一种氯醇亚胺的高效液相检测及含量测定方法与流程

1.本发明属于有机化合物检测技术领域，具体涉及一种氯醇亚胺的高效液相检测及含量测定方法。


背景技术：

2.氯醇亚胺化学名称为(2s)-1-氯代-3-[[(4-氯苯基)亚甲基]氨基]-2-丙醇，分子式为c
10h11
cl2no，cas登记号为1345879-87-9，其化学结构式如下：
[0003][0004]
氯醇亚胺是一种化工原料，常用作医药中间体，在农药、生物医药、化工等领域有着广泛的应用前景。化工原料在生产及应用前均需对原料进行质量检测，以保障其应用效果和使用安全。目前，氯醇亚胺的定性定量检测方法尚未见文献报道。
[0005]
本发明将利用高效液相技术，建立一种操作简便、高效、分离度好、准确度高、专属性强的氯醇亚胺的定量定性检测方法。


技术实现要素：

[0006]
本发明的目的是克服现有技术氯醇亚胺的质量控制技术尚属空白，提供一种氯醇亚胺的高效液相检测及含量测定方法。
[0007]
本发明提供的一种氯醇亚胺的高效液相检测及含量测定方法，检测步骤如下：(1)标准工作溶液的配制：称取适量氯醇亚胺标准品，加入溶剂溶解并稀释后配制成系列标准工作溶液。(2)供试品溶液的配制：称取适量氯醇亚胺的待测样品，加入溶剂溶解并稀释后配制成供试品溶液。(3)测定和计算：将空白溶剂、氯醇亚胺的供试品溶液和氯醇亚胺标准品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，记录色谱图，按外标法计算供试品溶液中氯醇亚胺的含量。
[0008]
溶剂为乙腈、超纯水或正辛醇。
[0009]
高效液相色谱采用zorbaxsb-c18色谱柱和pad检测器，高效液相色谱的分析条件为：
[0010]
进样体积：25～35μl；
[0011]
流速：0.8～1.5ml/min；
[0012]
流动相：a为0.1％磷酸水溶液，b为乙腈；a∶b＝30:70(v/v)；
[0013]
柱温：26～35℃；
[0014]
检测波长：250～260nm。
[0015]
优选的，所述进样体积为28～32μl，流速为1.0～1.2ml/min，柱温为28～32℃。
[0016]
进一步优选的，所述进样体积为30μl，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。
[0017]
优选的，所述检测波长为254nm。
[0018]
优选的，样品溶液的浓度为0.10～10.0mg/l。
[0019]
优选的，标准工作溶液的浓度为0.05～10.00mg/l。
[0020]
一种氯醇亚胺的高效液相检测及含量测定方法，含量测定具体步骤如下：
[0021]
①
标准工作溶液的制备：精密称取0.10025g氯醇亚胺标准品于100ml容量瓶中，用乙腈溶解定容至刻度，摇匀得浓度为1002.5mg/l的标准母液，取1.00ml标准母液于100ml容量瓶中，用乙腈溶解定容至刻度，摇匀得浓度为10.00mg/l的标准储备液，吸取适量标准储备液用乙腈稀释配制成氯醇亚胺浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mg/l的系列标准工作溶液。
[0022]
②
供试品溶液的制备：称取0.01～1.00mg氯醇亚胺待测样品于100ml容量瓶中，用超纯水或正辛醇定容至刻度，混合均匀，得到氯醇亚胺供试品溶液。
[0023]
③
标准曲线的绘制：吸取25～35μl步骤
①
中的系列标准工作溶液进行hplc测定，以系列标准工作溶液的浓度为横坐标，氯醇亚胺的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。
[0024]
④
样品测定和含量计算：吸取25～35μl步骤
②
中的供试品溶液进行hplc测定，得到供试品中氯醇亚胺的峰面积，将峰面积代入上述步骤
③
的线性回归方程进行计算，即得供试品中氯醇亚胺的浓度。
[0025]
本方法氯醇亚胺的线性回归方程为y＝128852x 787.02，线性相关系数r2＝0.9998，线性范围为0.05～1.00mg/l。
[0026]
本发明有益效果如下：
[0027]
1、本发明采用lc2030csdplus高效液相色谱仪，使用zorbax sb-c
18
色谱柱和pad检测器对氯醇亚胺进行高效液相色谱分析，本发明可以准确检测出乙腈、超纯水和正辛醇中的氯醇亚胺，并通过外标法对样品中的氯醇亚胺进行含量测定，为氯醇亚胺生产应用过程的质量控制提供了技术参考，确保其质量可控。本发明氯醇亚胺在4.3min出峰，且空白样品在这个时间点无干扰峰。本发明检测方法效率高、目标峰分离度好、成本低，该方法既适用于规模化生产中氯醇亚胺的定性定量检测，也适用于实验室的检测分析。
[0028]
2、本发明的分析方法验证学试验表明：氯醇亚胺浓度在0.05～1.00mg/l范围内线性关系良好，线性方程为y＝128852x 787.02，线性相关系数r2＝0.9998。本方法对氯醇亚胺的检出限lod为0.05mg/l，loq为0.10mg/l。目标峰rsd
r.t.
为0.04％，rsd
area
为0.15％。氯醇亚胺在超纯水中的回收率为94.4％～98.3％，在正辛醇中的回收率为90.0％～98.9％。本发明的方法具有操作简便，快速，分离效果好，专属性强，精密度和准确度高等优点。
附图说明
[0029]
图1为氯醇亚胺线性关系图；
[0030]
图2为氯醇亚胺典型图谱；
[0031]
图3为乙腈空白图谱；
[0032]
图4为水空白图谱；
[0033]
图5为正辛醇空白图谱；
[0034]
图6为水回收率加标溶液典型图谱(低浓度)；
[0035]
图7为水回收率加标溶液典型图谱(高浓度)；
[0036]
图8为正辛醇回收率加标溶液典型图谱(低浓度)；
[0037]
图9为正辛醇回收率加标溶液典型图谱(高浓度)。
具体实施方式
[0038]
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，但不限于本发明的保护范围。
[0039]
本发明所使用的主要仪器设备、主要试剂和溶液如下：
[0040]
1、主要仪器设备
[0041]
(1)高效液相色谱仪：lc2030csdplus；
[0042]
(2)电子天平：梅特勒-托利多(中国)有限公司，型号：xse105du；
[0043]
(3)气浴恒温振荡器：江苏金坛宏华仪器厂，型号：zd-85a，lhy190-1；
[0044]
(4)湘仪台式高速离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号：h1850。
[0045]
2、主要试剂和溶液
[0046]
(1)磷酸：优级纯，天津科密欧化学试剂有限公司；
[0047]
(2)乙腈：hplc，上海安谱实验科技股份有限公司；
[0048]
(3)超纯水：电阻率，18.2mω
×
cm。
[0049]
实施例1:
[0050]
水中氯醇亚胺的高效液相检测方法，步骤如下：
[0051]
(1)标准工作溶液的制备：精密称取0.10025g氯醇亚胺标准品于100ml容量瓶中，用乙腈溶解定容至刻度，摇匀得浓度为1002.5mg/l的标准母液；取1.00ml标准母液于100ml容量瓶中，用乙腈溶解定容至刻度，摇匀得浓度为10.00mg/l的标准储备液；吸取适量标准储备液用乙腈稀释配制成氯醇亚胺浓度为0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mg/l的系列标准工作溶液。
[0052]
(2)供试品溶液的制备：吸取步骤(1)中浓度为10.0mg/l的标样储备液1.00ml于100ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度，混合均匀，即得氯醇亚胺理论浓度为0.10mg/l的供试品溶液。
[0053]
(3)标准曲线的绘制：吸取30μl步骤(1)中的系列标准工作溶液注入高效液相色谱仪进行分析，结果见表1，以系列标准工作溶液的浓度为横坐标，氯醇亚胺的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数，氯醇亚胺的线性回归方程为
[0054]
y＝128852x 787.02，线性相关系数r2＝0.9998，标准曲线见图1。
[0055]
表1：氯醇亚胺系列标准工作溶液的试验结果
[0056][0057]
(4)测定和样品含量计算：吸取30μl乙腈空白溶剂、超纯水空白溶剂和步骤(2)中的供试品溶液注入高效液相色谱仪进行分析，即得供试品溶液中氯醇亚胺的峰面积，将峰面积代入上述线性回归方程进行计算，即得超纯水中氯醇亚胺的浓度。
[0058]
(5)高效液相色谱分析条件为：
[0059]
流速：1.0ml/min；
[0060]
流动相：a为0.1％磷酸水溶液，b为乙腈；a∶b＝30:70(v/v)；
[0061]
柱温：30℃；
[0062]
检测波长：254nm。
[0063]
实施例2:
[0064]
水中氯醇亚胺的高效液相检测方法。
[0065]
除步骤(2)供试品浓度不同外，其他步骤、条件、试剂用量均与实施例1相同。
[0066]
供试品溶液的制备步骤为：吸取步骤(1)中浓度为1002.5mg/l的标准母液1.00ml于100ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度，混合均匀，即得氯醇亚胺理论浓度为10.0mg/l的供试品溶液。
[0067]
实施例3:
[0068]
水中氯醇亚胺的高效液相检测方法。
[0069]
除标准工作溶液、乙腈空白溶剂、超纯水空白溶剂和步骤(2)中的供试品溶液的吸取量改为25μl，高效液相色谱分析条件改为：流速为0.8ml/min，柱温为26℃，检测波长为250nm外，其他步骤、条件、试剂用量均与实施例1相同。
[0070]
实施例4:
[0071]
水中氯醇亚胺的高效液相检测方法。
[0072]
除标准工作溶液、乙腈空白溶剂、超纯水空白溶剂和步骤(2)中的供试品溶液的吸取量改为28μl，高效液相色谱分析条件改为：流速为0.9ml/min，柱温为28℃，检测波长为252nm外，其他步骤、条件、试剂用量均与实施例1相同。
[0073]
实施例5:
[0074]
水中氯醇亚胺的高效液相检测方法。
[0075]
除标准工作溶液、乙腈空白溶剂、超纯水空白溶剂和步骤(2)中的供试品溶液的吸取量改为32μl，高效液相色谱分析条件改为：流速为1.2ml/min，柱温为32℃，检测波长为256nm外，其他步骤、条件、试剂用量均与实施例1相同。
[0076]
实施例6:
[0077]
水中氯醇亚胺的高效液相检测方法。
[0078]
除标准工作溶液、乙腈空白溶剂、超纯水空白溶剂和步骤(2)中的供试品溶液的吸取量改为35μl，高效液相色谱分析条件改为：流速为1.5ml/min，柱温为35℃，检测波长为268nm外，其他步骤、条件、试剂用量均与实施例1相同。
[0079]
实施例7:
[0080]
水中氯醇亚胺的高效液相检测方法。
[0081]
除高效液相色谱分析条件检测波长改为260nm外，其他步骤、条件、试剂用量均与实施例1相同。
[0082]
实施例8-14:
[0083]
正辛醇中氯醇亚胺的高效液相检测方法，步骤如下：
[0084]
除步骤(2)中所用溶剂不同外，其他步骤、色谱条件、试剂用量分别与实施例1-6相同。
[0085]
实施例7-12中，步骤(2)供试品溶液的制备步骤为：吸取实施例1步骤(1)中浓度为10.0mg/l的标样储备液1.00ml于100ml容量瓶中，用正辛醇定容至刻度，混合均匀，即得供试品溶液。
[0086]
实验例：
[0087]
为了说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例：
[0088]
1、高效液相色谱分析条件筛选试验
[0089]
1.1不同进样体积筛选试验
[0090]
选择25～35μl的进样体积进行筛选试验，其他色谱条件如下：
[0091]
色谱柱：zorbaxsb-c18；
[0092]
流速：1.0ml/min；
[0093]
流动相：a为0.1％磷酸水溶液，b为乙腈；a∶b＝30:70(v/v)；
[0094]
柱温：30℃；
[0095]
检测波长：254nm。
[0096]
试验结果：在上述色谱条件下，分别吸取25μl、28μl、30μl、32μl、35μl实施例1中的供试品溶液进行测定，进样体积在25～35μl范围内均能达到检测氯醇亚胺的效果，峰分离度均能达到检测要求，重现性好。进样体积为30μl时峰形较好，因此，优选进样体积为30μl。
[0097]
1.2不同流速筛选试验
[0098]
选择0.8～1.5ml/min的流速进行筛选试验，其他色谱条件如下：
[0099]
色谱柱：zorbaxsb-c18；
[0100]
进样体积：30μl；
[0101]
流动相：a为0.1％磷酸水溶液，b为乙腈；a∶b＝30:70(v/v)；
[0102]
柱温：30℃；
[0103]
检测波长：254nm。
[0104]
试验结果：在上述色谱条件下，分别以流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min、1.5ml/min对实施例1中的供试品溶液进行测定，流速在0.8～1.5ml/min范围内均能达到检测氯醇亚胺的效果，峰分离度均能达到检测要求，重现性好。流速为1.0ml/min时目标峰出峰时间最短，因此，优选流速为1.0ml/min。
[0105]
1.3不同柱温筛选试验
[0106]
选择26～35℃的柱温进行筛选试验，其他色谱条件如下：
[0107]
色谱柱：zorbaxsb-c18；
[0108]
进样体积：30μl；
[0109]
流速：1.0ml/min；
[0110]
流动相：a为0.1％磷酸水溶液，b为乙腈；a∶b＝30:70(v/v)；
[0111]
检测波长：254nm。
[0112]
试验结果：在上述色谱条件下，分别设置柱温为26℃、28℃、30℃、32℃、35℃，对实施例1中的供试品溶液进行测定，柱温在26～35℃范围内均能达到检测氯醇亚胺的效果，峰分离度均能达到检测要求。柱温为30℃时，目标峰出峰时间最短，因此，优选柱温为30℃。
[0113]
1.4不同检测波长筛选试验
[0114]
选择250～260nm的检测波长进行筛选试验，其他色谱条件如下：
[0115]
色谱柱：zorbaxsb-c18；
[0116]
进样体积：30μl；
[0117]
流速：1.0ml/min；
[0118]
流动相：a为0.1％磷酸水溶液，b为乙腈；a∶b＝30:70(v/v)；
[0119]
柱温：30℃。
[0120]
试验结果：在上述色谱条件下，分别选择检测波长250nm、252nm、254nm、256nm、258nm、260nm对实施例1中的供试品溶液进行测定，检测波长在250～260nm范围内均能达到检测氯醇亚胺的效果，峰分离度均能达到检测要求。检测波长为254nm时，分离效果和峰形最佳，因此，优选检测波长为254nm。
[0121]
2、方法学验证试验
[0122]
2.1专属性
[0123]
用本发明建立的hplc分析方法测定溶剂乙腈、水和正辛醇空白样品，比较乙腈、水和正辛醇空白样品和被试物样品的谱图，结果见图2-图5，氯醇亚胺在4.3min出现峰，且空白样品在这个时间点无干扰峰，说明该方法对氯醇亚胺的专属性好。
[0124]
2.2检出限和定量限
[0125]
对浓度为0.05mg/l的标准工作溶液图谱进行分析，在该浓度下，目标峰的信噪比(s/n)＝42.03，因此，可以认为本方法的lod为0.05mg/l；在对浓度为0.10mg/l的标准工作溶液图谱进行分析后，在该浓度下，目标峰的信噪比(s/n)＝114.03，因此，可以将0.10mg/l作为本分析方法的loq。
[0126]
2.3精密度
[0127]
对浓度为0.40mg/l的同一标准工作溶液进行连续进样6次，测定该分析方法的精密度，其rsd
r.t.
为0.04％，rsd
area
为0.15％。结果表明该分析方法对于同一样品的分析精密度满足要求，精密度测试结果见表2。
[0128]
表2：精密度试验结果
[0129][0130]
2.4回收率试验
[0131]
2.4.1水中回收率试验
[0132]
吸取浓度为10.0mg/l的标准储备液1.00ml于100ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度，混合均匀，得到氯醇亚胺浓度为0.10mg/l的低浓度回收率试验液。重复以上操作，配制5份浓度为0.10mg/l的低浓度回收率试验液。
[0133]
吸取浓度为1002.5mg/l的标准母液1.00ml于100ml容量瓶中，用超纯水定容至刻度，混合均匀，得到氯醇亚胺浓度为10.0mg/l的高浓度回收率试验液。重复以上操作，配制5份浓度为10.0mg/l的高浓度回收率试验液，测定前用乙腈稀释20倍。
[0134]
同时制作超纯水空白样品。
[0135]
将上述低浓度回收率试验液、高浓度回收率试验液、超纯水空白样品分别取样后按本发明高效液相色谱分析条件进行测试，计算回收率，结果见表3。
[0136]
表3：水中回收率试验结果
[0137][0138]
2.4.2正辛醇中回收率试验
[0139]
吸取浓度为10.0mg/l的标准储备液1.00ml于100ml容量瓶中，用正辛醇定容至刻度，混合均匀，得到氯醇亚胺浓度为0.10mg/l的低浓度回收率试验液。重复以上操作，配制5份浓度为0.10mg/l的低浓度回收率试验液。
[0140]
吸取浓度为1002.5mg/l的标准母液1.00ml于100ml容量瓶中，用正辛醇定容至刻度，混合均匀，得到氯醇亚胺浓度为10.0mg/l的高浓度回收率试验液。重复以上操作，配制5份浓度为10.0mg/l的高浓度回收率试验液，测定前用乙腈稀释20倍。
[0141]
同时制作正辛醇空白样品。
[0142]
将上述低浓度回收率试验液、高浓度回收率试验液、正辛醇空白样品分别取样后按本发明高效液相色谱分析条件进行测试，计算回收率，结果见表4。
[0143]
表4：正辛醇中的回收率
[0144][0145][0146]
以上尽管通过优选实施例和参考附图相结合的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内。任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。