半夏白术天麻汤的质量检测方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，涉及半夏白术天麻汤的质量检测方法以及该质量检测方法的具体应用。


背景技术：

2.古代经典名方是指目前仍然应用广泛、疗效确切、具有明显特色与优势的古籍所记载的方剂。经典名方复方制剂的研发是传承和发掘传统中医药宝库的一把钥匙，也是贯彻落实《中华人民共和国中医药法》和推动中医药事业发展的现实选择。2018年，《古代经典名方目录(第一批)》(简称《目录》)和《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定》(简称《管理规定》)相继发布，明确了经典名方制剂研发、注册的总体方向和措施，经典名方复方制剂的研发也从政策层面逐渐走向了落地实施的阶段，这也成为行业研究和发展的热点。
3.《目录》文件中明确半夏白术天麻汤出自清代医家程国彭的医学著作《医学心悟》，原文记载：“半夏一钱五分，天麻、茯苓、橘红各一钱，白术三钱，甘草五分，生姜一片，大枣二枚，水煎服，具有化痰熄风，健脾祛湿之功效。”通过对该经典名方进行大量的文献研究工作，发现目前对于半夏白术天麻汤的文献报道主要集中在临床研究、应用等方面，对其质量标准评价方面报道较少。
4.在薄层鉴别方面，cn108956843a公开了一篇半夏白术天麻汤冻干粉快速多信息薄层鉴别方法。该方法仅从薄层定性鉴别的角度，对复方中麸炒白术、甘草、天麻、橘红4个药味进行了定性指认，无法全面体现复方的整体属性，该方法样品制备方法虽简单，但从各薄层斑点来看，斑点显色清晰度和分离度较差，橘红、天麻鉴别薄层板存在斑点重叠的现象，且各药味的特征斑点量相对教少。此外，该专利公布的天麻、橘红薄层展开方法涉及二次展开，展开时间较长、方法稍显繁琐，有待进一步提高。
5.在特征图谱研究方面，王淑玲等对半夏白术天麻汤4种方法提取液进行了hplc特征图谱的比较，选取了12个特征峰进行分析，但并未进行峰指认(王淑玲等.半夏白术天麻汤4种方法提取液特征图谱比较[j].杭州师师范大学(自然科学版),2010,9(02):127-134)。徐男等采用hplc法建立特征图谱，通过中药色谱特征图谱相似度评价系统匹配26个共有峰，确定了天麻素、甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、异甘草苷、白术内酯ⅲ、甘草次酸7个化合物，但从该文献的多批次色谱叠加图来看，多个特征峰峰面积较小，部分共有峰未达到基线分离，且特征峰分离度不佳，尤其是半夏、天麻两味君药的化学成分信息体现不全面，关键质量属性基指标选择上有明显不足和缺失。(徐男等.化学计量学结合信息熵赋权优选半夏白术天麻汤提取工艺[j].中草药,2020,51(04):995-1002)。
[0006]
综上，目前有关半夏白术天麻汤的质量控制研究较少，存在研究深度的不够，指标选择不充分、药味定性评价体系不全面等问题，分析方法准确性、全面性和可操作性等有待进一步研究和优化。


技术实现要素：

[0007]
发明要解决的问题
[0008]
为了解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种半夏白术天麻汤的质量检测方法，该方法能够整体定性，分析周期较短，适用于半夏白术天麻汤制剂整体质量控制。
[0009]
用于解决问题的方案
[0010]
本发明提供了如下技术方案：
[0011]
[1]一种半夏白术天麻汤的质量检测方法，其中，
[0012]
所述质量检测方法包括：对半夏白术天麻汤待测样品进行薄层鉴别和将待测样品的液相色谱图谱与半夏白术天麻汤的特征图谱进行比较，
[0013]
其中所述薄层鉴别采用3个供试品溶液，在4块薄层板上，对半夏白术天麻汤中白术、天麻、甘草、橘红和生姜进行薄层鉴别；
[0014]
所述半夏白术天麻汤的特征图谱有至少16个共有峰；
[0015]
所述待测样品选自半夏白术天麻汤通过水煎煮工艺所制备得到的药液、冻干粉、干膏粉及颗粒中的一种。
[0016]
[2]根据[1]所述的质量检测方法，其中，
[0017]
所述薄层鉴别包括采用同一供试品溶液对白术、橘红、甘草进行鉴别。
[0018]
[3]根据[2]所述的质量检测方法，其中，
[0019]
对白术、橘红、甘草进行薄层鉴别所用的供试品溶液的制备方法包括：取半夏白术天麻汤待测样品2～10g，加甲醇20～40ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解。
[0020]
[4]根据[1]～[3]任一技术方案所述的质量检测方法，其中，
[0021]
所述薄层鉴别包括采用同一块薄层板实现对于甘草和橘红的鉴别。
[0022]
[5]根据[4]所述的质量检测方法，其中，
[0023]
所述薄层鉴别包括吸取供试品溶液、甘草对照药材、甘草苷对照品溶液、橙皮苷对照品溶液，分别点于同一块薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，喷以三氯化铝试液，热风吹干，先置紫外光灯下检视；再喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视以实现在同一块薄层板对于甘草和橘红的鉴别。
[0024]
[6]根据权利要求1～5任一技术方案所述的质量检测方法，其中，
[0025]
所述薄层鉴别包括对半夏白术天麻汤中白术进行薄层鉴别，其包括以三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，以2％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液为显色剂，在紫外灯下检视。
[0026]
[7]根据[1]～[6]任一技术方案所述的质量检测方法，其中，
[0027]
所述薄层鉴别包括对半夏白术天麻汤中天麻进行薄层鉴别，其包括以下步骤：
[0028]
取半夏白术天麻汤待测样品2～10g，加甲醇20～30ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，通过大孔吸附树脂柱，用水洗脱，弃去水液，再用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为天麻鉴别供试品溶液；取天麻对照药材1g，加甲醇20～30ml，采用所述天麻鉴别供试品溶液的制备方法制成对照药材溶液；再取天麻素对照品，加
甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
[0029]
吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
[0030]
[8]根据[1]～[7]任一技术方案所述的质量检测方法，其中，
[0031]
所述薄层鉴别还包括对半夏白术天麻汤中生姜进行薄层鉴别，其包括以下步骤：
[0032]
取半夏白术天麻汤待测样品2～10g，加水10～30ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液；
[0033]
取6-姜辣素对照品1mg，加甲醇制成每1ml含有1mg的溶液，作为对照品溶液；
[0034]
吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一薄层板上，以石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘至斑点清晰。
[0035]
[9]根据[1]～[8]任一技术方案所述的质量检测方法，其中，
[0036]
所述半夏白术天麻汤的特征图谱的特征峰包括：天麻中的天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷e、巴利森苷b、巴利森苷c、巴利森苷的色谱峰；甘草中的芹糖甘草苷、甘草苷、甘草酸、甘草素的色谱峰；橘红中的橙皮苷、维采宁-2、川陈皮素的色谱峰；白术、甘草、橘红、清半夏、生姜中共有成分l-色氨酸的色谱峰；白术、橘红中共有成分的绿原酸的色谱峰。
[0037]
[10]根据[1]～[9]任一技术方案所述的质量检测方法用于控制半夏白术天麻汤中间体、制剂(包括颗粒)的产品质量和/或评价半夏白术天麻汤制剂的生产工艺稳定性的用途。
[0038]
发明的效果
[0039]
本发明以半夏白术天麻汤为研究对象，建立半夏白术天麻汤的质量检测方法和半夏白术天麻汤物质基准质量评价体系，为该复方制剂的合理开发应用提供了研究工作基础。
[0040]
一方面，本发明提供的半夏白术天麻汤的质量检测方法，能够进行整体定性研究。本发明作为半夏白术天麻汤的质量整体评价方法，由16个峰的特征图谱，5个药味的薄层鉴别共同构成立体的评价体系，较全面的反映了半夏白术天麻汤中除大枣、茯苓外共6个药味的整体特性，能够全面体现复方的整体属性。
[0041]
另一方面，针对中药复方中化学成分复杂，薄层鉴别干扰成分多，斑点识别性和分离度差等问题，根据药味中不同成分的极性特点，有针对性的开展供试品处理方法的除杂和优化，所选展开剂配制简单有助于获得斑点清晰丰富的色谱图，采用的显色剂显色速度快显色明显、分离效果好。本发明采用3个供试品溶液、4块薄层板建立了5个药味的薄层鉴别方法，其中橘红和甘草可在同一块薄层板上进行有效鉴别，解决了现有专利cn108956843a在分离天麻和橘红时(尤其是针对中间体和颗粒供试品)，未能将天麻的斑点得到有效分离的问题。本发明中复方各单味药的特征斑点数量多，且清晰，同时对半夏白术天麻汤物质基准、制剂中间体及颗粒的薄层色谱鉴别中均有对应的特征斑点，为物质基准、制剂中间体、颗粒中的特征成分溯源提供了依据。
[0042]
在特征图谱研究方面，本发明所建立的特征图谱，根据处方药味配伍的重要性，结合每个药味的关键指标，以各药味中水溶性好、含量高的专属性成分如天麻中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷e、巴利森苷b、巴利森苷c、巴利森苷色谱峰、甘草中芹糖甘草苷、甘草
苷、甘草酸、甘草素色谱峰、橘红中橙皮苷、维采宁-2、川陈皮素色谱峰及共有成分如麸炒白术、甘草、橘红、清半夏、生姜中的l-色氨酸色谱峰、麸炒白术、橘红中的绿原酸色谱峰为特征峰，建立了半夏白术天麻汤中的特征图谱。本发明确定的16个特征峰具有一定的专属性和全面性，分析方法具有耐用性和实用性强、分离度高等优势，实现了半夏白术天麻汤整体定性研究，更全面反映产品质量，弥补了单一成分无法反映整体复方的缺点。
[0043]
另外，本发明仅通过薄层鉴别和特征图谱就能实现处方中除大枣、茯苓外的6个药味的定性鉴别，简单及快速的实现中药复方的整体性评价，其分析周期较短，现实可操做性强，有利于节约成本、提高效率。需要说明的是，上述的记载并不是公开了本发明的全部实施方式和本发明的全部优点。
附图说明
[0044]
为了更清楚地说明本发明的具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0045]
图1为半夏白术天麻汤特征图谱(特征对照图谱)。
[0046]
图2为半夏白术天麻汤中白术的薄层鉴别图谱。(其中，1-16分别对应批号1-16的待测样品，s为白术对照药材)
[0047]
图3为半夏白术天麻汤中天麻的薄层鉴别图谱。(其中，1-16分别对应批号1-16的待测样品，s为天麻对照药材、t为天麻素对照品)。
[0048]
图4为半夏白术天麻汤中橘红的薄层鉴别图谱。(其中，1-3分别对应批号1-3的待测样品，4为缺少甘草的阴性样品，5为缺少橘红的阴性样品，t1为甘草苷对照品、s为甘草对照药材、t2为橙皮苷对照品)
[0049]
图5为半夏白术天麻汤中甘草的薄层鉴别图谱。(其中，1-3分别对应批号1-3的待测样品，4为缺少甘草的阴性样品，5为缺少橘红的阴性样品，t1为甘草苷对照品、s为甘草对照药材、t2为橙皮苷对照品)。
[0050]
图6为半夏白术天麻汤中生姜的薄层鉴别图谱。(其中，1-3分别对应批号1-3的待测样品，4为缺少生姜的阴性样品，t为6-姜辣素对照品)。
[0051]
图7为采用专利cn108956843a的方法对半夏白术天麻汤中间体、颗粒样品进行橘红、天麻的鉴别在紫外光灯365nm下检视的薄层图谱。(其中，1为天麻素，2为天麻对照药材，3-5为中间体供试品，6-8为颗粒供试品，9为橘红对照药材，10为橙皮苷)。
[0052]
图8为采用专利cn108956843a的方法对半夏白术天麻汤中间体、颗粒样品进行橘红、天麻的鉴别在紫外光灯254nm下检视的薄层图谱。(其中，1为天麻素，2为天麻对照药材，3-5为中间体供试品，6-8为颗粒供试品，9为橘红对照药材，10为橙皮苷)。
[0053]
图9为半夏白术天麻汤中间体、颗粒进行甘草鉴别的薄层鉴别图谱。(其中，1、12为橙皮苷，2、11为甘草苷，3、10为甘草对照药材，4-6为3批半夏白术天麻汤中间体，7-9为相应批次的半夏白术天麻汤颗粒)。
[0054]
图10为半夏白术天麻汤中间体、颗粒进行橘红鉴别的薄层鉴别图谱。(其中，1、12为橙皮苷，2、11为甘草苷，3、10为甘草对照药材，4-6为3批半夏白术天麻汤中间体，7-9为相
应批次的半夏白术天麻汤颗粒)。
[0055]
图11为半夏白术天麻汤中间体、颗粒进行生姜鉴别的薄层鉴别图谱。(其中，1、8为6-姜辣素对照品，2-4半夏白术天麻汤中间体，5-7为半夏白术天麻汤颗粒)。
[0056]
图12为半夏白术天麻汤中间体、颗粒进行天麻鉴别的薄层鉴别图谱。(其中，1、10为天麻素对照品，2、9为天麻对照药材，3-5半夏白术天麻汤中间体，6-8为半夏白术天麻汤颗粒)。
[0057]
图13为半夏白术天麻汤中间体、颗粒进行白术(麸炒白术)鉴别的薄层鉴别图谱。(其中，1、8为白术对照药材，2-4半夏白术天麻汤中间体，5-7为半夏白术天麻汤颗粒)。
[0058]
图14为多批次半夏白术天麻汤叠加图。
具体实施方式
[0059]
为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在另外一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法、手段、器材和步骤未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。除非另有定义，本发明所用的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域中的普通技术人员所通常理解的相同含义。
[0060]
本说明书中，使用“数值a～数值b”表示的数值范围是指包含端点数值a、b的范围。本说明书中，使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。本说明书中，“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
[0061]
本说明书中，所提及的“一些具体/优选的实施方式”、“另一些具体/优选的实施式”、“实施方式”、“实施方案”等是指所描述的与该实施方式有关的特定要素(例如，特征、结构、性质和/或特性)包括在此处所述的至少一种实施方式中，并且可存在于其它实施方式中或者可不存在于其它实施方式中。另外，应理解，所述要素可以任何合适的方式组合在各种实施方式中。
[0062]
本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“包括”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含一系列步骤或单元的过程、方法或系统、产品或设备没有限定于已列出的步骤或单元，而是可选地还包括没有列出的步骤或单元，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
[0063]
在本发明中，如无特殊说明，有关溶液“a％”均表示体积分数为a％，如“70％甲醇”或者“70％甲醇水溶液”、“70％甲醇溶液”表示甲醇体积分数为70％的水溶液。
[0064]
本发明提供了一种半夏白术天麻汤的质量检测方法(也可以称为质量控制方法或者质量评价方法，主要是定性鉴别的方法)，所述方法包括：对半夏白术天麻汤待测样品进行薄层鉴别、将待测样品的液相色谱图谱与半夏白术天麻汤的特征图谱进行比较(包括利用液相色谱法进行半夏白术天麻汤的特征图谱研究)。
[0065]
半夏白术天麻汤是国家中医药管理局公布的经典名方，由半夏、天麻、茯苓、橘红、白术、甘草6味药材组成，加水煎煮时，加入生姜和大枣，在冻干粉中一共含八味药材。其处方配比和制备工艺如下：处方：半夏一钱五分、天麻、茯苓、橘红各一钱，白术三钱，甘草五分。制法：取处方中六味，加生姜一片，大枣二枚，水煎煮，煎煮液浓缩，冷冻干燥，得冻干粉。
[0066]
《薄层鉴别方法》
[0067]
本发明薄层鉴别方法选择白术、天麻、甘草、橘红、生姜为鉴别对象。生姜作为佐使药，在中药复方中具有“药引子”的作用，是复方中的一部分，增加该项目的鉴别能更全面地体现复方的整体属性。
[0068]
本发明薄层鉴别方法中供试品溶液的制备步骤提取效果好，采用的展开剂有助于获得斑点清晰丰富的色谱图，采用的显色剂显色速度快。对于天麻、生姜可直接在日光下检视，对于白术、甘草、橘红置于紫外灯下检视。本发明的薄层鉴别采用3个供试品溶液，在4块薄层板上，对半夏白术天麻汤中白术、天麻、甘草、橘红和生姜进行薄层鉴别。本发明的薄层鉴别包括采用同一供试品溶液对白术、橘红、甘草进行鉴别。进一步地，对白术、橘红、甘草进行薄层鉴别所用的供试品溶液的制备方法包括：取半夏白术天麻汤待测样品2～10g，加甲醇20～40ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取(如2～3次)，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解。在本文中，术语“水饱和的正丁醇”、“正丁醇饱和的水”是本领域已知的，可采用本领域常用方法制备，比如通过将正丁醇和蒸馏水混合(混合比例为1:1)，振摇混匀后放置过夜或超声处理10min，得到的混合液进行分层后，上层为水饱和的正丁醇溶液，下层为正丁醇饱和的水溶液。本发明的薄层鉴别还包括采用不同的显色剂和显色处理在同一块薄层板实现对于甘草和橘红的鉴别。本发明的薄层鉴别方法相对便捷、高效，检测信息更全面，分离度及呈点性较好，药材、饮片、半夏白术天麻汤物质基准薄层色谱鉴别中均有对应的特征斑点，为物质基准、制剂中间体或颗粒中的特征成分溯源到药材/饮片提供了依据。
[0069]
进一步地，本发明分别提供了半夏白术天麻汤中白术的薄层鉴别方法、半夏白术天麻汤中天麻的薄层鉴别方法、半夏白术天麻汤中甘草、橘红的薄层鉴别方法和半夏白术天麻汤中生姜的薄层鉴别方法。
[0070]
在本发明的一些具体实施方式中，本发明提供了一种半夏白术天麻汤中白术的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
[0071]
(1.0)取半夏白术天麻汤待测样品2～10g，加甲醇20～40ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇溶液振摇提取2～3次，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。
[0072]
(1.1)取白术对照药材1g，加甲醇20～40ml，采用与(1.0)相同的方法制成对照药材溶液。
[0073]
(1.2)照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以薄层显色剂1，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视。优选地，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。在本发明的一些具体实施方式中，供试品溶液和对照药材溶液的点样量为1μl～10μl。进一步地，为了获得更佳的分离度，此处使用的展开剂，以体积比计，三氯甲烷：丙酮：甲酸＝(8～12):0.5:(0.01-0.08)，进一步优选为(9～11)：0.5：(0.02～0.06)，在本发明的另一些具体实施方式中，此处使用的薄层显色剂1为2wt％对二甲氨基苯甲醛的10％(v/v)硫酸乙醇溶液，进而在105℃加热至斑点显色清晰。进一步地，检视时紫外灯的波长为365nm。
[0074]
在本发明的一些具体实施方式中，本发明提供了一种半夏白术天麻汤中天麻的薄
层鉴别方法，其包括以下步骤：
[0075]
(2.0)取半夏白术天麻汤待测样品2～10g，加甲醇20～30ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，通过大孔吸附树脂柱，用水洗脱，弃去水液，再用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。
[0076]
(2.1)取天麻对照药材，加甲醇20～30ml，采用与(2.0)相同的方法制成对照药材溶液。再取天麻素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
[0077]
(2.2)照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以薄层显色剂2，加热至斑点显色清晰。优选地，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。在本发明的一些具体实施方式中，供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液的点样量为1μl～10μl。进一步地，为了获得更佳的分离度，此处使用的展开剂，以体积比计，乙酸乙酯：甲醇：水＝(6～12):1:(0.1～0.5)，进一步优选为(8～10)：1：(0.2～0.4)，在本发明的另一些具体实施方式中，此处使用的薄层显色剂2为10wt％磷钼酸乙醇溶液，进而在105℃加热至斑点显色清晰。
[0078]
本发明的薄层鉴别的方法还包括以三氯甲烷-甲醇-水为展开剂在同一块薄层板上鉴别甘草、橘红。在本发明的一些具体实施方式中，本发明提供了一种半夏白术天麻汤中甘草、橘红的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
[0079]
(3.0)供试品溶液的制备同(1.0)所述的方法。
[0080]
(3.1)取甘草对照药材，加甲醇20～40ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2～3次，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液。
[0081]
(3.2)取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为橙皮苷对照品溶液。
[0082]
(3.3)取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含有1mg的溶液，作为甘草苷对照品溶液。
[0083]
(3.4)照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液、甘草对照药材、甘草苷对照品溶液、橙皮苷对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，先置紫外光灯(365nm)下检视。再喷以10％(v/v)硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。优选地，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。在本发明的一些具体实施方式中，吸取供试品溶液2～5μl，甘草对照药材、甘草苷对照品溶液各1～3μl，橙皮苷对照品溶液3～6μl。为了获得更佳的分离度，此处使用的展开剂，以体积比计，三氯甲烷：甲醇：水＝(8～15):2.5:(0.1～0.5)，进一步优选为(9～13)：2.5：(0.2～0.4)。采用本发明前述两种不同的检视条件，可以利用同一供试品溶液、在同一块薄层板上实现两味药材的薄层鉴别。
[0084]
本发明还提供了半夏白术天麻汤中生姜的薄层鉴别方法，其包括以6-姜辣素为对照品，以石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，以香草醛硫酸溶液为显色剂以实现对半夏白术天麻汤中生姜的薄层鉴别。在本发明的一些具体实施方式中，所述生姜的薄层鉴别方法包括：
[0085]
(4.0)取半夏白术天麻汤待测样品2～10g，加水10～30ml使溶解，用乙酸乙酯振摇
提取2～3次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液。
[0086]
(4.1)取6-姜辣素对照品1mg，加甲醇制成每1ml含有1mg的溶液，作为对照品溶液。
[0087]
(4.2)照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。在本发明的一些具体实施方式中，吸取供试品溶液10～20μl，对照品溶液0.5～3μl。为了获得更佳的分离度，此处使用的展开剂，石油醚为沸程为60-90℃的石油醚，以体积比计，石油醚：三氯甲烷：乙酸乙酯＝(1～5):1:1，进一步优选为(2～4):1:1。进一步地，此处采用的显色剂为5wt％香草醛硫酸溶液，在105℃烘至斑点清晰。
[0088]
在本发明的一些具体实施方式中，本发明的薄层鉴别方法供试品溶液和对照药材或对照品的点样量为1μl～10μl。
[0089]
如果采用前述薄层鉴别的方法，待测样品的各供试品色谱均显示了与对应的对照药材色谱和/或对照品色谱相同颜色的荧光斑点，则能定性表明待测样品具有所鉴别的白术、天麻、甘草、橘红、生姜这五味药。
[0090]
《特征图谱》
[0091]
本发明的半夏白术天麻汤的质量检测方法还包括将待测样品的液相色谱图谱与半夏白术天麻汤的特征图谱进行比较，看是否具有16个共有峰(或特征峰)，以更加全面、有效控制半夏白术天麻汤制剂产品质量。相应地，本发明还提供了半夏白术天麻汤的特征图谱的构建方法。本发明以各药味中水溶性好、含量高、专属性高且共有的成分作为特征峰，建立了半夏白术天麻汤的特征图谱。
[0092]
在本发明的一些具体实施方式中，特征图谱的构建方法包括：
[0093]
供试品制备方法：取半夏白术天麻汤样品约0.2～1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水或者甲醇溶液10～50ml，密塞，称定重量进行提取，放冷，再称定重量，用对应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。进一步地，本发明考察了不同提取溶剂对半夏白术天麻汤特征图谱的影响，从总峰面积/称样量值的大小考虑，优选20～75％甲醇为提取溶剂。对于提取方式和提取时间，本发明均没有特别限定，超声、加热回流、振摇提取均可以，采用上述三种提取方式所得的总峰面积/称样量值相近，提取时间可以为10～70min。
[0094]
参照物或对照品的制备方法：取天麻素对照品、对羟基苯甲醇对照品、巴利森苷e对照品、巴利森苷b对照品、巴利森苷c对照品、巴利森苷对照品适量，精密称定，加乙腈-水溶液制成每1ml含天麻素60μg、对羟基苯甲醇5μg、巴利森苷e 40μg、巴利森苷b 50μg、巴利森苷c 30μg、巴利森苷40μg的混合溶液。取甘草苷对照品、橙皮苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加20～75％甲醇制成每1ml含甘草苷30μg、橙皮苷90μg、甘草酸35μg的混合溶液(甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207)，作为对照品参照物溶液。
[0095]
色谱条件：采用超高效液相色谱仪，dad检测器，以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱；以甲醇为流动相a2，以0.05wt％-0.1wt％磷酸溶液为流动相b2，梯度洗脱：0～30min，5
→
45a2％，30～40min，45
→
66％a2％，40～45min，66
→
100a2％，45～50min，100a2％，50～51min，100
→
5a2％；柱温为25～35℃；流速为每分钟0.15～0.4ml；检测波长为200～400nm。
[0096]
测定方法：分别精密吸参照物溶液和供试品溶液1～3μl，注入液相色谱仪，测定，
即得。
[0097]
分析方法：本发明采用国家药典委员会推荐的“中药色谱特征图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，结合峰归属情况，选择其共有峰，以峰4巴利森苷e、峰13橙皮苷峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，拟合共有峰叠加图谱，生成共有模式的特征对照图谱。结合实际可实施性，本发明确定其中的16个共有峰作为半夏白术天麻汤的特征峰，本发明构建的半夏白术天麻汤特征图谱参见图1。本发明通过阴性和单味药特征图谱的研究和对照品指认，对天麻，甘草、橘红、白术、半夏、生姜、大枣、茯苓进行了峰归属，其中l-色氨酸为白术(麸炒白术)、甘草、橘红、半夏、生姜共有成分，绿原酸为白术(麸炒白术)、橘红共有成分；其余峰归属于天麻、甘草、橘红；大枣、茯苓未有峰在复方中体现，具体参见表1。其中峰1、峰2、峰4、峰7、峰8、峰10、峰11、峰13、峰16分别与天麻素对照品、对羟基苯甲醇对照品、巴利森苷e对照品、巴利森苷b对照品、巴利森苷c对照品、巴利森苷对照品，甘草苷对照品、橙皮苷对照品、甘草酸对照品参照物峰保留时间相对应。与巴利森苷e参照物峰相应的峰作为s1峰，计算峰3、峰5、峰6与s1峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的10％范围之内，规定值为：0.71(峰3)、1.19(峰5)、1.49(峰6)；与橙皮苷参照物峰相应的峰作为s2峰，计算峰9、峰12、峰14、峰15与s2峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的10％范围之内，规定值为：0.78(峰9)、0.95(峰12)、1.22(峰14)、1.42(峰15)。
[0098]
表1各色谱峰单味药归属结果
[0099][0100]
本发明建立半夏白术天麻汤的质量检测方法和半夏白术天麻汤物质基准质量评价体系，为该复方制剂的合理开发应用提供了研究工作基础，适用于控制半夏白术天麻汤中间体和制剂产品的质量和/或评价半夏白术天麻汤制剂生产工艺稳定性的用途。
[0101]
实施例
[0102]
以下将结合具体的实施例来进一步阐述本发明中的技术方案。应当理解的是，下列实施例仅用于解释和说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。
[0103]
《半夏白术天麻汤白术薄层鉴别方法》
[0104]
仪器与试药
[0105]
薄层自动成像仪(camag tlc visualizer)、超声波清洗器(kq-250e，昆山市超声仪器有限公司)、千分之一天平(ar223cn，奥豪斯)、ae-2401电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)、gkc控温水浴锅(南通华泰实验仪器有限公司)。
[0106]
三氯甲烷(上海凌峰化学试剂有限公司)、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、甲苯、甲酸、冰醋酸、石油醚(60～90℃)、乙醇(国药集团化学试剂有限公司)，试剂均为分析纯，硅胶g薄层板(国药集团化学试剂有限公司)；
[0107]
白术对照药材(120925-201812)、天麻对照药材(120944-201310)、天麻素(110807-201608)、甘草对照药材(120904-201620)、橙皮苷(110721-201818)、甘草苷
(111610-201607)、6-姜辣素(111833-201705)购于中国食品药品检定研究院。
[0108]
半夏白术天麻汤冻干粉、中间体、颗粒以及阴性样品均由江阴市天江药业有限公司提供。具体制备方法如下：
[0109]
半夏白术天麻汤冻干粉：取处方中六味，加生姜一片，大枣二枚，加水煎煮，武火煮沸，文火保沸1～2小时，趁热过滤，煎煮液浓缩，冷冻干燥，即得。
[0110]
半夏白术天麻汤中间体：按处方量投料，加水煎煮两次，每次煎煮1～2小时，合并提取液，过滤后将提取液进行浓缩，加适量辅料喷雾干燥，即得。
[0111]
半夏白术天麻汤颗粒：由中间体，加适量辅料，制粒，即得。
[0112]
实施例1半夏白术天麻汤白术薄层鉴别方法
[0113]
1.1供试品溶液的制备
[0114]
取半夏白术天麻汤冻干粉2g，加甲醇40ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。
[0115]
1.2对照药材溶液的制备
[0116]
取白术对照药材1g，同法(同1.1)制成对照药材溶液。
[0117]
1.3阴性样品溶液的制备
[0118]
取缺少白术的阴性样品，同法(同1.1)制成阴性样品溶液。
[0119]
1.4薄层色谱条件
[0120]
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液与对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(9：0.5：0.03)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2wt％对二甲氨基苯甲醛的10％(v/v)硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。
[0121]
1.5多批次半夏白术天麻汤白术的鉴别
[0122]
分别对不同批次(批号1-16)的半夏白术天麻汤冻干粉样品进行白术的薄层鉴别，见图2。
[0123]
结论：由图可见，不同批次的半夏白术天麻汤在与对照药材色谱在相应的位置显相同颜色的荧光主斑点。阴性样品在与样品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。
[0124]
实施例2半夏白术天麻汤天麻薄层鉴别方法
[0125]
2.1供试品溶液的制备
[0126]
取半夏白术天麻汤冻干粉6g，加甲醇30ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，通过d101大孔吸附树脂柱(内径为1cm，柱高为12cm)，用水洗脱，弃去水液，再用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。
[0127]
2.2对照溶液的制备
[0128]
取天麻对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取天麻素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
[0129]
2.3阴性样品溶液的制备
[0130]
取缺少天麻的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。
[0131]
2.4薄层色谱条件
[0132]
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液与对照药材溶
液各6μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(8：1：0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
[0133]
2.5多批次半夏白术天麻汤天麻的鉴别
[0134]
分别对不同批次(批号1-16)的半夏白术天麻汤冻干粉样品进行天麻的薄层鉴别，见图3。
[0135]
结论：由图可见，不同批次的半夏白术天麻汤在与对照药材、对照品色谱在相应的位置显相同颜色的斑点。阴性样品在与样品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。
[0136]
实施例3半夏白术天麻汤甘草、橘红的薄层鉴别方法
[0137]
3.1供试品溶液的制备
[0138]
同1.1的供试品溶液的制备。
[0139]
3.2对照溶液的制备
[0140]
取甘草对照药材1g，加甲醇30ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为橙皮苷对照品溶液。再取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含有1mg的溶液，作为甘草苷对照品溶液。
[0141]
3.3阴性样品溶液的制备
[0142]
取缺少甘草、橘红的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。
[0143]
3.4薄层色谱条件
[0144]
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液3μl，甘草对照药材、甘草苷对照品溶液各3μl，橙皮苷对照品溶液6μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(9︰2.5︰0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，先置紫外光灯(365nm)下检视。再喷以10％硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。
[0145]
3.5多批次半夏白术天麻汤甘草、橘红的鉴别
[0146]
分别对不同批次(批号1-3)的半夏白术天麻汤冻干粉样品进行橘红、甘草的薄层鉴别，见图4、图5。
[0147]
结论：由图可见，不同批次(图4、图5的1～3是不同批次的样品)的半夏白术天麻汤中橘红与甘草色谱，分别与相应的对照药材色谱和对照品色谱(图4、图5中的s是甘草对照药材，t1是甘草苷对照品、t2是橙皮苷对照品)在相同的位置显相同颜色的荧光斑点。阴性样品(图4、图5中的4是缺少甘草的阴性样品，5是缺少橘红的阴性样品)在与样品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。
[0148]
实施例4半夏白术天麻汤生姜的薄层鉴别方法
[0149]
4.1供试品溶液的制备
[0150]
取半夏白术天麻汤冻干粉2g，加水使溶解，用乙酸乙酯振摇提取两次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为供试品溶液。
[0151]
4.2对照溶液的制备
[0152]
另取6-姜辣素对照品1mg，加甲醇制成每1ml含有1mg的溶液，作为对照品溶液。
[0153]
4.3阴性样品溶液的制备
[0154]
取缺少生姜的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。
[0155]
4.4薄层色谱条件
[0156]
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘至斑点清晰。
[0157]
4.5多批次半夏白术天麻汤生姜的鉴别
[0158]
分别对不同批次(批号1-3)的半夏白术天麻汤冻干粉样品进行生姜的薄层鉴别，见图6。
[0159]
结论：由图可见，不同批次(图6的1～3是不同批次的样品)的半夏白术天麻汤色谱，与相应的6-姜辣素对照品色谱(图6中的t是6-姜辣素对照品)在相同的位置显相同颜色的斑点。阴性样品(图6中的4是缺少生姜的阴性样品)在与样品色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点。
[0160]
实施例5多批次半夏白术天麻汤中间体、颗粒中甘草、橘红、生姜、天麻、白术的鉴别
[0161]
采用本发明前述实施例的供试品溶液的制备方法分别对3批次的半夏白术天麻汤中间体、颗粒进行供试品制备，按本发明前述实施例的薄层色谱条件分别对半夏白术天麻汤中甘草、橘红、生姜、天麻、白术(麸炒白术)进行鉴别，结果见图9～图13，由此可知采用本发明的方法能为半夏白术天麻汤制剂中间体或颗粒中的特征成分的溯源提供依据。
[0162]
比较例1
[0163]
采用cn108956843a的方法对半夏白术天麻汤中间体、颗粒样品进行鉴别。半夏白术天麻汤中间体、颗粒样品均采用该方法所述的供试品制备方法。图7和图8分别是在紫外光灯365nm和254nm下检视的薄层图谱。由图可知，斑点显色清晰度和分离度较差，橘红、天麻鉴别薄层板存在斑点重叠的现象。
[0164]
《半夏白术天麻汤的特征图谱的构建》
[0165]
实施例6半夏白术天麻汤的特征图谱的构建方法
[0166]
6.1仪器与试药
[0167]
agilent technologies 1290 infinity超高效液相色谱仪；1290dad fs二极管阵列检测器；1290 mct柱温箱；1290 vial sampler自动进样器；1290 fiexible pump四元泵；open lab 2.3色谱工作站；电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；kq-250b超声清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；纯水系统(sartorius公司)；as165w型离心机(亚速旺(上海)商贸有限公司)。乙腈(色谱纯，thermo fisher公司)；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。半夏白术天麻汤冻干粉由江阴天江药业有限公司制备提供。
[0168]
6.2对照品来源
[0169]
甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷、天麻素、对羟基苯甲醇、绿原酸对照品均购自中国食品药品检定研究院，编号分别为111610-201607、110731-201720、110721-201818、110807-201809、111970-201702、110753-201817。巴利森苷、巴利森苷b、巴利森苷c、巴利森苷e、芹糖甘草苷、川陈皮素、l-色氨酸对照品购自上海诗丹德公司，编号分别为st20450120mg、st20460120mg、st20470105mg、st55040105mg、st04390120mg、st00690120mg、st56120100mg。
[0170]
6.3色谱条件
[0171]
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a2，以0.1％磷酸溶液流动相b2，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml；柱温为25℃；检测波长为220nm。
[0172]
表2
[0173][0174]
6.4参照物溶液的制备：
[0175]
对照品参照物溶液的制备：取绿原酸、l-色氨酸、甘草苷、甘草酸铵、甘草素、芹糖甘草苷、维采宁-2、川陈皮素、橙皮苷、天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷a、巴利森苷b、巴利森苷c、巴利森苷e对照品，精密称定，置于容量瓶中，加甲醇制成每1ml含绿原酸100μg、含l-色氨酸30μg、含甘草苷20μg、含甘草酸100μg、含甘草素50μg、含芹糖甘草苷20μg、含维采宁-2 50μg、含川陈皮素20μg、含橙皮苷100μg、含天麻素50μg、对羟基苯甲醇50μg、巴利森苷a 50μg、巴利森苷b 50μg、巴利森苷c 50μg的溶液、巴利森苷e 50μg的对照品溶液。
[0176]
对照药材参照物溶液的制备：取白术对照药材2g，天麻、甘草对照药材各约0.2g，半夏对照药材3g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入30％甲醇20ml，密塞，超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液；大枣对照药材1.5g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入30％甲醇10ml，密塞，超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。
[0177]
6.5供试品溶液的制备：
[0178]
取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇15ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用30％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0179]
6.6方法学验证
[0180]
6.6.1精密度考察
[0181]
取同一批号样品，按本实施例供试品溶液制备方法制备成供试液，连续进样6次，记录色谱图。以峰4巴利森苷e、峰13橙皮苷峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的rsd均小于3％，表明仪器精密度良好。
[0182]
6.6.2稳定性试验
[0183]
取同一批号样品，按供试品溶液制备方法制成供试液，平行6份，分别于0、2、4、8、12、24h按上述色谱条件测定，记录色谱图。以峰4巴利森苷e、峰13橙皮苷峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的rsd均小于5％，表明供试液在24小时内稳定性良好。
[0184]
6.6.3重复性试验
[0185]
取同一批号样品，按供试品溶液制备方法制成供试液，平行6份，记录色谱图。以以峰4巴利森苷e、峰13橙皮苷峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的rsd
均小于5％，供试液重复性良好。
[0186]
6.7不同批次半夏白术天麻汤样品测定及特征峰的确定
[0187]
采用国家药典委员会推荐的“中药色谱特征图谱相似度评价系统(2012版)”进行结果分析，结合峰归属情况，选择其共有峰，以峰4巴利森苷e、峰13橙皮苷峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，拟合共有峰叠加图谱，见图14；生成共有模式的特征对照图谱，见图1。测定30批次，由各特征峰相对保留时间可以看出，30批样品中特征峰的保留时间比值较稳定。
[0188]
通过阴性和单味药特征图谱的研究，对天麻，甘草、橘红、麸炒白术、清半夏、生姜、大枣、茯苓进行了峰归属，其中l-色氨酸为麸炒白术、甘草、橘红、清半夏、生姜共有成分，绿原酸为麸炒白术、橘红共有成分；其余峰归属于天麻、甘草、橘红；大枣、茯苓未有峰在复方中体现。
[0189]
取待测样品，按供试品溶液制备方法制成供试液，得到色谱图，与图1进行比较，供试品色谱中应呈现16个特征峰，其中峰1、峰2、峰4、峰7、峰8、峰10、峰11、峰13、峰16应分别与天麻素对照品、对羟基苯甲醇对照品、巴利森苷e、巴利森苷b、巴利森苷c、巴利森苷a对照品，甘草苷对照品、橙皮苷对照品、甘草酸铵对照品参照物峰保留时间相对应。与巴利森苷e参照物峰相应的峰作为s1峰，计算峰3、峰5、峰6与s1峰的相对保留时间；其相对保留时间应在规定值的10％范围之内，规定值为0.71(峰3)、1.19(峰5)、1.49(峰6)；与橙皮苷参照物峰相应的峰作为s2峰，计算峰9、峰12、峰14、峰15与s2峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的10％范围之内，规定值为0.78(峰9)、0.95(峰12)、1.22(峰14)、1.42(峰15)。
[0190]
以上实施例仅用于阐明本发明的若干实施方案，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明的范围产生任何限制。应当明确的是，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围之内。