大分子非特异性清除测定的制作方法

技术特征：
1.一种用于确定抗体的非特异性清除的方法，所述方法包括以下步骤：a)将缀合至ph敏感性荧光染料的所述抗体与原代人内皮细胞一起孵育，以及b)确定步骤a)的所述原代人内皮细胞的荧光强度，其中如果在步骤b)中确定的所述原代人内皮细胞的所述荧光强度高于在不存在所述抗体的情况下确定的所述原代人内皮细胞的荧光强度，则检测到所述抗体的非特异性清除。2.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括以下步骤：c)确定未与所述抗体一起孵育/在不存在所述抗体的情况下的所述原代人内皮细胞的所述荧光强度。3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在所述荧光强度的所述确定之前，洗涤所述原代人内皮细胞。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在所述染料的相同的浓度下并且使用相同激发波长所确定，所述染料在为约7的生理ph与在ph4至5范围内的酸性ph之间具有约10倍的荧光强度变化。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述染料是式i的phab。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述染料在残基297处(根据kabat编号)缀合至所述抗体。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述染料经由式ii的磺基dbco-peg4-胺接头缀合至所述抗体。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述染料缀合至接头，并且所述接头缀合至所述抗体并且具有式iii的结构。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述荧光强度是通过facs以确定荧光最大值的移位来确定的。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述荧光强度是通过facs确定的几何平均荧光强度。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述原代人内皮细胞是原代人肝内皮细胞。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述孵育持续最长达4小时。13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述孵育至少持续0.5小时。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述抗体具有人igg1或igg4亚类的fc区。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述抗体是双特异性抗体。

技术总结
本文报道了一种用于确定抗体的非特异性清除的方法，所述方法包括以下步骤：将缀合至pH敏感性荧光染料的所述抗体与原代人内皮细胞一起孵育，以及确定所述原代人内皮细胞的荧光强度，其中所述原代人内皮细胞的所述荧光强度相对于背景水平的增加指示所述抗体的非特异性清除。异性清除。


技术研发人员：A-L
受保护的技术使用者：豪夫迈
技术研发日：2021.04.06
技术公布日：2022/11/22