一种益生菌组合物、制剂及其应用的制作方法

1.本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种益生菌组合物、制剂及其应用。


背景技术：

2.益生菌（probiotics）是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥对肠道有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。 目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。
3.随着压力和生活方式的变化，许多人三餐不规律，经常熬夜、喝酒，致使身体出现胃肠部不适，体内菌群失衡，引起胃病和肥胖等，给生活和工作带来不便。为了改善这些亚健康人群的健康状况，调节肠道健康，益生菌产品应用而生。但是，因为益生菌是适合在低温环境中保存的菌种，且人体的消化道环境复杂，在经过胃酸、胆汁等环境后依然能存活的菌株才能到达大肠发挥其功效，因此，如何保持益生菌的体内体外活性一直是研究的难点和重点。


技术实现要素：

4.为了解决现有技术中益生菌产品菌株活性难以保持的问题，本发明的目的一在于提供一种益生菌组合物，目的二在于提供包含上述益生菌组合物的制剂，目的三在于提供大豆蛋白肽在维持益生菌体内体外活性方面的应用，目的四在于提供上述益生菌组合物或制剂在制备用于调理肠道菌群的保健品、食品或药品中的应用。
5.本发明采用的具体方案为：第一方面，一种益生菌组合物，按照质量份数计，包括8-10份大豆蛋白肽和46-66份益生菌混粉；所述益生菌混粉，按照质量份数计，包括乳酸菌10-12份、嗜酸乳杆菌8-10份、乳双歧杆菌6-8份、长双歧杆菌3-5份、鼠李糖乳杆菌3-5份、植物乳杆菌3-5份、乳酸片球菌6-8份、青春双歧杆菌3-5份、婴儿双歧杆菌1-3份和两歧双歧杆菌3-5份。
6.优选地，所述大豆蛋白肽，采用以下步骤制备所得：步骤一、将原料大豆分离蛋白粉碎、过筛，制得100目以下的细粉；步骤二、向步骤一所得细粉中加水并溶解，所述细粉与水的质量比为1:15~17，得混合液ⅰ；步骤三、将步骤二所得混合液ⅰ在4000-5000rpm转速下处理至少5次，每次30s，每次间隔10s；然后在4℃、150-180mpa压力下循环两次进行高压均质处理，得混合液ⅱ；步骤四、调节步骤三所得混合液ⅱ的ph为5-6，加入混合酶，所述混合酶的加入量为细粉质量的0.2
‰‑
0.3
‰
，然后进行酶解处理，得酶解液；所述混合酶为风味蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按照4-6:1-3:9-10的质量比混合所得。
7.步骤五、将步骤四所得酶解液过滤、浓缩、干燥、粉碎，得大豆蛋白肽。
8.更进一步地，步骤四中，所述混合酶为风味蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按照5:2:9的质量比混合所得。
9.优选地，所述益生菌组合物，还包括5-6份乳糖醇、3-4份低聚木糖、3-4份水苏糖、5-6份草莓粉和5-6份甜菜根粉。
10.优选地，每克所述益生菌混粉中，活菌数150-170亿。
11.第二方面，包含上述益生菌组合物的制剂。进一步地，所述制剂为胶囊、片剂或颗粒剂。
12.优选地，所述制剂为一种固体饮料，采用以下步骤制备所得：按照上述质量配比进行配料，经粉碎混合后进行制粒，然后烘干至水分≤7%，冷却后制得。
13.第三方面，大豆蛋白肽在维持益生菌体内体外活性方面的应用。
14.第四方面，益生菌组合物或制剂在制备用于调理肠道菌群的保健品、食品或药品中的应用。
15.有益效果：本发明一种益生菌组合物，采用多种菌种与大豆蛋白肽进行复配，可以有效延长所制备的益生菌制剂的保存期，提高益生菌在体内体外的存活率，有利于益生菌在体内的有效繁殖，同时，益生菌组合物中还包含低聚木糖、乳糖醇等益生元和草莓粉、甜菜根粉等原料成分，通过协同作用助力于肠道消化，维持肠道菌群平衡，改善肠道健康。
附图说明
16.图1是固体饮料的生产工艺流程图；图2是固体饮料产品的安全检测结果图。
具体实施方式
17.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
18.原料：大豆分离蛋白（含量90%），临沂山松生物制品有限公司。风味蛋白酶（酶活19万u/g，novozyme）、胃蛋白酶（3000~10000nf/mg, 南宁庞博生物工程有限公司），胰蛋白酶（酶活0.3万u/g，sigma）。
19.嗜酸乳杆菌la85、乳双歧杆菌bla80、长双歧杆菌bl21、鼠李糖乳杆菌lra05、植物乳杆菌n13、乳酸片球菌ccfm7902。
20.其他如未特别声明，下述实施例中所用试剂均为常规市售试剂，所用操作手段均为常规技术手段。
21.所述大豆蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：步骤一、将原料大豆分离蛋白粉碎、过筛，制得100目以下的细粉；步骤二、向步骤一所得细粉中加水并溶解，所述细粉与水的质量比为1:15~17，得混合液ⅰ；步骤三、将步骤二所得混合液ⅰ在4000-5000rpm转速下处理至少5次，每次30s，每次间隔10s；然后在4℃、150-180mpa压力下循环两次进行高压均质处理，得混合液ⅱ；步骤四、调节步骤三所得混合液ⅱ的ph为5-6，加入混合酶，所述混合酶的加入量为细粉质量的0.2
‰
，然后进行酶解处理，得酶解液；所述混合酶为风味蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按照5:2:9的质量比混合所得。
22.步骤五、将步骤四所得酶解液过滤、浓缩、干燥、粉碎，得大豆蛋白肽。
23.采用上述制备方法制备的大豆蛋白肽，平均水解度在15.4%，具有较强的抗氧化活性。
24.实施例1一种益生菌组合物，按照质量份数计，包括8份大豆蛋白肽和63份益生菌混粉；所述益生菌混粉，按照质量份数计，包括乳酸菌12份、嗜酸乳杆菌10份、乳双歧杆菌8份、长双歧杆菌3份、鼠李糖乳杆菌5份、植物乳杆菌5份、乳酸片球菌7份、青春双歧杆菌5份、婴儿双歧杆菌3份和两歧双歧杆菌5份。
25.对照例1一种益生菌组合物，按照质量份数计，包括乳酸菌12份、嗜酸乳杆菌10份、乳双歧杆菌8份、长双歧杆菌3份、鼠李糖乳杆菌5份、植物乳杆菌5份、乳酸片球菌7份、青春双歧杆菌5份、婴儿双歧杆菌3份和两歧双歧杆菌5份。
26.实施例2一种益生菌组合物，按照质量份数计，包括10份大豆蛋白肽和54份益生菌混粉；所述益生菌混粉，按照质量份数计，包括乳酸菌10份、嗜酸乳杆菌9份、乳双歧杆菌6份、长双歧杆菌5份、鼠李糖乳杆菌4份、植物乳杆菌4份、乳酸片球菌8份、青春双歧杆菌3份、婴儿双歧杆菌2份和两歧双歧杆菌3份。
27.对照例2一种益生菌组合物，按照质量份数计，包括乳酸菌10份、嗜酸乳杆菌9份、乳双歧杆菌6份、长双歧杆菌5份、鼠李糖乳杆菌4份、植物乳杆菌4份、乳酸片球菌8份、青春双歧杆菌3份、婴儿双歧杆菌2份和两歧双歧杆菌3份。
28.实施例3与实施例1所述的益生菌组合物的配方基本相同，不同之处在于：还包括5份乳糖醇、3份低聚木糖、3份水苏糖、5份草莓粉和5.5份甜菜根粉。
29.对照例3与实施例3基本相同，不同之处在于：不包含乳糖醇。
30.实施例4与实施例1所述的益生菌组合物的配方基本相同，不同之处在于：还包括6份乳糖醇、4份低聚木糖、3.5份水苏糖、6份草莓粉和6份甜菜根粉。
31.对照例4与实施例4基本相同，不同之处在于：不包含低聚木糖。
32.实施例5与实施例1所述的益生菌组合物的配方基本相同，不同之处在于：还包括6份乳糖醇、3.5份低聚木糖、4份水苏糖、5.5份草莓粉和5份甜菜根粉。
33.对照例5与实施例5基本相同，不同之处在于：不包含甜菜根粉。
34.将上述实施例1-5和对照例1-5所述的益生菌组合物制备成颗粒性制剂，如固体饮料，制备工艺如图1所示，具体为：原辅料
‑‑
配料
‑‑
粉碎
‑‑‑
混合
‑‑
制粒
‑‑‑
烘干
‑‑‑
冷却
‑‑‑
筛理
‑‑‑
包装
‑‑‑‑
检验
‑‑‑
入库。进行检测，结果如图2所示，表明产品安全，符合国家标准，
可用于调节调节肠道菌群，改善肠道健康。
35.取实施例1-5和对照例1-5所述的益生菌组合物，进行体外存活率及对体内肠道菌群的影响进行评析。
36.体外活菌数存活率测定时是将样品分别存放于温度为37
±
2℃，湿度为75
±
5％的环境中，然后分别于第0天、45天、90天和120天，对活菌数进行统计，计算存活率，结果见表1。
37.表1 活菌数存活率。
组别第0天活菌数/(cfu/g)45天存活率/％90天存活率/％120天存活率/％实施例11.54
×
10
10
847956实施例21.63
×
10
10
898263实施例31.72
×
10
10
907869实施例41.66
×
10
10
918871实施例51.62
×
10
10
858765对比例11.58
×
10
10
635337对比例21.53
×
10
10
685944对比例31.61
×
10
10
877761对比例41.74
×
10
10
827266对比例51.76
×
10
10
868064
38.根据表1可知，实施例1-2与对照例1-2相比，存活率明显有所提升，说明大豆蛋白肽可以适当延长益生菌的保存期。其他如乳糖醇、低聚木糖、水苏糖、草莓粉和甜菜根粉度在体外对益生菌的存活率没有明显影响。
[0039] 测定益生菌制剂对体内肠道菌群的影响时，进行动物试验，具体如下：取小鼠50只，雌雄各半，体重18-22g，正常饲喂一周，然后随机分为10组，每组5只，使用实施例1-5和对比例1-5的益生菌制剂饲喂，以正常饲料饲喂为空白对照组，0.5g/只，早晚各一次，4周后收集盲肠内容物，以嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌和长双歧杆菌为测定目标，采用涂布法计数，测定每克盲肠内容物中上述菌的数量，结果如表2所示。
[0040]
表2组别嗜酸乳杆菌（cfu/g）乳双歧杆菌（cfu/g）长双歧杆菌（cfu/g）实施例14.435.565.43实施例25.635.345.15实施例37.856.986.45实施例46.997.006.83实施例56.247.246.25对照例12.164.223.45对照例23.483.175.67对照例35.435.985.88对照例44.896.455.34对照例56.456.576.07ck1.421.351.78
通过上表可知，实施例1-2与对比例1-2相比，各菌数量有所提升，说明大豆蛋白肽可以在一定程度上保护益生菌免收胃酸等体内复杂环境的影响从而使得益生菌以较高的存活率作用于机体，其他益生元或原料成分也对益生菌制剂起到积极地促进作用。说明本发明的益生菌制剂可以促进益生菌增殖，有效调节肠道菌群生态系统平衡，促进肠道消化吸收。
[0041]
需要说明的是，以上所述的实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对本发明作出的一些非本质的改进和调整仍属于本发明的保护范围。