一种用于治疗皮肤疾病的金纳米颗粒组合物及其制备方法

1.本发明涉及药物组合物领域，具体为一种含有壬二酰胺修饰的金纳米颗粒(au-mea nps)药物组合物，用于治疗皮肤疾病，尤其用于治疗玫瑰痤疮或银屑病。


背景技术：

2.玫瑰痤疮是一种常见的慢性面部炎症性疾病，临床特征包括面部红斑，丘疹，脓疱，毛细血管扩张和反复潮红，目前用于玫瑰痤疮临床药物包括多西环素和α-肾上腺素受体激动剂，这些药剂的临床功效归因于它们的抗炎或抗血管生成特性。尽管玫瑰痤疮不是一种致命的疾病，但因其反复发作，又好发于面部，因此严重影响了患者的身心健康和生活质量。
3.银屑病俗称牛皮藓，发病原因复杂且没有确切的发病机制和治疗方案。临床上主要表现为红斑，鳞屑，是一种易复发，病程长且难以治愈的全身性慢病皮肤病。目前的外用药主要是糖皮质激素或免疫抑制剂，口服药为甲氨蝶呤或其他免疫抑制剂加上物理疗法对症治疗，但因其耐受性较差且停药后症状加重，导致银屑病难以治愈。
4.故现有治疗玫瑰痤疮及银屑病等皮肤疾病的传统药物与方法存在以下缺点或不足：
5.1、现有的治疗药物中没有一种可以更好的治疗玫瑰痤疮及银屑病等皮肤疾病的潜在新药，导致治疗比较困难；
6.2、传统的药物中没有以抗ros为主的治疗药物，导致缺乏新的药物靶点；
7.3、传统的方法没有可以更好的治疗玫瑰痤疮和银屑病的一种新的治疗手段，导致治疗或减轻效果较差且具有一定副作用。
8.因此，急需要新的、有效的、有针对性且方便的药物来减轻上述皮肤性疾病的症状和体征，为患者提供更广泛的治疗。19世纪90年代以来，黄金作为治疗许多自身免疫性疾病的治疗剂在现代医学中引起了很多关注，硫代葡萄糖金和硫代苹果酸金钠是常用的金基药物，然而，因不良副作用限制了其广泛应用，近年来，纳米技术提供了一种更安全，更有效的替代品，即纳米金，金纳米颗粒(aunps)在治疗炎症性疾病方面比常规金药物更有效、毒性更小，目前生物学上常用的金纳米颗粒主要是柠檬酸钠修饰的aunps(au-canps)，上述纳米材料清除活性氧效率不够高，需要的量较大，本发明人经过反复实验发现，将表面活性剂柠檬酸钠置换成壬二酰胺(mea)，不仅保持了纳米颗粒的稳定性，且具备更强的抗氧化、抗炎能力，不仅效果好，且安全有效，易于产业化生产后能取得更好的经济收益和社会效益。


技术实现要素：

9.本发明的目的在于提供一种用于治疗皮肤疾病的药物组合物，尤其用于玫瑰痤疮和银屑病，以解决上述背景技术中提到的现有的问题。
10.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于治疗皮肤疾病的药物组合物，所述药物组合物由活性成份au-mea nps和必要药用辅料组成；
nps乳膏组做对照。
30.au-mea nps改善玫瑰痤疮样表型的动物模型构建进行之后进行au-mea nps改善银屑病样表型的动物模型构建，即购买7周龄balb/c雌鼠，第1至3天，在balb/c小鼠的耳部涂抹5.05％au-mea nps乳膏，早晚各一次，一日两次，于第4-10天在小鼠耳部涂抹咪喹莫特乳膏以诱导银屑病样表型，同时应用5.05％au-mea nps乳膏涂抹，早晚各一次，一日两次。同时加入au-ca nps乳膏组做对照。
31.造模结束后剪取小鼠皮损，分为两部分，分别进行福尔马林固定48h后，梯度脱水石蜡包埋，切成5μm厚，切片用苏木精和伊红(h&e)染色，并在标准光学显微镜下观察它们的组织形态学；液氮速冻，使用trizol试剂(invitrogen life technologies，usa)皮损组织中分离总rna，将1μg rna转录成cdna，q-pcr检测炎症相关分子。
32.二、试验结果
33.结果如图1-2所示。
34.图1为au-mea nps缓解玫瑰痤疮样小鼠表型，图1-a为小鼠背部剃毛后，金纳米颗粒乳膏预涂抹三天，然后皮内注射ll37，诱导玫瑰痤疮样红斑表型，同时涂抹金纳米颗粒乳膏；图1-b为玫瑰痤疮皮损处皮肤h&e染色分析；图1-c为q-pcr法检测小鼠皮损中tnf-α、il-6和il-1β的表达水平。
35.图2为au-mea nps缓解银屑病样小鼠表型，图2-a为金纳米颗粒乳膏预涂抹小鼠耳部3天，然后将imq涂抹至小鼠耳部，诱导银屑病样表型，同时涂抹金纳米颗粒乳膏；图2-b银屑病皮损处皮肤h&e染色分析；图2-c q-pcr法检测小鼠皮损中tnf-α、il-1β和il-6的表达水平。
36.由图1可知，au-mea nps显著减弱了ll37诱导的玫瑰痤疮样红斑，组织学分析显示，au-mea nps治疗改善了玫瑰痤疮样皮损中的炎症细胞浸润；大量研究表明，玫瑰痤疮中促炎细胞因子及趋化因子显著上调，但这在小鼠背部皮损中可被au-mea nps治疗所抑制，且其效果要比au-ca nps好，因此，这些结果表明au-mea nps改善了ll37诱导的小鼠玫瑰痤疮样炎症表型。
37.同样，由图2可知，咪喹莫特造模小鼠的银屑病样皮损从第3天开始出现，第7天最严重，包括红斑、皮肤增厚和脱屑，h&e染色显示imq处理小鼠的典型组织学变化，特征为角化不全、基层细胞增多和炎性细胞浸润，相比之下，在au nps治疗小鼠中，这些症状得到缓解，rt-pcr结果显示，在imq诱导的银屑病小鼠中，il-6、il-1β和tnf-α的表达显著升高，而au nps显著缓解了这些炎症因子的表达升高，且au-mea nps效果要比au-ca nps好。
38.综上所述，au-mea nps是一种治疗玫瑰痤疮及银屑病等皮肤疾病的良药，本发明药物组合物具有治疗痤疮及银屑病等皮肤疾病的效果。
39.试验例2、本发明细胞实验
40.一、实验方法
41.抗ros能力检测：培养人角质形成细胞系hacat，收集细胞，用192mm的过氧化氢刺激细胞10分钟，然后用pbs洗去残留的过氧化氢，悬浮装载dcfh-da探针，将细胞悬液加入96孔板，488nm激发波长，在525nm处测定吸光度
42.抗炎能力检测：用100ng/ml tnf-α处理hacat细胞12小时后收集细胞提取rna，进行实时荧光定量pcr检测细胞内炎症因子(tnf-α、il-6、il-8等)的改变
43.一、实验结果
44.如图3-4所示
45.图3为au-mea nps在细胞水平的抗ros能力，与单纯h2o2诱导组相比，au-mea nps预处理组可以明显减轻细胞ros的水平，并且抑制效果较au-ca nps预处理组好。
46.图4为au-mea nps在细胞水平的抗炎能力，au-mea nps预处理组可以明显减轻tnf-α诱导的hacat细胞炎症，且效果比au-ca nps预处理组好。
47.试验例3、本发明临床试验
48.为了验证本发明组合物在制备治疗玫瑰痤疮药物的应用，本发明人在中南大学湘雅附属医院进行临床小试，具体情况如下：
49.一、病例选择
50.被两位临床医生诊断为红斑毛细血管扩张型和丘疹脓疱型玫瑰痤疮患者(红斑评分为3分及以上)，并自愿签署知情同意书。
51.二、病例概况
52.此次临床试验均按以下诊断标准进行病症选择，共选择120例患者，年龄为18～65岁，平均35岁，男女不限。
53.诊断标准：
54.1、在门诊被临床医生诊断为玫瑰痤疮红斑毛细血管扩张型和丘疹脓疱型患者；
55.2、年龄在18-65岁；
56.2、近期无妊娠计划者；
57.3、近两周内未予以局部外用治疗患者或4周内使用普通药物全身治疗或半年内使用异维a酸治疗；
58.4、无鼻部增生肥大的玫瑰痤疮患者。
59.三、资料均衡性检验
60.将上述病例随机分为2组，即治疗组和对照组。每组各60例。男女不限，试验组及对照组的年龄、病情程度大致匹配，具有可比性。
61.四、研究方法
62.随机、对照研究。并按下述疗效标准进行统计研究结果。
63.疗效标准：
64.疗效标准：
65.1、显效：持续性红斑，丘疹脓疱，刺痛和灼热感大部分消退，消退率》75％，症状明显减轻；
66.2、有效：持续性红斑，丘疹脓疱，刺痛和灼热感大部分消退，消退率25-75％，症状有所改善；
67.3、无效：皮损消退不明显或者加重，消退率＜25％，症状未见变化。
68.五、治疗方法
69.治疗组患者给予本发明乳膏剂(实施例1)，每天2次，每次适量，涂抹于患处，4周为1个疗程。对照组患者给予空白乳膏，即不含有au-mea nps的聚丙烯酸酯交联聚合物-6制成的乳膏，每天2次，每次适量，外涂患处，4周为1个疗程。治疗期间两组患者均不再使用其他任何药物。
70.六、结果
71.1、治疗组与对照组临床疗效比较情况见表一。
72.表一、治疗组与对照组临床疗效比较表
[0073][0074]
(p《0.01，差异有非常显著性)
[0075]
从上表可以看出，本发明的有效率达93.3％，对照组的有效率13.3％，说明本发明有效率明显高于对照组，且效果显著。
[0076]
2、不良反应情况
[0077]
治疗组中尚未发现有明显不良反应者，对照组中9例出现不同程度出现显著的发红、脱屑或皮肤不适。
[0078]
经临床验证，本发明药物组合物在治疗痤疮方面有显著疗效。
[0079]
综上所述，au-mea是一种治疗玫瑰痤疮及银屑病等皮肤疾病的潜在新药，其有效成分不同于现有的抗炎药物，涉及金纳米颗粒领域，au-mea在治疗皮肤疾病尤其是玫瑰痤疮及银屑病中的应用更好。
[0080]
实施例1、本发明乳膏剂
[0081]
称取au-mea nps50.5g溶于纯水500ml中，再加入1000g聚丙烯酸酯交联聚合物-6，室温下充分混匀，制成au-mea nps乳膏1000支，于2～8℃保存。
[0082]
实施例2、本发明乳膏剂
[0083]
称取au-mea nps 10g溶于纯水500ml中，再加入1000g聚丙烯酸酯交联聚合物-6，室温下充分混匀，制成au-mea nps乳膏100支，于2～8℃保存。
[0084]
实施例3、本发明乳膏剂
[0085]
称取au-mea nps 100g溶于纯水500ml中，再加入1000g聚丙烯酸酯交联聚合物-6，室温下充分混匀，制成au-mea nps乳膏1000支，于2～8℃保存。
[0086]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。