石胆酸的用途

1.本发明涉及一种已知化合物
─
石胆酸的用途。


背景技术：

2.胆汁酸是胆汁里的一个有效成分，是参与胆汁消化功能的重要成分之一。其含量变化在肝脏病诊断中具有重要的参考价值，已公开的文献中披露胆汁酸具有抑制肿瘤的效果。另，中国发明专利申请202111019726.6公开胆石酸具有抗金葡菌mrsa和mssa、大肠埃希菌esbls 、大肠埃希菌esbls-和铜绿假单胞菌的抑菌活性。本发明的石胆酸是肠道中最重要的次级胆汁酸之一，其分子式为：c
24h40
o3，结构式如下式所示：
3.

技术实现要素：

4.本发明公开石胆酸的一种用途。
5.石胆酸c
24h40
o3在制备抗婴儿链球菌atcc 700779的药物中应用。
6.本发明首次发现了石胆酸在制备抗婴儿链球菌产品中的应用；实验表明，该产品具有良好的抑制婴儿链球菌atcc 700779活性。
7.据国外报道，老年人急性脑梗死病人或者呼吸道感染sars-cov-2的病人的粪便婴儿链球菌(streptococcus_infantis)丰度均升高，说明婴儿链球菌与疾病相关([1]analysis of microbiota in elderly patients with acute cerebral infarction.[2]depicting sars-cov-2faecal viral activity in association with gut microbiota composition in patients with covid-19),因此开发针对婴儿链球菌的药物具有重要的参考价值。
[0008]
本发明涉及的石胆酸，是人体中正常组成部分，研究表明，石胆酸对婴儿链球菌atcc 700779具有良好的抑制作用，为临床防控婴儿链球菌提供了新的手段。。
附图说明
[0009]
图1：石胆酸浓度与婴儿链球菌生长抑制率关系图。
[0010]
图2：不同氯霉素浓度与缓症链球菌生长抑制率关系图。
具体实施方式
[0011]
本发明结合以下的石胆酸抑菌实验相关内容解说。
[0012]
(一)供试品及对照
[0013]
1.1供试药物
[0014]
石胆酸，市售品。
[0015]
供试品临用前用乙醇配制成最大浓度20mg/ml，依次对倍稀释。
[0016]
1.2对照药品
[0017]
氯霉素，市售品。
[0018]
(二)测试菌株及其培养方法
[0019]
2.1菌株：婴儿链球菌atcc 700779。
[0020]
2.2菌种来源：购于北京百欧博伟生物技术有限公司。
[0021]
2.3培养条件：todd-hewitt broth(thb)，37℃孵育24h-48h。
[0022]
2.4菌种开启接种并培养
[0023]
用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，用无菌吸管吸取0.3ml的无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在哥伦比亚血琼脂培养基上，37℃培养24小时后，挑取单个菌落于液体培养基中在相同的培养条件下培养增菌。
[0024]
2.5菌液工作液的准备
[0025]
当od600值达到0.5左右(约109cfu/ml)，经thb肉汤梯度稀释(0、10、100、1000、10000、100000、10000倍)后，取100μl菌悬液接种于固体培养基上，培养24h后计数活菌数，计算菌悬液浓度，再将此混悬菌液进行稀释，使菌悬液最终浓度约为2
×
106cfu/ml。菌种操作均在无菌条件下进行，实验完毕，所有耗材经灭菌再做丢弃处理。
[0026]
三、抑菌实验
[0027]
抑制50％受试菌所需最低抑菌浓度的测定(mic50)
[0028]
3.1测试方法：采取微量肉汤稀释法，进行mic50的测定。
[0029]
实验分为阳性对照组(即不含药物的菌悬液)、阴性对照组(含溶媒乙醇的培养基)和实验组(含不同浓度的石胆酸菌悬液)。以上各组均设置3个平行组。将浓度为50μg/ml的石胆酸实验液按对倍稀释溶于液体培养基中，使其终浓度为50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml。浓度为2
×
106cfu
·
ml-1
菌悬液与各组药液按比例1∶1各100μl，分别接种于无菌96孔板中，使菌悬液的终浓度为1
×
106cfu/ml(含105cfu/孔)，置于适当的培养条件下培养20h。同时设置对照品氯霉素，使其终浓度分别为32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0μg/ml。培养结束后，在黑色背景下进行肉眼观察，平皿内未见细菌生长的最低药物浓度即为石胆酸的最低抑菌浓度(mic)。所有菌种的ic测定实验重复3次。悬浮菌体测od600值，不同浓度的供试品及对照抑菌率的计算方法：抑菌率(％)＝1-(供试品od值—阴性对照od值)/(阳性对照od值—阴性对照od值)
×
100％。通过曲线拟合得函数计算而得ic50。
[0030]
3.2结果判断
[0031]
本次试验结果见表1，抑制率参见图1。当阳性对照孔(即不含药物)内细菌明显生长，试验才有意义。结果显示，阳性对照孔(即不含药物)内细菌正常生长，溶媒对照培养基孔无菌生长。对照品氯霉素对缓症链球菌的mic值为4μg/ml，参见表2和图2，符合美国临床实验室标准化委员会(national committee for clinical library standardization,
nccls)2001年的《抗微生物药物敏感试验的执行标准：第十一版信息增刊》m100-s11中氯霉素对缓症链球菌≤4μg/ml的标准，说明本实验方法是可靠的。
[0032]
统计结果表明：石胆酸对受试的婴儿链球菌的ic50为1.14μg/ml。结果表明，表别石胆酸有良好的抑制婴儿链球菌活性，研究结果表明，表别石胆酸为临床防控婴儿链球菌提供了新的手段。
[0033]
表1：不同浓度石胆酸对婴儿链球菌生长影响的吸光值测定
[0034][0035]
表2：不同浓度氯霉素对缓症链球菌生长影响的吸光值测定
[0036][0037]


技术特征：
1.石胆酸在制备抗婴儿链球菌atcc 700779的药物中应用。

技术总结
本发明公开已知化合物石胆酸在制备抗婴儿链球菌ATCC700779的药物中应用，实验表明，该产品具有良好的抑制婴儿链球菌ATCC700779活性。本发明的石胆酸，是人体中正常组成部分，研究表明，石胆酸对婴儿链球菌ATCC700779具有良好的抑制作用，为临床防控婴儿链球菌提供了新的手段。新的手段。


技术研发人员：王帅 郭爱疆 王玉桂
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：2022.08.25
技术公布日：2022/11/22