利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法与流程

1.本发明涉及水产饲料技术领域，特别是涉及一种利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法。


背景技术：

2.发酵软颗粒是一种新型的发酵饲料，通过微生物发酵技术处理配合饲料，能促进动物采食，其优势如下：1）具有微生物及其代谢产物和配合饲料的全价营养效果；2）含有丰富的微生物发酵产生的初级代谢产物和次级代谢产物，能促进机体健康；3）含有大量的微生物细胞，进入动物体内后能调节动物肠道微生态，同时，这些微生物进入水体后还能起到一定的水质改善作用；4）短期内含有高活性的微生物分泌的酶，能提高发酵软颗粒的使用价值。
3.发酵软颗粒主要是通过乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌、真菌及一些酶制剂配合使用，但不同菌种的产酸能力、酶活力及在发酵料中保存的时间不同，因此，需要根据使用目的选择合适的发酵工艺。目前，发酵软颗粒产能低，很多发酵软颗粒需要长时间控温，能源消耗大。
4.近些年，发酵软颗粒在水产上，尤其是螃蟹、对虾等高经济价值的水产养殖品种上应用较为普遍。螃蟹软颗粒在没有标准化的机械设备制备过程中，无法进行物料灭菌处理，容易受到霉菌孢子的污染。评价发酵软颗粒优劣的指标包括：货架期、营养价值、发酵产总酸含量、有益菌数量、酸溶蛋白的含量等。螃蟹软颗粒在生产过程中需经高温处理，物料酸化导致后期制备菌种活性低、产酸能力弱，容易发霉，因此，发酵效果差、成品货架期短。


技术实现要素：

5.本发明针对上述技术问题，克服现有技术的缺点，提供一种利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，包括以下步骤：（1）采用植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母作为菌株，采用酸性蛋白酶作为酶制剂，进行菌种配比及活化，得到混合菌液；（2）将步骤（1）的混合菌液与水按比例稀释后备用；（3）将螃蟹配合饲料与步骤（2）的稀释混合菌液按比例混合，每2～3分钟搅拌一次，待所有菌液被颗粒饲料完全吸收后，初步制备完成；（4）在干净的薄膜上平铺步骤（3）的颗粒饲料，晾晒；（5）将步骤（4）的颗粒饲料进行称量，并装入带有单向透气阀的塑料袋中，封口保存；（6）将步骤（5）的颗粒饲料在26～28℃的温室下静置堆放发酵，堆放层数为3～6层，发酵7～10天后即为成品螃蟹用发酵软颗粒饲料。
6.本发明进一步限定的技术方案是：前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（1）中，
活化菌液包括三种：活化菌液1：植物乳杆菌、红糖、水，按1:1:8比例混合，搅拌活化0.5～1小时备用；活化菌液2：酿酒酵母、红糖、水，按1:1:8比例混合，搅拌活化0.5～1小时备用；活化菌液3：枯草芽孢杆菌、红糖、水，按1:1:8比例混合，通气搅拌活化1～2小时备用。
7.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（1）中，使用1份活化菌液1、5份活化菌液2、1份活化菌液3和1份酸性蛋白酶。
8.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（1）中，酸性蛋白酶在使用前加入。
9.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（2）中，混合菌液与水按1:80～100比例稀释。
10.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（3）中，螃蟹配合饲料与稀释混合菌液按1:0.35～0.38比例混合。
11.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（3）中，螃蟹配合饲料的组分如下：鱼粉30～40份、豆粕25～30份、玉米粉10～15份、骨粉15～20份、复合维生素0.1份、矿物添加剂2份、脱壳素0.1～0.15份，粘合剂1.5～2.0份。
12.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（3）中，螃蟹配合饲料的粒径为2.0～3.0mm。
13.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（3）中，螃蟹配合饲料的各项成分值如下：水10%～12%，粗蛋白36%～38%，粗脂肪3.5%～4.0%，粗纤维7.5%～8.0%，粗灰分17%～18%，赖氨酸1.6%～1.8%。
14.前所述的利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，步骤（4）中，平铺厚度为3～5厘米，晾晒1～2小时。
15.本发明的有益效果是：（1）本发明使用植物乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酸性蛋白酶配伍制备螃蟹用发酵软颗粒饲料，所制备出的软颗粒较常规方法具有更高的酸溶蛋白含量和乳酸含量，提高了发酵软颗粒料的易吸收性，缩短了制备周期，延长了货架期；（2）本发明使用酸性蛋白酶提高易吸收的小分子酸溶蛋白的含量，创新性地使用酸性蛋白酶提高发酵软颗粒中总酸的含量，获得更低ph值；（3）本发明使用产酸能力较强的植物乳杆菌作为乳酸菌菌种，同时使用产酶能力较强的枯草芽孢杆菌菌种进行组合发酵，两株在生长上具有协同作用。
具体实施方式
16.本实施例提供的一种利用菌酶协同作用快速制备螃蟹用发酵软颗粒饲料的方法，包括以下步骤：（1）采用植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母作为菌株，采用酸性蛋白酶作为酶制剂（5万u/g，在使用前加入），进行菌种配比及活化，得到混合菌液；（2）将步骤（1）的混合菌液与水按1:85比例稀释后备用；（3）将螃蟹配合饲料与步骤（2）的稀释混合菌液按1:0.36比例混合，每2.5分钟搅
拌一次，待所有菌液被颗粒饲料完全吸收后，初步制备完成；（4）在干净的薄膜上平铺步骤（3）的颗粒饲料，厚度为4厘米，晾晒2小时；（5）将步骤（4）的颗粒饲料进行称量，并装入带有单向透气阀的塑料袋中，每袋10kg，封口保存；（6）将步骤（5）的颗粒饲料在26℃的温室下静置堆放发酵，堆放层数为4层，发酵9天后即为成品螃蟹用发酵软颗粒饲料。
17.螃蟹配合饲料的组分如下：鱼粉30份、豆粕25份、玉米粉15份、骨粉20份、复合维生素0.1份、矿物添加剂2份、脱壳素0.15份，粘合剂1.5份。粒径为2.5mm。各项成分值如下：水10%，粗蛋白38%，粗脂肪3.8%，粗纤维7.8%，粗灰分18%，赖氨酸1.8%。
18.活化菌液1：植物乳杆菌、红糖、水，按1:1:8比例混合，搅拌活化1小时备用；活化菌液2：酿酒酵母、红糖、水，按1:1:8比例混合，搅拌活化0.5小时备用；活化菌液3：枯草芽孢杆菌、红糖、水，按1:1:8比例混合，通气搅拌活化1.5小时备用。
19.处理1：植物乳杆菌；处理2：植物乳杆菌：酵母菌=1:5；处理3：植物乳杆菌：枯草芽孢杆菌=1:1；处理4：植物乳杆菌：枯草芽孢杆菌：酿酒酵母=1:1:5；处理5：植物乳杆菌：酸性蛋白酶=1:10；处理6：植物乳杆菌：酵母菌：酸性蛋白酶=1:5:10；处理7：植物乳杆菌：枯草芽孢杆菌：酸性蛋白酶=1:1:10；处理8：植物乳杆菌：枯草芽孢杆菌：酿酒酵母：酸性蛋白酶=1:1:5:10。
20.处理1使用活化菌液1；处理2 使用1份活化菌液1、5份活化菌液2；处理3使用1份活化菌液1、1份活化菌液3；处理4使用1份活化菌液1、1份活化菌液2、5份活化菌液3；处理5使用1份活化菌液1、1份酸性蛋白酶；处理6使用1份活化菌液1、5份活化菌液2、1份酸性蛋白酶；处理7使用1份活化菌液1、1份活化菌液3、1份酸性蛋白酶；处理8使用1份活化菌液1、5份活化菌液2、1份活化菌液3、1份酸性蛋白酶。
21.（一）螃蟹发酵软颗粒中微生物菌群数检测采用稀释涂布平板的方法，检测15天后发酵料中微生物的数量。
22.乳酸菌和凝结芽孢杆菌检测使用mrs培养基平板，培养基组成为(1l)：蛋白胨10.0g，牛肉粉5.0g，葡萄糖20.0g，酵母粉4.0g，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.2g，柠檬酸三铵2.0g，硫酸锰0.05g，吐温801ml，琼脂粉15.0g。灭菌条件，121℃、15min。
23.芽孢杆菌使用营养琼脂培养基，培养基组成为（1l）：蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，琼脂粉15.0g。121℃、20min。
24.酵母菌使用虎红培养基，培养基成分为(1l)：蛋白胨5.0g，磷酸二氢钾1.0g，葡萄糖10.0g，孟加拉红（虎红）0.033g，硫酸镁0.5g，琼脂18.5g，氯霉素0.1g。
25.（二）螃蟹发酵软颗粒中ph值检测
10g软颗粒，粉碎后加入40ml蒸馏水，搅拌混匀，静置30min，检测。
26.（三）螃蟹发酵软颗粒中酸溶蛋白含量检测使用三氯乙酸浸提，再使用凯氏定氮法检测酸溶蛋白含量。
27.表1 15天后不同处理发酵料的理化参数与其它组别相比较，使用植物乳杆菌、植物乳杆菌和芽孢杆菌、植物乳杆菌和酸性蛋白酶、植物乳杆菌和芽孢杆菌及酸性蛋白酶能够获得更低ph值的发酵软颗粒，发酵产生的酸含量更多。同时，这几种方法获得的发酵软颗粒中乳酸菌活菌数更多，酸溶蛋白含量也更高，其中，使用植物乳杆菌、芽孢杆菌和酸性蛋白酶组合处理的发酵软颗粒酸溶蛋白含量最高，酸性蛋白酶提高了发酵总酸的含量。
28.除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。