用于患有子宫内膜异位症的对象的组合物及组合的制作方法

1.本发明涉及健康领域，更具体地涉及子宫内膜异位症以及与子宫内膜异位症相关的症状和障碍的治疗及管理。


背景技术：

2.子宫内膜异位症的定义是子宫腔外存在子宫内膜组织。该组织尤其可能存在于子宫壁、输卵管、卵巢、子宫骶韧带的水平，但也存在于膀胱和结肠的水平。因此，同一名患者的多个器官可能受到影响。在极少数情况下，子宫内膜异位病灶也可能出现在远离子宫的器官水平，例如肺。这种子宫外组织具有与子宫内膜相同的特征，并且在卵巢激素的影响下以相同的方式运行。在这种情况下，月经出血没有途径排出体外，这种滞留的血液会导致邻近组织发炎而造成多种问题：病灶、囊肿、器官之间的粘连。
3.因此，在患有子宫内膜异位症的对象中，我们可能会观察到卵巢或腹膜表面的浅表结节性病灶、卵巢囊肿(子宫内膜瘤)，以及侵入直肠阴道区、膀胱和子宫骶韧带等区域的深部结节，以及影响骨盆的粘连(这可能导致冻结样骨盆)。
4.子宫内膜异位症是多态性的：受影响的器官以及相关的症状和障碍因对象而异。存在一个分类，其允许根据病灶数量和受影响的器官将子宫内膜异位症分为4个阶段；然而，子宫内膜异位症的阶段(i-iv)及其对生育能力和相关疼痛的影响之间没有明确的相关性。
5.实际上，与子宫内膜异位症相关的主要症状和障碍是疼痛和不孕症。主要症状是复发性骨盆疼痛，有时非常剧烈，特别是在月经期(痛经)，这种周期性特点是其疾病的特征，这些病灶实际上对女性荷尔蒙很敏感，表现得像子宫组织。因此，病灶会在每个月经周期增殖、流血并留下纤维疤痕。在一些患者中，病灶的大量神经支配可能会导致有时感到极度疼痛。在月经期之外，患者也可能在排卵期、性交期间(性交疼痛)甚至排尿或排便时受到影响。
6.第二个症状是生育障碍。实际上，很大比例的子宫内膜异位症患者患有生育力低下或不孕症。
7.此外，子宫内膜异位症是一种常见的病理，具有相当大的社会经济影响，这种病理影响至少10至15％的女性。在法国，根据insee(2014年)的一项研究，有210至420万名之间的女性受到子宫内膜异位症的影响，与之相对300万名患有癌症，270万名患有2型糖尿病。
8.子宫内膜异位症可能对患者的生活产生非常显著的影响，特别是因为其引起非常剧烈的疼痛，可能导致停工和旷工，以及由于不孕和性交疼痛，对亲密生活和家庭生活产生不利影响。法国子宫内膜异位症的成本估计每年约为95亿欧元，这个数字既包括直接成本(患者护理)，也包括影响生产力的间接成本(病假)。2010年至2013年间，与子宫内膜异位症相关的住院人数也增加了7.5％(petit，2016)。
9.子宫内膜异位症的病因尚不清楚，且无法治愈该疾病。
10.子宫内膜异位症的治疗涉及疼痛和不孕症的管理，以及病灶的稳定化。除了治疗
疼痛(主要基于在需要时服用非类固醇抗炎药(nsaid))，一线治疗通常旨在抑制月经的激素治疗，并基于服用孕激素(去氧孕烯型)或雌激素-孕激素口服避孕药连续服用，或使用孕激素植入物或线圈。这种类型的治疗可以减轻与子宫内膜异位病灶的激素反应相关的疼痛，且可使病灶稳定化，甚至可稍微减小其体积；然而，并不会完全消除其病灶。其他治疗方法可用于建立人工更年期，但由于其副作用，这些治疗方法通常只处方较短时间；这种类型的治疗包括gnrh类似物(亮丙瑞林(leuprolide)、曲普瑞林(triptorelin))和抗雄激素药，例如达那唑(danazol)，其通常使用最多3至6个月的时间，例如在手术前或手术后。
11.在法国，不孕症的一线管理主要基于医学辅助生殖技术，尤其是体外受精。
12.如果疼痛或不孕症的药物管理失败，或者结节侵入性太大，二线治疗为手术。然而，切除与子宫内膜异位症相关的病灶可能很困难，且非常具有侵入性，尤其是在直肠乙状结肠等区域；手术后的复发也很常见，特别是因为不可能全部或完全去除病灶。
13.因此，目前需要用于管理患有子宫内膜异位症的患者的新策略。


技术实现要素：

14.本发明涉及一种来自酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)菌种的酵母菌、白藜芦醇和姜黄提取物的组合，特别用于管理患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象。本发明的组合可用于治疗或预防患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的子宫内膜异位病灶，例如减缓进展或减少子宫内膜异位病灶。本发明的组合还可用于治疗或预防与子宫内膜异位症相关的一种或多种症状或障碍，所述症状或障碍选自：生育力低下、不孕症、骨盆疼痛特别是痛经和性交疼痛、经期疼痛特别是泌尿或肠道水平的经期疼痛、泌尿和肠道障碍、子宫出血(metrorrhagia)、直肠出血(proctorrhagia)、慢性腹膜炎症、肠道通透性过高、慢性疲劳及其组合。本发明的组合还可用于使患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的肠道通透性正常化、调节免疫状态、维持生育能力和/或降低氧化应激。
15.来自酿酒酵母菌种的酵母菌、白藜芦醇和姜黄提取物可包含在单一药物、保健品或营养组合物中，或者分布于旨在同时或依序施用的几种单独药物、保健品或营养组合物中。
16.在一些实施方式中，对象患有子宫内膜异位症且已经或将要进行子宫内膜异位病灶切除的手术治疗、医学辅助生殖的医学方案，特别是体外受精和/或正在接受避孕治疗。
17.在其他实施方式中，本发明的组合包括在食品补充剂中，所述食品补充剂任选地具有一种或多种具有生理或营养目的的成分，优选地选自维生素、微量元素、矿物质、益生元、益生菌、抗氧化剂、氨基酸及其组合；更优选地选自叶酸和5-甲基四氢叶酸、维生素b6、维生素b12、锌、镁、钙、硒、锰、菊粉、果寡糖/半乳寡糖、阿拉伯树胶、瓜尔胶、肌醇及其组合。
18.另一方面，本发明涉及一种药物、保健品或营养组合物，优选地呈食品补充剂的形式的药物、保健品或营养组合物，其包含下述比例的酿酒酵母酵母菌、白藜芦醇和姜黄提取物的组合：
19.以白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母的总和为100重量％计或以所述组合物总重量为100重量％计，
[0020]-1至50重量％的酵母菌酿酒酵母，
[0021]-10至50重量％的白藜芦醇，
[0022]-1至50重量％，例如1至20重量％或10至50重量％的姜黄提取物，
[0023]
所述组合物优选地适用于管理患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象。
[0024]
该组合物可进一步包含一种或多种益生元；和/或维生素、矿物质和/或微量元素；和/或植物、水果、蔬菜、藻类或真菌的粉末或提取物；和/或一种或多种益生菌。优选地，所述益生菌不是乳杆菌属的细菌。
[0025]
本发明的组合物可以呈剂量单位的形式，例如呈片剂或胶囊的形式，每个剂量单位包含：
[0026]-10至300mg，优选地为25至250mg的白藜芦醇；
[0027]-1至300mg或10至300mg，优选地为5至25mg或25至250mg的姜黄提取物；以及
[0028]-1x107cfu至1x10
11
cfu，优选地为1x108cfu至1x109cfu的酿酒酵母酵母菌。
[0029]
该组合物可进一步包含菊粉和锌，例如，本发明的组合物，其特征可在于呈剂量单位的形式，包含：
[0030]-30至70mg的白藜芦醇，优选地为反式白藜芦醇；
[0031]-5至25mg与环糊精结合的姜黄提取物形式的姜黄色素；
[0032]-1x108cfu至1x10
10
cfu，优选地为2x108cfu至6x108cfu，例如3x108cfu至5x108cfu布拉氏(boulardii)变种的酿酒酵母酵母菌；
[0033]-任选地10mg至100mg，优选地为25mg至50mg的菊粉；以及
[0034]-任选地1mg至15mg的锌(zn
2
)，优选地为2mg至8mg的锌，例如以双甘氨酸锌(zinc bisglycinate)的形式添加。
[0035]
本发明还涉及一种包含两种组合物的组合的药物、保健品或营养试剂盒：
[0036]-第一组合物，其包含优选地为1x107cfu至1x10
11
cfu的量的酿酒酵母酵母菌；以及
[0037]-第二组合物，其包含优选为10至300mg的量的白藜芦醇，以及1至300mg，例如10至300mg的量的姜黄提取物；所述试剂盒优选地适用于管理患有或易患有子宫内膜异位症的对象。
[0038]
本发明的组合、组合物或试剂盒，其特征可在于：
[0039]-酿酒酵母酵母菌为布拉氏变种的酿酒酵母；和/或
[0040]-白藜芦醇提取物以富含反式白藜芦醇的植物提取物的形式添加，例如滴定至至少95重量％的反式白藜芦醇的日本虎杖(japanese knotweed)提取物；和/或
[0041]-包含至少15重量％姜黄色素的姜黄提取物；和/或
[0042]-姜黄提取物包含姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素；和/或
[0043]-姜黄提取物包含以所述提取物中存在的姜黄色素的总重量计至少55重量％，优选地为至少60重量％的姜黄素；和/或
[0044]-姜黄提取物封装在环糊精优选γ-环糊精中；和/或
[0045]-姜黄素提取物与封装或载体系统优选环糊精组合。
[0046]
本发明还涉及一种白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌的组合用于制备保健品或药物组合物的用途，所述保健品或药物组合物用于治疗患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象，更精确地用于治疗或预防子宫内膜异位症或其症状。
[0047]
本发明进一步涉及一种治疗患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用有效剂量的白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌。
附图说明
[0048]
图1显示鼠子宫内膜异位病灶随时间的增长、重量及体积。m(对照组)：以白藜芦醇和姜黄提取物的混合物处理的组；m1(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物和布拉氏酿酒酵母的混合物处理的组；m2(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物、布拉氏酿酒酵母和嗜酸乳杆菌(l.acidophilus)的混合物处理的组；
[0049]
图2显示不同组m、m1和m2牺牲时取样(he染色)的病灶的组织学；
[0050]
图3显示治疗12周后(s12)不同组的脾免疫状态-t淋巴细胞。sham(对照组)对应于接受假手术的动物；m(对照组)：以白藜芦醇和姜黄提取物的混合物处理的组；m1(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物和布拉氏酿酒酵母的混合物处理的组；m2(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物、布拉氏酿酒酵母和嗜酸乳杆菌的混合物处理的组；
[0051]
图4显示治疗12周后(s12)不同组的脾免疫状态-b淋巴细胞及巨噬细胞。sham(对照组)对应于接受假手术的动物；m(对照组)：以白藜芦醇和姜黄提取物的混合物处理的组；m1(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物和布拉氏酿酒酵母的混合物处理的组；m2(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物、布拉氏酿酒酵母和嗜酸乳杆菌的混合物处理的组；
[0052]
图5显示对连蛋白(zonulin)、白介素6(il6)、tnfα和晚期氧化蛋白产物(aopp)的影响。sham(对照组)对应于接受假手术的动物；m(对照组)：以白藜芦醇和姜黄提取物的混合物处理的组；m1(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物和布拉氏酿酒酵母的混合物处理的组；m2(本发明)：以白藜芦醇、姜黄提取物、布拉氏酿酒酵母和嗜酸乳杆菌的混合物处理的组。
具体实施方式
[0053]
子宫内膜异位症是一种以异位子宫内膜存在为特征的疾病，其在卵巢和腹腔内形成囊性病灶，关于这种疾病的病理生理学知之甚少。最近的研究表明，子宫内膜异位症是一种免疫性、雌激素依赖性炎症甚至自身免疫性疾病(ahn,2016；khan,2010；lin,2016；malutan,2015)。也有人提到生态失调和/或肠道和阴道的高通透性以及氧化应激会对疾病的进展产生影响(baker,2017；laschke,2015；puca,2017；ito,2017；scutiero,2017)。
[0054]
令人惊讶的是，本发明人已经表明，相较于对照组动物以及用白藜芦醇和姜黄提取物的组合治疗的动物，在子宫内膜异位症的动物模型中，治疗12周后，酵母菌酿酒酵母、白藜芦醇和姜黄提取物(curcuma longa)的组合施用能够显著减缓子宫内膜异位病灶的进展。
[0055]
本发明人也表明，这种活性成分的组合可以通过增加1型巨噬细胞相对于2型巨噬细胞的比例来调节免疫状态。在对照组动物中或用白藜芦醇和姜黄提取物组合治疗的动物中未观察到这种作用。
[0056]
因此，本发明人已经表明，本发明的三种活性成分，即酵母菌酿酒酵母、白藜芦醇和姜黄提取物，发挥协同作用，可以阻止子宫内膜异位病灶甚至使其消退，并调节患者的免
疫状态。
[0057]
本发明人也表明，白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合施用可减少促炎细胞因子如tnfα和白介素6的产生，以及细胞氧化应激。值得注意的是，这种活性成分的组合还可以降低连蛋白的血浆水平，连蛋白是一种与肠道高通透性有关的蛋白质，是一种低度炎症反应的生物标志物。
[0058]
总结，白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合施用可预防或治疗子宫内膜异位病灶的进展。这种活性成分的组合还可以调节免疫系统，特别是调节巨噬细胞m1/m2的比例，并使子宫内膜异位症对象的腹膜水平的炎症状态正常化，特别是通过降低氧化应激和肠道通透性。
[0059]
因此，本发明涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌的组合用于治疗患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症对象的用途。更精确地说，本发明涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌的组合在治疗或预防子宫内膜异位症或其症状或相关障碍中的用途。
[0060]
本发明进一步涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌的组合用于制备组合物优选保健品、食品或药物组合物的用途，所述组合物用于治疗患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象，更精确地说用于治疗或预防子宫内膜异位症或其症状。
[0061]
本发明还涉及治疗患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的方法，所述方法包括向所述对象施用有效剂量的白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌。本发明还涉及一种包含白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌的组合的试剂盒或组合物，优选地为药物、保健品或食品组合物，所述组合物或所述试剂盒适用于患有子宫内膜异位症的对象或易患子宫内膜异位症的对象。
[0062]
一般定义
[0063]
如本文所用，术语“障碍(disorder)”、“异常(anomaly)”或“病变(affection)”是可互换的，并且指的是身体功能不正常的器官、部分、结构或系统。优选地，术语“病变”表示健康病变，例如干扰正常的生理或心理功能。
[0064]
如本文所用，“药物组合物”表示一种或多种活性剂与其他任选的化学成分例如生理上合适的载体和/或赋形剂的制剂。药物组合物的目的是促进活性剂施用于生物体。本发明的组合物可以是适合任何施用途径或常规使用的形式。药物组合物通常包含药学上可接受的媒介物。
[0065]
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的媒介物”是可互换的，且包含本领域技术人员已知可用于配制药物或兽用组合物的所有化合物或化合物的组合。在本发明的上下文中，“生理学上可接受的”或“药学上可接受的”是指不干扰活性药物成分(此处指白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合)的生物活性功效的任何介质或添加剂，且在施用浓度下对对象没有过度毒性和/或施用时不会产生不良反应。生理学上可接受的媒介物、载体或赋形剂可适合施用于人和/或动物(特别是哺乳动物)。
[0066]
如本文所用，术语“医药产品”包括供人类在人类医学中使用的医药产品，是指提供治疗和/或有益效果的任何药理学上可接受的物质，本文所用术语“医药产品”不一定限于需要上市许可的物质，而是可包含可用于化妆品和保健品组合物，例如食品补充剂的物
质。
[0067]
术语“保健品”是指由食品物质制成的组合物或产品，但以片剂、粉末、药水或其他通常与食物无关的格林制剂形式提供，且对人类的病变或疾病具有有益的生理作用或保护作用。特别地，该定义包括食品补充剂、特定群体的某些食物或膳食替代品。
[0068]“保健品组合物”是指包含食物成分如常量营养素、微量营养素、植物或植物提取物或具有营养或生理作用的物质的任何组合物，目的是补充人类的饮食以改善后者的营养状态并从而促进良好的健康状态。正如本文所设想，保健品产品是分离的营养素、食品补充剂或包含在特定人群的某些食物中。因此，保健品组合物包括例如本发明的组合和任选的食品级组分，特别是加工添加剂或助剂。
[0069]
本文中，“食品补充剂”是指与其他食物分开配制和施用的任何组合物，其目的是补充对象的营养摄入，具有药理学上可接受的形式，特别是硬胶囊、片剂、软胶囊、小袋、棒状包装、糖浆剂、包装在安瓿中的口服溶液、滴管或本领域技术人员熟悉的任何其他合适的形式。
[0070]
术语“食品(food)”、“食物产品(food product)”和“食物(foodstuff)”在此可互换使用，除人类通常食用的食物外，还包含功能性食品和特定群体的食品，其本身包含用于特殊医疗目的的食物。
[0071]“食品组合物”是指包含食品成分例如常量营养素、微量营养素、维生素、矿物质、微量元素或具有营养或生理作用的物质的任何组合物。正如本文所设想，食品是常规食物、功能性食品或转化食品。因此，根据定义，食品组合物可以是本领域技术人员已知的各种食物。
[0072]
食品组合物可以特别是用于人类营养的食品，其可以是液体、糊状物或固体。举例而言，食品可以是乳制品，例如奶酪、黄油、奶油、酸奶、冰淇淋、奶酪；烘焙产品，例如面包、饼干和蛋糕；基于水果的产品，例如果汁、水果色拉或水果酱、基于大豆的食品、基于淀粉的食品、糖果产品、食用油组合物、可涂抹的糊状物、早餐谷物、食品棒；饼干、零食、口香糖；饮料、能量饮料，浓缩饮料；饮料补充剂(添加到饮料中的粉末)等，但不限于此。
[0073]
一特定方面，食品组合物不是基于乳。优选地，食品组合物不包含人乳或动物乳的蛋白质或寡糖。举例而言，本发明的食品组合物包含本发明的活性物质和至少一种上述食物或饮料的组分的组合。
[0074]
本文中，术语“功能性食品”是指形成正常饮食的一部分并除了其包含的常规营养素外提供生理益处和/或降低疾病或障碍的风险和/或减轻与其相关的症状的常规食品。
[0075]
如本文所用，术语“食品添加剂”是指在施用于对象之前旨在与一种或多种其他食物混合的化合物或组合物。更具体地，“食品添加剂”是指食品法典食品添加剂通用标准codex stan 192-1995中所定义的任何添加剂，即不单独作为食物消费，也不单独用作一种食物的典型成分的任何物质，无论其是否具有营养价值，且在制造、加工、制备、处理、包装(packaging)、包裹(wrapping)、运输或储存该食物所涉及的任何步骤中或直接或间接涉及的所有可能情况下出于技术(包括感官)目的有意添加到食物中，将其或其衍生物掺入该食物中或可能以其他方式影响其特性。
[0076]
如本文所用，“益生元”是指一种成分或基质，其被宿主的微生物选择性使用，赋予健康益处，其可允许在益生菌的组成和/或活性方面引起有益的变化。益生元可以是可食用
的食品或饮料或其成分。益生元可包括复合碳水化合物、多酚和多不饱和脂肪酸。益生元通常是一种难以消化的碳水化合物，例如寡糖或多糖，或糖醇，在没有肠道微生物的情况下，不会在上消化道中降解或吸收。优选地，本发明的益生元如2016年9月26日的法令中所定义，该法令建立了食品补充剂中允许的具有营养或生理目的的物质及其使用条件的清单。
[0077]
如本文所用，术语“益生菌”是指活细菌或灭活细菌，当以合适的量施用时，对宿主生物体具有有益作用。这些组合物的优点在于其适合施用于人和其他哺乳动物对象。益生菌物质含有足够多的益生菌微生物，以对肠道微生物群产生直接或间接的作用。应当注意是，为了本说明书的目的，“益生菌”是指益生菌的任何生物活性形式，优选但不完全是酵母菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、杆菌、链球菌、肠球菌、丙酸杆菌或酿酒酵母，但也包含构成“正常肠道菌群”的其他微生物，或者细菌壁的碎片或这些微生物的dna的碎片。优选地，本发明的益生菌如联合国粮食及农业组织(fao)和世界卫生组织(who)2001年进行的在食物(包括含有活乳酸菌的奶粉)中评估益生菌的健康和营养特性的fao/who专家的混合磋商中所定义。
[0078]
下文中使用的术语“微生物群(microbiota)”或“微生物菌群(microflora)”可互换，表示环境中(永久或暂时)存在的所有微生物物种，包含真核生物、古细菌、原核生物和病毒。术语“微生物组(microbiome)”是指微生物群的“遗传内容(genetic contents)”，包含基因组dna、核糖体rna、表观基因组、质体和微生物群的所有其他类型的遗传信息。优选地，这些术语在此是指人类肠道微生物群的细菌。
[0079]
如本文所用，术语“酵母菌(yeast)”表示微小真菌，具有宽度为千分之几毫米的卵形细胞，易于彼此分离并因此非常适合在液体中繁殖。术语“酵母菌”包括酵母(saccharomyces)属的所有物种。
[0080]
如本文所用，术语“细菌(bacterium)”表示以单个细胞、群体或个体细胞聚集体的形式存在的任何原核微生物。术语“细菌”包含细菌的所有变体(例如，内源性细菌或环境细菌)，更特别是人类或动物微生物群的细菌，尤其是肠道微生物群。
[0081]
如本文所用，术语“包含(comprising)”或“包含(comprises)”用于指对本发明必不可少的物质、化合物或方法，但其对包含非特定元素开放，无论是否必需。“包含”的使用表示包含而非限制。
[0082]
此处使用的术语“和/或”应被视为对指定的两个特征或组分中的每一个的具体描述，无论有或没有另一个；举例而言，“a和/或b”将被视为对以下每个要素的具体披露：(i)a、(ii)b和(iii)a和b，就好像它们中的每一个都是单独表示的。
[0083]
本文使用的与所有数值(包括数值范围的下限和上限)相关的术语“约”表示具有高达
±
10％(例如，
±
0.5％、
±
1％、
±
1.5％、
±
2％、
±
2.5％、
±
3％、
±
3.5％、
±
4％、
±
4.5％、
±
5％、
±
5.5％、
±
6％、
±
6.5％、
±
7％、
±
7.5％、
±
8％、
±
8.5％、
±
9％、
±
9.5％)的可接受变化的任何值。在数值列表的开头使用术语“约”来修饰其中的每一个(即“约1、2和3”是指约1、约2和约3)。此外，当描述数值列表时(例如约50％、60％、70％、80％、85％或86％)，其列表包括其所有中间值和分数值(例如54％或85.4％)。
[0084]
本文所用的术语“基本上由
……
组成”定义了一种组合物，其中除提及的那些元素之外的元素占组合物的不超过5重量％，优选地不超过3重量％，更优选地不超过1重量％。
[0085]
本发明的用途
[0086]
第一方面，本发明涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌的组合用于管理
患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的用途。
[0087]
本发明的组合可用于治疗患有子宫内膜异位症的对象。更精确地说，本发明涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合用于治疗或预防子宫内膜异位症或其症状或相关障碍的用途。
[0088]
本发明特别涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合用于治疗或预防子宫内膜异位病灶的用途。更具体地，本发明的组合可用于预防或减缓子宫内膜异位病灶的进展，或用于减少患有子宫内膜异位症的对象或易患子宫内膜异位症的对象的子宫内膜异位病灶的体积或重量。
[0089]
某一方面，本发明的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合用于预防或治疗例如减轻患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的慢性腹膜炎。
[0090]
另一方面，本发明的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合在患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象中用于预防或治疗例如降低肠道通透性过高或用于使肠道通透性正常化。
[0091]
另一方面，本发明的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合用于在患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象中使免疫状态正常化或调节免疫状态，例如促进免疫系统的正常功能。
[0092]
另一方面，本发明的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合用于预防或降低患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的腹膜水平的氧化应激。
[0093]
另一方面，本发明的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合用于预防或治疗一种或多种与子宫内膜异位症相关的症状或障碍。
[0094]
本发明的组合可用于例如预防或降低患有以下疾病的对象的疼痛频率和/或强度，例如骨盆疼痛如痛经和性交疼痛和经期疼痛，例如在患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的肠道或泌尿水平。
[0095]
本发明的组合还可用于治疗或预防患有子宫内膜异位症或可能患有子宫内膜异位症的对象的生育力低下或不孕症。本发明的组合还可用于改善患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的生育能力或维持正常生育能力。
[0096]
本发明的组合可用于维持患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的生育能力。本发明的组合可特别用于使患有子宫内膜异位症的对象或易患子宫内膜异位症的对象的激素状态正常化或改善，例如使amh(抗缪勒管激素，antim
ü
llerian hormone)和/或雌二醇(estradiol)的血浆水平正常化或改善。
[0097]
另一方面，本发明的组合可用于改善患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的一般状况。
[0098]“改善一般状况”是指改善对象的生理和/或心理状态，尤其是可使其生活质量改善。本发明的组合可使疾病和相关症状更容易忍受。其可为本发明的组合的非治疗用途。
[0099]
因此，另一方面，本发明涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合的非治疗用途，用于改善患有或易患子宫内膜异位症的对象的健康状况和/或生活质量。特别地，本发明涉及白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌的组合的非治疗用途，作为食品补充剂用于管理患有或易患子宫内膜异位症的对象。
[0100]
1.本发明的子宫内膜异位症和相关症状和障碍、对象
[0101]
如先前技术部分所述，子宫内膜异位症是一种病理，其特征在于子宫腔外存在子宫内膜组织。该组织尤其可以存在于子宫壁、输卵管、卵巢、子宫骶韧带的水平，但也存在于膀胱和结肠的水平。
[0102]
在本发明的意义上，术语“子宫内膜异位症”包含子宫内膜异位症的所有已知形式，包括子宫腺肌病、子宫内膜瘤、深部子宫内膜异位症或根据美国生育学会分类的i至iv期的子宫内膜异位症。
[0103]
包含但不限于疼痛、异常或过度出血，例如直肠出血、尿血和子宫出血，消化或泌尿系统障碍，例如腹泻、便秘、频尿和/或排尿疼痛，尤其是在月经期间，慢性疲劳、生育力低下和不孕症。与子宫内膜异位症相关的症状和障碍还包含慢性腹膜炎、肠道通透性过高和阴道和/或肠道菌群失调。
[0104]
与子宫内膜异位症相关的疼痛是各式各样的，尤其包括痛经(月经期间的骨盆疼痛)、腰痛、性交疼痛以及尤其是在泌尿或肠道水平的经期疼痛。
[0105]
在本发明的上下文中，“生育力低下(hypofertility)”是指女性在没有避孕的情况下进行至少6个月的定期性关系后仍未怀孕。“不孕症”是指女性在未采取避孕措施的情况下进行定期性关系24个月后仍未怀孕。
[0106]“定期性关系”对应于至少每48小时进行一次性交。在一具体实施方式中，本发明的活性物质的组合用于治疗或预防与子宫内膜异位症相关的症状或障碍，该症状或障碍选自痛经、性交疼痛、慢性疲劳、生育力低下、不孕症及其组合。
[0107]
在本发明的上下文中，术语“治疗(treat)、治疗(treatment)”是指获得所需的药理学和/或生理学效果。就完全或部分预防病理学或相关障碍或其症状而言，其作用可以是预防性的，和/或在部分或完全治愈该疾病方面可以是治疗性的。本文所用的术语“治疗”涵盖对感兴趣对象的疾病的任何治疗，用于：在没有症状的一段时间内降低疾病或障碍的发生率和/或复发风险；缓解或减轻与疾病相关的症状或障碍；在患有或易患其疾病的对象中预防疾病或相关症状或障碍或障碍的进展；停止、减缓或延迟疾病或相关症状或障碍的进展；减少疾病发作的频率和/或强度，例如症状；以及减轻疾病或相关症状或障碍，即使所述疾病、相关症状或障碍的完全或部分消退。
[0108]
例如，本发明的组合可用于预防(例如预防、减缓或延迟)子宫内膜异位病灶的出现和进展和/或减少或甚至治疗子宫内膜异位病灶。
[0109]
作为另外的实例，本发明的组合可用于治疗，例如降低患有子宫内膜异位症的女性骨盆疼痛的频率和/或强度。
[0110]
本发明的对象是任何年龄的经期女性，特别是在12岁和50岁之间，优选地在14岁和45岁之间。
[0111]“患有子宫内膜异位症的对象”是指已被诊断出存在至少一个子宫内膜异位病灶的女性，例如在临床检查期间，通过成像技术(超声波检查、mri)或通过腹腔镜检查。“患有子宫内膜异位症的女性”尤其包括处于缓解期的女性，例如为了消除或减少子宫内膜异位症的病灶而进行了医学或手术治疗的女性。
[0112]
患有子宫内膜异位症的对象可能正在接受用于管理子宫内膜异位症或其症状的治疗，包括服用避孕药，特别是口服避孕药、nsaid，以及用于医学辅助生殖的治疗，特别是卵巢刺激治疗，甚至水疗。其也可能是替代医学的治疗(整骨疗法、针灸、运动疗法、自我催
眠、心理疗法
…
等)。
[0113]
患有子宫内膜异位症的女性可能具有上述一种或多种障碍或症状。在一个优选实施方式中，患有子宫内膜异位症的女性具有至少一种选自痛经、性交疼痛、慢性疲劳、不孕症及其组合的症状或障碍。
[0114]“易患子宫内膜异位症的对象”或“倾向于患子宫内膜异位症的对象”是指具有表明存在子宫内膜异位症的临床表现的女性，例如在月经期间表现出强烈或剧烈的疼痛和/或生育力低下或不孕症和/或有家族疾病史(例如患有子宫内膜异位症的母亲、阿姨、祖母和/或姐妹)。
[0115]
2.本发明的活性成分的组合
[0116]
本发明的活性成分的组合包含白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母酵母菌。
[0117]
根据本发明，“活性成分的组合”或“活性成分的结合”是指一组活性物质，其可相互作用或协同作用以获得一种或多种药理学和/或生理学和/或营养学效果，目的是改善对象的一般状况和/或治疗或预防病理学或其相关症状或障碍。如上所述，本发明的活性成分的组合可用于管理患有子宫内膜异位症的对象或易患子宫内膜异位症的对象。
[0118]
白藜芦醇
[0119]
白藜芦醇是一种存在于许多植物物种中的芪类多酚。在本发明的意义上，术语白藜芦醇包含反式异构体和顺式异构体。在某些实施方式中，白藜芦醇是反式和顺式异构体的混合物形式。在其他实施方式中，白藜芦醇是反式异构体的形式，因此其为cas no.501-36-0的反式白藜芦醇。
[0120]
优选地，白藜芦醇以反式白藜芦醇的形式存在。
[0121]
白藜芦醇可通过化学合成制备或可从已知包含白藜芦醇的任何植物或植物部分开始纯化，例如葡萄、日本虎杖、可可、蔓越莓、桑椹或坚果的浆果、果核、叶和芽。
[0122]
白藜芦醇可以纯形式提供，即纯度至少为99％。
[0123]
如果适用，白藜芦醇可以富含白藜芦醇的植物提取物的形式提供，即相对于提取物的干物质重量计，具有至少50重量％(例如至少60重量％、70重量％、80重量％、85重量％、90重量％或95重量％)的白藜芦醇。
[0124]
在一具体实施方式中，白藜芦醇以日本虎杖(fallopia japonica(houtt.)ronse dec.,polygonaceae)的提取物形式存在，所述提取物滴定至相对于组合物的总重量按重量计至少95重量％，例如至少98重量％的反式白藜芦醇。
[0125]
根据本发明，白藜芦醇的单日剂量可以在10mg至300mg的范围内，例如25mg至250mg、25mg至100mg，优选地为30mg至70mg或40mg至60mg。
[0126]
酵母菌酿酒酵母
[0127]
在本发明的意义上，“酵母菌酿酒酵母(yeast saccharomyces cerevisiae)”或“酿酒酵母酵母菌(saccharomyces cerevisiae yeast)”是指属于酿酒酵母菌种的任何酵母菌。酿酒酵母菌种特别包括布拉氏(boulardii)变种以及cerevisiae变种。
[0128]
优选地，本发明是用属于布拉氏变种的酵母菌酿酒酵母进行的。
[0129]
在一具体实施方式中，酵母菌酿酒酵母选自酿酒酵母布拉氏变种的菌株、酿酒酵母cerevisiae变种的菌株及其组合。
[0130]
在一个优选的实施方式中，酵母菌酿酒酵母选自属于酿酒酵母布拉氏变种的菌
株。
[0131]
几种酿酒酵母特别是布拉氏变种的菌株可商购获得。
[0132]
我们可以特别提及由lesaffre human care以pro scb商标销售并在cncm(国家微生物培养物保藏中心)注册其编号为i-3799的菌株。
[0133]
作为另外的实例，我们还可以提及由biocodex laboratories于1988年3月28日在cncm-巴斯德研究所保藏的cncm编号为i-745的菌株，该菌株可在商购获得，例如在的产品中。我们还可以提及由lallemand公司销售的cncm编号为i-1079的菌株或以atcc(美国典型培养物保藏中心)编号为mya-796或mya-797保藏的菌株。
[0134]
应当理解，本发明还涉及酿酒酵母菌种，优选为布拉氏变种的任何酵母菌的用途，以及从该细菌物种获得的任何菌株或同源物的用途。术语“同源物(homolog)”、“变体(variant)”或“突变体(mutant)”是可互换的，是指与亲本菌株(parent bacterial strain)的核苷酸序列(参考序列)具有同源性或序列同一性的细菌菌株。其包括与酿酒酵母菌种基因组的核苷酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％同一性的菌株，优选地具有以cncm编号i-745注册或以cncm编号i-3799注册的酿酒酵母布拉氏变种菌株基因组的核苷酸序列。突变体可以通过基因工程技术获得，所述技术能够改变本发明菌株的遗传物质或使得本发明菌株的遗传物质与其他分子重组。通常，为了获得这种突变体菌株，本领域技术人员可以使用标准诱变技术，例如紫外线辐射或暴露于诱变化学品。
[0135]
存在于本发明的组合中的酵母菌酿酒酵母可为活的或灭活的。优选地，其酵母菌为活的形式。酵母菌酿酒酵母可以特别是水合的、冻干的、冷冻的、喷雾形式的或允许其活体施用于对象的任何其他形式。酵母菌可以原样或在被吸收在合适的生理学上可接受的媒介物之后施用。
[0136]
例如，酵母菌以培养的活细菌的形式、营养形式或孢子形式施用。或者，酵母菌以从微生物材料如粪便材料获得的纯化群体的形式提供。“活的(live)/存活(alive)”应理解为保持细胞的完整性，且如果酵母菌在合适的培养基和合适的条件下培养，细胞过程会发生或可能发生。任何活酵母菌都可以在合适的培养基上重新接种，并能够在合适的条件下繁殖。
[0137]
在某些实施方式中，酵母菌酿酒酵母以107至10
11
，特别是107至10
10
，优选地为108至10
10
或108至109菌落形成单位(colony-forming units，cfu)的剂量施用。
[0138]
例如，酵母菌酿酒酵母以5至100mg重量的剂量施用。
[0139]
优选地，该酿酒酵母属于酿酒酵母布拉氏变种的菌株，例如以cncm no.i-3799或i-745保藏的菌株。
[0140]
优选地，本发明的组合包含每日施用2x108至6x108cfu，更优选地为3x108至5x108cfu的酿酒酵母布拉氏变种。
[0141]
姜黄提取物
[0142]
根据本发明，姜黄(curcuma longa l.)又称为姜黄素(curcumin)、姜黄(curcuma)或姜黄根(turmeric)，是一种原产于亚洲的多年生植物，属于姜科(zingiberaceae family)。姜黄的根茎由黏液、多糖、精油、多酚和尤其是赋予根茎黄色/橙色的姜黄色素组成。
[0143]“姜黄色素(curcuminoid)”是二芳基庚烷类化合物，特别包含姜黄素及其衍生物，例如去甲氧基姜黄素或双去甲氧基姜黄素。
[0144]
姜黄素(1,7-双(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮)，也称为二阿魏酰甲烷(diferuloylmethane，cas no.:458-37-7)，是亚洲姜黄的主要姜黄色素。
[0145]
组合中存在的姜黄提取物通常是根茎提取物，干燥的或新鲜的姜黄。它可以是针对姜黄色素进行标准化的提取物。
[0146]
在本发明的意义上，术语“标准化(standardized)”或“进行标准化(standardize)”是指控制提取物、油或任何其他成分以使其符合标准或某些分子(例如姜黄提取物情况下的姜黄色素)的限定最低含量的概念。因此，针对姜黄色素标准化的姜黄提取物是具有限定的姜黄色素最小含量，优选姜黄色素的最小含量为15％的姜黄提取物。
[0147]
因此，本发明的姜黄提取物包含相对于提取物的总重量，优选地相对于提取物的干物质的总重量，按重量计至少15重量％的姜黄色素。
[0148]
存在于本发明的组合中的姜黄提取物可以通过任何已知的提取方法获得，例如通过使用有机溶剂提取、通过浸渍或煎煮或者通过超临界流体提取。优选地，姜黄根茎提取物通过包含使用可用于制备食品补充剂的溶剂例如醇或酯类如乙酸乙酯提取的步骤的方法获得。
[0149]
有利地，本发明的姜黄提取物为粉末形式。其水含量优选地为低于提取物总重量的15重量％(例如低于10重量％或5重量％)。根据本发明的优选实施方式，姜黄提取物包含至少10、15、20、25、30、35、40或45重量％的姜黄色素。
[0150]
在一具体实施方式中，姜黄提取物包含姜黄素、去甲氧基姜黄素和/或双去甲氧基姜黄素。优选地，姜黄素是提取物中的主要姜黄色素。姜黄素可占提取物中存在的姜黄色素总重量的至少55重量％，优选地为至少60重量％。
[0151]
例如，姜黄提取物包含以下比例的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素：65至82重量％的姜黄素、15至25重量％的去甲氧基姜黄素和2至7重量％的双去甲氧基姜黄素，百分比以相对于提取物中存在的姜黄色素总重量的重量表示。
[0152][0153]
为了提高姜黄色素的生物利用度，姜黄提取物可以使用载体或封装系统如脂质体或笼形分子进行配制。在一具体实施方式中，姜黄提取物与环糊精，优选地与γ-环糊精组合。其可特别是由wacker销售的产品
[0154]
一特定方面，本发明的组合包含通过添加姜黄提取物或以纯化形式引入组合物中的姜黄素。
[0155]
另一方面，本发明的组合包含每日施用1至100mg的姜黄色素，优选地为5至50mg的姜黄色素，例如10至30mg或10至20mg的姜黄色素，所述姜黄色素至少包含姜黄素，且优选地包含姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素，且所述姜黄色素以姜黄提取物的形式施用。
[0156]
优选地，姜黄提取物如上所述。优选地，姜黄提取物与γ-环糊精组合，且姜黄素与γ-环糊精的重量比在1至10，优选地为2至8，更优选地为3至7，例如4至5的范围内。
[0157]
3.本发明的组合的施用方案
[0158]
本发明的组合或联合，其可通过任何合适的途径对感兴趣的对象进行施用，例如通过颊、口腔、鼻腔、经黏膜例如阴道、子宫内、直肠内或经皮途径。
[0159]
优选地，本发明的组合通过口服途径施用。
[0160]
本发明的组合的成分，即白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母，可同时施用于对象。举例而言，白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母可存在于相同的药物、保健品或营养组合物中。或者，白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母可随着时间的推移分开、相继或分开施用。举例而言，白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母可以试剂盒的形式施用，即以几种单独的药物、保健品或营养组合物的形式，例如以至少两个用于口服施用的剂量单位的形式，例如含有酿酒酵母第一胶囊和含有白藜芦醇和姜黄提取物的第二胶囊或片剂。用于施用组合的试剂盒可替代地包含三个单独的胶囊，含有酵母菌的胶囊、含有白藜芦
醇的片剂或胶囊，以及含有姜黄提取物的片剂或胶囊。
[0161]
剂量、施用频率和治疗持续时间取决于对象的特征，特别是她的年龄、体重、病史、子宫内膜异位症或相关症状或障碍的阶段和严重程度、接受的医学治疗等等。
[0162]
通常，本发明的组合可以每月、每周或每天至少施用一次。优选地，本发明的组合每天施用至少一周，通常至少两周、至少三周、至少四周、至少30天或甚至至少2、3、4、6、12个月或甚至更长时间。
[0163]
例如，本发明的组合可每天施用1至3个月，且如果需要，可以重复这种治疗。
[0164]
本发明的组合通常以有效或足够的剂量施用以获得预期效果之一；如上所述，特别是能够减少、减缓或治疗与子宫内膜异位症相关的障碍或症状的效果，特别是与子宫内膜异位症病灶的进展相关的障碍或症状和/或能够改善患有子宫内膜异位症的对象的一般状况。
[0165]
例如，在治疗子宫内膜异位症的方法中，组合物的“治疗有效量”可以对应于降低症状的严重性和/或降低与病理相关的可测量参数至少约5％、10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％或更多，与在没有对对象进行治疗的情况下的症状(例如症状的严重程度)，或可测量参数相比。举例而言，它可能是减缓或减少子宫内膜异位病灶的效果，例如可以通过成像(超声波检查、mri和其他断层扫描技术)可视化，提高生育能力或减少可测量的炎症的效果，例如通过某些血液标志物或使用仿真疼痛评分量表可测量的疼痛强度的降低。
[0166]
通常，施用的每日剂量范围可为：
[0167]-10至300mg，优选地为25至250mg的白藜芦醇；
[0168]-1至300mg，例如10至300mg、25至250mg的姜黄提取物，或优选地为5至25mg的姜黄提取物；以及
[0169]-1x107cfu至1x10
11
cfu，优选地为1x108cfu至1x10
10
cfu或1x108cfu至1x109cfu或5至10mg，或者甚至5至50mg的酵母菌酿酒酵母，优选地为布拉氏变种。
[0170]
作为一另外的实例，施用的每日剂量范围可为：
[0171]-30至70mg，优选地为40至60mg的白藜芦醇；
[0172]-5至100mg，优选地为5至25mg的姜黄提取物形式的姜黄色素；以及
[0173]-2x108cfu至6x108cfu，优选地为3x108cfu至5x108cfu的酵母菌酿酒酵母，优选地为布拉氏变种。
[0174]
这些日剂量可以每天一、二、三或四次单独的剂量施用。优选地，本发明的组合以每天一次或两次单独的剂量施用，优选地为每天一次。
[0175]
本发明的组合物可以在饭前通过口服途径施用。
[0176]
在另一实施方式中，本发明的组合与一种或多种用于管理子宫内膜异位症和相关症状的常规医药产品组合施用。这些医药产品包含但不限于避孕药，特别是孕激素药丸或复合药丸类型的口服避孕药，镇痛药，特别是对乙酰胺酚和阿司匹林，非类固醇抗炎药(nsaid)，特别是布洛芬(ibuprofen)和氟比洛芬(flurbiprofen)，或者在医学辅助生殖(medically assisted reproduction,mar)中使用的卵巢刺激治疗，特别是在体外受精方案的背景下。
[0177]
本发明的组合还可以与切除子宫内膜异位病灶的手术相结合用于管理子宫内膜
异位症。作为另外的实例，本发明的组合还可以与水疗法组合用于管理子宫内膜异位症。在本文中，“水疗”是指使用来自温泉的天然温泉水及其衍生产品(例如热气和泥浆)。举例而言，水疗可以进行至少连续三周，以减轻与子宫内膜异位症相关的疼痛为目的，且特别包含应用诸如阴道冲洗、母液压缩、变压热水淋浴以及在热水游泳池中进行动员的应用。
[0178]
更一般地，本发明的组合可以与替代药物治疗组合使用，例如与针灸、整骨疗法、瑜伽、运动疗法、心理疗法、自然疗法、自我催眠、冥想和/或放松的组合。
[0179]
在一具体实施方式中，将本发明的组合施用于患有子宫内膜异位症且将接受选自切除子宫内膜异位病灶的手术和/或art治疗的女性。通常，本发明的组合可在治疗前每天施用至少一周(例如至少2、3、4、5、6、7或8周)。这种施用可与口服避孕药联合施用，通常是雌激素-孕激素(estrogen-progestagen)药丸，例如基于左炔诺孕酮(levonorgestrel)和炔雌醇(ethinylestradiol)的雌激素-孕激素药丸，或者是gnrh激动剂。
[0180]
在另一实施方式中，将本发明的组合施用于患有子宫内膜异位症且已经接受了切除子宫内膜异位病灶的手术治疗的女性。
[0181]
此外，本发明的组合可与具有生理或营养作用的其他活性物质一起施用，例如益生元、维生素、微量元素矿物质；植物、水果、蔬菜、藻类或真菌的粉末或提取物；以及益生菌，以及更一般地与任何具有营养或健康目的的生理物质，优选地为2016年9月26日法令中所定义的，该法令规定了法国食品补充剂中允许的具有营养或生理目的的物质清单及其使用条件。此类物质的实例在下文的组合物部分详述。
[0182]
在一具体实施方式中，本发明的组合与选自以下的活性成分一起施用：维生素，特别是维生素c、维生素d、维生素b6、维生素b12、叶酸和/或5-甲基四氢叶酸(均属于维生素b9群)；矿物质，例如锌、铜、镁、钙；微量元素，例如硒或锰；益生菌，例如乳杆菌(lactobacillus spp)菌种，如嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)、干酪乳杆菌(lactobacillus casei)、副干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)或双歧杆菌(bifidobacterium spp)菌种；益生元，例如菊粉、肌醇或果寡糖/半乳寡糖、树胶(瓜尔胶、阿拉伯胶等)；避孕药及其组合。
[0183]
举例而言，本发明的组合可与一种或多种以下物质一起施用：维生素b6、维生素b9、锌、镁、硒、菊粉、果寡糖或半乳寡糖及其组合。
[0184]
作为说明，本发明的组合与锌(zn
2
)，例如双甘氨酸盐形式的锌和益生元例如菊粉组合施用。
[0185]
4.本发明的组合物和试剂盒
[0186]
本发明还涉及一种包含本发明的活性成分即白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的组合的组合物。不言而喻，该组合物尤其旨在施用于患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象。所述组合物特别适用于实施本技术中描述的任何一种用途和方法，特别是用于管理患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象。
[0187]
白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母如上述所定义。
[0188]
优选地，本发明的组合物是用于口服施用的组合物。特别地，其可优选地为施用于人类的药物、保健品或营养食品组合物。其可特别为医药产品、食品补充剂、功能性食品、保健品、针对特定群体的营养制剂等。
[0189]
优选地，本发明的组合物是医药产品或食物补充剂，更优选地为食物补充剂。
[0190]
本发明的组合物可以是各种形式，其可为固体、液体或凝胶组合物。优选地，本发明的组合物是适合于通过口服途径施用形式的组合物。其可特别为丸剂、片剂、胶囊、任选地溶解或重新悬浮在合适媒介物中的粉末、糊剂或口香糖、吸吮或咀嚼的糖果、溶液，例如包装在安瓿中的口服溶液、凝胶等。
[0191]
在某些实施方式中，本发明的组合物包含或基本上由以下比例的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母组成：
[0192]-10至50重量％的白藜芦醇，
[0193]-10至60重量％的姜黄提取物，
[0194]-1至50重量％的酵母菌酿酒酵母，
[0195]
百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母的总和为100重量％表示或以所述组合物重量为100重量％表示。
[0196]
在另一实施方式中，本发明的组合物包含或基本上由以下比例的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母组成：
[0197]-20至70重量％的白藜芦醇，
[0198]-1至20重量％的姜黄提取物，
[0199]-10至60重量％的酵母菌酿酒酵母，
[0200]
百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的总和为100重量％表示或以所述组合物重量为100重量％表示。优选地，百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的总和为100重量％表示。
[0201]
在另一实施方式中，本发明的组合物包含或基本上由以下比例的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母组成：
[0202]-20至40重量％的白藜芦醇，
[0203]-40至60重量％的姜黄提取物，
[0204]-5至30重量％的酵母菌酿酒酵母，
[0205]
百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的总和为100重量％表示或以所述组合物重量为100重量％表示。优选地，百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的总和为100重量％表示。
[0206]
在另一实施方式中，本发明的组合物包含或基本上由以下比例的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母组成：
[0207]-50至70重量％的白藜芦醇，
[0208]-5至20重量％的姜黄提取物，
[0209]-15至40重量％的酵母菌酿酒酵母，
[0210]
百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的总和为100重量％表示或以所述组合物重量为100重量％表示。优选地，百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母的总和为100重量％表示。
[0211]
在另一实施方式中，本发明的组合物包含或基本上由以下比例的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母组成：
[0212]-25至35重量％，例如30至34重量％的白藜芦醇，
[0213]-45至55重量％，例如46至50重量％的姜黄提取物，
[0214]-15至25重量％，例如18至22重量％的酵母菌酿酒酵母，
[0215]
百分比以所述组合物中存在的白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母的总和为100重量％表示或以所述组合物重量为100重量％表示。
[0216]
在某些另外的或替代的实施方式中，本发明的组合物的特征在于以下特征中的一个或多个：
[0217]-姜黄提取物为包含至少15重量％姜黄色素的提取物，和/或
[0218]-姜黄提取物包含姜黄素、去甲氧基姜黄素和/或双去甲氧基姜黄素，和/或
[0219]-姜黄提取物包含相对于提取物中存在的姜黄色素的总重量按重量计至少55重量％，优选的为按重量计至少60重量％的姜黄素，和/或
[0220]-姜黄提取物封装在环糊精优选γ-环糊精中，和/或
[0221]-以白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母的总和为100重量％计或以所述组合物为100重量％计，该组合物包含1至20重量％，优选地为1至10重量％的姜黄色素，和/或
[0222]-以白藜芦醇、姜黄提取物和酿酒酵母的总和为100重量％计或以所述组合物为100重量％计，该组合物包含0.5至10重量％的姜黄色素，和/或
[0223]-酵母菌酿酒酵母是布拉氏变种的酵母菌，和/或
[0224]-白藜芦醇以富含白藜芦醇的植物提取物的形式提供，优选地为日本虎杖提取物，和/或
[0225]-白藜芦醇以反式白藜芦醇的形式提供。
[0226]
不言而喻，本发明的组合物可包含一种或多种附加成分，例如一种或多种添加剂、赋形剂或如下所定义的附加活性物质。这种或这些附加成分优选地选自药学上、保健品学上和/或营养学上可接受的成分。其可占本发明组合物总重量的1至95重量％，优选地为1至79重量％，例如10至50重量％，或者20至60重量％。
[0227]
因此，本发明的组合物可以包含：
[0228]-5至99重量％，优选地为21至99重量％的白藜芦醇、酵母菌酿酒酵母和姜黄提取物，优选地为上述的比例，以及
[0229]-1至95重量％，优选地为1至79重量％的一种或多种选自添加剂、赋形剂和附加的药学上、保健品学上和/或营养学上可接受活性成分的成分。
[0230]
作为另外的实例，本发明的组合物可以包含：
[0231]-10至50重量％的白藜芦醇；
[0232]-10至60重量％的姜黄提取物；
[0233]-1至50重量％的酵母菌酿酒酵母；以及
[0234]-1至79重量％的一种或多种选自添加剂、赋形剂和附加的药学上、保健品学上和/或营养学上可接受活性成分的附加成分。
[0235]
作为另一个的实例，本发明的组合物可以包含：
[0236]-10至50重量％的白藜芦醇；
[0237]-1至20重量％的姜黄提取物形式的姜黄色素；
[0238]-1至50重量％的酵母菌酿酒酵母；以及
[0239]-1至88重量％的一种或多种选自添加剂、赋形剂和附加的药学上、保健品学上和/
或营养学上可接受活性成分的附加成分。
[0240]
附加成分可为任何类型，且取决于本发明组合物的形式和所寻求的治疗、保健品学或生理学效果。
[0241]
在一具体实施方式中，该组合物包含一种或多种附加的药物或保健品学活性成分，包括一种或多种用于营养或健康目的的生理成分，优选地如2016年9月26日颁布的法令中所定义的，该法令规定法国食品补充剂中允许的具有营养或生理目的的成分清单及其使用条件。相对于组合物的总重量，一种或多种附加的药物或保健品学活性成分优选地占至多50重量％，特别是至多45、40、30、20、15或10％。通常，其以组合物最终重量的0.5至30重量％的量存在。
[0242]
活性药物成分特别包括nsaid、避孕药特别是孕激素例如去氧孕烯和左炔诺孕酮，以及地诺孕酮雌激素例如炔雌醇、gnrh激动剂及其组合。
[0243]
特别用于营养或生理目的的保健品活性成分包含但不限于维生素、矿物质、微量元素、植物提取物和粉末、藻类或真菌、益生元、益生菌、氨基酸、抗氧化剂及其组合。
[0244]
作为维生素、矿物质和微量元素的实例，我们可提到维生素硫胺素(b1)、核黄素(b2)、烟酸(b3)、泛酸(b5)、吡哆醇(b6)、叶酸(b9)和氰钴胺(b12)，以及维生素c、a、d、e、k1和k2，矿物质如镁、钙或铁，微量元素如碘、铁、铜、锌、硒、铬、钼、硼、锰或其混合物。
[0245]
举例而言，植物、藻类或真菌的粉末或提取物(干燥或液体)可特别地选自本领域技术人员已知的各种欧洲监管清单，包含例如：魔芋粉/提取物、山药粉/提取物、豆粉/提取物、咖啡粉/提取物、茶粉/提取物、松树皮粉/提取物、葡萄粉/提取物、大蒜粉/提取物、藏红花粉/提取物、苹果粉/提取物、灵芝粉/提取物、螺旋藻粉/提取物、小球藻粉/提取物、褐藻粉/提取物及其任何混合物。
[0246]
举例而言，益生元可以是糖、糖醇、寡糖或具有可变聚合度的或多或少支链的多糖。益生元可例如选自菊粉、肌醇、塔格糖、乳果糖、α-葡聚寡糖、反式半乳寡糖(tos)、果寡糖(fos)、半乳寡糖(gos)、木寡糖(xos)及其混合物。
[0247]
举例而言，氨基酸包含但不限于亮氨酸、瓜氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、半胱氨酸及其衍生物、甲硫氨酸及其衍生物、色氨酸及其衍生物。
[0248]
举例而言，抗氧化剂包含但不限于超氧化物歧化酶(sod)、泛醇/泛醌(辅酶q10)、白藜芦醇、儿茶素(儿茶素、表儿茶素和没食子酸酯衍生物)、黄烷醇、黄烷酮或花青素。
[0249]
益生菌包含但不限于选自芽孢杆菌属(bacillus)、拟杆菌属(bacteroides)、双歧杆菌属(bifidobacterium)、肠杆菌科(enterobacteriaceae)、肠球菌属(enterococcus)、粪杆菌属(faecalibacterium)、梭杆菌属(fusobacterium)、克鲁维酵母属(kluyveromyces)、乳杆菌属、臭杆菌属(odoribacter)、副杆菌属(parabacteroides)、片球菌属(pediococcus)、瘤胃球菌属(ruminococcus)或其他酵母菌。
[0250]
在一具体实施方式中，本发明的组合物包含少于20种不同微生物菌株，优选地少于10、9、8、7、6、5、4或3种不同微生物菌株。
[0251]
此外或附加地，药物、保健品或营养组合物还可包含一种或多种益生元。
[0252]
根据一实施方式，本发明的药物、保健品或食品组合物包含活形式的益生菌以及一种或多种可被益生菌或肠道微生物群降解的益生元.益生元和益生菌的这种结合构成了合生元(synbiotic)。
[0253]
在一具体实施方式中，本发明的组合物包含乳杆菌菌株，特别是鼠李糖乳杆菌或嗜酸乳杆菌作为附加的益生菌。
[0254]
举例而言，本发明的组合物包含酿酒酵母菌株，优选地为布拉氏变种，以及乳杆菌菌株，优选地为嗜酸乳杆菌。
[0255]
在另一实施方式中，组合物不含任何属于乳杆菌属，特别是嗜酸乳杆菌和/或双歧杆菌属的益生菌。
[0256]
在另一实施方式中，酵母菌酿酒酵母是本发明组合物中存在的唯一益生菌。
[0257]
在一具体实施方式中，本发明的组合物包含附加的保健品或药物活性成分，其选自维生素特别是维生素c、维生素b6、维生素b12、叶酸和/或5-甲基四氢叶酸(维生素b9)、微量元素或矿物质例如锌、镁、钙、硒、锰、益生菌(如乳酸杆菌属菌种)、具有营养或生理目的的成分例如菊粉、果寡糖/半乳寡糖、树胶(瓜尔胶、阿拉伯树胶...)或肌醇及其组合。
[0258]
在另一具体实施方式中，本发明的组合物包含附加的保健品或药物活性成分，其选自维生素特别是维生素c、维生素d、维生素b6、维生素b12、叶酸和/或5-甲基四氢叶酸，以及微量元素或矿物质例如锌、镁、钙、硒或锰。
[0259]
举例而言，除了本发明的组合之外，组合物还包含一种或多种选自维生素b6、维生素b9、锌、镁、硒、菊粉、果寡糖/半乳寡糖及其组合的成分。
[0260]
例如，本发明的组合物包含锌和维生素b6。
[0261]
根据另一实例，本发明的组合物可包含锌和菊粉。
[0262]
在一具体实施方式中，本发明的组合物是剂量单位的形式，包含：
[0263]-10至300mg，优选地为25至250mg的白藜芦醇；
[0264]-10至300mg，优选地为25至250mg的姜黄提取物；以及
[0265]-1x107cfu至1x10
11
cfu，优选地为1x108cfu至1x109cfu的酵母菌酿酒酵母，优选地为布拉氏变种。
[0266]
在另一具体实施方式中，本发明的组合物是剂量单位的形式，包含：
[0267]-25至100mg，优选地为30至70mg的白藜芦醇；
[0268]-1至300mg，优选地为5至25mg的姜黄提取物；以及
[0269]-1x108至1x109cfu，优选地为2x108至6x108cfu的酵母菌酿酒酵母，优选地为布拉氏变种。
[0270]
所述剂量单位可例如为片剂和胶囊。
[0271]
本发明的药物、保健品或食品组合物的制剂可根据施用途径和打算使用组合物的剂量而变化。本发明的药物、保健品或食品组合物可以特别是固体、半固体或液体形式。在使用至少一种生理上可接受的媒介物或赋形剂配制后，本发明的组合物可以是适合于施用于哺乳动物，特别是人类的任何形式，例如片剂、锭剂、糖衣丸剂、软胶囊、硬胶囊、丸剂、颗粒剂、粉剂、悬浮液、乳液、糖浆、软膏、液体安瓿、带有滴管的瓶子和其他类似形式的液体制剂或粉剂，或栓剂。
[0272]
本领域技术人员能够选择最适合制备给定类型制剂的媒介物和赋形剂。
[0273]
在一具体实施方式中，生理学上可接受的媒介物可以是固体，且本发明的组合物可以是粉末或片剂的形式。生理学上可接受的媒介物也可以是液体，且本发明的组合物可以是溶液形式。液体媒介物用于制备溶液、溶剂、分散介质、悬浮液、乳液、糖浆、酏剂和加压
组合物。合适的液体或凝胶基载体包含但不限于：水和生理盐水溶液；乳液或悬浮液，包括盐水溶液和缓冲介质；尿素；非水溶剂，例如醇类(例如乙醇)或植物油或种子油，例如橄榄油。液体组合物，包括例如乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酏剂，尤其可在溶剂、增溶剂、乳化剂、油、脂肪酸和/或其他添加剂，例如悬浮剂、防腐剂、甜味剂、天然或合成调味剂、稳定剂和/或增稠剂和/或食品级着色剂存在下配制。乳液可能含有乳化剂，例如卵磷脂、失水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。还可将众所周知的增稠剂加至组合物中，例如玉米淀粉、天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、瓜尔胶、黄原胶等。
[0274]
选择赋形剂和媒介物以不显著影响酵母菌酿酒酵母和任选地存在于本发明的组合物中的其他益生菌的活力。
[0275]
特别地，本发明的组合物可进一步包含：
[0276]-抗结块剂，例如碳酸镁、碳酸钙、二氧化硅、硬脂酸、脂肪酸盐例如硬脂酸镁、棕榈酸镁、油酸镁或肉豆蔻酸镁；和/或
[0277]-一种或多种增黏剂或表面活性剂，特别是淀粉、纤维素醚例如羟丙基甲基纤维素或阿拉伯树胶；和/或
[0278]-一种或多种黏合剂，特别是鱼油或任何植物油，例如向日葵油、大豆油、橄榄油或奇亚籽油；和/或
[0279]-包衣剂，例如蜂蜡、巴西棕榈蜡或食品脂肪酸的单酸甘油酯；和/或
[0280]-乳化剂，例如卵磷脂、环糊精或酯胶；和/或
[0281]-一种或多种稀释剂，如纤维素或麦芽糊精；和/或
[0282]-一种或多种非营养性甜味剂，特别是山梨糖醇、三氯蔗糖、阿斯巴甜、纽甜、麦芽糖醇、木糖醇、乙酰磺氨酸钾、阿斯巴甜、糖精、甘草酸或甜菊提取物；和/或
[0283]-粉状或液体形式的一种或多种天然或人造调味剂；和/或
[0284]-一种或多种酸度校正剂，特别是盐、柠檬酸、苹果酸或酒石酸；和/或
[0285]-一种或多种着色剂，特别是花青素、β-胡萝卜素、甜菜提取物、番茄红素或焦糖提取物。
[0286]
在某些实施方式中，本发明的药物、保健品或食品组合物被配制用于立即释放一种或多种活性成分或成分。或者，可以配制药物组合物以延长或靶向释放活性成分或保护活性成分，例如抵抗酸度和胃酶。因此，可以使用对ph值和/或胃酶作用有抵抗力的包衣，对ph值和/或酶促作用敏感的包衣，或黏附在胃或肠壁上的生物黏附包衣，或封装系统。
[0287]
优选地，该组合物为胃耐受口服形式，允许包含在本发明的组合物中的酵母耐受胃的胃液并在肠中释放。肠溶包衣可耐受酸性ph(如在胃中)且可在碱性ph下溶解(例如在肠中)。可用于肠溶包衣的材料包含例如藻酸、邻苯二甲酸醋酸纤维素、蜡、虫胶、脂肪酸(例如硬脂酸或棕榈酸)或壳聚糖，但不限于此。
[0288]
在一实施方式中，胃耐受和肠溶包衣被设计用于维持活性成分在胃中的稳定性。肠溶包衣设计用于在胃的酸性条件下维持并在非酸性条件下降解，从而在肠中释放药物、保健品或食品组合物。
[0289]
肠溶包衣可用于i)防止胃液与活性成分反应或破坏活性成分；ii)防止活性成分在到达肠道之前被稀释；iii)确保活性成分仅在制剂通过胃后释放；以及iv)防止包含在本发明的组合物中的活酵母被胃的酸性ph改变或杀死。
[0290]
根据一实施方式，该组合物还可包含麦芽糊精和/或硬脂酸镁。
[0291]
本发明的组合物可以通过本领域技术人员已知的任何方法制备，例如通过将白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母与一种或多种营养上、保健品学上或药学上可接受的赋形剂或添加剂混合。
[0292]
在一具体实施方式中，本发明的组合物是剂量单位的形式，包含：
[0293]-25至100mg，优选地为30至70mg的白藜芦醇；
[0294]-1至300mg，优选地为5至25mg的姜黄提取物；以及
[0295]-1x108cfu至1x109cfu，优选地为2x108cfu至6x108cfu的酵母菌酿酒酵母，优选地为布拉氏变种；
[0296]-益生元，优选地为菊粉；以及
[0297]-锌，优选地以双甘氨酸锌的形式。
[0298]
本发明的组合物还可包含一种或多种选自稀释剂、抗结块剂、乳化剂、增黏剂及其组合的赋形剂。
[0299]
优选地，本发明的组合物可包含γ-环糊精、麦芽糊精和脂肪酸盐，例如硬脂酸镁或硬脂酸、油酸、棕榈酸和肉豆蔻酸的镁盐的混合物。
[0300]
优选地，本发明的剂量单位为粉末形式。该粉末通常包含在胶囊中，优选地基于羟丙甲纤维素(hpmc)和碳酸钙的胶囊中。
[0301]
作为说明，本发明的组合物是剂量单位的形式，包含：
[0302]-25至100mg，优选地为30至70mg的白藜芦醇，优选地为反式白藜芦醇；
[0303]-5至25mg的姜黄提取物形式的姜黄色素；
[0304]-1x108cfu至1x10
10
cfu，优选地为2x108cfu至6x108cfu，更优选地为3x108cfu至5x108cfu的布拉氏变种的酵母菌酿酒酵母，例如菌株cncm i-3799或菌株cncm i-745；
[0305]-10mg至100mg，优选地为25mg至50mg的菊粉，例如以菊苣根提取物的形式提供；以及
[0306]-1mg至15mg的锌(zn
2
)，优选地为2mg至8mg的锌，例如以双甘氨酸锌的形式。
[0307]
剂量单位可以包含在胶囊中，优选地为基于hpmc或普鲁兰多糖的植物性胶囊。
[0308]
剂量单位可包含作为赋形剂的γ-环糊精、麦芽糊精和脂肪酸镁盐，例如硬脂酸、油酸、棕榈酸、肉豆蔻酸的镁盐及其混合物。
[0309]
γ-环糊精通常用于提高姜黄提取物的生物利用度。γ-环糊精可以每剂量单位20至120mg的量存在。麦芽糊精可以每剂量单位5至50mg的量存在。脂肪酸镁盐可以每剂量单位0.1mg至10mg的量存在。
[0310]
本发明还涉及一种保健品或药物试剂盒，例如包含几种组合物的食品补充剂试剂盒，优选地为用于口服施用，并结合本发明的组合。
[0311]
在一具体实施方式中，该试剂盒包含：
[0312]-包含酵母菌酿酒酵母的组合物；
[0313]-包含白藜芦醇的组合物；以及
[0314]-包含姜黄提取物的组合物。
[0315]
在一具体实施方式中，该试剂盒包含：
[0316]-第一组合物，其包含酵母菌酿酒酵母，例如与胶囊中的一种或多种赋形剂联合；
以及
[0317]-第二组合物，其包含白藜芦醇和姜黄提取物，例如以片剂或胶囊的形式。
[0318]
该试剂盒通常包含每种组合物的几个剂量单位。其还可包含试剂盒的施用说明。
[0319]
在一具体实施方式中，第一组合物可以是包含10至300mg，优选地为25至250mg的白藜芦醇；以及1至300mg，优选地为10至300mg、5至25mg或25至250mg的姜黄提取物的剂量单位形式，且第二组合物可以是包含1x107cfu至1x10
11
cfu，优选地为1x108cfu至1x109cfu的酵母菌酿酒酵母优选地为布拉氏变种的剂量单位形式。剂量单位可以是例如片剂和胶囊。
[0320]
该试剂盒中存在的组合物的特征类似于本发明的组合物的特征，特别是在酵母、白藜芦醇和姜黄提取物之间的相对重量比以及剂量方面。
[0321]
试剂盒中存在的每种组合物可包含如上所述的一种或多种选自添加剂、赋形剂和附加的药学上、保健品学上和/或营养学上可接受的活性成分的附加成分。
[0322]
本发明还涉及一种治疗患有子宫内膜异位症或易患子宫内膜异位症的对象的方法，所述方法包括向该对象施用有效剂量的白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母。这种方法的实施和预期效果是针对本发明的用途所描述的那些。
[0323]
通过阅读下文中给出的实施例将能更好地理解本发明，这些实施例仅是说明性的而非限制性的。
[0324]
实施例
[0325]
实施例1：本发明的组合对子宫内膜异位症鼠模型的效果的评价
[0326]
此研究的目的是在体内测试包含姜黄提取物、白藜芦醇和酵母菌酿酒酵母布拉氏变种的组合对子宫内膜异位症鼠模型中子宫内膜异位病灶的生长以及免疫和炎症状态的效果。
[0327]
材料及方法
[0328]
6周龄的雌性balb/cjrj小鼠购自供货商janvier labs(route du genest,53940 le genest-saint-isle)。将小鼠饲养在常规动物房中，具有12小时的自动昼/夜循环，随意饮水(自来水)和进食(teklad,envigo,gannat,france,#t.2016mi.12)。同基因腹膜内子宫角植入(缝合)的子宫内膜异位小鼠模型是经过验证的模型，已多次使用并发表[jones等,2018；ruiz等,2016]。在异氟醚麻醉(3.5％，氧气2.5l/min下)及术后止痛(bupr
é
care，10μg/kg，sc)下进行腹膜内子宫角植入。进行剖腹术，且通过两个用可吸收缝线5/0制成的缝合点将片段固定在腹膜内壁上开口的每一侧。
[0329]
用于治疗的分子和产品是：双甘氨酸锌螯合物(lbion laboratories,clearfield,usa,#03506)、seygal阿拉伯树胶(nexira food,rouen,france,#fibergumb)、反式白藜芦醇(active inside,beychac et caillau,france,#pr-0018)、姜黄提取物(wacker,eddyville,ia,usa,#60072151)、布拉氏酿酒酵母(lhc lesaffre bio springer,maison alfort,france,#vi1700368)、嗜酸乳杆菌(danisco us,madison,wi,usa,#msamphrudoph)。
[0330]
小鼠的组如下：
[0331]
对照组(假手术，sham)(n＝10)：进行假手术但没有植入物和未经治疗的小鼠(假手术)；
[0332]
m组(对照组)(n＝10)：小鼠手术，其使用包含媒介物(双甘氨酸锌、seygal阿拉伯
int.1996 may；49(5):1304-13.晚期氧化蛋白产物作为尿毒症氧化应激的新标志物(advanced oxidation protein products as a novel marker of oxidative stress in uremia).witko-sarsat v等.)。
[0352]
il6和tnfα使用elisa试剂盒测量(thermofisher scientific,waltham,ma usa分别用#kmc0061和bms607-3)以及连蛋白(clinisciences,nanterre,france,#mbs748504-96)。
[0353]-通过组织学和qrt-pcr研究病灶
[0354]
根据制造商的说明，使用试剂trizol(invitrogen,carlsbad,usa)从小鼠组织(子宫内膜异位症类型的病灶)中提取总rna。使用合成试剂盒maxima h minus cdna synthesis master mix kit(thermo fisher scientific)合成cdna。qpcr使用试剂盒sensifast sybr no-rox(bioline)进行。所选基因的转录水平在light cycler 480(roche,san francisco,ca)中量化，并针对参考基因(actinb和tbp)进行标准化，并使用lightcycler专用软件进行分析。
[0355]
各种结果的统计分析
[0356]
各组小鼠的比较统计分析通过单因子变异量分析(1-factor anova)以及kruskal-wallis检验进行。
[0357]
结果
[0358]
1)子宫内膜异位病灶的重量和体积
[0359]
对于三个组小鼠m、m1和m2(m，n＝10；m1，n＝20；m2，n＝20)，植入时病灶的重量和体积是一致的。
[0360]
治疗12周后，注意到使用本发明的组合物(m1或m2)治疗的小鼠的病灶体积和重量显著低于使用对照组合物m治疗的小鼠(p《000.1)。
[0361]
因此，本发明的组合白藜芦醇、姜黄提取物和酵母菌酿酒酵母布拉氏变种的组合协同作用于子宫内膜异位病灶的进展(图1)。
[0362]
2)牺牲时取样的病灶组织学
[0363]
在组织学上，在治疗3周和12周后，m1组和m2组相对于对照组m观察到病灶活动性降低(图2)；实际上，腺体外观是子宫内膜异位病灶的标志，相对于m组，m1组和m2组的腺体外观明显减弱。
[0364]
3)各组在s12的脾免疫状态
[0365]
与没有病灶植入的假手术组(sham)相比，所有组的免疫状态都发生了改变(图3及图4)。
[0366]
假手术(sham)组、m组、m1组和m2组之间脾脏活化tcd4和tcd8的百分比呈下降趋势，无显著性(sham，n＝3；m，n＝6；m1，n＝5；m2，n＝5)。m、m1和m2制剂倾向于降低脾脏活化b细胞的百分比(sham，n＝3；m，n＝6；m1，n＝5；m2，n＝5)。
[0367]
值得注意的是，相对于对照组(m和sham)，在本发明的组(m1和m2)的小鼠中，m1/m2(1型和2型巨噬细胞)的比率显著增加。对人类和小鼠的研究证明了m2巨噬细胞在子宫内膜异位病灶的建立和生长的发病机制中起了关键作用。实际上，与对照组相比，子宫内膜异位症女性腹腔液体中m2巨噬细胞的比例有所增加。此外，还表明m2巨噬细胞的腹膜内转移导致小鼠子宫内膜异位症的生长和新生血管形成(bacci等,2009)。因此，本研究的结果表明，
本发明的组合对巨噬细胞的极化具有免疫调节作用，这可能允许患有子宫内膜异位症的患者的免疫反应正常化。
[0368]
4)炎症参数
[0369]
与假手术对照组(sham)相比，本发明的组(分别为m1和m2)中，肠屏障通透性标志物连蛋白和炎症标志物白介素6非常显著地降低。tnf-α也显著地降低，因为它在m1和m2组的血清中检测不到(图5)。
[0370]
5)氧化应激
[0371]
与假手术组(sham)相比，三个补充组(m、m1和m2)在12周时，血清蛋白氧化水平和氧化应激水平的标志物，即晚期氧化蛋白产物(aopp)显著地降低(图4)。
[0372]
6)qpcr结果
[0373]
初步结果显示，m1和m2组在s12的血管生成标志物(cd31)有降低的趋势。通过anova分析和bonferroni检验进行的s12-s3比较显示，仅m1组的标记物igf1(疼痛标记物)显著降低。
[0374]
关于疼痛敏感性，需要注意的是，根据“热板”试验，在治疗第4周，m1组相对于m0和m2组，对热的敏感性显著降低。
[0375]
结论
[0376]
以上结果表明，本发明的组合在临床和免疫和生理方面均具有良好的效果。本发明的组合显著减缓鼠模型中子宫内膜异位病灶的生长。此外，子宫内膜异位症的特征是免疫功能紊乱。现在，本发明的组合产生允许减少炎症的免疫调节效果，如促炎细胞因子tnf-α和il-6的血清水平降低、巨噬细胞m1/m2比例的调节和b细胞活化的减少。最后，本发明的组合可降低肠通透性标志物连蛋白的循环水平。
[0377]
实施例2：用于评估包含本发明的组合的食品补充剂对患有疼痛性子宫内膜异位症的女性生活质量影响的前瞻性、随机、双盲研究
[0378]
·
研究中心：
[0379]
cochin医院(port royal,france)。
[0380]
·
方法：
[0381]
该试点研究是一项单中心、随机、平行组、双盲、安慰剂对照研究。
[0382]
·
产品：
[0383]-实验产品(以下称qolendo)是一种食品补充剂，包含本发明的组合(剂量单位：白藜芦醇50mg、布拉氏酿酒酵母：4亿cfu和姜黄素12.7mg)、菊粉(34mg)、双甘氨酸锌(20mg当量)、γ-环糊精(58.5mg)、硬脂酸镁(1.5mg)和麦芽糊精(19.5mg)，为胶囊形式(hpmc、碳酸钙)。
[0384]-对照组产品是一种安慰剂胶囊，具有相同的包装和外观特征，其中的活性成分已被麦芽糊精、β-胡萝卜素(呈橙色)和硬脂酸镁代替。
[0385]
·
研究人数：
[0386]
80名患有疼痛性子宫内膜异位症并符合纳入和排除标准的女性将随机参与本研究。
[0387]
·
研究计划：
[0388]
招募：10个月；服用产品的持续时间：4个月；每个对象参与的总持续时间：5个月；
研究的总持续时间：15个月。
[0389]
·
干预：
[0390]
在就诊v1随机化后，对象将食用：
[0391]-实验产品：qolendo组
[0392]
从第1次就诊到第3次就诊(服用产品4个月)，每天早上或晚上搭配一杯水服用1粒qolendo产品胶囊；或者
[0393]-对照组：安慰剂
[0394]
从第1次就诊到第3次就诊(服用产品4个月)，每天早上或晚上搭配一杯水服用1粒安慰剂胶囊。
[0395]
·
研究目标：
[0396]
研究假设：研究的假设是测试产品qolendo可以改善患有疼痛性子宫内膜异位症的女性的生活质量。
[0397]
主要目标：主要目标是在服用产品4个月后使用ehp-5问卷评估qolendo组患有子宫内膜异位症的女性相对于安慰剂组女性的生活质量。
[0398]
次要目标：研究的次要目标是评估以下参数，两组之间和组内差异：
[0399]
1)服用产品2个月后使用ehp-5问卷调查的生活质量；
[0400]
2)服用产品4个月后的临床总体印象量表(cgi)问卷；
[0401]
3)整个研究过程中感受到的疼痛；
[0402]
4)在整个研究过程中镇痛剂的消耗；
[0403]
5)服用产品4个月后的炎症、免疫和荷尔蒙状态；
[0404]
6)服用产品4个月后肠上皮通透性；
[0405]
7)服用qolendo组产品2个月及4个月后，对产品的接受度。
[0406]
探索目标：为深度子宫内膜异位症和/或存在子宫腺肌病的女性亚组进行骨盆超声波检查，使用ehp-30问卷评估生活质量，自愿完成：问卷将在随机就诊(v1)，并在服用产品4个月后就诊v3时完成。
[0407]
安全目标：研究的安全目标是通过生命体征、体重和生物参数(在4个月时测量)以评估不良事件(ae)的发生率和总体健康状况。
[0408]
·
判断标准：
[0409]
主要判断标准：本研究的主要标准是生活质量的变化，4个月时相对于初次就诊(v1)，通过ehp-5问卷评估，总分以任意单位表示(a.u.,评分)，比较qolendo组与安慰剂组。
[0410]
次要判断标准：本研究的次要标准(如下所述)使qolendo组和安慰剂组可比较：
[0411]
1)在2个月时生活质量相对于初次就诊的变化，通过ehp-5问卷评估，以a.u.表示；
[0412]
2)相对于初次就诊，4个月时临床总体印象量表问卷的变化。本问卷由3个子量表组成：
[0413]
a.疾病的严重程度(评分范围从正常的1分至最严重的7分)；
[0414]
b.整体改善或变化(评分范围从1分强烈改善至7分强烈恶化)；
[0415]
c.治疗反应(评分范围从0分无不良事件的显著改善至4分无变化或恶化以及效益/风险平衡不令人满意)。
[0416]
3)疼痛的变化，在整个研究中相对于初始值，在视觉仿真量表(vas)上定义，从0至
10评估：
[0417]
疼痛(综合评价)、痛经、性交疼痛、非周期性慢性骨盆疼痛、消化疼痛、消化不良、小便疼痛。将收集月经日期以区分经期疼痛。
[0418]
4)整个研究中镇痛剂相对于初始值的定量消耗(以克/天为单位)；
[0419]
5)与初始值相比在4个月时的炎症状态，由以下参数评估：tnf-α、il1、il6、crp-us、aopp；
[0420]
6)与初始值相比在4个月时的免疫状态，由以下参数评估的：il4、il10、il12、infγ、nk细胞；
[0421]
7)与初始值相比在4个月时的荷尔蒙状态，由雌二醇(e2)、孕酮和抗缪勒管激素(amh)评估；
[0422]
8)与初始值相比在4个月时肠上皮的通透性，由血液连蛋白测定评估；
[0423]
9)服用qolendo组的产品2个月及4个月后，对产品的接受度。
[0424]
安全标准
[0425]
本研究的安全标准，在初次就诊以及4个月时测量为：
[0426]
1)体重(kg)；
[0427]
2)血液动力学参数：心率(hr,bpm)、收缩压(sbp,mmhg)和舒张压(dbp,mmhg)；
[0428]
3)以下生物学参数：
[0429]-全血细胞计数；
[0430]-通过确定以下参数来确定肝功能：asat、alat和ggt；
[0431]-通过肌酐测定肾功能。
[0432]
4)在整个研究中出现的每个对象的不良事件数量；
[0433]
5)在整个研究中出现至少一种不良事件的对象比例。
[0434]
探索标准：
[0435]
研究的探索标准涉及初始值与4个月时测量的值之间的变化：
[0436]-深度子宫内膜异位症和/或存在子宫腺肌病的患者通过骨盆超声波获得的参数；
[0437]-ehp-30问卷。