一种重组质粒及乙肝病毒全基因组敲入小鼠模型的构建

技术特征：
1.一种hbv全基因组1.3倍体重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的核苷酸序列为seq id no.10。2.权利要求1所述的hbv全基因组1.3倍体重组质粒在筛选hbv耐药位点、研究hbv耐药机制、构建hbv小鼠模型中的应用。3.权利要求1所述的hbv全基因组1.3倍体重组质粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、在hbv基因组nt202与nt203位点之间引入lsl表达盒，所述lsl表达盒包含三个终止信号bgh polya、sv40 polya和tk polya，所述lsl表达盒子的核苷酸序列两端为loxp；s2、在lsl表达盒第一个loxp与终止信号位点之间引入hdv genomic ribozyme-mirna122 target-hdv antigenomic ribozyme序列，其中，所述mirna122 target为5个重复；s3、在lsl表达盒两侧分别添加来自pci-neo载体的5’端内含子和3’端内含子。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述pci-neo载体的5’端内含子的核苷酸序列为seq id no.1。5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述pci-neo载体的3’端内含子的核苷酸序列为seq id no.2。6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述loxp的核苷酸序列为seq id no.3。7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述mirna122 target的核苷酸序列为seq id no.4。8.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述hdv genomic ribozyme的核苷酸序列为seq id no.5。9.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述hdv antigenomic ribozyme的核苷酸序列为seq id no.6。10.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述bgh polya的核苷酸序列为seq id no.7。11.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述sv40 polya的核苷酸序列为seq id no.8。12.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述tk polya核苷酸序列为seq id no.9。13.一种具备正常免疫能力的乙肝病毒全基因组敲入小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：r1、获取权利要求1所述的hbv全基因组1.3倍体重组质粒；r2、将hbv全基因组1.3倍体重组质粒通过同源重组的方法敲入小鼠；r3、将步骤r2获得的小鼠与albcreer
t2
小鼠配繁获得双转基因小鼠。14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，步骤r1包括权利要求3-9任意一项所述的方法。15.一种小鼠hbv感染模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：向权利要求10或11的方法获得的双转基因小鼠模型施加hbv基因表达诱导剂。16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述hbv基因表达诱导剂包括他莫西芬。17.如权利要求15所述的方法，其特征在于，婴幼期的双转基因小鼠单次或短时间多次
注射hbv基因表达诱导剂，可建立hbv中枢免疫耐受模型。18.如权利要求15所述的方法，其特征在于，成年期的双转基因小鼠单次或短时间多次注射hbv基因表达诱导剂，可建立急性hbv感染模型。19.如权利要求16所述的方法，其特征在于，成年期的双转基因小鼠持续注射hbv基因表达诱导剂，可首先建立急性感染，随着免疫系统耗竭进而建立慢性hbv感染模型。

技术总结
本发明公开了一种重组质粒及乙肝病毒全基因组敲入小鼠模型的构建。本发明首先构建了HBV全基因组1.3倍体重组质粒，可应用于筛选HBV耐药位点、研究HBV耐药机制、构建HBV小鼠模型等。本发明还建立了一种具备正常免疫能力的乙肝病毒全基因组敲入小鼠模型，该小鼠与AlbCreERT2配繁得到双转基因小鼠，通过调整他莫西芬给药方案以及受试双转基因小鼠年龄，可模拟HBV感染自然史的不同阶段。因此该模型可用于急性感染宿主免疫系统如何清除HBV以及慢性感染HBV如何导致宿主免疫系统耐受与耗竭等问题的基础研究，亦可以用于开发和评估治愈乙肝新型药物的应用研究。总之，该模型的建立为解析乙肝病毒感染自然史各期宿主免疫全景以开发治愈乙肝免疫治疗手段打下了坚实的基础。开发治愈乙肝免疫治疗手段打下了坚实的基础。开发治愈乙肝免疫治疗手段打下了坚实的基础。


技术研发人员：李建华 金程萌 袁正宏
受保护的技术使用者：复旦大学
技术研发日：2023.02.03
技术公布日：2023/9/7