一种抑菌促生长的发酵中药制剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及畜牧养殖技术领域，特别涉及一种抑菌促生长的发酵中药制剂及其制备方法。


背景技术：

2.目前，肉鸡养殖业中疫病频发和抗生素过量使用是当前我国肉鸡养殖业可持续发展面临的最严峻挑战之一。饲用抗生素禁用或减量化已成为国际社会共识。在全面“限抗、禁抗”的背景下，替抗产品成为肉鸡养殖业健康发展的迫切需求。益生菌与中药制剂兼备天然、安全、无残留、无污染等优点，因此，若能采用益生菌与中药制剂来开发具有抑菌促生长的发酵中药制剂，在肉鸡养殖业中将具有广阔的市场前景。


技术实现要素：

3.本发明提供了一种抑菌促生长的发酵中药制剂及其制备方法，本发明的发酵中药制剂对常见肠道致病菌均有抑制作用，同时还可促进肉鸡生长。
4.本发明技术方案如下：一种抑菌促生长的发酵中药制剂，所述抑菌促生长的发酵中药制剂由中药组合物和益生菌通过发酵制得；所述中药组合物包括五倍子、石榴皮、橡碗；所述益生菌包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母。
5.优选的，所述中药组合物的各组分的重量份为：五倍子20-50份、石榴皮20-30份、橡碗10-20份。
6.上述抑菌促生长的发酵中药制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液；（2）按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎，再将所述中药组合物的各组分混合均匀制得第一混合物，向所述第一混合物中加水，混合均匀制得第二混合物，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理，待冷却后得到中药混合物；（3）将所述中药混合物与发酵辅料按1:（0.2-0.3）混合均匀后，分别接入枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液，经发酵处理后，得到所述抑菌促生长的发酵中药制剂。
7.优选的，步骤（3）中，所述发酵辅料为玉米粉、麸皮或豆粕中的任意一种。
8.优选的，步骤（1）中，将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母分别按照1-2%的接种量接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化2h后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液。
9.优选的，步骤（2）中，向所述第一混合物中加水15-30重量份。
10.优选的，步骤（2）中，按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎至60-80目。
11.优选的，步骤（2）中，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理的参数为：使物料温度升至80-85℃，处理2h。
12.优选的，步骤（3）中，发酵处理的参数为：环境温度37℃，发酵3-5天。
13.优选的，步骤（3）中，所述枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液的添加量分别为所述中药混合物重量的（0.1-0.5）%、（0.1-0.5）%、（0.1-0.5）%、（0.1-0.5）%。
14.本发明的有益效果：1.本发明选择枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母4种益生菌进行发酵，芽孢杆菌和酵母菌产酶，可以促使中药组合物中的单宁酸的析出；植物乳杆菌、屎肠球菌利用中药混合物和发酵辅料发酵，产生乳酸等抑菌物质。
15.2.本发明的发酵中药制剂对常见肠道致病菌有抑制作用，特别是对金黄色葡萄球菌。
16.3.本发明的发酵中药制剂可促进肉鸡生长，提高饲料转化率。
具体实施方式
17.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施方式作进一步地详细描述。
18.实施例1一种抑菌促生长的发酵中药制剂，所述抑菌促生长的发酵中药制剂由中药组合物和益生菌通过发酵制得；所述中药组合物包括五倍子、石榴皮、橡碗；所述益生菌包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母。
19.所述中药组合物的各组分的重量份为：五倍子20份、石榴皮30份、橡碗17份。
20.上述抑菌促生长的发酵中药制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液；（2）按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎，再将所述中药组合物的各组分混合均匀制得第一混合物，向所述第一混合物中加水，混合均匀制得第二混合物，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理，待冷却后得到中药混合物；（3）将所述中药混合物与发酵辅料按1:0.2混合均匀后，分别接入枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液，经发酵处理后，得到所述抑菌促生长的发酵中药制剂。
21.步骤（3）中，所述发酵辅料为玉米粉。
22.步骤（1）中，将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母分别按照1.5%的接种量接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化2h后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液。
23.步骤（2）中，向所述第一混合物中加水24重量份。
24.步骤（2）中，按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎至70目。
25.步骤（2）中，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理的参数为：使物料温度升至85℃，处理2h。
26.步骤（3）中，发酵处理的参数为：环境温度37℃，发酵5天。
27.步骤（3）中，所述枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液的添加量分别为所述中药混合物重量的0.3%、0.5%、0.1%、0.3%。
28.实施例2一种抑菌促生长的发酵中药制剂，所述抑菌促生长的发酵中药制剂由中药组合物和益生菌通过发酵制得；所述中药组合物包括五倍子、石榴皮、橡碗；所述益生菌包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母。
29.所述中药组合物的各组分的重量份为：五倍子42份、石榴皮28份、橡碗11份。
30.上述抑菌促生长的发酵中药制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液；（2）按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎，再将所述中药组合物的各组分混合均匀制得第一混合物，向所述第一混合物中加水，混合均匀制得第二混合物，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理，待冷却后得到中药混合物；（3）将所述中药混合物与发酵辅料按1:0.23混合均匀后，分别接入枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液，经发酵处理后，得到所述抑菌促生长的发酵中药制剂。
31.步骤（3）中，所述发酵辅料为麸皮。
32.步骤（1）中，将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母分别按照1%的接种量接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化2h后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液。
33.步骤（2）中，向所述第一混合物中加水30重量份。
34.步骤（2）中，按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎至60目。
35.步骤（2）中，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理的参数为：使物料温度升至82℃，处理2h。
36.步骤（3）中，发酵处理的参数为：环境温度37℃，发酵4天。
37.步骤（3）中，所述枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液的添加量分别为所述中药混合物重量的0.1%、0.2%、0.4%、0.2%。
38.实施例3一种抑菌促生长的发酵中药制剂，所述抑菌促生长的发酵中药制剂由中药组合物和益生菌通过发酵制得；所述中药组合物包括五倍子、石榴皮、橡碗；所述益生菌包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母。
39.所述中药组合物的各组分的重量份为：五倍子50份、石榴皮20份、橡碗10份。
40.上述抑菌促生长的发酵中药制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液；（2）按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎，再将所述中药组合物的各组分混合均匀制得第一混合物，向所述第一混合物中加水，混合均匀制得第二混合物，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理，待冷却后得到中药混合物；（3）将所述中药混合物与发酵辅料按1:0.3混合均匀后，分别接入枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液，经发酵处理后，得到所述抑菌促生长的发酵中药制剂。
41.步骤（3）中，所述发酵辅料为豆粕。
42.步骤（1）中，将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母分别按照2%的接种量接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化2h后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液。
43.步骤（2）中，向所述第一混合物中加水16重量份。
44.步骤（2）中，按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎至80目。
45.步骤（2）中，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理的参数为：使物料温度升至80℃，处理2h。
46.步骤（3）中，发酵处理的参数为：环境温度37℃，发酵4天。
47.步骤（3）中，所述枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液的添加量分别为所述中药混合物重量的0.5%、0.4%、0.5%、0.1%。
48.实施例4一种抑菌促生长的发酵中药制剂，所述抑菌促生长的发酵中药制剂由中药组合物和益生菌通过发酵制得；所述中药组合物包括五倍子、石榴皮、橡碗；所述益生菌包括枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母。
49.所述中药组合物的各组分的重量份为：五倍子37份、石榴皮22份、橡碗20份。
50.上述抑菌促生长的发酵中药制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液；（2）按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎，再将所述中药组合物的各组分混合均匀制得第一混合物，向所述第一混合物中加水，混合均匀制得第二混合物，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理，待冷却后得到中药混合物；（3）将所述中药混合物与发酵辅料按1:0.27混合均匀后，分别接入枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液，经发酵处理后，得到所述抑菌促生长的发酵中药制剂。
51.步骤（3）中，所述发酵辅料为麸皮。
52.步骤（1）中，将所述枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母分别按照1.8%的接种量接种于灭菌后的独立培养基中培养，经保温活化2h后，分别制得枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液。
53.步骤（2）中，向所述第一混合物中加水15重量份。
54.步骤（2）中，按重量份分别称取所述中药组合物的各组分，并分别粉碎至80目。
55.步骤（2）中，向所述第二混合物通入蒸汽进行蒸汽加热处理的参数为：使物料温度升至83℃，处理2h。
56.步骤（3）中，发酵处理的参数为：环境温度37℃，发酵3天。
57.步骤（3）中，所述枯草芽孢杆菌活化液、植物乳杆菌活化液、屎肠球菌活化液和酿酒酵母活化液的添加量分别为所述中药混合物重量的0.4%、0.1%、0.2%、0.5%。
58.将实施例1-4所制得的抑菌促生长的发酵中药制剂进行抑菌和动物试验，试验处理具体如下：1.抑菌促生长的发酵中药制剂的抑菌试验大肠杆菌（e.coli） k88、k99、o139、o157 以及金黄色葡萄球菌、沙门氏菌6种肠道致病菌平板划线，37℃培养20h；挑取单菌落于mh液体培养基，置37℃振荡培养16h，培养结束后指示菌细菌数调整为od600=0.5。
59.分别称取实施例1-4所制得的抑菌促生长的发酵中药制剂5g，各两份，按照重量比1:5分别加入无菌蒸馏水和60%乙醇，涡旋5min，超声处理20min后再涡旋，调整ph至中性，离心，上清液备用。
60.取mh固体培养基，121℃灭菌20分钟，冷却至42℃，按菌液:培养基=500μl:100 ml分别加入指示菌菌液，混匀。含菌培养基倾注平板，使培养基厚度达4mm以上。待培养基凝固后，使用打孔器均匀打孔，每孔加入发酵中药制剂提取液200μl，4℃静置处理6h，37℃培养16h观察抑菌结果。水提法和醇提法抑菌结果表明，在所有的指示菌中，本发明所制得的抑菌促生长的发酵中药制剂对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好。本发明所制得的抑菌促生长的发酵中药制剂水提法对金黄色葡萄球菌抑菌效果最佳；与水提法相比，醇提法对大肠杆菌、沙门氏菌抑菌效果较好。
61.表1 本发明所制得的抑菌促生长的发酵中药制剂抑菌圈直径（水提法）表2 本发明所制得的抑菌促生长的发酵中药制剂抑菌圈直径（醇提法）
2.抑菌促生长的发酵中药制剂对817肉鸡生长性能的影响随机选取817肉鸡150只，按照公母各半的原则随机分为5组，对照组饲喂基础日粮，四组试验组（分别为实施例1、实施例2、实施例3、实施例4）均饲喂基础日粮 1kg/t本发明制得的抑菌促生长的发酵中药制剂，具体为：试验组（实施例1）：饲喂基础日粮 1kg/t实施例1制得的抑菌促生长的发酵中药制剂；试验组（实施例2）：饲喂基础日粮 1kg/t实施例1制得的抑菌促生长的发酵中药制剂；试验组（实施例3）：饲喂基础日粮 1kg/t实施例1制得的抑菌促生长的发酵中药制剂；试验组（实施例4）：饲喂基础日粮 1kg/t实施例1制得的抑菌促生长的发酵中药制剂；饲养试验阶段为1-35d。
62.试验结果显示，四组试验组（实施例1、实施例2、实施例3、实施例4）均无试验肉鸡死亡；与对照组相比，四组试验组（实施例1、实施例2、实施例3、实施例4）的平均日增重升高，料肉比降低。结果表明，本发明制得的抑菌促生长的发酵中药制剂可降低肉鸡死亡率，促进肉鸡生长。
63.表3 发酵中药制剂对817肉鸡生长性能的影响项目对照组实施例1实施例2实施例3实施例4起始数量（只）3030303030结束数量（只）2630303030只均采食量（g/只）1080.01250.41262.41212.61256.1平均日采食量（g/天/只）41.5441.6841.9640.4241.87平均日增重（g/天/只）21.9522.0722.3823.3022.29料肉比1.8921.8881.8751.7351.878本发明提供了一种抑菌促生长的发酵中药制剂，选择枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、屎肠球菌和酿酒酵母4种益生菌发酵，芽孢杆菌和酵母菌产酶，促使单宁酸的析出；植物乳杆菌、屎肠球菌利用中药混合物和发酵辅料发酵，产生乳酸等抑菌物质。发酵中药制剂对常见肠道致病菌有抑制作用，特别是金黄色葡萄球菌。发酵中药制剂可促进肉鸡生长，提高饲料转化率。
64.以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和
原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。