均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒的制作方法

1.本发明涉及化学发光免疫分析法技术领域，尤其是一种均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒。


背景技术：

2.猫咪如果确诊患有胰腺炎，可能同时出现胆管炎、十二指肠肠炎，导致猫咪出现频繁的呕吐，精神食欲下降，如果猫咪体重偏重，由于长时间没有进食，可能导致猫咪继发肝脏脂质沉积症，引起猫咪出现皮肤以及可视粘膜黄疸。
3.目前国内外的兽医临床上，对急性胰腺炎的诊断主要是依靠体检和实验室诊断指标相结合的办法，但是大量的临床统计数包括病史调查、光检查、超声检查等在内的体检方法对猫胰腺炎的诊断特异性和敏感性均不强，无法单纯通过这些方法建立对猫胰腺炎的准确诊断。
4.现有的猫胰腺脂肪酶的检测产品，采用的是荧光免疫层析试剂盒，其在样品垫上包被捕获猫胰脂肪酶的抗体所用的稀释剂配方中含蛋白保护成分种类较多。该方法属于半定量检测，结果准确度不高。


技术实现要素：

5.本发明的目的是：提供一种检测检测结果精准、检测速度快的均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒。
6.为实现上述目的，本发明中采用的技术方案如下：
7.均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒，所述试剂盒中的检测溶液包括dna1-fpl抗体1偶联物、dna2-fpl抗体2偶联物、标记吖啶酯ae的dna3和氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod；
8.所述dna1含有51个碱基，3’修饰nh2c6，通过偶联剂磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体1上的氨基共价结合，形成dna1-fpl抗体1偶联物；
9.所述dna2含有50个碱基，5’端修饰nh2c5，通过磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体2上的氨基共价结合，形成dna2-fpl抗体2偶联物；
10.所述dna3含有18个碱基，5’端修饰吖啶酯ae；
11.dna1与dna2之间有7个碱基互补，dna1与dna3之间有6个碱基互补，dna2与dna3之间有6个碱基互补。
12.进一步的，所述dna1-fpl抗体1偶联物的浓度为为8-16nm，dna2-fpl抗体2偶联物的浓度为为8-16nm，标记吖啶酯ae的dna3的浓度为0.06-0.16μm，氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod的浓度为18μg/ml。
13.进一步的，所述dna1-fpl抗体1偶联物的浓度为为12nm，dna2-fpl抗体2偶联物的浓度为为12nm，标记吖啶酯ae的dna3的浓度为0.12μm，氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod的浓度为18μg/ml。
14.进一步的，所述dna3从3’开始的3-8与dna1从5’端开始的3-8碱基位点的碱基互补，dna3从5’开始的3-8与dna2从3’端开始的3-8碱基位点的碱基互补
15.进一步的，所述dna1的序列5
’‑3’
如下：tgacaatcgcagtttgaaacggctagcacgccggtaaggttacgagattga-nh2c6；
16.所述dna2的序列5
’‑3’
如下：nh2c
5-ctgtactgtcgatgcatacattggagcgatcgtgttttgggggtgactcg；
17.所述dna3的序列5
’‑3’
如下：ae-nh2c
5-atcactgagcgattggga。
18.采用本发明中的技术方案的有益效果：
19.本发明中的均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒，相比于现有的荧光免疫层析试剂盒，其在样品垫上包被捕获猫胰脂肪酶的抗体所用的稀释剂配方中含蛋白保护成分种类较多，本发明中的检测方法简单、检测精度和灵敏度高，蛋白保护成分种类少，溶液稳定性高。
具体实施方式
20.下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
21.实施例1
22.均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒，所述试剂盒中的检测溶液包括dna1-fpl抗体1偶联物、dna2-fpl抗体2偶联物、标记吖啶酯ae的dna3和氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod；
23.所述dna1含有51个碱基，3’修饰nh2c6，通过偶联剂磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体1上的氨基共价结合，形成dna1-fpl抗体1偶联物；
24.所述dna2含有50个碱基，5’端修饰nh2c5，通过磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体2上的氨基共价结合，形成dna2-fpl抗体2偶联物；
25.所述dna3含有18个碱基，5’端修饰吖啶酯ae；
26.dna1与dna2之间有7个碱基互补，dna1与dna3之间有6个碱基互补，dna2与dna3之间有6个碱基互补。
27.dna1-fpl抗体1偶联物的浓度为为8-16nm，dna2-fpl抗体2偶联物的浓度为为8-16nm，标记吖啶酯ae的dna3的浓度为0.06-0.16μm，氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod的浓度为18μg/ml。
28.dna1-fpl抗体1偶联物的浓度为为12nm，dna2-fpl抗体2偶联物的浓度为为12nm，标记吖啶酯ae的dna3的浓度为0.12μm，氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod的浓度为18μg/ml。
29.dna3从3’开始的3-8与dna1从5’端开始的3-8碱基位点的碱基互补，dna3从5’开始的3-8与dna2从3’端开始的3-8碱基位点的碱基互补
30.dna1的序列5
’‑3’
如下：tgacaatcgcagtttgaaacggctagcacgccggtaaggttacgagattga-nh2c6；
31.dna2的序列5
’‑3’
如下：nh2c
5-ctgtactgtcgatgcatacattggagcgatcgtgttttgggggtgactcg；
32.dna3的序列5
’‑3’
如下：ae-nh2c
5-atcactgagcgattggga。
33.检测方法：
34.将全血或血清或血浆与1500μl检测试剂混合，置于hscl-10000化学发光仪中，并在37℃条件下温度5-10min；
35.加入化学发光底物，通过化学发光检测仪中的检测模块进行光信号采集，仪器自动调用标准曲线，从而得出样品中物质的浓度。
36.实施例2
37.均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒，所述试剂盒中的检测溶液包括dna1-fpl抗体1偶联物、dna2-fpl抗体2偶联物、标记吖啶酯ae的dna3和氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod；
38.所述dna1含有51个碱基，3’修饰nh2c6，通过偶联剂磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体1上的氨基共价结合，形成dna1-fpl抗体1偶联物；
39.所述dna2含有50个碱基，5’端修饰nh2c5，通过磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体2上的氨基共价结合，形成dna2-fpl抗体2偶联物；
40.所述dna3含有18个碱基，5’端修饰吖啶酯ae；
41.dna1与dna2之间有7个碱基互补，dna1与dna3之间有6个碱基互补，dna2与dna3之间有6个碱基互补。
42.dna1-fpl抗体1偶联物的浓度为为8nm，dna2-fpl抗体2偶联物的浓度为为8nm，标记吖啶酯ae的dna3的浓度为0.06μm，氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod的浓度为18μg/ml。
43.dna3从3’开始的3-8与dna1从5’端开始的3-8碱基位点的碱基互补，dna3从5’开始的3-8与dna2从3’端开始的3-8碱基位点的碱基互补
44.dna1的序列5
’‑3’
如下：tgacaatcgcagtttgaaacggctagcacgccggtaaggttacgagattga-nh2c6；
45.dna2的序列5
’‑3’
如下：nh2c
5-ctgtactgtcgatgcatacattggagcgatcgtgttttgggggtgactcg；
46.dna3的序列5
’‑3’
如下：ae-nh2c
5-atcactgagcgattggga。
47.检测方法：
48.将全血或血清或血浆与1500μl检测试剂混合，置于hscl-10000化学发光仪中，并在37℃条件下温度5-10min；
49.加入化学发光底物，通过化学发光检测仪中的检测模块进行光信号采集，仪器自动调用标准曲线，从而得出样品中物质的浓度。
50.实施例3
51.均相化学发光法检测猫胰腺特异性脂肪酶的试剂盒，所述试剂盒中的检测溶液包括dna1-fpl抗体1偶联物、dna2-fpl抗体2偶联物、标记吖啶酯ae的dna3和氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod；
52.所述dna1含有51个碱基，3’修饰nh2c6，通过偶联剂磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体1上的氨基共价结合，形成dna1-fpl抗体1偶联物；
53.所述dna2含有50个碱基，5’端修饰nh2c5，通过磺基琥珀酸二异辛酸与fpl抗体2上的氨基共价结合，形成dna2-fpl抗体2偶联物；
54.所述dna3含有18个碱基，5’端修饰吖啶酯ae；
55.dna1与dna2之间有7个碱基互补，dna1与dna3之间有6个碱基互补，dna2与dna3之间有6个碱基互补。
56.dna1-fpl抗体1偶联物的浓度为为16nm，dna2-fpl抗体2偶联物的浓度为为16nm，标记吖啶酯ae的dna3的浓度为0.16μm，氧化石墨烯go结合抗氧化剂aod的浓度为18μg/ml。
57.dna3从3’开始的3-8与dna1从5’端开始的3-8碱基位点的碱基互补，dna3从5’开始的3-8与dna2从3’端开始的3-8碱基位点的碱基互补
58.dna1的序列5
’‑3’
如下：tgacaatcgcagtttgaaacggctagcacgccggtaaggttacgagattga-nh2c6；
59.dna2的序列5
’‑3’
如下：nh2c
5-ctgtactgtcgatgcatacattggagcgatcgtgttttgggggtgactcg；
60.dna3的序列5
’‑3’
如下：ae-nh2c
5-atcactgagcgattggga。
61.检测方法：
62.将全血或血清或血浆与1500μl检测试剂混合，置于hscl-10000化学发光仪中，并在37℃条件下温度5-10min；
63.加入化学发光底物，通过化学发光检测仪中的检测模块进行光信号采集，仪器自动调用标准曲线，从而得出样品中物质的浓度。
64.以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。