一种用于防龋抑菌的鱼腥草洗漱产品及其生产线

1.本发明涉及口腔洗漱产品生产装备技术领域，具体为一种含鱼腥草提取物或其衍生物的防龋口腔洗漱产品及其自动化生产线。


背景技术：

2.据第四次全国口腔流行病学调查数据显示，我国成年人龋病患病率高达80％以上，是引起牙齿缺损和疼痛的主要原因。变异链球菌是引发龋病的主要致病菌。目前，控制变异链球菌常用的方法是通过刷牙的机械方式控制菌斑和使用添加抗菌成分的洗漱产品清洁口腔。然而，刷牙难以深入牙缝深处和牙龈边缘下。洗漱产品虽然能够深入牙缝深处和牙龈边缘下一定程度清除口腔细菌。但目前洗漱产品中的抗菌成分大多为酒精、氯己啶、甲硝唑等物质，长期使用容易造成黏膜的白色病变，引起牙石形成、牙面着色及味觉改变等问题。因此，寻求新型的安全有效的防龋物质至关重要。
3.鱼腥草作为药食同源类植物，不仅可以直接食用，而且还是颇具临床应用价值的中药材。鱼腥草提取物中主要有效成分是鱼腥草素，具有很好的抗菌、抗病毒、抗炎效果。鱼腥草素钠以及新鱼腥草素钠是人工合成的天然鱼腥草素的亚硫酸氢钠衍生物。研究显示鱼腥草素类衍生物性状更稳定，且保留对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、白色念珠菌、大肠杆菌等的抑菌作用。同时，研究显示鱼腥草提取物或其衍生物对于口腔细菌感染性疾病的防治均具有积极的作用。因此，鱼腥草提取物或其衍生物是口腔洗漱产品较为理想的一种防龋物质。
4.鱼腥草油、鱼腥草素、鱼腥草素钠、新鱼腥草素钠等鱼腥草提取物或其衍生物的水溶性较差，一定程度限制了其应用，如何改良其溶解度是影响其使用的关键问题。中国专利cn113143904a(一种鱼腥草素类似物在制备变异链球菌生长及其生物膜抑制剂的应用)公开了一种鱼腥草素类似物在制备变异链球菌生长及生物膜抑制剂的应用，抑制剂能够抑制变异链球菌生长以及生物膜形成，有作为防龋药物的潜力。但是该技术存在以下缺陷：(1)溶解母液为有机溶剂二甲基亚砜，具有一定毒性，可刺激眼睛、皮肤和呼吸系统；(2)该技术未设计相应的生产线，阻碍了其进一步的产品转化及应用。
5.此外，目前现有的洗漱产品以漱口水形式居多，多为液体形态，占体积较大，不便于携带；现有的漱口水产品的生产过程中涉及较多的材料和生产装置，这些材料和生产装置通常设置的较为分散，占用较大空间，增加了空间成本；而且，现有的漱口水产品在制造过程中的反应过程也相对复杂，不容易控制，影响其生产的安全和效率。
6.综上，有必要研发一种反应过程相对简单的生产线，制得便于携带、对口腔粘膜无明显刺激、同时具有良好口腔抑菌效果的口腔洗漱产品，这将有利于解决人们在口腔保健和口腔疾病预防方面对于有效、安全、可长期使用口腔洗漱产品的迫切需求。


技术实现要素：

7.本发明的目的在于提供一种含鱼腥草提取物或其衍生物的防龋抑菌口腔洗漱产
品及其自动化生产线，以解决上述背景技术中提出的问题。
8.为达到上述目的，本发明采用以下技术方案来实现：
9.一种用于防龋抑菌的鱼腥草洗漱产品，其特征在于，所述洗漱产品的有效成分包括a成分和b成分，其中：
10.a成分为鱼腥草提取物或其衍生物，其包含鱼腥草提取物、鱼腥草油、鱼腥草素、鱼腥草素钠、新鱼腥草素钠中的一种或多种；其中，
11.鱼腥草油、鱼腥草素、鱼腥草素钠、新鱼腥草素钠等水溶性差的表示为a类鱼腥草提取物或其衍生物；
12.鱼腥草提取物等水溶性良好的表示为b类鱼腥草提取物或其衍生物；
13.且当a成分用于制得所述洗漱产品时，a类鱼腥草取物或其衍生物用无水乙醇溶解，b类鱼腥草提取物或其衍生物用去离子水溶解；
14.b成分为绿茶相关提取物，包括绿茶提取物、茶多酚、儿茶素的一种或多种；
15.所述a与b的质量比，以能使洗漱产品兼顾抑菌效能和色泽、口感即可。
16.优选的，所述的一种用于防龋抑菌的鱼腥草洗漱产品，其特征在于：
17.所述洗漱产品还包括适量的辅料，辅料包括：保湿剂、防腐剂、抗氧剂、乳化剂、增稠剂、甜味剂、胶浆剂、芳香剂以及矫味剂中的一种或多种。
18.此外，本发明还揭示了一种用于防龋抑菌的鱼腥草洗漱产品的生产线，包括：
19.第一容器(1)、第二容器(2)、第三容器(3)、第四容器(401)、第五容器(17)、放置桶(9)、第二干燥装置(18)和冷冻装置(19)，其中：
20.放置桶(9)和第二干燥装置(18)之间、第二干燥装置(18)和冷冻装置(19)之间均通过管道相连通；
21.第一容器(1)和第二容器(2)顶端均通过支架连接有第一搅拌桶(101)，第一容器(1)和第一搅拌桶(101)相连接的管道上连接有液体流量计(102)；
22.第一搅拌桶(101)顶端两侧连通有进料管(12)和料斗(13)，第三容器(3)顶端开设的进料口通过连接管道(11)分别与第一容器(1)和第二容器(2)底端的出料口相连接；
23.第三容器(3)出料口通过连接管道(11)与第四容器(401)顶端的进料口相连接；
24.第四容器(401)和放置桶(9)顶端均连通有第二进液管(10)，第四容器(401)底端出料口通过连接管与第二搅拌桶(4)顶端上的进料口相连通；
25.第二搅拌桶(4)一侧放置有第一干燥装置(7)，第一干燥装置(7)底端出料口通过连接管与第五容器(17)相连接，第五容器(17)顶部连通有第一进液管(8)，第五容器(17)出料口通过连接管道(11)与放置在放置桶(9)内的透析袋(23)相连通。
26.优选的，所述的生产线，其特征在于：
27.所述生产线还包括粉碎装置(20)；所述冷冻装置(19)和粉碎装置(20)之间通过管道相连通。
28.优选的，所述的生产线，其特征在于：
29.所述放置桶(9)有多个并且呈一排设置，透析袋(23)的数量和放置桶(9)一致，一个透析袋(23)的出口和另一个透析袋(23)的进口均通过连接管道(11)相连通，最后一个透析袋(23)出料口与第二干燥装置(18)的进料口通过相连接管道(11)相连通。
30.优选的，所述的生产线，其特征在于：
31.所述第三容器(3)、第二搅拌桶(4)和第五容器(17)分别放置在第三磁力搅拌装置(16)、第一磁力搅拌装置(5)和第二磁力搅拌装置(6)顶部。
32.优选的，所述的生产线，其特征在于：
33.所述第一搅拌桶(101)、第四容器(401)和第一干燥装置(7)内部均设置有动力搅拌装置(14)。
34.优选的，所述的生产线，其特征在于：所述连接管道(11)管道上连接有电磁阀和水泵。
35.优选的，所述的生产线，其特征在于：
36.所述第二干燥装置(18)和冷冻装置(19)之间及冷冻装置(19)和粉碎装置(20)之间连接的管道上分别连接有第一卸料阀(21)和第二卸料阀(22)。
37.优选的，所述的生产线，其特征在于：所述第一容器(1)、第二容器(2)、第三容器(3)、第四容器(401)和第五容器(17)底端均连接有支撑架(15)。
38.此外，本发明还揭示了一种所述的生产线生产所述洗漱产品的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
39.(1)在所述第一容器中，将鱼腥草提取物或其衍生物溶解到去离子水或无水乙醇中制成鱼腥草提取物或其衍生物的溶液，其中，a类鱼腥草取物或其衍生物用无水乙醇溶解，b类鱼腥草提取物或其衍生物用去离子水溶解。
40.(2)在所述第二容器中，将环糊精或其衍生物溶于水制成浓度为10～500mg/ml的环糊精溶液；其中，通过所述液体流量计调整环糊精溶液的体积是鱼腥草提取物或其衍生物溶液体积的9-11倍，同时开启第二容器上的第一搅拌桶上设置的检测管，检查环糊精溶液浓度为10～500mg/ml；对于a类鱼腥草提取物或其衍生物，需采用环糊精或其衍生物进行包合；对于b类鱼腥草提取物或其衍生物，无需用环糊精或其衍生物包合；
41.(3)在所述第三容器中，将a类鱼腥草提取物或其衍生物溶液与环糊精溶液混合形成第一混合液；
42.(4)在所述第一搅拌桶中，将第一混合液进行搅拌使其混合均匀；
43.(5)在所述第四容器中，置入适量的绿茶相关提取物，并与第一混合液再次混合形成第二混合液；
44.(6)对于a类鱼腥草提取物或其衍生物，被环糊精或其衍生物包合，除去第四容器中第二混合液所有溶剂，得到第一产物；对于b类鱼腥草提取物或其衍生物，则无需除去第四容器中第二混合液所有溶剂，得到第一产物；
45.(7)在所述第五容器中，将a类鱼腥草提取物或其衍生物的第一产物通过纯水溶解，依次加入适量保湿剂、防腐剂、抗氧剂、乳化剂、增稠剂、甜味剂、胶浆剂、芳香剂及矫味剂等辅料，得到第二产物；对于b类鱼腥草提取物或其衍生物，在第二混合液中依次加入适量保湿剂、防腐剂、抗氧剂、乳化剂、增稠剂、甜味剂、胶浆剂、芳香剂及矫味剂等辅料，得到第二产物；
46.(8)将所述第二产物液体转移到透析袋，用100倍体积纯水，室温透析多次，以除去游离的鱼腥草提取物或其衍生物，得到漱口水形式的洗漱产品；
47.(9)将漱口水形式的洗漱产品通过所述冷冻装置、第二干燥装置进行冷冻、干燥，得到洗漱颗粒形式的洗漱产品。
48.优选的，所述的方法，还包括如下步骤：
49.(10)按照产品粒径要求，通过所述粉碎装置对所述洗漱颗粒形式的洗漱产品进一步粉碎。
50.优选的，所述的一种用于防龋抑菌的鱼腥草洗漱产品，其特征在于：
51.所述洗漱产品为用于溶于水的洗漱颗粒，或者为牙粉、牙齿凝胶或口腔喷雾。
52.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
53.(1)所述口腔洗漱产品的自动化生产线反应过程简单，制备过程容易控制，相对更安全高效。该生产线将多个过程的材料加工装置通过连接管道相互连接，并在连接管道上设置了不同的容器、电磁阀和水泵等组件，组成了一个完整的生产系统。该生产线不仅实现了对加工装置给料和各个反应过程的控制，而且该系统占地较少，利于空间利用，还大大提高了洗漱产品生产的自动化程度。
54.(2)在所述生产线基础上，本发明在实现常规漱口水形式洗漱产品生产的同时，还可实现一种方便携带的洗漱颗粒。在使用时，用户只需要利用水将洗漱颗粒溶解后即可使用，而且，洗漱颗粒更能长久的保存。
55.(3)所述最终产物含鱼腥草提取物或其衍生物的防龋抑菌洗漱产品及其制备方法，还具有以下优势：
56.(a)所含环糊精或其衍生物可改善a类鱼腥草提取物或其衍生物的溶解度，并且改善其口感，让人易于接受。
57.(b)最终产物与牙齿表面有效的粘附，利于减少细菌的黏附，提高抑菌能力，同时还具有良好的生物相容性。
附图说明
58.图1为制备口腔洗漱产品的自动化生产线的左侧轴视图；
59.图2为制备口腔洗漱产品的自动化生产线的右前侧轴视图；
60.图3为制备口腔洗漱产品的自动化生产线的俯视图；
61.图4为制备口腔洗漱产品的自动化生产线的分解图；
62.图5a至图5b为鱼腥草素钠洗漱产品中鱼腥草素钠-β-环糊精包合物的表征图；图5a为核磁共振谱图；图5b为相溶解度考察图；
63.图6a至图6b为鱼腥草素钠洗漱产品的生物相容性考察图；图6a为细胞毒性检测图；图6b为动物组织h&e染色图；
64.图7a至图7c为鱼腥草素钠洗漱产品的抑菌效能检测图；图7a为对变异链球菌生长的影响；其中，“11”代表未加洗漱产品，只用去离子水处理的阴性对照组；“1”、“2”、“3”、“4”、“5”、“6”、“7”、“8”、“9”、“10”分别代表用所含鱼腥草素钠3200、1600、600、400、200、100、50、25、12.5、6.25μg/ml的洗漱产品处理的不同实验组；图7b为对牙釉质牙表面细菌黏附的影响；图7c为对牙釉质牙表面细菌生物膜的影响；
65.图8a至图8b为鱼腥草提取物洗漱产品对变异链球菌生长的抑制作用；图8a为鱼腥草提取物(hhe)与绿茶提取物(gte)或茶多酚(tpe)作用下对变异链球菌生长的影响；图8b为不同浓度的鱼腥草提取物(hhe)与绿茶提取物(gte)或茶多酚(tpe)作用下对变异链球菌生长的抑制率；
66.附图标记：
67.1：第一容器；101：第一搅拌桶；102：液体流量计；2：第二容器；3：第三容器；4：第二搅拌桶；401：第四容器；5：第一磁力搅拌装置；6：第二磁力搅拌装置；7：第一干燥装置；8：第一进液管；9：放置桶；10：第二进液管；11：连接管道；12：进料管；13：料斗；14：动力搅拌装置；15：支撑架；16：第三磁力搅拌装置；17：第五容器；18：第二干燥装置；19：冷冻装置；20：粉碎装置；21：第一卸料阀；22：第二卸料阀；23：透析袋。
具体实施方式
68.下面结合实施例和附图1至图8b对本发明做进一步详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
69.基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
70.需要说明的是，在本发明的描述中，术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，并不是指示或暗示所指的装置或元件所必须具有的特定方位，或特定方位的构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
71.此外，应当理解，为了便于描述，附图中所示出的各个部件的尺寸并不按照实际的比例关系绘制，例如某些层的厚度或宽度可以相对于其他层有所夸大。
72.应注意的是，相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项。因此，一旦某一项在一个附图中被定义或说明，则在随后的附图的说明中将不再对其进行进一步的具体讨论和描述。
73.实施例1：
74.一种制备口腔漱口水及洗漱颗粒洗漱产品的自动化生产线，包括：
75.如图1到图4所示，自动化生产线包括第一容器1、第二容器2、第三容器3、第四容器401、第五容器17、放置桶9、第二干燥装置18、冷冻装置19和粉碎装置20。放置桶9和第二干燥装置18之间、第二干燥装置18和冷冻装置19之间及冷冻装置19和粉碎装置20之间均通过管道相连通。第一容器1、第二容器2、第三容器3、第四容器401和第五容器17均为不锈钢容器，其不锈钢的种类具体为304不锈钢。第一容器1和第二容器2顶端均通过支架连接有第一搅拌桶101，并且第一容器1和第一搅拌桶101相连接的管道上连接有液体流量计102，液体流量计102可以根据管道内的液体流速和管道孔径测算出流入容器内液体的体积；第一搅拌桶101顶端两侧连通有进料管12和料斗13，第三容器3顶端开设的进料口通过连接管道11分别与第一容器1和第二容器2底端的出料口相连接；在第三容器3出料口通过连接管道11与第四容器401顶端的进料口相连接；第一搅拌桶101、第四容器401和第一干燥装置7内部均设置有动力搅拌装置14；第四容器401和放置桶9顶端均连通有第二进液管1o，第四容器401底端出料口通过连接管与第二搅拌桶4顶端上的进料口相连通；第二搅拌桶4一侧放置有第一干燥装置7，在第一干燥装置7底端出料口通过连接管与第五容器17相连接；第五容器17顶部连通有第一进液管8，第五容器17出料口通过连接管道11与放置在放置桶9内的透析袋23相连通，连接管道11上连接有电磁阀和水泵。其中，放置桶9有多个并且呈一排设置，在本实施例中，放置桶9的具体数量为5个，透析袋23的数量和放置桶9一致；一个透析袋23
的出口和另一个透析袋23的进口均通过连接管道11相连通，最后一个透析袋23出料口与第二干燥装置18的进料口通过相连接管道11相连通；第三容器3、第二搅拌桶4和第五容器17分别放置在第三磁力搅拌装置16、第一磁力搅拌装置5和第二磁力搅拌装置6顶部。第三磁力搅拌装置16、第一磁力搅拌装置5和第二磁力搅拌装置6是利用磁性物质同性相斥的特性，通过不断变换基座两端的极性来推动磁性搅拌子转动，进一步带动样本旋转，使样本均匀混合。接着通过底部温度控制板对样本加热，配合磁性搅拌子的旋转使样本均匀受热，达到指定的温度。第二干燥装置18和冷冻装置19之间及冷冻装置19和粉碎装置20之间连接的管道上分别连接有第一卸料阀21和第二卸料阀22。第一容器1、第二容器2、第三容器3、第四容器401和第五容器17底端均连接有支撑架15。
76.实施例2：
77.利用所述自动化生产线制备一种含鱼腥草提取物或其衍生物的防龋抑菌口腔洗漱产品漱口水及洗漱颗粒的方法，包括以下步骤：
78.首先通过料斗13和进料管12向第一搅拌桶101内放入a类或b类鱼腥草提取物或其衍生物，以及注入去离子水或无水乙醇，经过动力搅拌装置14搅拌后得到第一溶液。将环糊精或其衍生物和水放入第二容器2的第一搅拌桶101内，经过动力搅拌装置14搅拌后得到第二溶液。通过液体流量计102调整第二溶液的体积是第一溶液体积的9-11倍，同时开启第二容器2上的第一搅拌桶101上设置的检测管，检查第二溶液的浓度为10～500mg/ml。将第一溶液和第二溶液泵入到第三容器3内，经第三磁力搅拌装置16进行搅拌12-36h，得到第三溶液。第三溶液泵入到第四容器401，并向第四容器401内注入一定质量的绿茶相关提取物，形成第四混合液。第四混合液经第一磁力搅拌装置5进行搅拌，搅拌后泵入到第一干燥装置7内进行干燥得到第一产物。打开第一干燥装置7底部的阀门，第一产物进入到第五容器17内，向第五容器17加入纯净水，并依次加入适量保湿剂、防腐剂、抗氧剂、乳化剂、增稠剂、甜味剂、胶浆剂、芳香剂以及矫味剂等辅料，并继续通过第二磁力搅拌装置6进行搅拌，得到第二产物。将第二产物泵入到透析袋23内，并向放置桶9内注入100倍体积的纯净水，确保始终处于室温环境。利用透析袋进行5次透析以去除鱼腥草提取物或其衍生物的游离成分，得到漱口水形式的洗漱产品。最后，对透析袋内的液体进行冷冻、干燥，得到洗漱颗粒形式的洗漱产品。此外还可按照产品粒径要求，通过所述粉碎装置对所述洗漱颗粒进一步粉碎。
79.本发明使用鱼腥草提取物或其衍生物和环糊精或其衍生物来研发洗漱产品，是因为发明人发现：环糊精作为搭载a类鱼腥草提取物或其衍生物的载体，通过环糊精的空间结构包裹a类鱼腥草提取物或其衍生物，可以有效提高载药整体的生物相容性。
80.本发明制备的最终产物优选纳米级别，以便后续使用中还能兼顾靶向释药，使药物与牙齿患处紧密贴合，利于有效发挥抑制变异链球菌的药效。
81.以鱼腥草素钠和β-环糊精为例，按照所述生产线和方法制备得到鱼腥草素钠洗漱产品，对其中的鱼腥草素钠-β-环糊精包合物颗粒进行相应表征，包括以下实验步骤：
82.(1)核磁共振实验
83.将制备的鱼腥草素钠-β-环糊精包合物、β-环糊精、鱼腥草素钠分别溶解于去离子水中配置成适宜浓度，并转移至核磁管中，检测三者的核磁共振图谱变化。结果如图5中a所示，可见，与鱼腥草素钠的氢谱相比，鱼腥草素钠-β-环糊精包合物的氢谱发生了一定的位移，证明了鱼腥草素钠-β-环糊精包合物的成功制备。
84.(2)相溶解度实验
85.将鱼腥草素钠溶解于去离子水中，稀释成一系列的浓度梯度，通过测定od
283nm
值计算鱼腥草素钠浓度与od
283nm
值之间的标准曲线。称取适量β-环糊精溶于去离子水配成浓度为0mmol/l、2mmol/l、4mmol/l、6mmol/l、8mmol/l、10mmol/l的溶液。取上述溶液各10ml，加入过量的鱼腥草素钠，于37℃磁力搅拌作用24h。取上清液用0.22μm滤膜滤过，取滤液1ml测定od
283nm
值。结果如图5中b所示，可见，利用β-环糊精将鱼腥草素钠制备成包合物后，鱼腥草素钠的溶解度显著提高。
86.此外，对制备的鱼腥草素钠洗漱产品进行生物相容性考察，包括以下实验步骤：
87.(1)体外细胞毒性实验
88.将洗漱产品(含鱼腥草素钠100μg/ml)溶于dmem培养基配置成一定浓度，加入接种有牙龈成纤维细胞的96孔板，于37℃、5％co2细胞培养箱中分别培养24h和72h，添加cck-8试剂后用酶标仪测定od
450
值，结果如图6中a所示，可见该洗漱产品处理组与去离子水对照组相比无显著差异，说明该洗漱产品对牙龈成纤维细胞无细胞毒性，具有良好的细胞相容性。
89.(2)动物组织毒性试验
90.将体重为18～22g的小鼠20只(雌雄各10只)，随机均分为2组(对照组和实验组)。对照组小鼠灌胃给予1.5ml去离子水，实验组小鼠灌胃给予1.5ml该洗漱产品(漱口水形式，含鱼腥草素钠100μg/ml)，每日两次，观察4周，小鼠均健康生存，无任何毒副作用相关的症状。4周后处理小鼠，并分离主要脏器(心、肝、肺、肾、胃)进行h&e染色，考察该洗漱产品对小鼠组织是否具有毒性。结果如图6中b所示，可见，实验组小鼠五个主要脏器的形态正常，与对照组小鼠相比未见明显差异。说明该洗漱产品对小鼠无明显毒性，具有良好的组织相容性。
91.此外，对制备的鱼腥草素钠洗漱产品的抑菌效能考察，包括以下实验步骤：
92.(1)抑菌实验
93.细菌种类：采用的细菌均为国际标准株，变异链球菌(streptcoccus mutans，atcc25175)。96孔板每孔加入100μl终浓度为105～106cfu/ml的细菌悬液，将不同浓度的鱼腥草素钠洗漱产品溶解在bhi液体培养基中，在37℃恒温，85％n2、5％co2和10％h2混合气体的厌氧条件下培养24h，通过对bhi固体培养基进行涂菌来确认最小抑菌浓度。结果如图7中a所示，可见该洗漱产品组(“1”、“2”、“3”、“4”、“5”、“6”、“7”、“8”、“9”、“10”分别代表所含鱼腥草素钠3200、1600、600、400、200、100、50、25、12.5、6.25μg/ml浓度组)与去离子水对照组(“11”标记)相比，对于变异链球菌的生长具有浓度依赖性的抑制作用，其中对变异链球菌的最小抑菌浓度为含鱼腥草素钠100μg/ml的洗漱产品组(“6”标记组)。后续其他实验选择含鱼腥草素钠100μg/ml的洗漱产品用于测试。
94.(2)牙釉质表面细菌黏附实验
95.取人牙牙釉质部分，用自凝材料包被制成底面宽为4mm、高2mm的牙釉质，放入37％磷酸溶液中浸泡3min，用去离子水冲洗备用。将牙釉质片及牙本质片置于含107cfu/ml的变异链球菌菌液中，37℃厌氧培养1h，分别用去离子水(对照组)和洗漱产品(实验组)作用2min，每隔6h处理一次。24h后用pbs漂洗，利用扫描电子显微镜检测变异链球在牙釉质表面的黏附情况，结果如图7中b所示，可见，对照组的牙釉质表面黏附有大量变异链球菌，并聚
集形成菌落；而实验组牙釉质表面的变异链球菌数目明显减少。说明该洗漱产品具有显著的抑制变异链球菌黏附牙釉质表面的作用。
96.(3)牙釉质表面细菌生物膜考察实验
97.取人牙牙釉质部分，用自凝材料包被制成底面宽为4mm、高2mm的牙釉质，放入37％磷酸溶液中浸泡3min，用去离子水冲洗备用。将牙釉质片及牙本质片置于含107cfu/ml的变异链球菌菌液中，37℃厌氧培养24h，分别用去离子水(对照组)和洗漱产品(实验组)作用2min，每隔6h处理一次。24h后用pbs漂洗，利用细菌死活染色试剂盒及激光共聚焦显微镜检测细菌生物膜，结果如图7中c所示。可见，对照组的牙釉质表面内仍残留有大量活性变异链球菌菌落，而实验组牙釉质表面变异链球菌菌落数目明显减少，且死细菌数目较对照组明显增加。说明该洗漱产品能够显著地破坏变异链球菌的生物膜，再次证明了该洗漱产品对变异链球菌显著的抑制作用。
98.此外，以鱼腥草提取物、绿茶提取物和茶多酚(≥98％)为例，按照所述生产线和方法制备分别得到不同的鱼腥草提取物洗漱产品，对其进行变异链球菌生长的影响考察，包括以下实验步骤：
99.96孔板中每孔保证100μl终浓度为105～106cfu/ml菌液和不同浓度的鱼腥草提取物洗漱产品，厌氧条件培养24h后稀释一定比例，取5μl滴涂于固体培养基，厌氧条件培养24h考察鱼腥草提取物洗漱产品的抑菌效能，结果如图8a至图8b所示。5mg/ml的鱼腥草提取物与5mg/ml的绿茶提取物、1mg/ml的鱼腥草提取物与1mg/ml的茶多酚，分别得到的洗漱产品均显示对变异链球菌生长具有显著的抑菌作用(图8中a)，抑制率均接近为100％(图8中b)。
100.以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更、变型以及等效结构变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。