一种表别石胆酸的用途

1.本发明涉及一种已知化合物―表别石胆酸(epiallolithocholicacid)的用途。


背景技术：

2.胆汁酸是胆汁里的一个有效成分，是参与胆汁消化功能的重要成分之一。 其含量变化在肝脏病诊断中具有重要的参考价值，已公开的文献中披露胆汁酸 具有抑制肿瘤的效果。另，中国发明专利申请202111019726.6公开胆石酸具有 抗金葡菌mrsa和mssa、大肠埃希菌esbls 、大肠埃希菌esbls-和铜绿假单 胞菌的抑菌活性。本发明所涉及的表别石胆酸是肠道中最重要的次级胆汁酸之 一，其分子式为：c
24h40
o3，结构式如下式所示：
3.

技术实现要素：

4.本发明公开一种表别石胆酸的用途。
5.本发明的表别石胆酸在制备抗缓症链球菌的药物中的应用。
6.缓症链球菌属于α-溶血性链球菌(亦称甲型溶血性链球菌)，通常是人体 口腔、消化道、生殖道等部位的正常菌群之一，该菌是一种条件致病菌，可致 中毒性休克综合征，亚急性心内膜炎，前列腺炎等，此外，还可致肺炎、心包 炎、腹膜炎、唾腺炎、口面部感染、牙源性感染、中耳炎、鼻窦炎等。据报道 在发病猪体内分离到此病原菌，并且导致仔猪发病和死亡严重，说明缓症链球 菌对猪也是有致病性。在儿科常用抗生素中，缓症链球菌对氨曲南、头孢曲松、 哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸钾均有不同程度耐药，耐药率达到 42.3％-48.1％。这些抗生素目前仍然是儿童肺炎的常用药物。细菌耐药是全球问
7.实验表明，表别石胆酸具有良好的抑制缓症链球菌活性。
附图说明
8.图1：表别石胆酸浓度与缓症链球菌生长抑制率关系图。图2：氯霉素浓度与缓症链球菌生长抑制率关系图。
具体实施方式
9.以下本发明结合实施例进行解说，实验中采用微量肉汤二倍稀释法对表别 石胆酸进行了体外抗菌活性测试，考察其对缓症链球菌的抗菌活性，以对照品 氯霉素进行实验系统的评价。
10.(一)供试品及对照
11.1.1供试品
12.名称：表别石胆酸，市售商品。
13.供试品临用前用乙醇配制成最大浓度5mg/ml，依次对倍稀释。
14.1.2对照品
15.名称：氯霉素，市售品。
16.(二)测试菌株及其培养方法
17.2.1菌株：缓症链球菌atcc49456
18.2.2菌种来源：购于北京百欧博伟生物技术有限公司。
19.2.3培养条件：todd-hewittbroth，37℃孵育24h-48h。
20.2.4菌种开启接种并培养
21.用75％酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖。 缓慢开启胶塞，用75％酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml液体培 养基复溶冻干粉末，将悬液接种在培养基上，37℃培养24小时后，挑取单个菌 落于液体培养基中在相同的培养条件下培养增菌。
22.2.5菌液工作液的准备
23.当od600值达到0.5左右(约109cfu/ml)，经thb肉汤梯度稀释(0、10、 100、1000、10000、100000、10000倍)后，取100μl菌悬液接种于固体培 养基上，培养24h后计数活菌数，计算菌悬液浓度，再将此混悬菌液进行稀释， 使菌悬液最终浓度约为2
×
106cfu/ml。菌种操作均在无菌条件下进行，实验 完毕，所有耗材经灭菌再做丢弃处理。
24.(三)抑制50％受试菌所需最低抑菌浓度的测定(mic50)
25.3.1测试方法：采取微量肉汤稀释法，进行mic50的测定。
26.实验分为阳性对照组(即不含药物的菌悬液)、阴性对照组(含溶媒乙醇的 培养基)和实验组(含不同浓度的表别石胆酸菌悬液)。以上各组均设置3个平 行组。将浓度为100μg/ml的表别石胆酸实验液按对倍稀释溶于液体培养基中， 使其终浓度为100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、 3.125μg/ml、0μg/ml。浓度为2
×
106cfu
·
ml-1
菌悬液与各组药液按比例1∶1 各100μl，分别接种于无菌96孔板中，使菌悬液的终浓度为1
×
106cfu/ml(含 105cfu/孔)，置于适当的培养条件下培养20h。同时设置对照品氯霉素，使其 终浓度分别为32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、 0μg/ml。培养结束后，在黑色背景下进行肉眼观察，平皿内未见细菌生长的最 低药物浓度即为表别石胆酸的最低抑菌浓度(mic)。所有菌种的mic测定实验重 复3次。悬浮菌体测od600值，不同浓度的供试品及对照抑菌率的计算方法： 抑菌率(％)＝1-(供试品od值—阴性对照od值)/(阳性对照od值—阴性对 照od值)
×
100％。通过曲线拟合得函数计算而得mic50。
27.3.2结果判断
28.本次试验结果见表1，抑制率见图1。当阳性对照孔(即不含药物)内细菌 明显生长，试验才有意义。结果显示，阳性对照孔(即不含药物)内细菌正常 生长，溶媒对照培养基孔无菌生长。对照品氯霉素对缓症链球菌的mic值为 4μg/ml，结果见表2，抑制率见图2符合美国临床实验室标准化委员会(nationalcommittee for clinical library standardization,nccls)2001年的《抗微 生物药物敏感试验的执行标准：第十一版信息增刊》m100-s11中氯霉素对缓症 链球菌≤4μg/ml的标准，说明本实验方法是可靠的。
29.统计结果表明：表别石胆酸对受试的缓症链球菌的mic50为6.526μg/ml。 综上所
述，表别石胆酸有良好的抑制缓症链球菌活性。
30.表1:不同浓度表别石胆酸对缓症链球菌生长影响的吸光值测定
[0031][0032]
表2：不同浓度氯霉素对缓症链球菌生长影响的吸光值测定
[0033]


技术特征：
1.表别石胆酸在制备抗缓症链球菌atcc49456的药物中的应用。

技术总结
本发明公开一种已知化合物―表别石胆酸在制备抗缓症链球菌ATCC49456的药物中的应用。本发明实验表明，表别石胆酸具有良好的抑制缓症链球菌活性,是一种潜在的可代替现有抗生素抑制缓症链球菌的药物。生素抑制缓症链球菌的药物。


技术研发人员：王帅 王玉桂 郭爱疆 邹扬 张少华
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：2022.08.11
技术公布日：2022/11/18