靶向GPC3和CD47的双特异性抗体的制作方法

技术特征：
1.一种分离的抗cd47抗体或其片段，其具有结合cd47的能力并与sirpa竞争与cd47的结合，优选地具有结合hcd47的能力。2.根据权利要求1所述的分离的抗cd47抗体或其片段，其是人抗cd47抗体或其片段，优选为单克隆人抗cd47抗体或其片段。3.根据权利要求1所述的抗cd47抗体或其片段，其包括：含有重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3的重链可变区，和含有轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3的轻链可变区，其中：hcdr1、hcdr2和hcdr3选自：(1)具有seq id no：1的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：2的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：3的氨基酸序列的hcdr3；(2)具有seq id no：4的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：5的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：6的氨基酸序列的hcdr3；(3)具有seq id no：7的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：8的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：9的氨基酸序列的hcdr3；(4)具有seq id no：10的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：11的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：12的氨基酸序列的hcdr3；(5)具有seq id no：13的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：14的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：15的氨基酸序列的hcdr3；和(6)(1)～(5)中所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3，但其中至少一者包括1、2、3、4或5个氨基酸的添加、缺失、保守氨基酸替换或其组合；并且lcdr1、lcdr2和lcdr3选自：(1)具有seq id no：16的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：17的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：18的氨基酸序列的lcdr3；(2)具有seq id no：19的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：20的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：21的氨基酸序列的lcdr3；(3)具有seq id no：22的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：23的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：24的氨基酸序列的lcdr3；(4)具有seq id no：25的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：26的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：27的氨基酸序列的lcdr3；(5)具有seq id no：28的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：29的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：30的氨基酸序列的lcdr3；和(6)(1)～(5)中所示的lcdr1、lcdr2、lcdr3，但其中至少一者包括1、2、3、4或5个氨基酸的添加、缺失、保守氨基酸替换或其组合。4.根据权利要求1所述的抗cd47抗体或其片段，其包括：含有重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3的重链可变区，和含有轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3的轻链可变区，其中：hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3选自：(1)具有seq id no：1的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：2的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：3的氨基酸序列的hcdr3，具有seq id no：16的氨基酸序列的lcdr1，具有
seq id no：17的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：18的氨基酸序列的lcdr3；(2)具有seq id no：4的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：5的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：6的氨基酸序列的hcdr3，具有seq id no：19的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：20的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：21的氨基酸序列的lcdr3；(3)具有seq id no：7的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：8的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：9的氨基酸序列的hcdr3，具有seq id no：22的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：23的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：24的氨基酸序列的lcdr3；(4)具有seq id no：10的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：11的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：12的氨基酸序列的hcdr3，具有seq id no：25的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：26的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：27的氨基酸序列的lcdr3；(5)具有seq id no：13的氨基酸序列的hcdr1，具有seq id no：14的氨基酸序列的hcdr2，具有seq id no：15的氨基酸序列的hcdr3，具有seq id no：28的氨基酸序列的lcdr1，具有seq id no：29的氨基酸序列的lcdr2，具有seq id no：30的氨基酸序列的lcdr3；和(6)(1)～(5)中所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2、lcdr3，但其中至少一者包括1、2、3、4或5个氨基酸的添加、缺失、保守氨基酸替换或其组合。5.根据权利要求1所述的抗cd47抗体或其片段，其包括重链可变区和轻链可变区，其中，所述重链可变区具有选自seq id no：37～41中示出的氨基酸序列的氨基酸序列，以及与seq id no：37～41中示出的任一氨基酸序列具有至少95％序列同一性并保留表位结合活性的氨基酸序列，其中，所述轻链可变区具有选自seq id no：42～46中示出的氨基酸序列的氨基酸序列，以及与seq id no：42～46中示出的任一氨基酸序列具有至少95％序列同一性并保留表位结合活性的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的抗cd47抗体或其片段，其包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和轻链可变区具有选自下述的氨基酸序列：(1)seq id no：37中所示的氨基酸序列和seq id no：42中所示的氨基酸序列；(2)seq id no：38中所示的氨基酸序列和seq id no：43中所示的氨基酸序列；(3)seq id no：39中所示的氨基酸序列和seq id no：44中所示的氨基酸序列；(4)seq id no：40中所示的氨基酸序列和seq id no：45中所示的氨基酸序列；(5)seq id no：41中所示的氨基酸序列和seq id no：46中所示的氨基酸序列；和(6)分别与(1)～(5)中的任一者具有至少95％序列同一性并保留表位结合活性的两个氨基酸序列。7.一种组合物，其包含权利要求1-6中的任一项所述的抗cd47抗体或其片段和药学上可接受的载体。8.根据权利要求1-6中的任一项所述的抗cd47抗体或其片段或根据权利要求7所述的组合物的用途，其用于在受试者中治疗其中cd47过表达或上调的障碍，优选地所述受试者是需要诊断、预后或治疗的哺乳动物受试者。9.根据权利要求8所述的用途，其中所述障碍是：癌症，包括但不限于实体肿瘤癌症，例
如肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、成胶质细胞瘤、髓母细胞瘤、平滑肌肉瘤、头颈部鳞状细胞癌、黑素瘤；以及液体癌症，例如血液学癌症、白血病、淋巴瘤；脑癌；感染，例如慢性感染；或免疫学疾病或障碍，炎性疾病，包括但不限于多发性硬化症和关节炎。10.一种治疗其中cd47过表达或上调的患者的障碍的方法，所述方法包括向所述患者给药权利要求1-6中的任一项所述的抗cd47抗体或其片段或权利要求7所述的组合物，优选地，所述受试者是需要诊断、预后或治疗的哺乳动物受试者第二方面，本发明涉及一种双特异性抗体或其片段，其具有特异性结合gpc3和cd47两者的能力。优选地，所述双特异性抗体或其片段具有特异性结合hgpc3和hcd47两者的能力。11.一种双特异性抗体，其包含与人gpc3(hgpc3)结合的第一抗原结合部分和与人cd47(hcd47)结合的第二抗原结合部分。12.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其中所述与人gpc3结合的第一抗原结合部分包含：(a)vh结构域，其包含(i)具有seq id no：31的氨基酸序列的hcdr1，(ii)具有seq id no：32的氨基酸序列的hcdr2，和(iii)具有seq id no：33的氨基酸序列的hcdr3；和(b)vl结构域，其包含(i)具有seq id no：34的氨基酸序列的lcdr1，(ii)具有seq id no：35的氨基酸序列的lcdr2，和(iii)具有seq id no：36的氨基酸序列的lcdr3。13.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其中所述与人gpc3结合的第一抗原结合部分包含：(a)vh结构域，其包含seq id no：47的氨基酸序列；和(b)vl结构域，其包含seq id no：48的氨基酸序列。14.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其中所述与人cd47结合的第二抗原结合部分包含：(a)vh结构域，其包含(i)具有seq id no：1的氨基酸序列的hcdr1，(ii)具有seq id no：2的氨基酸序列的hcdr2，和(iii)具有seq id no：3的氨基酸序列的hcdr3；和(b)vl结构域，其包含(i)具有seq id no：16的氨基酸序列的lcdr1，(ii)具有seq id no：17的氨基酸序列的lcdr2，和(iii)具有seq id no：18的氨基酸序列的lcdr3。15.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其中所述与人cd47结合的第一抗原结合部分包含：(a)vh结构域，其包含seq id no：37的氨基酸序列；和(b)vl结构域，其包含seq id no：42的氨基酸序列。16.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体还包含fc区。17.根据权利要求16所述的双特异性抗体，其中所述fc区包含铰链部分、ch3部分和ch2部分。18.根据权利要求16所述的双特异性抗体，其中所述fc区还包含促进异二聚化的结构域，优选地，所述fc区包括允许两条重链异二聚化的杵结构域和臼结构域，优选地，所述杵结构域和所述臼结构域分别位于ch3部分中。19.根据权利要求18所述的双特异性抗体，其中所述杵结构域具有杵突变，并且所述臼结构域具有臼突变，优选地，所述杵突变是t366w和s354c，并且所述臼突变是y407v、l368a、
t366s和y349c。20.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其具有ch1部分和cl部分，优选地，ch1部分和cl部分被相互代替。21.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其包含杵链(hc1链)和臼链(hc2链)，其中所述杵链包含第一抗原结合部分、ch1部分、铰链部分、ch2部分和ch3区，并且所述臼链包含第二抗原结合部分、cl部分、铰链部分、ch2部分和ch3部分，优选地，所述双特异性抗体还包含：lc1部分，其含有vl和cl；和，lc2部分，其含有vl和ch1。22.根据权利要求11所述的双特异性抗体，其包含：具有seq id no：49的氨基酸序列的hc1，具有seq id no：50的氨基酸序列的lc1部分，具有seq id no：51的氨基酸序列的hc2，和具有seq id no：52的氨基酸序列的lc2部分；hc1和hc2通过三个二硫键并以杵入臼的方式互连，并且lc1和lc2通过二硫键分别附连到hc1和hc2。23.根据权利要求11-22中的任一项所述的双特异性抗体的用途，其用于治疗hcc。

技术总结
提供了靶向GPC3和CD47的双特异性抗体。提供了靶向GPC3和CD47的双特异性抗体。


技术研发人员：隋建华 杜凯昕 陈卫 李宇露 刘娟
受保护的技术使用者：北京生命科学研究所
技术研发日：2022.01.05
技术公布日：2023/9/15