异黄酮类化合物在制备预防或治疗酒精性肝损伤或解酒保肝的药物中的用途的制作方法

1.本发明涉及医药领域，具体涉及一种异黄酮类化合物在制备预防或治疗酒精性肝损伤或解酒保肝的药物中的用途。


背景技术：

2.酒精性肝损伤，即酒精性肝病(alcoholic liver disease，ald)，是长期大量饮酒后酒精对肝脏产生毒性损伤并导致相关健康问题的疾病，在世界范围内ald发病率呈逐年上升趋势，因此备受关注。临床上将ald分为酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver，afl)、酒精性肝炎(alcoholic hepatitis，ah)、酒精性肝纤维化(alcoholic liver fibrosis，alf)和酒精性肝硬化(alcoholic cirrhosis，ac)。
3.酒精是亲神经物质，对中枢及周围神经可造成不可逆损害，饮酒对公共卫生的负担占全球疾病负担的5.1％。酒精使用障碍包括酒精滥用和酒精依赖，是过早死亡的主要危险因素之一，它可引起200多种疾病，包括神经精神类疾病、慢性疾病、癌症和致残性外伤。酒精使用障碍是导致酒精性肝损伤的最常见原因，可引起一系列肝脏疾病，如脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等。
4.多种黄酮类化合物被报道具有一定的解酒保肝效果，如菊花来源的黄酮、绿豆来源的黄酮以及杨梅来源的黄酮等。研究显示葛花来源的异黄酮如鸢尾苷和鸢尾苷元(鸢尾黄素)具有较好的保肝活性，并且鸢尾苷元的乙醇脱氢酶的激活效果优于鸢尾苷。
[0005][0006]
鸢尾黄素
[0007]
中国专利文献(cn1986556a)公开了一种6，7位成环的异黄酮化合物(5，3’，5
’‑
三甲氧基-6，7-亚甲二氧基异黄酮-4
’‑
o-β-d-葡萄糖)，并公开了这种异黄酮类化合物在防治雌激素水平低下、妇女更年期综合征中的应用。关于这种6，7位成环的异黄酮类化合物，目前未见其在治疗酒精性肝损伤或解酒保肝方面的报道。


技术实现要素：

[0008]
因此，本发明要解决的技术问题在于提供6，7位成环的异黄酮类化合物的新用途。
[0009]
本发明提供式(i)所示的异黄酮类化合物及其药学上可接受的盐在制备预防或治疗酒精性肝损伤或解酒保肝的药物中的用途，
[0010][0011]
其中：
[0012]
r1、r2、r3、r4彼此独立地选自氢、羟基、c
1-c8的烷基、c
3-c
10
的环烷基、c
1-c8的烷氧基或c
4-c
20
的糖基残基。
[0013]
进一步地，
[0014]
r1、r2、r3、r4彼此独立地选自氢、羟基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基或者选自由取代或未取代的中的至少一种所形成的糖基残基，其中，所述取代为上述基团上羟基中的氢被其他取代基取代。
[0015]
进一步地，
[0016]
r1、r2、r3、r4彼此独立地选自氢、羟基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基或者选自由由由中的至少一种所形成的糖基残基，其中，r1、r2、r3、r4彼此独立地选自上述糖基残基中的任意一个，或者选自两个及以上的同种或者不同种糖基残基的组合。
[0017]
进一步地，
[0018]
r1选自羟基、甲氧基或者由形成的糖基残基；
[0019]
r2、r3、r4彼此独立地选自氢、羟基、甲氧基或者由彼此独立地选自氢、羟基、甲氧基或者由彼此独立地选自氢、羟基、甲氧基或者由中的至少一种所形成的糖基残基，其中，r2、r3、r4彼此独立地选自上述糖基残基中的任意一个，或者选自两个及以上的同种或者不同种糖基残基的组合。
[0020]
进一步地，
[0021]
r1选自羟基或者甲氧基；
[0022]
r2选自氢、羟基或者甲氧基；
[0023]
r3选自羟基、甲氧基或者由选自羟基、甲氧基或者由中的至少一种所形成的糖基残基，其中，r3选自上述糖基残基中的任意一个，或者选自两个及以上的同种或者不同种糖基残基的组合；
[0024]
r4选自氢、羟基、甲氧基或者由形成的糖基残基。
[0025]
进一步地，
[0026]
所述异黄酮类化合物具有如下所示的结构：
[0027][0028]
chinensis by combining laser-microdissection with uhplc-q/tof-ms and uhplc
–
qqq-ms[j].talanta,2014,130:585-597.
[0042][0043]
实施例2
[0044]
取市售药材鸢尾(干燥)5kg，粉碎，用8倍重量的甲醇在室温下提取5天，提取两次，合并提取液，减压浓缩得到浸膏，将所得浸膏用hp-20大孔树脂进行柱层析，先后使用10％甲醇水溶液，50％甲醇水溶液以及90％甲醇水溶液进行洗脱，分别收集50％及90％甲醇洗脱组分，经过减压浓缩得到浸膏。
[0045]
将50％甲醇水溶液洗脱组分浸膏使用硅胶柱层析进行分离，先后使用氯仿/甲醇(100:1；50:1；20:1；10:1；5:1；3:1；2:1；1:1)以及纯甲醇进行洗脱，每个梯度洗脱三个柱体积，根据薄层色谱(tlc)检测结果合并相同斑点位置的洗脱液，减压浓缩除去溶剂得到fr1～fr8。
[0046]
将fr3使用反相硅胶进行柱层析，先后使用15％甲醇水溶液，25％甲醇水溶液，30％甲醇水溶液，40％甲醇水溶液，60％甲醇水溶液，95％甲醇水溶液进行洗脱，得到6个组分fr3-1～fr3-6，其中fr3-2经制备色谱分离(20％甲醇水溶液洗脱)得到化合物7和化合物10，fr3-3经制备色谱分离(20％甲醇水溶液洗脱)得到化合物6。
[0047]
将fr5使用反相硅胶进行柱层析，先后使用20％甲醇水溶液，30％甲醇水溶液，35％甲醇水溶液，40％甲醇水溶液，60％甲醇水溶液，95％甲醇水溶液进行洗脱，得到6个组分fr5-1～fr5-6，其中fr5-1经制备色谱分离(20％甲醇水溶液洗脱)得到化合物11，fr5-3经制备色谱分离(30％甲醇水溶液洗脱)得到化合物21，fr5-4经制备色谱分离(30％甲醇水溶液洗脱)得到化合物12。
[0048]
将90％甲醇水溶液洗脱组分浸膏使用硅胶柱层析进行分离，先后使用氯仿/甲醇/水(90:10:1；45:10:1；30:10:1；20:10:1；10:10:1)以及纯甲醇进行洗脱，每个梯度洗脱三个柱体积，根据tlc检测结果合并相同斑点位置的洗脱液，减压浓缩除去溶剂得到fr11～fr16，
[0049]
将fr12使用反相硅胶进行柱层析，先后使用20％甲醇水溶液，35％甲醇水溶液，40％甲醇水溶液，45％甲醇水溶液，70％甲醇水溶液，95％甲醇水溶液进行洗脱，得到6个组分fr12-1～fr12-6，其中fr12-2经制备色谱分离(20％甲醇水溶液洗脱)得到化合物17，fr12-4经制备色谱分离(40％甲醇水溶液洗脱)得到化合物9，fr12-5经制备色谱分离(60％甲醇水溶液洗脱)得到化合物19和化合物20。
[0050]
将fr14使用反相硅胶进行柱层析，先后使用30％甲醇水溶液，45％甲醇水溶液，
55％甲醇水溶液，70％甲醇水溶液，95％甲醇水溶液进行洗脱，得到5个组分fr14-1～fr14-5，其中fr14-2经制备色谱分离(20％甲醇水溶液洗脱)得到化合物13，fr14-3经制备色谱分离(40％甲醇水溶液洗脱)得到化合物14和化合物15，fr14-4经制备色谱分离(60％甲醇水溶液洗脱)得到化合物8。
[0051]
将fr15使用反相硅胶进行柱层析，先后使用35％甲醇水溶液，45％甲醇水溶液，70％甲醇水溶液，95％甲醇水溶液进行洗脱，得到4个组分fr15-1～fr15-4，其中fr15-3经制备色谱分离(60％甲醇水溶液洗脱)得到化合物16和化合物18。
[0052]
将上述制备得到的化合物分别通过hplc-ms以及1h-nmr、
13
c-nmr进行结构确认，结构确认数据参考如下文献：
[0053]
arisawa m,morita n,kondo y,et al.studies on constituents of iris genus plants.iv.the constituents of iris florentina l.(2)[j].chemical&pharmaceutical bulletin,1973,21(10):2323-2328.
[0054]
wollenweber e,et al.cancer chemopreventive in vitro activities of isoflavones isolated from iris germanica.[j].planta med 2003,69:15-20.
[0055]
杨阳,董晓芳,申美伦,et al.膜苞鸢尾和中亚鸢尾中抑制脂多糖诱导小鼠raw264.7细胞产生no的活性成分研究[j].中草药,2018,49(23):24-30.
[0056]
bukvicki d,novakovic m,ab ghani n,et al.secondary metabolites from endemic species\r,iris adriatica,trinajstic ex mitic(iridaceae)[j].natural product research,2017:1-4.
[0057]
yokosuka a,koyama y,mimaki y.chemical constituents of the underground parts of iris florentina and their cytotoxic activity[j].natural product communications,2015,10(6):955-958.
[0058]
qin m j,li r,wang x,et al.new isoflavonoid glycosides from the rhizomes of iris leptophylla lingelsh.[j].植物学报(英文版),2007,49(2):213-217.
[0059]
[0060][0061]
实验例
[0062]
1.主要试剂
[0063]
实施例1-2制备的化合物1-21；
[0064]
复方甘草酸苷片(乐普药业股份有限公司，国药准字h20073723)；alt、ast、tc、tg试剂盒(美国贝克曼库尔特有限公司)；
[0065]
mda试剂盒(南京建成生物工程研究所)，采用硫巴比妥酸比色法(tba)，按试剂盒要求检测。
[0066]
2.药物配制
[0067]
受试药物溶液：采用质量百分数为0.5％的羧甲基纤维素钠(cmc-na)的水溶液分别将化合物1-21配制成药物浓度为50mg/ml的受试药物溶液；
[0068]
鸢尾黄素溶液：采用质量百分数为0.5％的cmc-na的水溶液将鸢尾黄素配制成浓度为50mg/ml的鸢尾黄素溶液；
[0069]
复方甘草酸苷溶液：采用质量百分数为0.5％的cmc-na的水溶液将复方甘草酸苷配制成浓度为6mg/ml的复方甘草酸苷溶液。
[0070]
3.实验动物及饲养
[0071]
8周龄spf级雄性sd大鼠250只，体重180～220g，动物实验室温度为22℃～25℃，相对湿度为55％～70％。
[0072]
4.动物分组、造模及给药
[0073]
sd大鼠适应性喂养7天后，按体重随机分成25组，每组10只，分别为空白对照组，酒精模型组，实验组(包含本发明实施例1和2制备化合物1-21)，鸢尾黄素对照组及复方甘草酸苷阳性对照组。其中空白对照组10只，每天上午给予生理盐水，前2周给药剂量8ml/kg，后4周给药剂量为12ml/kg；剩余24组(240只)为造模小鼠，每天上午给予50％酒精，前2周给药剂量8ml/kg，后4周给药剂量为12ml/kg。
[0074]
造模2周后(即后4周)每天下午给予治疗药物，给药剂量10ml/kg，其中空白对照组和酒精模型组给予生理盐水，实验组(化合物组1-21)、鸢尾黄素对照组及复方甘草酸苷阳性对照组，分别给予受试药物溶液(化合物1-21)、鸢尾黄素溶液及复方甘草酸苷溶液，具体给药方式采用灌胃给药，各组处理方式如表1所示：
[0075]
表1实验各组处理方式
[0076][0077]
注：上午和下午的灌胃时间间隔约6h。
[0078]
5.指标检测和方法
[0079]
5.1给药后观察
[0080]
每天给药前进行观察，精神状态、运动清理、毛色、大便等情况。
[0081]
5.2生化指标
[0082]
末次灌胃后，禁食不禁水12h，称重后异氟烷麻醉，腹主动脉取血，分离全血，全自动生化分析仪(au480)进行检测血清谷草转氨酶(ast)、丙氨酸转氨酶(alt)、甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)；10％肝组织匀浆测定丙二醛(mda)。
[0083]
5.3脏器系数
[0084]
取血结束后，迅速解剖分离肝脏，冷生理盐水漂洗，滤纸拭干后称重，计算肝脏系数。
[0085]
6.实验结果
[0086]
6.1实验各组的生化指标和脏器系数的检测结果如表2所示。
[0087]
表2生化指标和脏器系数的检测结果
[0088][0089][0090]
注：*表示与模型对照组相比，p《0.05(t-test检验)；
[0091]
**表示与模型对照组相比，p《0.01(t-test检验)；
[0092]
***表示与模型对照组相比，p《0.001(t-test检验)。
[0093]
如表2所示，酒精模型组大鼠的各生化指标观察：血清谷草转氨酶(ast)、丙氨酸转氨酶(alt)、甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)、丙二醛(mda)相较于空白对照组均明显升高，肝脏指数也明显增加。本发明化合物1-21组大鼠的血清谷草转氨酶(ast)、丙氨酸转氨酶(alt)、甘油三酯(tg)、总胆固醇(tc)，丙二醛(mda)以及肝脏指数和酒精模型组相比，存在显著差异，均得到不同程度的改善，且改善效果优于类似化合物鸢尾黄素(鸢尾黄素组各项指标与模型对照组相比，均为p《0.05)；尤其是化合物1、2、3、5、6、7、8、10、13、14、15组大鼠和酒精模型组相比p《0.01或p《0.001，具有较好的改善效果。此外，化合物5、7、13对各指标的改善程度优于复方甘草酸苷阳性对照组。以上均证明本发明提供的6，7位成环异黄酮类化合物具有良好的治疗酒精性肝损伤的活性，具有很好的保肝效果。
[0094]
6.2给药后观察结果
[0095]
6.2.1观察酒精模型组大鼠结果
[0096]
酒精模型组大鼠出现不同程度的精神萎靡；摄食、饮水量减少，大便稀溏；大鼠毛色不光泽，稍有竖立情况出现，并且普遍出现用前爪挠嘴表现，醉酒表现：轻者走路不稳、动作呆板，重者翻倒，反射消失，个别大鼠出现呼吸急促。
[0097]
6.2.2观察实验组大鼠结果
[0098]
和酒精模型组相比，精神萎靡程度均有缓解，摄食饮水量和模型组相比减小幅度得到缓和，大便稀溏亦有改善；部分有毛色不光泽情况，前爪挠嘴频率和模型组相比大幅降低，几乎没有翻倒情况的醉酒重者。
[0099]
通过对酒精模型组和实验组大鼠的行为进行观察对比，证明本发明提供的6，7位成环异黄酮类化合物具有明显的解酒作用。
[0100]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。