局部抗微生物组合物的制作方法

1.本发明涉及局部抗微生物组合物，特别是化妆品组合物，且更具体地涉及包含活性物质的化妆品组合物，所述活性物质相互作用以提供协同抗微生物作用，并且至少可用于对抗与如头皮屑和痤疮的美容相关病症有关的一些微生物。
2.发明背景
3.本发明涉及一种用于清洁和/或护理任何身体部位的抗微生物组合物，其特别适用于毛发以及头皮护理、手部卫生或用于面部护理和清洁。
4.头皮屑是一个在全球范围内影响许多人的问题。其症状表现为团块状死皮细胞从头皮上脱落。它们为白色且容易看到，因此它们呈现出美学上令人不愉快的外观。导致头皮屑的一个因素是马拉色菌属(malassezia)酵母的某些成员。为了对抗它们，可以使用各种抗头皮屑组合物，例如洗发剂。通常这种洗发剂含有表面活性剂和一种或多种抗头皮屑剂。典型的抗头皮屑剂是吡啶硫酮金属，例如吡啶硫酮锌(zpto)、羟甲辛吡酮(吡罗克酮乙醇胺)、唑类抗微生物剂(例如氯咪巴唑)、硫化硒及其组合。
5.尽管通过在此类洗发剂中使用上述活性物质在很大程度上缓解了头皮屑问题，但仍需要更为有效的组合物。
6.痤疮，也称为寻常痤疮，是一种影响几乎所有青少年和成人的常见皮肤病症。其具有涉及异常角质化和过度皮脂产生的复杂病因。痤疮通常发生在皮脂腺丰富的区域，如面部、颈部和背部。痤疮丙酸杆菌(cutibacterium acnes)(c.acnes，先前称为propionibacterium acnes或p.acnes)细菌也与痤疮的发生有关。已经以多种方式治疗痤疮。大多数治疗需要数周至数月才能看到明显的变化。具有抗细菌作用的过氧化苯甲酰已被用于轻度痤疮病例，并被认为预防痤疮的进一步形成。在非常严重的痤疮病例中，已经使用抗生素如四环素、红霉素和克林霉素。
7.因此，本发明的一个目的在于提供一种相比于单个组分表现出协同抗微生物活性的局部组合物。


技术实现要素：

8.我们已经确定，当通常在天然植物中发现的某种活性物质与典型的抗微生物活性物质(其为吡罗克酮、辛酰羟肟酸、苯甲羟肟酸或吡罗克酮乙醇胺中的至少一种)一同配制时，该组合对与如头皮屑和痤疮等病症相关的一些微生物高度有效。这使得我们推断，包含上述组合的组合物可以具备抗头皮屑、抗痤疮和一般抗微生物活性，并且可以适合用于例如洗发剂、身体和面部护理中。以上所指的某种活性物质是常山碱。
9.因此，根据第一方面，公开了一种局部组合物，其包含：
10.(i)抗微生物活性物质，其为吡罗克酮、辛酰羟肟酸、苯甲羟肟酸或吡罗克酮乙醇胺中的至少一种；和
11.(ii)常山碱。
12.根据第二方面，公开了一种提供局部抗微生物益处的非治疗性方法，其包括施用
安全和有效量的第一方面的局部抗微生物组合物的步骤。
13.根据第三方面，公开了一种用于在人体或动物体的局部表面上提供抗微生物益处的第一方面的组合物。
具体实施方式
14.根据本发明的组合物包含可以具有多种不同形式的局部可接受的载体、媒介物或稀释剂。局部可接受的载体应优选为非刺激性的。因此，“局部可接受的”意旨所述载体适用于皮肤的局部应用而不会引起任何不希望的安全性或毒性问题。换句话说，这些载体适合用于哺乳动物皮肤上。典型的载体可以是水-醇体系(例如液体和凝胶)、无水油或硅氧烷基体系或乳液体系的形式，包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅氧烷包水包油乳液。所述乳液可涵盖广泛的稠度，包括稀洗剂(其也可适合于喷雾或气雾剂递送)、乳膏状洗剂、轻乳膏和重乳膏。乳液也可以包括微乳液体系。其它合适的局部载体包括无水的固体和半固体(例如凝胶和棒)；及基于无水的摩丝体系。
15.在下文中描述了可用于本发明的局部载体体系的非限制性实例。
16.通过阅读以下详细描述和所附权利要求，这些和其它方面、特征和优点将对于本领域普通技术人员而言变得显而易见。为了避免疑问，可以在本发明的任何其他方面中使用本发明的一个方面的任何特征。词语“包含”旨在表示“包括”，但不一定是“由
……
组成”或“由
……
构成”。换句话说，所列出的步骤或选项不必是穷举的。应指出的是，以下说明书中给出的实施例旨在阐明本发明，而不旨在将本发明限制于那些实施例本身。类似地，除非另有说明，否则本文所包含的所有百分比和比率均为重量/重量百分比。
17.除了在操作和对比实施例中，或在另有明确说明的情况下，本说明书中所有表示材料量或反应条件、材料的物理性质和/或用途的数字均应理解为由单词“约”进行修饰。除非另有说明，否则以“x至y”格式表示的数值范围应理解为包括x和y。当对于特定特征以“x至y”的格式描述多个优选范围时，应理解的是，也考虑了组合不同端点的所有范围。在适当的情况下，参考上文单个章节的本发明的各种特征经适当改变也适用于其他章节。因此，一个章节中指定的特征可以与其他章节中指定的特征进行适当的组合。添加任何章节标题仅出于方便起见，而无意以任何方式限制本公开。
18.局部组合物是指以免洗或洗去型的形式用于外部施用的组合物，其用于清洁或消毒局部区域，例如哺乳动物，尤其是人类的皮肤和/或毛发和/或口腔。这种组合物包括应用于人体的任何产品，其也用于改善外观、清洁、气味控制或总体美观。根据一个方面，根据本发明的组合物是洗去型组合物。或者，它们是免洗型组合物。本发明的组合物可以呈液体、洗剂、乳膏、泡沫或凝胶或者化妆水的形式，或用工具或经由面膜、护垫或贴剂施用。如本文所用，“皮肤”是指包括脸部和身体上的皮肤(例如颈部、胸部、背部、手臂、腋下、手、腿、臀部和头皮)。本发明的组合物也与除皮肤以外的人体的任何其它外部基质(例如毛发)上的应用有关。
19.本文所用的“抗微生物组合物”是指包括用于局部施用于哺乳动物，特别是人类的皮肤、毛发和/或头皮的组合物。这种组合物通常在几秒钟至长达24小时的时间内施用于身体的所需局部表面上。当施用时间短，例如约几秒钟至几分钟，然后用水冲洗掉或擦掉该组合物时，这种组合物称为清洁组合物或洗去型组合物。当将组合物施用较长时间，例如几分
钟至长达24小时，且通常在常规个人清洁过程中被洗掉时，这种组合物称为免洗型组合物。更优选用于预防或减轻头皮和/或毛发上的头皮屑的症状，用于抗痤疮益处或用于对人体的手或其他部位进行消毒。
20.如本文所用，“毛发护理组合物”旨在包括局部施用于毛发的组合物。此类组合物的非限制性实例包括免洗型洗发液、乳膏、及洗去型洗发剂、调理剂、沐浴露或皂条。当本发明的组合物是毛发护理组合物时，它优选为洗去型组合物，尤其是洗发剂或调理剂。
21.本发明涉及一种局部组合物，其包含：
22.(i)抗微生物活性物质，其为吡罗克酮、辛酰羟肟酸、苯甲羟肟酸或吡罗克酮乙醇胺中的至少一种；和
23.(ii)常山碱。
24.异羟肟酸和异羟肟酸衍生物
25.异羟肟酸是一类带有官能团rc(o)n(oh)r'的有机化合物，其中r和r'为有机残基，且co为羰基。
26.根据本发明的抗微生物活性物质是至少一种异羟肟酸或异羟肟酸衍生物。异羟肟酸为吡罗克酮、辛酰羟肟酸或苯甲羟肟酸，更优选为辛酰羟肟酸。异羟肟酸衍生物为吡罗克酮乙醇胺。
27.因此，根据本发明的抗微生物活性物质为吡罗克酮、辛酰羟肟酸、苯甲羟肟酸或吡罗克酮乙醇胺中的至少一种。更优选为根据本发明的抗微生物活性物质为辛酰羟肟酸或吡罗克酮乙醇胺中的至少一种。最优选地抗微生物活性物质为吡罗克酮乙醇胺。
28.吡罗克酮是环状异羟肟酸，其由分别在4位和6位带有甲基和2,4,4-三甲基戊基取代基的1-羟基吡啶-2-酮组成。cas号为50650-76-5，且该化合物具有如下通式(a)：
[0029][0030]
辛酰羟肟酸是源自椰子油的氨基酸。它是一种防腐剂和广谱抗真菌剂。cas号为7377-03-9，且该化合物具有如下通式(b)：
[0031][0032]
苯甲羟肟酸是异羟肟酸中的一种。cas号为495-18-1，且该化合物具有如下通式(c)：
[0033]
[0034]
吡罗克酮乙醇胺是异羟肟酸衍生物吡罗克酮的醇胺盐，其为典型的抗微生物活性物质。其通常被称为吡罗克酮乙醇胺，商品名为
[0035]
根据本发明的吡罗克酮乙醇胺是1-羟基-4-甲基-6-(2,4,4-三甲基戊基)-2(1h)-吡啶酮与2-氨基乙醇的1：1化合物，也称为1-羟基-4-甲基-6-(2,4,4-三甲基戊基)-2(1h)-吡啶酮单乙醇胺盐。cas号为68890-66-4，且该化合物具有如下通式(d)：
[0036][0037]
本发明的组合物中作为异羟肟酸或异羟肟酸衍生物中的至少一种的抗微生物活性物质的量取决于局部组合物的类型和所用其它抗微生物活性物质的确切性质。所述组合物优选包含以所述组合物的重量计0.01至10重量％的所述抗微生物活性物质，更优选0.1至5重量％，进一步优选0.5至3重量％。
[0038]
常山碱
[0039]
根据本发明的常山碱是喹唑啉酮生物碱。cas号为24159-07-7，且该化合物具有如下通式(e)：
[0040][0041]
此类常山碱也可以在植物-常山(dichroa febrifuga)或者八仙花(hydrangea macrophylla)中找到。
[0042]
本发明的组合物中常山碱的量优选为0.01至10重量％。更优选地该量为以所述组合物的重量计0.01至5％，最优选0.1至2％。
[0043]
本发明的组合物优选包含常山的提取物，或者八仙花的提取物，其又包含所述常山碱。选择测定量的提取物，使得其中所包含的所需量的常山碱包含在组合物中。
[0044]
含有常山碱的植物提取物可从多种不同来源购得。例如，常山的根的提取物可从中国科学院大连化学物理研究所获得。或者，本领域普通技术人员能够通过使用本领域已知的任何合适的分离和纯化方法分离常山碱。在一些实施方式中，常山碱的提取物可以从干燥的常山植物获得，并且可以通过本领域已知或待开发的任何手段制备。
[0045]
通常，可以使用包括水和醇的水性溶剂或使用超临界二氧化碳制备植物提取物，其发挥提取有益的植物组分的作用。例如，将药草(herb)原材料粉碎成小块，和在10倍体积的去离子水中浸泡30分钟，然后回流提取30分钟两次。过滤后，可以干燥液体以获得提取物粉末。
[0046]
或者，将药草原材料粉碎成小块，且在10倍体积的95％乙醇中浸泡24小时两次，合并两次过滤溶液并过滤。蒸发移除上清液中的溶剂以获得提取物粉末。
[0047]
由于该组合物包含抗微生物活性物质和常山碱，优选保持活性成分的量之间的比率以得到最佳功效。优选地，所述常山碱的量与所述抗微生物活性物质的重量比为1：10至100：1，更优选1：2至50：1，进一步优选1：1至20：1，特别优选3：1至10：1，最优选5：1至10：1。
[0048]
分数抑制浓度的总和(σfic)广泛用于抗微生物成分的组合的情况中。它是确定抗微生物成分(当组合使用时)是否具有协同作用或拮抗作用或两者都不具有(即加和效应)的工具。本发明人已利用σfic测试来评估抗微生物活性物质与常山碱对糠秕马拉色菌(m.furfur)的组合作用。
[0049]
据信，当根据本发明的抗微生物活性物质和常山碱存在于本发明的组合物中，常山碱与所述抗微生物活性物质协同地相互作用以使其甚至更为有效。
[0050]
优选地，本发明的局部组合物包含吡罗克酮乙醇胺和常山碱。在这种情况下，优选常山碱的量与吡罗克酮乙醇胺的量的重量比为1：10至100：1，或者1：2至50：1，再或者1：1至10：1。
[0051]
优选地，本发明的局部组合物包含辛酰羟肟酸和常山碱。在这种情况下，优选地常山碱的量与辛酰羟肟酸的量的重量比为1：10至100：1，或者1：2至50：1，再或者1：1至10：1。
[0052]
其他成分
[0053]
本发明的组合物优选包含化妆品可接受的媒介物。化妆品可接受的媒介物使得组合物可以例如作为洗发剂、调理剂、沐浴露、洗手或洗面奶产品、乳膏、洗剂、凝胶、粉剂、软膏、洗手液或皂条制备，并且其余成分会相应地变化。
[0054]
在一个方面，根据本发明的局部组合物是毛发护理组合物。优选地，这种组合物是洗发剂、毛发调理剂、精华素或发油。最优选地，所述局部用组合物是对至少一些马拉色菌属的种(malessezia spp)有效的抗头皮屑组合物。
[0055]
当本发明的组合物是洗发剂时，它优选包含通常包含在这种组合物中的其它成分。
[0056]
洗发剂优选包含1至20重量％，更优选2至16重量％，还优选3至16重量％的阴离子表面活性剂，例如烷基硫酸盐和/或乙氧基化的烷基硫酸盐表面活性剂。优选的烷基硫酸盐为c
8-18
烷基硫酸盐，更优选c
12-18
烷基硫酸盐，优选地为与增溶阳离子如钠、钾、铵或取代铵的盐的形式。
[0057]
特别优选的烷基醚硫酸盐为具有下式的那些：ro(ch2ch2o)nso3m；其中r为具有8至18个(优选12至18个)碳原子的烷基或烯基；n是具有大于至少0.5，优选为1与3，更优选2与3的平均值的数；且m是增溶阳离子，例如钠、钾、铵或取代的铵。一个实例是月桂基醚硫酸钠(sles)。特别优选平均乙氧基化度为0.5至3，优选1至3的sles。
[0058]
根据本发明的洗发剂组合物可以包含一种或多种化妆品上可接受且适于局部施用于毛发的其他阴离子清洁表面活性剂。实例包括烷芳基磺酸盐、烷基琥珀酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基醚磺基琥珀酸盐、n-烷基肌氨酸盐、烷基磷酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚羧酸及其盐，特别是它们的钠、镁、铵及单乙醇胺盐、二乙醇胺盐和三乙醇胺盐。烷基和酰基通常含有8至18个、优选10至16个碳原子，并且可以是不饱和的。烷基醚磺基琥珀酸盐、烷基醚磷酸盐和烷基醚羧酸及其盐每个分子可以包含1至20个环氧乙烷或环氧丙烷单元。
[0059]
通常，合适的阴离子表面活性剂包括油基琥珀酸钠、月桂基磺基琥珀酸铵、月桂基醚磺基琥珀酸钠、十二烷基苯磺酸钠、三乙醇胺十二烷基苯磺酸盐、月桂基醚羧酸和n-月桂基肌氨酸钠。合适的优选的其他阴离子清洁表面活性剂是月桂基醚磺基琥珀酸(n)eo钠(其中n为1至3)、月桂基醚羧酸(n)eo(其中n为10至20)。
[0060]
任何前述阴离子清洁表面活性剂的混合物也可能是合适的。本发明的洗发剂组合物优选另外包含0.1至10重量％，更优选0.5至8重量％的两性表面活性剂，优选甜菜碱表面活性剂，例如烷基酰胺丙基甜菜碱表面活性剂，例如椰油酰胺丙基甜菜碱。
[0061]
所述组合物的ph优选等于或高于4.0，更优选在5.0至10.0的范围内。
[0062]
优选地，洗发剂组合物还包含0.1至3重量％，更优选0.1至1.5重量％的锌化合物。据信在组合物中锌的存在改善抗头皮屑功效。合适的锌化合物是zpto、氧化锌、柠檬酸锌、丙二酸锌、碳酸锌或其组合。
[0063]
优选地，洗发剂组合物还包含0.01至2重量％，更优选0.025至0.75重量％的康唑杀真菌剂。优选地，所述康唑杀真菌剂是酮康唑或氯咪巴唑或其混合物。据信康唑杀真菌剂的存在改善吡啶硫酮锌(zpto)的沉积。
[0064]
洗发剂组合物还优选包含悬浮剂。合适的悬浮剂是聚丙烯酸、丙烯酸的交联聚合物、丙烯酸与疏水性单体的共聚物、含羧酸的单体与丙烯酸酯的共聚物、丙烯酸和丙烯酸酯的交联共聚物、杂多糖胶和结晶长链酰基衍生物。所述长链酰基衍生物理想地选自乙二醇硬脂酸酯、具有16至22个碳原子的脂肪酸的链烷醇酰胺及其混合物。乙二醇二硬脂酸酯和聚乙二醇二硬脂酸酯是优选的长链酰基衍生物，因为它们赋予组合物珠光性。聚丙烯酸可作为420、488或493购得。也可以使用与多官能剂交联的丙烯酸的聚合物；它们可以910、934、941和980购得。含羧酸的单体和丙烯酸酯的合适共聚物的实例为1342。所有的carbopol(商标)材料都可以购自goodrich。
[0065]
合适的丙烯酸和丙烯酸酯的交联聚合物是tr1和tr2。合适的杂多糖胶是黄原胶，例如可作为kelzan购得。
[0066]
可以使用任何以上悬浮剂的混合物。优选丙烯酸的交联聚合物和结晶长链酰基衍生物的混合物。
[0067]
悬浮剂(如果包含)通常以0.1至10重量％，优选0.5至6重量％存在。
[0068]
本发明的组合物可以包含其他成分以提高性能和/或消费者可接受性。这样的成分包括香料、染料和颜料、ph调节剂、珠光剂或遮光剂、粘度调节剂、防腐剂和天然毛发营养成分，例如植物制剂、水果提取物、糖衍生物和氨基酸。
[0069]
优选地洗发剂组合物是水基的。它优选包含70至95重量％的水。
[0070]
毛发调理剂
[0071]
或者，本发明的局部组合物是毛发调理剂。
[0072]
当通过本发明的组合物递送调理益处时，该组合物称为毛发调理剂。通常，用于毛发护理组合物中的最常见的调理剂是水不溶性的油性材料，例如矿物油、天然存在的油如甘油三酯和硅氧烷聚合物。通过将油性材料沉积在毛发上导致形成膜而获得调理益处，这使得毛发在湿润时更容易梳理，且在干燥时更易于管理。特别有用的调理剂是硅氧烷，优选
非挥发性硅氧烷。有利的是，本文的组合物可包含一种或多种硅氧烷。硅氧烷是以分散或悬浮颗粒形式存在的调理剂。它们旨在沉积在毛发上，从而在用水冲洗毛发后保留。合适的硅油可包括聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷、聚醚硅氧烷共聚物及其混合物。氨基硅氧烷通常与洗发剂组合物一起进行配制。氨基硅氧烷是含有至少一个伯胺、仲胺、叔胺或季铵基团的硅氧烷。也可以使用高分子量硅橡胶。另一种有用的类型是交联的硅氧烷弹性体，例如二甲基硅氧烷/乙烯基/二甲基硅氧烷交联聚合物(例如dow corning 9040和9041)。
[0073]
本发明的毛发调理剂组合物优选包含0.1至10重量％、更优选约0.1至约8重量％的硅氧烷。或者，该毛发调理剂是不含硅氧烷的，从而包含不超过1重量％的硅氧烷。所述组合物的ph优选大于4.0，更优选5.0至7.0。
[0074]
本发明的毛发调理剂组合物优选还可以包含0.5至10重量％的脂肪醇。据信在调理组合物中组合使用脂肪醇和阳离子表面活性剂是特别有利的，因为这导致形成阳离子表面活性剂分散在其中的层状相。
[0075]
代表性的脂肪醇包含8至22个碳原子、更优选16至22个碳原子。脂肪醇通常是含有直链烷基的化合物。合适的脂肪醇的实例包括鲸蜡醇、硬脂醇及其混合物。这些材料的使用也是有利的，因为它们有助于本发明组合物的整体调理性能。
[0076]
皮肤清洁
[0077]
本发明的组合物可用于皮肤护理，例如，身体或面部清洗。局部组合物还可包含表面活性剂。优选的表面活性剂是非离子表面活性剂。
[0078]
因此，在高度优选的方面，局部组合物包括选自阴离子表面活性剂的组的表面活性剂。
[0079]
当存在表面活性剂时，局部组合物优选包含按组合物重量计1至90％的表面活性剂。
[0080]
当使用表面活性剂时，特别优选的表面活性剂是皂。皂是适用于本发明局部组合物的个人洗涤应用的表面活性剂。当存在时，皂在本发明中优选以组合物重量的1至90％的量存在，优选10至85％，更优选25至75％。优选的组合物可以包含其它已知成分，例如香料、颜料、防腐剂、润肤剂、防晒剂、乳化剂、胶凝剂和增稠剂。这些成分的选择很大程度取决于组合物的形式。
[0081]
水是优选的载体。当水存在时，它优选以组合物重量的至少1％，更优选至少2％，还优选至少5％存在。当水是载体时，优选的液体组合物包含10至99.8重量％的水。该液体局部组合物可用作皮肤消毒液，用于皮肤清洁，特别是用于洗手或面部清洗。当水是载体时，优选的固体组合物包含5至30重量％的水。
[0082]
固体局部组合物优选为成型固体的形式，更优选为条。固体局部组合物特别适用于皮肤清洁，特别是用于洗手或面部清洗。
[0083]
根据另一方面，无机颗粒材料也是合适的载体。当无机颗粒材料为载体时，局部组合物为固体形式。优选地，无机颗粒材料是滑石。当无机颗粒材料是滑石时，固体抗微生物组合物作为滑石粉特别适用于面部或身体应用。
[0084]
在本发明的另一方面，本发明的组合物适合用于个人卫生的擦巾。
[0085]
根据本发明的用途和方法
[0086]
根据第二方面，公开了一种用于在人体或动物体的局部表面上提供抗微生物益处的第一方面的组合物。还公开了一种用于在人体或动物体的局部表面上对抗至少一些马拉色菌属的种的局部组合物。优选地，所述局部组合物是有效对抗人体或动物体局部表面上的至少一些马拉色菌属的种的抗头皮屑组合物。或者，所述局部组合物是至少有效对抗痤疮丙酸杆菌的抗痤疮组合物。再或者，所述局部组合物是至少有效对抗金黄色葡萄球菌的洗去型或免洗型组合物。优选地，根据本发明的用途是用于非治疗性目的。优选地，所述非治疗性目的意指用于美容目的。或者，根据本发明的组合物的用途是用于治疗目的。本领域普通技术人员理解组合物的治疗和非治疗用途之间的差异。
[0087]
根据另一方面，公开了一种在人体或动物体的局部表面上提供局部抗微生物益处的非治疗性方法，其包括施用安全和有效量的第一方面的局部组合物的步骤。术语“安全和有效量”是本领域技术人员所公知的，并且该量可以根据产品形式而变化，例如，在免洗型组合物的情况下，所述量可以是每次应用1到2毫升，而在洗发剂的情况下，该量可以是每次应用5到10毫升。该方法可用于预防或治疗痤疮、头皮屑或用于维持一般卫生。
[0088]
优选地，局部组合物是有效对抗至少一些马拉色菌属的种的抗头皮屑组合物。或者，局部组合物是至少有效对抗痤疮丙酸杆菌的抗痤疮组合物。再或者，局部组合物是至少有效对抗金黄色葡萄球菌的洗去型或免洗型组合物。
[0089]
所述方法在常山碱与对糠秕马拉色菌细胞的抗微生物活性物质的重量比在1：10至100：1范围内时更有效，在3：1至100：1的范围内时甚至更为有效。
[0090]
根据另一方面，公开了一种用于在人体或动物体的局部表面上提供抗微生物益处的组合物。
[0091]
根据另一方面，公开了一种用作至少对一些马拉色菌属的种有效的抗头皮屑组合物的局部组合物。根据再另一方面，公开了一种用作至少对痤疮丙酸杆菌有效的抗痤疮组合物的局部组合物。根据又一方面，公开了一种至少对金黄色葡萄球菌有效的洗去型或免洗型组合物。
[0092]
现在将在如下非限制性实施例的帮助下对本发明进行详细描述。
[0093]
实施例
[0094]
实施例1：根据本发明的示例性组合物的抗微生物功效是针对糠秕马拉色菌测定的。
[0095]
现简要说明相关程序。
[0096]
方法1：针对糠秕马拉色菌的σfic测定
[0097]
步骤1：微生物培养和准备
[0098]
将糠秕马拉色菌(cbs1878)保持在md琼脂平板上(溶液a)上，在20ml生长培养基糠疹癣菌属(pityrosporum)肉汤(pb，溶液b)中培养。然后将它们在32℃下伴随振荡孵育48小时。然后，将1ml的第一肉汤培养物转移到9ml新鲜pb中，并在32℃下伴随振荡孵育48小时。最终培养物应包含2至6
×
106个细胞/ml。这是通过使用pb稀释至5
×
105个细胞/ml来实现的。
[0099]
溶液a的制备：
[0100]
改性dixon琼脂(md)
[0101]
36g麦芽提取物(oxoid)
[0102]
6g真菌蛋白胨(oxoid)
[0103]
10纯化琼脂(oxoid)
[0104]
20g牛胆汁(oxoid)
[0105]
2ml油酸(sigma)
[0106]
2ml甘油(sigma)
[0107]
10ml tween 40(sigma)
[0108]
去离子水至1000ml
[0109]
50mg(1小瓶)溶解在2ml 95％乙醇中 氯霉素(oxoid sr078e)(确保彻底搅拌，包括高压灭菌后)
[0110]
溶液b的制备：
[0111]
糠疹癣菌属肉汤(pb)
[0112]
10g
ꢀꢀ
细菌蛋白胨
[0113]
0.1g 酵母提取物
[0114]
10g
ꢀꢀ
牛胆汁
[0115]
2.5g 牛磺胆酸
[0116]
10g
ꢀꢀ
葡萄糖
[0117]
1l
ꢀꢀꢀ
去离子水
[0118]
0.5ml tween60
[0119]
1ml
ꢀꢀ
甘油
[0120]
调节ph至6.2
[0121]
除菌后
[0122]
0.5ml uht奶
[0123]
步骤2：体外敏感性试验
[0124]
被连续稀释(2倍)以在生长培养基中以60-1000ppm的范围制备。测试的常山碱(原液：10mg/ml)在dmso中连续2倍稀释而以5000-5ppm范围制备。通过将10μl的溶液与10ul测试化合物混合，在96孔板中制备和测试化合物的二元组合。将每个孔中的溶液进一步与180μl的糠秕马拉色菌菌株悬浮液在pb中混合。
[0125]
测试板中的最终细胞密度约为5
×
104细胞/ml。(20倍稀释)后以ppm(百万分率)计的每种成分的最终浓度如下。这些浓度中的每一个均被测试以确定与常山碱的组合(中任何一种)的fic值。肉汤培养基和溶剂对照(作为阴性对照)用于结果比较。
[0126]-6.25、3.125和0ppm。
[0127]
常山碱-500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.8、3.9、2.0、1.0、0.5和0ppm。
[0128]
使用多通道移液管混合化合物和菌株悬浮液。随后将96孔板在培养箱中孵育。读取od600(起始)。对于糠秕马拉色菌，孵育2天后，读取od600(结束)。然后加入阿尔玛蓝(alamar blue)(10％)，并孵育8小时。最后，监测指示剂的颜色变化以检查微生物生长或生长抑制的可见迹象。如果颜色变为红色，则表示(微生物的)生长，而蓝色表示无生长或生长受到抑制。
[0129]
步骤3：计算：∑fic测试
[0130]
(1)最小抑制浓度(mic)：
[0131]
mic定义为在测试条件下提供完全微生物生长抑制(如阿尔玛蓝的蓝色所指示)的活性物质的绝对最低浓度。
[0132]
(2)分数抑制浓度(fic)：
[0133]
∑fic测试是基于先前在hall mj,middleton rf,&westmacott d(1983),the fractional inhibitory concentration(fic)index as a measure of synergy.journal of antimicrobial chemotherapy 11(5):427-433中描述的原理。过程如下：
[0134]
使用分数浓度(fc)和分数抑制浓度(fic)的概念广泛研究了抑制性抗微生物剂在分离物和混合物中的不同性能。参数可被定义如下：
[0135][0136]
(3)协同性和加和性
[0137]
抗微生物剂之间的相互作用可以是加和的、协同的或拮抗的，这取决于组合的功效是否等同于、大于或小于单独测试时单个组分的相同总浓度所获得的功效。
[0138]
在记录所有观察结果并制成表格后，计算分数抑制浓度(fic)。
[0139]
使用分数浓度(fc)和分数抑制浓度(fic)的概念广泛研究了抑制性抗微生物剂的组合效果。该参数定义如下：
[0140]
∑fic＝fic(组分1) fic(组分2)
[0141]
此外，下表总结了可以从∑fic的值得出的推论。学术或专利文献中并无一致的途径来定义精确限制的∑fic值，其区分协同性与加和性或拮抗作用。在这项研究中，我们采用了一种自由的方式，将∑fic《0.9的任何二元混合物定义为显示协同行为的证据。
[0142]
∑fic＝1加和性的抗微生物活性不可接受∑fic＞1拮抗的抗微生物活性不可接受∑fic＜0.9协同的抗微生物活性本发明的
[0143]
在(稀释10倍)后每种成分以ppm(百万分率)计的最终浓度如下。这些浓度中的每一个进行了测试以确定与常山碱的组合(中任一种)的fic值。
[0144]
结果：
[0145]
观察到与常山碱对糠秕马拉色菌具有协同作用(表1)。
[0146]
表1：与常山碱化合物对糠秕马拉色菌的作用
[0147][0148]
表1中列出的观察结果清楚地表明，常山碱与根据本发明的抗微生物活性物质协同地相互作用。协同相互作用被∑fic小于0.9的事实所证明。
[0149]
与其它已知的抗微生物活性物质zpto的组合作为阴性对照。
[0150]
类似于上述使用的针对糠秕马拉色菌的体外∑fic试验用于进行确定
和其他已知抗微生物活性物质(如吡啶硫酮锌)之间的相互作用是否产生协同的抗微生物活性的实验。实验是在以下的成分浓度范围内进行：
[0151]-50、25、12.5、6、3和0ppm。
[0152]
znpt：50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.2、0.1、0.05和0ppm。
[0153]
进行∑fic测定，且数据表明不能与zpto协同地相互作用以产生协同抗微生物活性。因此，不能得出吡罗克酮乙醇胺与任何已知的抗微生物活性物质的组合总是产生协同作用的结论。令人惊讶的是，常山碱与本发明要求保护的抗微生物活性物质的组合显示出协同性能。
[0154]
实施例2：根据本发明的示例性组合物的抗微生物功效是针对糠秕马拉色菌测定的。
[0155]
微生物制备：
[0156]
将糠秕马拉色菌(cbs1878)保持在md琼脂平板(溶液a)上，在20ml生长培养基糠疹癣菌属肉汤(pb，溶液b)中培养。
[0157]
然后将它们在32℃下伴随振荡孵育48小时。然后，将1ml的第一肉汤培养物转移到9ml新鲜pb中，并在32℃下伴随振荡培孵育48小时。
[0158]
最终培养物应包含2-6
×
106个细胞/ml。这是通过使用pb稀释至5
×
105个细胞/ml来实现的。
[0159]
体外敏感性试验：
[0160]
辛酰羟肟酸(0.5％)在dmso中制备，并在生长培养基连续2倍稀释以5000-78ppm的范围内制备。通过将20ul的连续稀释液加入96孔板(corning-3788)的每一列中。
[0161]
测试常山碱化合物(原液：10mg/ml，在dmso中)在生长培养基中连续2倍稀释以在10000-10ppm的范围内制备。通过将20ul的连续稀释液加入96孔板(corning-3788)的每一行中，以产生与辛酰羟肟酸的二元组合。
[0162]
测试板中的最终细胞密度约为5
×
104细胞/ml，并且96孔板的每个孔中的活性物质的最终浓度显示如下：
[0163]
常山碱：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.8、3.9、2.0、1.0、0ppm。
[0164]
辛酰羟肟酸：500、250、125、62.5、31.25、15.63、7.8、0ppm。
[0165]
对于糠秕马拉色菌，孵育2天后，读取od600(结束)。然后加入阿尔玛蓝(10％)，并孵育8小时。记录从蓝色到红色的颜色变化并读取荧光(530ex nm/590em nm)。
[0166]
观察到辛酰羟肟酸与常山碱对糠秕马拉色菌具有协同作用(表3)。
[0167]
表3：辛酰羟肟酸和常山碱对糠秕马拉色菌的作用
[0168]
实施例组合∑fic2辛酰羟肟酸 常山碱0.56
[0169]
表2中列出的观察结果表明，常山碱与根据本发明的抗微生物活性物质辛酰羟肟酸协同地相互作用。
[0170]
上文公开的所有实验均在体外条件下进行，以确定指定的抗微生物活性物质-吡罗克酮乙醇胺和常山碱的组合相对于它们是否是协同的、加合性的或拮抗的。就实验而言，成分的浓度选择为在相关测试允许的容许限值内，并且可以在其中记录技术效果。因此，进
行测试的浓度可能看起来并未落在化妆品组合物中通常使用的这些成分的范围内(通常以重量％计)。
[0171]
本发明的组合物可以与其他常用成分一起配制成乳液或凝胶，这些成分可以影响油相和水相中所需活性物质的浓度。这类组合物还可能具有不同组的物理和流体动力学性质，例如分配系数、扩散速率、对流传输速率和流变性质。因此，预期在配制为组合物时使用的浓度可能与进行实验的细胞水平下的浓度不同，且通常使用的浓度要高几个数量级。