一种基于内毒素去除的尿激酶生产方法与流程

技术特征：
1.一种基于内毒素去除的尿激酶生产方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品预处理：调节尿激酶粗品溶液的ph值和电导，得到预处理液；(2)层析柱制备与装柱：向复合微球中加水，得到悬混液，装柱，得到层析柱；所述复合微球由纳米四氧化三铁、聚苯乙烯和聚赖氨酸组成；(3)消毒：对层析柱和层析系统消毒，检测内毒素，结果为阴性；(4)上样处理：使用平衡缓冲液平衡层析柱，待紫外、电导和ph稳定后上样，所述上样的样品为步骤(1)得到的预处理液；当检测到流穿峰紫外吸收>50mau时开始收集流穿液体，上样结束后，继续使用平衡缓冲液冲洗层析柱，直至系统检测到紫外吸收<50mau，停止收集，收集液即为去除内毒素的尿激酶原料溶液。2.根据权利要求1所述的尿激酶生产方法，其特征在于，步骤(1)中所述ph值为9；所述电导为3-6ms/cm。3.根据权利要求1所述的尿激酶生产方法，其特征在于，步骤(2)中所述层析柱中复合微球和水的高度比为1:0.8-1.2。4.根据权利要求1所述的尿激酶生产方法，其特征在于，所述复合微球的制备方法，包括以下步骤：s1、将纳米四氧化三铁、磷酸钙分散在水中，得到分散液；s2、将苯乙烯、二乙烯基苯、乙烯基三甲氧基硅烷和过氧化二苯甲酰混合，得到油相；s3、将油相滴加到水相中，控制搅拌速度100-150rpm，温度45-60℃，调节ph为8-12；升温至80-100℃后反应2-4h，抽滤，洗涤，得到纳米四氧化三铁-聚苯乙烯微球；s4、将纳米四氧化三铁-聚苯乙烯微球置于聚赖氨酸溶液中，调节ph至9.0，于50-55℃振荡反应过夜，反应完毕后过滤，再洗涤至中性并干燥，得到所述复合微球。5.根据权利要求4所述的尿激酶生产方法，其特征在于，步骤s1中所述纳米四氧化三铁的粒径为10-50nm。6.根据权利要求4所述的尿激酶生产方法，其特征在于，所述分散液的质量分数为8-12％；所述纳米四氧化三铁、磷酸钙的质量比为0.5-1:1。7.根据权利要求5所述的尿激酶生产方法，其特征在于，步骤s2中所述苯乙烯、二乙烯基苯、乙烯基三甲氧基硅烷和过氧化二苯甲酰的质量比为25-28:2-4:2-4:0.2-0.4。8.根据权利要求5所述的尿激酶生产方法，其特征在于，步骤s4中所述聚赖氨酸溶液的浓度为5-6g/ml。9.根据权利要求1所述的尿激酶生产方法，其特征在于，步骤(4)中所述层析柱的层析流动为70-90cm/h。10.一种权利要求1-9任一项所述尿激酶生产方法中的复合微球在吸附内毒素中的应用。

技术总结
本发明公开了一种基于内毒素去除的尿激酶生产方法，包括以下步骤：(1)样品预处理：(2)层析柱制备与装柱：向复合微球中加水，得到悬混液，装柱，得到层析柱；所述复合微球由纳米四氧化三铁、聚苯乙烯和聚赖氨酸组成；(3)消毒：对层析柱和层析系统消毒，检测内毒素，结果为阴性；(4)上样处理：收集液即为去除内毒素的尿激酶原料溶液。本发明利用纳米四氧化三铁、聚苯乙烯和聚赖氨酸组成的复合微球实现了内毒素的快速、高效吸附，有效去除乐尿激酶中的内毒素，且相比现有技术，本发明的生产成本更低，满足了产业化需求。满足了产业化需求。


技术研发人员：顾京 熊心磊 郭芬 李乐枫 杨展伟 金伟 熊倩 赵宝营 曾文 肖蛟龙 唐维 王德军
受保护的技术使用者：河南省尤里卡生物科技有限公司
技术研发日：2022.10.10
技术公布日：2022/12/9