一种三七产地趁鲜加工方法

1.本发明属于中药产地加工技术领域，涉及了一种三七产地趁鲜加工方法。
技术背景
2.三七为五加科植物三七panax notoginseng(burk.)f.h.chen的干燥根和根茎，主产于我国云南、广西等地，具有散瘀止血、消肿定痛的功效，常用于治疗咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛等症。三七具有“生消熟补”之说，《本草纲目拾遗》认为“人参补气第一，三七补血第一”，指的是熟三七具有良好的补血效果。现代研究表明，生三七功效偏于散瘀止血、消肿定痛；熟三七功效偏于补益，且其益气补血活血作用优于生三七。
3.传统熟三七粉的加工方法主要是窑洞烘烤和自然晾晒后，再采用蒸制、油煎等方式进行加工粉碎；自然晾晒需15-20天，木炭烘烤需5-7天，传统加工方法不仅时间长，且需要大量的能源，期间如遇到阴雨天气，三七易发霉变质。在传统方法干燥过程中，皂苷等功效成分易降解，影响了临床疗效；提高熟三七饮片的生产效率是目前三七生产中急需解决的一大生产难题。
4.产地趁鲜加工是指在产地用鲜活中药材进行切制等加工方法，制成品为产地片或中药饮片。产地趁鲜加工可以避免有效成分的酶解、水解，避免中药在储存运输过程中出现霉烂、变质，同时还可以节省物力、人力，有利于提升中药饮片质量。国家《中药材保护和发展规划》指出：“推进中药材产地初加工标准化、规模化、集约化，鼓励中药生产企业向中药材产地延伸产业链，开展趁鲜切制和精深加工。”产地趁鲜加工是提高产地工业化水平，增加产区地方财政收入的有效途径，也是未来三七趁鲜加工的发展方向。


技术实现要素：

5.本发明提供一种提高补血活性的三七产地趁鲜加工方法，直接在产地将新鲜的三七主根切厚片后进行蒸制，再干燥的一种熟三七饮片新的加工技术，该方法减少了熟三七饮片干燥工艺步骤，避免三七在储存运输过程中出现霉烂、变质，同时还可以节省物力、人力，有利于提升三七饮片质量，提高三七饮片加工的生产效率及经济效益。
6.本发明方法是：
7.在产地将新鲜的三七主根，经过挑选、清洗后去除须根、剪口，趁鲜切制成厚片，放入高压灭菌锅中蒸制，将蒸制后的三七放入电热鼓风干燥箱中干燥，完成熟三七饮片的制备。
8.所述切片厚度为2-10mm。
9.所述蒸制温度为80-130℃，蒸制时间为0.5-10h。
10.所述干燥温度为40-80℃，干燥时间为12-72h。
11.本发明与传统熟三七加工工艺相比存在以下优点：
12.1、本发明进行鲜加工，鲜三七加工时不受到高温和阴雨天气的影响，鲜三七直接
在产地进行加工，切片蒸制干燥一体化生产，避免中药在储存运输过程中出现霉烂、变质，同时还可以节省物力、人力，有利于提升三七饮片质量。
13.2、本发明进行鲜加工，减少干燥时间，省时节能，从传统加工“鲜药材-干药材-饮片”的模式向“鲜药材-饮片”转变，实现产地加工与炮制的一体化融合，有利于大幅提高生产效能，实现鲜药材到饮片的一步成型。
14.3、本发明加工的熟三七饮片药理效果优于传统工艺生产的熟三七饮片，补血活性更高。
15.4、本发明操作简单，有利于产品的质量控制。
附图说明
16.图1为实施例1中不同切片厚度三七片皂苷含量对比图；
17.图2为实施例1中不同切片厚度三七片累积溶出量对比图；
18.图3为实施例1中采用趁鲜加工工艺所制备的熟三七饮片；
19.图4为实施例1中采用传统方法所制备的熟三七饮片；
20.图5为实施例4中三七趁鲜加工工艺制备的熟三七饮片sem图；
21.图6为对比例1中传统方法制备的熟三七饮片sem图；
22.图7为实施例5中三七趁鲜加工工艺制备的熟三七饮片和不同皂苷标准品高效液相色谱图对比图；
23.图8为实施例5中三七趁鲜加工工艺制备的熟三七饮片和传统制备的熟三七饮片高效液相色谱图对比图；
24.图9为实施例6中测定的不同分组的红细胞含量结果；
25.图10为实施例6中测定的不同分组的血小板含量结果；
26.图11为实施例6中测定的不同分组的白细胞含量结果；
27.图12为实施例6中测定的不同分组的血红蛋白含量结果；
28.图13为实施例6中不同分组he染色结果。
具体实施方式
29.下面结合实施例对该发明进行进一步说明，但本发明的保护范围绝非仅局限于实施例。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件进行，所用试剂或仪器未注明生产商者，均为可以通过市购获得的常规产品。三七原料为同一批次不同加工方式。
30.实施例1
31.本实施例将20kg新鲜三七捡选、清洗后，将主根、须根和剪口分离，利用切片机将主根切成0.8-1、1.1-1.5、1.6-1.9mm的薄片(编号为薄片-1、薄片-2、薄片-3)和2-3、5-6、9-10mm的厚片(厚片-1、厚片-2、厚片-3)，用高效液相色谱仪检测其皂苷含量，同时选择薄片-1和厚片-3用溶出仪测定其在水中和人工胃液介质中的溶出量，分别在0.5、1、2、4、6h取样并计算，结果如图1，2所示，厚片的皂苷含量略高于同一批次的薄片，厚片的累积溶出量高于同批次的薄片。
32.将实施例1的厚片混合用于后续实验。
33.实施例2
34.取实施例1的厚片0.5kg，放入高压灭菌锅中蒸制，蒸制温度为130℃，蒸制时间为0.5h，将蒸制后的三七放入电热鼓风干燥箱中干燥，干燥温度为40℃，干燥时间为72h，完成熟三七饮片的制备。
35.实施例3
36.取实施例1的厚片0.5kg，放入高压灭菌锅中蒸制，蒸制温度为80℃，蒸制时间为10h，将蒸制后的三七放入电热鼓风干燥箱中干燥，干燥温度为80℃，干燥时间为12h，完成熟三七饮片的制备。
37.实施例4
38.将实施例1中剩余的厚片均匀分成两份，一份三七放入高压灭菌锅中蒸制，蒸制温度为130℃，蒸制时间为4h；将蒸制后的三七放入电热鼓风干燥箱中干燥，干燥温度为60℃，干燥时间为24h，完成熟三七饮片的制备，如图3所示。
39.对比例1
40.另一份三七按云南省药品监督管理局熟三七标准中规定的传统方法制备：通过自然晾晒得干三七，然后常压蒸制3h，干燥、切片制得传统的熟三七饮片，如图4所示。
41.将实施例4方法制得的熟三七饮片和对比例1以传统方法制备的熟三七饮片分别打粉，过六号筛，过筛后的粉末进行扫描电镜测定，设置参数为：电子枪：肖特基场发射电子枪；分辨率：0.9nm@15kv(二次电子图像)；2.0nm@30kv(背散射电子图像)；电子光路：镜筒内电子束无交叉光路；加速电压：200v-30kv；探针束流：1pa-100na，稳定度优于0.2％/h；放大倍数：8x-100000x；物镜：电磁/静电复合透镜；探测器：in-beam se及se二次电子探测器、背散射探测器、eds能谱仪；能谱型号：xplore 30；能谱分析工作距离：15mm；样品台行程：x＝125mm；y＝125mm；z＝50mm；t＝-60
°
to 60
°
；r＝360
°
(连续可调)；图像采集：最高16kx16，所得结果如图5、6所示。
42.实施例5
43.对实施例4和对比例1制得的两种熟三七饮片中的三七皂苷r1、人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1、人参皂苷rd、人参皂苷rk3、人参皂苷rh4、20(s)-人参皂苷rg3、20(r)-人参皂苷rg3、20(s)-人参皂苷rh1、20(r)-人参皂苷rh1、人参皂苷rg5进行检测，步骤如下，
44.1、将实施例4方法制得的熟三七饮片和对比例1以传统方法制备的熟三七饮片分别打粉，过六号筛，各取0.3g，加入10ml的质量浓度70％的甲醇溶液超声提取30min，离心后滤渣重复提取一次，合并两次提取液并定容到25ml，过0.45μm滤膜得到供试液；
45.2、精密称定r1、rg1、re、rb1、rd、rk3、rh4、20(s)-rg3、20(r)-rg3、20(s)-rh1、20(r)-rh1和rg5标准品适量，用70％甲醇溶解稀释成不同浓度的溶液，以检测浓度(x)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线，用于后续计算样品中皂苷含量，将不同皂苷的峰面积y值带入，即可求得相应的浓度x值，如表1所示，趁鲜加工工艺所制的熟三七饮片与混合标准品对照图如图7所示。
46.表1不同皂苷高效液相色谱标准曲线
[0047][0048][0049]
3、采用岛津lc-2030plus高效液相色谱仪进行皂苷含量测定，色谱柱：pntulips rszg-c18plus，(5μm，4.6
×
250mm)，流动相：乙腈(a):水(b)，线性洗脱梯度(v:v)；洗脱梯度条件：0-25min：20％b；25-30min：20
→
25％b；30-41min：25
→
41％b；41-55min：41
→
55％b；55-80min：45
→
74％b；80-82min：74
→
100％；检测波长203nm，柱温：30℃，流速：1.0ml/min，进样量：10μl；分别在该色谱条件下测定实施例4中所得的趁鲜加工工艺制备的熟三七饮片和传统制备的熟三七饮片，得到的高效液相色谱图如图8所示。
[0050]
结果计算：
[0051]
总皂苷含量％＝含(r1) 含(rg1) 含(rb1) 含(rk3) 含(rh4) 含(20(s)-rg3) 含(20(r)-rg3) 含(20(s)-rh1) 含(20(r)-rh1) 含(rg5)
[0052]
结果见表2，从结果可以看出，本发明方法制得的熟三七饮片总皂苷含量高于传统熟三七饮片。
[0053]
表2不同加工工艺的皂苷含量对比
[0054]
加工工艺总皂苷含量(％)
实施例4加工工艺12.961
±
0.544对比例1传统加工工艺9.688
±
0.006
[0055]
实施例6
[0056]
取不同批次鲜三七共9批，按照实施例1和实施例4中的工艺进行加工，将所得的新型饮片进行检测，包括水分、总灰分、酸不溶性灰分测定以及重金属及有害元素测定，均参照2020版《中国药典》进行，其中水分按照2020版《中国药典》水分(通则0832第二法)、总灰分参照2020版《中国药典》总灰分(通则2302)、酸不溶性灰分参照2020版《中国药典》酸不溶性灰分(通则2302)测定、重金属及有害元素测定参照2020版《中国药典》原子吸收分光光度法(通则2321)测定，醇溶性浸出物参照2020年版《中国药典》醇溶性浸出物测定法(通则2201项下的热浸法)测定，如表3所示。
[0057]
表3
[0058][0059]
结合表中数据，均符合2020版《中国药典》要求。
[0060]
实施例7
[0061]
比较实施例4加工的熟三七饮片和对比例1传统工艺制备的熟三七饮片在药理学上的差异，贫血模型建立及补血验证实验方法如下：
[0062]
1、动物分组及给药
[0063]
spf级昆明小鼠90只，雌雄各半，随机分为9组，每组10只，分为设立为空白组、模型组，实施例4中的趁鲜加工饮片(下述称为本法加工工艺)高剂量组(1.2g/kg)、中剂量组(0.6g/kg)、低剂量组(0.3g/kg)，对比例1中的传统熟三七饮片高剂量组(1.2g/kg)、中剂量组(0.6g/kg)、低剂量组(0.3g/kg)，阳性对照组，适应性饲养七天后，各给药组分别灌胃相对应的药物，空白组和模型组灌胃生理盐水(0.2ml/20g)，阳性对照组灌胃复方阿胶浆(30mg/kg)，连续给药14d，给药的同时进行模型建立，在给药的前三天，除空白组外，其余各组小鼠每天按体重以0.1ml/10g腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液，剂量为0.08g/kg，每天一次，连续三天；在给药的第三天，除空白组外，其余各组小鼠每天按体重以0.1ml/10g皮内注射乙酰苯肼生理盐水溶液，剂量为0.08g/kg，建立贫血模型，空白组动物注射等体积的生理盐水。
[0064]
2、血液样本采集
[0065]
末次给药24小时后，采用眼球取血的方法，将血液收集到无菌的含有edta的离心管中，使用全自动血细胞分析仪对血液进行外周血象分析，检测血液中红细胞rbc、血小板plt、白细胞wbc、血红蛋白hb数量及占比，实验结果如图9-12所示。
[0066]
血常规分析显示，与空白组相比，模型组的rbc、hb、wbc、plt均显著降低，说明模型建立成功，给药15天后，不同剂量实施例4加工的饮片和对比例1传统工艺制备的熟三七饮片均能改善小鼠外周血象，但本法工艺加工的饮片补血效果优于传统工艺加工的饮片，并且具有统计学意义(***p《0.001)。
[0067]
3、he染色
[0068]
将小鼠脾脏组织于4％多聚甲醛中固定24h，石蜡包埋，切片，苏木素-伊红(he)染色，于显微镜下观察组织病理变化，结果如图13所示，a：空白组，b：模型组，c：阳性组，d：本法加工工艺-高剂量组，e：本法加工工艺-中剂量组，f：本法加工工艺-低剂量组，g：传统熟三七饮片-高剂量组，h：传统熟三七饮片-中剂量组，f：传统熟三七饮片-低剂量组，从图中可知，空白组小鼠的脾组织结构完整，红髓和白髓界限清晰，细胞排列紧密有序，模型组小鼠的脾脏组织红髓和白髓界限不清晰，细胞排列杂乱，各给药组小鼠的脾脏结构形态得到大程度的改善，白髓和红髓界限清晰明确，说明了熟三七对环磷酰胺致免疫抑制的小鼠具有很好的免疫保护作用，且本法工艺加工的饮片效果优于传统工艺加工的饮片。