一种增强枸杞子内治眼病功效的炮制方法及其应用

1.本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种增强枸杞子内治眼病功效的炮制方法及其应用。


背景技术：

2.随着工作学习生活所带来的高强度压力，高科技电子产品的快速渗透，生存环境的大范围污染等因素累积，越来越多的人出现眼部的不适或疾患，中医药在治疗眼部疾患方面积累了丰富经验，具有独到疗效和优势；人体脏腑中，肝、肾与眼睛的关系最为密切，肝肾亏虚可导致滋养眼目的精血乏源，从而导致多种内障眼病的发生。
3.中医药研究者在长期的研究实践中发现，中药经适度炮制后，可以增加活性成分，提高药理作用。枸杞子味甘气平，退虚热，补精髓，治目昏云翳；枸杞子是药食两用的食材，人们常用的食用枸杞子的方法就是泡水喝，其次就是将枸杞子放在汤羹中煮食，或与其它药材组成复方使用，但是对于治疗眼病的技术效果偏差。虽然目前现有技术中有采用炒制、盐制或者酒制等炮制方法，效果也不尽如人意。
4.为此，能够提供一种增强枸杞子内治眼病功效的炮制方法是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了一种增强枸杞子内治眼病功效的炮制方法及其应用，本发明在枸杞子中加入黄酒浸润，分别与花椒、芝麻、薄荷、小茴香同炒，可益精兴阳，从而增加枸杞子方剂内治眼病的功效。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种增强枸杞子内治眼病功效的炮制方法，包括以下步骤：将4等份枸杞子分别与花椒、芝麻、薄荷、小茴香共同炒制后，筛出枸杞子，混匀即可。
8.优选的，所述枸杞子与所述花椒、所述芝麻、所述薄荷、所述小茴香的质量比均为5-10:2。
9.优选的，所述枸杞炒制前用黄酒进行浸润。
10.优选的，所述枸杞和所述黄酒的质量比为5-15:1。
11.优选的，所述炒制炒至大黄即可。
12.如上述所述制备方法得到的炮制后的枸杞子。
13.如上述所述的枸杞子在制备预防或治疗眼部疾病药物中的应用。
14.优选的，所述药物还包括生地黄、熟地黄、白茯苓、白术和菊花。
15.优选的，所述枸杞子、所述生地黄、所述熟地黄、所述白茯苓、所述白术和所述菊花的质量比为5-15:1:1:1:1:1。
16.优选的，所述药物的剂型为丸剂、颗粒剂、片剂、散剂和膏剂中的任意一种。
17.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：本发明在枸
杞子中加入黄酒浸润，分别与花椒、芝麻、薄荷、小茴香同炒，筛出枸杞子，去除火气，可增加枸杞子方剂内治眼病的功效；中医认为：“左肾，阴水也，阴衰则阳火独治而生花；右肾，阳水也，阳衰则阴气上蒸而有障，本方枸杞子用黄酒浸润后与四种芳香药材同炒，可益精兴阳，右肾与之；加白术、白茯苓、菊花、地黄，可利湿、生阴，左肾与之；两水既盈，五火潜息，而病亦寻瘥。该复方具补肝肾、清虚热、明目的功效，可治两肾虚损、眼花白障等症。
附图说明
18.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，本描述中的附图仅仅是本发明的实施例。
19.图1为本发明对比例1枸杞子gc-ms分析谱图；
20.图2为本发明对比例2枸杞子gc-ms分析谱图；
21.图3为本发明对比例3枸杞子gc-ms分析谱图；
22.图4为本发明黑芝麻炒枸杞子gc-ms分析谱图；
23.图5为本发明薄荷炒枸杞子gc-ms分析谱图；
24.图6为本发明花椒炒枸杞子gc-ms分析谱图；
25.图7为本发明小茴香炒枸杞子gc-ms分析谱图；
26.图8为本发明对比例1枸杞子超高效液相色谱-高分辨质谱图；
27.图9为本发明对比例2枸杞子超高效液相色谱-高分辨质谱图；
28.图10为本发明对比例3枸杞子超高效液相色谱-高分辨质谱图；
29.图11为本发明花椒炒枸杞子超高效液相色谱-高分辨质谱图；
30.图12为本发明黑芝麻炒枸杞子超高效液相色谱-高分辨质谱图；
31.图13为本发明小茴香炒枸杞子超高效液相色谱-高分辨质谱图；
32.图14为本发明薄荷炒枸杞子超高效液相色谱-高分辨质谱图；
33.图15为本发明视网膜he染色图；
34.其中，a-对照组，b-模型组，c-未炮制枸杞子方剂组，d-炮制枸杞子方剂组。
具体实施方式
35.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
36.实施例1
37.一种增强枸杞子内治眼病功效的炮制方法的制备方法，具体包括以下步骤：
38.准备四等份枸杞子，在每份枸杞子中加入黄酒，每份中枸杞子与黄酒的质量比为12:1，混匀，浸润，将浸润的枸杞子分别与花椒、芝麻、薄荷、小茴香同炒(每份枸杞子与花椒、芝麻、薄荷、小茴香的质量比均为10:2.5)，不断翻炒，炒至枸杞子大黄，趁热筛出枸杞子，去除火气，即得到一种增强内治眼病功效的枸杞子；
39.然后在枸杞子中加入生地黄、熟地黄、白茯苓、白术、菊花混合，质量比为10:1:1:1:1:1，将其研磨成粉之后，混匀，用超微粉碎机粉碎为极细粉，炼蜜为丸。
40.实施例2
41.一种增强枸杞子内治眼病功效的炮制方法的制备方法，具体包括以下步骤：
42.准备四等份枸杞子，在每份枸杞子中加入黄酒，每份中枸杞子与黄酒的质量比为8:1，混匀，浸润，将浸润的枸杞子分别与花椒、芝麻、薄荷、小茴香同炒(每份枸杞子与花椒、芝麻、薄荷、小茴香的质量比均为10:2.5)，不断翻炒，炒至枸杞子大黄，趁热筛出枸杞子，去除火气，即得到一种增强内治眼病功效的枸杞子；
43.然后将枸杞子研磨成粉，将质量比生地黄、熟地黄、白茯苓、白术、菊花第一次用十倍水提取2小时，过滤，得提取液，第二次用八倍水提取1小时，过滤，得提取液，弃去残渣，合并第一次及第二次提取液，浓缩提取液。将枸杞子粉末混合到浓缩提取液中，制粒，装胶囊或压片，枸杞子、生地黄、熟地黄、白茯苓、白术、菊花的质量比为10:1:1:1:1:1。
44.对比例1
45.不进行任何处理的枸杞子。
46.对比例2
47.将枸杞子进行清炒。
48.对比例3
49.将枸杞子用5倍质量的黄酒浸润后进行炒制。
50.检测
51.1、将实施例1得到的4种炒制枸杞子和对比例1-3得到的枸杞子粉碎，采用气相色谱-质谱(gc-ms)联用技术进行检测：
52.1)实验仪器：
53.gc 5977a(agilent)-ms 7890b(agilent)，毛细管色谱柱db-wax(0.32mm
×
30m，0.25)，同时蒸馏萃取仪
54.2)实验方法
55.称取7等份枸杞子粉末样品，每份20g，加入同时蒸馏萃取仪水提侧的1000ml圆底烧瓶中，加入40g氯化钠和350ml蒸馏水，放入玻璃珠防止爆沸，用电热套加热；仪器有机溶液提取侧的250ml圆底烧瓶中加入40ml二氯甲烷，用电热套加热，同时蒸馏萃取2h，收集二氯甲烷提取液，在二氯甲烷提取液中加入2g无水硫酸钠进行脱水处理，静置过夜，用gc-ms进行分析；
56.gc-ms色谱质谱分析条件：程序升温：柱温50℃，保持1min，以3℃/min升温至250℃，载气为氦气，流速1ml/min，进样量为1μl。质谱条件：离子源为ei源，离子源温度250℃，进样口温度250℃，压力7.7psi，隔垫吹扫流量为3ml。
57.3)分析结果
58.如图1-7不同样品gc-ms分析图谱可知，经过gc-ms仪器分析出炮制枸杞子与原枸杞子的差异组分，将差异组分和nist数据库中化合物对比，鉴定出清炒枸杞子有2个差异组分；黄酒浸润后炒制枸杞子有9个差异组分；花椒炒枸杞子有50个差异组分，差异组分主要是烃类、萜类、酯类、酮类等；薄荷炒枸杞子有26个差异组分，差异组分主要是酯类、酮类、醇类、烃类及其衍生物等；小茴香炒枸杞子有13个差异组分，差异组分主要是酮类、醛类、醇类等；黑芝麻炒枸杞子有2个差异组分，说明经过炮制的枸杞子与原枸杞子相比组分发生了变化；
59.将鉴别出的差异组分与现有文献报道的黄酒、花椒、薄荷、小茴香、黑芝麻组分对比发现，在差异组分中丁酸、正己酸是黄酒中的挥发性成分；柠檬烯、茴香脑、(-)-4-萜品醇、月桂酸、棕榈酸是花椒中含有的挥发性成分；胡薄荷酮、α-松油醇、β-波旁烯、糠醛、丁香酚是薄荷中含有的挥发性成分，表明适宜的炮制条件下炮制枸杞子中增加了炮制辅料中的挥发性成分。挥发性成分有升散作用，有助于引药上行，从而增强药物内治眼病功效。
60.2、将实施例1得到的4种炒制枸杞子和对比例1-3得到的枸杞子粉碎，采用超高效液相色谱-高分辨质谱(uhplc-hrms)技术对比与芳香药物同炒后的枸杞子与原枸杞子不挥发性组分变化进行检测：
61.1)实验仪器
62.美国agilentuhplc-q-tof 6545 系统(配有电喷雾离子源esi)；数据采集软件：agilentmasshunter；
63.2)实验方法
64.精密称取7个样品各约2.5g于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声处理30min，放至室温，称定，补足减失的重量，摇匀，静置即可，用超高效液相色谱-高分辨质谱(uhplc-hrms)进行分析；
65.uhplc-q-tof-ms色谱质谱分析条件：色谱条件：采用agilentt3反向色谱柱(2.1mm
×
100mm，1.8μm)，流动相a(0.1％甲酸水)-b(0.1％甲酸乙腈)，梯度洗脱程序如下表所示；流速0.2ml/min，柱温30℃，进样体积1μl。质谱条件：q-tof-ms系统使用esi离子源，在正离子模式下采集数据，扫描范围是100～1000m/z，干燥气温度(gas temp)320℃，干燥气流速(drying gas)8l/min；雾化器压力(nebulizer)35psig。
66.3)实验结果
67.实验结果如下图8-14所示，6种炮制枸杞子样品与原枸杞子相比，炮制枸杞子组分均有变化，其中花椒炒枸杞子样品在保留时间(rt)为26min左右时出现组分的变化最为明显，其次，小茴香炒枸杞和薄荷炒枸杞子在保留时间(rt)为18min左右时出现的组分变化较为明显。
68.3、实施例1中枸杞子方剂内治眼病的药效学实验
69.1)实验动物
70.由宁夏医科大学动物中心提供的spf级sd雄性大鼠24只，体重100-150g，清洁环境饲养；
71.2)药品与试剂
72.生理盐水、碘酸钠、眼球固定液
73.3)实验方法
74.视网膜损伤造模及给药：24只sd大鼠适应性喂养一周，称重编号，随机分成4组，每组6只，分为对照组、模型组、未炮制枸杞子方剂组、炮制枸杞子方剂组；
75.建立碘酸钠诱导sd大鼠视网膜损伤模型，对照组均尾静脉注射生理盐水，其它各组均尾静脉注射碘酸钠溶液(20g/ml)50mg/kg；造模后第一天开始，对照组和模型组均灌胃生理盐水，给药组分别灌胃相应剂量的全粉(0.7g/ml)1.4ml/100g，每天一次，同时观察大鼠的生活状况。在造模后的第十四天取大鼠的眼球，放入眼球固定液中固定24小时以上。将眼球取出矢状切开，但视网膜不分离；放入固定液中再固定一天，脱水，石蜡包埋，切片，he
染色进行观察；
76.4)药效学评价
77.naio3作为一种稳定的强氧化剂，能诱发多种哺乳动物视网膜发生氧化应激反应，特异性的产生视网膜毒性，naio3会引起视网膜色素上皮细胞(rpe)、视锥和视杆细胞退化，最终导致rpe细胞坏死，脉络膜毛细血管萎缩，外核层(onl)和rpe层完全融合，全视网膜变性。对视网膜的损伤呈浓度和时间依赖性，造模时间越早，剂量越大损伤越严重。
78.实验结果如图15，对照组sd大鼠视网膜的视网膜色素上皮细胞(rpe)层、光感受器细胞内外节段层(is/os)、内核层(inl)、外核层(onl)、神经节细胞层(gcl)等各层结构完整、边界清晰，细胞排列整齐且密集。模型组与对照组相比，模型组视网膜各层结构发生了不同程度的变化，其中大鼠视网膜的onl、inl层的厚度变薄，结构出现波浪状，各层界限模糊，外丛状层(opl)边界模糊的较为明显，脉络膜层与rpe层之间的空隙增大，细胞排列紊乱，部分细胞丢失。相较与模型组，未炮制枸杞子方剂组和炮制枸杞子方剂组的大鼠视网膜均有好转，但未炮制枸杞子方剂组的内核层细胞较松散，视网膜恢复程度较炮制枸杞子方剂组有一些差距，炮制枸杞子方剂组的大鼠视网膜恢复程度较好。
79.对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。