一种美容用冬灵酵素及其制备方法与流程

1.本发明涉及化妆品用发酵产物技术领域，特别涉及一种美容用冬灵酵素及其制备方法。


背景技术：

2.现有技术中，冬灵酵素在发酵后，通过离心等方式对菌体细胞及培养基残留成份进行分离，这种分离方式造成产品中活性成份损失。为更多保留活性成分，对菌体细胞进行细胞裂解，将细胞壁碎片化后形成碎片与溶胞液共存产物，这种方法细胞壁碎片较大，沉淀在溶胞液下层，在化妆品中应用细胞壁碎片沉淀物不仅会影响产品外观，而且不利于细胞壁碎片中活性成份的吸收利用。采用酶解工艺，将发酵后的细胞碎片进行酶解，增加了工艺的操作流程。


技术实现要素：

3.为保证活性成分溶出，消除细胞壁碎片沉淀对产品外观的不良影响，减少工艺流程，提高生产效率和产品成分稳定。本发明一种美容用冬灵酵素及其制备方法，采用固态发酵与超声提取相结合的形式，将麦冬、灵芝、燕麦粉碎后，通过酵母菌固态发酵，再用超声工艺将发酵后活性成份溶出，无需再进行菌体细胞裂解溶胞工艺，批量化生产效率高，产物成分稳定，整个工艺无高温，产物活性高。发酵产物氨基酸含量是普通水提工艺氨基酸含量的6.4倍，且发酵产物提升i型胶原蛋白基因表达能力较普通水提物有显著提升。
4.本发明技术方案如下：一种美容用冬灵酵素，包括以下按质量份计的组分：冬灵发酵滤液：80-95份；保湿组分：5-20份；其中，所述冬灵发酵滤液包括冬灵发酵粉3-5份，二裂酵母发酵产物滤液95-97份；其中，所述保湿组分包括丙二醇、丁二醇 、甘油、已二醇、戊二醇、甲基丙二醇中的一种或多种。
5.优选的，所述冬灵发酵粉按质量份数计包括麦冬粉40-70份，灵芝粉10-40份，燕麦粉20-30份。
6.优选的，所述二裂酵母发酵产物滤液为将双歧杆菌活化菌种种子液进行接种，进行第一次发酵，再加入双歧杆菌活化菌种种子液，进行第二次发酵后获得的产物。
7.一种美容用冬灵酵素的制备方法，包括：取冬灵发酵滤液80-95份，加入共计5-20份的保湿组分，混合均匀，取混合均匀的前述物质3-5份与95-97份无菌水混合；其中，所述冬灵发酵滤液包括冬灵发酵粉3-5份，二裂酵母发酵产物滤液95-97份；其中，所述保湿组分包括丙二醇、丁二醇 、甘油、已二醇、戊二醇、甲基丙二醇中的一种或多种。
8.优选的，所述冬灵发酵滤液采用固态发酵和超声提取工艺制备，包括：
先对麦冬、灵芝、燕麦进行固态发酵得到冬灵发酵粉，使用二裂酵母发酵产物滤液对冬灵发酵粉进行超声提取。
9.优选的，包括如下步骤：将麦冬、灵芝、燕麦粉碎，过筛，臭氧灭菌后备用，取粉碎后的麦冬40-70份，灵芝10-40份，燕麦20-30份，酵母菌0.4份，混合均匀，无菌水喷洒，翻拌，表面撒白糖，在28-35℃，静置7天，发酵结束后烘干得到冬灵发酵粉；取冬灵发酵粉3-5份，二裂酵母发酵产物滤液95-97份，超声提取，过滤、离心，上清液为冬灵发酵滤液。
10.优选的，所述臭氧灭菌时间为2小时；无菌水50-80份进行喷洒。
11.优选的，所述发酵结束后烘干，烘干条件为置于50℃鼓风干燥箱中。
12.优选的，所述超声提取时间为超声25-30min，超声强度为0.5w/cm2。
13.优选的，所述二裂酵母发酵产物滤液的制备方法为：对双歧杆菌活化菌种种子液进行接种，进行第一次发酵，发酵后添加复合维生素和葡萄糖进行营养流加；加入双歧杆菌活化菌种种子液进行第二次接种，再进行第二次发酵，发酵后经离心，过滤后的滤液即为二裂酵母发酵产物滤液。
14.本发明的有益效果如下：本发明提供的美容用冬灵酵素及其制备方法，对原料采用固态发酵与超声提取工艺，超声提取过程中未添加水，且固态发酵后有效物糖、肽小分子化更易溶出，无需再进行菌体细胞裂解溶胞工艺，批量化生产效率高，产物成分稳定，整个工艺无高温，产物活性高，含量提高，功效显著提升。
15.对于灵芝等研究其适宜的提取工艺，能够大大提升资源利用度，发挥更好的生物活性作用，实现更高的经济价值；整个制备过程无有害溶剂，绿色环保，产物安全性高，可应用于普通化妆品中，也可用于敏感肌护理产品中。冬灵发酵粉易于保存，缩短了成品生产工时，节能减排。
16.通过固态发酵与超声提取相结合的形式，发酵产物氨基酸含量是普通水提工艺的6.4倍，通过功效测试，发酵产物在提升i型胶原蛋白基因表达方面，较普通水提物有显著提升。
附图说明
17.为了更清楚地说明本方案的实施，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本方案的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
18.图1为本发明一个实施例中美容用冬灵酵素的制备方法流程图；图2为本发明一个实施例中美容用冬灵酵素的保湿效果图。
具体实施方式
19.下面对本发明的实施方式作进一步地详细描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是所有实施例的穷举。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。未说明来源的本实施例所有原料均为市售。
20.说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等(如果存在)是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的实施例能够以除了在这里图示或描述的内容以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备，不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
实施例
21.现有技术中对原料的处理多采用传统发酵方式液态发酵，料液比最低1：100，需要加热保温发酵，工时长，能耗高；本发明对原料处理方法为固态发酵-超声联用，粉碎-固态发酵，适宜季节常温发酵即可，超声提取快速高效，能耗大大降低。且固态发酵后有效物糖、肽小分子化更易溶出，无需再进行菌体细胞裂解溶胞工艺，批量化生产效率高，产物成分稳定，整个工艺无高温，产物活性高，含量提高，功效显著提升。
22.冬灵酵素按照如下步骤进行制备：如图1所示为本发明一个实施例中美容用冬灵酵素的制备方法流程图。
23.步骤一、固态发酵将麦冬、灵芝、燕麦粉碎，过80目筛，臭氧灭菌2小时，装袋备用；按照麦冬粉质量份数40-70份，灵芝粉质量份数10-40份，燕麦粉20-30份，酵母菌0.4份，混合均匀，无菌水50-80份，喷洒翻拌均匀，表面撒白糖覆盖，盖上带排气功能的盖子，在28-35℃，静置7天，进行固态发酵。然后50℃鼓风干燥箱中烘干，得到冬灵发酵粉，装真空袋冷藏备用。
24.本实施例优选按照麦冬粉质量份数50份，灵芝粉质量份数20份，燕麦粉25份，无菌水60份。
25.步骤二、超声提取取步骤一中获得的冬灵发酵粉3-5份，本实施例优选冬灵发酵粉5份，二裂酵母发酵产物滤液（自产）95-97份，本实施例优选40-45℃二裂酵母发酵产物滤液（自产）95份，超声25-30min，超声强度0.5w/cm2，过300目滤布；高速离心机转速8000r/min，时间15min，将滤液进行离心，取上清液，为冬灵发酵滤液，备用。
26.其中二裂酵母发酵产物滤液的制备方法为：对双歧杆菌活化菌种种子液进行接种，接下来进行第一次发酵，发酵后添加复合维生素和葡萄糖等进行营养流加，加入双歧杆菌活化菌种种子液进行第二次接种后，再进行第二次发酵，发酵后经离心处理后，过滤后的滤液即为二裂酵母发酵产物滤液。
27.步骤三、配置冬灵酵素取步骤二冬灵发酵滤液80-95份，本实施例优选85份，加入保湿组分，保湿组分包括丙二醇、丁二醇 、甘油、已二醇、戊二醇、甲基丙二醇中的一种或多种，5-20份，本实施例优选甘油10份和戊二醇5份，混合均匀即可。本实施例样品取5份前述混合均匀的物质与95份无菌水混合，即为本实施例中的美容用冬灵酵素样品。
28.对比例
对比例样品的制备方法为：将麦冬、灵芝、燕麦粉碎，过80目筛，臭氧灭菌2小时灭菌，装袋备用；按照麦冬粉质量份数40-70份，灵芝粉质量份数10-40份，燕麦粉20-30份混均，加入90-100份无菌水，90-100℃，回流提取1小时；冷却降温，过滤；滤液中加入甘油10%、戊二醇5%，搅拌均匀即可，取5份前述混合均匀的物质与95份无菌水混合，即得到对比例样品。
29.本对比例与实施例各物质比例相同，麦冬粉质量份数50份，灵芝粉质量份数20份，燕麦粉25份。
30.实施例效果水解氨基酸含量采用氨基酸自动分析仪（日本株式会社日立高新技术科学，la8080）测定水解氨基酸的实验方法，对本发明中实施例冬灵酵素与对比例样品（同比例麦冬、灵芝、燕麦水提物）的水解氨基酸含量进行了分析。结果如下表1所示：表1美容用冬灵酵素水解氨基酸含量
表1中结果显示，实施例中美容用冬灵酵素的水解氨基酸含量为0.360 g/100ml，对比例中样品的水解氨基酸含量为0.056g/100ml，本发明通过固态发酵-超声联用工艺，美容用冬灵酵素水解氨基酸含量是对比例样品中的6.4倍。
31.保湿功效人体实验，由特定实验人群组成受试群体，测试受试者使用化妆品（以及化妆品功效成分）前后皮肤水分以及水分散失的变化，从而确定化妆品（或功效成分）的保湿功效。受试者共计6人。具体性别构成和年龄构成随机确定。期间若有2人出现不良反应，则终止测试，结果未发现不良反应。
32.实验仪器：mpa9多功能皮肤测试仪（皮肤含水量corneometer cm825和水分经皮肤散失tewameter tm300测试探头，德国ck电子公司生产）。
33.受试样品编号空白、1-5号：空白：不使用任何物质；1号：100%无菌水；2号：5%甘油 95%无菌水；3号：0.1%透明质酸130万分子量 99.9%无菌水；4号：实施例；5号：对比例。
34.测试时间：0小时、0.25h、1h、1.5h、2h。
35.实验条件：温度（
º
c）：20
±
1；湿度（%）：50
±
10。
36.图2为本发明实施例中美容用冬灵酵素的保湿效果图，结果表明，4号即实施例美容用冬灵酵素组与空白不使用任何物质、1号100%无菌水、2号5%甘油 95%无菌水、3号0.1%透明质酸130万分子量 99.9%无菌水和5号对比保湿效果显著提升。虽然3号在测试开始时水分含量值较实施例高，这是由于透明质酸属于大分子粘多糖，分子量可高达130万，由于理化特性携带水份较多，所以在0.3小时前，受试部位会测得较高的水份含量值，而随着时间推移，这种大分子多糖失水速度较快，受试部位水份含量值迅速降低；实施例美容用冬灵酵素含有多种分子量糖类成份及丰富的氨基酸成份，可以提升受试部位锁水能力，因此，虽然在15min之前受试部位水份含量较透明质酸低，但之后受试部位水份含量下降较慢，达到了长效保湿的效果，长效保湿效果较3号0.1%透明质酸130万分子量 99.9%无菌水组提升了25%。
37.抗皱功效皮肤的生长、修复、营养以及弹性、张力都与胶原蛋白有关，它的流失会使 皮肤光滑度下降，产生皱纹。在四足动物中，i型胶原蛋白是一个三聚体，主要由两个α1链和一个α2链组成，分别由col1a1a和col1a2基因编码，在结 缔组织和骨中执行胶原蛋白相关生物功能。在斑马鱼中存在三种 i 型胶原基因，分别编码α1（i）、α2（i）和α3（i）链的 col1a1a、col1a1b和col1a2。
38.因此，通过检测col1a1a或（和）col1a1b或（和）col1a2基因相对表达量可表明样品是否具有抗皱功效。
39.将实施例美容用冬灵酵素与对比例样品分别进行抗皱功效评价，如下表2美容用冬灵酵素抗皱功效所示：
表2美容用冬灵酵素抗皱功效表2结果所示，实施例美容用冬灵酵素抗皱功效col1a1b 基因相对表达量1.81，对比例样品抗皱功效col1a1b 基因相对表达量0.03，美容用冬灵酵素抗皱功效显著。
40.本发明对原料采用固态发酵与超声提取工艺，超声提取过程中未添加水，且固态发酵后有效物糖、肽小分子化更易溶出，无需再进行菌体细胞裂解溶胞工艺，批量化生产效率高，产物成分稳定，整个工艺无高温，产物活性高，含量提高，功效显著提升。
41.对于灵芝等研究其适宜的提取工艺，能够大大提升资源利用度，发挥更好的生物活性作用，实现更高的经济价值；整个制备过程无有害溶剂，绿色环保，产物安全性高，可应用于普通化妆品中，也可用于敏感肌护理产品中。冬灵发酵粉易于保存，缩短了成品生产工时，节能减排。
42.通过固态发酵与超声提取相结合的形式，美容用冬灵酵素氨基酸含量是普通水提工艺的6.4倍，通过功效测试，美容用冬灵酵素在提升i型胶原蛋白基因表达方面，较普通水提物有显著提升。
43.显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。