一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法与流程

1.本发明涉及食品加工技术领域，尤其是涉及一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法。


背景技术：

2.板栗属于栗属类植物，营养价值高，板栗仁中含有蛋白质、脂肪、淀粉、糖以及多种维生素。唐代孙思邈称“栗，肾之果也，肾病宜食之”，医学家李时珍在《本草纲目》中说到：“食栗子可以益气血、养胃、补肾、健肝脾。生食还有治舒筋活络的功效。”目前，板栗产品主要集中在糖炒板栗和甘栗仁等，精深加工产品较少。由于其淀粉含量高达干基含量的60％以上，其相关制品易因淀粉老化导致产品质量和口感变差，若将其加工成板栗饮料，淀粉的回生现象会导致产品出现沉淀，制约了板栗饮品的开发。
3.多酚化合物可与板栗淀粉相互作用，抑制淀粉间的聚合，减缓淀粉凝沉，使淀粉在短期老化过程中透光率降低的趋势逐渐减缓；且可使淀粉吸水性减弱、凝胶强度明显降低、糊化性质发生变化、短程有序性降低，从而起到减弱淀粉的重结晶能力、减缓淀粉回生的作用。此外，多酚化合物还具有较高的体外抗氧化活性和抑菌活性。然而，多酚脂溶性较差，而且在潮湿、光照和高温等条件下极易发生氧化、聚合和缩合等反应，导致其结构中酚羟基变成醌，从而降低其生物利用率。同时，在消化过程中，多酚的结构也容易被破坏导致生物活性降低，生物利用率低。这是由于消化液中的消化酶会破坏它们的结构稳定性。而多酚类化合物主要被小肠上皮细胞吸收，进入消化道后多酚的结构遭到破坏，从而降低其在体内的抗氧化活性和生物利用度。这些极大地限制其在食品及工业中的应用。
4.脂质体具有良好的生物相容性、可降解性、缓释性及靶向性，可有效提高载物的稳定性和生物利用度，已成为一种广泛使用的营养物新剂型的载体。在食品领域已用于维生素、矿物质、feso4等营养物的新型输送载体的研究，显示了良好的应用前景。将多酚制成脂质体的形式可使其生理功能得到发挥。然而，目前常用的脂质体制备方法包括逆相蒸发法、薄膜法、超声法、熔融法、冻融法等这些方法由于不可避免地使用了大量有毒有机溶剂及难以满足工业化大规模生产的要求而不适用于食品工业。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于克服上述技术不足，提出一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，解决现有技术中将多酚制成脂质体需使用有毒有机溶剂、无法适用于食品工业的技术问题。
6.本发明提供了一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，包括以下步骤：
7.将脂质膜材和可选的魔芋葡甘聚糖加入板栗乳中，搅拌至体系均一后，加入多酚，继续搅拌至体系稳定、无肉眼可见悬浮物，得到含酚脂质体。
8.与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
9.本发明通过将多酚包裹于脂质体中，可避免多酚化合物在消化道被破坏以提高小
肠的吸收效率，同时未包封的多酚均匀分散于板栗乳中，可减弱板栗乳中淀粉老化、回生引起的沉降现象，提高产品稳定性；多酚在脂类物质和板栗乳中淀粉的双重保护下，生物利用率显著提高；本发明在改善板栗饮品体系的稳定性及口感等问题的同时引入多具有抗氧化、清除自由基、降血脂等功能的多酚，丰富了板栗饮品的功能特性；本发明的含酚脂质体的制备方法不使用有毒有机溶剂，不使用添加剂，得到的复合脂质体纯天然无污染，能够适用于食品工业。
附图说明
10.图1为实施例1～5制备所得信阳毛尖粗提物的对比图；
11.图2为实施例6、8制备所得样品以及纯板栗乳的对比图。
具体实施方式
12.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
13.本发明提供了一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，包括以下步骤：
14.将脂质膜材和可选的魔芋葡甘聚糖加入板栗乳中，搅拌至体系均一后，加入多酚，继续搅拌至体系稳定、无肉眼可见悬浮物，得到含酚脂质体。
15.本领域技术人员均知，脂质膜材不溶于水，因此无法直接将多酚和脂质膜材在水中混合形成脂质体。试验过程中，发明人惊奇地发现，通过先将脂质膜材加入板栗乳中搅拌均匀，随后加入多酚继续搅拌均匀，能够成功制备出含酚脂质体。本发明的制备方法不使用有毒有机溶剂，不使用添加剂，得到的复合脂质体纯天然无污染。
16.本发明中，加入多酚可以减弱板栗乳中淀粉的重结晶能力，从而减缓板栗乳在存放过程中由于淀粉回生而出现的沉淀现象，产品稳定性显著提高，此外，含酚板栗乳饮品透明度升高，产品更为清澈；另一方面，多酚具有很强的抗氧化活性，通过脂质体包裹方式其更易分散于板栗乳中，多酚在脂质膜材和板栗乳中淀粉的双重保护下，在胃中的保存率显著提高，使其具有更高的生物利用率。
17.本发明中，板栗乳的固含量为1wt％～30wt％，进一步为2wt％～10wt％，更进一步为5wt％～6wt％。
18.本发明中，脂质膜材为卵磷脂或胆固醇中的至少一种。
19.本发明中，板栗乳与脂质膜材的用量比为100ml：(0.5～1)g，进一步为100ml：(0.6～0.8)g。
20.本发明中，板栗乳与多酚的用量比为100ml：(100～300)mg，进一步为100ml：(150～200)mg。
21.本发明中，板栗乳与魔芋葡甘聚糖的用量比为100ml：(0.01～0.2)mg，进一步为100ml：(0.08～0.12)mg。魔芋葡甘聚糖(kgm)具有乳化、增稠的作用，通过加入魔芋葡甘聚糖能使板栗饮品体系趋于稳定。
22.本发明中，搅拌的温度为40～50℃。
23.本发明中，板栗乳可一次性加入体系中，也可先加入部分形成含酚脂质体后继续
加入剩余板栗乳，本发明对此不作限制。
24.在本发明的一些具体实施方式中，多酚以茶叶提取物的方式加入板栗乳中。
25.在本发明的一些更具体实施方式中，茶叶提取物通过将信阳毛尖加入水中，搅拌使茶叶全部浸入，随后在60～80℃反应20～40min，再置于室温反应20～40min，经抽滤、滤液旋转蒸发、冷冻干燥得到；其中，水的温度为60～80℃，料液比为1g：(20～140)ml，进一步为1g：100ml；抽滤后得到的茶叶还可进行多次提取以提高多酚的提取率。
26.在本发明的一些更具体实施方式中，上述基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，包括以下步骤：
27.在搅拌的条件下，将脂质膜材和可选的魔芋葡甘聚糖加入板栗乳中，搅拌至完全溶解后，加入茶叶提取物分散液，继续搅拌至体系稳定、无肉眼可见悬浮物，得到含酚脂质体。该过程中，茶叶提取物分散液中多酚的浓度为10～100mg/ml，进一步为30～40mg/ml；茶叶提取物分散液通过将茶叶提取物加入水中，分散均匀后，离心去除不溶物得到。
28.实施例1
29.一种从茶叶中提取多酚的方法，包括以下步骤：
30.(1)室温下，将信阳毛尖放入200ml锥形瓶中，按料液比为1：140(g/ml)加入70℃超纯水，搅拌使茶叶全部浸入。
31.(2)将步骤(1)所得样品放入70℃的恒温水浴锅中反应30min，置于室温反应30min。
32.(3)将步骤(2)所得第一道提取液进行真空抽滤。滤液使用旋转蒸发仪旋转蒸发至10～20ml后放置于冰箱冷冻至完全冻紧。
33.(4)将步骤(3)所得样品快速转移至冷冻干燥机里冷冻干燥(2～3天)，直至得到粉末状样品。
34.(5)将步骤(4)所得粉末状样品称量后放入样品袋进行避光干燥保存。
35.实施例2
36.一种从茶叶中提取多酚的方法，包括以下步骤：
37.(1)室温下，将信阳毛尖放入200ml锥形瓶中，按料液比为1：100(g/ml)加入70℃超纯水，搅拌使茶叶全部浸入。
38.(2)将步骤(1)所得样品放入70℃的恒温水浴锅中反应30min，置于室温反应30min。
39.(3)将步骤(2)所得第一道提取液进行真空抽滤。滤液使用旋转蒸发仪旋转蒸发至10～20ml后放置于冰箱冷冻至完全冻紧。
40.(4)将步骤(3)所得样品快速转移至冷冻干燥机里冷冻干燥(2～3天)，直至得到粉末状样品。
41.(5)将步骤(4)所得粉末状样品称量后放入样品袋进行避光干燥保存。
42.实施例3
43.一种从茶叶中提取多酚的方法，包括以下步骤：
44.(1)室温下，将信阳毛尖放入200ml锥形瓶中，按料液比为1：60(g/ml)加入70℃超纯水，搅拌使茶叶全部浸入。
45.(2)将步骤(1)所得样品放入70℃的恒温水浴锅中反应30min，置于室温反应
30min。
46.(3)将步骤(2)所得第一道提取液进行真空抽滤。滤液使用旋转蒸发仪旋转蒸发至10～20ml后放置于冰箱冷冻至完全冻紧。
47.(4)将步骤(3)所得样品快速转移至冷冻干燥机里冷冻干燥(2～3天)，直至得到粉末状样品。
48.(5)将步骤(4)所得粉末状样品称量后放入样品袋进行避光干燥保存。
49.实施例4
50.一种从茶叶中提取多酚的方法，包括以下步骤：
51.(1)室温下，将信阳毛尖放入200ml锥形瓶中，按料液比为1：20(g/ml)加入70℃超纯水，搅拌使茶叶全部浸入。
52.(2)将步骤(1)所得样品放入70℃的恒温水浴锅中反应30min，置于室温反应30min。
53.(3)将步骤(2)所得第一道提取液进行真空抽滤。滤液使用旋转蒸发仪旋转蒸发至10～20ml后放置于冰箱冷冻至完全冻紧。
54.(4)将步骤(3)所得样品快速转移至冷冻干燥机里冷冻干燥(2～3天)，直至得到粉末状样品。
55.(5)将步骤(4)所得粉末状样品称量后放入样品袋进行避光干燥保存。
56.实施例5
57.(1)室温下，将实施例1～4中真空抽滤所得茶叶分别放入200ml锥形瓶中，按料液比分别为1：140、1：100、1：60、1：20(g/ml)加入70℃超纯水，搅拌使茶叶全部浸入。
58.(2)将步骤(1)所得样品放入70℃的恒温水浴锅中反应30min，置于室温反应30min。
59.(3)将步骤(2)所得第一道提取液进行真空抽滤。滤液使用旋转蒸发仪旋转蒸发至10～20ml后放置于冰箱冷冻至完全冻紧。
60.(4)将步骤(3)所得样品快速转移至冷冻干燥机里冷冻干燥(2～3天)，直至得到粉末状样品。
61.(5)将步骤(4)所得粉末状样品称量后放入样品袋进行避光干燥保存。
62.实施例6
63.一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，包括以下步骤：
64.(1)室温下，精确称取0.5g实施例2中所得粉末状样品复溶于5ml超纯水中，充分混匀后超声15min。
65.(2)将步骤(1)所得样液悬浮液离心(5000
×
g，10min)以除去不溶的残渣，获得样液4℃冰箱贮藏备用。
66.(3)准确量取90ml购于河南信阳多栗多绿色食品有限公司的板栗汁(固含量5.7wt％)于200ml锥形瓶中。
67.(4)将步骤(3)所得样品置于磁力搅拌器上，转速保持在550rpm。
68.(5)向步骤(4)所得样品中加入0.7g卵磷脂，45℃搅拌至卵磷脂完全溶解。
69.(6)向步骤(5)中加入步骤(2)所得溶液，随后加入剩余板栗汁使体系凹液面与100ml刻度线平齐。
70.(7)将步骤(6)所得样品继续45℃搅拌加热至体系均一、无肉眼可见悬浮物，即得到总酚含量为172mg/100ml的复合脂质体。
71.实施例7
72.一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，包括以下步骤：
73.(1)室温下，精确称取0.5g实施例2中所得粉末状样品复溶于5ml超纯水中，充分混匀后超声15min。
74.(2)将步骤(1)所得样液悬浮液离心(5000
×
g，10min)以除去不溶的残渣，获得样液4℃冰箱贮藏备用。
75.(3)准确量取90ml购于河南信阳多栗多绿色食品有限公司的板栗汁(固含量5.7wt％)于200ml锥形瓶中。
76.(4)将步骤(3)所得样品置于磁力搅拌器上，转速保持在550rpm。
77.(5)向步骤(4)所得样品中加入0.7g胆固醇，45℃搅拌至胆固醇完全溶解。
78.(6)向步骤(5)中加入步骤(2)所得溶液，随后加入剩余板栗汁使体系凹液面与100ml刻度线平齐。
79.(7)将步骤(6)所得样品继续45℃搅拌加热至体系均一、无肉眼可见悬浮物，即得到总酚含量为172mg/100ml的复合脂质体。
80.实施例8
81.一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，包括以下步骤：
82.(1)室温下，精确称取0.5g实施例2中所得粉末状样品复溶于5ml超纯水中，充分混匀后超声15min。
83.(2)将步骤(1)所得样液悬浮液离心(5000
×
g，10min)以除去不溶的残渣，获得样液4℃冰箱贮藏备用。
84.(3)准确量取90ml购于河南信阳多栗多绿色食品有限公司的板栗汁(固含量5.7wt％)于200ml锥形瓶中。
85.(4)将步骤(3)所得样品置于磁力搅拌器上，转速保持在550rpm。
86.(5)向步骤(4)所得样品中加入0.7g卵磷脂与0.1mg魔芋葡甘聚糖(kgm)，45℃搅拌至卵磷脂与kgm完全溶解。
87.(6)向步骤(5)中加入步骤(2)所得溶液，随后加入剩余板栗汁使体系凹液面与100ml刻度线平齐。
88.(7)将步骤(6)所得样品继续45℃搅拌加热至体系均一、无肉眼可见悬浮物，即得到总酚含量为172mg/100ml的复合脂质体。
89.实施例9
90.一种基于板栗乳的含酚脂质体的制备方法，包括以下步骤：
91.(1)室温下，精确称取0.5g实施例2中所得粉末状样品复溶于5ml超纯水中，充分混匀后超声15min。
92.(2)将步骤(1)所得样液悬浮液离心(5000
×
g，10min)以除去不溶的残渣，获得样液4℃冰箱贮藏备用。
93.(3)准确量取90ml购于河南信阳多栗多绿色食品有限公司的板栗汁(固含量5.7wt％)于200ml锥形瓶中。
94.(4)将步骤(3)所得样品置于磁力搅拌器上，转速保持在550rpm。
95.(5)向步骤(4)所得样品中加入0.7g胆固醇与0.1mg魔芋葡甘聚糖(kgm)，45℃搅拌至胆固醇与kgm完全溶解。
96.(6)向步骤(5)中加入步骤(2)所得溶液，随后加入剩余板栗汁使体系凹液面与100ml刻度线平齐。
97.(7)将步骤(6)所得样品继续45℃搅拌加热至体系均一、无肉眼可见悬浮物，即得到总酚含量为172mg/100ml的复合脂质体。
98.试验组1
99.对实施例1～5的提取物进行测试，结果见图1和表1。
100.表1信阳毛尖提取率与总酚含量测定结果
[0101][0102]
请参阅图1，图1中左为四个料液比第一次浸提所得冻干粉样品，右为第二次浸提所得冻干粉样品。结果表明，二次提取可增加茶叶中总酚的提取率。
[0103]
请参阅表1，通过表1可以看出，茶叶第一次浸提的得率和总酚含量都高于第二次浸提，且第二次浸提所得总酚含量仅为第一次浸提总酚含量的1/4。在第一次浸提中，料液比为1：60的实验组得率最高，但料液比为1：100的实验组总酚含量最高。第二次浸提中料液比为1：20的实验组得率最高，但仍是料液比为1：100的实验组总酚含量最高。综上，茶叶中总酚提取料液比1：100进行两次提取较为适宜。
[0104]
试验组2
[0105]
对上述实施例6和8制备的样品进行稳定性测试，以纯板栗乳作为空白对照。
[0106]
请参阅图2，图2中，左为实施例8制得的复合脂质体样品；中为实施例6制得的复合脂质体样品；右为不加任何东西的板栗乳。实验结果表明：实施例6和8制备所得样品体系均一、无肉眼可见悬浮物，并且实施例8制备所得样品体系更浓稠，说明kgm使得体系黏度升高，有利于进一步提高稳定性。
[0107]
试验组3
[0108]
对不同样品进行模拟体外消化实验，通过模拟与人体胃消化液功能相似的人工消化液，对不同样品体系中多酚在模拟消化液中的保存率进行测定，测试结果见表2，步骤如下：
[0109]
胃消化液的配制：
[0110]
(1)nacl溶液：取2.25g nacl，用蒸馏水定容至250ml；
[0111]
(2)胃蛋白酶溶液：取0.4g胃蛋白酶，用90mlnacl溶液溶解，测得ph为6.15；加入0.5mol/l的hcl溶液调胃蛋白酶溶液的ph为2-2.3；通过反复加入nacl溶液与hcl溶液使胃蛋白酶溶液保持ph在2-2.3的范围内定容至100ml。
[0112]
体外消化实验：
[0113]
实验1：取2ml实施例6所得复合脂质体体系、8ml胃消化液于离心管中混匀，避光反应2h，4000r离心10min，用福林酚法测消化前后总酚含量。采用板栗乳和卵磷脂混合所得空白脂质体做对照，以便在测吸光度时调零，扣除背景体系对吸光度带来的误差。
[0114]
实验2：将0.5g实施例2所得粉末状样品加入100ml板栗乳中，获得板栗乳-多酚复合体系；取2ml板栗乳-多酚复合体系、8ml胃消化液于离心管中混匀，避光反应2h，4000r离心10min，用福林酚法测消化前后总酚含量。采用纯板栗乳作对照，以便在测吸光度时调零，扣除背景体系对吸光度带来的误差。
[0115]
实验3：将0.5g实施例2所得粉末状样品溶解在100ml超纯水中，获得多酚提取物分散液；取2ml多酚提取物分散液、8ml胃消化液于离心管中混匀，避光反应2h，4000r离心10min，用福林酚法测消化前后总酚含量。采用超纯水作对照，以便在测吸光度时调零，扣除背景体系对吸光度带来的误差。
[0116]
表2总酚在胃液中的保存率
[0117][0118]
请参阅表2，表2为不同样品进行模拟体外消化实验所得多酚的保存率结果。结果表明，多酚加入板栗乳体系中，胃保存率可从6.3％提升至13.7％，进一步被卵磷脂包裹后，其在胃保存率从13.7％增加至34.2％，使其生物利用率得到显著提高。
[0119]
以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所做出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。