测定设备的制作方法

1.本文提供了涉及侧流测定盒的技术以及相关的方法、试剂盒、系统及用途，以提供用于检测患者样品中的病原体抗原和/或对病原体抗原具有特异性的抗体的测定法。


背景技术：

2.人病原体(例如，微生物诸如病毒、原核生物(例如细菌)和真核生物(例如，真菌和原生动物寄生虫))在全球引起人疾病和数以亿计的死亡。虽然存在防止患上许多种人病原体以及死于许多种人病原体的治疗，但它们的有效性通常依赖于及时诊断以鉴定病原学因子并确定适当的治疗过程。因此，需要用于鉴定致病因子的快速测试设备。


技术实现要素：

3.侧流测定法提供了使用抗原-抗体相互作用(例如，使用免疫色谱法)在短时间内定性检测和/或定量测量分析物的技术。这些测试通常使用侧流测定测试条形式的测定设备或者侧流测定测试条被固定在塑料盒内的设备。参见，例如，国际专利申请公开第wo2011102563a1号；美国专利第8,828,739号，每个专利都通过引用方式并入本文。包括侧流测定测试条的测定设备，提供了用于检测人病原体(例如，来自人病原体的抗原和/或对抗来自人病原体的抗原而产生的人抗体)的快速床旁测定。本文提供的技术涉及对测定设备的改进。特别地，本文提供的技术涉及测定设备(例如，测试盒包括盒(例如，塑料盒)和侧流测定测试条)以检测患者的感染(例如，患者的病原性(例如，病毒性、细菌性、真菌性、寄生性)感染)，例如，以检测来自患者的样品中的病原性(例如，病毒性、细菌性、真菌性、寄生性)抗原和/或以检测对病原性(例如，病毒性、细菌性、真菌性、寄生性)抗原有特异性的抗体。
4.例如，在一些实施方案中，该技术提供了测定设备，所述测定设备包括如本文描述的侧流测定测试条和被配置成向侧流测定测试条提供经计量的样品的毛细管组件。在一些实施方案中，所述测定设备包括与样品接收区(例如，样品采集端口)连通的可压低的空气室和毛细管组件。在一些实施方案中，所述测定设备包括将样品接收区(例如，样品采集端口)连接至缓冲液孔的毛细管，并且可压低的空气室提供经计量的样品到缓冲液孔。
5.在一些实施方案中，该技术提供了如本文描述的测定设备、刺血针或扎手指的其他设备，并且提供血样和样品转移设备(诸如毛细管、样本滴管或移液管)。在一些实施方案中，该技术提供了包括如本文描述的测定设备、刺血针或扎手指的其他设备的试剂盒，并且提供血样和样品转移设备(诸如毛细管、样本滴管或移液管)。
6.在一些实施方案中，该技术提供了自测测定设备(例如，用于检测抗病原体的igg抗体)和被配置成提供经计量的样品的毛细组件。在一些实施方案中，所述自测测定设备包括与样品接收区连通的可压低的空气室。在一些实施方案中，所述自测测定设备包括将样品接收区连接至缓冲液孔的毛细通道。
7.因此，在一些实施方案中，该技术涉及用于检测对病原体有特异性的人igg抗体
和/或对病原体有特异性的人igm抗体的测定设备。例如，在一些实施方案中，该技术提供了这样的测定设备，所述测定设备包括来自病原体的重组抗原、抗人igg抗体以及抗人igm抗体(例如，在一些实施方案中，该测定设备包括包含来自病原体的重组抗原的侧流测定测试条、抗人igg抗体以及抗人igm抗体)。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗人igm抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述重组抗原包含标签。在一些实施方案中，所述重组抗原包括胶体金标签。在一些实施方案中，所述重组抗原包括乳胶珠标签。在一些实施方案中，所述测定设备包括包含抗人igg抗体的第一测试线和包含抗人igm抗体的第二测试线。在一些实施方案中，第一侧流测定测试条包含第一测试线，并且第二侧流测定测试条包含第二测试线。在一些实施方案中，一个侧流测定测试条包含第一测试线和第二测试线。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是小鼠抗体。在一些实施方案中，所述抗人igm抗体是小鼠抗体。在一些实施方案中，所述测定设备进一步包括对照(例如，在一些实施方案中，所述测定设备包括包含对照的侧流测定测试条)。在一些实施方案中，所述对照是包含标签的兔igg。在一些实施方案中，所述测定设备包括包含抗兔抗体的对照线(例如，在一些实施方案中，所述测定设备包括包含抗兔抗体的侧流测定测试条)。在一些实施方案中，所述抗兔抗体是igg。在一些实施方案中，所述抗兔抗体是山羊抗体。在一些实施方案中，所述测定设备包括标签垫，其中所述标签垫包含来自病原体的重组抗原(例如，在一些实施方案中，所述测定设备包括包含标签垫的侧流测定测试条，其中所述标签垫包含来自病原体的重组抗原)。
8.在一些实施方案中，该技术提供了用于检测病原体的测定设备。例如，在一些实施方案中，该技术提供了包含第一抗病原体抗体和第二抗病原体抗体的测定设备(例如，在一些实施方案中，所述测定设备包括包含第一抗病原体抗体和第二抗病原体抗体的侧流测定测试条)。在一些实施方案中，所述第一抗病原体抗体被固定(例如，在一些实施方案中，所述第一抗病原体抗体被固定在侧流测定测试条上)。在一些实施方案中，所述第二抗病原体抗体包含标签。在一些实施方案中，所述第一抗病原体抗体和所述第二抗病原体抗体识别该抗原的不同表位。在一些实施方案中，所述测定设备包括样品垫，并且样品垫包含所述第二抗病原体抗体(例如，在一些实施方案中，所述测定设备包括包含样品垫的侧流测定测试条，并且所述样品垫包含所述第二抗病原体抗体)。在一些实施方案中，所述侧流设备包括测试线，并且所述测试线包含所述第一抗病原体抗体(例如，在一些实施方案中，所述测定设备包括包含测试线的侧流测定测试条，并且所述测试线包含所述第一抗病原体抗体)。
9.本文描述的技术还提供了用于检测对病原体有特异性的igg抗体和/或igm抗体的方法的实施方案。例如，在一些实施方案中，该技术提供了这样的方法，所述方法包括提供包含来自病原体的重组抗原、抗人igg抗体以及抗人igm抗体的测定设备(例如，测定设备包括侧流测定测试条)；使血样与所述测定设备接触；以及观察第一测试线处指示样品中存在对所述病原体有特异性的igg抗体的可检测信号和/或观察第二测试线处指示样品中存在对所述病原体有特异性的igm抗体的可检测信号。在一些实施方案中，所述测定设备包括包含来自病原体的重组抗原、抗人igg抗体以及抗人igm抗体的侧流测定测试条。在一些实施方案中，该方法包括使血样与所述侧流测定测试条接触；以及观察侧流测定测试条的第一测试线处指示样品中存在对所述病原体有特异性的igg抗体的可检测信号和/或观察侧流测定测试条的第二测试线处指示样品中存在对所述病原体有特异性的igm抗体的可检测信
号。
10.在一些实施方案中，第一侧流测定测试条包括第一测试线，并且第二侧流测定测试条包括第二测试线。在一些实施方案中，一个侧流测定测试条包括第一测试线和第二测试线。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗人igm抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述重组抗原包含标签。在一些实施方案中，所述重组抗原包括胶体金标签。在一些实施方案中，所述重组抗原包括乳胶珠标签。
11.在一些实施方案中，所述测定设备包括包含所述抗人igg抗体的第一测试线，并且测定设备包括包含所述抗人igm抗体的第二测试线(例如，在一些实施方案中，所述测定设备包括包含所述抗人igg抗体的侧流测定测试条，并且测定设备包括包含第二测试线的侧流测定测试条，所述第二测试线包含所述抗人igm抗体)。在一些实施方案中，第一侧流测试条包含所述第一测试线，并且第二侧流测试条包含所述第二测试线。在一些实施方案中，一个侧流测试条包含所述第一测试线和所述第二测试线。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是小鼠抗体。在一些实施方案中，所述抗人igm抗体是小鼠抗体。
12.在一些实施方案中，该技术提供了用于检测病原体的方法。例如，在一些实施方案中，方法包括提供包含第一抗病原体抗体和第二抗病原体抗体的测定设备(例如，包括侧流测定测试条)；使血样与所述侧流设备接触；以及观察测试线处指示样品中存在所述病原体的可检测信号。在一些实施方案中，所述侧流测定测试条包含所述第一抗病原体抗体和所述第二抗病原体抗体，并且方法包括使血样与所述侧流测定测试条接触，以及观察侧流测定测试条的测试线处指示样品中存在对所述病原体的可检测信号。在一些实施方案中，所述第一抗病原体抗体被固定。在一些实施方案中，所述第二抗病原体抗体包含标签。在一些实施方案中，所述第一抗病原体抗体和所述第二抗病原体抗体识别该抗原的不同表位。在一些实施方案中，样品垫(例如，侧流测定测试条的样品垫)包含所述第二抗病原体抗体。在一些实施方案中，测试线(例如，侧流测定测试条的测试线)包括所述第一抗病原体抗体。
13.该技术可用于检测对病原体有特异性的人igg抗体。在一些实施方案中，该技术涉及使用如本文描述的测定设备(例如，包括侧流测定测试条)来检测对病原体有特异性的人igg抗体。该技术可用于检测对病原体有特异性的人igm抗体。在一些实施方案中，该技术涉及使用如本文描述的测定设备(例如，包括侧流测定测试条)来检测对病原体有特异性的人igm抗体。
14.在一些实施方案中，该技术提供了包含重组病原体抗原和抗人igg抗体的测定设备(例如，测定设备包括侧流测定测试条)。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含标签。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含胶体金标签。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含乳胶珠标签。在一些实施方案中，所述测定设备(例如，测定设备包括侧流测定测试条)包括包含所述抗人igg抗体的测试线。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是小鼠抗体。在一些实施方案中，所述测定设备(例如，测定设备包括侧流测定测试条)进一步包括对照。在一些实施方案中，所述对照是包含标签的兔igg。在一些实施方案中，所述测定设备(例如，测定设备包括侧流测定测试条)进一步包括包含抗兔抗体的对照线。在一些实施方案中，所述抗兔抗体是igg。在一些实施方案中，所述抗兔抗体是山羊抗体。在一些实施方案中，所述测定设备包括标签垫，并且所述标签垫包含所述重组病原体抗原。
15.在一些实施方案中，所述测定设备包括包含重组病原体抗原和抗人igg抗体的侧流测定测试条。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含标签。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含胶体金标签。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含乳胶珠标签。在一些实施方案中，所述侧流测定测试条包含包含所述抗人igg抗体的测试线。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是小鼠抗体。在一些实施方案中，所述侧流测定测试条进一步包含对照。在一些实施方案中，所述对照是包含标签的兔igg。在一些实施方案中，所述侧流测定测试条进一步包含包含抗兔抗体的对照线。在一些实施方案中，所述抗兔抗体是igg。在一些实施方案中，所述抗兔抗体是山羊抗体。在一些实施方案中，所述侧流测定测试条包括标签垫，并且所述标签垫包含所述重组病原体抗原。
16.在一些实施方案中，该技术提供了用于检测对病原体有特异性的igg抗体的方法。例如，在一些实施方案中，方法包括提供包含重组病原体抗原和抗人igg抗体的测定设备；使血样与所述测定设备接触；以及观察测试线处指示样品中存在对所述病原体有特异性的igg抗体的可检测信号。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含标签。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含胶体金标签。在一些实施方案中，所述重组病原体抗原包含乳胶珠标签。在一些实施方案中，所述测定设备包括包含所述抗人igg抗体的测试线。在一些实施方案中，所述抗人igg抗体是小鼠抗体。
17.在一些实施方案中，该技术提供了如本文描述的测定设备检测对病原体有特异性的人igg抗体的用途。在一些实施方案中，该技术提供了如本文描述的测定设备(例如，用于检测抗病原体抗体)检测所述病原体的用途。
18.例如，在一些实施方案中，该技术提供了包括侧流测定测试条的测定设备；毛细管包括大端、中心部分和小端；与所述毛细管的小端流体连通的样品采集端口；与所述毛细管的大端和与所述侧流测定测试条流体连通的缓冲液孔；与所述毛细管的中心部分流体连通的可压低的室；其中所述可压低的室适合移动所述毛细管中的样品到所述缓冲液孔中。在一些实施方案中，所述测定设备进一步包括这样的壳体，所述壳体包括经其可看到所述毛细管的至少一部分的信号窗；耦接到所述可压缩室的转移按钮；与所述缓冲液孔流体连通的缓冲液孔；以及经其可看到所述侧流测试条的至少一部分的测试结果查看窗。在一些实施方案中，抑制所述可压低的室使所述毛细管中经计量的样品移动到所述缓冲液孔中。在一些实施方案中，所述处于扩展态的可压低的室包含空气，并且所述处于压低态的可压低的室将空气置换到所述毛细管中以移动样品到所述缓冲液孔中。在一些实施方案中，提供缓冲液到所述缓冲液孔中提供所述缓冲液孔中的缓冲液，所述缓冲液孔中的所述缓冲液与样品混合以提供经缓冲的样品，并且所述经缓冲的样品接触所述侧流测定测试条以启动侧流测定。在一些实施方案中，所述侧流测定测试条包含经标记的重组抗原；以及抗人抗体。在一些实施方案中，所述抗人抗体被固定在所述侧流测试条上。在一些实施方案中，所述侧流测定测试条包含第一抗体和第二抗体。在一些实施方案中，所述第一抗体被固定在所述侧流测试条上，并且所述第二抗体包含标签。基于本文中获得的教义，额外的实施方案对相关领域的技术人员将是显而易见的。
附图说明
19.本发明技术的这些和其它特征、方面和优点将可根据以下附图来更好地理解。
20.图1是用于检测对抗样品中病原体的igg和/或igm抗体的设备的示意图。101：样品垫；102：硝酸纤维素膜；103：吸附剂垫；104：塑料背衬；105：标签垫；106：测试线；107：对照线。流动方向是由箭头108指示。
21.图2a是如本文描述的自测设备的实施方案200a的示意图。250：上面板；260：下面板；201：底座；202：血液转移部件包括血样毛细管和可压缩室；210：缓冲液孔；211：测试结果查看窗；213：样品采集端口(例如，包括基座201)；214：自测设备用户触及(例如，接触和压缩)可压缩室的窗口(参见图2c，206)。
22.图2b是如本文描述的自测设备的实施方案200b的示意图。250：上面板；260：下面板；201：基座；202：血液转移部件包括血样毛细管和可压缩室；209：信号窗；210：缓冲液孔；211：测试结果查看窗；213：样品采集端口(例如，包括基座201)；214：自测设备用户触及(例如，接触和压缩)可压缩室的窗口(参见图2c，206)。
23.图2c是侧视图(上图)和截面图(下图)中血液转移部件的示意图，包括血样毛细管和可压缩室。203：血样毛细管小端；204：血样毛细管中心部分；205：血样毛细管大端；206：可压缩室；207：血样毛细管小端的内径；208：血样毛细管大端的内径。
24.图2d是测试结果查看窗211的对照(c)、igg(g)测试线和igm(m)线的放大图，示出了指示阳性(顶部三个简图)、阴性(中间简图)或无效(底部四个示意图)测试结果的可见线的组合。
25.应当理解的是，这些图不一定是按比例绘制的，这些图中的物体也不一定是按相互关系按比例绘制的。这些图是旨在澄清和理解本文公开的设备、系统和方法的描绘。在可能的情况下，在整个附图中将使用相同的参考号以指代相同部件或类似部件。此外，应当理解的是，附图并非意图以任何方式限制本发明教义的范围。
具体实施方式
26.本文提供了涉及床旁测定的技术，并且特别地但不排他地涉及用于检测患者样品中病原体抗原和/或对病原体抗原有特异性的抗体的设备、方法和系统。
27.在各种实施方案的这项具体实施方式中，出于解释的目的，陈述了许多具体的细节以提供对所公开的实施方案的全面了解。然而，本领域的技术人员将理解，这些各种实施方案可以用或不用这些具体细节来实现。在其他例子中，结构和设备是以框图形式示出的。此外，本领域的技术人员可以更容易理解，呈现和执行方法的具体顺序是说明性的，并且预期该顺序可以改变且仍在本文公开的各种实施方案的精神和范围内。
28.本技术中引用的所有文献和类似材料，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、论文和互联网网页，均出于任何目的特此明确地以引用的方式整体并入。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本文中描述的各种实施方案所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。当并入的参考文献中术语的定义似乎与本发明的教义中提供的定义不同时，本发明的教义中提供的定义应适用。本文使用的章节标题仅用于组织性目的，并且不被解释为以任何方式限制所描述的主题。
29.定义
30.为促进对本发明技术的理解，以下定义多个术语和短语。在整个具体实施方式中陈述了额外的定义。
31.在整个说明书和权利要求中，以下术语具有本文中明确相关的含义，除非上下文另外清楚地指出。如本文使用的短语“在一个实施方案中”不一定指示相同的实施方案，虽然它可以指示相同的实施方案。此外，如本文使用的短语“在一个实施方案中”不一定指示不同的实施方案，但它可以指示不同的实施方案。因此，如下文所述，本发明的各种实施方案可以很容易地合并，而不偏离本发明的范围或精神。
32.此外，如本文所用，术语“或”是包容性“或”运算符，并且等效于术语“和/或”，除非上下文另外明确指出。术语“基于”并非排他性的，并且允许基于未描述的额外因素，除非上下文另外明确指出。此外，在整个说明书中，“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述”的含义包括复数指代物。“在...中(in)”的含义包括“在...中(in)”和“在...上(on)”。
33.如本文所用，术语“约(about)”、“大约(approximately)”、“基本上(substantially)”和“显著地(significantly)”是本领域技术人员所理解的，并且将在它们所被使用的上下文中一定程度地变化。鉴于使用这些术语的上下文，如果存在本领域普通技术人员不明白的这些术语的使用，“约”和“大约”意指正或负的小于或等于特定术语的10％，“基本上”和“显著地”意指正或负的大于特定术语的10％。
34.如本文所用，范围的公开包括整个范围内所有值和进一步分开的范围的公开，包括所述范围给出的终点和子范围的公开。
35.如本文所用，后缀“无/不含(-free)”是指省略附加“无/不含”一词的词根特征的技术的实施方案。也就是说，如本文所用的术语“无/不含x(x-free)”意指“无x”，其中x是“无/不含x”技术中省略的技术的特征。例如，“无/不含钙”组合物不包含钙，“无混合”方法不包括混合步骤等。
36.虽然术语“第一”、“第二”、“第三”等在本文中可被用于描述各种步骤、元素、组合物、组件、区域、层和/或部分，但除非另外指明，这些步骤、元素、组合物、组件、区域、层和/或部分不应受这些术语限制。这些术语被用于将一个步骤、元素、组合物、组件、区域、层和/或部分与另一个步骤、元素、组合物、组件、区域、层和/或部分区分开。术语诸如“第一”、“第二”和其他数值术语在本文中使用时并非暗示顺序或次序，除非上下文明确指出。因此，本文讨论的第一步骤、元素、组合物、组件、区域、层和/或部分可被称为第二步骤、元素、组合物、组件、区域、层和/或部分而不偏离技术。
37.如本文所用，“存在”或“不存在”(或者，替代地，“存在或不存在”)一词是以相对含义用于描述特定实体(例如，分析物)的量或水平。例如，当分析物被称为“存在”于测试样品中时，它意指该分析物的水平或量高于预定阈值；相反，当分析物被称为“不存在”于测试样品中时，它意指该分析物的水平或量低于预定阈值。预定阈值可能是与用于检测分析物的特定测试相关的可检测性的阈值或任何其他阈值。当样品中“检测到”分析物时，它“存在”于样品中；当“未检测到”分析物时，样品中“不存在”。此外，“检测到”分析物或“存在”分析物的样品是对该分析物呈“阳性”的样品。此外，“未检测到”分析物或“不存在”分析物的样品是对该分析物呈“阴性”的样品。
38.如本文所用，“增加”或“减少”分别是指变量的值相对于先前测定的该变量的值、相对于预先确定的值和/或相对于标准对照的值的可检测的(例如，测定的)正或负的变化。
增加是相对于先前测定的该变量的值、预先确定的值和/或标准对照的值的正变化，优选至少10％，更优选50％，仍更优选2倍，甚至更优选至少5倍，并且最优选至少10倍。类似地，减少是相对于先前测定的该变量的值、预先确定的值和/或标准对照的值的负变化，优选至少10％，更优选50％，仍更优选80％，并且最优选至少90％。指示定量变化或差异的其他数据，诸如“更多”或“更少”，在本文中以与如上所述相同的方式使用。
39.如本文所用，“系统”是指为共同目的一起运行的多个真实和/或抽象组件。在一些实施方案中，“系统”是硬件和/或软件组件的集成装配体。在一些实施方案中，系统的每个组件与一个或多个其他组件相互作用，以及/或者与一个或多个其他组件关联。在一些实施方案中，系统是指组件和用于控制与指导方法的软件的组合。
40.如本文所用，术语“分析物”是指通过与配体、受体或酶(例如，抗体或抗原)的特异性结合来检测盒/或测定的化合物或组合物。在一些实施方案中，所述分析物是蛋白质或核酸。在一些实施方案中，所述分析物是抗原、抗体和/或受体。在一些实施方案中，所述分析物是抗原、抗体和/或受体的片段。在一些实施方案中，所述分析物是分析物类似物或分析物衍生物(例如，通过化学或生物学方法改变的分析物)。在一些实施方案中，分析物是表位。如本文所述，在一些实施方案中，所述分析物来自病原体。
41.如本文所用，术语“病原体”是指通过直接感染另一种生物体或通过在另一种生物体中产生引起疾病的因子(例如，产生致病毒素等的细菌)而在另一种生物体(例如，动物(例如，人)或植物)中引起疾病的生物体，包括微生物。如本文所用，病原体包括但不限于原核生物和真核生物(例如，细菌、古细菌和/或真核生物)，因此该术语包括作为细菌、真核生物、古细菌、真核生物、原虫、真菌、线虫、类病毒和病毒或者其任何组合描述的致病性生物体，其中病原体能够自身或与另一种病原体一起在脊椎动物中引发疾病，所述脊椎动物包括但不限于哺乳动物，并且包括但不限于人。如本文所用，术语“病原体”还涵盖在非免疫低下的宿主中通常可能无致病性的微生物。病毒性病原体的具体非限制性实例包括单纯疱疹病毒(hsv)1、hsv2、eb病毒(ebv)、巨细胞病毒(cmv)、人疱疹病毒(hhv)6、hhv7、hhv8、水痘带状疱疹病毒(vzv)、丙型肝炎、乙型肝炎、腺病毒、东方马脑炎病毒(eeev)、西尼罗河病毒(wne)、jc病毒(jcv)、bk病毒(bkv)、mers、sars、sars-cov-2、流感病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒、奥拉病毒、贝巴鲁病毒、犰狳病毒、登革病毒、摩根堡病毒、盖塔病毒、kyzylagach病毒、马亚罗病毒、米德尔堡病毒、穆坎博病毒、恩杜茂病毒、皮克孙纳病毒、托纳特病毒、特里尼蒂病毒、乌纳病毒、西方马脑脊髓炎病毒、沃达罗河病毒、辛德毕斯病毒(sin)、塞姆利基森林病毒(sfv)、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒(vee)、罗斯河病毒、人类免疫缺陷病毒(hiv-1、hiv-2)和htlv(htlv-1、htlv-2、htlv-3和htlv-4)。参见，例如，strauss和strauss,microbiol.rev.,58:491-562(1994)，其通过引用方式并入本文。
42.如本文所用，术语“微生物”包括来自古细菌、细菌和真核生物的域的原核生物和真核生物的微生物物种，后者包括酵母和丝状真菌、原虫、藻类或高级原生生物。术语“微生物细胞”和“微生物(microbes)”与术语微生物(microorganism)可互换使用。
43.术语“细菌(bacteria)”和“细菌(bacterium)”是指三域系统中细菌域的原核生物体(参见，例如，woese cr等人，proc natl acad sci u s a 1990,87:4576
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79)。意指术语涵盖被认为是细菌的所有微生物，包括分枝杆菌属(mycobacterium)、支原体属(mycoplasma)、衣原体属(chlamydia)、放线菌属(actinomyces)、链霉菌属(streptomyces)
和立克次体属(rickettsia)。所有形式的细菌都包括在本定义内，包括球菌、杆菌、螺旋体、球粒体、原生质体等。在一些实施方案中，细菌能够引起疾病和产物降解或酸败。因此，“细菌”或“真细菌”是指原核生物的域。细菌包括至少11个不同的组如下：(1)革兰氏阳性(gram )细菌，其中存在两个主要分支：(i)高g c组(放线菌属、分枝杆菌属、微球菌属(micrococcus)、其他)(ii)低g c群(芽孢杆菌属(bacillus)、梭菌属(clostridia)、乳杆菌属(lactobacillus)、葡萄球菌属(staphylococci)、链球菌属(streptococci)、支原体属)；(2)变形菌门(proteobacteria)，例如，紫色光合 非光合革兰氏阴性菌(包括大多数“常见”革兰氏阴性菌)；(3)蓝细菌(cyanobacteria)，例如，产氧光养菌(oxygenic phototroph)；(4)螺旋体(spirochetes)及相关物种；(5)浮霉状菌属(planctomyces)；(6)拟杆菌属(bacteroides)、黄杆菌属(flavobacteria)；(7)衣原体属(chlamydia)；(8)绿色硫细菌(green sulfurbacteria)；(9)绿色非硫细菌(green non-sulfur bacteria，也是厌氧光养菌(anaerobic phototroph))；(10)抗辐射微球菌及其相关；(11)栖热袍菌(thermotoga)和栖热腔菌(thermosipho)嗜热菌。
[0044]“革兰氏阴性菌”包括球菌、非肠杆菌(nonenteric rods)和肠杆菌(enteric rods)。革兰氏阴性菌的属包括，例如，奈瑟球菌属(neisseria)、螺旋菌属(spirillum)、巴斯德菌属(pasteurella)、布鲁杆菌属(brucella)、耶尔森菌属(yersinia)、弗朗西丝菌属(francisella)、嗜血杆菌属(haemophilus)、博德特菌属(bordetella)、埃希氏菌属(escherichia)、沙门菌属(salmonella)、志贺菌属(shigella)、克雷伯菌属(klebsiella)、变形杆菌属(proteus)、弧菌属(vibrio)、假单胞菌属(pseudomonas)、拟杆菌属(bacteroides)、醋杆菌属(acetobacter)、气杆菌属(aerobacter)、土壤杆菌属(agrobacterium)、固氮菌属(azotobacter)、螺旋菌属(spirilla)、沙雷菌属(serratia)、弧菌属(vibrio)、根瘤菌属(rhizobium)、衣原体属(chlamydia)、立克次体属(rickettsia)、密螺旋体属(treponema)和梭杆菌属(fusobacterium)。
[0045]“革兰氏阳性细菌”包括球菌、无孢杆菌(nonsporulating rods)和产孢杆菌(sporulating rods)。革兰氏阳性菌的属包括，例如，放线菌属、芽孢杆菌属、梭菌属、棒杆菌属(corynebacterium)、丹毒丝菌属(erysipelothrix)、乳杆菌属、李斯特菌属(listeria)、分枝杆菌属、粘球菌属(myxococcus)、诺卡氏菌属(nocardia)、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属(streptomyces)。
[0046]
如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白、免疫球蛋白衍生物和/或免疫球蛋白片段。抗体在其表面上或腔体中包含这样的区域，所述区域与另一个分子的特定空间和/或极性组织特异性地结合。抗体可为单克隆的或多克隆的，并且可以通过本领域所熟知的技术诸如，例如，宿主的免疫和血清的采集，或者通过杂交细胞系技术来制备。因此，术语“抗体”是指免疫球蛋白、其保持了特异性结合能力的衍生物以及具有与免疫球蛋白结合结构域同源的或基本上和/或有效地同源的结合结构域的蛋白质。这些蛋白质可衍生自天然来源或部分或完全合成地产生。抗体可为任何免疫球蛋白类别的一员，包括人类别的任何一员：igg、igm、iga、igd以及ige。基本抗体结构单元已知包括四聚体。每个四聚体由两个同一的多肽链对构成，每条链对具有一个“轻”链(约25kda)和一个“重”链(约50-70kda)。每条链的氨基末端部分包括约100至110个或更多个主要负责抗原识别的氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分限定主要负责效应子功能的恒定区。轻链被分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、
α、δ或ε，并将抗体的同种型分别定义为igm、igd、igg、iga和ige。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过约12个或更多氨基酸的“j”区结合起来，重链也包括约10个或更多氨基酸的“d”区。(一般参见，fundamental immunology(参见，例如，paul,fundamental immunology，第3版，1993,raven press,new york)。每个轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点。这些链全部显示由三个高变区(也称为互补决定区或cdr)连接的相对保守的框架区(fr)的相同一般结构。来自每个链对的两条链的cdr则由框架区对齐，使得能够其与特异性表位结合。cdr和fr残基根据kabat等人(第5版，1991)sequences of proteins of immunological interest(national institutes of health publication 91-3242，其通过引用方式并入本文)的标准序列定义来确定。替代的结构定义已由chothia等人(1987)j.mol.biol.196:901-917；(1989)nature 342:878-883；以及(1989)j.mol.biol.186:651-663(每一份文献都通过引用方式并入本文)提出。
[0047]
如本文所用，术语“抗体片段”是指包含的氨基酸序列小于全长抗体氨基酸序列的任何抗体衍生物。在示例性实施方案中，抗体片段保留全长抗体的特异性结合能力的至少重要部分。抗体片段的实例包括但不限于fab、fab'、f(ab')2、scfv、fv、dsfv抗体和fd片段。抗体片段可以通过任何手段产生。例如，例如，抗体片段可由完整抗体经酶促或化学方法产生，它可以从编码部分抗体序列的基因重组产生，或者其可以全部或部分合成产生。例如，在一些实施方案中，术语fab片段可以是指从完整抗体的木瓜蛋白酶解离产生的结合片段，并且术语fab'和f(ab')2可以是指通过胃蛋白酶解离产生的完整抗体的结合片段。如本文所用，术语“fab”被用于通常指代完整抗体的双链结合片段，其具有足以用于抗原特异性结合的至少基本上完整的轻链和重链可变区，以及和足以维持轻链和重链的结合的部分轻链和重链恒定区。通常而言，fab片段是通过使全长或基本上全长的轻链与包含可变结构域和恒定区的至少ch1结构域的重链复合所形成的。抗体片段可任选地是单链抗体片段。替代地，片段可包含多个例如通过二硫键连接在一起的链。片段还可以任选地是多分子复合体。功能性抗体片段通常将包含至少约50个氨基酸，并且更通常将包含至少约200个氨基酸。
[0048]
如本文所用，术语“特异性地结合”或“与...特异性免疫反应”，例如当指代抗体、抗体片段、抗原或其他结合部分时，是指在蛋白质和/或其他生物制品的异源群体存在的情况下确定靶分析物存在的结合反应。因此，在指定的测定条件下，指定的结合部分优先与特定靶分析物结合，并且不以显著的量与测试样品中存在的其他组分结合。在此类条件下与靶抗原特异性结合可能需要因其对特定靶分析物的特异性而被选择的结合部分。各种免疫测定形式可被用于选择与特定蛋白质特异性免疫反应的抗体。例如，固相elisa免疫测定常规地用于选择与抗原特异性免疫反应的单克隆抗体。关于可以用于确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述，参见harlow和lane(1988)antibodies,a laboratory manual,cold spring harbor publications,new york。通常，特异性或选择性反应至少是本底信号或噪音的2倍，并且更通常超过本底的10倍至100倍。抗体或其他结合因子和抗原之间的特异性结合一般意指至少106m-1
的结合亲和力。优选的结合因子以至少约107m-1
，并且优选108m-1
至109m-1
或10
10
m-1
的亲和力结合。
[0049]
如本文所用，术语“表位”是指能够与抗体特异性结合的抗原决定簇。表位通常包括分子部分的化学活性表面基团，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。构象表位和非构象表位的差别在于在变性溶剂存在的情况下，与
构象表位的结合丧失，但与非构象表位的结合不丧失。表位可以包括非相邻氨基酸，以及相邻氨基酸。
[0050]
如本文所用，术语“样品”是指任何包含病原体或其一部分或其组分或可能包含病原体或其一部分或其组分的样品。因此，术语“样品”是指有待测试的材料的分析物(例如病原体或其一部分或其组分)的存在或量。优选地，样品是流体样品，优选液体样品。例如，样品可以是体液，诸如血液、血清、血浆、眼液、尿液、粘液、精液、鼻咽拭子液、喉拭子、泪液、汗液或唾液。粘性液体、半固体或固体样本可被用于创建液体溶液、洗脱物、悬浮物或可以作为样品的提取物。例如，喉拭子或生殖器拭子可被悬浮在液体溶液中以制备样品。
[0051]
如本文所用，术语“测试条”或者替代地，“侧流测定测试条”可以包括一种或多种吸收性或非吸收性材料。如果测试条包含多于一种材料，则所述一种或多种材料优选为流体连通。测试条的一种材料可以覆盖在所述测试条的另一种材料上，诸如，例如覆盖在硝酸纤维素上的滤纸。替代地或此外，测试条可以包括包含一种或多种材料的区域，以及包含一种或多种不同材料的区域。在此情况下，这些区域为流体连通，并且可以或不可以彼此部分重叠。用于测试条的合适材料包括但不限于衍生自纤维素的材料，诸如滤纸、色谱纸、硝酸纤维素和醋酸纤维素，以及由玻璃纤维、尼龙、涤纶、pvc、聚丙烯酰胺、交联右旋糖酐、琼脂糖、聚丙烯酸酯、陶瓷材料等制成的材料。测试条的一种或多种材料可被任选地处理以改变它们的毛细流动特性或所施加的样品的特性。例如，测试条的样品施加区可用缓冲液处理以纠正所施加的样品的ph值、盐浓度或比重以优化测试条件。
[0052]
一种或多种材料可为单一结构，诸如切成条的薄板，或者它可以为若干个条或结合于载体或固体表面上的颗粒材料，诸如例如在薄层色谱法中所见，并且可以具有作为整体部分或以液体接触的吸附剂垫。该材料还可以是其上具有泳道能够点样以诱导泳道形成的薄板，其中可在每条泳道中执行不同的测定。材料可以具有矩形、圆形、卵圆形、三角形或其它形状，条件是存在至少一个测试溶液通过毛细迁移穿越的方向。其他穿越方向可以出现，诸如在中心与测试溶液接触的卵圆形或圆形件上。然而，主要考量是存在一个流向预定位点的方向。
[0053]
在载体为所需或必要的情况下，测试条的载体的通常不溶于水，常常为无孔且刚性，但可能是弹性的，通常是疏水性且多孔的，通常将具有与测试条相同的长度和宽度，但可能更大或更小。载体材料可以是透明的，并且当本发明技术的测试设备被装配时，透明载体材料可以在用户能够查看的测试条一侧，使得透明载体材料在测试条上可能暴露于外部环境的地方形成保护层，诸如测试设备前面的窗孔。多种不可移动和不可移动的材料(天然和合成)及其组合都可被采用，条件仅仅是载体不干扰一种或多种材料的毛细作用，或者不会非特异性结合测定组分，或者不干扰信号产生系统。说明性的聚合物包括聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚(对苯二甲酸乙二酯)、尼龙、聚(丁酸乙烯酯)、玻璃、陶瓷、金属等。塑料载体可由聚氨酯、氯丁橡胶、乳胶、硅橡胶等。
[0054]
如本文所用，术语“对照区”或“对照线”是测试条的一个区域，其中可以观察到标签的移动位置、出现、变色或消失以指示测定正确执行。对照区(例如)的检测或观察可通过任何常规手段进行，取决于标签的特定选择，尤其是，例如但不限于目视、荧光、通过反射、x线影像学等。如将要描述的，标签可以或不可以直接施加于对照区，取决于正在使用的对照的设计。
[0055]
如本文所用，术语“标签”是指任何结合于特异性结合成员的能够产生可检测信号的分子。在本发明中，标签可以是惰性的，并且通过在检测区中集中来提供信号，它可以仅仅充当结合位点用于信号产生系统的成员，或者可以自发产生可检测的信号或可以与其它信号产生系统相结合产生可检测的信号。标签可为同位素的或非同位素的。在一些实施方案中，标签包含胶体金、乳胶珠、染料、荧光部分或其他可检测的实体。
[0056]
如本文所用，术语“近端”是指包括测试设备的样品施加窗孔和/或测试条的样品施加区的测试设备或测试条的末端。
[0057]
如本文所用，术语“试剂区”是指测试条中提供试剂的区域。试剂区可以在试剂垫(测试条上包含的吸收性或非吸收性材料的单独节段)上，或者它可以是测试条上也包括气体区诸如分析物检测区的吸收性或非吸收性材料的区域。试剂区可以携带可检测的标签，其可以是直接标签或间接标签。优选地，试剂是以这样的形式提供，即试剂在干燥状态下不可移动，而在潮湿状态下可以移动。试剂可为有助于测试条测定的功能的特异性结合成员、分析物或分析物类似物、酶、底物、指示物、信号产生系统的组分、化学品或化合物，诸如缓冲剂、还原剂、螯合剂、表面活性剂等。
[0058]
如本文所用，术语“样品施加窗孔”是指测试设备的一部分，其中测试设备中的开孔提供通向测试条的样品施加区的通路。
[0059]
如本文所用，术语“样品施加区”是测试条中施加样品的部分。在一些实施方案中，“样品垫”包含样品施加区。
[0060]
如本文所用，术语“特异性结合成员”是指两个不同分子之一，其表面上或腔体中具有与另一个第二分子的特定空间和极性组织特异性结合并且由此被定义为互补的区域。特异性结合对的成员被称为配体和受体(抗配体)。这些通常将是免疫对诸如抗原-抗体的成员，但其它特异性结合对例如生物素-亲和素、激素-激素受体、核酸双链、igg-蛋白a、dna-dna、dna-rna等不是免疫对，但包括在定义中。在结合对诸如亲和素-生物素的情况下，试剂可用该结合对的一个成员标记，并且检测区可以在捕获型测定中包括该结合对的另一个成员。使用亲和素-生物素对或这类结合对的其他一般类型的测定是本领域已知的。抗体(例如，经标记的抗体)可被用作试剂，用于检测与此类抗体结合或与此类抗体特异性结合的抗原。抗原或表位(例如，经标记的抗原)可被用作试剂，用于检测与此类抗原结合或与此类抗原特异性结合的抗体。
[0061]
如本文所用，术语“测试结果区”是测试条中提供可检测的信号以指示分析物存在的区域。测试结果区可以包括对分析物(“特异性结合成员”)和/或与该分析物反应的酶具有特异性的经固定的结合成员。测试结果区可以包括一个或多个分析物检测区，例如，“测试线”。可能允许或增强分析物检测的其它物质，诸如底物、缓冲剂、盐，也可以在测试结果区中提供。信号产生系统的一个或多个成员可以与检测区直接或间接地结合。测试结果区可以任选地包括一个或多个对照区(例如，“对照线”)，提供该测试已正确执行的指示。
[0062]
在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“同一的”或百分“同一性”是指两个或更多个序列或子序列当进行最大对应性比较和比对时是相同的或具有特定百分比的相同核苷酸或氨基酸残基，如使用序列比较算法或通过目视检查中的一种所测量的。在两个核酸的上下文中，短语“基本上同一的”是指两个或更多个序列或子序列当进行最大对应性比较和比对时具有至少80％，优选85％，最优选90-95％的核苷酸同一性，如使用以下
序列比较算法或通过目视检查中的一种所测量的。对于氨基酸序列，“基本上同一的”是指两个或更多个序列或子序列当进行最大对应性比较和比对时具有至少60％同一性，优选75％同一性，最优选90-95％同一性，如使用以下序列比较算法或通过目视检查中的一种所测量的。优选地，在长度至少约10个残基的核酸或氨基酸序列的区域中，更优选在至少约20个残基的区域中存在基本同一性，并且最优选序列在至少约为100个残基中是基本上同一的。在最优选的实施方案中，序列在指定区域(例如，编码区)的整个长度内是基本上同一的。
[0063]
对于序列比较，通常一个序列充当将测试序列与其比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中，必要时指定序列坐标，并且指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法根据指定的程序参数计算一个或多个测试序列相对于参考序列的序列百分同一性。用于比较的序列的最佳比对可以例如通过smith&waterman,adv.appl.math.2:482(1981)的局部同源性算法、通过needleman&wunsch,j.mol.biol.48:443(1970)的同源性比对算法、通过pearson&lipman,proc.nat'l.acad.sci.usa 85:2444(1988)的相似性算法的检索、通过这些算法的计算机化执行(wisconsin genetics软件包(genetics computer group,575science dr.,madison,wis.)中的gap、bestfit、fasta和tfasta)或通过目视检查(参见，一般地，molecular biology(f.m.ausubel等人编)中的当前方案、greene publishing associates,inc.和john wiley&sons,inc.,(1995supplement)(ausubel)的合资企业的当前方案)来执行。
[0064]
适合确定序列百分同一性和序列相似性的算法的实例是blast和blast 2.0算法，其分别描述于altschul等人(1990)j.mol.biol.215:403-410和altschuel等人(1977)nucleic acids res.25:3389-3402中。执行blast分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(national center for biotechnology information)(ncbi.nlm.nih.gov)公开获取。该算法涉及首先通过鉴定查询序列中长度w的短词来鉴定高分序列对(hsp)，其在与数据库序列中相同长度的词比对时匹配或满足一些正取值的阈值评分t。t被称为相邻词评分阈值(前述altschul等人)。这些初始相邻词命中充当启动检索的种子以查找包含它们的更长的hsp。然后，将词命中沿着每个序列向两个方向扩展，直至累积比对评分可以增加。对于核苷酸序列，累积评分是使用参数m(对于匹配残基对的奖励分；始终》0)和n(对于错配残基的罚分，始终《0)计算的。对于氨基酸序列，使用评分矩阵计算累积评分。在以下情况下每个方向上的词命中扩展暂停：累积比对评分自其最大实现值下降达数量x；累积评分因一个或多个负评分的残基比对累积而达到零或低于零；或者达到任一序列的末端。blast算法参数w、t和x确定算法的灵敏度和速度。blastn程序(用于核苷酸序列)使用词长(w)11，期望(e)10、m＝5、n＝-4以及两条链的比较作为默认值。对于氨基酸序列，blastp程序使用词长(w)3，期望(e)10和blosum62评分矩阵(参见henikoff&henikoff,proc.natl.acad.sci.usa 89:10915(1989))作为默认值。
[0065]
两个氨基酸或多肽基本上同一的进一步的指示是，由第一核酸编码的多肽与由第二核酸编码的多肽具有免疫交叉反应，如下文描述。因此，多肽通常与第二多肽是基本上同一的，例如，在两个多肽仅保守取代不同的情况下。两个核酸基本上同一的另一个指示是两个分子在严格的条件下彼此杂交，如下文描述。
[0066]
因此，术语“变体”和“突变体”在提及核苷酸序列的情况下使用时，是指与另一个
核苷酸序列(通常为相关的核苷酸序列)差异达一个或多个核苷酸的核苷酸序列。“变异”是两个不同核苷酸序列间的差异；通常，一个序列是参考序列。
[0067]
术语“变体”和“突变体”在提及多肽的情况下使用时，是指与另一个氨基酸序列(通常为相关的多肽)差异达一个或多个氨基酸的氨基酸序列。变体可具有“保守”变化，其中取代的氨基酸具有相似的结构或化学性质。一类保守氨基酸取代是指具有相似侧链的残基的可互换性。例如，一组具有脂肪族侧链的氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；一组具有脂肪族羟基侧链的氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；一组具有含酰胺的侧链的氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；一组具有芳香族侧链的氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；一组具有碱性侧链的氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；以及一组具有含硫侧链的氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸以及天冬酰胺-谷氨酰胺。更罕见地，变体可能具有“非保守”的变化(例如，用色氨酸置换甘氨酸)。类似的次要变异还可以包括氨基酸缺失或插入(即，添加)或二者。确定哪个氨基酸残基以及多少个氨基酸残基可被取代、插入或缺失而不会消除生物活性的指南可用本领域所熟知的计算机程序例如dnastar软件来发现。变体可在功能性测定中进行检测。优选的变体具有少于10％，并且优选少于5％，并且仍更优选少于2％的变化(是否取代、缺失等)。
[0068]
因此，如本文所用，术语特定多核苷酸序列的“保守修饰的变异”是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些多核苷酸，或者在多核苷酸不编码氨基酸序列的情况下是指基本上相同的序列。由于遗传密码的简并性，大量在功能上相同的核酸编码任何给定的多肽。例如，密码子cgu、cgc、cga、cgg、aga和agg均编码氨基酸精氨酸。因此，在由密码子指定精氨酸的每一位置处，密码子可以被改变为任何所述的相应密码子，而不改变所编码的多肽。这类核酸变异为“沉默取代”或“沉默变异”，它们是“保守修饰的变异”的一种。除另有说明外，本文所述的编码多肽的每一多核苷酸序列也描述了每一可能的沉默变异。因此，沉默取代是编码氨基酸的每一核酸序列的隐含特征。技术人员将会认识到，核酸中的每个密码子(aug和ugg除外，前者通常是甲硫氨酸的唯一密码子，后者是色氨酸的唯一密码子)可通过标准技术被修饰以产生在功能上相同的分子。在一些实施方案中，编码酶的核苷酸序列优选被优化以在用于产生酶的特定宿主细胞(例如，酵母、哺乳动物、植物、真菌等)中表达。
[0069]
类似地，氨基酸序列中一个或几个氨基酸被具有高度类似特性的不同氨基酸取代的“保守氨基酸取代”也容易被确认为与特定的氨基酸序列或与编码氨基酸的特定核酸序列高度类似。任何特定序列的这类保守取代的变异是本发明的特征。在编码序列中改变、添加或缺失单个氨基酸或小百分比的氨基酸(典型地少于5％，更典型地少于1％)的个别取代、缺失或添加是“保守修饰的变异”，其中所述改变导致氨基酸被在化学上类似的氨基酸取代。提供在功能上类似的氨基酸的保守取代表是本领域中熟知的。参见例如creighton(1984)proteins,w.h.freeman and company.
[0070]
术语“蛋白质”和“多肽”是指包含经由肽键连接的氨基酸的化合物，并且可互换使用。在本文中如下使用常规的单字母和三字母氨基酸代码—丙氨酸：ala，a；精氨酸：arg，r；天冬酰胺：asn，n；天冬氨酸：asp，d；半胱氨酸：cys，c；谷氨酸：glu，e；谷氨酰胺：gln，q；甘氨酸：gly，g；组氨酸：his，h；异亮氨酸：ile，i；亮氨酸：leu，l；赖氨酸：lys，k；甲硫氨酸：met，
m；苯丙氨酸：phe，f；脯氨酸：pro，p；丝氨酸：ser，s；苏氨酸：thr，t；色氨酸：trp，w；酪氨酸：tyr，y；缬氨酸：val，v。如本文所用，代码xaa和x是指任何氨基酸。
[0071]
众所周知的是，dna(脱氧核糖核酸)是由4种类型的核苷酸组成的核苷酸链；a(腺嘌呤)、t(胸腺嘧啶)、c(胞嘧啶)和g(鸟嘌呤)，且rna(核糖核酸)由4种类型的核苷酸组成；a、u(尿嘧啶)、g和c。还已知所有这5种类型的核苷酸以被称为互补碱基配对的组合方式彼此特异性结合。即，腺嘌呤(a)与胸腺嘧啶(t)配对(然而在rna的情况下，腺嘌呤(a)与尿嘧啶(u)配对)，且胞嘧啶(c)与鸟嘌呤(g)配对，使得这些碱基对中的每一对形成双链。
[0072]
用于描述核酸或蛋白质的变体的命名法指定了突变的类型和碱基或氨基酸变化。对于核苷酸取代(例如，76a》t)，数字是核苷酸自5'端的位置，第一个字母代表野生型核苷酸，且第二个字母代表取代野生型的核苷酸。在给定的实例中，第76位的腺嘌呤被胸腺嘧啶替代。如果有必要区分基因组dna、线粒体dna、互补dna(cdna)和rna中的突变，则采用简单的惯例。例如，如果核苷酸序列的第100个碱基从g突变为c，则如果突变发生在基因组dna中就写为g.100g》c，如果突变发生在线粒体dna中就写为m.100g》c，如果突变发生在cdna中就写为c.100g》c，或者如果突变发生在rna中就写为r.100g》c。
[0073]
对于氨基酸取代(例如，d111e)，第一个字母是野生型氨基酸的单字母代码，数字是氨基酸自n-末端的位置，且第二个字母是突变中存在的氨基酸的单字母代码。无义突变用第二个氨基酸的x代表(例如d111x)。对于氨基酸缺失(例如δf508，f508del)，希腊字母δ(德尔塔)或字母“del”表示缺失。字母是指野生型中存在的氨基酸，且数字是自其在野生型中存在的氨基酸的n末端的位置。内含子突变由内含子编号或cdna位置标示，并且提供从gt剪接供体位点的g开始的正数或从ag剪接受体位点的g开始的负数。g.3' 7g》c表示在基因组dna水平上的nt 7处的g到c的取代。当已知全长基因组序列时，突变由基因组参考序列的核苷酸编号最佳地标示。参见den dunnen&antonarakis，“mutation nomenclature extensions and suggestions to describe complex mutations:a discussion”.human mutation 15:7-12(2000)；ogino s等人，“standard mutation nomenclature in molecular diagnostics:practical and educational challenges”,j.mol.diagn.9(1):1-6(2007年2月)，上述文献中的每一者以引用的方式并入本文。
[0074]
如本文所用，氨基酸的单字母代码是指如以下文献中发布的“氨基酸和肽的iupac-iub命名法”中所述的标准iub命名法：biochem.j.,1984,219,345-373；eur.j.biochem.,1984,138,9-37；1985,152,1；internat.j.pept.prot.res.,1984,24，第84页之后；j.biol.chem.,1985,260,14-42；pure appl.chem.,1984,56,595-624；amino acids and peptides,1985,16,387-410；和biochemical nomenclature and related documents，第2版，portland press,1992，第39-67页，上述文献中的每一者以引用的方式并入本文。以下简并代码可用于核苷酸碱基：r(g或a)、y(t/u或c)、m(a或c)、k(g或t/u)、s(g或c)、w(a或t/u)、b(g或c或t/u)、d(a或g或t/u)、h(a或c或t/u)、v(a或g或c)或n(a或g或c或t/u)、空位(-)。
[0075]
如本文所用，术语“耦接”是指通过任意合适的方式固定在一起的两个或更多个组件。因此，在一些实施方案中，表述两个或更多个部件或组件被“耦接”将意指部件直接或间接地(例如，通过一个或多个中间部件或组件)连接或在一起操作。如本文所用，“直接耦接”意指两个元件彼此直接接触。如本文所用，“固定耦接”或“固定”意指两个组件被耦接，以便
作为一体而移动，同时保持彼此相对的不变取向。因此，当两个元件被耦接时，这些元件的所有部分均被耦接。然而，描述将第一元件的特定部分与第二元件耦接(例如，轴第一端与第一轮耦接)意指第一元件的特定部分比其其它部分更靠近第二元件布置。进一步地，一个物体搁置在另一物体上仅通过重力保持在适当位置并非是与下部物体“耦接”，除非上部物体以其它方式基本上保持在适当位置。即，桌子上的书并非与其耦接，但胶粘于桌子上的书是与其耦接的。
[0076]
如本文所用，术语“流体连通”是指连接的流体元件，它们在元件之间包括流体界面，使得流体可以从一个元件向另一个元件转移。因此，如本文所用的术语“流体连通”是指含有流体的两个组件、腔室或区域，其中所述组件、腔室或区域连接在一起(例如，通过管线、管路或管道)，使得流体可以在两个腔室、组件或区域之间流动。因此，“流体连通”的两个组件可例如通过两个腔室之间的管线连接在一起，使得流体可以在两个腔室之间自由流动。
[0077]
如本文所用，术语“计量”是指可再现地(例如，在与测量相关的误差范围内)测量和定量的物质(例如，样品)的量(例如，体积)，其由更大量(例如，体积)的该物质(例如，样品)提供。因此，“计量样品”是样品已知的和经测量的量(例如，体积)，其是可再现的，因此预计更大量的样品的“计量样品”是与每次产生计量样品时相同(例如，基本上和/或实质上相同)量的样品。因此，预期后期的计量样品中的物质的量(例如，体积)具有与当前计量样品中所提供的相同(例如，基本上和/或实质上相同)的量(例如，体积)。
[0078]
如本文所用，术语“配置”是指被构造成执行所指示的功能的组件、模块、系统、子系统等。
[0079]
侧流测定法
[0080]
侧流测定法用于医院、诊所和家庭环境中(例如，在自测试设备中，例如用于执行包括通过使样品与自测设备接触而实施测试以检测病原体的方法)。这些设备用于测试多种分析物，如滥用的药物、激素、蛋白质、病原体(例如，及其抗原)、血浆组分、抗体等。侧流测定法通常在设备(例如，测定设备)中提供，所述设备包括侧流测定测试条(例如，硝化纤维素或滤纸)、样品施加区(例如，样品垫)、测试结果区(例如，测试线)、任选的对照结果区(例如，对照线)和与可检测标签结合的分析物特异性结合试剂(例如，着色颗粒或酶检测系统)。参见例如6,485,982、6,187,598、5,622,871、6,565,808和6,809,687号美国专利以及系列号为10/717,082的美国专利申请，上述专利文献中的每一者以引用的方式并入本文。参见例如图1。
[0081]
特别地，实施方案提供了用于检测样品中的病原体的测定法。在一些实施方案中，实施方案涉及检测针对样品中的病原体的抗体(例如，igg和/或igm)。在一些实施方案中，该技术涉及适用于家庭、诊所或医院的测定设备，并且该测定设备旨在要求使用者的技能和参与程度最低的情况下给出快速的分析结果。在一些实施方案中，使用本文所述的设备涉及其中使用者执行一系列操作以提供可观察的测试结果的方法。
[0082]
在一些实施方案中，该技术涉及包括侧流测定测试条(例如，试剂浸渍的侧流测定测试条)以提供特异性结合测定(例如，免疫测定)的测定设备。参见例如图1。在一些实施方案中，通常借助于洗脱溶剂如水和/或合适的缓冲液(例如，任选包含洗涤剂)将样品施加到侧流测定测试条的一部分上，并使其透过侧流测定测试条材料。这样做时，样品进入或通过
侧流测定测试条中的检测区，在所述检测区中，疑似在样品中的分析物(例如，病原体或其一部分或组分、抗病原体抗体(例如，对所述病原体特异性的igg和/或igm))的特异性结合试剂(例如，抗体)被固定。样品中存在的分析物可因此结合在检测区内。可借助于标记的试剂来确定分析物在该区中结合的程度，所述标记的试剂也可结合到侧流测定测试中或随后施加于其上。
[0083]
在一些实施方案中，测定设备包括由含有干燥多孔载体的防湿固体材料构成的中空壳体，所述干燥多孔载体与壳体的外部直接或间接连通，使得液体测试样品可以被施加到多孔载体上。在一些实施方案中，测定设备还包含用于分析物的标记的特异性结合试剂，并且当处于湿态时，标记的特异性结合试剂在多孔载体内可自由移动。在一些实施方案中，测定设备包含针对同一分析物的未标记的特异性结合试剂，并且未标记的试剂永久固定在载体材料上的检测区中，因此在湿态下是不可移动的。标记的试剂和检测区的相对定位使得施加到测定设备上的液体样品可以获取标记的试剂，且之后渗入检测区，并且测定设备提供标记的试剂在待观察的检测区中达到的范围(如果有的话)。
[0084]
本技术的另一实施方案涉及包含多孔固相材料的测定设备，所述多孔固相材料在第一区中携带标记的试剂，所述标记的试剂在多孔材料处于干态时保留在第一区中，但当多孔材料例如通过施加疑似含有分析物的含水液体样品而被湿润时可穿过多孔材料自由迁移。在一些实施方案中，多孔材料在与第一区在空间上不同的第二区中包含对分析物具有特异性并且能够与标记的试剂一起参与“夹心”或“竞争”反应的未标记的特异性结合试剂。未标记的特异性结合试剂牢固地固定在多孔材料上，使得当多孔材料处于湿态时其不可自由迁移。
[0085]
在一些实施方案中，本技术还提供了一种分析方法，其中使如本文所述的测定设备与疑似含有分析物的含水液体样品接触，使得样品通过毛细管作用透过多孔固相材料经由第一区进入第二区，并且标记的试剂随之从第一区迁移到第二区，通过观察标记的试剂在第二区中结合的程度(如果有的话)来确定样品中分析物的存在。
[0086]
在一些实施方案中，标记的试剂是分析物的特异性结合伴侣。标记的试剂、分析物(如果存在的话)和固定的未标记的特异性结合试剂在“夹心”反应中一起协作。如果样品中存在分析物，这会导致标记的试剂结合在第二区中。在夹心形式中，两种结合试剂对分析物上的不同表位具有特异性。
[0087]
在一些实施方案中，标记的试剂是分析物本身(例如，与标签缀合)或者是分析物类似物(例如，与标签缀合)，例如具有与分析物相同或基本上和/或实际上相同的特异性结合特性的化学实体。在后一种情况下，优选分析物类似物的影响其在含水液体样品中的溶解度或分散性及其穿过湿多孔固相材料迁移的能力的性质与分析物本身的那些性质相同或基本上和/或实际上相同。在一些实施方案中，标记的分析物或分析物类似物穿过多孔固相材料迁移进入第二区，并与固定的试剂结合。样品中存在的分析物在此结合反应中与标记的试剂竞争。这种竞争导致在第二区中结合的标记的试剂的量减少，并且由此与在样品中不存在分析物的情况下观察到的信号相比，在第二区中观察到的信号的强度降低。
[0088]
在一些实施方案中，侧流测试条(例如，载体材料)包含硝化纤维素。这具有优于一些其它侧流测试条材料如纸的显著优点，因为其具有结合蛋白质的天然能力，而不需要事先敏化。特异性结合试剂如免疫球蛋白可以被直接施加到硝化纤维素并固定于其上。不需
要可能会干扰试剂的基本特异性结合活性的化学处理。之后可以使用简单的材料如聚乙烯醇来封闭硝化纤维素上未使用的结合位点。此外，容易获得一定孔径范围的硝化纤维素，这有利于选择载体材料以适应特定的要求，如样品流速。
[0089]
在一些实施方案中，本技术包括使用附着于特异性结合试剂之一的一种或多种“直接标签”。在一些实施方案中，本技术使用包含例如胶体金(例如，金颗粒(例如，金纳米颗粒)在通常是水或含水缓冲液的流体中的溶胶或胶态悬浮液)或染料(例如，染料溶胶)的标签。在一些实施方案中，标签产生即时的分析结果，而不需要添加进一步的试剂来产生可检测的信号。它们具有稳健性和稳定性，因此可以很容易地用于干态储存的分析设备。它们在与含水样品接触时的释放可例如通过使用可溶性釉料来进行调整。
[0090]
在一些实施方案中，本文所述的设备的开发涉及选择使得能够在基于载体的测定设备(例如基于侧流测定测试条形式的测定设备)中使用直接标记的特异性结合试剂以给出快速且明确的结果的技术特征。理想地，测定的结果应该是可以通过眼睛辨别的，为此，本技术提供了在检测区中变得集中的直接标签。因此，直接标记的试剂可容易且快速地通过显影液传输。此外，优选将全部显影的样品液体引导穿过相对小的检测区，使得获得可观察的结果的可能性增加。
[0091]
在一些实施方案中，所述技术包括在包含硝化纤维素的载体材料上使用直接标记的特异性结合试剂。在一些实施方案中，硝化纤维素的孔隙大小为至少一微米。在一些实施方案中，硝化纤维素的孔隙大小不大于约20微米。在一些实施方案中，硝化纤维素的孔隙大小为1至20微米(如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20微米)。在一些实施方案中，直接标签是球形或接近球形且最大直径不大于约0.5微米的有色乳胶颗粒。在一些实施方案中，此类颗粒的大小范围为约0.05至约0.5微米(如，0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45或0.50微米)。
[0092]
在一些实施方案中，多孔固相材料连接至多孔接收构件，液体样品可被施加到所述多孔接收构件中并且该样品可从所述多孔接收构件渗透至多孔固相材料中。在一些实施方案中，多孔固相材料包含在不透湿的外壳或壳体内，并且与多孔固相材料连接的多孔接收构件延伸出壳体并充当用于允许液体样品进入壳体并渗透多孔固相材料的装置。在一些实施方案中，壳体设有装置，如适当放置的窗孔(aperture)，其使得多孔固相材料的第二区(携载有固定化的未经标记的特异性结合试剂)能够从壳体外部被观察到，从而使得可以观察到测定的结果。如果需要，壳体还可以设有进一步的装置，所述装置使多孔固相材料的进一步的区能够从壳体外部被观察到，并且所述进一步的区掺入有能够给出测定程序是否已经完成的指示的对照试剂。
[0093]
在一些实施方案中，测定设备作为适用于医院、诊所或家庭的试剂盒提供。在一些实施方案中，试剂盒包括多个(如，两个)设备，它们分别包裹在防潮包装材料中并与给用户的适当说明一起包装。
[0094]
在一些实施方案中，测定设备是自测测定设备，例如供用户在家或诊所中使用，其中自测测定的结果由检查一个或多个覆盖测定检测区的窗的用户直接读取，如以确定在一个或多个(或所有)检测区存在或不存在可检测信号。每个检测区可以在壳体中设有单独的窗，以允许用户检查检测区。可替代地，大窗可以容纳两个或多个(或所有)检测区。通常，在此类用户读取设备中，用户将直接检查测定设备或侧流测定测试条的检测区(如，用户使用
眼睛进行目视检查)。在一些实施方案中，用户通过参考颜色图表或指示器来确定结果。方便地，在一些实施方案中，自测测定设备提供有用于读取自测测定结果的说明或指导。例如，可以向用户提供打印的颜色图表以促进对此类直接读取的视觉测试的解释。在一些实施方案中，该设备为用户解释测定结果。
[0095]
在一些实施方案中，自测测定设备与测定结果读取设备一起使用，该测定结果读取设备可以是通过测量如由可见标签产生的信号强度来读取自测测定结果的优选地配有相机的专用读取设备或移动电话或其他便携式电子设备(如平板电脑)。因此，在一些实施方案中，测定结果读取设备可以读取和解释自测测定结果，或者可以将自测测定结果数据传输到远程定位的设备以用于解释自测测定数据。自测测定数据可以实时传输到远程定位的设备。自测数据可以经由互联网连接传输，或者可以存储在物理输送到远程设备的存储设备(诸如“闪存”驱动器等)上，或者自测测定数据可以通过无线通信装置(如蓝牙、近场通信(nfc)等)传输。在一些实施方案中，微处理器可以控制光学读取或其他自测测定读取组件的操作，并可方便地用每种分析物的相关测定信号阈值编程或能够访问每种分析物的相关测定信号阈值，比较实际自测测定信号值与预先确定的阈值，并解释自测测定结果以确定测定结果。在一些实施方案中，自测测定结果与识别设备用户的信息(如，识别号)相关联。在一些实施方案中，自测测定结果和/或识别设备用户的信息被加密。
[0096]
在一些实施方案中，测定设备包括多孔样品接收构件(如，与侧流测定测试条流体连通的多孔样品接收构件)。在一些实施方案中，测定设备包括含有干燥多孔硝化纤维素载体的中空细长外壳，所述载体经由从外壳突出的吸水样品接收构件与外壳的外部间接连通。在一些实施方案中，多孔样品接收构件由能够快速吸收液体的任何吸水、多孔或纤维材料制成。该材料的孔隙度可以是单向的(如，其中的孔隙或纤维完全或主要平行于构件的轴延伸)或多向的(全向的，因此构件具有无定形海绵状结构)。可以使用多孔塑料材料，诸如聚丙烯、聚乙烯(优选具有非常高的分子量)、聚偏二氟乙烯、乙烯醋酸乙烯酯、丙烯腈和聚四氟乙烯。在制造过程中用表面活性剂对构件进行预处理可能是有利的，例如，以降低构件中任何固有的疏水性并因此增强其快速且有效地吸收和递送潮湿样品的能力。多孔样品接收构件也可以由纸或其他纤维素材料、诸如硝酸纤维素制成。现在用于所谓的纤维笔尖笔的材料是特别合适的，并且此类材料可以被成型或挤压成适合于本发明上下文的各种长度和横截面。在一些实施方案中，构成多孔接收构件的材料被选择成使得多孔构件可以在几秒钟内被水性液体饱和。优选地，该材料在潮湿时保持坚固，并且由于这个原因，纸和类似材料在其中多孔接收构件从壳体突出的任何实施方案中都不太优选。此后，液体必须从多孔样品接收构件自由地渗透到多孔固相材料中。
[0097]
在一些实施方案中，测定设备包括任选的“对照区”(如，侧流测定测试条包括“对照区”)。参见如图2d。如果存在，则“对照”区可以被设计为向用户传达设备已正常运行的无关信号。例如，对照区可以装载有抗体(如山羊抗兔igg)，该抗体将与来自第一区的经标记的抗体(如经标记的兔igg)结合，以确认样品已渗透到侧流测定测试条中。在一些实施方案中，第一区包括与分析物无关并且在对照区被特异性捕获的抗原和/或抗体。在一些实施方案中，对照区可以含有在被润湿时会产生颜色变化或颜色形成的无水试剂，例如，在被含水样品润湿时会变成蓝色的无水硫酸铜。作为进一步的选择，对照区可以含有与来自第一区的过量的经标记的试剂反应的固定化的分析物。由于对照区的目的是向用户指示测试已经
完成，因此对照区应位于记录所需测试结果的第二区的下游。因此，阳性对照指示剂告诉用户样品已经穿过测定设备(如，通过测定设备的侧流测定测试条)渗透了所需的距离。
[0098]
标签可以是可以容易地检测到其存在的任何实体。在一些实施方案中，标签是直接标签，例如在自然状态下很容易被肉眼或借助滤光器和/或施加的刺激(如促进荧光的紫外光)容易看见的实体。例如，微小的有色颗粒，诸如染料溶胶、金属溶胶(如金)和有色乳胶颗粒，都是非常合适的。将标签集中到小的区或体积中会产生易于检测的信号，如，强烈着色的区域。这可以通过眼睛或通过仪器(如果需要)进行评价。
[0099]
在一些实施方案中，所述技术包括使用间接标签。可以使用间接标签，诸如酶如碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶，但这些通常需要添加一种或多种显影试剂，诸如底物，才能检测到可见信号。可将此类额外的试剂掺入到多孔固相材料中或样品接收构件(如果存在的话)中，以使得它们溶解或分散在水性液体样品中。可替代地，可以在与多孔材料接触之前将显影试剂添加到样品中，或者可以在发生结合反应之后将多孔材料暴露于显影剂中。
[0100]
如果需要，可以通过共价键合或疏水键合将标签与特异性结合试剂偶联。
[0101]
根据所述技术，经标记的试剂随着液体样品行进到检测区中而迁移。在一些实施方案中，样品流继续行进至超出检测区，并且将足够的样品施加到多孔材料中，从而使得这种情况可以发生，并且来自第一区的不参与第二区中的任何结合反应的任何过量的经标记的试剂被这种持续的流冲离检测区。如果需要，可以在载体材料的远端(如，在侧流测定测试条的远端)设置吸收“槽”。吸收槽可以包括例如whatman 3mm色谱纸并且应该提供足够的吸收能力以允许任何未结合的缀合物被洗出检测区。作为此类槽的替代方案，具有延伸超过检测区的一定长度的多孔固相材料可能就足够了。
[0102]
在一些实施方案中，来自结合在第二区中的标记的信号的存在或强度提供了样品中分析物的定性或定量测量。水性液体样品可逐步通过的多孔固相材料上串联布置的多个检测区也可被用于对分析物进行定量测量，或可单独加载有不同的特异性结合剂以提供多分析物测试。
[0103]
在一些实施方案中，第二区中固定化的特异性结合试剂是高度特异性的抗体(如，单克隆抗体)。在涉及夹心反应的技术的实施方案中，经标记的试剂也是一种高度特异性的抗体(如，单克隆抗体)。
[0104]
在一些实施方案中，载体材料为条(如，侧流测定测试条)或片材的形式，试剂被施加到该条(如，侧流测定测试条)或片材上的空间上不同的区中，并且该液体样品得以穿过该片材或条从一侧或一端渗透到另一侧或另一端。
[0105]
在一些实施方案中，根据所述技术的测定设备掺入有两个或更多个多孔固相材料离散体，如分开的侧流测定测试条或片材，其各自携载有可移动的和固定化的试剂。例如，这些离散体可以被平行布置，使得将液体样品单次施加到测定设备能同时启动离散体中的样品流动。可以以这种方式确定的单独分析结果可以用作对照结果。如果在不同的载体上使用不同的试剂，则可以进行单个样品中的多种分析物的同时测定。可替代地，可以将多个样品单独施加至载体阵列中并同时进行分析。
[0106]
在一些实施方案中，构成多孔固相的材料是硝化纤维素。这所具有的优点是第二区中的抗体可以在没有预先化学处理的情况下被牢固地固定。例如，如果多孔固相材料包括纸，则抗体在第二区中的固定需要通过使用例如溴化氰(cnbr)、羰基二咪唑或三氟乙磺
酰氯(tresyl chloride)的化学偶联来进行。
[0107]
在将抗体施加到检测区之后，对多孔固相材料的其余部分进行处理，以封闭其他地方的任何剩余结合位点。例如，可以通过用蛋白质(如牛血清白蛋白或乳蛋白)或用聚乙烯醇或乙醇胺或这些剂的任何组合处理来实现封闭。然后可以将用于第一区的经标记的试剂分配到干燥载体上，该经标记的试剂在载体处于潮湿状态时将变得可在载体中移动。在这些各种的工艺步骤(敏化、施加未经标记的试剂及封闭和施加经标记的试剂)的每一个之间，干燥多孔固相材料。
[0108]
在一些实施方案中，将经标记的试剂作为表面层施加到载体上，而不是浸渍在载体的厚度中，如，以促进经标记的试剂在多孔载体被样品润湿时的自由流动性。这可以最小化载体材料和经标记的试剂之间的相互作用。在一些实施方案中，将载体中的待施加经标记的试剂的区域用上釉材料进行预处理。例如，可以通过将如蔗糖或乳糖的糖或纤维素水溶液沉积在载体上的相关部分处并干燥来实现上釉。然后可以将经标记的试剂施加到上釉部分上。在一些实施方案中，载体材料的其余部分没有上釉。
[0109]
在一些实施方案中，多孔固相材料是硝化纤维素片材，其孔隙大小为至少约1微米，如大于约5微米(如约8-12微米)。在一些实施方案中，该硝化纤维素片材的标称孔隙大小高达约12微米(如，1-12微米(如，1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5或12.0微米)；5-12微米(如，5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5或12.0微米)；8-12微米(如，8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9或12.0微米)；和/或0.01至12微米(如，0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9或12.0微米))。
[0110]
在一些实施方案中，硝化纤维素片材“加有背衬”，如加有塑料片材背衬，以增加其处理强度。这可以通过在一片背衬材料上形成一层薄薄的硝化纤维素来轻松制造。当硝化纤维素以这种方式加有背衬时，其实际孔隙大小将往往小于相应的未被背衬的材料的孔隙大小。在一些实施方案中，可以将预先形成的硝化纤维素片材紧紧地夹在两个固体材料的支撑片材(如塑料片材)之间。
[0111]
在一些实施方案中，通过多孔固相材料的含水样品的流速使得在未处理的材料中，含水液体在不超过2分钟内以大约1cm的速率迁移，但是如果需要可以使用更慢的流速。在一些实施方案中，区之间的空间间隔和多孔载体材料的流速特性被选择成允许足够的反应时间(在此期间可以发生必要的特异性结合)，并允许第一区中经标记的试剂溶解或分散在液体样品中并迁移通过载体。通过在样品中掺入粘度调节剂(如糖和改性纤维素)以减缓试剂迁移，可以实现对这些参数的进一步控制。
连接的微球的沉淀在室温下悬浮在含有1-5％wt/体积的牛血清白蛋白(bsa)的缓冲液中1小时。bsa封闭微球的任何未反应表面。再离心一次后，将球体重悬在缓冲液(含5％bsa的tbs)中，并在使用前储存在4℃。
[0118]
在一些实施方案中，固相颗粒包括水分散性颗粒，诸如通过引用并入本文的美国专利no.3,088,875中公开的聚苯乙烯乳胶颗粒。此类固相材料简单地由抗原/抗体能够结合的水不溶性小颗粒的悬浮液组成。适合的固相颗粒也公开在例如美国专利no.4,184,849；4,486,530；和4,636,479中，其中的每一篇均都通过引用并入本文。
[0119]
在一些实施方案中，分析物附着于荧光微球或荧光微粒。典型地，荧光微球在微球的固体外基质或内部体积中掺入荧光染料。荧光球通常由荧光读取仪检测，该荧光读取仪在一个波长下激发分子并检测在另一个波长处发射的荧光波。例如，尼罗红(nile red)颗粒在526nm下激发并在574nm下发射，远红(far red)在680nm下激发并在720nm下发射，并且蓝色(blue)在365nm下激发并在430nm下发射。在侧流测定形式中，在一些实施方案中，荧光微粒的检测涉及使用具有适当激发源(如，hene、氩、钨或二极管激光器)和用于检测的适当发射滤光片的反射率读取仪。二极管激光器的使用允许使用利用低成本激光器的检测系统，其检测波长高于600nm。大多数本底荧光来自发出低于550nm的荧光的分子。
[0120]
在一些实施方案中，荧光微球包含表面官能团，诸如羧酸根、硫酸根或醛基团，使其适用于蛋白质和其他含胺生物分子的共价偶联。此外，硫酸根、羧基和脒微球是疏水性颗粒，其将被动吸收几乎任何蛋白质或凝集素。因此，涂层类似于非荧光微球。在一些实施方案中，将荧光球的悬浮液在超声处理后与抗原/抗体在水中或在磷酸盐缓冲溶液中混合，之后将它们在室温下孵育10-75分钟。edac(可溶性碳二亚胺)、琥珀酰亚胺酯和异硫氰酸酯以及其他交联剂可用于蛋白质和凝集素与微球的共价偶联。在蛋白质附着到微粒表面后，将混合物离心，并将含有与荧光微粒连接的抗原或抗体的沉淀悬浮在含有1-5％牛血清白蛋白的缓冲液中一小时。再离心一次后，将球体重悬在缓冲液(含5％bsa的tbs或其他适当的缓冲液)中，并在使用前储存在4℃。
[0121]
在一些实施方案中，固相颗粒包括，例如乳胶或其他载体材料(诸如二氧化硅、琼脂糖、玻璃、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸甲酯、羧酸盐改性乳胶和琼脂糖)的颗粒。优选地，颗粒的大小从约0.2微米至约10微米变化(如为0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0微米)。在一些实施方案中，将颗粒以本领域本身已知的方式用与其偶联的抗原层涂布以呈递固相组分。
[0122]
因此，实施方案提供：包含针对病原体(如，微生物，诸如病毒、原核生物(如，细菌)或真核生物(如，真菌或原生动物寄生虫))的抗体(如，igg和/或igm)的样品与经标记的抗原发生反应从而形成抗原-抗体复合物(如，经标记的抗原-抗体复合物)。抗原-抗体复合物开始沿着侧流测定测试条迁移。抗原-抗体复合物开始沿着侧流测定测试条迁移。在一些实施方案中，在侧流测定测试条的长度的更下方是三个结合位点。第一结合位点优选结合igm。第二结合位点优选结合igg。第三结合位点用于对照。更具体地，每个结合位点是沿着
侧流测定测试条的宽度的条纹线的形式。每个结合位点包含抗体。例如，在一些实施方案中，抗人igm抗体被铺设在第一结合位点处并且抗人igg抗体被铺设在第二位点处。在对照位点固定有针对对照物质的抗体(如，经标记的抗体或抗原)。在一些实施方案中，与igm和igg结合的抗体来自对山羊、兔、驴、绵羊、鸡或其他动物的免疫血清的亲和纯化。在一些实施方案中，与igm和igg结合的抗体是针对igm和igg的单克隆抗体。在一些实施方案中，所使用的抗体对igm和igg抗体的重链部分有特异性。
[0123]
在一些实施方案中，包含病原体(如，微生物，诸如病毒、原核生物(如，细菌)或真核生物(如，真菌或原生动物寄生虫))或病原体抗原(如，微生物诸如病毒、原核生物(如细菌)或真核生物(如真菌或原生动物寄生虫)的抗原和/或组分或部分)的样品与抗体(如经标记的抗体)反应从而形成抗原-抗体复合物(如经标记的抗原-抗体复合物)。抗原-抗体复合物开始沿着侧流测定测试条迁移。参见，如图1。在一些实施方案中，在侧流测定测试条的长度的更下方是两个或三个结合位点。第一结合位点包含对病原体(如，微生物诸如病毒、原核生物(如细菌)或真核生物(如，真菌或原生动物寄生虫))或病原体抗原(如，微生物诸如病毒、原核生物(细菌)或真核生物(如真菌或原生动物寄生虫))的抗原和/或组分或部分有特异性的固定化的抗体。在对照位点固定有针对对照物质的抗体(如，经标记的抗体或抗原)。尽管本文中的公开内容涉及某些例示的实施方案，但应理解，这些实施方案是通过实例而非限制的方式呈现的。
[0124]
实施例
[0125]
包括样品转移组件的自测设备
[0126]
在本文描述的技术的实施方案的开发过程中，设计和测试了自测设备的实施方案(如，200a和200b)，其采集定量测量的血液体积用于测试并显示在采集过程期间采集的量是否足够。特别地，测定设备包括样品采集端口213，该样品采集端口213包括用于样品采集的基座201(图2a和图2b)，该基座201流体连接到血液转移部件202(图2a和2b)，该血液转移部件202包括血样毛细管和可压缩室206(图2c)。样品采集端口213(例如，包括基座201)被适配成直接从人的手指采集血样，例如，通过允许血滴在从手指(如，刺破的手指)落下时接触和/或进入样品采集端口。
[0127]
如图2a和2b所示，在一些实施方案中，自测设备200a和/或200b包括顶板250和底板260。在一些实施方案中，顶板包括信号窗209、缓冲液孔210、测试结果查看窗211、样品采集端口213和供自测设备的用户触及(如，接触和压缩)可压缩室(参见图2c，206)的窗214。当组装(如，通过耦接顶板250和底板260)时，侧流测定测试条212、基座201和血液转移部件202在组装的顶板250和底板260之间保持就位。在一些实施方案中，底板260包括将侧流测定测试条212、基座201和血液转移部件202保持在适当位置的凸起特征件。样品采集端口213包括在其上提供样品的基座201。基座201与设备的外部流体连通，并因此，当患者从手指提供血样时，基座与患者手指(如，与患者血液)流体连通。基座201与血液转移部件202(如，血液转移部件202的大端205)流体连通。血液转移部件202的小端203与缓冲液孔210流体连通。缓冲液孔210与侧流测定测试条212流体连通。
[0128]
尽管提供在顶板250、底板260中并保持在顶板250和底板260之间的特征件(如，侧流测定测试条212、基座201和血液转移部件202)的布置可变化(如，如实施方案200a和200b中所示)，但所述技术提供：将血样通过样品采集端口213提供到基座，血样由基座213递送
至血液转移部件202，并通过可压缩室5(参见图2c，206)的操作，计量的血样被提供给缓冲液孔210以提供经缓冲的血样。向缓冲液孔210提供缓冲液启动了在侧流测定测试条212上对经缓冲的血样进行测定。因此，所述技术不限于如实施方案200a和200b所示的实施方案，只要样品如所描述的那样提供并且如所描述的那样流动通过组件。
[0129]
例如，在一些实施方案中，样品采集端口213包括“基座”201，该“基座”201包括将血样引导至血液转移部件202的凹槽。基座201包括主中央凹槽和一个或多个流体连接至主中央凹槽的横向凹槽。基座201的顶面是凹形的，使得血样汇集在基座201的凹形面内。基座201包括与血液转移部件202流体连接的斜坡组件。斜坡组件包括至少一部分的主要中央凹槽。汇集在基座201内的血液被重力拉动从而在主中央凹槽内沿着斜坡组件向下移动到血液转移部件。横向凹槽有助于将汇集在基座201的凹形面内的血液输送到主中央凹槽，以输送到血液转移部件202。在血样转移到血液转移部件202之后，血样毛细管充满血液。
[0130]
基座与血样毛细管流体连通。因此，血样毛细管填充有提供给测定设备(如，提供给基座201)的血样。血样毛细管包括与中心部分204(图2c)流体连接的小端203(图2c)和与中心部分204流体连接的大端205(图2c)。在血样毛细管的小端203中，毛细力将血液从包括基座201的样品采集端口吸入血样毛细管中，并且血液移动至血样毛细管的中心部分204和/或大端205中。血样毛细管的大端205中的毛细力可以忽略和/或不存在。
[0131]
血样毛细管的小端203流体连接到包括基座201的样品采集端口，并且大端205流体连接到缓冲液孔210，缓冲液孔210继而流体连接到侧流测定测试条212(如，侧流测定测试条的样品垫)。中心部分204流体连接到可压缩室206(图2c)(如，包括空气的可压缩室)。血样毛细管(如血样毛细管的小端203)流体连接到包括基座201的样品采集端口，使得接触包括基座201的样品采集端口的血液通过毛细作用移动到血样毛细管中。因此，提供到包括基座201的样品采集端口的血样(如，通过刺破手指并将所得的血样接触到包括基座201的样品采集端口)从包括基座201的样品采集端口移动到血样毛细管，从而使血样毛细管的至少一部分填充有血液。测定设备包括信号窗209，通过该信号窗可以看到血样毛细管。当用户观察到通过信号窗209可见的血样毛细管部分中的血液时，已经向测定设备提供了足够量的血液。在确认(如，通过对信号窗209的视觉检查)血样毛细管中已经采集了足够量的血液之后，通过将缓冲液提供到缓冲液孔210中来将血样与缓冲液混合，从而提供了经缓冲的血样。经缓冲的血样因此通过毛细作用被提供给侧流测定测试条212。
[0132]
具体地，通过压缩可压缩室206将采集的血样(如，在血样毛细管中)转移到缓冲液孔210。在一些实施方案中，该设备包括可操作地连接到可压缩室206的血液转移按钮。可压缩室206包括空气。当压缩可压缩室206时，该可压缩室中的空气被移动到血样毛细管中并且血样毛细管中的血液移向和移出血样毛细管的大端205。当向血样毛细管的中心部分204中的血液施加压力(如，通过压缩与血样毛细管的中心部分204流体连通的可压缩室206)时，血样毛细管的大端205提供比血样毛细管的小端203更低的血流阻力。特别地，血样毛细管的小端203处的头压大于血样毛细管的大端205处的头压，因为血样毛细管的小端203具有比血样毛细管的大端的内径和/或面积(图2c，208)小的直径和/或面积(图2c，207)。此外，血样毛细管的小端203中的毛细管压力为血液向血样毛细管的大端205的流体输送提供驱动力。因此，血液的计量部分流向血样毛细管的大端205。在一些实施方案中，血样毛细管的小端203的内径207为约0.5mm(如，0.40、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、
0.49、0.50、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59或0.60mm)并且血样毛细管的大端205的内径208为约1.1mm(如，1.00、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.10、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19或1.20mm)。在一些实施方案中，血样毛细管的长度(如，从小端至大端)为约42.8mm(e.g.,42.0、42.1、42.2、42.3、42.4、42.5、42.6、42.7、42.8、42.9、43.0、43.1、43.2、43.3、43.4、43.5、43.6、43.7、43.8、43.9或44.0mm)。
[0133]
压缩可压缩室206使血样的计量部分(如，包括约1、2、3、4或5滴(如，约50至250微升(如，50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245或250微升)))移动至缓冲液孔210。在一些实施方案中，该设备包括转移按钮(未示出)并且按下转移按钮压缩可压缩室206。可压缩室206继而压缩血样毛细管以驱动血样的计量部分(如，包括约1、2、3、4或5滴(如，约50至250微升(如，50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245或250微升)))移至测定设备的缓冲液孔210。在一些实施方案中，压缩可压缩室206移动空气，该空气驱动血样的计量部分(如，包括约1、2、3、4或5滴(如，约50至250微升(如，50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245或250微升)))移至测定设备的缓冲液孔210。
[0134]
接下来，将缓冲液(如，约1、2、3、4或5滴(如，约50至250微升(如，50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245或250微升)))提供至测定设备的缓冲液孔210。缓冲液与缓冲液孔210中的血样混合从而提供经缓冲的血样。经缓冲的血样接触侧流测定测试条212从而启动侧流测定测试条212上的侧流测定。在经过足以使侧流测定测试条显色的时间间隔之后读取测试结果。适当的时间间隔可以根据通过侧流测定和/或通过测定装置的特定设计测试(如，检测)的分析物而变化。在一些实施方案中，测试结果在自启动侧流测定以来已经过去5至40分钟(如，5、10、15、20、25、30、35或40分钟)的时间之后读取。在一些优选的实施方案中，测试结果在启动侧流测定15分钟之后和20分钟之前(如，在启动侧流测定的15
–
20分钟内(如，在15.0、15.5、16.0、16.5、17.0、17.5、18.0、18.5、19.0、19.5或20.0分钟之后)(如，在提供缓冲液至缓冲液孔中的15
–
20分钟内(如，在15.0、15.5、16.0、16.5、17.0、17.5、18.0、18.5、19.0、19.5或20.0分钟之后)))读取。用户观察测试结果线(如，针对igm(“m”)和/或igg(“g”)的存在)和/或对照线处颜色的形成。参见，如图2d。
[0135]
在一些实施方案中，用户在启动侧流测定之后立即启动计时器并在计时器指示时间间隔的结束之后读取测试结果(如，通过测试结果查看窗211)。
[0136]
因此，所述技术的实施方案涉及一种方法，该方法包括从患者获得血样、通过信号窗观察血液以及压缩与样品采集端口和血样毛细管流体连通的可压缩室(如，通过按压血液转移组件(如，按钮))以将血样从血样毛细管推进到缓冲液孔。在一些实施方案中，用户将缓冲液添加到样品中(如，通过将缓冲液提供到测定设备的缓冲液孔中)。缓冲液与血样混合，然后经缓冲的血样利用由侧流测定测试条提供的芯吸作用被推进到侧流测定测试条
中。因此，提供缓冲液(如，至缓冲液孔中)启动了在侧流测定测试条上的侧流测定。因此，本文提供的技术简化了操作步骤，并且方便用户操作。
[0137]
特别地，在一些实施方案中，该技术因毛细原理填充了血样毛细管来提供定量采集。血样毛细管的两个末端为大端和小端，并且空气被吹到中间。在向血样毛细管的中心处的样品部分施加空气压力后，液体将仅流向大端并从大端流出，其向缓冲液孔提供经计量的样品量的样品转移，并且随后转移到侧流测定测试条。因此，在一些实施方案中，该技术规定，不需要使用移液管转移经量化(例如，经计量的)的量的血样；血液采集是通过观察信号窗中的血液进行量化和确认(例如，表明血液采集体积足够)。此外，由用户按压的部件是弹性材料，其最小化和/或消除了设备误操作的机会。因此，该技术可用于转移经量化的样本(例如，血样)到试剂条中。在使用过程中，用户将血液放置在样品采集端口上，并使用血液转移组件转移经计量的血样到侧流测定测试条。参见，例如，图2a、图2b和图2c。
[0138]
在一些实施方案中，自测设备可用于诊所，其中自测设备的检测员和/或用户执行分析物的测定，例如以测试样品的病原体感染。在一些实施方案中，设备的用户提供样品，并且用户判定测试结果。在一些实施方案中，用户提供样品，并且医疗保健提供者判定测试结果。在一些实施方案中，医疗保健提供者获得样品，医疗保健提供者提供样品给自测设备，并且医疗保健提供者判定测试结果。因此，在一些实施方案中，该技术给消费者(例如，外行用户)提供设备，以测试他们自己的病原体感染。在一些实施方案中，该技术给医疗保健提供者提供设备，以测试患者的病原体感染。在设备的一些实施方案中，血液被采集到容器(例如，通过观察移液管、毛细管或样本滴管上的灌注线来抽吸固定量的血液)，然后转移到试剂条中，并且在一些实施方案中，血样被直接提供给测定设备。
[0139]
血清学侧流测定
[0140]
本文提供了另一种用于检测对sars-cov-2具有特异性的抗体的示例性侧流测定。测定设备包括壳体、塑料背衬、硝酸纤维素膜、样品垫、标签垫以及吸附剂垫。参见，例如，图1。标签垫包含重组sars-cov-2抗原，所述抗原包含标签(例如胶体金或胶体乳胶)。标签垫包含兔抗体(例如，igg)，所述兔抗体包含对照反应的标签(例如，胶体金或胶体乳胶)。硝酸纤维素膜包含检测区，所述检测区包含两条测试线和对照线。在一些实施方案中，第一测试条包含第一测试线，并且第二测试条包含第二测试线。在一些实施方案中，一个测试条包含所述第一测试线和所述第二测试线。在包含第一测试条和第二测试条的实施方案中，所述第一测试条和/或所述第二测试条可以包含对照线。所述第一测试线包含经固定的小鼠抗人igg单克隆抗体，并且所述第二测试线包含经固定的小鼠抗人igm单克隆抗体。所述对照线包含山羊抗兔igg单克隆抗体。
[0141]
为测试针对sars-cov-2的igg和/或igm抗体的存在，用户获得血清、血浆、全血或毛细管血的样品。将样品施加到所述样品垫。接下来，两滴缓冲液被施加到所述样品垫以启动测试。“g”测试线处可见的线指示样品中存在抗-sars-cov-2igg。“m”测试线处可见的线指示样品中存在抗-sars-cov-2igm。“c”对照线处可见的线指示测试正确地执行。“c”对照线处没有可见的线指示无效测试。参见，例如，图2d。
[0142]
前面的说明书中提及的所有出版物和专利都通过引用方式以其整体并入本文用于全部目的。该技术的描述的组合物、方法和用途的各种修改和变化对本领域的技术人员将是显而易见的，而不偏离所述技术的范围和精神。虽然该技术已结合具体的示例性实施
方案进行描述，但应当理解，所要求保护的本发明不应受到此类具体实施方案的不当限制。事实上，对本领域技术人员来说显而易见的所述实施本发明的模式的各种修改，预期都在所附权利要求的范围内。