用于增强树突细胞和T细胞激活以及用于诱导Th-1免疫应答的体外方法和组合物与流程

技术特征：
要求专有权或特权的本发明的实施方案定义如下：1.一种用于产生富集过度活跃的成熟的树突细胞的细胞群的体外或离体方法，所述成熟的树突细胞对预定抗原产生增强的免疫应答，所述方法包括：提供未成熟的树突细胞；和在适合所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有干扰素γ(ifnγ)，和炎症激活脂质接触一段时间足以形成成熟的树突细胞；其中成熟的树突细胞群在与幼稚t细胞接触时对所述抗原产生增强的th1应答。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是poly i:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在添加所述炎症激活脂质之前使所述未成熟的树突细胞与所述树突细胞成熟剂接触至少约3小时，并且将所述树突状细胞培养另外约1至24小时或更长时间。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在使所述未成熟的树突细胞与所述树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和氧化的炎症激活脂质接触之前、同时或之后，使成熟树突细胞与预定抗原接触。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、细菌或肿瘤细胞裂解物、细菌或肿瘤细胞膜制剂、重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原。7.根据权利要求6的方法，其中所述重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原是细菌的、肿瘤相关的或肿瘤特异性抗原、肽抗原或分离的抗原。8.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：获得富集单核树突细胞前体的细胞群；和在存在树突细胞分化剂的情况下培养所述前体以形成所述未成熟的树突细胞。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述树突细胞分化剂是gm-csf，或gm-csf与白细胞
介素4(il-4)、白细胞介素7(il-7)、白细胞介素13(il-13)或白细胞介素15(il-15)的组合。10.根据权利要求8所述的方法，其中所述单核树突细胞前体分离自人受试者。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述增强的免疫应答是th1应答。12.一种用于对抗原产生增强的免疫应答的体外或离体方法，所述方法包括：提供未成熟的树突细胞；在适合所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有干扰素γ(ifnγ)，和预定抗原接触以形成成熟的树突细胞群；其中在成熟过程中成熟树突细胞摄取和加工抗原；将所述成熟的树突细胞制剂用于向个体施用；与在没有炎症激活脂质的情况下施用的经制剂的树突细胞组合物相比，将成熟的树突细胞制剂与有效量的炎症激活脂质一起施用以对预定抗原产生增强的th1免疫应答。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂是咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是polyi:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。14.根据权利要求12所述的方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。15.根据权利要求12所述的方法，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、细菌或肿瘤细胞裂解物、细菌或肿瘤细胞膜制剂、重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原。16.根据权利要求15的方法，其中所述重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原是细菌的、肿瘤相关的或肿瘤特异性抗原、肽抗原或分离的抗原。17.根据权利要求12所述的方法，进一步包括：获得富集单核树突细胞前体的细胞群；和在存在树突细胞分化剂的情况下培养所述前体以形成所述未成熟的树突细胞。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述树突细胞分化剂是gm-csf，或gm-csf与白细胞介素4(il-4)、白细胞介素13(il-13)或白细胞介素15(il-15)的组合。19.根据权利要求17所述的方法，其中所述单核树突细胞前体分离自人受试者。
20.根据权利要求12至19中任一项所述的方法，其中所述经制剂的成熟的树突细胞和所述炎症激活脂质同时或以任何顺序序贯施用。21.根据权利要求12至20中任一项所述的方法，其中所述增强的免疫应答是th1应答。22.一种用于产生过度激活的成熟的树突细胞群的体外或离体方法，所述方法包括：提供富集未成熟的树突细胞的细胞群；和在适合所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有干扰素γ(ifnγ)，和炎症激活脂质接触至足以形成过度激活的成熟的树突状细胞群的时间段。23.根据权利要求22所述的方法，进一步包括在与所述树突细胞成熟剂，有或没有干扰素γ(ifnγ)，或所述炎症激活脂质接触之前或同时，使所述未成熟的树突细胞与预定抗原接触。24.根据权利要求22所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是poly i:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。25.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油
‑ꢀ
3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。26.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括使所述未成熟的树突细胞与预定抗原接触。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、表达抗原的重组细胞，其中所述抗原是细菌抗原、病毒抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原，细菌或肿瘤细胞裂解物、细菌或肿瘤细胞膜制剂、重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原，其中所述重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原是细菌抗原、病毒抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原。28.根据权利要求22所述的方法，进一步包括：分离单核树突细胞前体；和在存在树突细胞分化剂的情况下培养所述前体以形成所述未成熟的树突细胞。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述分化剂是gm-csf，或gm-csf与il-4、il-13或il-15的组合。30.根据权利要求28所述的方法，其中所述单核树突细胞前体分离自人受试者。
31.根据权利要求22至30中任一项所述的方法，其中所述成熟的树突细胞的活性通过th1应答的增加进行测量，优选地，其中th1的增加通过以下项进行测量：由所述成熟的树突细胞诱导的效应t细胞和记忆t细胞产生的增加；由所述成熟的树突细胞诱导的cd4

和cd8

t细胞的终末分化和/或激活的增加；以及由所述成熟的树突细胞分泌il1β、il-2和/或tnfα的增加。32.通过权利要求22至31中任一项的方法产生的过度激活的树突细胞在制备用于治疗癌症、细菌感染或病毒感染的药物中的用途。33.一种用于激活抗原特异性t细胞的组合物，所述组合物包含：富集树突细胞的细胞群，在适合未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，用有效浓度的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和炎症激活脂质使所述富集树突细胞的细胞群成熟并持续足以形成过度活跃的成熟的树突细胞的时间段；和预定抗原；其中与用有效浓度的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，而未用所述炎症激活脂质成熟的成熟的树突细胞相比，富集过度活跃的成熟的树突细胞的细胞群产生增强的t细胞应答，优选地，其中所述增强的t细胞应答是th1应答。34.根据权利要求33所述的组合物，其中当在体外或体内测量时，所述富集过度活跃的成熟的树突细胞的细胞群产生增强的抗原特异性thl应答，并且其中增强的th细胞应答是效应t细胞和记忆t细胞生成增加；cd4

和cd8

t细胞的终末分化和/或激活增加；和/或il1β、il-2和/或tnfα的分泌增加。35.根据权利要求33所述的组合物，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是polyi:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。36.根据权利要求33所述的组合物，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。37.根据权利要求33所述的组合物，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、表达抗原的重组细胞、细菌或肿瘤细胞裂解物、细菌或肿瘤细胞膜制剂、重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原，其中所述重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原是细菌抗原、病毒抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原。
38.一种分离的、过度活跃的成熟的树突细胞群，所述细胞群包含：分离的过度活跃的成熟的树突细胞，在适合未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，所述分离的过度活跃的成熟的树突细胞通过使未成熟的树突细胞与有效浓度的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和炎症激活脂质接触足以形成过度活跃的成熟的树突细胞的时间段而产生；其中所述过度活跃的成熟的树突细胞产生增强的t细胞应答，优选地，其中所述增强的t细胞应答是当与幼稚t细胞接触时效应t细胞和记忆t细胞生成增加；cd4

和cd8

t细胞的终末分化和/或激活增加；和il1β的分泌增加。39.根据权利要求38所述的细胞群，进一步包含预定抗原。40.根据权利要求38所述的细胞群，进一步包含分离的t细胞。41.根据权利要求40所述的细胞群，其中所述t细胞是幼稚t细胞。42.根据权利要求38所述的细胞群，进一步包含分离的淋巴细胞。43.根据权利要求38所述的细胞群，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是polyi:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。44.根据权利要求38所述的细胞群，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。45.一种用于产生激活的抗原特异性t细胞的体外方法，所述体外方法包括：提供未成熟的树突细胞；使所述未成熟的树突细胞与预定抗原接触；在适合所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效浓度的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和炎症激活脂质接触足以形成过度活跃的成熟的树突细胞群的时间段；和使所述过度活跃的成熟的树突细胞与幼稚t细胞接触以形成激活的抗原特异性t细胞，与用树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，而未用所述炎症激活脂质激活的t细胞相比，所述激活的抗原特异性t细胞产生增加量的ifnγ。46.根据权利要求45所述的体外方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/
或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是polyi:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。47.根据权利要求45所述的体外方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。48.根据权利要求45所述的方法，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、表达抗原的重组细胞，其中所述抗原是细菌抗原、病毒抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原；细胞裂解物，其中所述细胞裂解物是细菌或肿瘤细胞裂解物；膜制剂，其中所述膜制剂是细菌或肿瘤细胞膜制剂；重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原，其中所述重组产生的抗原、肽抗原和分离的抗原是细菌抗原、病毒抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原。49.根据权利要求45所述的方法，其中所述未成熟的树突细胞在与所述预定抗原接触之前或同时与所述树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和所述炎症激活脂质接触。50.根据权利要求45所述的方法，进一步包括：分离单核树突细胞前体；和在存在树突细胞分化剂的情况下培养所述前体以形成所述未成熟的树突细胞。51.根据权利要求50所述的方法，其中所述树突细胞分化剂是gm-csf，或gm-csf与il-4、il-7、il-13或il-15的组合。52.根据权利要求50所述的方法，其中所述单核树突细胞前体分离自人受试者。53.根据权利要求45至52中任一项所述的方法，其中所述未成熟的树突细胞和t细胞对于彼此是自体的。54.一种组合物，所述组合物包含分离的或富集的过度活跃的成熟的树突细胞和药学上可接受的载体，其中与通过用包含有效浓度的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，的组合物而未用炎症激活脂质使未成熟的树突细胞成熟而制备的成熟的树突细胞相比，在适合树突细胞成熟的条件下，所述过度活跃的成熟的树突细胞产生更多il-1β，产生效应t细胞和记忆t细胞增加；并且产生cd4

和cd8

t细胞的终末分化和/或激活增加。55.一种用于在动物中产生增强的免疫应答的方法，提供未成熟的树突细胞；在足以使所述未成熟的树突细胞成熟以形成成熟的树突细胞的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和炎症激活脂质以及预定抗
原接触；与用树突细胞成熟剂和ifnγ而未用炎症激活脂质激活的t细胞相比，使所述成熟的树突细胞与幼稚t细胞接触以形成激活的t细胞，产生增加量的ifnγ和/或il-1β；和向所述动物施用过度激活的t细胞；其中所述增强的免疫应答优选地是th1应答。56.根据权利要求55所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是poly i:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。57.根据权利要求55所述的体外方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。58.根据权利要求55所述的方法，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、表达抗原的重组细胞，其中所述抗原是细菌抗原、病毒抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原，细胞裂解物，其中所述细胞裂解物是细菌细胞裂解物或肿瘤细胞裂解物，膜制剂，其中所述膜制剂是肿瘤细胞或细菌细胞膜制剂，重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原，其中所述重组产生的抗原、肽抗原和分离的抗原具有对细菌、病毒或肿瘤特异的或与其相关的表位。59.根据权利要求55所述的方法，其中所述未成熟的树突细胞在与所述预定抗原接触之前或同时与所述树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和所述炎症激活脂质接触。60.根据权利要求55所述的方法，进一步包括：从所述动物分离单核树突细胞前体；并且在存在树突细胞分化剂的情况下培养前体以形成所述未成熟的树突细胞。61.根据权利要求60所述的方法，其中所述树突细胞分化剂是gm-csf，或gm-csf与il-4、il-13或il-15的组合。62.根据权利要求55所述的方法，其中所述未成熟的树突细胞和t细胞对于所述动物是自体的或同种异体的。63.根据权利要求55所述的方法，其中所述未成熟的树突细胞和t细胞具有相同的mhc单倍型。64.根据权利要求55所述的方法，其中所述动物是人。
65.根据权利要求55所述的方法，其中所述施用是肠胃外施用。66.根据权利要求65所述的方法，其中肠胃外施用是静脉内、皮内、皮下、口服、经皮、经粘膜、瘤内或直肠施用。67.根据权利要求55所述的方法，其中将所述炎症激活脂质应用于施用部位。68.一种用于产生抗肿瘤免疫应答的体外方法，所述体外方法包括：提供未成熟的树突细胞；在适合诱导所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，接触；和在完全成熟之前分离成熟树突细胞；将所述成熟树突细胞制剂用于施用；瘤内施用所述成熟树突细胞；和肿瘤内或全身施用炎症激活脂质。69.根据权利要求66所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂是咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-1h-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是polyi:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。70.根据权利要求65所述的体外方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。71.根据权利要求68所述的方法，其中所述树突细胞获自皮肤、脾脏、骨髓、胸腺、淋巴结、脐带血或外周血。72.根据权利要求68所述的方法，其中所述树突细胞获自待治疗个体或获自与所述待治疗个体hla匹配的健康个体。73.一种用于在个体中产生抗肿瘤免疫应答的方法，所述方法包括：提供未成熟的树突细胞；在适合诱导所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与预定抗原、有效量的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和炎症激活脂质接触，并且持续一段时间足以使所述树突细胞摄取和加工所述预定抗原并使所述树突细胞成熟；分离成熟的树突细胞；将分离的成熟树突细胞制剂用于向所述个体施用；和
将所述成熟树突细胞直接瘤内施用于肿瘤。74.根据权利要求73所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是poly i:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。75.根据权利要求73所述的体外方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。76.根据权利要求73所述的方法，其中所述树突细胞获自皮肤、脾脏、骨髓、胸腺、淋巴结、脐带血或外周血。77.根据权利要求73所述的方法，其中所述树突细胞获自待治疗个体或获自与所述待治疗个体hla匹配的健康个体。78.根据权利要求73至77中任一项所述的方法，其中将所述成熟的树突细胞冷冻保存并在施用前解冻。79.一种用于在个体中产生增强的抗肿瘤免疫应答的方法，所述方法包括：提供未成熟的树突细胞；在适合诱导所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，接触；在完全成熟之前分离成熟树突细胞；将分离的成熟树突细胞制剂用于向所述个体施用；和向所述个体共同施用所述成熟树突细胞与炎症激活脂质。80.根据权利要求79所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是poly i:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。81.根据权利要求76所述的体外方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更
多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。82.根据权利要求79所述的方法，其中所述树突细胞获自皮肤、脾脏、骨髓、胸腺、淋巴结、脐带血或外周血。83.根据权利要求79所述的方法，其中所述树突细胞获自待治疗个体或获自与所述待治疗个体hla匹配的健康个体。84.根据权利要求79所述的方法，其中将所述分离的成熟树突细胞冷冻保存并在施用前解冻。85.根据权利要求79至84中任一项所述的方法，其中所述分离的成熟树突细胞和所述炎症激活脂质同时或以任何顺序序贯施用。86.根据权利要求85所述的方法，其中所述炎症激活脂质在同一组合物中，或在单独的组合物中。87.根据权利要求85所述的方法，其中所述炎症激活脂质在单独的组合物中并且局部施用于施用部位。88.一种用于产生对抗原产生增强的th1应答的成熟的树突细胞群的体外方法，所述体外方法包括：提供未成熟的树突细胞；和在适合所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有干扰素γ(ifnγ)，和炎症激活脂质接触足以形成所述成熟的树突状细胞群的时间；其中所述成熟的树突细胞群在与幼稚t细胞接触时对抗原产生增强的th1应答。89.根据权利要求88所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是toll样受体(tlr)激动剂，优选地，其中所述tlr激动剂是tlr2激动剂、tlr3激动剂、tlr4激动剂、tlr7激动剂和/或tlr8激动剂，或tlr9，更优选地，其中所述tlr4激动剂是lps或bcg，tlr7和/或tlr8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(r848)或1-(2-甲基丙基)-lh-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(r837)及其衍生物，所述tlr3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是poly i:c或poly[i]:poly[c(12)u]，或tlr9激动剂是含有已知诱导dc成熟的未甲基化的cpg基序的核酸序列，或其任何组合。90.根据权利要求85所述的方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxpapc)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pov-pc)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pgpc)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷e2)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(peipc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(hodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二
酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kodia-pc)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(hooa-pc)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(kooa-pc)。91.根据权利要求88至90中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括使所述未成熟的树突细胞与预定抗原接触。92.根据权利要求91所述的方法，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、细菌或肿瘤细胞裂解物、细菌或肿瘤细胞膜制剂、重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原。93.根据权利要求92所述的方法，其中所述重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原是细菌抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原、肽抗原或分离的抗原。94.根据权利要求88所述的方法，进一步包括在使所述未成熟的树突细胞与树突细胞成熟剂，有或没有ifnγ，和氧化的炎症激活脂质接触之前或同时使所述未成熟的树突细胞与预定抗原接触。95.根据权利要求88所述的方法，进一步包括：分离单核树突细胞前体；和在存在树突细胞分化剂的情况下培养所述前体以形成所述未成熟的树突细胞。96.根据权利要求95所述的方法，其中所述树突细胞分化剂是gm csf，或gm-csf与白细胞介素4(il-4)、白细胞介素13(il-13)或白细胞介素15(il-15)的组合。97.根据权利要求95所述的方法，其中所述单核树突细胞前体分离自人受试者。

技术总结
本公开提供了用于获得增强的抗原特异性Th1免疫应答的组合物和体外或离体方法。该组合物可以包含在体外产生的激活增强的树突细胞或T细胞。该方法包括使未成熟的树突细胞与包含树突细胞成熟剂、干扰素γ和炎症激活脂质的成熟剂接触，其可以产生过度激活的树突细胞。该方法可以进一步包括在成熟过程中使成熟的树突细胞与预定抗原接触。还提供了一种体外或离体方法，其中过度活跃的树突细胞可用于诱导幼稚T细胞激活，其中将激活的T细胞制剂用于向需要此类治疗的个体施用。向需要此类治疗的个体施用。


技术研发人员：M
受保护的技术使用者：西北生物治疗药物公司
技术研发日：2020.10.07
技术公布日：2022/12/8