活性物质负载与成品制备：

20、s51、将s3所得活性物质纳米脂质体冻干粉用纯化水配制成质量分数为1%-5%的复溶液；

21、s52、将s4所得桑叶基茶坯置于流化床包衣设备中，以s51的复溶液作为包衣液进行底喷包衣，包衣液喷速为1-3ml/min，进风温度为30-40℃，包衣至桑叶基茶坯增重5%~15%；

22、s53、将包衣后的桑叶茶坯于25-35℃低温干燥至含水量不超过7%，经充氮包装，即得富含桑叶干细胞活性物质的养生茶成品。

23、与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：

24、（1）本发明首次将桑叶干细胞悬浮培养技术引入养生茶制备领域，通过体外规模化培养桑叶干细胞，实现了桑叶活性物质的可持续、稳定生产，有效规避了传统桑叶原料受品种、季节、产地等因素影响导致品质不稳定的问题。

25、（2）本发明采用低温高压微射流破碎结合超声辅助低共熔溶剂萃取技术，在低温条件下高效破碎桑叶干细胞并萃取其活性物质。低共熔溶剂作为一种新型绿色溶剂，具有溶解能力强、可生物降解等优势，配合低温操作条件，可最大限度保护dnj、黄酮、多糖等热敏性活性成分的生物活性。

26、（3）本发明通过纳米脂质体包埋技术对桑叶干细胞活性物质进行包裹，形成80~200nm的纳米级包埋物，有效解决了活性物质在储存和冲泡过程中易氧化、易降解的问题，显著提高了活性物质的稳定性和生物利用度。

27、（4）本发明采用深度冷冻-缓慢解冻-低温真空干燥的工艺路线处理桑叶基茶坯，替代了传统高温杀青和烘干工序，避免了高温对桑叶基茶坯中天然活性成分的破坏，同时通过冻融处理使桑叶细胞壁破裂，有利于后续活性物质的负载与渗透。

28、（5）本发明采用流化床底喷包衣技术将活性物质纳米脂质体冻干粉均匀负载于桑叶基茶坯表面，包衣层均匀致密，冲泡时活性物质可快速释放，保证了产品的功效一致性。

1.一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s1中，液体悬浮培养基以ms培养基为基础培养基，添加蔗糖20-40g/l、6-苄氨基嘌呤0.3-1.0mg/l、2,4-二氯苯氧乙酸0.5-1.5mg/l、萘乙酸0.5-1.5mg/l、甲基茉莉酮酸酯0.5-2.0mg/l，ph调节至5.6~5.9；

3.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s2中，低共熔溶剂由氯化胆碱和果糖按摩尔比1-2:1组成；低温条件的温度为0-4℃。

4.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s3中，磷脂为大豆卵磷脂，大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为5-10:1；纳米脂质体的粒径为80-200nm。

5.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s2中，低温高压破碎采用低温高压微射流破碎，破碎压力为80-120mpa，循环处理2-4次；超声辅助萃取的功率为200-400w，时间为20-40min。

6.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s3中，冻干保护剂为海藻糖和甘露醇的混合物，纳米脂质体包埋物与冻干保护剂的质量比为1:1-3。

7.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s3中，浓缩采用超滤浓缩至原体积的1/5~1/3；包埋采用薄膜分散法，依次经高压均质和挤出成型。

8.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s4中，深度冷冻处理的温度为-18至-25℃，时间为12-24h；低温真空干燥的温度为40-60℃，干燥至桑叶含水量为8%-12%。

9.根据权利要求1所述的一种富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法，其特征在于：s5中，包衣液的质量分数为1%-5%；流化床包衣采用底喷方式，包衣液喷速为1-3ml/min，进风温度为30-40℃，包衣至桑叶基茶坯增重5%-15%。

10.一种由权利要求1-9任一项所述富含桑叶干细胞活性物质的养生茶制备方法所制备的养生茶。