一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料及其应用

1.本发明属于水产饲料技术领域，具体涉及一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料及其应用。


背景技术：

2.鲍以其丰富的营养、宜人的味道和可观的药用价值而闻名，是我国最具商业价值的腹足类之一。近十年来，我国鲍养殖产量逐年上升，据最新的中国渔业统计显示，我国2020年的鲍年产量高达20.35万吨，相比2010年的5.65万吨将近翻两番。然而，营养素单一，品质来源不稳定的鲍天然饵料(龙须菜和海带)和只能满足鲍基本营养需求而缺乏功能性的普通商业饲料已很难满足鲍养殖业快速健康的可持续发展。另外，鲍养殖业的迅猛发展势必会导致鲍鱼养殖业的集约化，集约化养殖过程中也出现了养殖密度过高，养殖管理经验不足和抗生素滥用等一系列问题，这些问题势必会放大鲍养殖业的应激源，增加疾病爆发的风险。弧菌通常被认为是海洋无脊椎动物的主要致病菌株，对鲍养殖业有巨大威胁。为了减少经济损失和增加产量，鲍养殖业通常使用抗生素和化学药物来预防和对抗细菌感染，但使用抗生素和化学药物会导致细菌耐药性、药物残留和肠道菌群失衡等多方面负面影响。
3.随着抗生素在全球范围内的禁用，寻求高效环境友好型的抗生素和化学药物替代品迫在眉睫。近年来，天然多酚类化合物因其价格便宜，来源广泛和绿色环保，并且具有改善免疫系统和抗氧化应激等特性，引起了人们广泛的兴趣。作为抗生素的可持续替代物之一，包括姜黄素在内的天然多酚类化合物已成为中国、日本、韩国和泰国等国家积极开展科学研究的主题。
4.姜黄素(c
21h2o
o6)是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取的黄色酸性多酚类化合物，作为姜黄中的主要生物活性分子，具有促生长、保肝降脂、抗炎、抗氧化、抗菌及免疫调节等生理功能。长期以来，姜黄素作为安全的调味剂、防腐剂、着色剂和生长免疫增强剂，已被应用于食品、医药、畜牧和水产养殖等领域。许多研究表明日粮中补充适量的姜黄素能提高凡纳滨对虾、南美白对虾、虹鳟、草鱼等水生生物的生长性能和免疫力，并能促进金头鲷鱼、尼罗罗非鱼的肠道有益菌群的增殖和降低致病菌群的丰度。然而，日粮中过量补充姜黄素会对水生生物生长和生存产生负面的影响，日粮中最佳的姜黄素添加量因养殖物种的生长阶段和种类而异。因此，确定姜黄素的最佳添加量，才能最大限度的发挥其替代抗生素的潜能和实现水产养殖业的最大经济效益。
5.近年来，鲍集约化养殖模式下带来的生长速度缓慢、疾病爆发和死亡率高等问题，越来越受到营养学家以及产业界的高度关注。中国发明专利cn113100354公开一种可以抑制弧菌鲍鱼生物发酵饲料。该发明的抑菌效果主要是通过复合酶、沙福芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌发酵原料来实现。cn113841812a公开具有抗菌功能的鲍鱼饲料配方及生产工艺及设备，该发明的抗菌剂由中药中的大黄、五倍子和马齿苋组成。这两项发明专利主要是提供了鲍抑菌饲料的生产工艺及设备，并没有在试验动物上进行实际应用，抑菌效果如何尚不清
楚，为鲍抑菌饲料的开发应用提供一种可能。专利申请cn107223803公开一种鲍鱼中草药抗病营养配合饲料及其制备方法，所述得中草药抗病添加剂由绞股蓝、黄芪、甘草、板蓝根、苦地丁、蒲公英、菟丝子、车前草、青蒿和鱼腥草按一定的配比混合，经超声波浸提而制得，该发明制备的鲍鱼中草药抗病营养配合饲料能显著促进鲍鱼生长、提高鲍鱼的成活率。同样，专利申请cn103844042也公开一种可增强鲍鱼免疫力的饲料添加剂，所述饲料添加剂由复合菌、有机硒、光合细菌、磷酸氢钙、复合维生素和β-葡聚糖组成，该发明的饲料添加剂具有增强鲍鱼免疫力、降低发病率、提高成活率的功效。然而，上述发明专利抗病添加剂原料来源复杂、原料成本较高、制备工艺繁琐、发酵不当或中草药配伍不当等均有产生有毒有害物质的风险，难以广泛应用。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料及其应用。所述配合饲料不仅能增强鲍机体细胞免疫力和抗病力，还能通过改善鲍肠道菌群结构来提高机体的食物消化、营养代谢和维持免疫稳态的能力，从而降低鲍养殖风险，缩短养殖周期，促进鲍养殖行业的健康可持续发展。
7.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，包括以下重量份数的组分：鱼粉100～200份、谷朊粉80～150份、豆粕100～200份、高筋面粉100～200份、海带粉150～300份、粘合剂60～150份、大豆磷脂10～40份、磷酸二氢钙10～20份、氯化胆碱5～10份、复合维生素10～30份、复合矿物质10～30份、褐藻酸钠20～35份、姜黄素0.1～1份。
8.以上所述配合饲料中，姜黄素具有一定刺激性味道(辛涩味)，对于鲍这种主要靠嗅觉来寻找食物，且摄食时间长的素食性贝类来说具有明显的促摄食和促消化的作用。姜黄素具有的抗炎、抗氧化和抗菌特性能够很好的修复鲍肠道损伤，提高肠道消化酶活性，维持肠道菌群稳态，最终提高鲍生长性能和免疫力。
9.作为一种优选的技术方案，所述配合饲料包括以下重量份数的组分：鱼粉150份、谷朊粉120份、豆粕135份、高筋面粉130份、海带粉250份、粘合剂100份、大豆磷脂20份、磷酸二氢钙10份、氯化胆碱5份、复合维生素20份、复合矿物质30份、褐藻酸钠30份，姜黄素0.1～1份。
10.以上所述配合饲料中，各组分之间的重量份数配比原则是根据鲍生长发育的营养需求，包括对蛋白质(氨基酸)、脂肪(脂肪酸)、糖类、维生素、矿物质等需求而制定的。其中，较高用量的粘合剂，是为了提高配合饲料水中稳定性，防止片状饲料弥散而影响鲍摄食和污染水质。
11.作为一种优选的技术方案，所述粘合剂包含糊精50份、α-淀粉50份，分析纯度均不低于98％。
12.作为一种优选的技术方案，所述姜黄素添加量为0.05～1份。
13.作为一种优选的技术方案，所述姜黄素添加量为0.05～0.8份。
14.作为一种优选的技术方案，所述姜黄素的分析纯度不低于95％。
15.作为一种优选的技术方案，每千克配合饲料中所述复合维生素包括：维生素a 2.01g、维生素b1 6.7g、维生素b2 10g、维生素b6 8g、维生素b12 0.01g、维生素c 100g、维生素d30.41g、维生素e 0.02g、维生素k3 3.4g、叶酸3.3g、d-泛酸26.5g、d-生物素0.34g、烟
酰胺53.5g、肌醇80g和脱脂米糠705.81g。
16.作为一种优选的技术方案，每千克配合饲料中所述复合矿物质包括：硫酸亚铁12g、硫酸镁8g、硫酸锌5g、硫酸铜1g、硫酸锰1g、碘酸钾0.065g、亚硒酸钠0.025g、氯化钴0.06g、米糠200g和沸石粉772.85g。
17.作为一种优选的技术方案，所述一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料的制备方法如下：将各组分原料的重量份数由小到大的顺序称取，并逐级混合，后超微粉碎机粉碎过100目网筛，将过筛后的各组分原料加入原料总质量20％～30％的蒸馏水于搅拌机中进一步混合，混匀后得到柔软的面沙状混合料转移至辊压机中压薄并切割成片状饲料，再经蒸煮熟化、烘干、筛分即得配合饲料。
18.作为一种优选的技术方案，所述片状饲料的长度为2cm,宽度为2cm,厚度为0.5cm。
19.作为一种优选的技术方案，所述熟化温度为105℃，熟化时间为10min。
20.作为一种优选的技术方案，所述烘干温度为60℃，烘干时间为6h，饲料水分低于10％。
21.本发明还提供一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料在鲍养殖中的应用。
22.与上述发明专利抗病添加剂相比，本发明的优势在于：1)本发明的免疫刺激剂来源于药食两用的姜黄，来源广泛，价格便宜，且姜黄素的纯度高达95％；2)姜黄素提取过程简单，且在提取过程几乎不会产生有毒有害物质；3)本发明的免疫刺激剂高效、绿色、小剂量的添加就能达到预期的效果。
23.与现有技术相比，本发明具有以下优点：
24.1、营养均衡，充分考虑了动、植物蛋白源和各类脂肪酸的合理配比，鲍摄食后可健康的快速生长。
25.2、本发明的配合饲料中含有的姜黄素具有促生长、保肝降脂、抗炎、抗氧化、抗菌及免疫调节等多种生理功能，且高效绿色，无毒无害，可提高鲍的生长性能，抗氧化能力和弧菌胁迫下的细胞免疫力和抵抗力
26.3、本发明的配合饲料中含有的姜黄素还具有调控肠道菌群结构的功能，可促进鲍肠道有益菌群的增殖和分化，从而提高机体的食物消化、营养代谢和维持免疫稳态的能力。
附图说明
27.图1为本发明对比例1和5组实施例饲料对皱纹盘鲍哈维氏弧菌感染下的细胞免疫反应的影响示意图。a)总血细胞计数(thc)，b)血细胞死亡率，和c)吞噬活性和d)活性氧(ros)。不同组中的不同字母表示显著差异(p《0.05)。
28.图2为本发明对比例1(a组)和实施例2(b组)饲料对皱纹盘鲍肠道菌群的β多样性的影响示意图。a:主坐标分析(pcoa),基于未加权的统一坐标距离的pc1与pc2轴；b:pcoa使用基于加权统一距离的pc1与pc2轴。
29.图3为本发明对比例1(a组)和实施例2(b组)饲料对皱纹盘鲍肠道菌群在门(a)和属(b)水平上的影响示意图。
具体实施方式
30.为了使本发明的优点更加清楚明白，下面结合具体实施例，对本发明的目的和技
术方案进行了进一步阐述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的部分实施例，而非全部实施例。本发明的示意性实施方式仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。如无特殊说明，本发明中所用到的试剂均可通过商业途径购买获得。
31.实施例1
32.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉150g、谷朊粉120g、豆粕135g、高筋面粉129.95g、海带粉250g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g,姜黄素50mg。
33.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
34.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料的制备方法为：将各组分原料的重量份数由小到大的顺序称取，逐级混合，超微粉碎机粉碎过100目网筛，将过筛后的各组分原料加入原料总质量20％～30％的蒸馏水于搅拌机中混合，混匀后得到柔软的面沙状混合料转移至辊压机中压薄并切割成片状，再经蒸煮熟化、烘干、筛分即得配合饲料。
35.所述片状饲料的长度为2cm,宽度为2cm,厚度为0.5cm。
36.所述熟化温度为105℃，熟化时间为10min。
37.所述烘干温度为60℃，烘干时间为6h，饲料水分低于10％。
38.本实施例所得饲料的粗蛋白含量为32.50％，粗脂肪含量为3.89％。
39.实施例2
40.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉150g、谷朊粉120g、豆粕135g、高筋面粉129.9g、海带粉250g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g、姜黄素100mg。
41.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
42.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
43.本实施例所得饲料的粗蛋白含量为32.14％，粗脂肪含量为3.72％。
44.实施例3
45.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉150g、谷朊粉120g、豆粕135g、高筋面粉129.8g、海带粉250g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g、姜黄素200mg。
46.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
47.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
48.本实施例所得饲料的粗蛋白含量为33.10％，粗脂肪含量为3.81％。
49.实施例4
50.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉150g、谷朊粉120g、豆粕135g、高筋面粉129.6g、海带粉250g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g、姜黄素
400mg。
51.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
52.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
53.本实施例所得饲料的粗蛋白含量为32.34％，粗脂肪含量为3.69％。
54.实施例5
55.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉150g、谷朊粉120g、豆粕135g、高筋面粉129.2g、海带粉250g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g、姜黄素800mg。
56.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
57.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
58.本实施例所得饲料的粗蛋白含量为32.35％，粗脂肪含量为3.60％。
59.实施例6
60.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉130g、谷朊粉120g、豆粕145g、高筋面粉129.9g、海带粉260g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g、姜黄素100mg。
61.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
62.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
63.实施例7
64.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉100g、谷朊粉140g、豆粕145g、高筋面粉129.85g、海带粉260g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g、姜黄素150mg。
65.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
66.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
67.实施例8
68.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉100g、谷朊粉140g、豆粕145g、高筋面粉129.8g、海带粉260g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g、姜黄素200mg。
69.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
70.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
71.对比例1
72.一种不含姜黄素的对照组饲料，每千克配合饲料中原料组成为：鱼粉150g、谷朊粉120g、豆粕135g、高筋面粉130g、海带粉250g、粘合剂100g、大豆磷脂20g、磷酸二氢钙10g、氯化胆碱5g、复合维生素20g、复合矿物质30g、褐藻酸钠30g。
73.所述粘合剂包括：糊精50g、α-淀粉50g。
74.一种增强免疫力和改善肠道菌群的鲍配合饲料，其制备方法及具体操作步骤同实施例1。
75.本对比例所得饲料的粗蛋白含量为32.53％，粗脂肪含量为3.98％。
76.对比例2
77.一种普通鲍商业饲料，粗蛋白含为38.58％，粗脂肪含量为3.29％。
78.本实验例对上述部分实施例和对比例制备获得的饲料在鲍养殖应用如下：
79.一、试验材料与方法
80.1、试验动物
81.本发明所使用的试验动物均为同一批人工孵化后的18月龄皱纹盘鲍。试验开始前，所有皱纹盘鲍在水泥池(8m
×
2.2m
×
0.8m)中投喂对比例2饲料(普通鲍商业饲料)暂养15天，以适应饲料和养殖环境。适应试验结束后，选取840只皱纹盘鲍(平均初始壳长:59.47
±
0.08mm；平均初始体重:24.68
±
0.07g)随机分配到42个养殖笼中(每组6个笼子，每个笼子20只鲍)。
82.2、养殖试验与养殖管理
83.养殖试验期间，每天18：00投喂各组试验饲料，为了确保明显的饱腹感，每天的投喂量根据上次剩余的饲料进行调整，养殖周期为100天。次日7：00，记录死亡鲍的数量和收集前一天的剩余饲料，更换三分之二的新鲜海水和使用通气的海水流动，以确保良好的水质。养殖试验中测定的水质指标：水温：22～23℃；溶解氧：7.15～7.28mg/l盐度：31～32g/l和ph值：7.9～8.1。
84.3、样品收集和分析
85.养殖试验结束后，所有鲍饥饿3天以排空肠道，对鲍进行计数、测量和称重，以计算存活率，壳长日增长率，增重率和特定生长率。从每组中随机选取12只鲍，用无菌注射器从足部肌肉的血窦中收集1ml左右的血淋巴，并立即以3000
×
g离心10min，收集血清用于抗氧化参数分析。从已抽取血淋巴的鲍鱼中收集鲍鱼的肝胰腺和肠道，立即冷冻在液氮中，储存于-80℃冰箱用于肝脏抗氧化参数和肠道微生物组分析。
86.4、哈维氏弧菌ap37菌株感染试验
87.养殖试验结束后，从5个实施例组和2个对比例组中随机选取45只鲍，以研究哈氏弧菌ap37菌株胁迫下各实施例组和对比例组配合饲料饲养的鲍存活率的影响(每组3个重复，每个重复15只鲍鱼)。哈维氏弧菌ap37是一株从患病的杂色鲍中分离出的菌株，已经证明其对鲍具有致病活性。在感染实验之前，用2216e培养基在37℃下培养24h以活化哈维氏弧菌ap37菌株，预实验已经确定哈维氏弧菌ap37菌株对皱纹盘鲍的7天的半致死浓度为1.0
×
107cfu/ml。使用微量注射器对每只鲍肌内注射50μl的1.0
×
107cfu/ml的哈维氏弧菌ap37悬浮液，另外15只注射等体积的无菌海水作为阴性对照组。在168h哈维氏弧菌ap37菌株感染试验期间，所有鲍保持不喂食，并且每天上午9:00和下午6:00记录鲍的死亡情况。
88.根据感染试验结果和预实验的结果，选择对皱纹盘鲍的亚致死浓度(3.0
×
106cfu/ml)的哈维氏弧菌ap37菌株悬浮液以评估其对各实施例组和对比例组配合饲料饲养鲍的血细胞免疫反应的影响。使用微量注射器对每组的30只鲍肌内注射50μl的3.0
×
106cfu/ml的哈维氏弧菌ap37菌株悬浮液，另外10只注射等体积的无菌海水作为阴性对照组。感染试验期间，每组随机选取三只鲍鱼，分别在0(阴性对照组)、48和96h收集血淋巴(每只鲍约收集2ml血淋巴),用于总血细胞计数(thc)、血细胞死亡率、活性氧(ros)和吞噬活性的测定。
89.5、实验数据的统计与分析方法
90.存活率(％)＝100
×
(实验末存活鲍数量/实验初存活鲍数量)
91.生物增量(g)＝实验末总生物量-实验初始总生物量
92.饲料转化率(％)＝摄入的饲料干重/(实验末总生物量-实验初始总生物量)
93.蛋白质效率(％)＝(实验末总生物量-实验初始总生物量)/(摄入的饲料干重
×
饲料蛋白含量)
94.所有数据均采用spss 20.0进行统计分析，并以平均值
±
均值标准误差表示。先采用单因素方差分析，当各组间差异有统计学意义时，再采用duncan's进行多重比较，p《0.05表示具有显著统计学意义。
95.二、试验结果
96.1.存活、生长性能和饲料利用效率
97.5组实施例饲料与2组对比例饲料对皱纹盘鲍的存活、生长性能和饲料利用效率的影响如表1所示。7种试验饲料持续饲养皱纹盘鲍100天，各试验组的鲍存活率在85％～91.67％之间变化，其中实施例2饲料饲养鲍存活率最高，显著高于两组对比例饲料(p《0.05)，但与其它四种实施例饲料均无显著性差异(p》0.05)。实施例2饲料饲养鲍有最大的末长、末重和生物增量，与对比例1相比分别增加8.10％、22.83％和127.85％；与对比例2相比分别增加8.25％、16.17％和76.64％。与对比例1相比，所有实施例饲料饲养鲍的蛋白质效率均显著增加，而饲料效率则显著降低(p《0.05)，其中实施例2饲料饲养鲍有最大的蛋白质效率和最小的饲料效率。因此，饲料中补充适量的姜黄素能显著提高皱纹盘鲍的存活率、生长性能和饲料利用效率。
98.表1实施例和对比例饲料对皱纹盘鲍存活、生长性能和饲料利用效率的影响
[0099][0100]
注：同一行内不同的上标字母代表差异显著(p《0.05)
[0101]
2.血清和肝脏的生化参数和抗氧化酶活
[0102]
表2列出6种试验饲料对鲍血清和肝脏的生化参数和抗氧化酶活性的影响。与对比例相比，5种实施例饲料均能显著降低皱纹盘鲍血清和肝脏中甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)和丙二醛(mda)的含量(p《0.05)，其中实施例2饲料有最小值。当饲料中姜黄素添加量超过100mg/kg时(实施例2、3、4、5饲料)，鲍血清和肝脏中超氧化物歧化酶(sod)、过氧化氢酶(cat)、谷胱甘肽过氧化氢酶(gsh-px)活性和总抗氧化能力(t-aoc)均显著高于对比例1饲料(p《0.05)，但实施例2、3、4、5饲料之间的差异不显著(p》0.05)。表明饲料中补充100～800mg/kg的姜黄素能提高皱纹盘鲍的抗氧化能力，减少脂肪在肝脏堆积和脂质过氧化产物的产生从而保护肝脏健康。
[0103]
表2实施例和对比例饲料对皱纹盘鲍血清和肝脏生化参数和抗氧化酶活的影响
[0104][0105][0106]
注：同一行内不同的上标字母代表差异显著(p《0.05)
[0107]
3.哈维氏弧菌感染下的皱纹盘鲍累积死亡率
[0108]
如表3所示，哈维氏弧菌感染后的前两天(累积1天和累积2天)，各组试验饲料对皱纹盘鲍的累积死亡率均无显著性差异(p》0.05)。哈维氏弧菌感染后的第3天，各实施例饲料饲养的皱纹盘鲍的累积死亡率均显著低于对比例1饲料(p《0.05)，但与对比例2饲料无显著性差异(实施例2饲料除外，p《0.05)。哈维氏弧菌感染后的第5～7天，与对比例1～2饲料相比，实施例2～5饲料显著降低哈维氏弧菌感染下的皱纹盘鲍累积死亡率，其中饲养实施例2饲料效果最明显，其次是实施例3、实施例4和实施例5。以上表明饲料中补充100～800mg/kg的姜黄素能够提高皱纹盘鲍抵抗病原体感染的能力，降低死亡率。
[0109]
血细胞的数量在细胞免疫中非常重要，细胞免疫可以通过执行一系列免疫功能，如抗原识别、趋化、吸附和凝集、吞噬作用和呼吸爆发，来杀死和清除入侵的外源病原体。如图1a所示，攻击前(0h)，实施例2、3、5组饲料饲养鲍的thc均显著高于对比例1组(p《0.05)。在弧菌感染试验的48和96h，所有实施例组饲料饲养鲍的thc均显著高于对比例1组(p《0.05)。随着弧菌感染时间的延长，各饲料组的thc均呈下降趋势，且对比例1组下降趋势更明显。许多研究表明贝类体内的thc减少经常导致血细胞的高死亡率，血细胞的死亡主要是由于坏死或凋亡过程。如图1b所示，在0、48和96h，对比例1组饲料饲养鲍的血细胞死亡率显著高于各实施例组(p《0.05)。实施例2～5组饲料饲养鲍的血细胞死亡率在0～48h持续上升，在96h时降至感染前水平。不同的是，对比例1组和实施例1组饲料饲养鲍的血细胞死亡率在96h时仍保持较高水平。除了thc和血细胞死亡率，血细胞的吞噬活性和ros也是细胞免疫的重要指标。吞噬作用的过程通常伴随着呼吸爆发的产生，吞噬活性和ros(表现为ros水平增加)协同作用，共同决定宿主清除外源病原体的效率。如图1c所示,实施例2和实施例3组饲料饲养鲍的血细胞吞噬活性显著高于对比例1组，并且在整个弧菌感染试验中始终保持着高水平的吞噬活性。如图1d所示,实施例2组饲料饲养鲍的ros水平在各个感染时间点(48和96h)均显著高于对比例1组饲料(p《0.05)。对比例1组饲料饲养鲍的ros水平在感染后48h内显著升高，在感染后48～96h迅速下降；但实施例2～5组饲料饲养鲍的ros水平在48和96h持续保持较高水平。这些结果表明，姜黄素能激发弧菌胁迫下的鲍血细胞免疫响应，通过促进鲍血细胞的快速增殖和分化以对抗病原体入侵以及通过维持较高的吞噬活性和ros水平增强入侵病原体的清除率，提高鲍机体的病菌抵抗力。
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表3实施例和对比例饲料对哈维氏弧菌胁迫下的皱纹盘鲍累积死亡率的影响
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4.肠道菌群组成
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通过使用基于操作分类单位(otu)水平的各种指数，对饲养对比例1(a组)和实施例2(b组)饲料的鲍的肠道细菌生态特征的变化评估。如表4所示，两组的平均覆盖率指数均大于99％。与对比例1相比，实施例2饲料饲养的鲍的肠道具有更低的微生物多样性(shannon和simpson指数)、微生物群落丰度(chao1和ace指数)和系统发育多样性(pd whole tree)。如图2主坐标分析(pcoa)图显示，基于未加权和加权的unifrac距离，a组和b组肠道菌群之间有明显的差异。这些结果表明日粮中补充100mg/kg姜黄素能够调控鲍的肠道菌群组成，降低肠道菌群的多样性和丰富度。
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如图3所示，在门水平，对比例1(a组)饲料饲养的鲍的肠道菌群丰富度排名前五名的是变形菌门(proteobacteria)、厚壁菌门(firmicutes)、蓝细菌门(cyanobacteria)、放线菌门(actinobacteria)和拟杆菌门(bacteroidota)，而实施例2(b组)饲料喂养的鲍的肠道菌群丰富度排名前五名的是变形菌门(proteobacteria)、厚壁菌门(firmicutes)、梭杆菌门(fusobacteriota)、弯曲杆菌门(campylobacterota)和拟杆菌门(bacteroidota)。b组中厚壁菌门(33.01％)、梭杆菌门(23.70％)的相对丰富度以及厚壁菌门/拟杆菌门的比值(11.49％)均显著高于a组(23.54％，1.63％和5.09％)(p《0.05)。已有研究报道变形菌门、厚壁菌门是鲍肠道菌群的主要组成成员。高丰富度的变形菌门、厚壁菌门以及厚壁菌门/拟杆菌门的高比值与食物消化和吸收效率呈正相关。在属水平，支原体属(mycoplasma)、嗜冷杆菌属(psychrilyobacter)和弧菌(vibrio)是b组中的优势细菌属，占序列的70％以上，并且三种优势细菌属均显著高于a组(p《0.05)。支原体属是兼性厌氧菌，作为共生菌，参与聚糖、蛋白质和寡糖的降解，产生乳酸；嗜冷杆菌属是专性厌氧菌，属于梭杆菌门，与无脊椎动物的发酵代谢、消化功能和营养获取过程有关；弧菌属是兼性厌氧菌具有降解琼脂糖、海带多糖和藻酸盐的能力，并能够发酵丙酮酸和产生短链脂肪酸以发挥其有益功能。以上结果表明，补充姜黄素的日粮可以通过促进潜在益生菌的生长和增殖调节肠道菌群组成，对鲍产生有益的作用。
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表4实施例和对比例对皱纹盘鲍肠道菌群α多样性的影响
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综合所述，姜黄素作为高效绿色、无毒无害的饲料添加剂，具有可持续替代抗生素的潜能。鲍配合饲料中添加适量的姜黄素不仅能增强皱纹盘鲍的抗病免疫能力，抗氧化能力和减少脂质过氧化产物的产生，还能提高鲍的生长性能和调控肠道有益菌群的生长和增殖。本发明的配合饲料，具有营养均衡、安全性高、生物利用度高、抗病性强等特点，可作为鲍高温或疾病频发季节的免疫强化专用饲料，具有广泛的开发应用前景。
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以上仅对本发明的部分实施方式进行详细说明，但并不以此来限定本发明之权利范围，对本领域的技术人员而言，其它任何未违背本发明的精神实质和原则下所进行的多种等同变型，修改或替换，仍属于本发明所保护的范围之内。