用于治疗皮肤红斑狼疮的TLR7抑制剂与泼尼松龙或羟氯喹的组合的制作方法

用于治疗皮肤红斑狼疮的tlr7抑制剂与泼尼松龙或羟氯喹的组合
1.交叉引用
2.本技术要求2021年6月11日提交的印度临时申请序列号202011024586的权益，将所述临时申请以其整体并入本文。
3.说明书
4.本发明总体上涉及一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自泼尼松龙和羟氯喹或其药学上可接受的盐。


背景技术：

5.toll样受体(tlr)属于模式识别受体家族，所述模式识别受体识别多样病原体的高度保守组分并且诱导先天和适应性免疫反应(akira s,takeda k,t.kaisho,t.,nat immunol.2001；2:675-680；pandey s,agrawal dk.,immunol cell biol.2006；84:333-341；kawai t,akira s.j biochem.2007；141:137-145)。tlr7和tlr8已显示在内体区室中表达并且识别ssrna分子模式。tlr7在b细胞和浆细胞样树突细胞(pdc)中表达；tlr8在单核细胞和髓样树突细胞(mdc)中表达(chuang th,ulevitch rj.eur cytokine net.2000；11:372-378；iwasaki a,medzhitov r.nat immunol.2004；5:987-995)。
6.皮肤红斑狼疮(cle)是一种皮肤障碍，所述皮肤障碍可以作为孤立的皮肤表现发生或伴随系统性红斑狼疮(sle)发生(okon lg,werth vp.best pract res clin rheumatol.2013；27:391-404；cohen mr,crosby d.j rheumatol.1994；21:1665-1669)。
7.cle通常与不同频率的自身抗体的存在相关。与sle类似，i型干扰素(ifn)失调被认为是cle中的关键致病驱动因子。cle患者通常在血液和皮肤病变中存在ifn特征(ifn signature)，其中血液ifn特征与皮肤病活动性得分相关(braunstein i,klein r,okawa j等人,br j dermatol.2012；166:971-975；meller s,winterberg f,gilliet m等人,arthritis rheum.2005；52:1504-1516,wenzel j,zahn s,mikus s等人,br j dermatol.2007；157:752-757)。
8.在ii期临床试验中，用西法木单抗(抗ifnαmab)和阿尼鲁单抗(抗ifnar mab)的治疗显示出患有皮肤疾病的sle患者的皮肤病活动性得分改善，从而进一步支持了i型ifn对cle的发病机制的贡献(furie r,khamashta m,merrill jt等人arthritis rheumatol.2017；69:376-86；petri m,wallace dj,spindler a等人arthritis rheum.2013；65:1011-1021)。浆细胞样树突细胞(pdc)是积聚在cle患者皮肤中的特化细胞，并且占免疫浸润物的5％-10％并且被认为是cle病变中i型ifn的主要来源。响应于核酸配体对tlr7和tlr9的刺激，pdc稳健地分泌ifnα，而tlr8诱导多种骨髓细胞以产生促炎细胞因子，诸如tnfα和il-6(siegal fp,kadowaki n,shodell m等人science 1999；284:1835-1837；tomasini d,mentzel t,hantschke m等人,j cutan pathol.2010；37:1132-1139；vermi w,lonardi s,morassi m等人,immunobiology 2009；214:877-86)。
9.由紫外线辐射诱导的凋亡碎片是cle的众所周知的环境触发因素，导致核糖核酸(rna)和脱氧核糖核酸(dna)片段的积聚，所述片段将分别激活tlr7和tlr9，导致pdc激活和i型ifn产生(wenzel j,proelss j,wiechert a等人,j am acad dermatol.2007；56:648-650)。
10.治疗cle的新方法是希望的。
11.本文公开了治疗皮肤红斑狼疮的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的泼尼松龙或其药学上可接受的盐的组合。
12.本文还公开了治疗皮肤红斑狼疮的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的羟氯喹或其药学上可接受的盐的组合。


技术实现要素：

13.本发明提供了治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自泼尼松龙和羟氯喹或其药学上可接受的盐。
14.本发明提供了治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的泼尼松龙或其药学上可接受的盐的组合。
15.本发明提供了治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的羟氯喹或其药学上可接受的盐的组合。
16.随着本公开文本的继续，将以扩展的形式阐述本发明的这些和其他特征。
附图说明
17.通过参照以下述附图来说明本发明。
18.图1示出了在雌性mrl/lpr小鼠中用化合物(i)或泼尼松龙治疗后对皮肤病变的抑制。a：颈部病变；b：头部病变；c：面部病变；d：耳部病变；e：总病变。
19.图2示出了在雌性mrl/lpr小鼠中用化合物(i)或泼尼松龙治疗后皮肤病变红斑的减少。a：颈部红斑；b：耳部红斑；c：总红斑。
20.图3示出了在用化合物(i)或泼尼松龙治疗后对循环抗体滴度的抑制，包括抗dsdna、抗smrnp和抗ro抗体滴度。
21.图4示出了在用化合物(i)或泼尼松龙治疗后蛋白尿和尿ngal的降低。
22.图5示出了在用化合物(i)或泼尼松龙治疗后，化合物(i)在离体环境中抑制tlr7诱导的il-6。
23.图6示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的已确立疾病的雌性mrl/lpr小鼠的总病变。
24.图7示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的雌性mrl/lpr小鼠的颈部红斑得分。
25.图8示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的已确立疾病的雌性mrl/lpr小鼠的耳部红斑得分。
26.图9示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的已确立疾病的雌性mrl/lpr小鼠的总红斑得分。
27.图10示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的已确立疾病的雌性mrl/lpr小鼠的蛋白尿水平。
28.图11示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的已确立疾病的雌性mrl/lpr小鼠的尿ngal水平。
29.图12示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的晚期疾病的雌性mrl/lpr小鼠的总病变。
30.图13示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、和化合物(i) 泼尼松龙的雌性mrl/lpr小鼠的颈部红斑得分。
31.图14示出了用媒介物、羟氯喹、和化合物(i) 羟氯喹治疗的雌性mrl/lpr小鼠的颈部红斑得分。
32.图15示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的晚期疾病的雌性mrl/lpr小鼠的耳部红斑得分。
33.图16示出了用媒介物、化合物(i)、泼尼松龙、羟氯喹、化合物(i) 泼尼松龙、和化合物(i) 羟氯喹治疗的晚期疾病的雌性mrl/lpr小鼠的总红斑得分。
34.定义
35.为了可以更容易地理解本说明书，首先定义某些术语。在整个具体实施方式中阐述了另外的定义。
[0036]“tr7抑制剂”抑制tlr7的功能。tlr7抑制剂可以可逆或不可逆地与tlr7缔合，并且包括抗体、小分子和毫分子化合物(millimolecular compound)。
[0037]
式(i)的化合物是tlr7抑制剂，并且具有以下结构：
[0038][0039]
式(i)的化合物的化学名称是2-(4-(2-(7,8-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-3-异丙基-1h-吲哚-5-基)哌啶-1-基)乙酰胺。wo 2018/005586 a1中描述了式(i)的化合物的发现和合成。
[0040]
泼尼松龙是一种皮质类固醇药物，化学名称为：11,17-二羟基-17-(2-羟基乙酰基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢环戊二烯并[a]菲-3-酮。泼尼松龙可以以片剂、口腔崩解片、溶液或混悬剂的形式口服施用。眼科泼尼松龙可以以溶液(液体)和混悬剂(滴眼液)形式获得。泼尼松龙可以以钠盐形式获得。泼尼松龙也可以作为前药泼尼松来施用。如本文所用，“泼尼松龙”包括泼尼松龙和泼尼松两者。如本文所用，“pred”是指泼尼松龙。
[0041]
羟氯喹具有以下结构：
[0042][0043]
如本文所用，“hcq”是指羟氯喹。羟氯喹用于治疗或预防自身免疫疾病，包括狼疮和类风湿性关节炎。它可以减少狼疮中的皮肤问题，包括皮肤红斑狼疮并且防止关节炎中的肿胀/疼痛。羟氯喹以硫酸盐的形式获得，其中200mg硫酸盐相当于155mg碱。
[0044]
除非另有定义，否则结合本发明所用的科学和技术术语应该具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。
[0045]
如本文所用，术语“治疗”(“treat”、“treating”和“treatment”)是指对患者进行的任何类型的干预或过程或向患者施用活性药剂，目的是逆转、减轻、缓解、抑制或减缓或防止症状、并发症、病症或与疾病有关的生化指标的进展、发展、严重程度或复发。治疗包括治疗性治疗和防预性或预防性措施，其中目的是预防或减轻目标病症或障碍。
[0046]
药物或治疗剂的术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指有效治疗患者的疾病或障碍的药物量。在某些实施方案中，有效量是指在必需剂量下并且持续必需的时间有效实现所需治疗或预防结果的量。可以使用本领域实践者已知的各种方法评价治疗剂促进疾病消退或抑制疾病发展或复发的能力，如在临床试验期间的人受试者中、在预测人中的功效的动物模型系统中、或通过测定药剂在体外测定中的活性来评价。
[0047]
tlr7抑制剂、泼尼松龙和羟氯喹的治疗有效量可以根据诸如患者的疾病状态、年龄、性别和体重以及tlr7抑制剂、泼尼松龙和羟氯喹在患者中引发所希望的反应的能力等因素而变化。tlr7抑制剂、泼尼松龙和羟氯喹的治疗有效量涵盖tlr7抑制剂、泼尼松龙和羟氯喹的任何毒性或有害作用被治疗有益作用超过的量。
[0048]
术语“施用(administering)”和“施用(administration)”是指使用本领域技术人员已知的任何不同方法和递送系统将包含治疗剂的组合物物理引入患者。tlr7抑制剂和第二药剂的施用途径包括肠内、局部和粘膜施用，诸如口服、局部、舌下、直肠、鼻内和静脉内施用；以及肠胃外施用，诸如静脉内、肌内和皮下注射。
[0049]
与一种或多种其他治疗剂“组合”施用包括同时(并行)施用和以任何顺序连续(顺序)施用。例如，患者可以以任何顺序(连续)吞咽tlr7抑制剂的口服剂型和第二药剂的口服剂型；或者可以一起吞咽两种口服剂型(并行)。
[0050]
术语“患者”包括接受治疗性治疗的人和其他哺乳动物受试者。
具体实施方式
[0051]
在阅读以下详细描述后，本领域普通技术人员可以更容易地理解本发明的特征和优点。应当理解，出于清楚原因而在前后不同实施方案中描述的本发明某些特征也可以组合成单个实施方案。相反地，出于简要原因而在单个实施方案中描述的本发明各个特征也可以组合形成其亚组合。本文标识为示例性或优选的实施例旨在是说明性的而不是限制性的。
[0052]
本文提供了一种或多种用于治疗患者皮肤红斑狼疮的患者的方法。
[0053]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐的组合；和治疗有效剂量的第二药剂，所述第二药剂选自泼尼松龙和羟氯喹或其药学上可接受的盐。
[0054]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的泼尼松龙或其药学上可接受的盐的组合。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0055]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的泼尼松或其药学上可接受的盐的组合。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0056]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的羟氯喹或其药学上可接受的盐的组合。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0057]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自泼尼松龙和羟氯喹或其药学上可接受的盐，其中所述第二药剂与所述tlr7抑制剂同时施用。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0058]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自泼尼松龙或其药学上可接受的盐，其中所述第二药剂与所述tlr7抑制剂同时施用。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0059]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自羟氯喹或其药学上可接受的盐，其中所述第二药剂与所述tlr7抑制剂同时施用。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0060]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自泼尼松龙和羟氯喹或其药学上可接受的盐，其中所述第二药剂与所述tlr7抑制剂按顺序施用。此实施方案中包括一种方法，其中在施用第二药剂之前施用tlr7抑制剂。此实施方案中还包括一种方法，其中在第二药剂之后施用tlr7药剂。另外，此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0061]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自泼尼松龙或其药学上可接受的盐，其中所述第二药剂与所
述tlr7抑制剂按顺序施用。此实施方案中包括一种方法，其中在施用第二药剂之前施用tlr7抑制剂。此实施方案中还包括一种方法，其中在第二药剂之后施用tlr7药剂。另外，此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0062]
一个实施方案提供了一种治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的第二药剂的组合，所述第二药剂选自羟氯喹或其药学上可接受的盐，其中所述第二药剂与所述tlr7抑制剂按顺序施用。此实施方案中包括一种方法，其中在施用第二药剂之前施用tlr7抑制剂。此实施方案中还包括一种方法，其中在第二药剂之后施用tlr7药剂。另外，此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0063]
在一个实施方案中，式(i)的化合物的治疗有效剂量在0.1至100mg的范围内。
[0064]
在一个实施方案中，泼尼松龙化合物的治疗有效剂量在0.5至50mg的范围内。
[0065]
在一个实施方案中，羟氯喹化合物的治疗有效剂量在1至20mg的范围内。
[0066]
可以将治疗有效剂量的tl7抑制剂作为单一日剂量(q.d.)施用，每日分两次(b.i.d.)施用，或者每日分三个或更多个剂量施用。
[0067]
可以将治疗有效剂量的泼尼松龙作为单一日剂量(q.d.)施用，每日分两次(b.i.d.)施用，或者每日分三个或更多个剂量施用。
[0068]
可以将治疗有效剂量的羟氯喹作为单一日剂量(q.d.)施用，每日分两次(b.i.d.)施用，或者每日分三个或更多个剂量施用。
[0069]
在一个实施方案中，将治疗有效剂量的tlr7抑制剂作为单一日剂量施用。
[0070]
在一个实施方案中，将治疗有效剂量的式(i)的化合物作为单一日剂量施用。
[0071]
在一个实施方案中，治疗有效剂量的泼尼松龙作为单一日剂量施用。
[0072]
在一个实施方案中，治疗有效剂量的羟氯喹作为单一日剂量施用。
[0073]
在一个实施方案中，将治疗有效剂量的tlr7抑制剂作为单一日剂量施用，并且治疗有效剂量的选自泼尼松龙和羟氯喹的第二药剂作为单一剂量施用。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂和第二药剂每日一次施用，其中tlr7抑制剂和第二药剂同时施用，或tlr7抑制剂在施用第二药剂之前或之后立即施用。此实施方案还包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。另外，此实施方案包括一种方法，其中第二药剂是泼尼松龙。实施方案中进一步包括一种方法，其中第二药剂是羟氯喹。
[0074]
在一个实施方案中，治疗有效剂量的泼尼松龙作为单一日剂量施用。
[0075]
在一个实施方案中，治疗有效剂量的羟氯喹作为单一日剂量施用。
[0076]
在一个实施方案中，治疗有效剂量的tlr7抑制剂作为每日两次剂量施用，并且治疗有效剂量的第二药剂作为每日一次或两次剂量施用。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。
[0077]
在一个实施方案中，将治疗有效剂量的tlr7抑制剂作为每日两次剂量施用，并且治疗有效剂量的选自泼尼松龙和羟氯喹的第二药剂作为两次剂量施用。此实施方案包括一种方法，其中tlr7抑制剂和第二药剂每日两次施用，其中tlr7抑制剂和第二药剂同时每日两次施用，或tlr7抑制剂在每日两次施用第二药剂之前或之后立即施用。此实施方案还包括一种方法，其中tlr7抑制剂是式(i)的化合物。另外，此实施方案包括一种方法，其中第二药剂是泼尼松龙。实施方案中进一步包括一种方法，其中第二药剂是羟氯喹。
[0078]
在另一个实施方案中，治疗患有皮肤红斑狼疮的患者的方法包括向所述患者施用治疗有效剂量的tlr7抑制剂或其药学上可接受的盐与治疗有效剂量的选自泼尼松龙和羟氯喹或其药学上可接受的盐的第二药剂的组合以及与一种或多种另外的第三药剂的组合。合适的第三药剂的例子包括皮质类固醇、咯利普兰、卡弗他丁(calphostin)、细胞因子抑制性抗炎药(csaid)、白介素-10、糖皮质激素、水杨酸盐、一氧化氮和其他免疫抑制剂；核转位抑制剂，诸如脱氧精胍菌素(dsg)；非甾体抗炎药(nsaid)，诸如布洛芬、塞来昔布和罗非昔布；类固醇，诸如地塞米松；抗增殖剂，诸如甲氨蝶呤、来氟米特、fk506(他克莫司，)；细胞毒性药物，诸如硫唑嘌呤和环磷酰胺；tnf-α抑制剂，诸如替尼达普、抗tnf抗体或可溶性tnf受体和雷帕霉素(西罗莫司或)或其衍生物。当与化合物(i)和第二药剂的组合联合使用时，以上第三药剂可以例如以physicians’desk reference(pdr)中指示的或者如在其他方面由本领域普通技术人员确定的那些量使用。在本发明的方法中，可以在施用化合物(i)或第二药剂之前、同时或之后施用一种或多种第三药剂。
[0079]
小鼠中的皮肤红斑狼疮研究
[0080]
材料和方法
[0081]
所有动物实验程序均经机构动物伦理委员会(institutional animal ethics committee，iaec)审查和批准，并且根据由动物实验控制和监督委员会(committee for the purpose of control and supervision on experiments on animals，cpcsea)制定的程序进行。将小鼠分组安置在syngene实验室动物研究设施(syngene laboratory animal research facility)(slar，印度班加罗尔，aaalac认可的)，并且维持在正常12h光照/12h黑暗循环下，随意获得食物和水。在研究结束时，通过co2窒息对动物实施安乐死，以收集血浆和组织。
[0082]
狼疮的皮肤模型
[0083]
基于抗dsdna抗体和尿嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)的滴度，筛选12至14周龄的雌性mrl/lpr小鼠并且随机分组。用媒介物(10％乙醇；45％ peg 300；5％普朗尼克f-68；40％20mm柠檬酸盐缓冲液)或不同剂量的测试化合物(化合物(i))或参考(泼尼松龙)化合物将小鼠每日一次口服治疗，持续8周。通过单独地评价颈部、头部、面部和耳部的皮肤病变来评估媒介物、测试或参考化合物对皮肤疾病严重程度的影响。每周通过计数病变和红斑的数量来评估皮肤病变的严重程度(在0至4级的标度上，考虑零-无；1-轻度，2-中度，3-中度至重度，并且4-非常明显且重度)。通过将颈部、头部、耳部和面部病变的红斑得分相加，得出总红斑。由于雌性mrl/lpr小鼠除了皮肤病变之外还发生肾炎，因此通过测量蛋白尿、尿ngal和自身抗体滴度(如抗ro、抗smrnp和抗dsdna ab滴度)来评价媒介物、测试或参考化合物对肾病的影响。在实验结束前一周，在不同的时间点给小鼠放血，以捕获测试或参考化合物的完整药物代谢动力学特征以及还有离体全血测定中嘎德莫特(gardiquimod)诱导的il-6的抑制程度。在研究结束时取得脾脏样品，以通过流式细胞术测量治疗对产生il-6和ifnα的细胞群的影响。通过qpcr分析血液样品的基因表达，并且利用嘎德莫特诱导的il-6产生的离体血液测定来分析tlr7靶覆盖率。使用具有邓奈特检验(dunnett’s test)的单因素方差分析(one-way anova)进行统计分析，以计算测试或参考化合物处理组相对于媒介物对照组的显著性。针对每个参数计算测试或参考化合物处理组
相对于媒介物对照组的疾病严重程度的百分比降低。
[0084]
狼疮mrl/lpr模型中皮肤表现的抑制
[0085]
雌性mrl/lpr小鼠以自发的方式出现皮肤病变，使其成为广泛接受的临床前皮肤狼疮鼠模型。除了皮肤表现，这些小鼠还显示出肾损伤。在此模型中研究了化合物对皮肤病变和肾损伤标记物两者的作用。在此研究中，基于尿ngal和抗dsdna ab滴度对小鼠进行随机分组。招募后，立即用化合物(i)和泼尼松龙治疗小鼠8周。
[0086]
图1：用化合物(i)治疗后雌性mrl/lpr小鼠的皮肤病变的抑制。小鼠口服给药8周。然后评估颈部(a)、头部(b)、面部(c)和耳部(d)的皮肤病变。还通过将面部、颈部、头部和耳部上存在的病变的数量相加来表示治疗对总病变的影响。(e)数据来自每组13至15只小鼠的一个实验。通过双因素方差分析和邦费罗尼检验(bonferroni test)，相对于媒介物，*p《0.01，**p《0.001，***p《0.0001。
[0087]
图2：用化合物(i)治疗雌性mrl/lpr小鼠抑制皮肤病变的红斑。小鼠口服给药8周。在颈部(a)和耳部(b)上评估皮肤病变的红斑。还通过评估背部、面部、颈部、耳部和头部(c)上存在的皮肤病变的红斑得分来表示治疗对总红斑的影响。数据来自每组13至15只小鼠的一个实验。通过双因素方差分析和邦费罗尼检验，相对于媒介物，*p《0.01，**p《0.001，***p《0.0001。
[0088]
图3：用化合物(i)治疗的雌性mrl/lpr小鼠的自身抗体的抑制。用相应治疗向小鼠口服给药8周。给药8周后，评估抗dsdna(a)和抗ro(b)和抗smrnp抗体滴度(c)。数据来自每组13至15只小鼠的一个实验。相对于媒介物组的抑制百分比显示在每个柱上方。通过单因素方差分析和邓奈特检验，相对于媒介物，*p《0.01，**p《0.001，***p《0.0001。
[0089]
图4：用化合物(i)治疗的雌性mrl/lpr小鼠中肾损伤标记物的抑制。用相应治疗向小鼠口服给药8周。给药8周后，评估蛋白尿(a)和尿ngal(b)。数据来自每组13至15只小鼠的一个实验。相对于媒介物组的抑制百分比显示在每个柱上方。通过单因素方差分析和邓奈特检验，相对于媒介物，*p《0.01，**p《0.001，***p《0.0001。
[0090]
图5：在雌性mrl/lpr狼疮模型的离体测定中，化合物(i)抑制tlr7依赖性il-6诱导。用相应治疗向小鼠口服给药7周。给药7周后，在不同时间点抽取小鼠全血，并且用嘎德莫特激发16至18小时。通过elisa评估il-6抑制。数据来自一个实验，其中在每个时间点对每组三只小鼠进行测量。
[0091]
与媒介物相比，用化合物(i)的治疗提高了雌性mrl/lpr狼疮模型中小鼠的存活率。
[0092]
表1
[0093][0094]
缩写：na，不适用。
[0095]
表1中的数据显示，在此研究中，用化合物(i)的治疗提高了小鼠的存活率。尽管仅
87％的媒介物小鼠存活了8周，但接受0.25和0.75mg/kg剂量的化合物(i)的小鼠实现了100％的存活。
[0096]
如图1所示，如通过测量面部、颈部、头部和耳部上的病变的数量所评估，化合物(i)显示出显著且稳健的剂量依赖性皮肤表现抑制。还通过将面部、颈部、头部和耳部上存在的病变的数量相加来表示治疗对总病变的影响。此外，还通过评估颈部和耳部上的红斑来评价化合物(i)的效果，并且单独表示。另外，在评估背部、面部、颈部、耳部和头部上存在的皮肤病变的红斑后，也评价了皮肤病变的总红斑。图2观察到用化合物(i)治疗后红斑显著减少。图3中示出了在8周时间点用化合物(i)治疗的小鼠和媒介物小鼠中的病变的代表性图像。
[0097]
在小鼠中用化合物(i)治疗的情况下观察到皮肤病变的剂量依赖性抑制，包括病变的数量以及病变的红斑。用0.25mg/kg和0.75mg/kg剂量的化合物(i)观察到更大的功效。这两种剂量导致提高的存活率100％，相对于媒介物治疗小鼠87％的存活率。在这些剂量下，如通过肾损伤标记物如蛋白尿和尿ngal所评估，化合物(i)显示出对狼疮性肾炎的抑制。另外，在这两种剂量下，化合物(i)显示出显著抑制抗dsdna、抗ro和抗smrnp自身抗体滴度，并且抑制i型ifn反应基因表达。
[0098]
组合研究
[0099]
表2
[0100]
编号治疗剂量(mg/kg)n1媒介物5ml/kg，qd152化合物(i)0.25153泼尼松龙1154hcq100155化合物(i) 泼尼松龙0.25 1156化合物(i) hcq0.25 100157泼尼松龙1015
[0101]
1.在mrl/lpr狼疮模型中化合物(i)与泼尼松龙以及化合物(i)与羟氯喹(hqc)组合研究-已确立疾病
[0102]
将15周龄雌性mrl/lpr小鼠治疗5周。当小鼠显示出总皮肤病变得分的组平均值为1.5至2时，招募它们。总皮肤病变得分包括颈部/背部、面部、头部和耳部病变的累计得分。
[0103]
表3
[0104]
[0105][0106]
图6：与用媒介物的治疗相比，用化合物(i)的治疗抑制了已确立疾病的小鼠的皮肤病变的总数量。用泼尼松龙和羟氯喹的单一疗法显示出对皮肤病变的抑制，但不如用化合物(i)的治疗。与羟氯喹和1mpk泼尼松龙单一疗法相比，用化合物(i) 泼尼松龙的组合以及化合物(i)和羟氯喹的组合的治疗显示出增加的抑制。
[0107]
图7：与媒介物相比，用化合物(i)的治疗抑制了已确立疾病的小鼠的颈部上的皮肤病变的红斑。用泼尼松龙和羟氯喹的单一疗法显示出对小鼠颈部上的皮肤病变的红斑的抑制。用化合物(i) 泼尼松龙的组合以及化合物(i)和羟氯喹的组合的治疗显示出对小鼠颈部上的皮肤病变的红斑的抑制。
[0108]
图8：与媒介物相比，用化合物(i)的治疗抑制了已确立疾病的小鼠的耳部上的皮肤病变的红斑。用泼尼松龙和羟氯喹的单一疗法显示出对小鼠耳部上的皮肤病变的红斑的抑制，但不如用化合物(i)的治疗。与羟氯喹和1mpk泼尼松龙单一疗法相比，用化合物(i) 泼尼松龙的组合以及化合物(i)和羟氯喹的组合的治疗显示出对皮肤病变红斑的抑制增加。
[0109]
图9：与媒介物相比，用化合物(i)的治疗抑制了已确立疾病的小鼠的皮肤病变的总红斑。用泼尼松龙和羟氯喹的单一疗法显示出对小鼠上的皮肤病变的总红斑的抑制。用化合物(i) 泼尼松龙的组合以及化合物(i)和羟氯喹的组合的治疗显示出对小鼠上的皮肤病变的总红斑的抑制。
[0110]
图10：用化合物(i)的治疗显示出在已确立疾病中肾损伤标记物蛋白尿和尿嗜中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(ngal)的抑制。用泼尼松龙或羟氯喹的单一治疗显示出对肾损伤标记物蛋白尿的抑制。化合物(i)与泼尼松龙的组合以及化合物(i)与羟氯喹的组合显示出对肾损伤标记物蛋白尿的抑制增加。
[0111]
图11：用化合物(i)的治疗显示出在已确立疾病中肾损伤标记物蛋白尿ngal的抑制。用泼尼松龙或羟氯喹的单一治疗显示出对肾损伤标记物尿ngal的抑制。化合物(i)与泼尼松龙的组合以及化合物(i)与羟氯喹的组合显示出对肾损伤标记物尿ngal的抑制增加。
[0112]
2.在mrl/lpr狼疮模型中化合物(i)与泼尼松龙以及化合物(i)与羟氯喹(hqc)组合研究-晚期疾病
[0113]
将16周龄雌性mrl/lpr小鼠治疗5周。当小鼠显示出总皮肤病变得分的组平均值为2至2.5时，招募它们。总皮肤病变得分包括颈部/背部、面部、头部和耳部病变的累计得分。表2示出了各治疗组中的治疗、剂量和小鼠数量。
[0114]
表4
[0115][0116][0117]
图12：与用媒介物的治疗相比，用化合物(i)的治疗抑制了晚期疾病的小鼠的皮肤病变的总数量。用泼尼松龙和羟氯喹的单一疗法显示出对皮肤病变的抑制，但不如用化合物(i)的治疗。与羟氯喹和1mpk泼尼松龙单一疗法相比，用化合物(i) 泼尼松龙的组合以及化合物(i)和羟氯喹的组合的治疗显示出增加的抑制。
[0118]
图13：与媒介物相比，用化合物(i)的治疗抑制了晚期疾病的小鼠的颈部上的皮肤病变的红斑。用泼尼松龙的单一疗法显示出对小鼠颈部上的皮肤病变的红斑的抑制。用化合物(i) 泼尼松龙的组合的治疗显示出对小鼠颈部上的皮肤病变的红斑的抑制。
[0119]
图14：与媒介物相比，用化合物(i)的治疗抑制了晚期疾病的小鼠的颈部上的皮肤病变的红斑。用羟氯喹的单一疗法显示出对小鼠颈部上的皮肤病变的红斑的抑制。与用羟氯喹的治疗相比，用化合物(i)的治疗和用化合物(i) 羟氯喹的组合的治疗显示出对小鼠颈部上的皮肤病变红斑的抑制增加。
[0120]
图15：与媒介物相比，用化合物(i)的治疗抑制了晚期疾病的小鼠的耳部上的皮肤病变的红斑。用泼尼松龙和羟氯喹的单一疗法显示出对小鼠耳部上的皮肤病变的红斑的抑制，但不如用化合物(i)的治疗。与羟氯喹和1mpk泼尼松龙单一疗法相比，用化合物(i) 泼尼松龙的组合以及化合物(i)和羟氯喹的组合的治疗显示出对皮肤病变红斑的抑制增加。
[0121]
图16：与媒介物相比，用化合物(i)的治疗抑制了晚期疾病的小鼠的皮肤病变的总红斑。用泼尼松龙和羟氯喹的单一疗法显示出对小鼠上的皮肤病变的总红斑的抑制。与羟氯喹和1mpk泼尼松龙单一疗法相比，用化合物(i) 泼尼松龙的组合以及化合物(i)和羟氯喹的组合的治疗显示出对小鼠上的皮肤病变的总红斑的抑制。