与色素沉着有关的组合物和方法与流程

与色素沉着有关的组合物和方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年3月27日提交的美国临时专利申请第63/001,095号的权益，所述美国临时专利申请以全文引用的方式并入本文。


背景技术：

3.皮肤、毛发和眼睛的颜色是由黑素体产生的黑色素引起的。特定个体所产生的黑色素量基于包含暴露于uv光的多种遗传因素和环境因素而变化。皮肤中黑色素的过量产生会导致色素沉着过度，从而导致黄褐斑、雀斑和老年色素斑。因此，了解黑色素产生的调节和潜在机制对于鉴定用于预防和治疗色素沉着病症的目标非常重要。


技术实现要素：

4.本文描述了用于调节色素沉着的组合物和方法。在一些情况下，如本文所描述的组合物和方法可减少黑素细胞激活，抑制黑色素合成，减少黑色素转移，导致含有黑素体的角质细胞脱落或黑素体自噬或其组合。
5.本文所描述的一方面是用于改善色素沉着的局部组合物，所述局部组合物包括：一种或多种光体；一种或多种脂质体；六肽-11；以及六肽-12；其中所述局部用组合物改善色素沉着。在一个特征中，所述一种或多种光体以约0.1wt.％至约2wt.％的范围存在。在一个特征中，所述一种或多种光体以约0.25wt.％至约1wt.％的范围存在。在一个特征中，所述一种或多种光体包封所述一种或多种脂质体。在一个特征中，所述六肽-11以50-150ppm存在。在一个特征中，所述六肽-11以约0.004重量(wt.％)至约0.100wt.％的范围存在。在一个特征中，所述六肽-11被包封在所述一种或多种脂质体中的第一脂质体中。在一个特征中，所述六肽-12被包封在所述一种或多种脂质体中的第二脂质体中。在一个特征中，所述六肽-11和所述六肽-12被包封在所述一种或多种脂质体中的第一脂质体中。在一个特征中，所述六肽-12包括棕榈酰六肽-12、肉豆蔻酰六肽-12或其组合。在一个特征中，所述六肽-12以1-10ppm存在。在一个特征中，所述六肽-12以约0.001重量(wt.％)至约0.025wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括乳铁蛋白。在一个特征中，所述乳铁蛋白以不超过约0.25wt.％存在。在一个特征中，所述乳铁蛋白以约0.005wt.％至约0.25wt.％的范围存在。在一个特征中，所述乳铁蛋白被包封在所述一种或多种脂质体中的第三脂质体中。在一个特征中，所述局部进一步包括乳铁蛋白，并且其中所述乳铁蛋白、所述六肽-11和所述六肽-12被包封在所述一种或多种脂质体中的第一脂质体中。在一个特征中，所述局部进一步包括源自乳铁蛋白的肽。在一个特征中，所述源自乳铁蛋白的肽包括seq id no:1的至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、14个、16个、18个、20个、22个、24个、26个、28个、30个或多于30个的氨基酸。在一个特征中，所述局部进一步包括磷脂酰丝氨酸。在一个特征中，所述磷脂酰丝氨酸以不超过约0.075wt.％存在。在一个特征中，所述磷脂酰丝氨酸以约0.005wt.％至约0.1wt.％的范围存在。在一个特征中，所述磷脂酰丝氨酸以不超过5.0wt％存在。在一个特征中，所述局部进一步包括水飞蓟素。在一个特征中，所述
水飞蓟素以约0.1wt.％至约1.0wt.％的范围存在。在一个特征中，所述水飞蓟素以约0.2wt.％至约3.0wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括芝麻酚。在一个特征中，所述芝麻酚以约0.002wt.％至约0.050wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括氨甲环酸。在一个特征中，所述氨甲环酸以约1wt.％至约10wt.％的范围存在。在一个特征中，所述氨甲环酸以约0.25wt.％至约6.25wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合。在一个特征中，所述八氢番茄红素、所述六氢番茄红素或其组合以约1wt.％至约10wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括南非醉茄提取物。在一个特征中，所述南非醉茄提取物以约0.020wt.％至约0.500wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括没食子酸。在一个特征中，所述没食子酸以约0.40wt.％至约10wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括橙皮苷。在一个特征中，所述橙皮苷以约0.020wt.％至约0.50wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括海百合。在一个特征中，所述海百合以约0.50wt.％至约5.0wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括烟酰胺。在一个特征中，所述烟酰胺以约1wt％至约10wt％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括橄榄苦苷。在一个特征中，所述橄榄苦苷以约0.030wt％至约0.750wt％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括嗜热栖热菌酵素。在一个特征中，所述嗜热栖热菌酵素以约0.30wt.％至约7.5wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括银耳。在一个特征中，所述银耳以约0.20wt.％至约5.0wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部进一步包括七钠六羧甲基二肽-12。在一个特征中，所述七钠六羧甲基二肽-12以约0.1wt.％至约10wt.％的范围存在。在一个特征中，所述七钠六羧甲基二肽-12以约0.2wt.％至约5wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部组合物是水性的。
6.本文所描述的一方面是用于改善色素沉着的局部组合物，所述局部组合物包括：六肽-11；六肽-12；以及源自乳铁蛋白的肽；其中所述局部组合物改善色素沉着。在一个特征中，所述六肽-12包括棕榈酰六肽-12、肉豆蔻酰六肽-12或其组合。在一个特征中，所述六肽-12以1-10ppm存在。在一个特征中，所述六肽-12以约0.001重量(wt.％)至约0.025wt.％的范围存在。在一个特征中，所述六肽-11以50-150ppm存在。在一个特征中，所述六肽-11以约0.004重量(wt.％)至约0.100wt.％的范围存在。在一个特征中，所述源自乳铁蛋白的肽包括seq id no:1的至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、14个、16个、18个、20个、22个、24个、26个、28个、30个或多于30个的氨基酸。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括磷脂酰丝氨酸。在一个特征中，按wt.％计，所述磷脂酰丝氨酸以不超过约0.075％存在。在一个特征中，所述磷脂酰丝氨酸以约0.005wt.％至约0.1wt.％的范围存在。在一个特征中，所述磷脂酰丝氨酸以不超过5.0wt％存在。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括乳铁蛋白。在一个特征中，所述乳铁蛋白以不超过约0.25wt.％存在。在一个特征中，所述乳铁蛋白以约0.005wt.％至约0.25wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括光体。在一个特征中，所述光体以约0.1wt.％至约2wt.％的范围存在。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括水飞蓟素、芝麻酚、氨甲环酸、八氢番茄红素、六氢番茄红素、南非醉茄提取物、橙皮苷、海百合、烟酰胺、橄榄苦苷、嗜热栖热菌酵素、银耳、七钠六羧甲基二肽-12或其组合。在一个特征中，所述局部组合物是水性的。
7.本文所描述的一方面是一种改善由色素沉着病症或疾病引起的色素沉着的方法，
所述方法包括施用本文所描述的局部组合物。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括为色素沉着过度的色素沉着病症或疾病。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括为炎症后色素沉着过度(pih)的色素沉着病症或疾病。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括为局灶性色素减退或弥漫性色素减退的色素沉着病症或疾病。在一个特征中，所述局部组合物进一步包括为黑棘皮病、老年斑、白化病、色素失调症、雀斑、黄褐斑、白色糠疹或进行性色素性紫癜的色素沉着病症或疾病。
8.通过引用的方式并入
9.本说明书中所提到的所有公开、专利、和专利申请均通过以相同的程度引用结合在此，如同特定且单独地指示每个单独的公开、专利、或专利申请是通过引用并入的。
附图说明
10.图1展示了影响色素沉着的因素以及可以用于治疗色素沉着疾病或病症的策略和药剂。
11.图2展示了外在影响对不同色素沉着通路的影响。所列出的缩写如下：对于黑素细胞上的表面受体：ednrb＝内皮素受体b、mc1r＝黑皮质素-1受体-激动剂是αmsh、wnt通路、scf＝干细胞因子；对于角质细胞和成纤维细胞中的细胞因子和介质：pla＝磷脂酶a、aa＝花生四烯酸、pge2＝前列腺素e2、bfgf＝碱性成纤维细胞生长因子、et-1＝内皮素-1、αmsh＝α黑素细胞刺激素、no＝一氧化氮、纤溶酶、cox2、il-1、组胺、mmp；对于黑素细胞中的酶和转录因子：mitf＝小眼相关转录因子、tyr＝酪氨酸酶、trp-2＝酪氨酸酶相关蛋白2、trp-1＝酪氨酸酶相关蛋白1。
12.图3a-3d展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、氨甲环酸(tran acid)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理后黑素细胞中的mek(图3a)、erk(图3b)、pomc(图3c)和ctnnb1(图3d)的表达水平。
13.图4展示了用六肽-12(hex-12)处理黑素细胞后各种基因的表达。
14.图5展示了用乳铁蛋白(lacto)处理黑素细胞后各种基因的表达。
15.图6a-6f展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、三肽-1(tri)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、氨甲环酸(tran acid)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理后角质细胞中的scf(图6a)、lif(图6b)、pomc(图6c)、内皮素基因(图6d)、pge2(图6e)和ngf(图6f)的表达。
16.图7展示了关于不同基因的单独的六肽-11(hex-11)活性。
17.图8a-8c展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、氨甲环酸(tran acid)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理内皮细胞后edn1(图8a)、scf(图8b)和tgfb1(图8c)的表达。
18.图9展示了edn1和其它黑素生成基因上单独的磷脂酰丝氨酸活性。
19.图10a-10d展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、氨甲环酸(tran acid)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理内皮细胞后pmel(图10a)、
酪氨酸酶基因(图10b)、mc1/4r(图10c)和ednrb(图10d)的表达。
20.图11展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、氨甲环酸(tran acid)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理内皮细胞后的mitf的表达。
21.图12a-12c展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理内皮细胞后erk1/2(mapk3/mapk1)(图12a)、jnk(图12b)、akt1(图12c)的表达。
具体实施方式
22.定义
23.在本公开全文中，各种实施例以范围格式呈现。应当理解，以范围格式进行描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对任何实施例的范围进行不灵活限制。因此，除非上下文另有明确规定，否则对范围的描述应被视为已经具体地公开了所有可能的子范围以及所述范围内到下限单位的十分之一内的单独数值。例如，对范围如1到6的描述应被视为已经具体地公开了如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等子范围，以及所述范围内的单独值，例如1.1、2、2.3、5和5.9。无论范围的广度如何，这都适用。这些中间范围的上限和下限可以独立地包含在较小的范围中，并且也涵盖在本公开内，这受制于所陈述的范围中的任何明确排除的限值。在所陈述的范围包括一个或两个限值的情况下，排除了那些被包含的限值的任一个或两者的范围也被包含在本公开中，除非上下文另有明确规定
24.本文所使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，并且不旨在限制任何实施例。如本文所使用的，除非上下文另外清楚地指明，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”旨在也包含复数形式。将进一步理解，当在本说明书中使用时，术语“包括(comprises和/或comprising)”指定所陈述的特征、整数、步骤、操作、要素和/或组件的存在，但不排除存在或添加一个或多个其它特征、整数、步骤、操作、要素、组件和/或其组。如本文所使用的，术语“和/或”包含相关联的所列项中的一个或多个的任何和所有组合。
25.除非具体说明或从上下文中明显可见，如本文所使用的，提及数字或数字范围的术语“约”被理解为意指所陈述数字及其 /-10％的数字，或针对某个范围所列的值低于所列下限的10％和高于所列上限的10％。
26.组合物
27.肽
28.如本文所描述的组合物包括一种或多种肽。在一些实施例中，如本文所描述的一种或多种肽改善包含色素沉着过度的色素沉着。在一些实施例中，一种或多种肽调节炎症后色素沉着过度、黄褐斑或衰老。在一些实施例中，由于衰老引起的色素沉着过度是由uv暴露或炎症引起的。
29.在一些实施例中，一种或多种肽包括六肽-11。在一些实施例中，六肽-11促进蛋白酶体、自噬、分子伴侣和抗氧化应答相关基因的激活。在一些实施例中，一种或多种肽包括六肽-11、三肽-1和六肽-12。
30.在一些实施例中，六肽-11、三肽-1和六肽-12导致基因表达的协同作用。在一些情
况下，六肽-11、三肽-1和六肽-12调节mitf基因表达。在一些情况下，与六肽-11、三肽-1和六肽-12单独相比，六肽-11、三肽-1和六肽-12使mitf下调增加至少或约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍或5倍以上。
31.如本文所描述的肽，在一些实施例中，组合改善色素沉着、黑素体的自噬、mitf的减少或其组合。例如，三肽-1和六肽-12改善巨噬细胞功能。在一些实施例中，三肽-1和六肽-11改善巨噬细胞功能。在一些实施例中，三肽-1、六肽-11和六肽-12改善巨噬细胞功能。例如，六肽-11与一种或多种不同的肽，如三肽-1、六肽-12或其组合组合，可刺激自噬和巨噬细胞聚集，并且可以改善黑素体的去除。
32.如本文所描述的组合物包括不同浓度的肽。在一些情况下，肽以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的肽存在。在一些情况下，肽以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，肽以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，肽以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，肽以每毫升约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50微克的范围存在。在一些情况下，肽的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。
33.如本文所描述的组合物在一些实施例中包括一种或多种肽。在一些情况下，所述一种或多种肽的肽以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的肽或任何其它合适的量存在。在一些情况下，所述一种或多种肽的肽以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，所述一种或多种肽的肽以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，所述一种或多种肽的肽以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，所述一种或多种肽的肽以每毫升约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50微克的范围存在。在一些情况下，所述一种或多种肽的肽的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。在一些实施例中，提供了至少或约0.00001重量％、0.0003重量％、0.0005重量％、0.001重量％、0.001重量％、0.005重量％、0.0055重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)的所述一种或多种肽的肽。在一些实施例中，所述一种或
多种肽的肽以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，所述一种或多种肽的每种肽以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约2重量％的范围提供。在一些实施例中，肽是三肽-1、六肽-12、六肽-11、八肽或其组合。
34.在组合物中，三肽通常以约50ppm或更少至约100、200、300、400或500ppm或更多，例如，50ppm至150ppm的量存在。在组合物中，六肽通常以约50ppm或更少至约100、200、300、400或500ppm或更多，例如，50ppm至150ppm的量存在。
35.在一些实施例中，提供了至少或约0.00001重量％、0.0003重量％、0.0005重量％、0.001重量％、0.001重量％、0.005重量％、0.0055重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)的三肽-1。在一些实施例中，三肽-1以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或大于25ppm的三肽-1。在一些实施例中，三肽-1以约0.25至约10、约0.5至约8、约1至约6或约2至约4ppm的范围提供。在一些实施例中，三肽-1以约1至约10ppm的范围提供。在一些实施例中，提供了每毫升至少或约0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或大于25微克(ug/ml)的三肽-1。在一些实施例中，三肽-1以每毫升约0.25至约10、约0.5至约8、约1至约6或约2至约4微克的范围提供。
36.在一些实施例中，提供了至少或约0.00001重量％、0.0003重量％、0.0005重量％、0.001重量％、0.005重量％、0.0055重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)的六肽-12。在一些实施例中，六肽-12以约0.00001重量％至约10重量％、约0.0003重量％至约9重量％、约0.0005重量％至约8重量％或约0.001重量％至约4重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或大于25ppm的六肽-12。在一些实施例中，六肽-12以约1至约10ppm的范围提供。在一些实施例中，六肽-12以约0.25至约10、约0.5至约8、约1至约6或约2至约4ppm的范围提供。在一些实施例中，提供了每毫升至少或约0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或大于25微克(ug/ml)的六肽-12。在一些实施例中，六肽-12以每毫升约0.25至约10、约0.5至约8、约1至约6或约2至约4微克的范围提供。
37.在一些实施例中，提供了至少或约30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000或大于2000微克(ug)的六肽-12。在一些实施例中，六肽-12以约30至约2000ug的范围提供。在一些实施例中，六肽-12以约40至约1000、约50至约900、约60至约800、约70至约700、约80至约600或约90至约500ug的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0150ug的六肽-12。在一些实施例中，提供了至少或约450ug的六肽-12。
38.在一些实施例中，提供了至少或约0.00001重量％、0.0003重量％、0.0005重量％、0.001重量％、0.005重量％、0.0055重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)的六肽-11。在一些实施例中，六肽-11以约0.00001重量％至约10重量％、约0.0003重量％至约8重量％、约0.0005重量％至约6重量％或约0.001重量％至约4重量％、约0.005重量％至约2重量％或约0.01重量％至约1重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，六肽-11以约0.001％至约6％、约0.002％至约4％、约0.01％至约3％或约0.02％至约2％的范围提供。在一些实施例中，六肽-11以约0.005重量％至约0.02重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.1ppm、3ppm、5ppm、10ppm、50ppm、55ppm、500ppm、1,000ppm、2,500ppm、5,000ppm或大于5,000ppm的六肽-11。在一些实施例中，六肽-11以约5ppm至约100ppm、约10ppm至约1000ppm、约50ppm至约1500ppm或约500ppm至约5,000ppm的范围提供。在一些实施例中，六肽-11为约1000ppm。在一些实施例中，提供了每毫升至少或约5、10、20、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500或大于500微克(ug/ml)的六肽-11。在一些实施例中，六肽-11以每毫升约25至约250、约50至约200、约75至约150、约200至约300或约200至约400微克的范围提供。
39.在一些实施例中，提供了至少或约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或约100毫克(mg)的六肽-11。在一些实施例中，六肽-11以约1至约100mg的范围提供。在一些实施例中，六肽-11以约2至约90、约3至约80、约4至约70或约5至约60mg的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约6mg的六肽-11。在一些实施例中，提供了至少或约18mg的六肽-11。
40.在一些实施例中，提供了至少或约0.00001重量％、0.0003重量％、0.0005重量％、0.001重量％、0.001重量％、0.005重量％、0.0055重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)的八肽。在一些实施例中，八肽以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，八肽以至少约百万分之10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200或大于200(ppm)的浓度提供。在一些实施例中，以约10至约190ppm、约20至约180ppm、约30至约170ppm、约40至约160ppm、约50至约150ppm、约60至约140ppm、约70至约130ppm、约80至约120ppm或约90至约110ppm的浓度提供八肽。在一些实施例中，八肽以约100ppm的浓度提供。在一些实施例中，以至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200或大于200ug/ml的浓度提供八肽。在一些实施例中，以约10至约190ug/ml、约20至约180ug/ml、约30至约170ug/ml、约40至约160ug/ml、约50至约150ug/ml、约60至约140ug/ml、约70至约130ug/ml、约80至约120ug/ml或约90至约110ug/ml的浓度提供八肽。在一些实施例中，八肽以约100ug/ml的浓度提供。
41.肽可以被官能化。例如，肽可以用脂肪酸，例如肉豆蔻油酸、棕榈油酸、皂甙酸
(sapienic acid)、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、亚麻酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳六烯酸、辛酸、癸酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、木蜡酸、蜡酸等官能化。实例包含棕榈酰六肽-12(pal-vgvapg)、棕榈酰三肽-1(pal-ghk)、肉豆蔻酰六肽12(myr-vgvapg)和肉豆蔻酰三肽-1(myr-ghk)。在某些实施例中可能期望棕榈酰官能化或肉豆蔻酰官能化，因为与其它脂肪酸相比，其表现出增强的渗透性。在一些实施例中，肽用化学基团官能化。例如，肽用乙酰基官能化。在一些情况下，肽用包括不超过14个碳的官能团官能化。在一些情况下，肽用包括不超过3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或超过20个碳的官能团官能化。在一些情况下，肽是非棕榈酰化的。在不希望受特定理论限制的情况下，在一些实施例中，将肽掺入脂质体中增加了被官能化或未被官能化的肽的亲脂性。
42.本文所提供的方法和组合物的一些实施例包含作为第一肽的甘氨酸-组氨酸-赖氨酸(ghk)。ghk是通常在蛋白质类中很少发现但在细胞外基质蛋白中经常发现的肽序列。ghk的小尺寸使其比较大的肽更容易接近膜受体。进一步地，其独特的铜结合结构增强了铜在细胞内和细胞外的转运，并且通过若干种不同但相关的通路促进伤口愈合。由于其强铜结合结构，ghk可以以ghk-cu(铜结合ghk形式)的形式提供。
43.水飞蓟素
44.水飞蓟素源自奶蓟草植物水飞蓟。水飞蓟宾，即水飞蓟素的主要组分，可以通过最小化uv辐射效应，如氧化应激、炎症、水肿、红斑和dna损伤而具有抗氧化作用和光保护作用。在一些情况下，水飞蓟宾在不影响细胞活力的情况下阻止黑色素的产生并降低酪氨酸酶蛋白的表达。一项针对患有黄褐斑的患者的研究发现，水飞蓟素乳膏比皮内氨甲环酸更有效。在一些情况下，水飞蓟素抑制角质细胞和巨噬细胞中由环氧酶-2(cox-2)所产生的白介素-1β(il-1β)和pge-2的产生。在一些情况下，水飞蓟宾降低诱导型一氧化氮合酶(inos)和cox-2，以及nf-κb。
45.如本文所描述的组合物在一些实施例中包括水飞蓟素。在一些实施例中，水飞蓟素包括水飞蓟宾。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的水飞蓟素。在一些实施例中，水飞蓟素以约0.25重量％至约10重量％、约0.1重量％至约2.5重量％、约0.5重量％至约8重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，水飞蓟素以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％、约0.02重量％至约2重量％或约0.2重量％至约3重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，水飞蓟素包括约或不超过约0.7重量％。在一些实施例中，提供了至少或约10、50、100、200、500、1000、2000、2500、5000、7500、10000、15000、20000、25000、30000、35000、40000或多于40000ppm的水飞蓟素。在一些实施例中，水飞蓟素以约2500ppm至约100000ppm、约1000ppm至约25000ppm、约5000ppm至约80000ppm、约75000ppm至约60000ppm或约1000ppm至约40000ppm的范围提供。在一些实施例中，水飞蓟素以约10ppm至约60000ppm、约20ppm至约40000ppm、约100ppm至约30000ppm或约200ppm至约20000ppm的范围提供。在一些实施例中，提供了每ml至少或约5、10、15、20、25、30、35或40微克(ug/ml)的水飞蓟素。在一些实施例中，水飞蓟素以约1到约50、约5到约45、约10到约40或约15到约
35ug/ml的范围提供。
46.在一些实施例中，提供了至少或约至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或约100毫克(mg)的水飞蓟素。在一些实施例中，水飞蓟素以约1至约100、约2至约90、约3至约80、约4至约70或约5至约60毫克(mg)的范围提供。在一些实施例中，水飞蓟素以约6毫克(mg)提供。在一些实施例中，水飞蓟素以约18毫克(mg)提供。
47.氨甲环酸
48.氨甲环酸(txa)是一种用于预防纤维蛋白溶解以减少失血的纤溶酶抑制剂。其是赖氨酸的合成衍生物，并且通过可逆地阻断纤溶酶原分子上的赖氨酸结合位点发挥作用，从而预防纤溶酶原与基础角质细胞结合，由此抑制纤溶酶原转化为纤溶酶，并且因此减少前列腺素(尤其是pge-2)的产生。在一些情况下，uv光暴露与黄褐斑的发病机制有关。uv照射可以诱导纤溶酶原激活剂合成并增加角质细胞中纤溶酶活性，从而通过磷脂酶刺激花生四烯酸(aa)的释放。游离aa可以通过其代谢物pge-2刺激黑素生成。在一些情况下，内皮细胞中的纤溶酶增加了aa的释放。增加的纤溶酶本身可以提高α-msh，从而激活黑素细胞中的黑色素合成。纤溶酶还可以增加碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)，即一种有效的黑素细胞生长因子的释放。所有这些过程均会导致皮肤中更多黑色素产生。在一些情况下，纤溶酶起着重要的血管生成作用。纤溶酶将细胞外基质结合的vegf转化成可自由扩散的形式。txa，即一种纤溶酶抑制剂，可以抑制血管生成，并且还抑制bfgf诱导的新血管形成。此外，txa在其结构上与酪氨酸相似，这意味着其可以竞争性地抑制酪氨酸酶的酶活性。在一些情况下，txa降低了vegf和et-1的水平，这可能是黄褐斑损伤血管增加的原因。
49.如本文所描述的组合物在一些实施例中包括氨甲环酸(txa)。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、7.5重量％、8.0重量％、8.5重量％、9.0重量％、9.5重量％、10.0重量％或大于10.0重量％(wt％)的txa。在一些实施例中，txa以约0.25重量％至约10重量％、约0.1重量％至约2.5重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％(wt％)的范围提供。在一些实施例中，txa以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％、约0.02重量％至约2重量％或约0.25重量％至约6.25重量％(wt％)的范围提供。在一些实施例中，txa以约或不超过约1.25重量％(wt％)提供。在一些实施例中，提供了至少或约10ppm、50ppm、100ppm、200ppm、500ppm、1000ppm、2000ppm、2500ppm、5000ppm、7500ppm、10000ppm、15000ppm、2000ppm、25000ppm、3000ppm、35000ppm、4000ppm、45000ppm、5000ppm、55000ppm、6000ppm、65000ppm、7000ppm、75000ppm、8000ppm、85000ppm、9000ppm、95000ppm、10000ppm或大于10000ppm的txa。在一些实施例中，txa以约2500ppm至约10000ppm、约1000ppm至约25000ppm、约5000ppm至约8000ppm、约7500ppm至约6000ppm或约10000ppm至约4000ppm的范围提供。在一些实施例中，txa以约10ppm至约6000ppm、约20ppm至约4000ppm、约100ppm至约3000ppm或约200ppm至约2000ppm的范围提供。在一些实施例中，txa为约5000ppm。在一些实施例中，提供了每毫升至少或约10、50、100、200、500、1000、2000、2500或5000微克(ug/ml)的txa。在一些实施例中，txa以约10至约5000ug/ml、约50至约4000ug/ml，约100至约
3000ug/ml、约150至约2000ug/ml或约500至约1500ug/ml的范围提供。
50.在一些实施例中，提供了至少或约至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、300、400、500或大于500毫克(mg)的txa。在一些实施例中，txa以约5至约500、约10至约400、约15至约300、约20至约200或约25至约100毫克(mg)的范围提供。在一些实施例中，以约30毫克(mg)提供txa。在一些实施例中，以约90毫克(mg)提供txa。
51.乳铁蛋白
52.乳铁蛋白(lf)是转铁蛋白家族的80kda铁结合糖蛋白，存在于外分泌液(眼泪、唾液、乳汁、鼻分泌物和支气管分泌物、胃肠液等)中。乳铁蛋白的作用范围从抗菌到抗炎以及具有高铁结合亲和力的免疫调节剂活性。乳铁蛋白可以通过局部皮肤细胞下调tnfα和其它细胞因子(il-1)的产生，并且可能与瘀伤消退和炎症后色素沉着的预防有关。乳铁蛋白还对伤口愈合具有积极作用。乳铁蛋白还是一种纤溶酶抑制剂，并且可能会影响内皮细胞诱导的色素沉着，尤其是黄褐斑。
53.在一些情况下，源自乳铁蛋白的胰蛋白酶化肽片段促进受体介导的mitf降解。在一些情况下，胰蛋白酶化肽片段对色素沉着具有抑制作用。
54.如本文所描述的组合物在一些实施例中包括转铁蛋白。在一些实施例中，转铁蛋白是乳铁蛋白。在一些实施例中，所述组合物包括乳铁蛋白的胰蛋白酶化片段。在一些实施例中，所述组合物包括源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，所述组合物包括乳铁蛋白的变体或片段。在一些情况下，所述源自乳铁蛋白的肽包括seq id no:1的至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、14个、16个、18个、20个、22个、24个、26个、28个、30个或多于30个的氨基酸。源自乳铁蛋白的示例性肽包含但不限于prknvrwct(seq id no:2)、lgflrip(seq id no:3)、gysgafkc(seq id no:4)、tcvrr(seq id no:5)、tcvrraf(seq id no:6)、wnslkdkksch(seq id no:7)、lfndnteclaklg(seq id no:8)、ttlknlr(seq id no:9)、qgldkcvpnske(seq id no:10)、vkkane(seq id no:11)、laklggrp(seq id no:12)、gdvafvk(seq id no:13)、nlnredfrl(seq id no:14)、algflri(seq id no:15)、ttlknlr(seq id no:16)、dalnldg(seq id no:17)、laedv(seq id no:18)、rafalec(seq id no:19)、gavakffs(seq id no:20)、nlreta(seq id no:21)、eeqkkc(seq id no:22)、cvpnskeky(seq id no:23)和qaypnl(seq id no:24)。
55.表1.
[0056][0057]
在一些情况下，乳铁蛋白具有抗菌活性。在一些情况下，乳铁蛋白对细菌、真菌、酵母菌、病毒、寄生虫或其组合具有抗微生物活性。在一些情况下，乳铁蛋白包括抗生物膜活性。在一些情况下，乳铁蛋白与细菌表面相互作用并使微生物膜不稳定。在一些情况下，乳铁蛋白螯合铁以破坏微生物膜。
[0058]
在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的乳铁蛋白。在一些实施例中，乳铁蛋白以约0.005重量％至约0.1重量％、约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约2.5重量％或约0.02重量％至约2重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约或不超过约0.025重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约或不超过约0.05重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约或不超过约0.10重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以每毫升至少或约5、10、20、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000或大于1000微克(ug/ml)提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以每毫升约5至约1000、约10至约900、约30至约800、约50至约700、约60至约600或约100至约500微克(ug/ml)的范围提供。在一些实施例中，提供了至少约百万分之1(ppm)、2ppm、3ppm、4ppm、5ppm、6ppm、7ppm、8ppm、9ppm、10ppm或大于10ppm的乳铁蛋白。在一些实施例中，乳铁蛋白以约5ppm提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约1至约10、约2至约9、约3至约8或约4至约6ppm的范围提供。
[0059]
在一些实施例中，提供了至少或约至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、300、400、500或大于500毫克(mg)的乳铁蛋白。在一些实施例中，乳铁蛋白以约5至约500、约10至约400、约15至约300、约20至约200或约25至约100毫克(mg)的范围提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约30毫克(mg)提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约90毫克(mg)提供。
[0060]
在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02
重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约0.005重量％至约0.1重量％、约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约2.5重量％或约0.02重量％至约2重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约或不超过约0.025重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约或不超过约0.05重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约或不超过约0.10重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以每毫升至少或约5、10、20、25、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、2000、3000、4000、5000或大于5000微克(ug/ml)提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约5至约5000、约10至约4000、约20至约3000、约25至约2000、约50至约1000或约75至约950ug/ml的范围提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约100ug/ml提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约1000ug/ml提供。在一些实施例中，提供了至少约百万分之100(ppm)、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm、900ppm、1000ppm、1100ppm、1200pm、1300ppm、1400ppm、1500ppm、1600ppm、1700ppm、1800ppm、1900ppm、2000ppm或大于2000ppm的源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以100ppm至约1900ppm、约200ppm至约1800ppm、约200ppm至约1700ppm、约400ppm至约1600ppm、约500ppm至约1500ppm、约600ppm至约1400ppm、约700ppm至约1300ppm、约800ppm至约1200ppm或约900ppm至约1100ppm的范围提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约10ppm至1000ppm的范围、约50ppm至约1000ppm、约100ppm至约1000ppm或约500ppm至约1000ppm的范围提供。
[0061]
在一些实施例中，提供了至少或约至少5、10、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、60、75、80、85、90、100、200、300、400、500或大于500毫克(mg)的源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约5至约500、约10至约400、约15至约300、约20至约200或约25至约100毫克(mg)的范围提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约30毫克(mg)提供。在一些实施例中，源自乳铁蛋白的肽以约90毫克(mg)提供。
[0062]
大麻二醇
[0063]
大麻二醇(cbd)可以降低nf-κb通路的活性，所述nf-b通路是调节促炎基因表达的主要通路。此外，cbd上调stat3转录因子的激活，所述stat3转录因子是诱导抗炎事件的体内平衡机制的一个要素。nf-κb可以调节il-1β和il-6细胞因子。cbd可以减少正在进行的促炎症过程，并增强对抗炎症的事件。在卡拉胶诱导的大鼠炎症模型中，cbd降低了pge2、一氧化氮(no)和丙二醛产生以及cox活性。
[0064]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括大麻二醇(cbd)。在一些实施例中，提供了至少或约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200或大于200ug/ml的cbd。在一些实施例中，cbd以约10至约190ug/ml、约20至约180ug/ml，约30至约170ug/ml、约40至约160ug/ml、约50至约150ug/ml、约60至约140ug/ml、约70至约130ug/ml、约80至约120ug/ml或约90至约110ug/ml的范围提供。在一些实施例中，
cbd以约100ug/ml提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的cbd。在一些实施例中，cbd以约0.25重量％至约10重量％、约0.1重量％至约2.5重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，cbd以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约2重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约10、50、100、200、500、1000、2000、2500、5000、7500、10000、15000、20000、25000、30000、35000、40000或多于40000ppm的cbd。在一些实施例中，cbd以约2500ppm至约100000ppm、约1000ppm至约25000ppm、约5000ppm至约80000ppm、约75000ppm至约60000ppm或约1000ppm至约40000ppm的范围提供。在一些实施例中，cbd以约10ppm至约60000ppm、约20ppm至约40000ppm、约100ppm至约30000ppm或约200ppm至约20000ppm的范围提供。
[0065]
南非醉茄提取物
[0066]
虽然其它脱色剂通常会抑制酪氨酸酶，但南非醉茄提取物(10ug/ml)通过中断主要由pkc和mapk通路组成的et-1触发的细胞内信号级联放大，进而导致下调黑素细胞主转录因子mitf。mitf功能的降低可以抑制其下游靶标的表达和功能，从而导致黑色素的合成减弱。南非醉茄提取物可以作为et-1相关色素沉着过度病症，如uvb-黑变病和老年性雀斑样痣的治疗工具。
[0067]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括南非醉茄提取物。在一些实施例中，南非醉茄提取物以每毫升至少约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、或大于40微克(ug/ml)提供。在一些实施例中，南非醉茄提取物以约0.5至约20、约1至约19、约2至约18、约3至约17、约4至约16、约5至约15、约6至约14、约7至约13、约8至约12或约9至约11ug/ml的范围提供。在一些实施例中，南非醉茄提取物以至少约10ug/ml提供。在一些实施例中，南非醉茄提取物以至少约20ug/ml提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的南非醉茄提取物。在一些实施例中，南非醉茄提取物以约0.005重量％至约0.1重量％、约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，南非醉茄提取物以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约2.5重量％、约0.02重量％至约2重量％、约0.02重量％至约0.5重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，南非醉茄提取物以约或不超过约0.025wt.％提供。在一些实施例中，南非醉茄提取物以约或不超过约0.05wt.％提供。在一些实施例中，南非醉茄提取物以约或不超过约0.10wt.％提供。
[0068]
在一些实施例中，提供了至少或约至少0.5、0.75、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2、4、6、8或大于10微克(ug)的南非醉茄提取物。在一些实施例中，南非醉茄提取物以约0.5至约2、约0.75至约5或约1.0至约4微克(ug)的范围提供。
[0069]
没食子酸
[0070]
没食子酸(ga)是一种存在于植物和水果中的膳食酚类物质，可以通过其抗氧化特性提供对抗色素沉着过度的有益作用。没食子酸是一种可以抑制黑色素瘤细胞中黑素生成的酚类化合物。没食子酸可以在转录和翻译水平下下调包含tyr、trp-1和dct表达的黑素生成调节基因。在一些情况下，ga通过下调camp介导的pka/creb信号级联放大来有效抑制mitf表达。通过局部施用ga持续4周，小鼠皮肤中uv-b诱导的色素沉着过度显著减少。
[0071]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括没食子酸。在一些情况下，ga以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的ga存在。在一些情况下，ga以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，ga以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，ga以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，ga以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些情况下，ga的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。在一些情况下，ga以约或不超过约2.0wt.％存在。
[0072]
芝麻酚
[0073]
芝麻酚是从芝麻中分离出来的一种活性木质素。在melan-a细胞中，芝麻酚可以通过减少环磷酸腺苷(camp)累积来抑制黑色素生物合成和细胞内酪氨酸酶的活性。芝麻酚可以降低黑素生成相关基因，如tyr、trp-1、trp-2、mitf和mc1r的表达。芝麻酚可以抑制黑色素生物合成。
[0074]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括芝麻酚。在一些实施例中，芝麻酚以至少约为5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100或大于100μm的浓度提供。在一些实施例中，芝麻酚以约5至约100μm、约10至约90μm，约20至约80μm、约30至约70μm、约40至约60μm的浓度范围提供。在一些实施例中，芝麻酚以约50μm的浓度提供。在一些情况下，芝麻酚以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的芝麻酚存在。在一些情况下，芝麻酚以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，芝麻酚以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，芝麻酚以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，芝麻酚以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些实施例中，芝麻酚以约100ug/ml提供。在一些情况下，芝麻酚以至少或约至少0.001重量％、0.002重量％、0.003重量％、0.004重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.05重量％、0.1重量％、0.2重量％、0.3重量％、0.4重量％、0.5重量％或大于0.5重量％(wt.％)存在。在一些情况下，芝麻酚以约0.002重量％至约0.05重量％、约0.001重量％至约0.5重量％、
约0.002重量％至约0.4重量％、约0.003重量％至约0.3重量％、约0.004重量％至约0.2重量％或约0.005重量％至约0.05重量％(wt.％)存在。在一些情况下，芝麻酚以至少或约0.01wt.％存在。
[0075]
在一些实施例中，提供了至少或约至少0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50或大于50毫克(mg)的芝麻酚。在一些实施例中，芝麻酚以约5至约50、约10至约40或约20至约30毫克(mg)的范围提供。在一些实施例中，芝麻酚以约3毫克(mg)提供。在一些实施例中，芝麻酚以约9毫克(mg)提供。
[0076]
麦角甾苷
[0077]
麦角甾苷是一种从地黄叶中提取的苯丙素苷。麦角甾苷可以抑制无细胞测定系统和培养的b16f10黑素瘤细胞两者中的酪氨酸酶活性和黑色素合成。麦角甾苷可以降低tyr、trp-1和mitf蛋白水平，并增加erk磷酸化。在一些情况下，麦角甾苷抑制由α-msh诱导的黑素生成并示出uv吸收作用。
[0078]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括麦角甾苷。在一些实施例中，麦角甾苷以至少约为50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000μm的浓度提供。在一些实施例中，麦角甾苷以约50至约1000μm、约100至约900μm，约200至约800μm、约300至约700μm、约400至约600μm的浓度范围提供。在一些实施例中，麦角甾苷以约500μm的浓度提供。在一些情况下，麦角甾苷以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的麦角甾苷存在。在一些情况下，麦角甾苷以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，麦角甾苷以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，麦角甾苷以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，麦角甾苷以每毫升约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50微克的范围存在。在一些情况下，麦角甾苷的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。
[0079]
橄榄苦苷
[0080]
橄榄苦苷是一种源自橄榄树的有效抗炎、抗氧化剂，示出了90％的酪氨酸酶抑制活性，并且抑制类型为非竞争性竞争。
[0081]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括橄榄苦苷。在一些情况下，橄榄苦苷以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的橄榄苦苷存在。在一些情况下，橄榄苦苷以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，橄榄苦苷以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，橄榄苦苷以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1200、1400、1600、1800、2000或大于2000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，橄榄苦苷以约10
至约1000、约10至约500、约10至约400、约10至约300、约10到约200、约100至约1000、约200至约800、约300至约600或约200至1200ug/ml的范围存在。在一些情况下，橄榄苦苷的存在量为约0.01wt.％至约10wt.％、约0.01wt.％至约0.02wt.％、约0.01wt.％至约0.03wt.％、约0.01wt.％至约0.04wt.％、约0.01wt.％至约0.05wt.％、约0.01wt.％至约0.1wt.％、约0.03wt.％至约0.750wt.％、约0.1wt.％至约5wt.％或约0.1wt.％至约10wt.％。在一些情况下，橄榄苦苷以约或不超过约0.15wt.％存在。
[0082]
在一些实施例中，提供了至少或约至少5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、300、400、500或大于500毫克(mg)的橄榄苦苷。在一些实施例中，橄榄苦苷以约5至约500、约10至约400、约15至约300、约20至约200或约25至约100毫克(mg)的范围提供。在一些实施例中，橄榄苦苷以约30毫克(mg)提供。在一些实施例中，橄榄苦苷以约90毫克(mg)提供。
[0083]
橙皮苷
[0084]
橙皮苷是对各种氧化应激介导的疾病具有活性的柑橘类黄酮之一。橙皮苷可以抑制黑素细胞中黑素体转运，并在色素重建表皮模型中示出了亮肤作用。rab27a、黑素亲和素和肌球蛋白va形成复合物以将黑素体与磷脂酰丝氨酸连接起来，从而将黑素体与质膜对接。在共培养和在体内中，与浅色素黑素细胞相比，具有显著更高rab27a表达的深色黑素细胞可以将更多的黑素体转移到角质细胞。橙皮苷可以通过阻断rab27a-黑素亲和素相互作用而具有脱色作用。
[0085]
如本文所提供的组合物在一些实施例中包括橙皮苷。在一些情况下，橙皮苷以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的橙皮苷存在。在一些情况下，橙皮苷以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，橙皮苷以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，橙皮苷以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，橙皮苷以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些情况下，橙皮苷的存在量为约0.01wt.％至约10wt.％、约0.01wt.％至约0.02wt.％、约0.01wt.％至约0.03wt.％、约0.01wt.％至约0.04wt.％、约0.01wt.％至约0.05wt.％、约0.01wt.％至约0.1wt.％、约0.020至约0.50wt.％、约1wt.％至约5wt.％或约1wt.％至约10wt.％。在一些情况下，橙皮苷以约或不超过约0.10wt.％存在。
[0086]
白乳木茎皮(sideroxylon inerme l.stem bark)
[0087]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括白乳木提取物。在一些情况下，白乳木提取物以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的白乳木提取物存在。在一些情况下，白乳木提取物以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，白乳木提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，白乳木提取物以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、
500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，白乳木提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些情况下，白乳木提取物的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。
[0088]
小白菊内酯
[0089]
小白菊内酯是一种倍半萜内酯化合物，并且是可用于炎症的草药小白菊(野甘菊)中的一种活性物质。小白菊内酯是nf-κb抑制剂，其可以通过抑制nf-kb介导的基因表达来阻断uvb介导的皮肤变化，从而减少来自细胞的bfgf和mmp-1的产生。在一些情况下，bfgf产生是由uv诱导的，并且促进皮肤角质细胞和黑素细胞的增殖。
[0090]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括小白菊内酯。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的小白菊内酯。在一些实施例中，小白菊内酯以约0.25重量％至约10重量％、约0.1重量％至约2.5重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，小白菊内酯以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约2重量％(wt.％)的范围提供。在一些实施例中，小白菊内酯以至少或约10、50、100、200、500、1000、2000、2500、5000或大于5000ppm提供。在一些实施例中，小白菊内酯以约25ppm至约100ppm、约100ppm至约250ppm、约50ppm至约800ppm、约75ppm至约600ppm或约10ppm至约400ppm的范围提供。在一些实施例中，小白菊内酯以约10ppm至约60ppm、约20ppm至约40ppm、约100ppm至约300ppm或约200ppm至约2000ppm的范围提供。
[0091]
海百合
[0092]
在一些情况下，黑素细胞向角质细胞释放的黑色素受到存在于包含物质p的表皮中的神经纤维释放的神经肽的刺激。海百合提取物(pme；海百合提取物)可以至少部分地通过其对黑素细胞树突上存在的物质p受体的作用抑制黑色素转移，从而为治疗色素斑提供了有效且原始的解决方案。
[0093]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括海百合提取物。在一些情况下，海百合提取物以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的海百合提取物存在。在一些情况下，海百合提取物以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，海百合提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，海百合提取物以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，海百合提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些情况下，海百合提取物的存在量
为约0.01wt.％至约10wt.％、约0.01wt.％至约0.02wt.％、约0.01wt.％至约0.03wt.％、约0.01wt.％至约0.04wt.％、约0.01wt.％至约0.05wt.％、约0.01wt.％至约0.1wt.％、约0.5wt.％至约5wt.％、约1wt.％至约5wt.％或约1wt.％至约10wt.％。在一些情况下，海百合提取物以至少或约至少1.5wt.％存在。
[0094]
自噬剂
[0095]
在一些情况下，本文所描述的组合物包括用于降解黑素体的自噬剂。在一些情况下，自噬剂以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的自噬剂存在。在一些情况下，自噬剂以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，自噬剂以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，自噬剂以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，自噬剂以每毫升约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50微克的范围存在。在一些情况下，自噬剂的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。在一些情况下，自噬剂是melatrepein
tm
。
[0096]
烟酰胺
[0097]
一旦合成，黑色素就会被包装在黑素体中，并通过黑素细胞树突从黑素细胞转移到其邻近的基础角质细胞。为了抑制这种转移，烟酰胺可以减少树突的形成。
[0098]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括烟酰胺。在一些实施例中，烟酰胺以至少约0.25重量％、0.5重量％、1重量％、1.5重量％、2重量％、2.5重量％、3重量％、3.5重量％、4重量％、4.5重量％、5重量％、5.5重量％、6重量％、6.5重量％、7重量％、7.5重量％、8重量％、8.5重量％、9重量％、9.5重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，烟酰胺以约0.25wt.％至约10wt.％、约0.5wt.％至约9.5wt.％、约1wt.％至约9wt.％、约1.5wt.％至约8.5wt.％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约至少2.0wt.％的烟酰胺。
[0099]
银耳
[0100]
银耳可以抑制黑色素产生。如本文所描述的组合物在一些实施例中包括银耳提取物。在一些实施例中，银耳提取物源自食用菌。在一些实施例中，银耳提取物提供水分和抗氧化特性。
[0101]
在一些实施例中，银耳提取物以至少或约0.001重量％(wt.％)、0.005wt.％、0.01wt.％、0.02wt.％、0.05wt.％、0.10wt.％、0.20wt.％、0.25wt.％、0.50wt.％、0.75wt.％、1.0wt.％、1.5wt.％、2.0wt.％、2.5wt.％、3.0wt.％、3.5wt.％、4.0wt.％或大于4wt.％提供。在一些实施例中，银耳提取物以约0.25wt.％至约10wt.％、约0.1wt.％至约2.5wt.％、约0.5wt.％至约8wt.％、约0.75wt.％至约6wt.％或约1wt.％至约4wt.％的范围提供。在一些实施例中，银耳提取物以约0.001wt.％至约6wt.％、约0.002wt.％至约4wt.％、约0.01wt.％至约3wt.％、约0.02wt.％至约2wt.％或约0.20wt.％至约5.0wt.％.
的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约至少1.0wt％的银耳提取物。
[0102]
嗜热栖热菌提取物
[0103]
嗜热栖热菌酵素可以充当抗氧化剂，特别是针对pge2。如本文所描述的组合物在一些实施例中包括嗜热栖热菌酵素。在一些情况下，嗜热栖热菌提取物以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的嗜热栖热菌提取物存在。在一些情况下，嗜热栖热菌提取物以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，嗜热栖热菌提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，嗜热栖热菌提取物以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，嗜热栖热菌提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些情况下，嗜热栖热菌提取物的存在量为约0.01重量％(wt.％)至约10wt.％、约0.01wt.％至约0.02wt.％、约0.01wt.％至约0.03wt.％、约0.01wt.％至约0.04wt.％、约0.01wt.％至约0.05wt.％、约0.01wt.％至约0.1wt.％、约0.3wt.％至约7.5wt.％、约1wt.％至约5wt.％或约1wt.％至约10wt.％。在一些情况下，嗜热栖热菌提取物以至少或至少约1.5wt.％存在。
[0104]
八氢番茄红素和六氢番茄红素
[0105]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合。八氢番茄红素和六氢番茄红素是源自调节前列腺素e-2(pge-2)的盐水微藻的无色类胡萝卜素。
[0106]
在一些实施例中，八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合以至少或约0.5重量％、1.0重量％、2.0重量％、3.0重量％、4.0重量％、5.0重量％、6.0重量％、7.0重量％、8.0重量％、9.0重量％、10重量％、11重量％、12重量％、13重量％、14重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％、20重量％或大于20重量％(wt.％)提供。在一些实施例中，八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合以约0.5重量％至约20重量％、约1.0重量％至约15重量％、约2.0重量％至约12重量％、约3.0重量％至约10重量％或约4.0重量％至约8重量％(wt.％)的范围提供。在一些情况下，八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合以至少或约5.0wt.％提供。在一些情况下，八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。
[0107]
欧夏至草
[0108]
欧夏至草(苦薄荷)可以降低et-1的水平。如本文所描述的组合物在一些实施例中包括欧夏至草提取物。在一些情况下，欧夏至草提取物以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的欧夏至草提取物存在。在一些情况下，欧夏至草提取物以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，欧夏至草提取物以约1至约
100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，欧夏至草提取物以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，欧夏至草提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些情况下，欧夏至草提取物的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。
[0109]
白绒水龙骨(polypodium leucotomos)
[0110]
白绒水龙骨或粗脉蕨(phlebodium aureum)包括可以对抗炎症和预防皮肤损伤的化合物。如本文所描述的组合物在一些实施例中包括白绒水龙骨提取物。在一些情况下，白绒水龙骨提取物以约50ppm或更少至1000、5000、10000、50000、100000、500000ppm或更多，例如100ppm的白绒水龙骨提取物存在。在一些情况下，白绒水龙骨提取物以约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000ppm存在。在一些情况下，白绒水龙骨提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ppm的范围存在。在一些情况下，白绒水龙骨提取物以每毫升约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、75、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000或大于1000微克(ug/ml)存在。在一些情况下，白绒水龙骨提取物以约1至约100、约1至约50、约1到约40、约1至约30、约1至约20、约1至约10、约5至约90、约10至约80、约20至约60或约30至约50ug/ml的范围存在。在一些情况下，白绒水龙骨提取物的存在量为约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约0.02重量％、约0.01重量％至约0.03重量％、约0.01重量％至约0.04重量％、约0.01重量％至约0.05重量％、约0.01重量％至约0.1重量％、约1重量％至约5重量％或约1重量％至10重量％(wt.％)。
[0111]
磷脂酰丝氨酸
[0112]
如本文所描述的组合物在一些实施例中包括磷脂酰丝氨酸。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以至少约或不超过约0.01重量％、0.02重量％、0.03重量％、0.04重量％、0.05重量％、0.06重量％、0.07重量％、0.08重量％、0.09重量％、0.10重量％、0.11重量％、0.12重量％、0.13重量％、0.14重量％、0.15重量％、0.16重量％、0.17重量％、0.18重量％、0.19重量％、0.20重量％或大于0.20％(wt.％)的浓度提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约0.01重量％至约0.2重量％、约0.02重量％至约0.15重量％、约0.03重量％至约0.1重量％、约0.04重量％至约0.1重量％(wt.％)的浓度提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约或不超过约0.075重量％(wt.％)存在。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约或不超过约0.05重量％(wt.％)的浓度提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以至少约百万分之100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000或大于2000(ppm)的浓度提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约100至约1900ppm、约200至约1800ppm、约300至约1700ppm、约400至约1600ppm、约500至约1500ppm、约600至约1400ppm、约700至约1300ppm、约800至约1200ppm或约900至约1100ppm的浓度提
供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约1000ppm的浓度提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以每毫升至少约100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000或大于2000微克(ug/ml)的浓度提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约100至约1900ug/ml、约200至约1800ug/ml，约300至约1700ug/ml、约400至约1600ug/ml、约500至约1500ug/ml、约600至约1400ug/ml、约700至约1300ug/ml、约800至约1200ug/ml或约900至约1100ug/ml的浓度提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约500至约1000ug/ml的浓度提供。
[0113]
在一些实施例中，提供了至少或约至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、200、300、400、500或大于500毫克(mg)的磷脂酰丝氨酸。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约20至约500、约30至约400、约40至约300、约50至约200、约60至约100、约70至约95或约80至约90毫克(mg)的范围提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约15毫克(mg)提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸以约20毫克(mg)提供。在一些实施例中，乳铁蛋白以约45毫克(mg)提供。
[0114]
七钠六羧甲基二肽-12(hhd12)
[0115]
hhd12可以刺激角质细胞的自噬。黑素体通常转移到邻近的角质细胞，并且然后通过自噬自然降解。然而，当皮肤不断暴露于阳光、病原体和激素变化下时，自噬过程会受到干扰并且黑素体无法降解。角质细胞中未降解的黑素体的累积导致皮肤色素沉着。hhd12激活自噬以分解角质细胞中的黑素体，并且同时抑制黑素体摄取到角质细胞中。
[0116]
在一些实施例中，hhd12以约或至少约0.01重量％(wt.％)、0.05wt.％、0.1wt.％、0.5wt.％、1wt.％、2wt.％、3wt.％、4wt.％、5wt.％、6wt.％、7wt.％、8wt.％、9wt.％或10wt.％存在。在一些实施例中，hhd12以约0.01wt.％至约10wt.％、约0.05wt.％至约9wt.％、约0.1wt.％至约8wt.％、约0.5wt.％至约7wt.％或约1wt.％至约6wt.％的范围存在。在一些实施例中，hhd12以约0.2wt.％至约5wt％的范围存在。在一些实施例中，hhd12以约或不超过约1.0wt.％存在。
[0117]
脂质体
[0118]
本文描述了用于改善分布、功效、生物利用度和/或活性的脂质体组合物。脂质体组合物可以通过改善递送和组织(例如皮肤)渗透来改善活性成分的分布、功效、生物利用度和/或活性。在一些情况下，经改善的递送和皮肤渗透是由于活性成分被掺入(例如包封)在脂质体中。在一些情况下，活性成分是包封在脂质体中的肽。在一些情况下，包封在脂质体中的肽允许有效的滤泡间经皮递送。
[0119]
如本文所描述的脂质体组合物可以包括包封在脂质体中的肽。在一些实施例中，肽是六肽-12。在一些实施例中，肽是六肽-11。在一些实施例中，肽用棕榈酰基官能化。在一些实施例中，肽用乙酰基官能化。在一些实施例中，包封在脂质体中的肽是乳铁蛋白。
[0120]
在一些实施例中，包封在脂质体中的肽为约或约10、25、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、3000、4000、5000或5000da以上。在一些实施例中，包封在脂质体中的肽以约10至约5000、约25至约4000、约50至约3000、约100至约2000或约200至约1000da的范围存在。在一些实施例中，包封在脂质体中的肽为约500至约800da。
[0121]
在一些实施例中，脂质体的平均粒度为10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400或500纳米(nm)。在一些实施例中，脂质体的平均粒度以约10至约500、约20至约
400、约30至约300或约40至约200nm的范围存在。在一些实施例中，脂质体的平均粒度为约110nm。
[0122]
在一些实施例中，脂质体是光体。光体在一些实施例中包括dna修复技术和/或使用dna修复酶光裂合酶修复破坏的uv诱导的二聚体。在一些情况下，本文所描述的组合物包括一种或多种光体。在一些情况下，光体以至少或约0.01重量％、0.1重量％、0.2重量％、0.3重量％、0.4重量％、0.5重量％、0.6重量％、0.7重量％、0.8重量％、0.9重量％、1重量％、2重量％、3重量％、4重量％或5重量％(wt.％)存在。在一些情况下，光体以约0.01重量％至约5重量％、约0.1重量％至约4重量％、约0.2重量％至约3重量％或约0.3重量％至约2重量％(wt.％)的范围存在。在一些情况下，光体以约0.1wt.％至约2wt.％的范围存在。
[0123]
本文所描述的组合物在一些实施例中包括一种或多种光体和一种或多种脂质体。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体包封至少一种肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体包封不同的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体包封包括六肽-11、六肽-12、乳铁蛋白、源自乳铁蛋白的肽或其组合的不同的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体包封一种或多种肽，其中所述一种或多种肽包括六肽-11、六肽-12、乳铁蛋白、源自乳铁蛋白的肽或其组合。
[0124]
在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封至少一种肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封非棕榈酰化六肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封非棕榈酰化六肽和乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11和六肽-12。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11和乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11和源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12和乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12和源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11、六肽-12和乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11、六肽-12和源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11、乳铁蛋白和源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12、乳铁蛋白和源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11、六肽-12、乳铁蛋白和源自乳铁蛋白的肽。
[0125]
在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11并且一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11并且一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11并且一种或多种脂质体中的第二脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12并且一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12并且一种或多种脂质体中的第二脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封乳铁蛋白并且一种或多种脂
质体中的第二脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。
[0126]
在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12，并且一种或多种脂质体中的第三脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12，并且一种或多种脂质体中的第三脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白，并且一种或多种脂质体中的第三脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12，一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白，并且一种或多种脂质体中的第三脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。
[0127]
在一些实施例中，一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12，一种或多种脂质体中的第三脂质体包封乳铁蛋白，并且一种或多种脂质体中的第四脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。
[0128]
本文所描述的组合物在一些实施例中包括包封一种或多种脂质体的一种或多种光体，所述一种或多种脂质体包封一种或多种肽。在一些实施例中，光体包封有包封一种肽的脂质体。在一些实施例中，光体包封有包封六肽-11的脂质体。在一些实施例中，光体包封有包封六肽-12的脂质体。在一些实施例中，光体包封有包封乳铁蛋白的脂质体。在一些实施例中，光体包封有包封源自乳铁蛋白的肽的脂质体。在一些实施例中，光体包封有包封两种或更多种肽的脂质体。在一些实施例中，光体包封有包封两种或更多种肽的脂质体，其中所述两种或更多种肽包括六肽-11、六肽-12、乳铁蛋白、源自乳铁蛋白的肽或其组合。在一些实施例中，光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的每种脂质体包封不同的肽。在一些实施例中，光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的每种脂质体包封包括六肽-11、六肽-12、乳铁蛋白、源自乳铁蛋白的肽或其组合的不同的肽。
[0129]
本文所描述的组合物在一些实施例中包括包封一种或多种脂质体的一种或多种光体。在一些实施例中，一种或多种光体包封有包封一种或多种肽的一种或多种脂质体。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的每种脂质体包封包括六肽-11、六肽-12、乳铁蛋白、源自乳铁蛋白的肽或其组合的不同的肽。在一些实施例中，一种或多种光体包封有包封一种或多种肽的一种或多种脂质体，其中所述一种或多种肽包括六肽-11、六肽-12、乳铁蛋白、源自乳铁蛋白的肽或其组合。
[0130]
在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。
[0131]
在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，并且所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂
质体中的第一脂质体包封六肽-11，并且所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，并且所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12，并且所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12，并且所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封乳铁蛋白，并且所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。
[0132]
在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12，并且所述一种或多种脂质体中的第三脂质体包封乳铁蛋白。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12，并且所述一种或多种脂质体中的第三脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白，并且所述一种或多种脂质体中的第三脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-12，所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封乳铁蛋白，并且所述一种或多种脂质体中的第三脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。
[0133]
在一些实施例中，一种或多种光体包封一种或多种脂质体，其中所述一种或多种脂质体中的第一脂质体包封六肽-11，所述一种或多种脂质体中的第二脂质体包封六肽-12，所述一种或多种脂质体中的第三脂质体包封乳铁蛋白，并且所述一种或多种脂质体中的第四脂质体包封源自乳铁蛋白的肽。
[0134]
在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体或一种或多种光体中的每种光体的平均粒度为10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400获500纳米(nm)。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体或一种或多种光体中的每种光体的平均粒度在约10至约500、约20至约400、约30至约300或约40至约200nm的范围内。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体或一种或多种光体中的每种光体的平均粒度为约110nm。
[0135]
在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体或一种或多种光体中的每种光体的平均粒度为约或至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000纳米(nm)。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体或一种或多种光体中的每种光体的平均粒度在约10至约1000、约20至约900、约30至约800、约40至约700、约50至约600、约60至约500、约70至约400或约80至约300nm的范围内。在一些实施例中，一种或多种脂质体中的每种脂质体或一种或多种光体中的每种光体的平均粒度为约或至少约220nm。
[0136]
在一些实施例中，本文所描述的包括一种或多种光体和一种或多种脂质体的组合
物在一个或多个步骤中制备。在一些实施例中，在第一步骤中，组合一种或多种肽、乳铁蛋白、源自乳铁蛋白的肽或其组合。在一些实施例中，所述一种或多种肽是六肽-11。在一些实施例中，所述一种或多种肽是六肽-12。在一些实施例中，所述一种或多种肽是六肽-11和六肽-12。在一些实施例中，在第二步骤中，添加第二脂质体。在一些实施例中，所述第二脂质体是光体。
[0137]
卵磷脂和其它磷脂可以用于制备含有如本文所描述的肽组合物的脂质体。在一些实施例中，脂质体用于制备一种或多种肽。在一些实施例中，肽用乙酰基官能化。当将磷脂如卵磷脂置于水中并因此形成一个双层或一系列双层时，就会形成脂囊泡，一旦提供足够的能量，每个双层均会被水分子分离。脂质体可以通过在水中对磷脂进行超声处理来产生。低剪切速率产生多层脂质体。持续的高剪切超声处理趋于形成较小的单层脂质体。疏水性化学物质可以溶解到磷脂双层膜中。脂质体的脂质双层递送如本文所描述的肽组合物。
[0138]
用于制备本文所描述的脂质体组合物的磷脂可以包括约10℃至约25℃的过渡相温度。在一些情况下，磷脂包括约10℃、12℃、14℃、16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃或超过40℃的过渡相温度。在一些情况下，磷脂包括约10℃至约40℃、约12℃到约36℃、约14℃至约32℃、约16℃至约20℃或约21℃至约25℃范围内的过渡相温度。
[0139]
局部组合物可以含有胶束，或分散在水溶液中的表面活性剂分子的聚集体。胶束可以通过将油溶剂分散在包括表面活性剂的水溶液中来制备，其中所述表面活性剂浓度超过临界胶束浓度。所得组合物含有胶束，即球形油滴。
[0140]
脂质体组合物可以含有胶束，或分散在水溶液中的表面活性剂分子的聚集体。胶束可以通过将油溶剂分散在包括表面活性剂的水溶液中来制备，其中所述表面活性剂浓度超过临界胶束浓度。所得调配物含有胶束，即被分散在水溶剂中的极性表面活性剂分子膜包围的球形油滴。
[0141]
在一些实施例中，本文所描述的是用于制备包括包封在脂质体中的肽的组合物的方法，所述方法包括：将肽和溶剂组合以形成混合物；并且使所述混合物与包括脂质体的水溶液接触。在一些情况下，接触发生在介于约10℃与约25℃之间的温度。在一些情况下，接触发生在约10℃、12℃、14℃、16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃或超过40℃的温度下。在一些情况下，接触发生在约10℃至约40℃、约12℃到约36℃、约14℃至约32℃、约16℃至约20℃或约21℃至约25℃范围内的温度下。
[0142]
用于制备包括包封在脂质体中的肽的组合物的方法可以包括使用溶剂。在一些情况下，溶剂是水。在一些情况下，溶剂是有机溶剂。示例性的有机溶剂包含但不限于石油醚、环己烷、甲苯、四氯化碳、二氯甲烷、氯仿、乙醚、二异丙醚、乙酸乙酯、丁醇、正丙醇、乙醇、甲醇、聚乙二醇、丙二醇和吡啶。在一些情况下，溶剂是乙二醇。在一些情况下，溶剂是丁二醇。在一些情况下，溶剂是辛甘醇。在一些情况下，溶剂是丙二醇(丙二醇)。
[0143]
溶剂可以以各种百分比使用。在一些情况下，提供了至少或约0.001％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.10％、0.20％、0.25％、0.50％、0.75％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、8％、9％、10％或大于10％的溶剂。溶剂可以是丙二醇、丁二醇或辛甘醇。
[0144]
在一些实施例中，如本文所描述的方法包括将肽和溶剂组合以形成混合物；并且
使所述混合物与包括脂质体的水溶液接触，其中所述水溶液包括一定百分比的水和一定百分比的脂质体。在一些情况下，水溶液包括至少或约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或超过90％的水。在一些情况下，水溶液包括约10％至约95％、约20％至约90％、约30％至约85％、约40％至约80％或约50％至约60％范围内的水。在一些情况下，水溶液包括至少或约20％、30％、40％、50％、60％或超过60％的脂质体。在一些情况下，水溶液包括约10％至约80％、约20％至约70％或约30％至约60％范围内的脂质体。脂质体与水的比率可以在约1:9至约3:7的范围内。在一些情况下，脂质体与水的比率可以为至少或约为1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3或1:2。
[0145]
如本文所描述的用于产生脂质体组合物的方法可以导致不超过100％的包埋效率。在一些情况下，包埋效率不超过50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或99.5％。
[0146]
本文所描述的是脂质体组合物，其中肽包括一定百分比的组合物。在一些实施例中，肽以组合物的至少或约0.0001％、0.0005％、0.00055％、0.001％、0.005％、0.01％、0.02％、0.05％、0.10％、0.20％、0.25％、0.50％、0.75％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％、7.0％、8％、9％、10％或超过10％提供。在一些实施例中，肽以组合物的至少或约10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、22％、24％、26％、28％、30％或超过30％提供。在一些实施例中，肽以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约5重量％或约0.02重量％至约2重量％的范围提供。在一些实施例中，肽以组合物的约0.03％提供。
[0147]
本文所描述的是脂质体组合物，其中所述脂质体包括一定百分比的组合物。在一些实施例中，脂质体以组合物的至少或约10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、22％、24％、26％、28％、30％或超过30％提供。在一些实施例中，脂质体以约5％到约90％、约10％到约80％、约20％到约70％、约30％到约60％、约10％到约30％、或约20％到约40％的范围提供。
[0148]
在一些实施例中，如本文所描述的脂质体组合物包括至多220纳米(nm)的平均粒度。在一些情况下，平均粒度为至多100nm、105nm、110nm、115nm、120nm、125nm、130nm、135nm、140nm、145nm、150nm、155nm、160nm、165nm、170nm、175nm、180nm、185nm、190nm、195nm、200nm、205nm、210nm、215nm、220nm、230nm、240nm、250nm、260nm、270nm、280nm、290nm、300nm、320nm、340nm、360nm、380nm或400nm。在一些情况下，平均粒度为约100nm、105nm、110nm、115nm、120nm、125nm、130nm、135nm、140nm、145nm、150nm、155nm、160nm、165nm、170nm、175nm、180nm、185nm、190nm、195nm、200nm、205nm、210nm、215nm、220nm、230nm、240nm、250nm、260nm、270nm、280nm、290nm、300nm、320nm、340nm、360nm、380nm或400nm。在一些情况下，平均粒度在约50nm至约500nm、约100nm至约400nm、约150nm至约220nm、约180nm至约220nm或约190nm至约210nm的范围内。
[0149]
在一些情况下，脂质体组合物包括分子量不超过约600道尔顿(da)的活性剂。在一些情况下，活性剂的分子量为至少或约50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975、1000或大于1000道尔顿(da)。在一些情况下，活性剂的分子量为至少或约1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、4000、5000、6000或大于6000道
尔顿(da)。在一些情况下，活性剂的分子量在约50至约1000、约100至约900、约200至约800、约300至约700或约400至约600道尔顿(da)的范围内。在一些情况下，活性剂是肽。在一些情况下，活性剂是包封在脂质体中的肽。
[0150]
在一些实施例中，如本文所描述的脂质体组合物的多分散指数(pdi)在0至约0.2的范围内。在一些情况下，多分散指数为约0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75或0.8。在一些情况下，多分散指数在约0.01至约0.8、约0.025至约0.75、约0.05至约0.6或约0.1至约0.3的范围内。
[0151]
在一些情况下，如本文所描述的脂质体组合物的截距在约0.85至约0.95的范围内。在一些情况下，所述截距是振幅。在一些情况下，所述截距为至少或约0.65、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90或0.95。
[0152]
在一些实施例中，脂质体包括丙二醇、卵磷脂或其组合。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的丙二醇。在一些实施例中，丙二醇以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约2重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)的卵磷脂。在一些实施例中，卵磷脂以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约2重量％的范围提供。在一些实施例中，脂质体包括丙二醇和卵磷脂。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt.％)的丙二醇和卵磷脂。在一些实施例中，丙二醇和卵磷脂以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约2重量％的范围提供。在一些实施例中，丙二醇和卵磷脂以约0.90重量％提供。
[0153]
本文所描述的是包括改进的分布、功效、生物利用度和/或活性的脂质体组合物。与不包括脂质体的组合物相比，脂质体组合物可以包括改进的分布、功效、生物利用度和/或活性。在一些情况下，与不包括脂质体的组合物相比，所述分布改善了至少或约0.5x、1.0x、1.5x、2.0x、2.5x、3.0x、4.0x、4.5x、5x或超过5x。在一些情况下，与不包括脂质体的组合物相比，所述功效提高了至少或约0.5x、1.0x、1.5x、2.0x、2.5x、3.0x、4.0x、4.5x、5x或超过5x。在一些情况下，与不包括脂质体的组合物相比，所述生物利用度提高了至少或约0.5x、1.0x、1.5x、2.0x、2.5x、3.0x、4.0x、4.5x、5x或超过5x。在一些情况下，与不包括脂质体的组合物相比，所述活性提高了至少或约0.5x、1.0x、1.5x、2.0x、2.5x、3.0x、4.0x、4.5x、
5x或超过5x。与不包括脂质体的组合物相比，所述分布、功效、生物利用度和/或活性提高了至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或大于90％。
[0154]
本文所描述的脂质体组合物和方法在一些实施例中是局部组合物。在一些情况下，脂质体组合物是不含油的。在一些情况下，脂质体组合物是不含防腐剂的。在一些实施例中，脂质体调配物是水性调配物。在一些实施例中，脂质体调配物是无水调配物。在一些情况下，脂质体组合物包括约5至约8范围内的ph。在一些情况下，脂质体组合物包括至少或约2、3、4、5、6、7、8、9或10的ph。
[0155]
如本文所描述的方法和组合物可以导致改善的滤泡渗透。在一些情况下，所述滤泡渗透提高了至少或约0.5x、1.0x、1.5x、2.0x、2.5x、3.0x、4.0x、4.5x、5x或超过5x。所述滤泡渗透可以提高至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或超过90％。在一些情况下，组合物导致滤泡渗透的深度为至少或约0.5、0.75、1、1.25、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、7、8、9、10或大于10毫米。
[0156]
其它组分
[0157]
其它成分可以包含抗炎剂、抗氧化剂和溶解度增强剂。示例性抗刺激剂包含但不限于三乙酸泛醇酯和柚皮素。三乙酸泛醇酯和柚皮素是减少皮肤发红和水分流失的天然植物提取物。当用于组合物中时，抗刺激剂的典型用量为1重量％至4重量％(wt.％)。
[0158]
示例性抗氧化剂包含但不限于杜氏盐藻提取物和角鲨烷。杜氏盐藻提取物包含β胡萝卜素等组分。其可以表现出抗氧化作用。当用于组合物中时，抗炎剂的典型用量为0.1重量％至2.5重量％(wt.％)。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％的杜氏盐藻提取物。在一些实施例中，杜氏盐藻提取物以约0.001％至约4.0％、约0.01％至约3.0％、约0.1％至约2.5％或约0.50％至约1.5％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％的角鲨烷。在一些实施例中，角鲨烷以约0.001％至约4.0％、约0.01％至约3.0％、约0.1％至约2.5％或约0.50％至约1.5％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％的杜氏盐藻提取物和角鲨烷。在一些实施例中，杜氏盐藻角鲨烷提取物和角鲨烷以约0.001％至约4.0％、约0.01％至约3.0％、约0.1％至约2.5％或约0.50％至约1.5％的范围提供。
[0159]
在一些实施例中，肽与合适的载体、稀释剂或赋形剂混合，并且可以含有辅助物质，如润湿剂或乳化剂、ph缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、香味剂、色素等，这取决于施用途径和所期望的制剂。参见例如，“《雷明顿：药学科学与实践(remington:the science and practice of pharmacy)》”,利平科特
·
威廉斯
·
威尔金斯出版公司(lippincott williams&wilkins)；第20版(2003年6月1日)和“《雷明顿药学科学
(remington's pharmaceutical sciences)》,”麦克出版公司(mack pub.co.)；第18版和第19版(分别为1985年12月和1990年6月)。此类制剂可以包含络合剂、金属离子、聚合物，如聚乙酸、聚乙醇酸、水凝胶、葡聚糖等、脂质体、微乳液、胶束、单层或多层囊泡、红细胞影或成球细胞。用于组合物的合适的脂质包含但不限于甘油单酯、甘油二酯、硫脂、溶血卵磷脂、磷脂、皂苷、胆汁酸等。在一些实施例中，本文所描述的组合物包括磷脂酰丝氨酸、磷脂、生育酚、抗坏血酸棕榈酸酯或其组合。在一些实施例中，提供了0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的磷脂酰丝氨酸、磷脂、生育酚、抗坏血酸棕榈酸酯或其组合。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸、磷脂、生育酚、抗坏血酸棕榈酸酯或其组合以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，磷脂酰丝氨酸、磷脂、生育酚、抗坏血酸棕榈酸酯或其组合以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约5重量％的范围提供。在一些实施例中，添加剂是甜菜碱。在一些实施例中，甜菜碱以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约5重量％的范围提供。在一些实施例中，本文所描述的组合物包括辛甘醇。在一些实施例中，辛甘醇以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约5重量％的范围提供。在一些实施例中，本文所描述的组合物包括辛酰氧肟酸。在一些实施例中，辛酰氧肟酸以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约5重量％的范围提供。此类另外的组分的存在会影响活性成分的物理状态、溶解度、稳定性、释放率、清除率和渗透性。
[0160]
用于局部施用的组合物包括本文所描述的肽组合物和皮肤学上可接受的媒剂。媒剂可以是水性的或非水性的。局部组合物中所使用的皮肤学上可接受的媒剂可以呈洗剂、凝胶、软膏、液体、乳膏或乳液的形式。如果媒剂是乳液，则乳液可以具有连续的水相和不连续的非水相或油相(水包油乳液)，或连续的非水相或油相和不连续的水相(油包水乳液)。当以液体或凝胶形式局部施用时，可以将液体载体，如水、石油、动物或植物来源的油，如花生油、矿物油、大豆油或芝麻油或合成油添加到活性成分中。生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖类溶液或二醇，如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇也是合适的液体载剂。药物组合物也可以呈水包油型乳剂的形式。油相可以是植物油，如橄榄油或花生油、矿物油，如液体石蜡或其混合物。合适的乳化剂包含天然存在的树胶，如阿拉伯树胶和黄蓍胶、天然存在的磷脂，如大豆卵磷脂、衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，如脱水山梨糖醇单油酸酯，以及这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物，如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可以含有着色剂和香味剂。
[0161]
在某些实施例中，采用硅酮弹性体(例如，二甲基硅氧烷交联聚合物)来增加肽向皮肤中的递送和渗透。增加分子量(如硅酮胶)或添加填料(如硅酮化合物)的替代方案是将硅氧烷聚合物部分交联并将此材料分散在适当的硅酮载液中。所得聚二甲基硅氧烷交联聚合物(在个人护理行业中也称为硅酮弹性体)与碱性聚二甲基硅氧烷(pdms)不同，因为线性聚合物之间存在交联。这些材料可以用于肽组合物，并在疤痕治疗、伤口周围保护和酶递送
方面提供益处。在护肤应用中，硅酮弹性体(包含那些具有官能团的硅酮弹性体)的美观性及其吸收各种油的能力(例如，用聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物，如dow9506弹性体粉末)是弹性体的两个理想特性。硅酮弹性体具有被描述为“光滑”、“天鹅绒般”和“粉状”的不同于任何硅酮流体的皮肤感觉。可以通过控制配方中的液相量，并且因此控制溶胀程度来对其进行修改。由于其成膜特性，聚二甲基硅氧烷交联聚合物可以用作活性成分如本文所描述的肽或其它组合物组分如油溶性维生素和防晒剂的递送系统。甲氧基肉桂酸辛酯等防晒剂可以更有效地从含有硅酮弹性体的组合物中递送，从而产生更高的防晒系数(spf)。硅酮弹性体共混物可以用于增强含有有机防晒剂的水包油组合物中的spf。例如，在对spf进行的测试中，向含有有机防晒剂的防晒组合物中添加4％的硅酮弹性体共混物，从而将spf从5.7增加到18。硅酮弹性体的这一特性使得组合物中的防晒剂的效力最大化，同时减少了实现所期望spf所需的量。因此，可以降低组合物成本，同时也可以减少由防晒活性物质引起的潜在刺激。因此，用相同量的uv吸收剂可以获得更高的spf，从而导致在不增加组合物成本的情况下增强性能。硅酮弹性体可以由线性硅酮聚合物通过多种交联反应，例如通过乙烯基与硅烷反应的氢化硅烷化反应产生。一般过程涉及其反应位点沿聚合物链与交联剂反应的线性硅酮聚合物。聚二甲基聚硅氧烷交联聚合物可以是由溶胀在载液中的弹性体颗粒的悬浮液制成的凝胶(例如，聚硅氧化合物中的高分子量硅酮弹性体的混合物，如dow9040硅酮弹性体共混物)，也可以由喷雾干燥粉末(聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物，如dow9506弹性体粉末)产生。具有期望属性的凝胶形式是环甲硅脂，但也可以使用低粘度聚二甲基硅氧烷和有机流体。悬浮液或凝胶形式的聚二甲基硅氧烷交联聚合物的实例是十甲基环戊硅氧烷中的高分子量硅酮弹性体(12％)(例如{dowst弹性体10)和环戊硅氧烷中的高分子量硅酮弹性体的混合物(例如dow9040硅酮弹性体共混物)，其弹性体含量通常在10重量％到20重量％之间。
[0162]
在一些实施例中，组合物包括硅氧烷聚合物。在一些实施例中，所述硅氧烷聚合物是辛基聚甲基硅氧烷。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4.0重量％(wt.％)的辛基聚甲基硅氧烷。在一些实施例中，辛基聚甲基硅氧烷以约0.5重量％提供。在一些实施例中，辛基聚甲基硅氧烷以约0.001重量％至约4.0重量％、约0.01重量％至约3.0重量％、约0.1重量％至约2.5重量％或约0.50重量％至约1.5重量％的范围提供。在一些实施例中，辛基聚甲基硅氧烷以约0.25重量％提供。在一些实施例中，辛基聚甲基硅氧烷以约1重量％提供。
[0163]
膨润土粘土可以与肽结合使用，以赋予组合物渗透性和吸附特性，并有助于稳定乳剂。也可以采用其它粘土，如锂皂石和镁铝硅酸盐。膨润土或其它粘土可以被改性，以产生有机经改性的粘土化合物。脂肪酸(例如，氢化脂肪酸)盐(例如，季铵盐)可与锂皂石或其它粘土反应。如本文所提供的，脂肪酸是使用本领域技术人员所采用的常规术语来提及和描述的。饱和脂肪酸不含碳-碳双键。不饱和脂肪酸包含至少一个碳-碳双键。单不饱和脂肪酸仅包含一个碳-碳双键。多不饱和脂肪酸包含两个或更多个碳-碳双键。脂肪酸中的双键
通常是顺式的；然而，反式双键也是可能的。双键的位置可以通过δn指示，其中n指示每对双键碳原子中较低编号的碳。指定总碳数的简化符号：双键号，可以采用δ
双键位置
。例如，20:4δ
5,8,11,14
是指具有20个碳原子和四个双键的脂肪酸，其中双键位于5个和6个碳原子、8个和9个碳原子，11个和12个碳原子以及14个和15个碳原子之间，其中碳原子1是羧酸基团的碳。硬脂酸(十八酸酯)是饱和脂肪酸。油酸(顺式-δ9-油酸甲酯)是单不饱和脂肪酸，亚麻酸(全顺式
‑△
9,12,15-十八碳三烯酸)是多不饱和脂肪酸。适合使用的脂肪酸可以包括5个至30个碳原子，例如，5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个碳原子。脂肪酸可以完全饱和，或者可以包含尽可能多的双键，只要链长合适。适合官能化锂皂石或其它粘土的脂肪酸包含棕榈酸和硬脂酸。二烷基季阳离子改性剂包含二棕榈酰二甲基氯化铵和二硬脂酰二甲基氯化铵。酰胺季铵阳离子改性剂包含棕榈酰胺丙基三甲基氯化铵鲸蜡硬脂醇和棕榈酰胺丙基三甲基氯化铵。
[0164]
用于肽组合物的局部制剂的药物赋形剂可以选自由以下组成的组：溶剂、润肤剂和/或乳化剂、油基、防腐剂、抗氧化剂、张力调节剂、促渗剂和增溶剂、螯合剂、缓冲剂、表面活性剂、一种或多种聚合物及其组合。
[0165]
用于水性或亲水性脂质体组合物的合适的溶剂包含以下：水；乙醇；异丙醇；水和乙醇和/或异丙醇的混合物；甘油；乙二醇、丙二醇或丁二醇；dmso；以及其混合物。在一些实施例中，提供了至少或约1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、11重量％、12重量％或大于12重量％(wt.％)的甘油。在一些实施例中，提供了至少或约7％的甘油。在一些实施例中，甘油以约1重量％至约12重量％、约2重量％至约11重量％或约3重量％至约10重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.0025重量％、0.005重量％、0.075重量％、0.01重量％、0.025重量％、0.05重量％、0.75重量％、1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、11重量％、12重量％或大于12重量％的丁二醇。在一些实施例，丁二醇以约0.01重量％至约10重量％、约0.025重量％至约5重量％或约0.05重量％至约1.25重量％的范围提供。用于疏水组合物的合适的溶剂包含矿物油、植物油和硅油。如果期望，如本文所描述的肽组合物可以溶解或分散在疏水油相中，并且然后油相可以在单独或与低级醇、甘油和/或二醇组合的包括水的水相中乳化。在一些实施例中，应用无水组合物，因为水的存在会在施用于经受激光治疗、化学换肤、磨皮术等的皮肤组织时导致刺痛。无水组合物还可以起到预防在损伤皮肤或敏感皮肤中发生水基刺激性接触性皮炎的作用，这可能会产生可延缓伤口愈合和改善皮肤质量的皮疹和皮肤刺激。tsai,t.f.,maibach,h.i.水有多刺激？概述.《接触性皮炎(contact dermatitis)》41(6)(1999):311-314(将由水引起的接触性皮炎描述为刺激物)。然而，在某些实施例中，提供水基组合物或允许存在有限量的水可能是可接受的。例如，可能存在水，但其量低于当应用于受损皮肤时可能导致刺痛感的阈值。渗透压休克或渗透胁迫是细胞周围溶质浓度的突然变化，从而导致水在跨其细胞膜上的运动发生快速变化。在上清液中盐、底物或任何溶质的高浓度条件下，水通过渗透从细胞中抽出。这也抑制了底物和辅助因子进入到细胞中的转运，从而“震惊”了细胞。可替代地，在溶质的浓度较低的情况下，水会大量进入细胞，从而导致细胞膨胀并破裂或发生细胞凋亡。如本文所描述的某些组合物可以有利地用于期望最小化渗透压休克的地方。
[0166]
如本文所描述的组合物可以包括不同量的溶剂。在一些实施例中，溶剂是水。在一些实施例中，溶剂为至少或约10重量％、15重量％、20重量％、25重量％、30重量％、35重量％、40重量％、45重量％、50重量％、55重量％、60重量％、65重量％、70重量％、75重量％、80重量％、85重量％、90重量％、95重量％或大于95重量％(wt.％)。在一些实施例中，溶剂在约10重量％至约95重量％、约20重量％至约90重量％、约30重量％至约85重量％、约40重量％至约80重量％或约50重量％至约75重量％的范围内。
[0167]
组合物的粘度可以使用药学上可接受的增稠剂维持在所选择水平处。可以用于制备具有含水基的粘胶或乳膏的合适的粘度增强剂或增稠剂包含聚丙烯酸钠、黄原胶、聚乙烯吡咯烷酮、丙烯酸聚合物、角叉菜胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙氧基化聚丙烯酰胺、聚乙氧基化丙烯酸酯和聚乙氧基化烷硫醇。甲基纤维素是优选的，因为其易于获得且经济适用且容易起作用。其它合适的增稠剂包含例如黄原胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆(carbomer)等。增稠剂的优选浓度将取决于所选增稠剂。优选地使用将达到所选粘度的量。粘性组合物通常通过添加此类增稠剂或通过采用具有可接受粘度水平的碱由溶液制备。
[0168]
在一些实施例中，如本文所描述的组合物的粘度在约8,000厘泊(cps)至约30,000cps的范围内。在一些实施例中，粘度为至少或约4,000；5,000；6,000；7,000；8,000；9,000；10,000；11,000；12,000；13,000；14,000；15,000；16,000；17,000；18,000；19,000；20,000；21,000；22,000；23,000；24,000；25,000；26,000；27,000；28,000；29,000；30,000；31,000；32,000；33,000；34,000；35,000；36,000；37,000；38,000；39,000；40,000；或大于40,000cps。在一些实施例中，组合物包括在约4,000至约40,000、约6,000至约38,000、约8,000至约36,000、约10,000至约34,000cps、约12,000至约32,000cps或约14,000至约30,000cps范围内的粘度。
[0169]
合适的润肤剂包含烃油和蜡，如矿物油、矿脂、石蜡、矿蜡、地蜡、微晶蜡、聚乙烯、鲨烯、全氢鲨烯、硅油、甘油三酯、乙酰甘油酯，如乙酰化甘油单酯；乙氧基化甘油酯，如乙氧基化单硬脂酸甘油酯；脂肪酸或二羧酸的烷基酯。在一些实施例中，润肤剂是辛酸/癸酸甘油三酯。
[0170]
在一些实施例中，提供了至少或约0.0025重量％、0.005重量％、0.075重量％、0.01重量％、0.025重量％、0.05重量％、0.75重量％、1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、11重量％、12重量％或大于12重量％的润肤剂。在一些实施例中，润肤剂以约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约2.5重量％、约0.025重量％至约5重量％或约0.05重量％至约1.25重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.0025重量％、0.005重量％、0.075重量％、0.01重量％、0.025重量％、0.05重量％、0.75重量％、1重量％、2重量％、3重量％、4重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、11重量％、12重量％或大于12重量％的辛酸/癸酸甘油三酯。在一些实施例中，辛酸/癸酸甘油三酯以约0.01重量％至约10重量％、约0.01重量％至约2.5重量％、约0.025重量％至约5重量％或约0.05重量％至约1.25重量％的范围提供。
[0171]
用作润肤剂的合适的硅油包含二甲基聚硅氧烷、甲基(苯基)聚硅氧烷和水溶性和醇溶性硅酮二醇共聚物。用作润肤剂的合适的甘油三酯包含植物和动物脂肪和油，所述植
物和动物脂肪和油包含蓖麻油、红花油、棉籽油、玉米油、橄榄油、鱼肝油、杏仁油、鳄梨油、棕榈油、芝麻油和大豆油。
[0172]
用作润肤剂的合适的羧酸或二酸的酯包含脂肪酸的甲酯、异丙酯和丁酯。烷基酯的具体实例包含月桂酸己酯、月桂酸异己酯、棕榈酸异己酯、棕榈酸异丙酯、油酸癸酯、油酸异癸酯、硬脂酸十六酯、硬脂酸癸酯、异硬脂酸异丙酯、乳酸二月桂酯、乳酸肉豆蔻酯和乳酸鲸蜡酯；以及脂肪酸的烯基酯，如肉豆蔻酸油酯、硬脂酸油酯和油酸油酯。二酸烷基酯的具体实例包含己二酸二异丙酯、己二酸二异己酯、己二酸二(己基癸基)酯和癸二酸二异丙酯。
[0173]
可用于组合物中的其它合适种类的润肤剂或乳化剂包含脂肪酸、脂肪醇、脂肪醇醚、乙氧基化脂肪醇、乙氧基化脂肪醇的脂肪酸酯和蜡。
[0174]
用作润肤剂的脂肪酸的具体实例包含壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸、羟基硬脂酸、油酸、亚油酸、蓖麻油酸、花生酸、山嵛酸和芥酸。用作润肤剂的脂肪醇的具体实例包含月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、十六烷基醇、硬脂醇、异硬脂醇、羟基硬脂醇、油醇、蓖麻油醇、山嵛醇和瓢儿菜醇，以及2-辛基十二烷醇。
[0175]
适合用作润肤剂的蜡的具体实例包含羊毛脂及其衍生物，所述羊毛脂及其衍生物包含羊毛脂油、羊毛脂蜡、羊毛脂醇、羊毛脂脂肪酸、羊毛酸异丙酯、乙氧基化羊毛脂、乙氧基化羊毛脂醇、乙氧基化胆固醇、丙氧基化羊毛脂醇、乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、羊毛脂醇亚油酸酯、羊毛脂醇蓖麻酸酯、羊毛脂醇蓖麻酸酯的乙酸酯、羊毛脂醇蓖麻酸酯的乙酸酯、乙氧基化醇酯的乙酸酯、羊毛脂的氢解物、氢化羊毛脂、乙氧基化氢化羊毛脂、乙氧基化山梨醇羊毛脂以及液体和半固体羊毛脂。还可用作蜡，包含烃蜡、酯蜡和酰胺蜡。有用的蜡包含蜡酯，如蜂蜡、鲸蜡、肉豆蔻酸肉豆蔻酯和硬脂酸硬脂酸酯；蜂蜡衍生物，例如聚氧乙烯山梨醇蜂蜡；和包含巴西棕榈蜡和小烛树蜡的植物蜡。
[0176]
多元醇和聚醚衍生物可以用作组合物中的溶剂和/或表面活性剂。合适的多元醇和聚醚包含丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇2000和4000、聚(氧乙烯-共-氧丙烯)二醇、甘油、山梨醇、乙氧基化山梨醇、羟丙基山梨醇、聚乙二醇200-6000、甲氧基聚乙二醇350、550、750、2000和5000，聚[环氧乙烷]均聚物(100,000-5,000,000)、聚亚烷基二醇及衍生物、己二醇、2-甲基-2,4-戊二醇、1,3-丁二醇、1,2,6-己三醇、2-乙基-1,3-己二醇、具有15个至18个碳原子的连二醇和三羟甲基丙烷的聚氧丙烯衍生物。
[0177]
多元醇酯可以用作乳化剂或润肤剂。合适的多元醇酯包含乙二醇单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、二乙二醇单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6000)单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、丙二醇单脂肪酯和二脂肪酯、聚丙二醇2000单油酸酯、聚丙二醇2000单硬脂酸酯、乙氧基化丙二醇单硬脂酸酯、甘油单脂肪酸酯和二脂肪酸酯、聚甘油多脂肪酸酯、乙氧基化甘油单硬脂酸酯、1,3-丁二醇单硬脂酸酯、1,3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯。
[0178]
用于组合物的合适的乳化剂包含阴离子、阳离子、非离子和两性离子表面活性剂。优选的离子乳化剂包含磷脂，如卵磷脂和衍生物。
[0179]
甾醇包含例如胆固醇和胆固醇脂肪酸酯；酰胺如脂肪酸酰胺、乙氧基化脂肪酸酰胺和脂肪酸链烷醇酰胺也可以用作润肤剂和/或促渗剂。
[0180]
可以采用药学上可接受的防腐剂来增加组合物的保存期限。用于组合物中的其它合适的防腐剂和/或抗氧化剂包含苯扎氯铵、苯甲醇、苯酚、脲、对羟基苯甲酸酯、丁基化羟
基甲苯(bht)、丁基化羟基茴香醚(bha)、生育酚、硫柳汞、氯丁醇等，以及其混合物，其均可以采用。如果采用防腐剂，如抗氧化剂，基于组合物的总重量，所述防腐剂，如抗氧化剂的合适浓度通常为约0.02％至约2％，但取决于所选择的试剂可能需要更大或更小的量。如本文所描述的，还原剂可以有利地用于维持组合物的良好保存期限。通常观察到实施例的无水组合物表现出令人满意的稳定性，从而使得可以从组合物中省略防腐剂。
[0181]
用于组合物的合适的螯合剂包含乙二胺四乙酸、其碱金属盐、其碱土金属盐、其铵盐和其四烷基铵盐。在一些实施例中，螯合剂是乙二胺四乙酸二钠(edta)。在一些实施例中，提供了至少或约0.001重量％、0.005重量％、0.01重量％、0.02重量％、0.05重量％、0.10重量％、0.20重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％或大于4重量％(wt.％)的edta二钠。在一些实施例中，edta二钠以约0.25重量％至约10重量％、约0.1重量％至约2.5重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，edta二钠以约0.001重量％至约6重量％、约0.002重量％至约4重量％、约0.01重量％至约3重量％或约0.02重量％至约2重量％的范围提供。
[0182]
载体的ph值优选地介于约4.0与10.0之间，更优选地介于约4.8与约7.8之间，更优选地介于约5.0与约6.5之间。可以使用缓冲溶液或其它ph调节剂来控制ph。合适的ph调节剂包含磷酸和/或磷酸盐、柠檬酸和/或柠檬酸盐、氢氧化物盐(即氢氧化钙、氢氧化钠、氢氧化钾)和胺，如三乙醇胺。合适的缓冲溶液包含ph保持在5.8和8之间的包括磷酸二氢钾和磷酸二钾溶液的缓冲液，以及包括ph保持在6和7.5之间的磷酸一钠和磷酸二钠溶液的缓冲液。其他它缓冲也包含柠檬酸/柠檬酸钠以及磷酸氢二钠/柠檬酸。实施例的肽组合物优选地与接受者的血液或其它体液等渗。可以使用酒石酸钠、丙二醇或其它无机或有机溶质来获得组合物的等渗性。特别优选氯化钠。可以采用缓冲剂，如乙酸和盐、柠檬酸和盐、硼酸和盐以及磷酸和盐。可能期望在组合物中包含还原剂，如维生素c、维生素e或制药领域已知的其它还原剂。
[0183]
表面活性剂也可用作赋形剂，例如，阴离子去污剂(如十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸二辛酯钠和磺酸二辛酯钠)、阳离子去污剂(如苯扎氯铵或苄索氯铵)或非离子去污剂(如聚氧乙烯氢化蓖麻油、单硬脂酸甘油酯、聚山梨醇酯、蔗糖脂肪酸酯、甲基纤维素或羧甲基纤维素)。
[0184]
在某些实施例中，包含具有药理活性的另外的试剂可能是有利的。抗感染剂包含但不限于驱虫药(甲苯咪唑(mebendazole))、包含氨基糖甙类的抗生素(庆大霉素(gentamicin)、新霉素(neomycin)、妥布霉素(tobramycin))、抗真菌抗生素(两性霉素(两性霉素)b、氟康唑(fluconazole)、灰黄霉素(griseofulvin)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、制霉菌素(nystatin)、咪康唑(micatin)、托萘酯(tolnaftate))、头孢菌素(cephalosporins)(头孢克洛(cefaclor)、头孢唑啉(cefazolin)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢曲松钠(ceftriaxone)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢氨苄(cephalexin))、β-内酰胺类抗生素(头孢替坦(cefotetan)、美罗培南(meropenem))、氯霉素(chloramphenicol)、大环内酯类(阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、红霉素(erythromycin))、青霉素类(青霉素g钠盐、阿莫西林(amoxicillin)、氨苄青霉素(ampicillin)、双氯青霉素(dicloxacillin)、乙氧萘青霉素
(nafcillin)、哌拉西林(piperacillin)、羟基噻吩青霉素(ticarcillin))、四环素(多西环素(doxycycline)、米诺环素(minocycline)、四环素(tetracycline))、杆菌肽(bacitracin)、克林霉素(clindamycin)、粘杆菌素甲基磺酸钠(colistimethate sodium)、多粘菌素b硫酸盐(polymyxin b sulfate)、万古霉素(vancomycin)、包含阿昔洛韦(acyclovir)的抗病毒药、金刚烷胺(amantadine)、地达诺新(didanosine)、依法韦仑(efavirenz)、膦甲酸(foscarnet)、更昔洛韦(ganciclovir)、茚地那韦(indinavir)、拉米夫定(lamivudine)、奈非那韦(nelfinavir)、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)、司他夫定(stavudine)、伐昔洛韦(valacyclovir)、缬更昔洛韦(valganciclovir)、齐多夫定(zidovudine)、喹诺酮类药(quinolones)(环丙沙星(ciprofloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin))、磺胺类药(sulfonamides)(磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺异噁唑(sulfisoxazole))、砜类药(sulfones)(氨苯砜(dapsone))、呋喃唑酮(furazolidone)、甲硝唑(metronidazole)、喷他脒(pentamidine)、磺胺结晶(sulfanilamidum crystallinum)、加替沙星(gatifloxacin)和磺胺甲恶唑(sulfamethoxazole)/甲氧苄啶(sulfamethoxazole)。麻醉剂可以包含但不限于乙醇、布比卡因(bupivacaine)、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、左旋布比卡因(levobupivacaine)、利多卡因(lidocaine)、甲哌卡因(mepivacaine)、普鲁卡因(procaine)、罗哌卡因(ropivacaine)、丁卡因(tetracaine)、地氟醚(desflurane)、异氟醚(isoflurane)、氯胺酮(ketamine)、丙泊酚(propofol)、七氟醚(sevoflurane)、可待因(codeine)、芬太尼(fentanyl)、氢吗啡酮(hydromorphone)、麻卡因(marcaine)、度冷丁(meperidine)、美沙酮(methadone)、吗啡(morphine)、羟考酮(oxycodone)、瑞芬太尼(remifentanil)、舒芬太尼(sufentanil)、布托啡诺(butorphanol)、纳布啡(nalbuphine)、曲马多(tramadol)、苯佐卡因(benzocaine)、地布卡因(dibucaine)、氯乙烷(ethyl chloride)、利多卡因(xylocaine)和非那吡啶(phenazopyridine)。抗炎剂包含但不限于非甾体抗炎药(nsaid)，如阿司匹林(aspirin)、塞来昔布(celecoxib)、三水杨酸胆碱镁(choline magnesium trisalicylate)、双氯芬酸钾(diclofenac potassium)、双氯芬酸钠(diclofenac sodium)、二氟尼柳(diflunisal)、依托度酸(etodolac)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、布洛芬(ibuprofen)、消炎痛(indomethacin)、酮洛芬(ketoprofen)、酮咯酸(ketorolac)、黑素酸(melenamic acid)、萘丁美酮(nabumetone)、萘普生(naproxen)、萘普生钠(naproxen sodium)、奥沙普秦(oxaprozin)、吡罗昔康(piroxicam)、罗非昔布(rofecoxib)、双水杨酯(salsalate)、舒林酸(sulindac)和托美汀(tolmetin)；以及皮质类固醇，如可的松(cortisone)、氢化可的松(hydrocortisone)、甲基强的松龙(methylprednisolone)、强的松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、倍他米松(betamethesone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、布地奈德(budesonide)、地塞米松磷酸钠(dexamethasone sodium phosphate)、氟尼缩松(flunisolide)、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、倍他米松(betamethasone)、氟轻松醋酸酯(fluocinonide)、二丙酸倍他米松(betamethasone dipropionate)、戊酸倍他米松(betamethasone valerate)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoximetasone)、氟轻松(fluocinolone)、去炎松(triamcinolone)、丙酸氯倍他索(clobetasol propionate)和地塞米松(dexamethasone)。
[0185]
在某些实施例中，润肤剂、乳液稳定剂、保湿剂、赋形剂和其它化合物的添加可以被改变以增强局部组合物的感官特性，所述感官特性包含但不限于：皮肤感觉(如丝滑、轻盈、乳脂状)，吸收性(产品失去湿润感并且不再被皮肤感知所需的时间)、稠度、紧实度、铺展性(例如粘度、流动起始、剪切速率)、粘性、形状完整性、光泽度、亲水性或疏水性等。优选地，组合物将具有高铺展性和低粘度特性。已证明具有此类特性的组合物具有增强的“丝滑”或“轻盈”肤感等级(参见例如，bekker,m.webber,g.,louw,n.当将矿物基和fischer-tropsch蜡基化妆品乳液和凝胶施用于皮肤时，将流变学测量与初级和次级皮肤感觉相关联(relating rheological measurements to primary and secondary skin feeling when mineral-based and fischer-tropsch wax-based cosmetic emulsions and jellies are applied to the skin),《国际美容科学杂志(international journal of cosmetic science)》2013,35(4),第354-61页)。
[0186]
在一些实施例中，组合物包括苯氧乙醇、乙基己基甘油或其组合。在一些实施例中，提供了至少或约0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的苯氧乙醇。在一些实施例中，苯氧乙醇以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的乙基己基甘油。在一些实施例中，乙基己基甘油以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的苯氧乙醇和乙基己基甘油。在一些实施例中，苯氧乙醇和乙基己基甘油以约0.25重量％至约10重量％、约0.1重量％至约4重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。
[0187]
在一些实施例中，组合物包括聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯、聚山梨酸酯20或其组合。在一些实施例中，提供了至少或约0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的聚丙烯酸酯-13。在一些实施例中，聚丙烯酸酯-13以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的聚异丁烯。在一些实施例
中，聚异丁烯以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，聚丙烯酸酯-13以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的聚山梨酸酯20。在一些实施例中，聚山梨酸酯20以约0.25重量％至约10重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％的范围提供。在一些实施例中，提供了至少或约0.05重量％、0.10重量％、0.25重量％、0.50重量％、0.75重量％、1.0重量％、1.5重量％、2.0重量％、2.5重量％、3.0重量％、3.5重量％、4.0重量％、4.5重量％、5.0重量％、5.5重量％、6.0重量％、6.5重量％、7.0重量％、8重量％、9重量％、10重量％或大于10重量％(wt％)的聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯和聚山梨酸酯20。在一些实施例中，聚丙烯酸酯-13、聚异丁烯和聚山梨酸酯20以约0.25重量％至约10重量％、约0.1重量％至约4重量％、约0.5重量％至约8重量％、约0.75重量％至约6重量％或约1重量％至约4重量％(wt.％)的范围提供。
[0188]
局部组合物可以含有胶束，或分散在水溶液中的表面活性剂分子的聚集体。胶束可以通过将油溶剂分散在包括表面活性剂的水溶液中来制备，其中所述表面活性剂浓度超过临界胶束浓度。所得组合物含有胶束，即球形油滴。
[0189]
促渗剂
[0190]
脂肪酸和醇可以用于增强肽的渗透性，并为组合物提供丝滑的感觉(例如，甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、肉豆蔻酸、异戊酸、棕榈油酸、皂甙酸、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、亚麻酸、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸、二十二碳六烯酸、辛酸、癸酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、木蜡酸、蜡酸、中链脂肪酸，例如c
6-12
脂肪酸等。当用于组合物中时，典型用量为1重量％至4重量％。
[0191]
使用方法
[0192]
本文描述了用于改善包含色素沉着过度的色素沉着的组合物和方法。在一些实施例中，色素沉着过度是由于炎症后色素沉着过度、黄褐斑或衰老所致。在一些实施例中，由于衰老引起的色素沉着过度是由uv暴露或炎症引起的。
[0193]
本文还描述了用于降低黑素细胞活性、抑制黑色素合成、减少黑色素转移、增加黑素体自噬、减少炎症或其组合的组合物和方法。在一些实施例中，黑素细胞活性的降低起因于抑制mitf、tyr、trp1、trp2或其组合。在一些实施例中，黑素细胞活性的降低起因于激活erk信号传导、jnk信号传导或其组合。在一些实施例中，增加的黑素体自噬起因于par-2、et-1或scf的表达、活性或两者增加。
[0194]
如本文所描述的组合物包括用于治疗色素沉着疾病或病症的肽、水飞蓟素、氨甲环酸、乳铁蛋白、大麻二醇、南非醉茄提取物、没食子酸、芝麻酚、麦角甾苷、橄榄苦苷、橙皮苷、白乳木提取物、小白菊内酯、melatrepein
tm
、烟酰胺、银耳提取物、嗜热栖热菌提取物，八氢番茄红素、六氢番茄红素、欧夏至草、白绒水龙骨提取物或其组合。
[0195]
使用本文所描述的组合物和方法可以改善各种色素沉着病症或疾病。在一些实施
例中，色素沉着病症或疾病是色素沉着过度。在一些实施例中，色素沉着病症或疾病是局灶性色素减退或弥漫性色素减退。在一些实施例中，所述病症或疾病是炎症后色素沉着过度(pih)。在一些实施例中，pih是pih的表皮形式。在一些实施例中，pih是pih的确定形式。在一些实施例中，色素沉着病症或疾病包含但不限于黑棘皮病、老年斑、白化病、色素失调症、雀斑、黄褐斑、白色糠疹，或进行性色素性紫癜。
[0196]
在一些实施例中，本文所描述的组合物通过降低黑素细胞活性、抑制黑色素合成、减少黑色素转移、增加黑素体自噬、减少炎症或其组合来改善色素沉着。在一些实施例中，本文所描述的组合物将色素沉着改善了至少或约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或超过95％。在一些实施例中，本文所描述的组合物将色素沉着改善了至少或约0.5x、1.0x、1.5x、2.0x、2.5x、3.0x、3.5x、4.0x、5.0x、6.0x、7.0x、8.0x、9.0x、10x或超过10x。
[0197]
如本文所描述的组合物可以与各种治疗方案一起使用。在一些情况下，本文所描述的局部组合物每天施用一次、每天施用两次、每天施用三次或更多次。在一些情况下，本文所描述的局部组合物每天施用两次。在一些实施例中，每日、每天、每隔一天、每周五天、每周一次、每隔一周、每月两周、每月三周、每月一次、每月两次、每月三次或更多次地施用本文所描述的局部组合物。在一些实施例中，本文所描述的局部组合物每天施用两次，例如早上和晚上。在一些实施例中，本文所描述的局部组合物被施用至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、2年、3年、4年、5年、10年或更长时间。在一些实施例中，本文所描述的局部组合物每天施用两次，持续至少或约1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长时间。在一些实施例中，本文所描述的局部组合物每天施用一次、每天施用两次、每天施用三次、每天施用四次或每天施用多于四次，持续至少或约1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长时间。
[0198]
稳定性测试
[0199]
组合物的稳定性测试可以如下进行。
[0200]
高温测试现在通常用作长期稳定性的预测指标。高温测试可以在37℃(98℉)和45℃(113℉)下进行。如果将产物在45℃下储存三个月(并表现出可接受的稳定性)，则那么其应该在室温下稳定持续两年。良好的控制温度为4℃(39℉)，其中大多数产物都表现出良好的稳定性。有时产物还会经受-10℃(14℉)下持续三个月。
[0201]
在一些情况下，通过从-10℃(14℉)到25℃(77℉)的三个温度测试循环来评估产物的稳定性。在此情况下，将产物放置在-10℃下持续24小时，并且然后在室温(25℃)下放置持续24小时。这完成了一个循环。更严格的测试是-10℃至45℃的五次循环测试。这会使乳液处于巨大的压力之下。
[0202]
(水包油乳液的)分散相有分离的趋势，并上升到乳液的顶部，从而形成一层油滴。此现象称为乳化。乳化是即将发生乳液不稳定的最初迹象之一。一种预测乳化的测试方法是离心法。将乳液加热至50℃(122℉)，并以3000rpm离心持续三十分钟。然后检查所得产物是否有乳化迹象。
[0203]
配方和包装两者均可能对uv辐射敏感。将产物置于玻璃中，并且实际包装在具有广谱输出的灯箱中。将另一个用铝箔完全覆盖的玻璃罐作为对照。可能会观察到产物变色。
[0204]
对于所有上述测试，可以在显微镜下观察颜色、气味/香味、粘度、ph值以及(如果有的话)粒度均匀性和/或颗粒团聚。
[0205]
用于非侵入用途的试剂盒
[0206]
本文所提供的方法和组合物的一些实施例包含包括本文所提供的肽的试剂盒。在一些实施例中，可以向管理医生、其它医疗保健专业人员、患者或护理者提供试剂盒。在一些实施例中，试剂盒包括含有合适的局部组合物中的肽组合物的容器，以及用于向受试者施用肽组合物的说明书。所述试剂盒还可以任选地含有一种或多种另外的治疗剂或其它药剂。例如，含有呈局部形式的肽组合物的试剂盒可以与其它护肤剂，如清洁剂、闭塞性保湿剂、渗透性保湿剂、遮光剂、防晒剂等一起提供。所述试剂盒可以含有散装形式的肽组合物，或者可以含有用于连续或顺序施用的单独剂量的肽组合物。所述试剂盒可以任选地含有一种或多种诊断工具、施用工具和/或使用说明。所述试剂盒可以含有合适的递送装置，如注射器、泵分配器、单剂量包等，以及用于施用肽组合物和任何其它治疗剂或有益剂的说明书。所述试剂盒可以任选地含有关于所包含的任何或所有治疗剂或有益剂的储存、重构(如果适用的话)和施用的说明书。所述试剂盒可以包含多个容器，所述容器反映了待给予受试者的施用次数，或待施用予受试者的不同产物。
[0207]
在一些实施例中，组合物还与皮肤自身的自然再生过程协同工作，并且有助于改善皮肤的外观和皮肤紧致度。局部组合物适用于所有皮肤类型和术后皮肤。局部组合物可以散装形式提供给患者，以允许患者自行施用适量的肽。例如，患者可以施用足以在受影响区域上提供均匀涂层或者按照医生的指示的量的组合物。在某些实施例中，可能需要将另外的治疗剂或活性剂掺入到局部组合物中。可替代地，可以单独施用辅助疗法或药剂。例如，可以在实施例的局部组合物之前或之后提供用于施用的清洁剂、防晒剂、遮光剂、渗透性保湿剂和/或闭塞性保湿剂。
[0208]
乳膏、软膏、洗剂、溶液、凝胶、喷雾剂和贴剂的各个实例可以将如本文所描述的肽组合物作为活性成分与渗透促进剂和协同作用于皮肤的其它活性剂组合，以促进伤口愈合或伤口闭合或治疗慢性皮肤伤口。
[0209]
带编号的实施例
[0210]
带编号的实施例1包括用于改善色素沉着的局部组合物，所述局部组合物包括：一种或多种光体；一种或多种脂质体；六肽-11；以及六肽-12；其中所述局部用组合物改善色素沉着。带编号的实施例2包括根据带编号的实施例1所述的局部组合物，其中所述一种或多种光体以约0.1wt.％至约2wt.％的范围存在。带编号的实施例3包括根据带编号的实施例1至2所述的局部组合物，其中所述一种或多种光体以约0.25wt.％至约1wt.％的范围存在。带编号的实施例4包括根据带编号的实施例1至3所述的局部组合物，其中所述一种或多种光体包封所述一种或多种脂质体。带编号的实施例5包括根据带编号的实施例1至4所述的局部组合物，其中所述六肽-11以50-150ppm存在。带编号的实施例6包括根据带编号的实施例1至5所述的局部组合物，其中所述六肽-11以约0.004重量(wt.％)至约0.100wt.％的范围存在。带编号的实施例7包括根据带编号的实施例1至6所述的局部组合物，其中所述六肽-11被包封在所述一种或多种脂质体中的第一脂质体中。带编号的实施例8包括根据带编号的实施例1至7所述的局部组合物，其中所述六肽-12被包封在所述一种或多种脂质体中的第二脂质体中。带编号的实施例9包括根据带编号的实施例1至8所述的局部组合物，其中
所述六肽-11和所述六肽-12被包封在所述一种或多种脂质体中的第一脂质体中。带编号的实施例10包括根据带编号的实施例1至9所述的局部组合物，其中所述六肽-12包括棕榈酰六肽-12、肉豆蔻酰六肽-12或其组合。带编号的实施例11包括根据带编号的实施例1至10所述的局部组合物，其中所述六肽-12以1-10ppm存在。带编号的实施例12包括根据带编号的实施例1至11所述的局部组合物，其中所述六肽-12以约0.001重量(wt.％)至约0.025wt.％的范围存在。带编号的实施例13包括根据带编号的实施例1至12所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括乳铁蛋白。带编号的实施例14包括根据带编号的实施例1至13所述的局部组合物，其中所述乳铁蛋白以不超过约0.25wt.％存在。带编号的实施例15包括根据带编号的实施例1至14所述的局部组合物，其中所述乳铁蛋白以约0.005wt.％至约0.25wt.％的范围存在。带编号的实施例16包括根据带编号的实施例1至15所述的局部组合物，其中所述乳铁蛋白被包封在所述一种或多种脂质体中的第三脂质体中。带编号的实施例17包括根据带编号的实施例1至16所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括乳铁蛋白，并且其中所述乳铁蛋白、所述六肽-11和所述六肽-12被包封在所述一种或多种脂质体中的第一脂质体中。带编号的实施例18包括根据带编号的实施例1至17所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括源自乳铁蛋白的肽。带编号的实施例19包括根据带编号的实施例1至18所述的局部组合物，其中所述源自乳铁蛋白的肽包括seq id no:1的至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、14个、16个、18个、20个、22个、24个、26个、28个、30个或多于30个的氨基酸。带编号的实施例20包括根据带编号的实施例1至19所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括磷脂酰丝氨酸。带编号的实施例21包括根据带编号的实施例1至20所述的局部组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸以不超过约0.075wt.％存在。带编号的实施例22包括根据带编号的实施例1至21所述的局部组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸以约0.005wt.％至约0.1wt.％的范围存在。带编号的实施例23包括根据带编号的实施例1至22所述的局部组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸以不超过5.0wt％存在。带编号的实施例24包括根据带编号的实施例1至23所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括水飞蓟素。带编号的实施例25包括根据带编号的实施例1至24所述的局部组合物，其中所述水飞蓟素以约0.1wt.％至约1.0wt.％的范围存在。带编号的实施例26包括根据带编号的实施例1至25所述的局部组合物，其中所述水飞蓟素以约0.2wt.％至约3.0wt.％的范围存在。带编号的实施例27包括根据带编号的实施例1至26所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括芝麻酚。带编号的实施例28包括根据带编号的实施例1至27所述的局部组合物，其中所述芝麻酚以约0.002wt.％至约0.050wt.％的范围存在。带编号的实施例29包括根据带编号的实施例1至28所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括氨甲环酸。带编号的实施例30包括根据带编号的实施例1至29所述的局部组合物，其中所述氨甲环酸以约1wt.％至约10wt.％的范围存在。带编号的实施例31包括根据带编号的实施例1至30所述的局部组合物，其中所述氨甲环酸以约0.25wt.％至约6.25wt.％的范围存在。带编号的实施例32包括根据带编号的实施例1至31所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括八氢番茄红素、六氢番茄红素或其组合。带编号的实施例33包括根据带编号的实施例1至32所述的局部组合物，其中所述八氢番茄红素、所述六氢番茄红素或其组合以约1wt.％至约10wt.％的范围存在。带编号的实施例34包括根据带编号的实施例1至33所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括南非醉茄提取物。带编号的实施例35包括根据带编号的实施例1至34所述的局部组合物，其中所述南
非醉茄提取物以约0.020wt.％至约0.500wt.％的范围存在。带编号的实施例36包括根据带编号的实施例1至35所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括没食子酸。带编号的实施例37包括根据带编号的实施例1至36所述的局部组合物，其中所述没食子酸以约0.40wt.％至约10wt.％的范围存在。带编号的实施例38包括根据带编号的实施例1至37所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括橙皮苷。带编号的实施例39包括根据带编号的实施例1至38所述的局部组合物，其中所述橙皮苷以约0.020wt.％至约0.50wt.％的范围存在。带编号的实施例40包括根据带编号的实施例1至39所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括海百合。带编号的实施例41包括根据带编号的实施例1至40所述的局部组合物，其中所述海百合以约0.50wt.％至约5.0wt.％的范围存在。带编号的实施例42包括根据带编号的实施例1至41所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括烟酰胺。带编号的实施例43包括根据带编号的实施例1至42所述的局部组合物，其中所述烟酰胺以约1wt％至约10wt％的范围存在。带编号的实施例44包括根据带编号的实施例1至43所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括橄榄苦苷。带编号的实施例45包括根据带编号的实施例1至44所述的局部组合物，其中所述橄榄苦苷以约0.030wt％至约0.750wt％的范围存在。带编号的实施例46包括根据带编号的实施例1至45所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括嗜热栖热菌酵素。带编号的实施例47包括根据带编号的实施例1至46所述的局部组合物，其中所述嗜热栖热菌酵素以约0.30wt.％至约7.5wt.％的范围存在。带编号的实施例48包括根据带编号的实施例1至47所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括银耳。带编号的实施例49包括根据带编号的实施例1至48所述的局部组合物，其中所述银耳以约0.20wt.％至约5.0wt.％的范围存在。带编号的实施例50包括根据带编号的实施例1至49所述的局部组合物，其中所述局部进一步包括七钠六羧甲基二肽-12。带编号的实施例51包括根据带编号的实施例1至50所述的局部组合物，其中所述七钠六羧甲基二肽-12以约0.1wt.％至约10wt％的范围存在。带编号的实施例52包括根据带编号的实施例1至51所述的局部组合物，其中所述七钠六羧甲基二肽-12以约0.2wt.％至约5wt％的范围存在。带编号的实施例53包括根据带编号的实施例1至52所述的局部组合物，其中所述局部组合物是水性的。带编号的实施例54包括用于改善色素沉着的局部组合物，所述局部组合物包括：六肽-11；六肽-12；以及源自乳铁蛋白的肽；其中所述局部组合物改善色素沉着。带编号的实施例55包括根据带编号的实施例1至54所述的局部组合物，其中所述六肽-12包括棕榈酰六肽-12、肉豆蔻酰六肽-12或其组合。带编号的实施例56包括根据带编号的实施例1至55所述的局部组合物，其中所述六肽-12以1-10ppm存在。带编号的实施例57包括根据带编号的实施例1至56所述的局部组合物，其中所述六肽-12以约0.001重量(wt.％)至约0.025wt.％的范围存在。带编号的实施例58包括根据带编号的实施例1至57所述的局部组合物，其中所述六肽-11以50-150ppm存在。带编号的实施例59包括根据带编号的实施例1至58所述的局部组合物，其中所述六肽-11以约0.004重量(wt.％)至约0.100wt.％的范围存在。带编号的实施例60包括根据带编号的实施例1至59所述的局部组合物，其中所述源自乳铁蛋白的肽包括seq id no:1的至少2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、12个、14个、16个、18个、20个、22个、24个、26个、28个、30个或多于30个的氨基酸。带编号的实施例61包括根据带编号的实施例1至60所述的局部组合物，其中所述局部组合物进一步包括磷脂酰丝氨酸。带编号的实施例62包括根据带编号的实施例1至61所述的局部组合物，其中按wt.％计，所述磷脂酰丝氨酸以不超过约0.075％存在。带
编号的实施例63包括根据带编号的实施例1至62所述的局部组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸以约0.005wt.％至约0.1wt.％的范围存在。带编号的实施例64包括根据带编号的实施例1至63所述的局部组合物，其中所述磷脂酰丝氨酸以不超过5.0wt％存在。带编号的实施例65包括根据带编号的实施例1至64所述的局部组合物，其中所述局部组合物进一步包括乳铁蛋白。带编号的实施例66包括根据带编号的实施例1至65所述的局部组合物，其中所述乳铁蛋白以不超过约0.25wt.％存在。带编号的实施例67包括根据带编号的实施例1至66所述的局部组合物，其中所述乳铁蛋白以约0.005wt.％至约0.25wt.％的范围存在。带编号的实施例68包括根据带编号的实施例1至67所述的局部组合物，其中所述局部组合物进一步包括光体。带编号的实施例69包括根据带编号的实施例1至68所述的局部组合物，其中所述光体以约0.1wt.％至约2wt.％的范围存在。带编号的实施例70包括根据带编号的实施例1至69所述的局部组合物，其中所述局部组合物进一步包括水飞蓟素、芝麻酚、氨甲环酸、八氢番茄红素、六氢番茄红素、南非醉茄提取物、橙皮苷、海百合、烟酰胺、橄榄苦苷、嗜热栖热菌酵素、银耳、七钠六羧甲基二肽-12或其组合。带编号的实施例71包括根据带编号的实施例1至70所述的局部组合物，其中所述局部组合物是水性的。带编号的实施例72包括一种改善由色素沉着病症或疾病引起的色素沉着的方法，所述方法包括施用根据带编号的实施例1至71所述的局部组合物。带编号的实施例73包括根据带编号的实施例1至72所述的方法，其中所述局部组合物进一步包括为色素沉着过度的色素沉着病症或疾病。带编号的实施例74包括根据带编号的实施例1至73所述的方法，其中所述局部组合物进一步包括为炎症后色素沉着过度(pih)的色素沉着病症或疾病。带编号的实施例75包括根据带编号的实施例1至74所述的方法，其中所述局部组合物进一步包括为局灶性色素减退或弥漫性色素减退的色素沉着病症或疾病。带编号的实施例76包括根据带编号的实施例1至75所述的方法，其中所述局部组合物进一步包括为黑棘皮病、老年斑、白化病、色素失调症、雀斑、黄褐斑、白色糠疹或进行性色素性紫癜的色素沉着病症或疾病。
[0211]
实例
[0212]
以下实例出于展示本公开的各个实施例的目的而给出并且不意味着以任何方式限制本公开。本实施例连同本文多描述的方法目前代表为示例性的优选实施例，并且不旨在限制本公开的范围。本领域技术人员将想到其中的变化和涵盖在由权利要求的范围所限定的本公开的精神内的其它用途。
[0213]
实例1：基因表达的示例性组合物和调节
[0214]
示例性组合物见于表2。此外，可以分析表3和表4中所列出的化合物和浓度，以评估其对调节黑素生成重要的基因表达的影响。具体地，分析了这些化合物对内皮细胞、黑素细胞、成纤维细胞和角质细胞中基因表达的影响。进行基因测序分析、生物信息学和基因本体分析。
[0215]
表2：调配物1
[0216][0217][0218]
表3：调配物2
[0219]
化合物浓度细胞类型乳铁蛋白5ppm(500ug/ml)-内皮细胞、黑素细胞、角质细胞源自乳铁蛋白的肽1000ppm(100ug/ml)内皮细胞、黑素细胞、角质细胞三肽-1100ppm(2.9ug/ml)黑素细胞、角质细胞六肽-12100ppm(2.9ug/ml)黑素细胞、角质细胞三肽-1和六肽-12200ppm(每种2.9ug/ml)黑素细胞、角质细胞六肽-111000ppm(100ug/ml)黑素细胞、角质细胞氨甲环酸5％(500ug/ml)内皮细胞、黑素细胞、角质细胞八肽100ppm(100ug/ml) 磷脂酰丝氨酸1000ppm(500-1000ug/ml) cbd(100ug/ml)黑素细胞、角质细胞
[0220]
表4：调配物3
[0221]
化合物浓度(以重量％；wt.％为单位)乳铁蛋白0.020％-0.50％六肽-120.001％-0.025％六肽-110.004％-0.10％磷脂酰丝氨酸0.010％-0.25％
水飞蓟素0.20％-3.00％芝麻酚0.002％-0.05％氨甲环酸0.25％-6.25％八氢番茄红素/六氢番茄红素1.0％-25.0％南非醉茄提取物0.020％-0.50％银耳0.20％-5.0％没食子酸0.40％-10.0％嗜热栖热菌酵素0.30％-7.5％橄榄苦苷0.030％-0.750％海百合0.30％-7.5％烟酰胺0.40％-10.0％七钠六羧甲基二肽-12(hhd12)0.20％-5.0％melatrepein0.30％-7.5％光体0.10％-2.5％橙皮苷0.020％-0.50％
[0222]
实例2：组合三肽-1和六肽-12的协同作用——皮肤色素沉着
[0223]
小眼相关转录因子(mitf)是色素沉着和黑色素转移的主要调节因子，并且是色素沉着过度和黑色素瘤的潜在新靶点。进行体外mitf基因表达测试以确定单独的肽(三肽-1和六肽-12)及其组合之间在mitf下调方面的差异。
[0224]
具体地，通过培养成纤维细胞并且然后添加三肽-1、六肽-12或两者的组合来进行测试。48小时后，分析mitf基因表达。如在下表5中所示出的，mitf基因分析示出单独的肽对mitf下调的影响有限。事实上，虽然单独的六肽-12示出了可忽略不计的mitf下调(-1.16)，但单独的三肽-1示出了轻微的mitf上调( 1.72)。然而，当混合在一起时，mitf下调显著增加(-4.17)。此种增加的表达在72小时时间点继续表现并进一步增加。
[0225]
表5.
[0226][0227]
*80ppm六肽是指载体中六肽-12的浓度；120ppm三肽是指载体中三肽-1的浓度；80ppm六肽和120ppm三肽的肽共混物
[0228]
数据示出了三肽-1和六肽-12对mitf基因表达具有协同作用。
[0229]
实例3：基因表达研究
[0230]
分析了与色素沉着通路相关的四种细胞类型——黑素细胞、角质细胞、成纤维细胞和内皮(huvec)细胞的基因表达。
[0231]
方法
[0232]
为了模拟uv刺激色素沉着通路过程，用pge2预处理黑素细胞，这是通常来自暴露的角质细胞的uv光暴露的正常直接后果。在48小时贴壁培养后，将这些黑素细胞在黑素细胞培养基中用10um pge2诱导持续24小时。将四种原代人成人真皮细胞系培养并一式三份
接种在孔板中，并且然后用11种不同的化合物处理(加上dmso对照)进行处理。贴壁培养48小时后，将剩余的成纤维细胞、huvec和角质细胞用表6中所列出的测试化合物处理。
[0233]
表6：用于基因表达研究的化合物
[0234][0235][0236]
再将化合物暴露24小时后，进行rna裂解物制备，并将样品运送至medgenome进行rna提取、文库构建和测序，达到每个样品25m个双端测序(paired end)100bp读段。文库制备和测序在medgenome完成。
[0237]
结果
[0238]
在4种细胞系中，有可能在三种细胞系——黑素细胞、角质细胞和huvecs中鉴定出具有显著黑素生成活性的活性物。成纤维细胞系表现出与黑素生成活性无关且未进一步使用的各种功能(主要是伤口愈合)。发现黑素细胞活性通路被激活(图3a-3d)。六肽-12(hex12)和乳铁蛋白(lacto)在黑素生成活性中尤其占优势。图4和图5展示了与六肽-12(hex12)和乳铁蛋白(lacto)相关的黑素生成基因的下调。类似地，图6a-6f展示了角质细胞中scf、lif、pomc、内皮素基因、pge2和ngf响应于表6中所列出的各种化合物的基因表达数据。数据表明六肽-11(hex11)作为黑色素生成活性中的活性成分，而图7展示了单独的hex-11活性。图8a-8c展示了huvec的响应于表6中所列出的各种化合物的edn-1(edn1)(图8a)、scf(图8b)和tgfb1(图8c)的基因表达的数据。图9展示了磷脂酰丝氨酸对edn1和其它黑素生成基因的有效活性。
[0239]
结论
[0240]
细胞系黑素生成基因活性测试鉴定出乳铁蛋白、六肽-11、六肽-12和磷脂酰丝氨酸对黑素生成活性有显著影响。
[0241]
实例4：通过吸光度读数进行体外黑素细胞比较分析
[0242]
黑素细胞模型旨在测试试剂以证明通过吸收对来自经化合物处理的黑素细胞样品的黑素细胞和黑色素产生的直接影响。
[0243]
方法
[0244]
将黑素细胞在含有生长培养基的6孔板中进行培养。一旦汇合，将10种化合物中的每种化合物的2种浓度添加到一式三份孔中的细胞中，持续4天。共有十一个6孔板，每种化合物处理使用一个，并且载体对照使用一个。对为6孔板的每个孔制备的裂解物读取吸光度读数，从而对细胞计数进行归一化。鉴于第一项研究中黑素细胞系的强基因表达结果，所述
模型最初进行了准确性测试，并使用六肽-12进行了验证——获得了减少刺激的确认。使用添加到培养基中的msh进行了另外的验证，以确认黑色素产生的刺激增加。此研究中使用的以下化合物见于表7。
[0245]
表7：用于体外黑素细胞比较分析的测试化合物
[0246]
化合物浓度乳铁蛋白1000ug/ml六肽-124.9ug/ml六肽-11200ug/ml磷脂酰丝氨酸500ug/ml水飞蓟素0.7％20ug/ml芝麻酚100ug/ml氨甲环酸1000ug/ml八氢番茄红素、六氢番茄红素5％
[0247]
结果
[0248]
表8展示了具有2种浓度的选定化合物的3种吸收光谱的结果。
[0249]
表8：所选化合物在405nm、490nm和492nm处的吸收光谱
[0250][0251]
[0252]
此测试证实了这些所选试剂在黑素细胞中减少黑素生成(减少吸收的％表示黑色素形成减少)的功效。观察到乳铁蛋白、六肽-11、六肽-12和磷脂酰丝氨酸对黑素生成的调节。还观察到水飞蓟素、芝麻酚、氨甲环酸和八氢番茄红素/六氢番茄红素对黑素生成的调节作用(表8)。
[0253]
实例5：基因表达研究
[0254]
黑素细胞模型旨在测试试剂以证明通过吸收对来自经化合物处理的黑素细胞样品的黑素细胞和黑色素产生的直接影响。
[0255]
方法
[0256]
使用与实例3-4类似的方法测量pmel、酪氨酸酶基因、mc1/4r、ednrb、mitf、erk1/2、jnk和ankt1的表达。
[0257]
结果
[0258]
图10a-10d展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、氨甲环酸(tran acid)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理内皮细胞后pmel(图10a)、酪氨酸酶基因(图10b)、mc1/4r(图10c)和ednrb(图10d)的表达。图10a-10d展示了六肽-12和乳铁蛋白展示的强大的黑素生成活性。图11展示了六肽-12的数据。
[0259]
mitf通过磷酸化调节。具体地，已知mapk和akt通路在某些位点处磷酸化mitf。图12a-12c展示了用乳铁蛋白(lacto)、源自乳铁蛋白的肽(tcv)、六肽-12(hex12)、三肽-1和六肽-12(trihex)、六肽-11(hex11)、八肽(octa)、磷脂酰丝氨酸(phos)、大麻二醇(cbd)和所有(总计)处理内皮细胞后erk1/2(mapk3/mapk1)(图12a)、jnk(图12b)、akt1(图12c)的表达。
[0260]
结论
[0261]
总之，这些激酶的表达增加可能与mitf表达减少有关，并且因此可能有助于减少黑素生成。六肽-12和乳铁蛋白对此类黑素生成活性具有显著影响。
[0262]
实例6：黑素细胞测定
[0263]
用各种化合物处理htert永生化真皮黑素细胞。实验材料和结果在以下呈现。
[0264]
方法
[0265]
原代人黑素细胞来自atcc(目录号atcc crl-4059)。将黑素细胞最初接种在黑素细胞生长培养基(补充有黑素细胞生长试剂盒(pcs-200-041)的真皮细胞基础培养基(pcs-200-030))中的6孔组织培养板(每孔1.5x10^3个细胞)中。然后以atcc推荐的浓度将黑素细胞扩增到10cm的组织培养板中。细胞似乎完全粘附在板/盘上，同时以网状形态进行培养。将细胞在37℃5％co2恒温箱中培养。
[0266]
将下文列表中的化合物1到10的库存悬浮在完全黑素细胞生长培养基或dmso中(在括号中指示)。然后将每种化合物重新悬浮液在黑素细胞生长培养基中稀释至表9中的最终浓度。
[0267]
表9：用于体外黑素细胞比较分析的化合物
[0268]
化合物浓度#1浓度#2hex-12(黑素细胞培养基)2.9ug/ml4.9ug/ml乳铁蛋白(黑素细胞培养基)500ug/ml1000ug/ml
hex-11(黑素细胞培养基)100ug/ml200ug/ml磷脂酰丝氨酸(dmso)250ug/ml500ug/ml水飞蓟素0.7％(黑素细胞培养基)10ug/ml20ug/ml芝麻酚(dmso)50ug/ml100ug/ml氨甲环酸(黑素细胞培养基)500ug/ml1000ug/ml八氢番茄红素/六氢番茄红素(黑素细胞培养基)2.50％5.00％橄榄苦苷(黑素细胞培养基)500ug/ml1000ug/ml南非醉茄(黑素细胞培养基)10ug/ml20ug/ml
[0269]
一旦黑素细胞在6孔板中100％汇合，则去除黑素细胞生长培养基并用含有上述化合物的培养基处理黑素细胞；为上文所列的每种化合物/浓度复制孔。将复制的媒剂对照孔仅馈送到黑素细胞生长培养基或具有dmso的黑素细胞生长培养基(每10ml黑素细胞生长培养基10ul)。
[0270]
在接下来的5天里，将细胞馈送到适当的培养基。每天检查细胞的形态。在整个五天的给药期间，所有细胞均保持正常形态，除非如下所述：
[0271]
在含有乳铁蛋白的培养基(浓度为500和1000ug/ml)中培养的黑素细胞在初始给药后24小时形成圆形形态而不是正常的网状形态。有趣的是，在初始给药后48小时，黑素细胞恢复到正常形态，并且在5天给药期间保持正常形态。
[0272]
在含有南非醉茄的培养基(10和20ug/ml两种浓度)中培养的黑素细胞在初始给药后24小时开始死亡，并持续死亡，直到在初始给药后48小时所有黑素细胞均死亡。
[0273]
在含有橄榄苦苷的培养基(500和1000ug/ml两种浓度)中的黑素细胞在初始给药后24小时开始死亡，并持续死亡，直到在初始给药后72小时几乎所有的黑素细胞均死亡。
[0274]
为每个样品制备裂解物。简而言之，将来自每个样品的6.6x10^5个细胞旋转减慢并收集在一个小瓶中。将150ul的chaps裂解缓冲液添加到每个复制的样品中，涡旋并置于干冰/乙醇浴中持续2分钟，然后在室温下精致直至完全解冻。将此冻融再进行一次，总共进行两个冷冻/融化循环。将裂解物样品以14,800rpm旋转持续15分钟。去除上清液，从而在小瓶中留下黑色沉淀。将沉淀重新悬浮在100ul的1m naoh/10％dmso溶液中并在80℃下温育持续90分钟，在30分钟、60分钟和90分钟时用移液管混合。
[0275]
结果
[0276]
将每个浓度的100ul的每个复制的样品添加到平底96孔板的单独的孔中，并在envision 2103multilabel读出器上在405nm、490nm和492nm处读取吸光度读数。
[0277]
表10：405nm、490nm和492nm处的吸光度读数
[0278][0279][0280]
实例7：全调配物黑素细胞测定
[0281]
将来自实例6的原始储备溶液的化合物和浓度组合以创建用于黑素细胞培养的全调配物培养基。
[0282]
方法
[0283]
将来自原始储备溶液的下表11的化合物和浓度组合以创建将黑素细胞在6孔板中培养持续5天的50ml全调配物培养基。所使用的培养基在括号中示出。
[0284]
表11.实例7中使用的化合物和浓度
[0285]
化合物浓度hex-12(黑素细胞培养基)4.9ug/ml乳铁蛋白(黑素细胞培养基)1000ug/mlhex-11(黑素细胞培养基)200ug/ml磷脂酰丝氨酸(dmso)500ug/ml水飞蓟素0.7％(黑素细胞培养基)20ug/ml
芝麻酚(dmso)100ug/ml氨甲环酸(黑素细胞培养基)1000ug/ml八氢番茄红素/六氢番茄红素(黑素细胞培养基)5.00％
[0286]
一旦黑素细胞在6孔板中100％汇合，则去除黑素细胞生长培养基并用含有上述全调配物培养基的培养基在复制的孔中处理黑素细胞。将复制的媒剂对照孔馈送到具有dmso的黑素细胞生长培养基(每10ml黑素细胞生长培养基20ul)。在接下来的5天里，将细胞馈送到适当的培养基。每天检查细胞的形态。在整个五天的给药期间，所有细胞均保持正常形态。
[0287]
为每个含有在全调配物培养基中生长的黑素细胞的复制的孔样品和含有在媒剂对照培养基中生长的黑素细胞的复制的孔样品制备如实例6中的裂解物。
[0288]
结果
[0289]
将100ul的每个复制的样品添加到平底96孔板中，并在envision 2103multilabel读出器上在405nm、490nm和492nm处读取吸光度读数。读数在表12中示出。
[0290]
表12：405nm、490nm和492nm处的吸光度读数
[0291]
调配物吸光度405nm吸光度490nm吸光度492nm全调配物培养基0.8870.5760.411媒剂对照培养基0.5090.3340.217
[0292]
实例8：双重脂质体
[0293]
此实例展示了用于本文所描述的调配物的双重脂质体的制备。
[0294]
在第一步中，将0.90重量％(wt.％)的pro-lipo neo、0.02wt.％的六肽-11、0.005wt.％的六肽-12和0.10wt.％的乳铁蛋白组合以形成脂质体溶液。向脂质体溶液中添加0.50wt.％的光体脂质体，以生成双重脂质体。
[0295]
虽然已经在本文示出并描述了本公开的优选实施例，但是对本领域的普通技术人员而言应当显而易见的是此类实施例仅以举例方式提供。在不背离本公开的情况下，本领域的普通技术人员现在将会想到众多变体、变化以及取代。应当理解，本文所描述的本公开的实施例的多种替代方案可以用于实践本公开。本发明的意图在于以下权利要求限定了本公开的范围以及由此覆盖在这些权利要求和其等效物的范围内的方法和结构。