一种从辅酶Q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法与流程

技术特征：
1.一种从辅酶q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)母液培养：将根癌农杆菌稀释至1-5x103个/ml后接种0.1-1ml至斜面培养基上，将斜面培养基置于温度为30-34℃，相对湿度为45％-55％的培养箱中培养2-6d后，挑取1个菌落接种于母瓶培养基中，将母瓶培养基置于30-34℃，相对湿度为45％-55％，转速为220-350rpm的摇床中培养24-48h，得到母液菌种；2)种子罐培养：将母液菌种按1-3
‰
的接种量接种至种子罐中的种子罐培养基中，在30-35℃，罐压0.03-0.05mpa，通气比0.3-0.6，搅拌转速200-250rpm，培养24-48h，得到葡萄糖残量0.5-1.0g/l，菌体形状均一，无菌良好的一级种子液；3)发酵罐培养：将种子液按5-10％的接种量接种至发酵罐中的发酵培养基，在35-38℃，罐压0.03-0.06mpa，通气比0.6-0.8，搅拌转速110-140rpm，培养24-36h；4)发酵液离心：将发酵液8000-15000rpm低温离心10-20min，取沉淀获得菌体；5)高压匀浆：将菌体沉淀按固液比质量1:10-20的比例加入菌体裂解液溶解后，加入高压匀浆机进行菌体破碎，收集菌体破碎液；6)菌体破碎液离心：将菌体破碎液12000-15000rpm低温离心，弃去沉淀，取上清；7)真空冷冻干燥：对上清进行真空冷冻干燥，真空度小于133pa，温度低于-50℃，得到干燥的发酵粉；8)亚临界萃取：取干燥的发酵粉投入萃取罐中，将萃取罐内抽至真空状态后，加入萃取剂进行亚临界萃取，萃取结束后，将萃取所得含脂溶性成分的亚临界流体从萃取罐倒入脱溶罐中，进行加热减压蒸发，待溶剂脱除完毕，得粗提物；9)丙酮萃取：将粗提物加入到质量分数50-60％丙酮溶液中，4-10℃冷却结晶4-8h，随后0.45μm过滤，得滤饼；10)旋转蒸发：将滤饼用去离子水冲洗后旋转蒸发水分和有机溶剂，得到磷脂。2.根据权利要求1所述的一种从辅酶q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，其特征在于，所述步骤1)斜面培养基的组成如下：蛋白胨8g/l、酵母浸膏5g/l、氯化钠3g/l、琼脂18g/l,ph值7.2、阿特拉津0.05g/l，ph值7.4。3.根据权利要求1所述的一种从辅酶q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，其特征在于，所述步骤2)种子罐培养基的组成如下：蔗糖35g/l、玉米浆15g/l、酵母浸膏10g/l、nacl 3g/l,阿特拉津0.03g/l，ph值7.4。4.根据权利要求1所述的一种从辅酶q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，其特征在于，所述步骤3)发酵培养基的组成如下：蔗糖45g/l、玉米浆30g/l、酵母浸膏10g/l、nacl 3g/l、磷酸二氢钠0.5g/l、磷酸氢二钠0.5g/l、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.02g/l。5.根据权利要求1所述的一种从辅酶q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，其特征在于，所述步骤5)高压匀浆中，工作压力1200-1500bar,匀浆3-6次。6.根据权利要求1所述的一种从辅酶q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，其特征在于，所述步骤5)中的菌体裂解液组成如下：50mmol/l tris-cl ph6.8,100mmol/l dtt,2％sds,0.1％溴酚蓝,10％甘油。7.根据权利要求1所述的一种从辅酶q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，其特征在于，所述步骤8)亚临界萃取中，所述真空状态指压力小于133pa，所述萃取剂为乙醇。8.如权利要求1-7任一项所述的方法制备的磷脂。

技术总结
本发明属于菌体磷脂提取领域，具体公开了一种从辅酶Q10发酵粉中高效提纯磷脂的方法，包括以下步骤：1)母液培养、2)种子罐培养、3)发酵罐培养、4)发酵液离心、5)高压匀浆、6)菌体破碎液离心、7)真空冷冻干燥、8)亚临界萃取、9)丙酮萃取、10)旋转蒸发；本发明通过调整培养基成分和优化培养工艺，能够实现对根癌农杆菌菌体的高密度培养，获得大量菌体，发酵液中，辅酶Q10含量可达5.1g/L发酵液,磷脂含量可达13.5g/L发酵液,并且本方法还公开了可以高效的从辅酶Q10发酵粉中提取出高纯度的磷脂的分离提纯方法，变废为宝，经济效益好，并且步骤简单温和，对设备要求低，绿色环保。绿色环保。绿色环保。


技术研发人员：吴新明 蒋奇
受保护的技术使用者：湖南祥民制药有限公司
技术研发日：2022.10.18
技术公布日：2022/12/9