靶向血浆蛋白降解的制作方法

1.本发明涉及存在于细胞膜中或细胞外的靶分子的受体介导的胞吞作用或溶酶体降解领域。


背景技术：

2.常规蛋白定向治疗剂通过阻断蛋白功能(例如酶抑制剂和受体拮抗剂)或通过募集免疫效应物(如在许多单克隆抗体药物的情况下)来治疗疾病。然而，潜在的治疗性蛋白靶标，诸如转录因子、支架蛋白、聚集体形成蛋白、脂质载体、粘蛋白、孤儿受体和具有不完全了解或不容易被抑制的分子功能的多功能分子，不能通过常规治疗方法用药物靶向(druggable)。靶向蛋白降解(tpd)是通过经由靶蛋白的降解而控制靶蛋白的量而不是抑制其功能来治疗这些不可用药物靶向的致病蛋白和信号传导途径的治疗方法。
3.靶向蛋白降解系统的实例包括蛋白水解靶向嵌合体(protac)(k.m.sakamoto等人,proc.natl.acad.sci.[美国科学院院刊]98,8554-8559,(2001)和g.e.winter等人,science.[科学]348,1376-1381(2015))、dtag(b.nabet等人,nat.chem.biol.[自然-化学生物学]14,431(2018))、trim-away(d.clift等人,cell.[细胞],171,1692-1706.e18(2017))、伴侣蛋白介导的自噬靶向(x.fan等人,nat.neurosci.[自然-神经科学],17,471-480(2014))和sniper(m.naito等人,drug discov.today technol.[今日药物发现-技术],(2019))。protac在e3泛素连接酶和它们的感兴趣的靶标之间形成桥，从而促进泛素化和蛋白酶体的降解(g.m.burslem等人,chem.rev.[化学评论],117,11269-11301(2017))。这些降解系统利用蛋白体途径来降解细胞内蛋白。此外，已经报道了利用溶酶体途径降解细胞外蛋白(分泌蛋白和质膜蛋白)的降解系统(s.banik等人,chemrxiv,2019和p.c.n.rensen等人,j.med.chem.[药物化学杂志],47,5798-5808,2004)，但用于降解细胞外靶标诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白的策略仍然是未满足的需求。


技术实现要素：

[0004]
本发明涉及双官能化合物和此类双官能化合物通过受体介导的胞吞作用随后溶酶体降解来降低患者中细胞外靶分子的血浆水平的用途，并由此发现在治疗由此类细胞外分子介导的疾病状态和/或病症中作为药剂的用途。因此，本发明提供了双官能化合物及其在通过溶酶体降解而靶向降解细胞外靶分子中的用途，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白。本发明还提供了双官能化合物及其在通过脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)介导的溶酶体降解而靶向降解细胞外靶分子中的用途，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白。本发明还提供了双官能化合物及其在通过甘露糖-6-磷酸受体(m6pr)介导的溶酶体降解而靶向降解细胞外靶分子中的用途，这些细胞外靶分
子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白。
[0005]
本发明的双官能化合物可以为患者提供重要的临床益处，特别是用于治疗由感兴趣的细胞外靶标调节的疾病状态和病症。
[0006]
本发明的双官能化合物包含与能够结合细胞外靶分子(诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞或质膜蛋白)的配体共价连接的细胞表面受体配体，其中该细胞表面受体与受体介导的胞吞作用相关。
[0007]
本发明还提供了具有式(i)的结构的双官能化合物：
[0008]rl-l
a-t
l
ꢀꢀꢀ(i)[0009]
其中：
[0010]rl
是结合与受体介导的胞吞作用相关的细胞表面受体的部分；
[0011]
la是接头，
[0012]
并且
[0013]
t
l
是结合细胞外靶标的部分。
[0014]
本发明还提供了包含治疗有效量的具有式(i)的双官能化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
[0015]
另一方面，本发明提供了包含治疗有效量的本发明的化合物和一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物。
[0016]
本发明还提供了包含具有式(i)的双官能化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
[0017]
在另一方面，本发明提供了包含本发明化合物和一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物。
[0018]
在另一方面，本发明提供了组合，特别是药物组合，其包含治疗有效量的本发明的化合物和一种或多种治疗活性剂。
[0019]
本发明提供了用于通过施用本发明的双官能化合物对细胞外靶分子进行靶向溶酶体降解的方法，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外泌体、病毒、细胞和质膜蛋白。本发明还提供了通过施用本发明的双官能化合物靶向脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)介导的溶酶体降解细胞外靶分子的方法，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外泌体、病毒、细胞和质膜蛋白。本发明还提供了通过施用本发明的双官能化合物靶向甘露糖-6-磷酸受体(m6pr)介导的溶酶体降解细胞外靶分子的方法，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外泌体、病毒、细胞和质膜蛋白。
[0020]
可利用这些方法来治疗通常通过治疗性单采术治疗的多种疾病、病症或临床状况，诸如心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒和血管炎。例如，此类疾病包括但不限于高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、冠心病、
外周血管疾病(包括主动脉疾病和脑血管疾病)、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、trl升高、甘油三酯升高、脓毒症、黄色瘤、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、膜性肾病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。
[0021]
也可利用这些方法来治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0022]
在另一方面，本发明还提供了通过向有需要的受试者施用治疗有效量的具有式(i)或其子式的双官能化合物来治疗由细胞外靶分子调节的疾病或病症的方法。
[0023]
另一方面，本发明还提供了具有式(i)或其子式的双官能化合物用于治疗由本文所述的靶向细胞外分子调节的疾病或病症的用途。
[0024]
另一方面，本发明还提供了具有式(i)或其子式的双官能化合物在制造用于治疗由本文所述的靶向细胞外分子调节的疾病或病症的药物中的用途。
[0025]
在另一方面，本发明还提供了体内治疗性血浆置换方法，其中该方法包括向受试者施用具有式(i)或其子式的双官能化合物。本发明还提供了进行体内治疗性血浆置换的方法，其中该方法包括向受试者施用本发明的双官能化合物。
[0026]
在另一方面，本发明还提供了用于治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒或血管炎的体内治疗性血浆置换方法，其中该方法包括向受试者施用本发明的双官能化合物。在某些实施例中，此类疾病是高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、冠心病、外周血管疾病(包括主动脉疾病和脑血管疾病)、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、trl升高、甘油三酯升高、脓毒症、黄色瘤、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、膜性肾病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。
[0027]
另一方面，本发明还提供了用于治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)的体内治疗性血浆置换方法
[0028]
在另一方面，本发明还提供了基于通过由具有式(i)或其子式的双官能化合物介导的溶酶体降解来抑制细胞外靶分子的细胞外水平的疗法。
[0029]
在另一方面，本发明还提供了用于治疗心血管疾病的疗法，该疗法基于通过由具有式(ia)的双官能化合物介导的溶酶体降解来抑制蛋白前蛋白转化酶枯草溶菌素/kexin 9型(pcsk9)的细胞外水平。
[0030]
在另一方面，本发明还提供了用于治疗与补体因子h相关蛋白3基因(cfhr3)相关的疾病或障碍的疗法，该疗法基于由具有式(ib)的双官能化合物介导的溶酶体降解来抑制
补体因子h相关蛋白3(fhr3)的细胞外水平。
[0031]
在另一方面，本发明还提供了用于治疗与补体因子h相关蛋白3(fhr3)相关的疾病或障碍的疗法，该疗法基于由具有式(ib)的双官能化合物介导的溶酶体降解来抑制细胞外补体因子h相关蛋白3(fhr3)水平。
[0032]
在另一方面，本发明还提供了在治疗pcsk9介导的疾病或障碍中使用的具有式(ia)的双官能化合物。在另一方面，本发明还提供了在治疗pcsk9介导的疾病或障碍中使用的包含具有式(ia)的双官能化合物的药物组合物。在此类用途的某些实施例中，pcsk9介导的疾病或障碍选自高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、富含甘油三酯的脂蛋白(trl)、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤。
[0033]
在另一方面，本发明还提供了在治疗cfhr3介导的疾病或障碍中使用的具有式(ib)的双官能化合物。在另一方面，本发明还提供了在治疗cfhr3介导的疾病或障碍中使用的包含具有式(ib)的双官能化合物的药物组合物。在此类用途的某些实施例中，cfhr3介导的疾病或障碍选自肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0034]
在另一方面，本发明还提供了在治疗fhr3介导的疾病或障碍中使用的具有式(ib)的双官能化合物。在另一方面，本发明还提供了在治疗fhr3介导的疾病或障碍中使用的包含具有式(ib)的双官能化合物的药物组合物。在此类用途的某些实施例中，fhr3介导的疾病或障碍选自肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0035]
另一方面，本发明还提供了具有式(ia)的双官能化合物在治疗pcsk9介导的疾病或障碍中的用途。另一方面，本发明还提供了具有式(ia)的双官能化合物在制造用于治疗pcsk9介导的疾病或障碍的药物中的用途。在另一方面，本发明还提供了包含具有式(ia)的双官能化合物的药物组合物在治疗pcsk9介导的疾病或障碍中的用途。在此类用途的某些实施例中，pcsk9介导的疾病或障碍选自高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、富含甘油三酯的脂蛋白(trl)、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤。
[0036]
在另一方面，本发明还提供了具有式(ib)的双官能化合物在治疗cfhr3介导的疾病或障碍中的用途。在另一方面，本发明还提供了具有式(ib)的双官能化合物在制造用于治疗cfhr3介导的疾病或障碍的药物中的用途。在另一方面，本发明还提供了包含具有式(ib)的双官能化合物的药物组合物在治疗cfhr3介导的疾病或障碍中的用途。在此类用途的某些实施例中，cfhr3介导的疾病或障碍选自肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0037]
在另一方面，本发明还提供了具有式(ib)的双官能化合物在治疗fhr3介导的疾病或障碍中的用途。在另一方面，本发明还提供了具有式(ib)的双官能化合物在制造用于治疗fhr3介导的疾病或障碍的药物中的用途。在另一方面，本发明还提供了包含具有式(ib)的双官能化合物的药物组合物在治疗fhr3介导的疾病或障碍中的用途。在此类用途的某些实施例中，fhr3介导的疾病或障碍选自肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0038]
在另一方面，本发明还提供了用于治疗pcsk9介导的疾病或障碍的方法，该方法包
括向有需要的患者施用治疗有效量的具有式(ia)的双官能化合物的步骤。在该方法的某些实施例中，pcsk9介导的疾病或障碍选自高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、富含甘油三酯的脂蛋白(trl)、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤。
[0039]
在另一方面，本发明还提供了用于治疗cfhr3介导的疾病或障碍的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的具有式(ib)的双官能化合物的步骤。在该方法的某些实施例中，cfhr3介导的疾病或障碍选自肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0040]
在另一方面，本发明还提供了用于治疗fhr3介导的疾病或障碍的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的具有式(ib)的双官能化合物的步骤。在该方法的某些实施例中，fhr3介导的疾病或障碍选自肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0041]
在另一方面，本发明还提供了用于细胞外靶分子的靶向溶酶体降解的方法，该方法包括施用具有式(ia)的双官能化合物，其中该细胞外靶分子是pcsk9。
[0042]
在另一方面，本发明还提供了用于细胞外靶分子的靶向溶酶体降解的方法，该方法包括施用具有式(ib)的双官能化合物，其中该细胞外靶分子是fhr3。
[0043]
在另一方面，本发明还提供了用于从有需要的患者的血浆中去除细胞外靶分子的方法，该方法包括施用具有式(ia)的双官能化合物，其中该细胞外靶分子是pcsk9。
[0044]
在另一方面，本发明还提供了用于从有需要的患者的血浆中去除细胞外靶分子的方法，该方法包括施用具有式(ib)的双官能化合物，其中该细胞外靶分子是fhr3。
[0045]
在另一方面，本发明还提供了在用于治疗心血管疾病的疗法中使用的具有式(ia)的双官能化合物，其中该疗法基于由具有式(ia)的双官能化合物介导的溶酶体降解来抑制pcsk9的细胞外水平。
[0046]
在另一方面，本发明还提供了在用于治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征或肝细胞癌(hcc)的疗法中使用的具有式(ib)的双官能化合物，其中该疗法基于由具有式(ib)的双官能化合物介导的溶酶体降解来抑制fhr3的细胞外水平。
附图说明
[0047]
图1a：在腹膜内推注施用媒介物、0.01mg/kg双官能化合物(bfc-13)和0.1mg/kg双官能化合物(bfc-13)后人fhr3从表达人fhr3的转基因小鼠中的清除率。hfhr3水平是相对于施用前的fhr3水平。
[0048]
图1b：在腹膜内推注施用媒介物、0.01mg/kg双官能化合物(bfc-15)和0.1mg/kg双官能化合物(bfc-15)后人fhr3从表达人fhr3的转基因小鼠中的清除率。hfhr3水平是相对于施用前的fhr3水平。
[0049]
图2a：共同施用研究：在静脉推注施用媒介物 3.3μg hpcsk9、0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9、0.05mg/kg pcsk9配体(c5)和0.05mg/kg asgpr配体(int-cc2) 3.3μg hpcsk9后人pcsk9从ldlr(-/-)小鼠中的清除率。
[0050]
图2b：共同施用研究：图2a中描绘的清除率数据的auc图。通过采用邓尼特多重比较检验的普通单向anova的统计。
hpcsk9
[0075]
图7b：双官能化合物的共同施用与预给药研究：-图7a中描绘的清除率数据的auc图。
[0076]
通过采用邓尼特多重比较检验的普通单向anova相对于媒介物的统计
[0077]
图8a：竞争研究：在以下处理之后人pcsk9从ldlr(-/-)小鼠中的清除率：
[0078]
i)静脉推注施用媒介物 3.3μg hpcsk9
[0079]
ii)静脉推注施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9
[0080]
iii)静脉推注施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9 10mg/kg asgpr配体(int-cc2)
[0081]
iv)静脉推注施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9 10mg/kg pcsk9配体(c5)
[0082]
图8b：竞争研究：图8a中描绘的清除率数据的auc图。
[0083]
通过普通单向anova相对于双官能化合物(bfc-1)的统计：
[0084]
**p＝0.0033；***p＝0.0003；****p《0.0001
具体实施方式
[0085]
定义
[0086]
如本文所使用的，术语“烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，所述基团中不存在不饱和。如本文所使用的，术语“c
1-c6烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，所述基团中不存在不饱和，具有从一个至六个碳原子，并且通过单键附接到分子的其余部分。“c
1-c6烷基”基团的非限制性实例包括甲基(c1烷基)、乙基(c2烷基)、1-甲基乙基(c3烷基)、正丙基(c3烷基)、异丙基(c3烷基)、正丁基(c4烷基)、异丁基(c4烷基)、仲丁基(c4烷基)、叔丁基(c4烷基)、正戊基(c5烷基)、异戊基(c5烷基)、新戊基(c5烷基)和己基(c6烷基)。
[0087]
如本文所使用的，术语“烯基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，所述基团包含至少一个双键。如本文所使用的，术语“c
2-ce烯基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，所述基团包含至少一个双键，具有从两个至六个碳原子，通过单键附接到分子的其余部分。“c
2-c6烯基”基团的非限制性实例包括乙烯基(c2烯基)、丙-1-烯基(c3烯基)、丁-1-烯基(c4烯基)、戊-1-烯基(c5烯基)、戊-4-烯基(c5烯基)、戊-1,4-二烯基(c5烯基)、己-1-烯基(c6烯基)、己-2-烯基(c6烯基)、己-3-烯基(c6烯基)、己-1,4-二烯基(c6烯基)、己-1,5-二烯基(c6烯基)和己-2,4-二烯基(c6烯基)。如本文所使用的，术语“c
2-c3烯基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链烃链基团，所述基团包含至少一个双键，具有从两个至三个碳原子，通过单键附接到分子的其余部分。“c
2-c3烯基”基团的非限制性实例包括乙烯基(c2烯基)和丙-1-烯基(c3烯基)。
[0088]
如本文所使用的，术语“亚烷基”是指仅由碳和氢原子组成的二价直链或支链烃链基团，并且所述基团中不存在不饱和。如本文所使用的，术语“c
1-c6亚烷基”是指仅由碳和氢原子组成的二价直链或支链烃链基团，所述基团中不存在不饱和，具有从一个至六个碳原子。“c
1-c6亚烷基”基团的非限制性实例包括亚甲基(c1亚烷基)、亚乙基(c2亚烷基)、1-甲基亚乙基(c3亚烷基)、正亚丙基(c3亚烷基)、异亚丙基(c3亚烷基)、正亚丁基(c4亚烷基)、异亚
丁基(c4亚烷基)、仲亚丁基(c4亚烷基)、叔亚丁基(c4亚烷基)、正亚戊基(c5亚烷基)、异亚戊基(c5亚烷基)、新亚戊基(c5亚烷基)和亚己基(c6亚烷基)。
[0089]
如本文所使用的，术语“亚烯基”是指仅由碳和氢原子组成的二价直链或支链烃链基团，并且所述基团包含至少一个双键。如本文所使用的，术语“c
2-c6亚烯基”是指仅由碳和氢原子组成的二价直链或支链烃链基团，所述基团包含至少一个双键，并且具有从两个至六个碳原子。“c
2-c6亚烯基”基团的非限制性实例包括亚乙烯基(c2亚烯基)、亚丙-1-烯基(c3亚烯基)、亚丁-1-烯基(c4亚烯基)、亚戊-1-烯基(c5亚烯基)、亚戊-4-烯基(c5亚烯基)、亚戊-1,4-二烯基(c5亚烯基)、亚己-1-烯基(c6亚烯基)、亚己-2-烯基(c6亚烯基)、亚己-3-烯基(c6亚烯基)、亚己-1,4-二烯基(c6亚烯基)、亚己-1,5-二烯基(c6亚烯基)和亚己-2,4-二烯基(c6亚烯基)。如本文所使用的，术语“c
2-c6亚烯基”是指仅由碳和氢原子组成的二价直链或支链烃链基团，所述基团包含至少一个双键，并且具有从两个至三个碳原子。“c
2-c3亚烯基”基团的非限制性实例包括亚乙烯基(c2亚烯基)和亚丙-1-烯基(c3亚烯基)。
[0090]
如本文所使用的，术语“烷氧基”是指-o-烷基或-烷基-o-，其中“烷基”基团如本文所定义。在某些实施例中，烷氧基基团是“c
1-c2烷氧基”、“c
1-c3烷氧基”、“c
1-c4烷氧基”、“c
1-c5烷氧基”、“c
1-c6烷氧基”、“c
1-c7烷氧基”、“c
1-c8烷氧基”、“c
1-c9烷氧基”或“c
1-c
10
烷氧基”，其中术语“c
1-c3烷氧基”、“c
1-c4烷氧基”、“c
1-c5烷氧基”、“c
1-c6烷氧基”、“c
1-c7烷氧基”、“c
1-c8烷氧基”、“c
1-c9烷氧基”和“c
1-c
10
烷氧基”，如本文所使用的，分别是指-o-c
1-c2烷基、-o-c
1-c3烷基、-o-c
1-c4烷基、-o-c
1-c5烷基、-o-c
1-c6烷基、-o-c
1-c7烷基、-o-c
1-c8烷基、-o-c
1-c9烷基或-o-c
1-c
10
烷基。“烷氧基”的非限制性实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、壬氧基、癸氧基等。
[0091]
如本文所使用的，术语“芳基”是指具有6个碳原子作为环成员的芳族单环系统、具有9-10个碳原子作为环成员的芳族稠合二环系统、或具有14个碳原子作为环成员的芳族稠合三环系统。如本文所使用的，芳基基团的非限制性实例包括苯基、萘基、芴基、茚基、薁基、蒽基、菲基等。在某些实施例中，此类芳基基团任选地被取代。在优选的实施例中，芳基基团是苯基。
[0092]
如本文所使用的，术语“环烷基”、或“c
3-c8环烷基”是指饱和、单环、稠合双环、稠合三环或桥接多环形环系统。稠合双环或桥接多环形环系统的非限制性示例包括双环[1.1.1]戊烷、双环[2.1.1]己烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[3.1.1]庚烷、双环[3.2.1]辛烷、双环[2.2.2]辛烷和金刚烷基。单环c
3-c8环烷基基团的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基基团。
[0093]
如本文所使用的，术语“卤代烷基”是指如本文所定义的烷基，其中该烷基的氢原子中的至少一个被如本文所定义的卤素基团置换。卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基或多卤代烷基，包括全卤代烷基。单卤代烷基可以在烷基基团内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基可以在烷基内具有两个或更多个相同的卤素原子或不同卤素基团的组合。典型地，多卤代烷基含有至多6个或4个或3个或2个卤素基团。卤代烷基的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指所有氢原子均被卤原子置换的烷基，例如三氟甲基。除非另有说明，否则代表性
的卤代烷基基团包括至少一个氢被卤素(例如其中卤素是氟)取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基：cf3cf
2-、(cf3)2ch-、ch
3-cf
2-、cf3cf
2-、cf3、cf2h-、cf3cf2ch(cf3)-或cf3cf2cf2cf
2-。
[0094]
如本文所使用的，术语“c
1-c6卤代烷基”是指如本文所定义的相应“c
1-c63烷基”，其中所述“c
1-c6烷基”的氢原子中的至少一个被卤原子置换。所述c
1-c6卤代烷基基团可以是单c
1-c6卤代烷基，其中此类c
1-c6卤代烷基基团具有一个碘、一个溴、一个氯或一个氟。另外，所述c
1-c6卤代烷基基团可以是二c
1-c6卤代烷基，其中此类c
1-c6卤代烷基基团可具有两个独立地选自碘、溴、氯或氟的卤原子。此外，所述c
1-c6卤代烷基基团可以是多c
1-c6卤代烷基，其中此类c
1-c6卤代烷基基团可具有两个或更多个相同的卤原子或者两个或更多个不同卤原子的组合。此类多c
1-c6卤代烷基可以是全卤c
1-c6卤代烷基，其中相应c
1-c6烷基的所有氢原子已经被卤原子置换且这些卤原子可相同或是不同卤原子的组合。“c
1-c6卤代烷基”基团的非限制性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、氟乙基、二氟乙基、三氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。
[0095]
如本文所使用的，术语“卤代烷氧基”是指如本文所定义的烷氧基，其中该烷基的氢原子中的至少一个被如本文所定义的卤素基团置换。卤代烷基可以是单卤代烷氧基、二卤代烷氧基、三卤代烷氧基或多卤代烷氧基，包括全卤代烷氧基。单卤代烷氧基可以在烷基基团内具有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷氧基和多卤代烷氧基基团可以在烷基内具有两个或更多个相同的卤原子或不同的卤代基团的组合物。通常，多卤代烷氧基含有至多6、或4、或3、或2个卤素基团。卤代烷氧基的非限制性实例包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基、三氯甲氧基、五氟乙氧基、七氟丙氧基、二氟氯甲氧基、二氯氟甲氧基、二氟乙氧基、二氟丙氧基、二氯乙氧基和二氯丙氧基。全卤代烷氧基是指所有氢原子均被卤原子置换的烷氧基，例如三氟甲氧基。除非另有说明，否则代表性卤代烷氧基基团包括至少一个氢被卤素(例如其中卤素是氟)取代的甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基：cf3cf2o-、(cf3)2cho-、ch
3-cf2o-、cf3cf2o-、-ocf3、-ochf
2-、cf3cf2ch(cf3)o-或cf3cf2cf2cf2o-。
[0096]
如本文所使用的，术语“c
1-c6卤代烷氧基”是指本文所定义的相应“c
1-c63烷氧基”，其中“c
1-c6烷基”的氢原子中的至少一个氢原自被卤原子置换。c
1-c6卤代烷氧基基团可以是单c
1-c6卤代烷氧基，其中此类c
1-c6卤代烷氧基基团具有一个碘、一个溴、一个氯或一个氟。另外，c
1-c6卤代烷氧基基团可以是二c
1-c6卤代烷氧基，其中此类c
1-c6卤代烷氧基基团可以具有两个独立地选自碘、溴、氯或氟的卤原子。此外，c
1-c6卤代烷氧基基团可以是多c
1-c6卤代烷氧基，其中此类c
1-c6卤代烷氧基基团可以具有两个或更多个相同的卤原子或者两个或更多个不同卤原子的组合。此类多c
1-c6卤代烷氧基可以是全卤代c
1-c6卤代烷基，其中相应的c
1-c6烷基的所有氢原子已经被卤原子置换并且这些卤原子可以是相同的或者是不同卤原子的组合。“c
1-c6卤代烷氧基”的非限制性实例包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基、三氯甲氧基、五氟乙氧基、七氟丙氧基、二氟氯甲氧基、二氯氟甲氧基、氟乙氧基、二氟乙氧基、三氟乙氧基、二氟丙氧基、二氯乙氧基和二氯丙氧基。
[0097]
如本文所使用的，术语“卤代”或“卤素”是指氟(f)、氯(cl)、溴(br)或碘(i)。
[0098]
如本文所使用的，术语“杂芳基”是指含有一个或多个杂原子的芳族环系。含有多
于一个杂原子的杂芳基可以含有不同的杂原子。杂芳基可以任选被一个或多个如式(i)中所定义的取代基取代。杂芳基基团可以是单环环系或者是稠合双环环系。单环杂芳基环具有5-6个环原子。双环杂芳基环具有8-10个成员原子。双环杂芳基环包括其中杂芳基环与苯基环稠合的那些环系统。如本文所使用的，杂芳基基团的非限制性实例包括苯并呋喃基、苯并[c]噻吩基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、噌啉基、呋咱基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、吲哚啉基、吲唑基、异吲哚基、异喹啉基、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、羟吲哚基、噁二唑基(包括1,3,4-噁二唑基和1,2,4-噁二唑基)、嘌呤基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、吡啶基(包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基)、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、四嗪基、四唑基、四唑并[1,5-a]吡啶基、噻唑基、噻二唑基(包括1,3,4-噻二唑基)、噻吩基、三嗪基和三唑基。
[0099]
术语“包含选自n、o和s的1-4个杂原子的5或6元杂芳基”是指具有1至4个独立地选自杂原子n、o和s的杂原子作为环成员的芳族5-6元单环环系。
[0100]
术语“包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基”是指具有1至3个独立地选自杂原子n、o和s的杂原子作为环成员的芳族5-6元单环环系。
[0101]
如本文所使用的，术语“杂原子”是指氮、氧或硫原子。
[0102]
如本文所使用的，术语“杂环烷基”是指如本文所定义的环烷基基团，其在环结构中有一至两个碳原子被一至两个独立地选自n、nh、n
12
、o或s的基团置换，其中r
12
是h或c
1-c6烷基。如本文所使用的，术语“具有一至两个独立地选自n、nh、nr
12
、o或s的环成员的4至6元杂环烷基”是指4至6元杂环烷基，其是具有4至6个环成员的完全饱和的单环烃环结构，其中一至两个环成员独立地选自n、nh、nr
12
、o或-s-，其中r
12
是h或c
1-c6烷基。如本文所使用的，杂环烷基基团的非限制性实例包括氮杂环丁烷基、氮杂环丁烷-1-基、氮杂环丁烷-2-基、氮杂环丁烷-3-基、氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷-2-基、氧杂环丁烷-3-基、氧杂环丁烷-4-基、硫杂环丁烷基、硫杂环丁烷-2-基、硫杂环丁烷-3-基、硫杂环丁烷-4-基、吡咯烷基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、吡咯烷-4-基、吡咯烷-5-基、四氢呋喃基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢呋喃-4-基、四氢呋喃-5-基、四氢噻吩基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、四氢噻吩-4-基、四氢噻吩-5-基、哌啶基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌啶-5-基、哌啶-6-基、四氢吡喃基、四氢吡喃-2-基、四氢吡喃-3-基、四氢吡喃-4-基、四氢吡喃-5-基、四氢吡喃-6-基、四氢噻喃基、四氢噻喃-2-基、四氢噻喃-3-基、四氢噻喃-4-基、四氢噻喃-5-基、四氢噻喃-6-基、哌嗪基、哌嗪-1-基、哌嗪-2-基、哌嗪-3-基、哌嗪-4-基、哌嗪-5-基、哌嗪-6-基、吗啉基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、吗啉-4-基、吗啉-5-基、吗啉-6-基、硫吗啉基、硫吗啉-2-基、硫吗啉-3-基、硫吗啉-4-基、硫吗啉-5-基、硫吗啉-6-基、氧硫杂环己烷基、氧硫杂环己烷-2-基、氧硫杂环己烷-3-基、氧硫杂环己烷-5-基、氧硫杂环己烷-6-基、二噻烷基、二噻烷-2-基、二噻烷-3-基、二噻烷-5-基、二噻烷-6-基、二氧戊环基、二氧戊环-2-基、二氧戊环-4-基、二氧戊环-5-基、氧硫杂环己烷基、氧硫杂环己烷-2-基、氧硫杂环己烷-3-基、氧硫杂环己烷-4-基、氧硫杂环己烷-5-基、二硫杂环戊烷基、二硫杂环戊烷-2-基、二硫杂环戊烷-4-基、二硫杂环戊烷-5-基、吡唑烷基、吡唑啶-1-基、吡唑啶-2-基、吡唑啶-3-基、吡唑啶-4-基及吡唑啶-5-基。
[0103]
如本文所使用的，术语“杂环基”是指含有碳和选自氧、氮或硫(o、n或s)的至少一个杂原子的饱和的(例如杂环烷基环)或部分不饱和的单环或多环的环，并且其中在环碳或
杂原子之间没有共用的非定域的n电子(芳香性)。
[0104]
如本文所使用的，术语“羟基烷基”是指被一个或多个-oh基团取代的烷基基团。羟基烷基基团的实例包括ho-ch
2-、ho-ch2ch
2-和ch
2-ch(oh)-。
[0105]
如本文所使用的，术语“螺环烷基”或“螺环基”是指具有通过单个原子连接的两个环的碳二环的环系统。这些环的尺寸和性质可以是不同的、或者尺寸和性质是相同的。实例包括螺戊烷、螺己烷、螺庚烷、螺辛烷、螺壬烷、或螺癸烷。螺环中的一个或两个环可以与另一个环碳环、杂环、芳香族环、或杂芳香族环稠合。(c
3-c
12
)螺环烷基是含有3至12个之间的碳原子的螺环。
[0106]
如本文所使用的，术语“螺杂环烷基”或“螺杂环基”是指其中至少一个环是杂环(碳原子中的一个或多个可以被杂原子取代(例如，至少一个环中的碳原子中的一个或多个被杂原子取代))的螺环。螺杂环中的一个或两个环可以与另一个环碳环、杂环、芳香族环、或杂芳香族环稠合。
[0107]
如本文所使用的，术语“体内治疗性血浆置换”是指从体内血浆中去除不需要的细胞外靶分子。此类细胞外靶分子的实例包括生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外泌体、病毒、细胞和质膜蛋白。此类靶分子的具体实例包括但不限于ldl(apob)、lp(a)、apociii、angptl3、angptl4、angptl8、因子11、gdf15、lpl、pcsk9、il1β、il17、补体因子b、补体因子d、mpo、ige、il7、il12a、il23、tnfa、cxcr4、mapt、fhr3、timp1、爱帕琳肽、bmp6、bmp9/gdf2、csf-1、epo、il5、mfge8、tslp、tsp、c5、cxcl10、fgf23、igf1、il10、il13、il2、il6、vegfa、nkg2d、znfr3、ada2、supar、tgf-β1、il4受体、stoll受体、组胺、tau、颗粒蛋白前体、α-突触核蛋白、毒素、毒液、hbv可溶性抗原、病毒抗原、朊病毒蛋白、scfv、aav和抗aav抗体。
[0108]
如本文所使用的，术语“聚乙二醇”或“peg”是指由(och2ch2)基团构成的线性链、支链或星形构象。在某些实施例中，聚乙烯或peg基团是-(och2ch2)
t
*-，其中t是4-40，并且其中
“‑”
指示指向自杀式间隔子的末端并且“*
‑”
指示与终末端基团r’的附接点，其中r’是oh、och3或och2ch2c(＝o)oh。在其他实施例中，聚乙烯或peg基团是-(ch2ch2o)
t
*-，其中t是4-40，并且其中
“‑”
指示指向自杀式间隔子的末端并且“*
‑”
指示与终末端基团r”的附接点，其中r”是h、ch3或ch2ch2c(＝o)oh。
[0109]
如本文所使用的，术语“聚乙二醇”是指由(o(ch2)m)
t
基团构成的线性链、支链或星形构象。在某些实施例中，聚乙烯或peg基团是-(o(ch2)m)
t
*-，其中m是1-10，t是4-40，并且其中
“‑”
指示指向自杀式间隔子的末端并且“*
‑”
指示与终末端基团r’附接点，其中r’是oh、och3或och2ch2c(＝o)oh。在其他实施例中，聚乙烯或peg基团是-((ch2)mo)
t
*-，其中m是1-10，t是4-40，并且其中
“‑”
指示指向自杀式间隔子的末端并且“*
‑”
指示与终末端基团r”的附接点，其中r”是h、ch3或ch2ch2c(＝o)oh。
[0110]
如本文所使用的，术语“细胞外”是指一个或多个细胞的质膜外部的空间。
[0111]
如本文所使用的，术语“细胞外水平的抑制”是指减少或降低位于一个或多个细胞质膜外部空间中的靶分子的浓度。
[0112]
术语“pcsk9”、“hpcsk9”或“前蛋白转化酶枯草溶菌素/kexin 9型”可互换地指属于分泌型枯草杆菌酶家族的蛋白酶k亚家族的天然存在的人前蛋白转化酶。pcsk9被合成为可溶酶原，其在内质网中经历了自催化性分子内加工，并被认为作为前蛋白转化酶起作用。
pcsk9在胆固醇稳态中起作用，并且可能在皮层神经元的分化中起作用。pcsk9基因的突变是常染色体显性家族性高胆固醇血症的原因。(burnett和hooper,clin.biochem.rev.[临床生物化学综述](2008)29(1):11-26)
[0113]
如本文所使用的，术语“pcsk9介导的疾病或障碍”或“与pcsk9相关的疾病或障碍”是指与pcsk9活性相关的疾病或障碍，其包括高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病(包括主动脉疾病和脑血管疾病)、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、trl升高、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤
[0114]
术语“高胆固醇血症”或“血脂异常”包括例如家族性和非家族性高胆固醇血症。家族性高胆固醇血症(fh)是常染色体显性遗传障碍，其特征是与低密度脂蛋白(ldl)结合的血清胆固醇升高。家族性高胆固醇血症包括杂合性fh和纯合性fh。高胆固醇血症(或血脂异常)是血液中高水平胆固醇的存在。它是高脂血症(血液中脂质水平升高)和高脂蛋白血症(血液中脂蛋白水平升高)的一种形式。
[0115]
高脂血症是血液中脂质的升高。这些脂质包括胆固醇、胆固醇酯、磷脂和甘油三酯。高脂血症包括例如i型、iia型、iib型、iii型、iv型和v型。
[0116]
高甘油三酯血症表示血液中甘油三酯水平高。甘油三酯水平升高与动脉粥样硬化相关(即使在没有高胆固醇血症的情况下)，并且容易患心血管疾病。
[0117]“谷固醇血症”或“植物固醇血症”是一种罕见的常染色体隐性遗传性脂质代谢障碍，其特征在于胃肠道中谷固醇的过度吸收和饮食固醇的胆汁排泄减少(即导致高胆固醇血症、肌腱和结节性黄色瘤、动脉粥样硬化的过早发展)以及改变胆固醇合成。
[0118]“动脉粥样硬化”包括与动脉内壁中脂肪物质、胆固醇、细胞废物、钙和纤维蛋白沉积有关的动脉硬化。产生的积聚称为斑块。
[0119]“动脉粥样硬化”或“动脉粥样硬化性血管疾病(asvd)”是一种特定形式的动脉硬化，其涉及由于白细胞(包含活的、活跃的白细胞(产生炎症))和死细胞的残留物(包括胆固醇和甘油三酯)的侵入和积聚而导致的动脉壁增厚、变硬和失去弹性。因此，由于动脉壁中白细胞的慢性炎性应答，动脉粥样硬化是影响动脉血管的综合征。
[0120]“冠心病”也称为动脉粥样硬化性心脏病、动脉粥样硬化性心血管疾病、冠心病或缺血性心脏病，是最常见的心脏病类型和心脏病发作原因。该疾病是由沿心脏动脉内壁积聚的斑块引起的，从而使动脉管腔变窄并减少了流向心脏的血液。
[0121]“黄色瘤”是脂质增生的皮肤表现，其中脂质在皮肤内的大泡沫细胞中积聚。黄色瘤与高脂血症有关。
[0122]
如本文所使用的，术语“lp(a)浓度升高”是指高于30mg/dl(75nmol/l)的血清lp(a)浓度。“血清lp(a)升高”意指大于约14mg/dl的血清lp(a)水平。在某些实施例中，如果患者中测得的血清lp(a)水平大于约15mg/dl、约20mg/dl、约25mg/dl、约30mg/dl、约35mg/dl、约40mg/dl、约45mg/dl、约50mg/dl、约60mg/dl、约70mg/dl、约80mg/dl、约90mg/dl、约100mg/dl、约20mg/dl、约140mg/dl、约150mg dl、约180mg/dl或约200mg/dl，则认为患者的血清lp(a)升高，可以在餐后检查患者的血清lp(a)水平。在一些实施例中，在禁食一段时间后(例如，禁食8小时，8小时，10小时，12小时或更长时间之后)测量lp(a)水平。测量患者血清lp(a)的示例性方法包括但不限于速率免疫比浊法、elisa、比浊法、免疫比浊法和离解增
强型镧系元素荧光免疫测定法，但任何临床可接受的诊断方法均可在本披露的上下文中使用。
[0123]“甘油三酯水平升高”或“etl”是指被确定为不希望的或被靶向调节的任何程度的甘油三酯水平。
[0124]“脓毒症”是一种全身性反应，其特征是动脉低血压、代谢性酸中毒、全身血管阻力降低、呼吸急促和器官功能障碍。脓毒症可以产生自败血症(即生物体，其在血液中的代谢终产物或毒素)(包括菌血症(即血液中的细菌))以及毒血症(即血液中的毒素)(包括内毒素血症(即血液中的内毒素)。术语“脓毒症”还包括真菌血症(即，血液中的真菌)、病毒血症(即，血液中的病毒或病毒颗粒)和寄生虫血症(即，血液中的蠕虫或原生动物寄生虫)。因此，败血症和败血性休克(由败血症引起的急性循环衰竭，通常与多器官衰竭和高死亡率有关)可能是由许多生物体引起的。
[0125]
术语“cfhr3”或“补体因子h相关蛋白3基因”可互换地指编码人蛋白补体因子h相关蛋白3(fhr3)的基因。
[0126]
术语“fhr3”或“补体因子h相关蛋白3”可互换地指天然存在的人补体因子h相关蛋白3，其是属于补体因子h相关蛋白家族的分泌蛋白。
[0127]
如本文所使用的，术语“cfhr3介导的疾病或障碍”或“与cfhr3相关的疾病或障碍”是指与cfhr3的异常活性相关的疾病或障碍，其包括肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0128]
如本文所使用的，术语“fhr3介导的疾病或障碍”或“与fhr3相关的疾病或障碍”是指与fhr3的活性相关的疾病或障碍，其包括肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0129]
如本文所使用的，术语“肾病”是指肾脏的疾病或损伤。
[0130]
如本文所使用的，术语“年龄相关性黄斑变性”是指影响眼睛的黄斑从而随时间推移导致失明的眼病。
[0131]
如本文所使用的，术语“非典型溶血性尿毒综合征”是指由于肾脏中的异常凝血而影响肾脏功能的疾病。非典型溶血性尿毒综合征的特征在于与异常凝血相关的三个主要特征：溶血性贫血、血小板减少症和肾衰竭。
[0132]
如本文所使用的，术语“溶血性贫血”是指红细胞的过早分解。
[0133]
如本文所使用的，术语“血小板减少症”是指用于辅助凝血的循环血小板的水平降低。
[0134]
如本文所使用的，术语“肝细胞癌(hcc)”是指肝癌。
[0135]
如本文所使用的，术语“反应性基团”是能够与抗体或抗体片段的官能团形成共价键的官能团。此类官能团的非限制性实例包括本文提供的表1的反应性基团。
[0136]
如本文所使用的，术语“偶联基团”是指将桥联间隔子连接至抗体或其片段的二价部分。所述偶联基团是通过反应基团与抗体或其片段的官能团之间的反应形成的二价部分。此类二价部分的非限制性实例包括本文提供的表1和表2中给出的二价化学部分。
[0137]
如本文所使用的，当展示化合物的部分结构时，波浪线指示所述部分结构与分子其余部分的附接点。
[0138]
如本文所使用的，术语“组合物”或“药物组合物”是指本发明的化合物与至少一种
及任选地多于一种其他药学上可接受的化学组分(如载剂、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂)的混合物。
[0139]
如本文所使用的，术语“光学异构体”或“立体异构体”是指本发明的给定化合物可存在的各种立体异构构象中的任一种并且包括几何异构体。应当理解，取代基可以与碳原子的手性中心连接。术语“手性”是指在其镜像配偶体上具有非重叠性性质的分子，而术语“非手性”是指在其镜像配偶体上是可重叠的分子。因此，本发明包括所述化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”是一对立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋”混合物。该术语用于在适当时指定外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个非对称原子，而彼此非镜像的立体异构体。绝对立体化学是根据cahn-lngold-prelog r-s系统规定的。当化合物是纯对映异构体时，各手性碳处的立体化学可以通过r或s来说明。未知绝对构型的拆分化合物可以取决于其使波长为钠d线的平面偏振光旋转的方向(右旋或左旋)来指定( )或(-)。本文所述的某些化合物含有一个或多个不对称中心或轴并且由此可以产生对映异构体、非对映异构体和其他可以根据绝对立体化学定义为(r)-或(s)-的立体异构体形式。
[0140]
如本文所使用的，术语“药学上可接受的载剂”包括任何及所有溶剂、分散体介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染料等以及它们的组合，如本领域普通技术人员已知的(参见，例如，remington’s pharmaceutical sciences[雷明顿制药科学],第18版,mack printing company[麦氏印务公司],1990,第1289-1329页)。除了任何常规载体与活性成分均不相容的情况外，考虑其在治疗或药物组合物中的用途。
[0141]
如本文所使用的，术语“受试者”涵盖哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于人、黑猩猩、猿、猴、牛、马、绵羊、山羊、猪；兔、狗、猫、大鼠、小鼠、豚鼠等。非哺乳动物的实例包括但不限于鸟、鱼等。通常，所述受试者是人。
[0142]
术语“需要这种治疗的受试者”是指将在生物学上、在医学上或在生活质量上从这种治疗中获益的受试者。
[0143]
如本文所使用的，术语任何疾病或障碍的“治疗”在一个实施例中，是指减轻疾病或障碍(即，减慢或停滞或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一实施例中，“治疗”是指缓解或减轻至少一种身体参数，包括不能被患者辨别的那些。在又另一实施例中，“治疗”是指在身体方面(例如，可辨别的症状的稳定化)、在生理方面(例如，身体参数的稳定化)、或二者方面调节疾病或障碍。
[0144]
如本文所使用的，术语任何疾病或障碍的“预防”是指疾病或障碍的预防性治疗；或延迟疾病或障碍的发作或进展。
[0145]
术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”可互换地指足以实现所期望结果(即，减少或抑制酶或蛋白活性，减轻症状，缓解症状或病症，延迟疾病进展，减小肿瘤尺寸，抑制肿瘤生长，防止转移，抑制或防止病毒、细菌、真菌或寄生虫感染)的量。在一些实施例中，治疗有效量不诱导或不引起不期望的副作用。在一些实施例中，治疗有效量诱导或引起副作用，但仅是由医疗服务提供者就患者的病症而言可接受的那些。可以通过首先施用低剂量然后递增地增加所述剂量直至实现所期望的效果来确定治疗有效量。本发明分子的“预防有效剂
量”或“预防有效量”可以防止疾病症状的发作，这些疾病症状包括与癌症相关的症状。本发明分子的“治疗有效剂量”或“治疗有效量”可以导致疾病症状的严重性下降，这些疾病症状包括与癌症相关的症状。
[0146]
本文提供的化合物名称使用chembiodraw ultra(版本14.0)获得。
[0147]
如本文所使用的，术语“一个/种”、“该/所述”以及在本发明的上下文中使用的类似术语(尤其是在权利要求的上下文中)应被解释为涵盖单数和复数两者，除非本文另外说明或与上下文明显矛盾。
[0148]
除非另有说明，否则术语“本发明的双官能化合物”是指具有式(i)、其子式(例如式(ia)和式(ib))的一种或多种双官能化合物和示例性化合物及其盐，以及所有立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、旋转异构体、互变异构体和同位素标记的化合物(包括氘取代)。
[0149]
本文中给出的任何式还旨在代表化合物的非标记形式以及同位素标记形式。除了一个或多个原子被具有选定原子量或质量数的原子置换以外，同位素标记的化合物具有本文中给出的式所描述的结构。可以掺入本发明化合物中的同位素包括例如氢的同位素。
[0150]
如本文所使用的，术语“多肽”和“肽”可互换使用，是指连接在一起的两个或更多个氨基酸。除了下表a中列出的不常见或非天然氨基酸的缩写和下表b中列出的受保护氨基酸的缩写之外，本领域公认的三字母或单字母缩写用于表示构成本披露的肽和多肽的氨基酸残基。当前面有“d”时，氨基酸是d-氨基酸。当前面有“l”时，氨基酸是l-氨基酸。当单字母缩写是大写字母时，它是指l-氨基酸。当单字母缩写是小写字母时，它是指d-氨基酸。氨基酸缩写的组或串用于表示肽。肽用左侧n-末端指示，序列从n-末端写到c-末端。
[0151]
本文所述的环肽含有非天然氨基酸(即，自然界中不存在的化合物)，并且可替代性地使用本领域已知的其他氨基酸类似物。
[0152]
本领域普通技术人员将理解，可以在本文所述的任何环多肽的序列中进行各种氨基酸取代，例如保守氨基酸取代，而不必降低其活性。如本文所使用的，“通常用作其替代物的氨基酸”包括保守取代(即，用具有相当化学特性的氨基酸取代)。为了保守取代的目的，非极性(疏水性)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和蛋氨酸。极性(亲水性)中性氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电荷的(碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸。带负电荷的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。氨基酸取代的实例包括用l-氨基酸取代其对应的d-氨基酸，用半胱氨酸取代高半胱氨酸或其他具有含硫醇侧链的非天然氨基酸，用赖氨酸取代高赖氨酸、二氨基丁酸、二氨基丙酸、鸟氨酸或其他具有含氨基侧链的非天然氨基酸，或用丙氨酸取代正缬氨酸等。
[0153]
本文所用的术语“氨基酸”是指天然存在的氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物和氨基酸模拟物，它们以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用，如果它们的结构允许此类立体异构形式，则全部是它们的d和l立体异构体。氨基酸在本文中通过它们的名称、它们的通常已知的三字母符号、表a或表b中列出的代码、或通过iupac-iub生化命名委员会推荐的单字母符号来表示。
[0154]
术语“天然存在的”是指在自然界中发现且未受人为操纵的材料。类似地，如本文所使用的，“非天然存在的”、“非天然的”等是指在自然界中未发现或已被人在结构上修饰
或合成的材料。当与氨基酸结合使用时，术语“天然存在的”是指20种常规氨基酸(即丙氨酸(a或ala)、半胱氨酸(c或cys)、天冬氨酸(d或asp)、谷氨酸(e或glu)、苯丙氨酸(f或phe)、甘氨酸(g或gly)、组氨酸(h或his)、异亮氨酸(i或ile)、赖氨酸(k或lys)、亮氨酸(l或leu)、蛋氨酸(m或met)、天冬酰胺(n或asn)、脯氨酸(p或pro)、谷氨酰胺(q或gln)、精氨酸(r或arg)、丝氨酸(s或ser)、苏氨酸(t或thr)、缬氨酸(v或val)、色氨酸(w或trp)和酪氨酸(y或tyr))。
[0155]
如本文所使用的，术语“非天然氨基酸”和“非自然氨基酸”可互换地表示使用来自任何生物体的未修饰或经修饰的基因(无论相同或不同)无法在任何生物体中生物合成产生的氨基酸结构。这些包括但不限于经修饰的氨基酸和/或氨基酸类似物，其不是20种天然存在的氨基酸、硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸(pyl)或吡咯啉-羧基-赖氨酸(pcl，例如，如pct专利公开wo 2010/48582中所述)中的一种。
[0156]
经修饰的编码氨基酸包括但不限于羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、o-磷酸丝氨酸、氮杂环丁烷甲酸、2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、叔丁基甘氨酸、2,4-二氨基异丁酸、锁链素(desmosine)、2,2'-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、n-乙基甘氨酸、n-甲基甘氨酸、n-乙基天冬酰胺、高脯氨酸、羟赖氨酸、别羟赖氨酸、3-羟脯氨酸、4-羟脯氨酸、异锁链素、别异亮氨酸、n-甲基丙氨酸、n-甲基甘氨酸、n-甲基异亮氨酸、n-甲基戊基甘氨酸、n-甲基缬氨酸、萘丙氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸、鸟氨酸、戊基甘氨酸、哌啶酸和硫脯氨酸。术语“氨基酸”还包括天然存在的氨基酸，它们是某些生物体中的代谢物，但不被遗传密码编码以掺入蛋白中。此类氨基酸包括但不限于鸟氨酸、d-鸟氨酸和d-精氨酸。
[0157]
肽在本文中被定义为包含通过肽键共价连接的两个或更多个氨基酸的有机化合物。肽可根据组成氨基酸的数目来称呼，即二肽或二聚体含有两个氨基酸残基，三肽或三聚体含有三个，等等。含有十个或更少氨基酸的肽可称为寡肽，而具有多于十个氨基酸残基的那些是多肽。
[0158]
如本文所使用的，术语“肽”是指通过肽键连接在一起的两个或更多个氨基酸。
[0159]
表a：如本披露中所述的非自然或非天然氨基酸的实例：
[0160][0161][0162]
表b：如本披露中所述的受保护氨基酸的实例：
[0163][0164]
本发明的双官能化合物
[0165]
本发明的双官能化合物是包含结合细胞外靶标(t
l
)的部分的化合物，这些细胞外靶标诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞或质膜蛋白。该靶分子配体(t
l
)与结合细胞表面受体(r
l
)的部分连接，其中该细胞表面受体与受体介导的胞吞作用相关。本发明的双官能化合物具有式(i)的结构：
[0166]rl-l
a-t
l
ꢀꢀꢀ(i)[0167]
其中：
[0168]rl
是结合与受体介导的胞吞作用相关的细胞表面受体的部分；
[0169]
la是接头，
[0170]
并且
[0171]
t
l
是结合细胞外靶标的部分。
[0172]
本发明的双官能化合物的某些方面和实例在本文提供的所枚举实施例中提供。应认识到，每个实施例中指定的特征可以与其他指定特征组合以提供本发明的另外的实施例。
[0173]
a.靶结合部分(t
l
)
[0174]
本发明的双官能化合物的靶结合部分(t
l
)是结合细胞外靶分子的部分，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞或质膜蛋白，其中本发明的双官能化合物然后可用于将细胞外靶分子引导至溶酶体以进行降解。可使用本发明的双官能化合物进行定向降解的此类靶分子的实例包括但不限于ldl(apob)、lp(a)、apociii、angptl3、angptl4、angptl8、因子11、gdf15、lpl、pcsk9、il1β、il17、补体因子b、补体因子d、mpo、ige、il7、il12a、il23、tnfa、cxcr4、mapt、fhr3、timp1、爱帕琳肽、bmp6、bmp9/gdf2、csf-1、epo、il5、mfge8、tslp、tsp、c5、cxcl10、fgf23、igf1、il10、il13、il2、il6、vegfa、nkg2d、znfr3、ada2、supar、tgf-β1、il4受体、stoll受体、组胺、tau、颗粒蛋白前体、α-突触核蛋白、毒素、毒液、hbv可溶性抗原、病毒抗原、朊病毒蛋白、scfv、aav和抗aav抗体。在某些实施例中，可使用本
发明的双官能化合物定向降解的细胞外靶分子是pcsk9和fhr3。
[0175]
实施例1.具有式(i)的双官能化合物，其中t
l
是结合pcsk9或fhr3的部分。
[0176]
实施例2.具有式(i)的双官能化合物，其中t
l
是结合pcsk9的部分。
[0177]
实施例3.具有式(i)或如实施例1至2中任一项所述的双官能化合物，其具有式(ia)的结构：
[0178]rl-l
a-pcsk9
l
ꢀꢀꢀ
(ia)
[0179]
其中：
[0180]rl
是结合与受体介导的胞吞作用相关的细胞表面受体的部分；
[0181]
la是接头，
[0182]
并且
[0183]
pcsk9
l
是结合pcsk9的部分。
[0184]
实施例4.具有式(i)或如实施例1至3中任一项所述的双官能化合物，其中所述靶结合部分(t
l
)是结合pcsk9的具有式(a)的化合物、或其药学上可接受的盐或立体异构体：
[0185][0186]
其中：
[0187]
l
a1
选自选自
[0188][0189]
其中l
a1
的**指示与接头(la)的附接点并且l
a1
的*指示与附接到l
a1
的-c(＝o)-基团的附接点；
[0190]
(aa)2是选自l-脯氨酸残基和d-脯氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)2的c-末端是与-nh-基团的附接点；
[0191]
(aa)3是选自l-精氨酸残基、d-精氨酸残基、l-丝氨酸残基、d-丝氨酸残基、l-组氨酸残基、d-组氨酸残基、l-丙氨酸残基和d-丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)3的c-末端是与(aa)2的附接点；
[0192]
(aa)4是选自l-天冬氨酸残基、d-天冬氨酸残基、l-天冬酰胺残基、d-天冬酰胺残基、l-谷氨酸残基、d-谷氨酸残基、l-赖氨酸残基、d-赖氨酸残基、l-谷氨酰胺残基、d-谷氨酰胺残基、l-脯氨酸残基、d-脯氨酸残基、l-丙氨酸残基、d-丙氨酸残基、l-(n-me)谷氨酸残基和d-(n-me)谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)4的c-末端是与(aa)3的附接点；
[0193]
(aa)5是选自l-(n-me)丙氨酸残基、d-(n-me)丙氨酸残基、l-(n-me)谷氨酸残基和d-(n-me)谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)5的c-末端是与(aa)4的附接点；
[0194]
(aa)6是选自l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、d-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、l-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、d-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、l-(3,4-二氯-苯丙氨酸)残基、d-(3,4-二氯-苯丙氨酸)残基、l-(3-氟-苯丙氨酸)残基、d-(3-氟-苯丙氨酸)残基、l-(4-氯-苯丙氨酸)残基和d-(4-氯-苯丙氨酸)残基的氨基酸残基，其中(aa)6的c-末端是与(aa)5的附接点；
[0195]
(aa)7是选自l-(n-me)丙氨酸残基、d-(n-me)丙氨酸残基、l-(n-me)苯丙氨酸残基和d-(n-me)苯丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)7的c末端是与(aa)6的附接点；
[0196]
(aa)8是选自l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、d-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、l-丝氨酸残基、d-丝氨酸残基、l-酪氨酸残基、d-酪氨酸残基、l-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、d-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、l-丙氨酸残基、d-丙氨酸残基、l-苯丙氨酸残基、d-苯丙氨酸残基、l-缬氨酸残基和d-缬氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)8的c-末端是与(aa)7的附接点；
[0197]
(aa)9是选自l-苏氨酸残基和d-苏氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)9的c末端是与(aa)8的附接点；
[0198]
(aa)
10
是选自l-苏氨酸残基、d-苏氨酸残基、l-丝氨酸残基和d-丝氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
10
的c-末端是与(aa)9的附接点；
[0199]
(aa)
11
是选自l-丝氨酸残基、d-丝氨酸残基、l-天冬氨酸残基、d-天冬氨酸残基、l-天冬酰胺残基、d-天冬酰胺残基、l-脯氨酸残基、d-脯氨酸残基、l-丙氨酸残基、d-丙氨酸残基、l-高丝氨酸残基和d-高丝氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
11
的c-末端是与(aa)
10
的附接点；
[0200]
(aa)
12
是选自l-缬氨酸残基、d-缬氨酸残基、l-谷氨酸残基和d-谷氨酸残基的氨基
酸残基，其中(aa)
12
的c-末端是与(aa)
11
的附接点；并且(aa)
13
是选自l-苯丙氨酸残基和d-苯丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
13
的c末端是与(aa)
12
的附接点。
[0201]
实施例5.如实施例4所述的双官能化合物，其中
[0202]
(aa)2是选自l-脯氨酸残基和d-脯氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)2的c-末端是与-nh-基团的附接点。
[0203]
实施例6.如实施例4或实施例5所述的双官能化合物，其中
[0204]
(aa)2是l-脯氨酸残基，其中(aa)2的c-末端是与式(a)中描绘的-nh-基团的附接点。
[0205]
实施例7.如实施例4至6中任一项所述的双官能化合物，其中
[0206]
(aa)3是选自l-精氨酸残基、d-精氨酸残基、l-丝氨酸残基、d-丝氨酸残基、l-组氨酸残基、d-组氨酸残基、l-丙氨酸残基和d-丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)3的c-末端是与(aa)2的附接点。
[0207]
实施例8.如实施例4至7中任一项所述的双官能化合物，其中
[0208]
(aa)3是选自l-精氨酸残基、l-丝氨酸残基、l-组氨酸残基和l-丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)3的c-末端是与(aa)2的附接点。
[0209]
实施例9.如实施例4至8中任一项所述的双官能化合物，其中
[0210]
(aa)3是l-丙氨酸残基，其中(aa)3的c-末端是与(aa)2的附接点。
[0211]
实施例10.如实施例4至9中任一项所述的双官能化合物，其中
[0212]
(aa)4是选自l-天冬氨酸残基、d-天冬氨酸残基、l-天冬酰胺残基、d-天冬酰胺残基、l-谷氨酸残基、d-谷氨酸残基、l-赖氨酸残基、d-赖氨酸残基、l-谷氨酰胺残基、d-谷氨酰胺残基、l-脯氨酸残基、d-脯氨酸残基、l-丙氨酸残基、d-丙氨酸残基、l-(n-me)谷氨酸残基和d-(n-me)谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)4的c-末端是与(aa)3的附接点。
[0213]
实施例11.如实施例4至10中任一项所述的双官能化合物，其中
[0214]
(aa)4是选自l-天冬氨酸残基、l-天冬酰胺残基、l-谷氨酸残基、l-赖氨酸残基、l-谷氨酰胺残基、l-脯氨酸残基、l-丙氨酸残基和l-(n-me)谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)4的c-末端是与(aa)3的附接点。
[0215]
实施例12.如实施例4至11中任一项所述的双官能化合物，其中
[0216]
(aa)4是l-谷氨酸残基，其中(aa)4的c-末端是与(aa)3的附接点。
[0217]
实施例13.如实施例4至12中任一项所述的双官能化合物，其中
[0218]
(aa)5是选自l-(n-me)丙氨酸残基、d-(n-me)丙氨酸残基、l-(n-me)谷氨酸残基和d-(n-me)谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)5的c-末端是与(aa)4的附接点。
[0219]
实施例14.如实施例4至13中任一项所述的双官能化合物，其中
[0220]
(aa)5是选自l-(n-me)丙氨酸残基和l-(n-me)谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)5的c-末端是与(aa)4的附接点。
[0221]
实施例15.如实施例4至14中任一项所述的双官能化合物，其中
[0222]
(aa)5是l-(n-me)丙氨酸残基，其中(aa)5的c-末端是与(aa)4的附接点。
[0223]
实施例16.如实施例4至15中任一项所述的双官能化合物，其中
[0224]
(aa)6是选自l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、d-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、l-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、d-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、l-(3,4-二氯-苯丙氨酸)
残基、d-(3,4-二氯-苯丙氨酸)残基、l-(3-氟-苯丙氨酸)残基、d-(3-氟-苯丙氨酸)残基、l-(4-氯-苯丙氨酸)残基和d-(4-氯-苯丙氨酸)残基的氨基酸残基，其中(aa)6的c-末端是与(aa)5的附接点。
[0225]
实施例17.如实施例4至16中任一项所述的双官能化合物，其中
[0226]
(aa)6是选自l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、l-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、l-(3,4-二氯-苯丙氨酸)残基、l-(3-氟-苯丙氨酸)残基和l-(4-氯-苯丙氨酸)残基的氨基酸残基，其中(aa)6的c-末端是与(aa)5的附接点。
[0227]
实施例18.如实施例4至17中任一项所述的双官能化合物，其中
[0228]
(aa)6是l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基，其中(aa)6的c-末端是与(aa)5的附接点。
[0229]
实施例19.如实施例4至18中任一项所述的双官能化合物，其中
[0230]
(aa)7是选自l-(n-me)丙氨酸残基、d-(n-me)丙氨酸残基、l-(n-me)苯丙氨酸残基和d-(n-me)苯丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)7的c末端是与(aa)6的附接点。
[0231]
实施例20.如实施例4至19中任一项所述的双官能化合物，其中
[0232]
(aa)7是选自l-(n-me)丙氨酸残基和l-(n-me)苯丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)7的c-末端是与(aa)6的附接点。
[0233]
实施例21.如实施例4至20中任一项所述的双官能化合物，其中
[0234]
(aa)7是l-(n-me)丙氨酸残基，其中(aa)7的c-末端是与(aa)6的附接点。
[0235]
实施例22.如实施例4至21中任一项所述的双官能化合物，其中
[0236]
(aa)8是选自l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、d-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、l-丝氨酸残基、d-丝氨酸残基、l-酪氨酸残基、d-酪氨酸残基、l-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、d-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、l-丙氨酸残基、d-丙氨酸残基、l-苯丙氨酸残基、d-苯丙氨酸残基、l-缬氨酸残基和d-缬氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)8的c-末端是与(aa)7的附接点。
[0237]
实施例23.如实施例4至22中任一项所述的双官能化合物，其中
[0238]
(aa)8是选自l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基、l-丝氨酸残基、l-酪氨酸残基、l-(4-三氟甲基-苯丙氨酸)残基、l-丙氨酸残基、l-苯丙氨酸残基和l-缬氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)8的c-末端为与(aa)7的附接点。
[0239]
实施例24.如实施例4至23中任一项所述的双官能化合物，其中
[0240]
(aa)8是l-(4-苯基-苯丙氨酸)(bip)残基，其中(aa)8的c-末端是与(aa)7的附接点。
[0241]
实施例25.如实施例4至24中任一项所述的双官能化合物，其中
[0242]
(aa)9是选自l-苏氨酸残基和d-苏氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)9的c末端是与(aa)8的附接点。
[0243]
实施例26.如实施例4至25中任一项所述的双官能化合物，其中
[0244]
(aa)9是l-苏氨酸残基，其中(aa)9的c-末端是与(aa)8的附接点。
[0245]
实施例27.如实施例4至26中任一项所述的双官能化合物，其中
[0246]
(aa)
10
是选自l-苏氨酸残基、d-苏氨酸残基、l-丝氨酸残基和d-丝氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
10
的c-末端是与(aa)9的附接点。
[0247]
实施例28.如实施例4至27中任一项所述的双官能化合物，其中
[0248]
(aa)
10
是l-苏氨酸残基，其中(aa)
10
的c-末端是与(aa)9的附接点。
[0249]
实施例29.如实施例4至28中任一项实施例所述的双官能化合物，其中
[0250]
(aa)
11
是选自l-丝氨酸残基、d-丝氨酸残基、l-天冬氨酸残基、d-天冬氨酸残基、l-天冬酰胺残基、d-天冬酰胺残基、l-脯氨酸残基、d-脯氨酸残基、l-丙氨酸残基、d-丙氨酸残基、l-高丝氨酸残基和d-高丝氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
11
的c-末端是与(aa)
10
的附接点。
[0251]
实施例30.如实施例4至29中任一项实施例所述的双官能化合物，其中
[0252]
(aa)
11
是选自l-丝氨酸残基、l-天冬酰胺残基、l-脯氨酸残基、l-丙氨酸残基和l-高丝氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
11
的c-末端是与(aa)
10
的附接点。
[0253]
实施例31.如实施例4至30中任一项实施例所述的双官能化合物，其中
[0254]
(aa)
11
是l-脯氨酸残基，其中(aa)
11
的c-末端是与(aa)
10
的附接点。
[0255]
实施例32.如实施例4至31中任一项所述的双官能化合物，其中
[0256]
(aa)
12
是选自l-缬氨酸残基、d-缬氨酸残基、l-谷氨酸残基和d-谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
12
的c-末端是与(aa)
11
的附接点。
[0257]
实施例33.如实施例4至32中任一项所述的双官能化合物，其中
[0258]
(aa)
12
是选自l-缬氨酸残基和l-谷氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
12
的c-末端是与(aa)
11
的附接点。
[0259]
实施例34.如实施例4至33中任一项所述的双官能化合物，其中
[0260]
(aa)
12
是l-缬氨酸残基，其中(aa)
12
的c-末端是与(aa)
11
的附接点。
[0261]
实施例35.如实施例4至34中任一项所述的双官能化合物，其中
[0262]
(aa)
13
是选自l-苯丙氨酸残基和d-苯丙氨酸残基的氨基酸残基，其中(aa)
13
的c末端是与(aa)
12
的附接点。
[0263]
实施例36.如实施例4至35中任一项所述的双官能化合物，其中
[0264]
(aa)
13
是l-苯丙氨酸，其中(aa)
13
的c-末端是与(aa)
12
的附接点。
[0265]
实施例37.如实施例4所述的双官能化合物，其中t
l
是具有式(a)的化合物或药学上可接受的盐或立体异构体，其选自以下：
[0266]
[0267]
[0268]
[0269]
[0270]
[0271]
[0272]
[0273]
[0274]
[0275]
[0276]
[0277]
[0278]
[0279]
[0280]
[0281]
[0282]
[0283]
[0284]
[0285]
[0286]
[0287][0288]
其中：
[0289]
ac是乙酰基，并且其中用“*”标记的乙酰基和用“*”标记的(l-cys)经由通过其侧链或末端形成的硫键连接，并且
[0290]
l
a1
如本文所定义，并且l
a1
的**指示与接头(la)的附接点。
[0291]
实施例38.如实施例4至37中任一项所述的双官能化合物，其中l
a1
是
其中l
a1
的**指示与接头(la)的附接点并且l
a1
的*指示与-c(＝o)-基团的附接点。
[0292]
实施例39.如实施例4至38中任一项所述的双官能化合物，其中l
a1
是其中l
a1
的**指示与接头(la)的附接点并且l
a1
的*指示与-c(＝o)-基团的附接点。
[0293]
实施例40.如实施例4至38中任一项所述的双官能化合物，其中l
a1
是其中l
a1
的**指示与接头(la)的附接点并且l
a1
的*指示与-c(＝o)-基团的附接点。
[0294]
实施例41.如实施例4至38中任一项所述的双官能化合物，其中t
l
是具有式(a)的化合物或药学上可接受的盐或立体异构体，其选自以下：
[0295][0296]
实施例42.如实施例4至38中任一项所述的双官能化合物，其中t
l
是
[0297][0298]
实施例43.具有式(i)或如实施例1至3中任一项所述的双官能化合物，其中t
l
是结合pcsk9的具有式(b)的化合物、或其药学上可接受的盐或立体异构体：
[0299][0300]
其中：
[0301]
x
b1
是c或n；
[0302]rb1
是h、(c
1-c6)烷基或(c
1-c6)卤代烷基；
[0303]
或r
b1
和r
b11
与它们所附接的原子一起形成包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂环基环，其任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：＝(o)、(c
1-c6)烷基和(c
1-c6)卤代烷基；
[0304]rb2
是(c
1-c6)烷氧基，(c
1-c6)烷基，-l
b1-，(c
1-c6)卤代烷基，(c
1-c6)羟基烷基，(c
3-c7)环烷基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该烷基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷氧基，(c
1-c6)卤代烷氧基，-c(＝o)(c
1-c6)烷基，-c(＝o)oh，-c(＝o)o(c
1-c6)烷基，-oc(＝o)(c
1-c6)烷基，-c(＝o)nr
b17rb18
，-nr
b17
c(＝o)r
b18
，(c
6-c
10
)芳基，和包含选自n、o和s的1-4个杂原子的5或6元杂芳基；
[0305]rb3
是h、(c
1-c6)烷基或(c
1-c6)卤代烷基；
[0306]rb4
是h、(c
1-c6)烷基或(c
1-c6)卤代烷基；
[0307]rb5
是h、(c
1-c6)烷基或(c
1-c6)卤代烷基；
[0308]rb6
是h、(c
1-c6)烷基、-l
b1-、(c
1-c6)卤代烷基或(c
1-c6)羟基烷基，其中该烷基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷氧基，-c(＝o)oh，-c(＝o)o
(c
1-c6)烷基，-nr
b17rb18
，-c(＝o)nr
b17rb18
，-nr
b17
c(＝o)r
b18
，(c
3-c7)环烷基，和包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0309]rb6’是h、(c
1-c6)烷基、-l
b1-、(c
1-c6)卤代烷基或(c
1-c6)羟基烷基，其中该烷基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷氧基，-c(＝o)oh，-c(＝o)o(c
1-c6)烷基，-nr
b17rb18
，-c(＝o)nr
b17rb18
，-nr
b17
c(＝o)r
b18
，(c
3-c7)环烷基，和包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0310]rb7
是h、(c
1-c6)烷基、-l
b1-、(c
1-c6)卤代烷基或(c
1-c6)羟基烷基，其中该烷基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷氧基，-c(＝o)oh，-c(＝o)o(c
1-c6)烷基，-nr
b17rb18
，-c(＝o)nr
b17rb18
，-nr
b17
c(＝o)r
b18
，(c
3-c7)环烷基，和包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0311]rb7’是h、(c
1-c6)烷基、-l
b1-、(c
1-c6)卤代烷基或(c
1-c6)羟基烷基，其中该烷基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷氧基，-c(＝o)oh，-c(＝o)o(c
1-c6)烷基，-nr
b17rb18
，-c(＝o)nr
b17rb18
，-nr
b17
c(＝o)r
b18
，(c
3-c7)环烷基，和包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0312]
或r
b6
和r
b7
与它们所附接的碳原子一起形成(c
3-c7)环烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基环；
[0313]
或r
b7
和r
b7’与它们所附接的碳原子一起形成(c
3-c7)环烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基环；或
[0314]rb7
和r
b9
与它们所附接的原子一起形成包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂环基环，其任选地被独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基和＝(o)；
[0315]rb8
是h或(c
1-c6)烷基；
[0316]rb9
是h，(c
1-c6)烷基，(c
2-c6)烯基，(c
1-c6)卤代烷基，(c
2-c6)卤代烯基，(c
1-c6)烷氧基，(c
1-c6)卤代烷氧基，(c
1-c6)羟基烷基，(c
3-c7)环烷基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该烷基任选地被一个或多个r
b27
取代；
[0317]rb9’是h，(c
1-c6)烷基，(c
2-c6)烯基，(c
1-c6)卤代烷基，(c
2-c6)卤代烯基，(c
1-c6)烷氧基，(c
1-c6)卤代烷氧基，(c
1-c6)羟基烷基，(c
3-c7)环烷基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该烷基任选地被一个或多个r
b27
取代；或当x
b1
是n时，r
b9’不存在；
[0318]
或r
b9
和r
b9’与它们所附接的碳原子一起形成(c
3-c7)环烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基环；
[0319]
或r
b7
和r
b9
与它们所附接的原子一起形成包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂环基环，其任选地被独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基和＝(o)；
[0320]rb10
是(c
6-c
10
)芳基，包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基，(c
3-c7)环烷基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该环烷基、杂环基、芳基和杂芳基被-or
b13
或-nr
b23rb13
取代并且任选地被一个或多个r
b14
取代；
[0321]rb11
是-l
b1-、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基或(c
1-c6)羟基烷基，其中该烷基任选地被一个或多个r
b15
取代；
[0322]
或r
b1
和r
b11
与它们所附接的原子一起形成包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7
c6)烯基，(c
2-c6)炔基，(c
1-c6)烷氧基，(c
1-c6)卤代烷基，(c
1-c6)卤代烷氧基，(c
1-c6)羟基烷基，-nr
b31rb32
，-c(＝o)nr
b31rb32
，-c(＝o)o(c
1-c6)烷基，(c
3-c7)环烷基，包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，(c
6-c
10
)芳基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基，其中该环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基、-nh2、-n(h)(c
1-c6)烷基、-n((c
1-c6)烷基)2、-n(h)(c
1-c6)卤代烷基、-n((c
1-c6)卤代烷基)2、卤素和-oh；
[0342]
或两个r
b26
当在相邻原子上时与它们所附接的原子一起形成(c
3-c7)环烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基环，其任选地被一个或多个r
b33
取代；
[0343]
每个r
b27
在每次出现时独立地是cn，(c
6-c
10
)芳基，包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂芳基，(c
3-c7)环烷基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该芳基、杂芳基、环烷基和杂环基任选地被一个或多个r
b28
取代；
[0344]
每个r
b28
在每次出现时独立地是(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷氧基、(c
1-c6)羟基烷基、卤素、氧代或cn；
[0345]
或当r
b27
是环烷基或杂环基时，两个r
b28
与它们所附接的原子一起形成(c
4-c7)环烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基环；
[0346]
或当r
b27
是环烷基或杂环基时，两个r
b28
当附接到同一碳原子时一起形成＝(o)；
[0347]
每个r
b29
在每次出现时独立地是-nr
b31rb32
或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其任选地被一个或多个r
b30
取代；
[0348]
每个r
b30
在每次出现时独立地是-oh、卤素、(c
1-c6)烷基或(c
1-c6)卤代烷基；
[0349]
或两个r
b30
当在同一原子上时与它们所附接的原子一起形成(c
3-c7)螺环烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元螺杂环基环；
[0350]
每个r
b31
独立地选自h，(c
1-c6)烷基，(c
1-c6)羟基烷基，(c
3-c7)环烷基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该烷基任选地被一个或多个d取代，并且该环烷基和杂环基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基、卤素和-oh；
[0351]
每个r
b32
独立地选自h，(c
1-c6)烷基，(c
1-c6)羟基烷基，(c
3-c7)环烷基，和包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该烷基任选地被一个或多个d取代，并且该环烷基和杂环基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基、卤素和-oh；
[0352]
每个r
b33
在每次出现时独立地是(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)卤代烷基或-c(＝o)r，其中r是(c
1-c6)卤代烷基，(c
3-c7)环烷基，包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，或任选地被一个或多个(c
1-c6)烷氧基取代的(c
1-c6)烷基；
[0353]
或两个r
b33
当在同一原子上时与它们所附接的原子一起形成(c
3-c7)螺环烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元螺杂环基环；
[0354]
每个r
b34
在每次出现时独立地是(c
3-c7)环烷基或包含选自n、o和s的1-4个杂原子的4至10元单环或双环杂环基，其中该环烷基和杂环基任选地被(c
1-c6)烷基取代，该烷基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：(c
3-c7)环烷基和包含选自n、o和s的1-4个杂原子的4至10元单环或双环杂环基；
[0355]
l
b1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
b1
的*指示与接头(la)的附接点，并且其中r
b11
、r
b2
、r
b6
或rb7
中的至少一者是-l
b1-；
[0356]
m是选自1至13的整数；
[0357]
n是1、2、3或4；
[0358]
q是0、1或2，并且
[0359]
p是1、2、3、4、5或6。
[0360]
实施例44.如实施例43所述的双官能化合物，其中
[0361]
x
b1
是c；
[0362]rb1
是h；
[0363]rb2
是(c
1-c6)烷氧基、-l
b1-、或被-c(＝o)oh取代的(c
1-c6)烷基；
[0364]rb3
是h或(c
1-c6)烷基；
[0365]rb4
是h或(c
1-c6)烷基；
[0366]rb5
是h或(c
1-c6)烷基；
[0367]rb6
是h、(c
1-c6)烷基或-l
b1-；
[0368]rb6’是h；
[0369]rb7
是h、(c
1-c6)烷基或-l
b1-；
[0370]rb7’是h；
[0371]
或r
b6
和r
b7
与它们所附接的碳原子一起形成(c
3-c7)环烷基；
[0372]rb8
是h或(c
1-c6)烷基；
[0373]rb9
是h或任选地被一个或多个r
b27
取代的(c
1-c6)烷基；
[0374]rb9’是h或(c
1-c6)烷基；
[0375]rb10
是被-or
b13
取代并且任选地被一个或多个r
b14
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0376]rb11
是-l
b1-或(c
1-c6)烷基；
[0377]rb12
是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh或cn；
[0378]rb13
是被r
16
取代并且任选地被一个或多个r
b16
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0379]
每个r
b14
在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、氧代、-oh或cn；
[0380]rb16
是包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂芳基，其任选地被一个或多个r
b26
取代；
[0381]
每个r
b16’在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh或cn；
[0382]
每个r
b26
在每次出现时独立地是任选地被一个或多个r
b29
取代的(c
1-c6)烷基；
[0383]
每个r
b27
在每次出现时独立地是(c
6-c
10
)芳基；
[0384]
每个r
b29
在每次出现时独立地是-nr
b31rb32
或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0385]
每个r
b31
独立地选自h和(c
1-c6)烷基；
[0386]
每个r
b32
独立地选自h和(c
1-c6)烷基；
[0387]
l
b1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
b1
的*指示与接头(la)的附接点，并且其中r
b11
、r
b6
或r
b7
中的至少一者是-l
b1-；
[0388]
n是1；
[0389]
并且
[0390]
p是1、2、3、4、5或6。
[0391]
实施例45.如实施例43所述的双官能化合物，其中所述具有式(b)的化合物具有式(b-1)的结构：
[0392][0393]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0394]
实施例46.如实施例43至45中任一项所述的双官能化合物，其中
[0395]rb1
是h；
[0396]rb2
是(c
1-c6)烷氧基、-l
b1-、或被-c(＝o)oh取代的(c
1-c6)烷基；
[0397]rb3
是h或(c
1-c6)烷基；
[0398]rb6
是h、(c
1-c6)烷基或-l
b1-；
[0399]rb7
是h、(c
1-c6)烷基或-l
b1-；
[0400]
或r
b6
和r
b7
与它们所附接的碳原子一起形成(c
3-c7)环烷基；
[0401]rb9
是h或任选地被一个或多个r
b27
取代的(c
1-c6)烷基；
[0402]rb9’是h或(c
1-c6)烷基；
[0403]rb10
是被-or
b13
取代并且任选地被一个或多个r
b14
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0404]rb11
是-l
b1-或(c
1-c6)烷基；
[0405]rb12
是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh或cn；
[0406]rb13
是被r
16
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0407]
每个r
b14
在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、氧代、-oh或cn；
[0408]rb16
是包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂芳基，其任选地被一个或多个r
b26
取代；
[0409]
每个r
b26
在每次出现时独立地是任选地被一个或多个r
b29
取代的(c
1-c6)烷基；
[0410]
每个r
b27
在每次出现时独立地是(c
6-c
10
)芳基；
[0411]
每个r
b29
在每次出现时独立地是-nr
b31rb32
或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0412]
每个r
b31
独立地选自h和(c
1-c6)烷基；
[0413]
每个r
b32
独立地选自h和(c
1-c6)烷基；
[0414]
l
b1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
b1
的*指示与接头(la)的附接点，并且其中r
b11
、r
b6
或r
b7
中的至少一者是-l
b1-；
[0415]
n是1；
[0416]
并且
[0417]
p是1、2、3、4、5或6。
[0418]
实施例47.如实施例43所述的双官能化合物，其中t
l
选自：
[0419][0420]
或其药学上可接受的盐或立体异构体，其中：
[0421]
l
b1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
b1
的*指示与接头(la)的附接点。
[0422]
实施例48.如实施例43至47中任一项所述的双官能化合物，其中t
l
是具有式(b)的化合物或药学上可接受的盐或立体异构体，其选自：
[0423][0423]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0424]
实施例49.如实施例43至48中任一项所述的双官能化合物，其中t
l
是
[0425]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0426]
实施例50.具有式(i)或如实施例1至3中任一项所述的双官能化合物，其中t
l
是结合pcsk9的具有式(c)的化合物、或其药学上可接受的盐或立体异构体：
oh或cn；
[0444]rc10
是(c
6-c
10
)芳基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基，其中该芳基和杂芳基任选地被一个或多个r
c22
取代；
[0445]
每个r
c11
在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh或cn；
[0446]rc12
和r
c13
各自独立地是h或(c
1-c6)烷基；
[0447]
每个r
c14
在每次出现时独立地是d，nr
c15rc15’，(c
3-c7)碳环基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的3至7元杂环基，其中该碳环基和杂环基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基和(c
1-c6)卤代烷氧基；
[0448]rc15
和r
c15’各自独立地是h或(c
1-c6)烷基；
[0449]rc16
和r
c17
各自独立地是h或(c
1-c6)烷基，
[0450]
或r
c16
和r
c17
与它们所附接的氮原子一起形成包含选自n、o和s的1-2个另外的杂原子的4至7元杂环基环；
[0451]
每个r
c18
在每次出现时独立地是(c
3-c7)碳环基，包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂环基，(c
6-c
10
)芳基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基，其中该碳环基、杂环基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个r
c20
取代；
[0452]
每个r
c19
在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh或cn；
[0453]
或两个r
c19
当在相邻原子上时一起形成(c
6-c
10
)芳基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基环，其中该芳基和杂芳基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh和cn；
[0454]
每个r
c20
在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、氧代、-oh或cn；或
[0455]
或当r
c18
是碳环基或杂环基时，则两个r
c20
当附接到同一碳原子时一起形成＝(o)；
[0456]rc21
是h或(c
1-c6)烷基；
[0457]
每个r
c22
在每次出现时独立地是卤素，(c
1-c6)烷基，(c
1-c6)烷氧基，(c
1-c6)卤代烷基，(c
1-c6)卤代烷氧基，-oh，cn，(c
6-c
10
)芳基，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基，其中该芳基和杂芳基任选地被一个或多个r
c23
取代；
[0458]
每个r
c23
在每次出现时独立地是卤素，(c
1-c6)烷基，(c
1-c6)烷氧基，(c
1-c6)卤代烷基，(c
1-c6)卤代烷氧基，-ch2(och2ch2)noch2ch3，-oh，cn，或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基，其中该杂环基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh、-c(o)r
c24rc25
、-nr
c24
c(o)r
c25
、-nh2、-nh(c
1-c6)烷基和-n((c
1-c6)烷基)2，并且该烷基任选地被-nr
c24rc25
或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基取代，该杂环基任选地被各自独立地选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh、-nh2、-nh(c
1-c6)烷基和-n((c
1-c6)烷基)2；
[0459]rc24
是h、(c
1-c6)烷基或(c
3-c7)碳环基；
[0460]rc25
是h、(c
1-c6)烷基或(c
3-c7)碳环基；并且
[0461]
l
c1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
c1
的*指示与接头(la)的附接点，并且其中r
c2
、r
c6
或r
c8
中的至少一者是-l
c1-。
[0462]
实施例51.如实施例50所述的双官能化合物，其中所述具有式(c)的化合物具有式(c-1)的结构：
[0463][0464]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0465]
实施例52.如实施例50或实施例51所述的双官能化合物，其中
[0466]
x
c1
和x
c2
与它们所附接的碳原子一起形成＝(o)；
[0467]
x
c3
是-ch
2-；
[0468]rc1
是被-or
c10
和一个或多个r
c11
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0469]rc2
是h、(c
1-c6)烷基、-l
c1-或(c
3-c9)碳环基，其中该烷基被一个r
c18
取代，并且该碳环基被一个或多个r
c19
取代；
[0470]rc3
是h或(c
1-c6)烷基；
[0471]rc4
是h或(c
1-c6)烷基；
[0472]
或r
c3
和r
c4
与它们所附接的原子一起形成包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂环基环；
[0473]rc5
是h或(c
1-c6)烷基；
[0474]rc6
是(c
1-c6)烷基或-l
c1-，其中该烷基任选地被各自独立地选自-oh或(c
1-c6)烷氧基的一个或多个取代基取代；
[0475]rc7
是h或(c
1-c6)烷基；
[0476]rc8
是h、(c
1-c6)烷基或-l
c1-；
[0477]rc9
是卤素；
[0478]rc10
是被一个r
c22
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0479]
每个r
c11
在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh或cn；
[0480]rc18
是(c
6-c
10
)芳基；
[0481]
每个r
c19
在每次出现时独立地是卤素、(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、(c
1-c6)卤代烷基、(c
1-c6)卤代烷氧基、-oh或cn；
[0482]rc22
是包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基，其被一个或多个r
c23
取代；
[0483]
每个r
c23
在每次出现时独立地是任选地被-nr
c24rc25
取代的(c
1-c6)烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0484]rc24
是h、(c
1-c6)烷基；
[0485]rc25
是h、(c
1-c6)烷基，并且
[0486]
l
c1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
c1
的*指示与接头(la)的附接点，并且其中r
c2
、r
c6
或r
c8
中的至少一者是-l
c1-。
[0487]
实施例53.如实施例50至52中任一项所述的双官能化合物，其中
[0488]rc1
是被-or
c10
和一个或多个r
c11
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0489]rc2
是(c
1-c6)烷基、-l
c1-或(c
3-c9)碳环基，其中该烷基被一个r
c18
取代，并且该碳环基被一个或多个r
c19
取代；
[0490]rc3
是(c
1-c6)烷基；
[0491]rc4
是h；
[0492]
或r
c3
和r
c4
与它们所附接的原子一起形成包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5至7元杂环基环；
[0493]rc5
是h或(c
1-c6)烷基；
[0494]rc6
是(c
1-c6)烷基或-l
c1-，其中该烷基任选地被各自独立地选自-oh或(c
1-c6)烷氧基的一个或多个取代基取代；
[0495]rc7
是h；
[0496]rc8
是(c
1-c6)烷基或-l
c1-；
[0497]rc9
是卤素；
[0498]rc10
是被一个r
c22
取代的(c
6-c
10
)芳基；
[0499]
每个r
c11
在每次出现时独立地是卤素；
[0500]rc18
是(c
6-c
10
)芳基；
[0501]
每个r
c19
在每次出现时独立地是(c
1-c6)烷基；
[0502]rc22
是包含选自n、o和s的1-3个杂原子的5或6元杂芳基，其被一个或多个r
c23
取代；
[0503]
每个r
c23
在每次出现时独立地是任选地被-nr
c24rc25
取代的(c
1-c6)烷基或包含选自n、o和s的1-3个杂原子的4至7元杂环基；
[0504]rc24
是(c
1-c6)烷基；
[0505]rc25
是c
1-c6)烷基，并且
[0506]
l
c1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
c1
的*指示与接头(la)的附接点，并且其中r
c2
、r
c6
或r
c8
中的至少一者是-l
c1-。
[0507]
实施例54.如实施例50所述的双官能化合物，其中t
l
选自：
[0508]
l
c1
是-(ch2)
p
nh-*，其中l
c1
的*指示与接头(la)的附接点。
[0509]
实施例55.如实施例50至54中任一项所述的双官能化合物，其中t
l
是具有式(c)的化合物或药学上可接受的盐或立体异构体，其选自：
[0510]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0511]
实施例56.具有式(i)或如实施例1至2中任一项所述的双官能化合物，其具有式(ib)的结构：
[0512]rl-l
a-fhr3
l
ꢀꢀꢀꢀ
(ib)
[0513]
其中：
[0514]rl
是结合与受体介导的胞吞作用相关的细胞表面受体的部分；
[0515]
la是接头，
[0516]
并且
[0517]
fhr3
l
是结合fhr3的部分。
[0518]
实施例57.具有式(i)、式(ib)或如实施例1至2中任一项所述的双官能化合物，其中所述结合fhr3的部分是选自以下的化合物：
[0519][0520][0521]
其中l
d1
是-(ch2)
p
nh-*，p是1、2、3、4、5或6，并且其中l
d1
的*指示与接头(la)的附接点。
[0522]
实施例58.如实施例56或实施例57所述的双官能化合物，其中所述结合fhr3的部分是选自以下的化合物或药学上可接受的盐或立体异构体：
[0523][0524][0524]
其中*指示与接头(la)的附接点。
[0525]
b.受体结合部分(r
l
)
[0526]
受体结合部分(r
l
)是结合细胞表面受体的部分，其中细胞表面受体与受体介导的胞吞作用相关。此类细胞表面受体的实例包括但不限于脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)、甘露糖-6-磷酸受体(m6pr)、胰岛素样生长因子2受体、甘露糖受体系统、库普弗细胞受体、巨噬细胞半乳糖凝集素(mgl)、清道夫受体c型凝集素(srcl)、egf受体、fc受体、溶酶体整合膜蛋白受体(limp-2)、转铁蛋白受体、分拣蛋白(sortilin)和诱饵受体(诸如cxcr7、darc、d6和ccx ckr)。
[0527]
脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)
[0528]
脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)是在肝细胞表面表达的c型凝集素，其调节以半乳糖(gal)或n-乙酰半乳糖胺(galnac)糖封端的血浆糖蛋白的水平。asgpr结合以半乳糖(gal)或n-乙酰半乳糖胺(galnac)糖封端的糖蛋白，并通过受体介导的胞吞作用内化，主要在肝细胞基底外侧膜上的被膜小窝中。内化后，配体-受体复合物被转运到内溶酶体区室。钙螯合和随后的内体区室酸化促进配体-受体复合物的解离，并且将受体再循环回到质膜，同时将货物(配体)分选到溶酶体用于降解。
[0529]
鉴于脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)有效辅助将以半乳糖(gal)或n-乙酰半乳糖胺(galnac)糖封端的糖蛋白递送至溶酶体的能力，在本文中利用它来降解细胞外靶分子(诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白)，其中细胞外靶分子与本发明的双官能化合物的(t
l
)基团结合，并且双官能化合物的受体结合部分(r
l
)包含一个或多个半乳糖(gal)基团或一个或多个n-乙酰半乳糖胺(galnac)基团。此类受体结合部分(r
l
)基团与脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)结合，由此将细胞外靶分子递送至溶酶体并经由溶酶体降解而降解。
[0530]
实施例59.具有式(i)或如实施例1至58中任一项所述的双官能化合物，其中所述受体结合部分(r
l
)选自：
[0531]
[0532][0532]
其中r
l
的*指示与接头(la)的附接点。
[0533]
在其他实施例中，本发明的双官能化合物的受体结合部分(r
l
)包含一个或多个半乳糖(gal)基团或一个或多个n-乙酰半乳糖胺(galnac)基团，其中该一个或多个半乳糖(gal)基团或一个或多个n-乙酰半乳糖胺(galnac)基团包含桥接缩酮部分。
[0534]
实施例60.具有式(i)或如实施例1至58中任一项所述的双官能化合物，其中所述受体结合部分(r
l
)选自：
[0535][0535]
其中r
l
的*指示与接头(la)的附接点。
[0536]
甘露糖-6-磷酸受体(m6pr)-也称为胰岛素样生长因子2受体
[0537]
溶酶体是具有特征性酸性ph的膜界定细胞器，其负责细胞中许多不同底物的降解。这种分解代谢过程通过细胞器内所含的超过60种可溶性酶进行，其中许多属于已知为糖苷酶、蛋白酶、磷酸酶、硫酸酯酶和脂肪酶的广泛类别的水解酶。这些溶酶体水解酶最初在粗面内质网中合成，并通过高尔基体特异性转运至反式高尔基体网络，然后通过转运囊泡递送至溶酶体。
[0538]
为了确保溶酶体水解酶被浓缩并递送至溶酶体，用独特的标志物标记溶酶体水解酶：甘露糖-6磷酸(m6p)基团。当溶酶体水解酶的n-连接寡糖移动通过顺式高尔基体网络时，m6p基团被专门添加到溶酶体水解酶的n-连接寡糖中。然后m6p基团被存在于反式高尔基体网络中的两个独立的跨膜m6p受体(mpr)识别：阳离子非依赖性m6p受体(ci-mpr，也称为胰岛素样生长因子2受体(igf2r))和/或阳离子依赖性m6p受体(cd-mpr)。在反式高尔基体网络中，m6p受体在ph 6.5-6.7下结合标记的溶酶体水解酶上的m6p基团，然后帮助将水解酶包装到转运囊泡中，用于将它们递送至晚期内体。阳离子非依赖性m6p受体(ci-mpr，也称为胰岛素样生长因子2受体(igf2r))也存在于细胞表面，在此它可结合已逃离细胞的溶酶体酶，将它们递送至晚期内体。一旦在通常为ph 6的内体内部，溶酶体水解酶从mpr解离，
并且在内体成熟为溶酶体期间，ph降至ph 5，在此水解酶开始消化从早期内体递送的胞吞物质。随后，mpr从内体再循环至细胞表面，然后回到高尔基复合体。
[0539]
鉴于m6p受体有效辅助将m6p标记的蛋白递送至溶酶体，在本文中利用它来降解细胞外靶分子(诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白)，其中细胞外靶分子与本发明的双官能化合物的(t
l
)基团结合，并且双官能化合物的受体结合部分(r
l
)包含一个或多个对m6p受体的高亲和力配体。此类受体结合部分(r
l
)基团与m6p受体结合，由此将细胞外靶分子递送至溶酶体并经由溶酶体降解而降解。
[0540]
实施例61.具有式(i)或如实施例1至58中任一项所述的双官能化合物，其中所述受体结合部分(r
l
)选自：
[0541]
[0542][0542]
其中r
l
的*指示与接头(la)的附接点。
[0543]
c.接头(la)
[0544]
本发明的双官能化合物的接头部分(la)是包含一个或多个选自以下的接头组分的不可切割接头：
[0545]
a)亚烷基基团：-(ch2)
n-，其可以是线性的或支链的(其中在此情况下，n是1-18)；
[0546]
b)亚烯基基团；
[0547]
c)亚炔基基团；
[0548]
d)烯基基团；
[0549]
e)炔基基团；
[0550]
f)乙二醇单元：-och2ch2或-ch2ch2o；
[0551]
g)聚乙二醇单元：(-ch2ch2o-)
x
(其中在这种情况下x是2-20)；
[0552]
h)-o；
[0553]
i)-s；
[0554]
j)羰基：-c(＝o)；
[0555]
k)酯：-c(＝o)-o-或-o-c(＝o)；
[0556]
l)碳酸酯：-oc(＝o)o；
[0557]
m)胺：-nh；
[0558]
n)叔胺
[0559]
o)酰胺：-c(＝o)-nh-、-nh-c(＝o)-或-c(＝o)n(c
1-6
烷基)；
[0560]
p)氨基甲酸酯：-oc(＝o)nh-或-nhc(＝o)o；
[0561]
q)尿素：-nhc(＝o)nh；
[0562]
r)磺胺：-s(o)2nh-或-nhs(o)2；
[0563]
s)醚：-ch2o-或-och2；
[0564]
t)被一个或多个独立地选自羧基、磺酸酯、羟基、胺、氨基酸、糖、磷酸和膦酸酯的基团取代的亚烷基；
[0565]
u)被一个或多个独立地选自羧基、磺酸酯、羟基、胺、氨基酸、糖、磷酸和膦酸酯的基团取代的亚烯基；
[0566]
v)被一个或多个独立地选自羧基、磺酸酯、羟基、胺、氨基酸、糖、磷酸和膦酸酯的基团取代的亚炔基；
[0567]
w)c
1-c
10
亚烷基，其中一个或多个亚甲基被一个或多个-s-、-nh-或-o-部分置换；以及
[0568]
x)具有两个可用的附接点的环系统，例如选自如下的二价环：苯基(包括1,2-、1,3-和1,4-二取代的苯基)、c
5-c6杂芳基、c
3-c8环烷基(包括1,1-二取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基和1,4-二取代的环己基)以及c
4-c8杂环烷基。
[0569]
另外，接头(la)的接头组分可以是易于通过两个反应性基团之间的反应形成的化学部分。此类化学部分的非限制性实例在表1中给出。
[0570]
表1
[0571]
[0572]
[0573]
[0574]
[0575][0576]
其中：表1中的r
32
是h、c
1-4
烷基、苯基、嘧啶或吡啶；表1中的r
35
是h、c
1-6
烷基、苯基或被1至3个-oh基团取代的c
1-4
烷基；表1中的每个r7独立地选自h、c
1-6
烷基、氟、被-c(＝o)oh取代的苄氧基、被-c(＝o)oh取代的苄基、被-c(＝o)oh取代的c
1-4
烷氧基和被-c(＝o)oh取代的c
1-4
烷基；表1中的r
37
独立地选自h、苯基和吡啶；并且表1中的q是0、1、2或3。
[0577]
此外，接头(la)的接头组分可以是下表2中给出的基团。
[0578]
表2
[0579]
[0580][0581]
实施例62.具有式(i)或如实施例1至61中任一项所述的双官能化合物，其中所述接头(la)选自：
[0582]
*-(ch2)nc(＝o)nhnhc(＝o)(ch2)non＝ch2x1c(＝o)-**；*-(ch2)nx3c(＝o)-**；*-(ch2)nc(＝o)-**；
[0583]
*-(ch2)nc(＝o)nhnhc(＝o)(ch2)non＝ch2x1c(＝o)nh(ch2)nch(c＝(o)nh2)-**；*-(ch2)nx3c(＝o)nh(ch2)nch(c＝(o)nh2)-**；*-(ch2)nc(＝o)nh(ch2)nch(c＝(o)nh2)-**；
[0584]
*-((ch2)no)
t
(ch2)mc(＝o)-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；*-(ch2)nc(＝o)nh((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；-(ch2)
n-；*-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)
m-**；*-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)
m-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)nnhc(＝o)(ch2)
m-**；*-((ch2)no)
t
ch2)mc(＝o)nh(ch2)
m-**；*((ch2)no)
t
(ch2)nnhc(＝o)(ch2)
m-**；*-(ch2)no(ch2)
m-**；*-(ch2)nnh(ch2)
n-**；*-(ch2)nnh(ch2)mc(＝o)-**；*-(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)nc(＝
o)nh(ch2)
m-**；*-(ch2)mnhc(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；*-(ch2)nc(＝o)nh(ch2)
m-**；*-(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；*-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)no(ch2)
m-**；*-(ch2)nnh(ch2)
m-**；*-((ch2)no)
t
ch2)nc(＝o)nh(ch2)
m-**；*-(ch2)nnhc(＝o(ch2)nx3(ch2)
m-**；-c(＝o)-；*-c(＝o)(ch2)nc(＝o)-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)mc(＝o)-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)mx3(ch2)no(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)mc(＝o)-**；*-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；*-c(＝o)nhnhc(＝o)(ch2)non＝ch2x1c(＝o)nh(ch2)nch(c＝(o)nh2)-**；*-x3c(＝o)nh(ch2)nch(c＝(o)nh2)-**；*-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nhnhc(＝o)(ch2)non＝ch2x1c(＝o)-**；*-c(＝o)(ch2)nx3c(＝o)-**；*-c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)
m-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)nnhc(＝o)(ch2)
m-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
ch2)mc(＝o)nh(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)no(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)
n-**；
[0585]
*-c(＝o)nh((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)nnh(ch2)
n-**；*-c(＝o)(ch2)nnh(ch2)mc(＝o)-**；*-c(＝o)(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)no(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)nnh(ch2)
m-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
ch2)nc(＝o)nh(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)nnhc(＝o(ch2)nx3(ch2)
m-**；
[0586]
*-c(＝o)nh(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-c(＝o)nh(ch2)nnhc(＝o)(ch2)
m-**；*-c(＝o)nh(ch2)nnhc(＝o)(ch2)no(ch2)
m-**；*-c(＝o)nh(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nx3(ch2)
m-**；
[0587]
*-c(＝o)nh(ch2)nnhc(＝o)-**；*-c(＝o)nh((ch2)no)
t
(ch2)nx3(ch2)
m-**；
[0588]
*-c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nx3(ch2)
m-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)nc(＝o)nh(ch2)
m-**；*-c(＝o)(ch2)mnhc(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)
m-**或*-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)
m-**；
[0589]
其中
[0590]
x1是并且
[0591]
x3是其中x3的*指示附接点朝向r
l
并且x3的**指示附接点朝向la，
[0592]
并且其中la的*指示与r
l
的附接点，并且la的**指示与t
l
的附接点。
[0593]
实施例63.具有式(i)或如实施例1至62中任一项所述的双官能化合物，其中所述接头(la)是：
[0594]
*-(ch2)nc(＝o)nhnhc(＝o)(ch2)non＝ch2x1c(＝o)-**；*-(ch2)nx3c(＝o)-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)mc(＝o)-**；*-(ch2)nc(＝o)-**；
[0595]
*-(ch2)nc(＝o)nhnhc(＝o)(ch2)non＝ch2x1c(＝o)nh(ch2)nch(c＝(o)nh2)-**；*-(ch2)nx3c(＝o)nh(ch2)nch(c＝(o)nh2)-**；-c(＝o)-；
[0596]
*-c(＝o)(ch2)nc(＝o)-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)mc(＝o)-**；*-((ch2)no)
t
(ch2)mx3(ch2)no(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)mc(＝o)-**；*-c(＝o)((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；或*-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh((ch2)no)
t
(ch2)
m-**；
[0597]
其中
[0598]
x1是并且
[0599]
x3是其中x3的*指示附接点朝向r
l
并且x3的**指示附接点朝向la，
[0600]
并且其中la的*指示与r
l
的附接点，并且la的**指示与t
l
的附接点。
[0601]
实施例64.具有式(i)或式(ia)的双官能化合物，其选自：
[0602]
[0603]
[0604]
[0605]
[0606]
[0607][0608]
实施例65.具有式(i)或式(ib)的双官能化合物，其选自：
[0609]
[0610][0611]
制备具有式(i)的化合物的方法
[0612]
为了说明的目的，本文所描绘的一般反应方案提供了用于合成本发明的化合物的潜在途径。有关各个反应步骤的详细说明，请参见下面的实例部分。另外，根据本披露，可以使用本领域技术人员熟知的常规化学进一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。在以下一般方案中，r
l
、la和t
l
如本文所定义。
[0613]
例如，具有式(i)的化合物的一般合成如以下方案i所示，其中受体配体(r
l
)具有附接的反应性基团(例如rg1)并且靶配体附接到具有反应性侧基(例如rg2)的接头部分(la′
)，该反应性侧基能够与受体配体上的反应性基团反应，并且由此形成将受体配体与靶配体偶联的接头(la)，从而形成具有式(i)的化合物。
[0614]
方案i
[0615]rl-rg1 rg
2-la′‑
t
l
→rl-l
a-t
l
[0616]
在方案i中，rg1是来自表1的反应性基团1并且rg2是来自表1的反应性基团1，其中相应基团的反应产物(如表1中所见)变成接头la的接头组分。
[0617]
具有式(i)的化合物的另一种一般合成如以下方案ii所示，其中受体配体(r
l
)附接到具有反应性侧基(例如rg1)的接头部分(la′
)并且靶配体具有附接的反应性基团，该反应性基团能够与离开受体配体的反应性基团反应，并且由此形成将受体配体与靶配体偶联的接头(la)，从而形成具有式(i)的化合物。
[0618]
方案ii
[0619]rl-la′‑
rg1 rg
2-t
l
→rl-l
a-t
l
[0620]
在方案ii中，rg1是来自表1的反应性基团1并且rg2是来自表1的反应性基团1，其中相应基团的反应产物(如表1中所见)变成接头la的接头组分。
[0621]
具有式(i)的化合物的另一种一般合成如以下方案iii所示，其中受体配体(r
l
)附接到具有反应性侧基(例如rg1)的接头部分(l
a”)并且靶配体附接到具有反应性侧基(例如rg2)的接头部分(la′
)，该反应性侧基能够与离开受体配体的反应性基团反应，并且由此形成将受体配体与靶配体偶联的接头(la)，从而形成具有式(i)的化合物。
[0622]
方案iii
[0623]rl-la″‑
rg1 rg
2-la′‑
t
l
→rl-l
a-t
l
[0624]
在方案ii中，rg1是来自表1的反应性基团1并且rg2是来自表1的反应性基团1，其中相应基团的反应产物(如表1中所见)变成接头la的接头组分。
[0625]
具有式(i)的化合物的另一种一般合成如以下方案iv所示，其中受体配体(r
l
)具有附接的反应性基团(例如rg1)，该反应性基团能够与接头部分(l
a”)上的反应性基团(例如rg2)反应，由此将接头部分(l
a”)附接到受体配体(r
l
)。接头部分(l
a”)还具有受保护的反应性基团(例如rg
1-prot)，其在脱保护后能够与靶配体上的反应性基团(例如rg2)反应，由此将受体配体与靶配体偶联并形成具有式(i)的化合物。
[0626]
方案iv
[0627][0628]
在方案iv中，rg1是来自表1的反应性基团1并且rg2是来自表1的反应性基团1，其中相应基团的反应产物(如表1中所见)变成接头la的接头组分。
[0629]
具有式(i)的化合物的另一种一般合成如以下方案v所示，其中靶配体(t
l
)具有附接的反应性基团(例如rg1)，该反应性基团能够与接头部分(l
a”)上的反应性基团(例如rg2)反应，由此将接头部分(l
a”)附接到靶配体(t
l
)。接头部分(l
a”)还具有受保护的反应性基团(例如rg
1-prot)，其在脱保护后能够与受体配体上的反应性基团(例如rg2)反应，由此将受体配体与靶配体偶联并形成具有式(i)的化合物。
[0630]
方案v
[0631][0632]
在方案v中，rg1是来自表1的反应性基团1并且rg2是来自表1的反应性基团1，其中相应基团的反应产物(如表1中所见)变成接头la的接头组分。
[0633]
药物组合物和施用途径
[0634]
对于本发明的双官能化合物的治疗用途，单独或作为药物组合物的一部分施用此类化合物。此外，对于本发明的双官能化合物的治疗用途，以治疗有效量单独或作为药物组合物的一部分施用此类化合物。因此，在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含本发明的双官能化合物和药学上可接受的载体。在另外的实施例中，组合物包含至少两种药学上可接受的载体，例如本文所述的那些。
[0635]
本发明的药物组合物可使用包括将本发明的双官能化合物与一种或多种药学上可接受的载体混合的方法来制备。例如，本发明的药物组合物通过混合、造粒和/或包衣使用游离形式的本发明的双官能化合物结合至少一种药学上可接受的载体进行制造。
[0636]
本发明的药物组合物或组合针对约50-70kg的受试者可以是约0.1-100mg活性成分的单位剂量。化合物、药物组合物或其组合的治疗有效剂量取决于治疗中的受试者的物种、体重、年龄及个体情况、障碍或疾病或其严重程度。
[0637]
使用有利的哺乳动物，例如小鼠、大鼠、狗、猴或其分离的器官、组织和制剂，可以在体外和体内试验中证明上述剂量特性。本发明的化合物可以溶液(例如水溶液)的形式体外应用，以及在肠内、肠胃外、皮下、静脉内例如作为悬浮液或在水溶液中体内应用。体外剂量可以在约10-12
摩尔浓度和10-6
摩尔浓度之间。体内治疗有效量的范围可在约0.01-10mg/kg之间。
[0638]
本发明的化合物的活性可通过本文实例中所述的体外和体内方法来评估。
[0639]
本发明的双官能化合物可以是配制用于特定肠内或肠胃外施用途径的药物组合物的活性成分。
[0640]
口服施用剂型
[0641]
本发明的药物组合物可作为离散剂型经口给予，其中这些剂型包括(但不限于)胶囊、明胶胶囊、胶囊型片剂、片剂、咀嚼片剂、锭剂、可分散粉末、颗粒、糖浆、调味糖浆、在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液、可食用泡沫或搅打泡沫及水包油液乳胶或油包水液乳胶。
[0642]
因此，对于口服施用，包含有效量的本发明的化合物的本发明的药物组合物可以固体形式(包括但不限于胶囊、明胶胶囊、硬或软胶囊、片剂、可咀嚼片剂、锭剂、胶囊型片剂、丸剂、颗粒或可分散粉末)或以液体形式(包括但不限于溶液、水性或油性悬浮液、糖浆、酏剂、泡沫、搅打泡沫或乳剂)制成。可以对药物组合物进行常规的制药操作，如灭菌，和/或可以使其含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及辅助剂(如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等)。
[0643]
将旨在用于口服使用的组合物根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方
法来制备，并且为了提供药学上精致的并且适口的制剂，此类组合物可以包含一种或多种选自下组的试剂，该组由以下组成：甜味剂、调味剂、着色剂以及防腐剂。
[0644]
通常，药物组合物是包含活性成分及以下中的一种或多种的片剂或明胶胶囊：
[0645]
a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
[0646]
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或
[0647]
聚乙二醇；对于片剂，还包含
[0648]
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、
[0649]
甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果希望的话，还包含
[0650]
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐，或泡腾
[0651]
混合物；以及
[0652]
e)吸附剂、着色剂、调味剂及甜味剂。
[0653]
片剂可含有活性成分，其与无毒的药学上可接受的赋形剂混合，所述赋形剂适合生产片剂。这些赋形剂是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂及崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如，淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。片剂是未包衣的，或者根据已知技术进行包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长的时间段内提供持久的作用。例如，可采用时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的配制品可呈现为硬质明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈现为软质明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
[0654]
肠胃外剂型
[0655]
在某些实施例中，本发明的药物组合物是通过各种途径肠胃外施用，包括但不限于皮下、静脉内(包括推注)、肌内和玻璃体内施用。
[0656]
某些可注射组合物是包含本发明的双官能化合物的等渗水溶液或悬浮液。此类组合物可含有赋形剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此类组合物可根据本领域已知的常规方法制备，并且此类组合物可被灭菌。
[0657]
组合治疗
[0658]
本发明的化合物及本文提供的药物组合物单独或与一种或多种另外的治疗剂组合施用。
[0659]
在某些实施例中，本发明的药物组合物任选地进一步包含一种或多种另外的治疗剂。替代性地，可将本发明的双官能化合物与一种或多种其他治疗剂组合施用于有需要的患者。
[0660]
本发明的双官能化合物可与一种或多种其他治疗剂同时、或在其之前或之后施用。本发明的双官能化合物可以通过与其他药剂相同或不同的施用途径分开施用，或在相同的药物组合物中一起施用。治疗剂是例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，当将该治疗剂与本发明的双官能化合物组合施用于患者时，该治疗剂具有治疗活性或增强治疗活性。
[0661]
在一个实施例中，本发明提供了包含本发明的双官能化合物和至少一种其他治疗
剂的产品，其作为组合制剂用于在疗法中同时、分开或顺序使用，其中该疗法是通过对细胞外靶分子的靶向溶酶体降解来治疗如本文所述的疾病或病症，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞或质膜蛋白。作为组合制剂提供的产品包括组合物，该组合物在同一药物组合物中共同包含本发明的双官能化合物和其他治疗剂，或以单独的形式(例如，以试剂盒的形式)包含本发明的化合物和其他治疗剂。
[0662]
在一个实施例中，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含本发明的双官能化合物和另一种治疗剂。任选地，该药物组合物可以包含如上所述的药学上可接受的载体。
[0663]
在一个实施例中，本发明提供了试剂盒，该试剂盒包含两种或更多种分开的药物组合物，其中至少一种药物组合物含有本发明的双官能化合物。在一个实施例中，试剂盒包含用于分开保留所述组合物的装置(例如容器、分隔瓶或分隔箔包)。这种试剂盒的实例是泡罩包装，如通常用于包装片剂、胶囊及类似物的泡罩包装。
[0664]
本发明的试剂盒可用于施用不同剂型(例如，口服及肠胃外)，用于以不同剂量间隔施用单独组合物或用于相对彼此滴定单独组合物。为有助在依从性，本发明的试剂盒通常包含用于施用的用法说明书。
[0665]
在本发明的组合疗法中，本发明的双官能化合物和其他治疗剂可以由相同或不同的制造商制造和/或配制。此外，可以将本发明的双官能化合物和其他治疗剂一起形成组合疗法：(i)在将组合产物释放给医师之前(例如，在包含本发明的化合物和其他治疗剂的试剂盒的情况下)；(ii)在施用前不久由医师本人(或在医师指导下)进行；(iii)在患者自身中，例如在顺序施用本发明的化合物和其他治疗剂期间。
[0666]
药理学及效用
[0667]
本发明的双官能化合物基于通过溶酶体降解抑制细胞外靶分子的水平而表现出有价值的药理学特性，并且因此被指示用于疗法或用作研究化学品(例如作为工具化合物)。
[0668]
常规治疗剂，例如蛋白定向治疗剂，通过阻断蛋白功能(例如通过抑制酶和受体)或通过募集免疫效应物(如在许多单克隆抗体药物的情况下)来治疗疾病。通常，由于常规药物/靶标相互作用的可逆性质，此类常规疗法的功效需要超化学计量的药物浓度来维持抑制，其可随着药物浓度降低而随时间损失。然而，本文所述的使用本发明的双官能化合物的方法可在化学计量或亚化学计量浓度下显示出改善的功效，其中功效受靶分子(例如蛋白)的再合成而非药物浓度的限制。
[0669]
因此，本发明提供了在通过细胞外靶分子的靶向溶酶体降解的疗法中使用的双官能化合物，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞或质膜蛋白。在某些实施例中，本发明还提供了在通过细胞外靶分子的靶向脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)介导的溶酶体降解的疗法中使用的双官能化合物，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白。在某些实施例中，本发明还提供了在通过细胞外靶分子的靶向甘露糖-6-磷酸受体(m6pr)介导的溶酶体降解的疗法中使用的双官能化合物，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋
白、外来体、病毒、细胞和质膜蛋白。在某些实施例中，此类疗法包括治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒或血管炎。在某些实施例中，此类疗法包括治疗高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒或川崎病。在其他实施例中，此类疗法包括治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征或肝细胞癌(hcc)。
[0670]
此外，本发明提供了在疗法中使用的双官能化合物，其中此类疗法包括治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒或血管炎。在某些实施例中，此类疗法包括治疗高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒或川崎病。在其他实施例中，此类疗法包括治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征或肝细胞癌(hcc)。
[0671]
本发明还提供了本发明的双官能化合物在疗法中使用的用途，其中此类疗法包括治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒或血管炎。在某些实施例中，此类疗法包括治疗高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒或川崎病。在其他实施例中，此类疗法包括治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征或肝细胞癌(hcc)。
[0672]
另一方面，本发明提供了用于治疗与细胞外靶分子水平升高相关的疾病的方法，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外泌体、病毒、细胞和质膜蛋白，其中该方法使用此类细胞外靶分子的靶向溶酶体降解。在某些实施例中，本发明还提供了用于治疗与细胞外靶分子水平升高相关的疾病的方法，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外泌体、病毒、细胞和质膜蛋白，其中该方法使用细胞外靶分子的靶向脱唾液酸糖蛋白受体(asgpr)介导的溶酶体降解。在某些实施例中，本发明还提供了用于治疗与细胞外靶分子水平升高相关的疾病的方法，这些细胞外靶分子诸如生长因子、细胞因子、趋化因子、激素、神经递质、衣壳、可溶性受体、
细胞外分泌蛋白、抗体、脂蛋白、外泌体、病毒、细胞和质膜蛋白，其中该方法使用细胞外靶分子的靶向甘露糖-6-磷酸受体(m6pr)介导的溶酶体降解。这些方法可用于治疗通常通过治疗性单采术治疗的多种疾病、病症或临床状况，诸如心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒和血管炎。例如，此类疾病包括但不限于高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。这些方法也可用于治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0673]
在另一方面，本发明提供了治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒和血管炎的方法，其中该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的双官能化合物。在某些实施例中，此类疾病包括但不限于高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。作为进一步的实施例，此类疾病包括肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0674]
在另一方面，本发明提供了治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒和血管炎的方法，其中该方法包括向有需要的受试者施用本发明的双官能化合物。在某些实施例中，此类疾病包括但不限于高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。作为进一步的实施例，此类疾病包括肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0675]
在另一方面，本发明提供了本发明的双官能化合物在制造用于治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒和血管炎的药物中的用途，其中该方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的双官能化合物。在某些实施例中，此类疾病包括但不限于高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、
恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。作为进一步的实施例，此类疾病包括肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0676]
本发明还提供了体内治疗性血浆置换方法，其中该方法包括向受试者施用本发明的双官能化合物。本发明还提供了进行体内治疗性血浆置换的方法，其中该方法包括向受试者施用本发明的双官能化合物。
[0677]
本发明还提供了用于治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒或血管炎的体内治疗性血浆置换方法，其中该方法包括向受试者施用本发明的双官能化合物。在某些实施例中，此类疾病是高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。
[0678]
本发明还提供了体内治疗性血浆置换方法，其中该方法包括向受试者施用具有式(i)的双官能化合物。本发明还提供了进行体内治疗性血浆置换的方法，其中该方法包括向受试者施用本发明的双官能化合物。
[0679]
本发明还提供了用于治疗心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、自身免疫疾病、神经疾病、血液疾病、皮肤疾病、药物中毒或血管炎的体内治疗性血浆置换方法，其中该方法包括向受试者施用具有式(i)的双官能化合物。在某些实施例中，此类疾病是高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、动脉硬化、闭塞性动脉硬化、暴发性肝功能衰竭、术后肝功能衰竭、急性肝衰竭、丙型肝炎、乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝同种异体移植、局灶性肾小球硬化、肾同种异体移植、恶性类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格-巴二氏综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、多发性硬化、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、溶血性尿毒综合征、妊娠血型不合、血友病、天疱疮、大疱性类天疱疮、中毒性表皮坏死、史蒂文-约翰逊综合征、药物中毒和川崎病。
[0680]
本发明的一个方面是双官能分子，其利用受体介导的胞吞作用从血浆中消除前蛋白转化酶枯草溶菌素/kexin 9型(pcsk9)或降低血浆中pcsk9的水平。
[0681]
pcsk9通过调节肝低密度脂蛋白受体(ldlr)，对血浆低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平具有显著影响，这是从循环系统中除去胆固醇的主要途径。pcsk9结合ldlr并将其引导至溶酶体降解，从而增加血浆ldl-c水平，并进而增加冠心病风险。(maxwell k.n.,proc.natl.acad.sci.[美国科学院院刊],101,2004,7100-7105；park,s.w.,j.biol.chem.[生物化学杂志]279,2004,50630-50638；lagace t.a.等人j.clin.invest.[临床研究杂志]2006,116(11):2995-3005)。小鼠或人pcsk9在小鼠中的过表达已显示出升高总ldl-c水平并大幅降低肝ldlr蛋白，而未观察到对mrna、srebp或srebp蛋白核质比的影响。(maxwell k.n.,proc.natl.acad.sci.[美国科学院院刊]101,2004,7100-7105)。此外，在小鼠模型中
引起pcsk9功能丧失的pcsk9突变也显示出降低总水平和ldl-c水平。(cohen,j.c.等人,n.engl.j.med.[新英格兰医学杂志],354,2006,1264-1272)。因此，表明pcsk9的调节导致ldlr蛋白水平降低。
[0682]
此外，pcsk9的基因缺失也已在小鼠中进行。pcsk9敲除小鼠显示血浆胆固醇水平降低约50％，并且对他汀类降低血浆胆固醇的敏感性增强(rashid.s.等人,(2005)proc natl acad sci[美国科学院院刊]102:5374-5379)。人遗传数据强烈支持pcsk9在ldl平衡中的作用。pcsk9与血浆ldl-c水平之间的联系首先是通过在常染色体显性家族性高胆固醇血症患者中发现pcsk9错义突变而建立的(abifadel,m.等人,nature genetics[自然-遗传学],2003,34:154-156)。携带pcsk9功能获得性等位基因的患者具有增加的血浆ldl-c水平和过早的冠心病，而具有pcsk9功能丧失性等位基因的患者具有显著降低的血浆ldl-c，并且被保护免于冠心病。
[0683]
pcsk9在脂蛋白(a)(lp(a))代谢中也起作用。lp(a)是一种促动脉粥样硬化的脂蛋白，由与apolp(a)共价连接的ldl颗粒组成。人基因研究表明，lp(a)与冠心病风险有因果关系。已显示pcsk9治疗性抗体可显著降低高胆固醇血症患者的lp(a)水平。(desai,n.r.等人,circulation.[循环]2013；128(9):962-969；lambert,g.等人,clinical science[临床科学],2017,131,261-268)。与安慰剂相比，用针对pcsk9的单克隆抗体治疗的、接受他汀类疗法的患者显示出lp(a)水平降低高达32％。(desai n.r.等人,circulation.[循环]2013；128(9):962-969)。
[0684]
pcsk9除了具有心血管作用外，在脓毒症中也起着重要作用，脓毒症是由机体对感染的应答引起的危及生命的疾病。脓毒症小鼠中pcsk9的过表达已显示出通过增加炎症而加重脓毒症，而对pcsk9的抑制已显示降低死亡率。(dwivedi,d.j.等人,shock[休克杂志],2016,46(6),672
–
680)。此外，在人hepg2细胞中进行的流式细胞术研究表明，pcsk9通过ldl依赖性机制通过调节ldlr介导的脂磷壁酸(lta)和lps的细菌脂质摄取，来负调节肝细胞对革兰氏阴性脂多糖(lps)的摄取。(grin,p.m.等人,nature[自然],2018,8(1):10496)因此，抑制pcsk9具有通过降低机体对感染的免疫应答来治疗脓毒症的潜力。
[0685]
动脉粥样硬化性心血管疾病是全世界死亡率的主要原因，在2015年估计导致7.4百万全球性死亡。ldl是血流中胆固醇的主要载体，是最广泛研究的与ascvd相关的可修改风险因素[ference ba等人2017]。前瞻性队列研究、孟德尔随机化研究和随机临床试验证明了ldl胆固醇绝对暴露与ascvd风险之间的对数-线性关联[baigent c等人2005，ference ba等人2017]。
[0686]
pcsk9是692个氨基酸的丝氨酸蛋白酶，其经由其对肝ldlr受体的调节对ldl-c水平具有显著影响，这是从循环中去除胆固醇的主要途径[brown ms和goldstein jl 1986]。pcsk9结合ldlr并将其引导至溶酶体降解，从而增加血浆ldl-c水平，并进而增加ascvd风险。pcsk9具有出色的靶标验证。相对于同窝出生的对照，缺乏pcsk9的小鼠具有降低的血浆胆固醇和增加的肝ldlr表达。其中pcsk9已在肝脏中选择性失活的小鼠在血液中没有可检测的pcsk9，表明肝脏是循环pcsk9的主要来源[zaid等人,2008]。携带pcsk9功能获得性等位基因的患者具有增加的血浆ldl-c水平和过早的ascvd，而具有pcsk9功能丧失性等位基因的患者具有显著降低的血浆ldl-c，并且被保护免于ascvd[cohen j等人2006]。因此，对鉴定模拟pcsk9功能丧失的新型疗法存在极大兴趣。
[0687]
使用pcsk9阻断抗体的临床研究已表明，在健康志愿者和高胆固醇血症患者中，在有和没有他汀类药物的情况下，ldl显著降低[banerjee等人,2012；dias等人,2012；roth等人,2012；stein等人,2012；sullivan等人,2012]。他汀类药物增加pcsk9水平，这限制了剂量递增的效用[careskey等人,2008；welder等人,2010]。来自用英利西朗(inclisiran)进行的若干临床研究的数据表明，经由抑制血浆pcsk9在肝细胞中的蛋白合成来使其减少显著降低循环ldl-c水平[fitzgerald等人,2017；ray等人,2017；nishikido和ray,2018；ray等人,2019]。
[0688]
本发明涉及能够降低血浆pcsk9水平或消除在血浆中循环的pcsk9的双官能化合物和组合物。本披露的特征在于通过向有需要的患者施用治疗有效量的具有式(ia)的双官能化合物来治疗、预防或改善其中pcsk9起作用的疾病或障碍的方法。本发明的方法可用于通过降低血浆pcsk9水平或消除在血浆中循环的pcsk9来治疗多种pcsk9依赖性疾病和障碍。降低血浆pcsk9水平或消除在血浆中循环的pcsk9提供了治疗、预防或改善疾病的新型方法，这些疾病包括但不限于高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病(包括主动脉疾病和脑血管疾病)、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、trl升高、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤。
[0689]
本发明的具有式(ia)的双官能化合物通过降低血浆pcsk9水平或消除在血浆中循环的pcsk9在治疗高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、trl升高(例如vldl和/或乳糜微粒升高)、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤方面具有实用性。
[0690]
例如，本发明的具有式(ia)的双官能化合物结合pcsk9并经由受体介导的胞吞作用引导其消除，从而降低血浆pcsk9水平或消除在血浆中循环的pcsk9。因此，pcsk9不能结合低密度脂蛋白受体(ldlr)或任何其他靶受体，从而导致细胞表面上存在更多ldlr以从细胞外液中去除ldl颗粒。因此，降低血浆pcsk9水平或消除在血浆中循环的pcsk9可降低血液ldl-颗粒浓度。
[0691]
因此，本发明的具有式(ia)的双官能化合物因此可潜在地用于治疗、预防、改善或延迟pcsk9介导的疾病或障碍、或其中pcsk9起作用的疾病或障碍以及受益于血浆pcsk9水平降低或在血浆中循环的pcsk9消除的病症、疾病和障碍的进展。此类疾病和障碍包括选自以下的疾病或障碍：高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、trl升高(例如vldl和/或乳糜微粒升高)、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤。
[0692]
此外，本发明的具有式(ia)的双官能化合物因此可潜在地用于治疗、预防、改善或延迟需要降低血浆pcsk9水平或消除在血浆中循环的pcsk9的疾病或障碍的进展。此类疾病和障碍包括选自以下的疾病或障碍：高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症、谷固醇血症、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病、外周血管疾病、外周动脉疾病、血管炎症、lp(a)升高、ldl升高、trl升高(例如vldl和/或乳糜微粒升高)、甘油三酯升高、脓毒症和黄色瘤。
[0693]
本发明的另一方面是利用受体介导的胞吞作用从血浆中消除或降低补体因子h相关蛋白3(fhr3)水平的双官能分子。
[0694]
补体介导的免疫应答由许多内源产生的蛋白紧密调节，以调节活性并区分健康的自身(非激活)和损伤的或非自身的致病性激活细胞。这些补体控制蛋白的范围从细胞表面
结合(即cr1、mcp、daf)到循环蛋白(即因子h和c4bp)，这些循环蛋白通过与宿主自身表面上的多糖诸如糖胺聚糖结合而募集到自身表面以灭活补体(mol immuno[分子免疫学]47(13):2187-2197)。补体调节受到严格控制以维持稳态，并且其失调和缺陷导致其靶向宿主细胞，这与许多疾病有关。
[0695]
因子h(fh)是替代的补体旁路激活的主要负调节物，属于还包括五个认为由非等位基因同源重组和基因座间基因转换产生的其他相关家族成员的家族：补体因子h相关蛋白1(fhr1)、补体因子h相关蛋白2(fhr2)、补体因子h相关蛋白3(fhr3)、具有同种型4a和4b的补体因子h相关蛋白4(fhr4a和fhr4b)以及补体因子h相关蛋白5(fhr5)。
[0696]
由于因子h在补体调节中发挥的核心作用，异常fh活性引起许多临床暗示。因子h的功能丧失性突变增加了对肾脏疾病、非典型溶血性尿毒综合征(ahus)和致密物沉积病(ddd)的易感性，而补体因子h的多态性变异与重要的人类疾病包括年龄相关性黄斑变性(amd)和脑膜炎球菌脓毒症强烈相关(clin exp immunol[临床与实验免疫学]151(2):210-230；immunobiology[免疫生物学]217(11):1034-1046)。
[0697]
与因子h不同，fhr3缺乏补体失活所必需的补体调节结构域，并且还与因子h竞争，从而导致补体过度激活。因此，本发明提供了在调节补体因子h-蛋白、特别是fhr3的浓度以去除因子h的竞争剂并由此恢复因子h介导的调节以治疗由过度补体激活引起的障碍中使用的双官能化合物。
[0698]
本发明还涉及能够降低血浆fhr3水平或消除在血浆中循环的fhr3的双官能化合物和组合物。本披露的特征在于通过向有需要的患者施用治疗有效量的具有式(ib)的双官能化合物来治疗、预防或改善与fhr3相关的疾病或障碍的方法。本发明的方法可用于通过降低血浆fhr3水平或消除在血浆中循环的fhr3来治疗多种与fhr3相关的疾病或障碍。降低血浆fhr3水平或消除在血浆中循环的fhr3提供了治疗、预防或改善疾病的新型方法，这些疾病包括但不限于肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)。
[0699]
本发明的具有式(ib)的双官能化合物通过降低血浆fhr3水平或消除在血浆中循环的fhr3在治疗肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)方面具有实用性。
[0700]
例如，本发明的具有式(ib)的双官能化合物结合fhr3并经由受体介导的胞吞作用引导其消除，从而降低血浆fhr3水平或消除在血浆中循环的fhr3。因此，本发明的具有式(ib)的双官能化合物因此可潜在地用于治疗、预防、改善或延迟由补体活性介导的疾病或障碍诸如肾病、年龄相关性黄斑变性、非典型溶血性尿毒综合征和肝细胞癌(hcc)的进展。
[0701]
实例
[0702]
在以下实例中进一步描述了本发明，这些实例不旨在限制权利要求中描述的本发明的范围。
[0703]
温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，则所有蒸发均减压进行，通常在约15mm hg和100mm hg(＝20-133mbar)之间。最终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析方法(例如，微量分析和光谱表征(例如，ms、ir、nmr))确认。使用的缩写为本领域中常规缩写。
[0704]
用于合成本发明的化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂是可商购的或者可以通过本领域的普通技术人员已知的有机合成方法生产或可
以通过如本文所述的有机合成方法生产。
[0705]
以下实例和本文其他地方使用的缩写是：
[0706]
aa：氨基酸
[0707]
ac：乙酰基
[0708]
ac2o：乙酸酐
[0709]
acn：乙腈
[0710]
aq.：水性
[0711]
am：氨基甲基
[0712]
boc：叔丁氧基羰基
[0713]
bnoh：苯甲醇
[0714]
bsa：牛血清白蛋白
[0715]
dbu：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
[0716]
dcm：二氯甲烷
[0717]
dic：n,n'-二异丙基碳二亚胺
[0718]
dtt：二硫苏糖醇
[0719]
dma：二甲基乙酰胺
[0720]
dmap：4-二甲基氨基吡啶
[0721]
dmf：n,n-二甲基甲酰胺
[0722]
dmso：二甲亚砜
[0723]
diea或dipea：n,n-二异丙基乙胺
[0724]
ea：乙酸乙酯
[0725]
edci：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
[0726]
edt：乙二硫醇
[0727]
eq.：当量
[0728]
esi-ms：电喷雾离子化质谱法
[0729]
et和etoac：乙基和乙酸乙酯
[0730]
fmoc：芴基甲基氧基羰基
[0731]
fret：荧光共振能量转移
[0732]
hatu：o-(7-偶氮苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
[0733]
hctu：o-(1h-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐
[0734]
hepes：4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸
[0735]
hfip：六氟异丙醇
[0736]
hilic：亲水相互作用液相色谱法
[0737]
hoat：1-羟基-7-氮杂苯并三唑
[0738]
hobt：羟基苯并三唑
[0739]
hplc：高压液相色谱法
[0740]
h、hr：小时
[0741]
hrms：高分辨质谱法
[0742]
ic50：半数最大抑制浓度
[0743]
lc和lcms：液相色谱法和液相色谱-质谱法
[0744]
ldlr：低密度脂蛋白受体
[0745]
min：分钟
[0746]
me：甲基
[0747]
ms：质量
[0748]
m/z：质荷比
[0749]
m和mm：摩尔和毫摩尔
[0750]
mg：毫克
[0751]
μl、ml和l：微升、毫升和升
[0752]
n：当量/升
[0753]
nmp：n-甲基-2-吡咯烷酮
[0754]
oxima pure：2-氰基-2-(肟基)乙酸乙酯钾盐，(肟基)氰基乙酸乙酯钾盐
[0755]
pbs：磷酸盐缓冲盐水
[0756]
pd：药效动力学
[0757]
pe：石油醚
[0758]
pg：保护基团
[0759]
ps：聚苯乙烯树脂
[0760]
pyoxim：[乙基氰基(肟基)乙酸根合-o2]三-1-吡咯烷基鏻六氟磷酸盐
[0761]
pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基
[0762]
pcsk9：前蛋白转化酶枯草溶菌素/kexin 9型
[0763]
ph：苯基
[0764]
rp：反相
[0765]
rpm：每分钟转数
[0766]
rt：室温
[0767]
ru：共振单元
[0768]
spps：固相肽合成
[0769]
sat.：饱和的
[0770]
tbu：叔丁基
[0771]
tbai：四丁基碘化铵
[0772]
tbtu：2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐
[0773]
tea：三乙胺
[0774]
thf：四氢呋喃
[0775]
tentagel
tm s ram树脂：n-fmoc-4'-[聚(氧乙烯)氨基甲酰基甲氧基]-2,4-二甲氧基-二苯甲胺聚合物结合的、聚(氧乙烯)-ram聚合物结合的
[0776]
tfa：三氟乙酸
[0777]
thpta：三羟丙基三唑基甲胺
[0778]
tis：三异丙基硅烷
[0779]
tlc：薄层色谱法
[0780]
tmsotf或tmsotf：三氟甲磺酸三甲基硅酯
[0781]
tr：保留时间
[0782]
tr：时间分辨
[0783]
tmscl：三甲基氯硅烷
[0784]
trt：三苯甲基
[0785]
tsoh：
[0786]
uplc：超高效液相色谱法
[0787]
uv：紫外线
[0788]
wt：重量
[0789]
分析方法、材料和仪器
[0790]
除非另有说明，否则使用从商业供应商处收到的试剂和溶剂。使用400mhz的瓦里安(varian)光谱仪，300mhz或400mhz的布鲁克(bruker)光谱仪获得质子核磁共振(nmr)光谱。光谱以ppm(δ)给出，并且以赫兹报告耦合常数j。将四甲基硅烷(tms)或溶剂峰用作内标。如果没有另外说明，则使用具有surveyor光电二极管阵列(pda)检测的thermo finnigan surveyor hplc系统和thermo lcq fleettm离子阱质谱仪测量纯度和低分辨率质谱数据。柱：synergi 4微米，hydro-rp80a，30
×
2.0mm，流速：0.500ml/min；溶剂a(水 0.1％甲酸)，溶剂b(乙腈 0.1％甲酸)；梯度：t＝0时的2％b至3min时的95％b至3.3min时的95％b。
[0791]
通用制备型hplc纯化程序和质谱
[0792]
根据待纯化的粗肽量，通过制备型反相c18-hplc，使用不同尺寸和改变流速的柱纯化粗肽。例如，使用在水中的0.1％tfa(a)和在乙腈中的0.1％tfa(b)作为洗脱剂。收集含有产物的级分并冻干以获得纯化的产物。
[0793]
条件e-1(lcms)-柱：acquity beh c18，1.7μm 2.1
×
50mm，80℃；流速：1.0ml/min；流动相：(a)在水中的0.5％tfa/(b)在乙腈中的0.4％tfa；梯度：4.4min内5％至98％；电喷雾质谱( )，dad-uv色谱图214nm。
[0794]
分析方法1
[0795]
agilent 1100/1200als系统/waters zqd ms系统
[0796]
洗脱剂a：h2o中的0.05％三氟乙酸
[0797]
洗脱剂b：乙腈
[0798]
柱温：40℃
[0799]
流速：2.0ml/min
[0800]
柱：sunfire c18，3.5μm，3.0
×
30mm
[0801]
梯度：
[0802][0803]
分析方法2
[0804]
waters acquity uplc系统/waters sqd ms系统
[0805]
洗脱剂a：h2o中的5mm氢氧化铵
[0806]
洗脱剂b：乙腈中的5mm氢氧化铵
[0807]
柱温：50℃
[0808]
流速：1.0ml/min
[0809]
柱：acquity uplc beh c18，1.7μm，2.1
×
50mm
[0810]
梯度：
[0811][0812]
分析方法3
[0813]
waters acquity uplc系统/waters xevo g2 qtof ms系统
[0814]
洗脱剂a：h2o中的0.1％甲酸
[0815]
洗脱剂b：乙腈中的0.1％甲酸
[0816]
柱温：50℃
[0817]
流速：1.0ml/min
[0818]
柱：acquity uplc beh c18，1.7μm，2.1
×
50mm
[0819]
梯度：
[0820][0821]
分析方法5
[0822]
waters acquity uplc系统/waters sqd ms系统
[0823]
洗脱剂a：h2o中的5mm氢氧化铵
[0824]
洗脱剂b：乙腈中的5mm氢氧化铵
[0825]
柱温：50℃
[0826]
流速：1.0ml/min
[0827]
柱：acquity uplc beh c18，1.7μm，2.1
×
30mm
[0828]
梯度：
[0829][0830]
分析方法7
[0831]
waters acquity uplc系统/waters sqd ms系统
[0832]
洗脱剂a：h2o中的0.1％甲酸
[0833]
洗脱剂b：乙腈中的0.1％甲酸
[0834]
柱温：50℃
[0835]
流速：1.0ml/min
[0836]
柱：acquity uplc beh c18，1.7μm，2.1
×
30mm
[0837]
梯度：
[0838][0839][0840]
分析方法9
[0841]
waters acquity uplc/waters qtof ms系统
[0842]
洗脱剂a：h2o中的0.05％三氟乙酸
[0843]
洗脱剂b：乙腈中的0.04％三氟乙酸
[0844]
柱温：80℃
[0845]
流速：0.5ml/min
[0846]
柱：acquity uplc csh c18，1.7μm，2.1mm
×
100mm
[0847]
梯度：
[0848][0849]
分析方法10
[0850]
waters acquity uplc/sqd ms系统
[0851]
洗脱剂a：h2o中的0.05％甲酸和3.75mm乙酸铵
[0852]
洗脱剂b：乙腈中的0.04％甲酸
[0853]
柱温：60℃
[0854]
流速：1.0ml/min
[0855]
柱：acquity uplc hss t3，1.8μm，2.1mm
×
50mm
[0856]
梯度：
[0857][0858]
分析方法11
[0859]
waters acquity uplc/sqd ms系统
[0860]
洗脱剂a：h2o中的0.05％甲酸和3.75mm乙酸铵
[0861]
洗脱剂b：乙腈中的0.04％甲酸
[0862]
柱温：60℃
[0863]
流速：1.0ml/min
[0864]
柱：acquity uplc hss t3，1.8μm，2.1mm
×
50mm
[0865]
梯度：
[0866][0867]
分析方法12
[0868]
waters acquity uplc/sqd ms系统
[0869]
洗脱剂a：h2o中的0.05％甲酸和3.75mm乙酸铵
[0870]
洗脱剂b：乙腈中的0.04％甲酸
[0871]
柱温：60℃
[0872]
流速：1.0ml/min
[0873]
柱：acquity uplc hss t3，1.8μm，2.1mm
×
50mm
[0874]
梯度：
[0875][0876]
用于环肽合成的一般程序：
[0877]
以下一般方案可用于获得化合物环肽，诸如化合物(c1)至(c4)。
[0878][0879]
步骤1：肽合成
[0880]
在来自cem公司(cem,inc.)的肽合成仪上进行固相肽合成
[0881]
合成循环a-1
[0882]
将树脂用dmf洗涤，然后通过用4-甲基哌啶/dmf(1:4)处理在两个循环中脱保护-第一循环30秒，第二循环3分钟。通过添加fmoc-氨基酸(4-5当量；在dmf中的0.2m溶液)、hatu(4-5当量；在dmf中的0.5m溶液)和dipea(4-6当量；在nmp中的2m溶液)完成偶联。重复偶联和脱保护步骤直到获得期望的环多肽。除了下表3中所示的氨基酸外，所有fmoc氨基酸均在75℃下偶联5min。最终偶联完成后，通过用4-甲基哌啶/dma(1:4)重复处理去除fmoc，得到脱保护的肽。
[0883]
表3：用于合成循环a-1的aa偶联条件
[0884][0885]
在来自吉罗斯蛋白技术ab公司(gyros protein technologies ab)的肽合成仪上进行固相肽合成。
[0886]
替代性地，如合成循环b-1或合成循环b-2中所述，在肽合成仪上合成肽。
[0887]
合成循环b-1
[0888]
将树脂用dma洗涤。然后通过用哌啶/dma(1:4)重复处理树脂去除fmoc。通过添加fmoc-氨基酸(3当量；在nmp中的0.2m溶液)、hctu(3当量；在nmp中的0.3m溶液)和dipea(3-6当量；在nmp中的0.66-0.9m溶液)，随后根据具体要求将悬浮液与氮气在室温下混合通常15min至4h来完成偶联。用dma洗涤后，重复偶联步骤。用dma洗涤后，通过添加ac2o/吡啶/dma(1:1:8)的混合物随后在室温下混合悬浮液进行封端。最终偶联完成后，如上所述在合成循环a-1中去除fmoc以得到肽。
[0889]
合成循环b-2
[0890]
将树脂用dma洗涤。通过用4-甲基哌啶/dma(1:4)重复处理去除fmoc。通过添加fmoc-氨基酸(3当量；在nmp中的0.2m溶液)、oxyma pure(3当量，在nmp中的0.3m溶液)和dipea(6-7当量；在nmp中的0.66m溶液)的混合物，随后根据具体要求将悬浮液与氮气在室温下混合15min至4h来完成偶联。用dma洗涤后，重复偶联步骤。用dma洗涤后，通过添加ac2o/吡啶/dma(1:1:8)的混合物随后在室温下混合悬浮液进行封端。最终偶联完成后，如上所述在合成循环a-1中去除fmoc以得到肽。
[0891]
步骤2：肽酰化
[0892]
将得自步骤1的树脂产物悬浮在n-甲基吡咯烷中，并添加n-琥珀酰亚胺基2-氯乙酸酯(5当量)。将所得树脂混合物在室温下振荡过夜。然后将树脂过滤并用二甲基甲酰胺和二氯甲烷各洗涤三次，得到酰化的肽产物。
[0893]
步骤3：伴随或不伴随去除保护基团(pg)从树脂上切割
[0894]
将得自步骤2的树脂产物与下文所列的切割溶液之一(1-5ml，0.1mmol规模)一起振荡1-3h。将树脂过滤并再次用新鲜的切割溶液处理0.5-1.5h。根据需要重复切割循环。然后将树脂过滤，并将合并的滤液缓慢倾倒入冷庚烷/乙醚(1:1)的混合物中，得到沉淀物。将含有沉淀物的悬浮液离心并倒出上清液。将沉淀物悬浮于冷乙醚中，短暂涡旋，然后离心。将该洗涤过程再重复两次。将粗肽产物在高真空中干燥。
[0895]
使用以下切割溶液：
[0896]
切割方法1：tfa/h2o/tis/dtt(92.5:2.5:2.5:2.5)
[0897]
切割方法2：95％tfa/edt/tis水溶液(95:2.5:2.5)
[0898]
步骤4：肽环化
[0899]
将得自步骤3的粗肽产物溶于dmso或dma中并用tea或dipea处理。然后将反应混合
物在室温下振荡过夜。将所得的含有环化肽的反应混合物在离心蒸发器上浓缩，得到期望的环多肽。
[0900]
实例1：pcsk9受体配体化合物(c1)至(c11)的合成
[0901]
实例1-1：3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-38-苄基-44-((2-(((s)-1,6-二氨基-1-氧代己烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(c1)的合成
[0902][0903]
注意：化合物(c1)具有以下氨基酸序列：
[0904]
([1,1'-联苯]-4-基甲基)-3-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-36-(4-氨基丁基)-9-苄基-18,21-双((r)-1-羟基乙基)-24,39-双(羟基甲基)-12-异丙基-26,27,32,33-四甲基-1,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40-十三氧代四十二氢-6h-吡咯并[2,1-f][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-15-基)乙酸(c2)的合成
[0911][0912]
注意：化合物(c2)具有以下氨基酸序列：
[0913][0914]
步骤1：肽序列f-v-d-t-t-s-(n-me)a-b-(n-me)a-k-s-p-c(trt)-g-nh-树脂(1-2b)在fmoc-gly-ram tentagel
tm
树脂(1-2a，0.22mmol/g载量，0.25mmol规模)上在肽合成仪上按照一般肽合成循环a-1(fmoc-氨基酸(4当量；在dmf中的0.2m溶液)、hatu(4当量；在dmf中的0.5m溶液)和dipea(4.4当量；在nmp中的2m溶液))合成。然后将
树脂过滤并用dmf(2x)和dcm(3x)洗涤，得到f-v-d-t-t-s-(n-me)a-b-(n-me)a-k-s-p-c(trt)-g-nh树脂(1-2b)。
[0915]
步骤2：将n-琥珀酰亚胺基2-氯乙酸酯(1-2c，287mg，1.5mmol)于nmp(8ml)中的溶液添加到来自步骤1的肽树脂1-2b(0.25mmol)中并将所得混合物在室温下振荡过夜。然后将树脂排干，用dmf(3x)和dcm(4x)洗涤，并干燥，得到clch2c(＝o)-f-v-d-t-t-s-(n-me)a-b-(n-me)a-k-s-p-c(trt)-g-nh树脂(1-2d)。
[0916]
步骤3：将来自步骤2的肽树脂产物1-2d从树脂切割并同时使用上文所述的切割方法1脱保护，得到粗肽clch2c(o)-f-v-d-t-t-s-(n-me)a-b-(n-me)a-k-s-p-c-g-nh2(1-2e)(266mg)。
[0917]
步骤4：将来自步骤3的粗肽1-2e(266mg)溶于dmso(20.5ml)中。添加几滴tea以调节至ph 8-9。将所得混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物在离心蒸发器上浓缩到几ml dmso中。将粗环肽通过制备型hplc(sunfire
tm prep c18柱，5μm，30
×
50mm，在6min内15％-40％，75ml/min，在水中的acn，含0.1％tfa)纯化然后冻干，得到环肽化合物2-((3r,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,30s,33s,36s,39s,44as)-30-([1,1'-联苯]-4-基甲基)-3-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-36-(4-氨基丁基)-9-苄基-18,21-双((r)-1-羟基乙基)-24,39-双(羟基甲基)-12-异丙基-26,27,32,33-四甲基-1,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40-十三氧代四十二氢-6h-吡咯并[2,1-f][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-15-基)乙酸(c2)(seq id no:2)。分析方法9：tr＝7.88，m 1＝1573.8；(m 2)/2＝787.3。
[0918]
下表4中的环肽化合物(c3)和(c4)使用如实例1-2中所述的类似方法获得，然而代替在步骤1中合成的肽序列(1-2b)，在步骤1中合成的环肽化合物(c3)和(c4)的相应肽序列也在表4中给出。
[0919]
表4
[0920]
[0921][0922]
环肽化合物(c3)和(c4)的分析数据总结在下表5中并且使用本文所述的分析方法e-1获得的。
[0923]
表5
[0924][0925]
实例1-3：3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-((2-(((s)-1-氨基-1-氧代-6-(4-氧代戊酰胺基)己-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(c5)的合成
[0926][0927]
向环肽(c1)(75mg，0.039mmol)于dmso(1ml)中的室温溶液中添加在dmso(1ml)中的dipea(0.020ml，0.117mmol)和4-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(0.130ml，0.117mmol)。将反应直接通过c18快速色谱法(30g柱，在15min内0％-80％acn/水)纯化并将纯级分通过genevac干燥，得到环肽(c5)。分析方法7：tr＝1.07min，m-1＝951.3
[0928]
中间体的合成
[0929]
(r)-2-苄基-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸(int-a1)的合成
[0930][0931]
步骤1.在30分钟的时段内在-78℃下向(s)-4-苄基噁唑烷-2-酮(500g，2.821mol)于thf(9l)中的冷搅拌溶液中缓慢添加n-buli(在己烷中的2.5m)(1.24l，3.103mol)并将所得混合物在-78℃下搅拌30分钟。然后在1h的时段内在-78至-60℃下缓慢添加3-苯基丙酰氯(571g，3.38mol)于thf(1l)中的溶液并将反应混合物缓慢升温至室温持续2h。将反应混合物冷却至0℃，用饱和nh4cl(500ml)淬灭并用二氯甲烷(2
×
1.5l)萃取。将合并的有机层用0.5n naoh(1l)和盐水(1l)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压蒸发。将粗(s)-4-苄基-3-(3-苯基丙酰基)噁唑烷-2-酮(int-a1-1)用石油醚(5l)研磨1h。将固体产物过滤，用石油醚(500ml)洗涤，并真空干燥，得到(s)-4-苄基-3-(3-苯基丙酰基)噁唑烷-2-酮(int-a1-1)。分析方法7；tr＝1.53min；[m h]

＝310.2。
[0932]
步骤2.在30分钟的时段内在-78℃下向(s)-4-苄基-3-(3-苯基丙酰基)噁唑烷-2-酮(int-a1-1)(500g，1.616mol)于thf(7l)中的冷搅拌溶液中缓慢添加在thf(1.94l，1.939mol)中的1.0m nahmds。将所得混合物在-78℃下搅拌1h，然后在30min的时段内在-78℃下滴加2-溴乙酸叔丁酯(472.8g，2.424mol)于thf(500ml)中的溶液。将混合物搅拌2h，然后用饱和nh4cl(500ml)淬灭，并用乙酸乙酯(2
×
1.5l)萃取。将合并的有机层用盐水溶液
(2l)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并减压浓缩。将粗物质用甲醇(800ml)研磨1h，此后将固体产物过滤，用甲醇(200ml)洗涤并真空干燥，得到(r)-3-苄基-4-((s)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-4-氧代丁酸叔丁基酯(int-a1-2)。分析方法7；tr＝1.78min；[m-tbu]

＝368.3。
[0933]
步骤3.在0-5℃下向(r)-3-苄基-4-((s)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-4-氧代丁酸叔丁酯(int-a1-2)(250g，0.59mol)于thf(9l)中的冷搅拌溶液中添加30％h2o2(267ml，2.37mol)并将反应在相同温度下搅拌30min。然后在0-5℃下将lioh.h2o(49.5g，1.18mol)于水(3l)中的溶液添加到上述反应混合物中并将混合物搅拌1h。将反应混合物用饱和亚硫酸钠(1.6l)和饱和碳酸氢钠(1.6l)淬灭。然后将溶剂减压浓缩，用水(3l)稀释并用dcm(2
×
1l)洗涤以去除杂质。然后将水层冷却至5℃并用6m hcl(1l)酸化至ph约1.5。将产物用乙酸乙酯(3
×
1l)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(1l)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，得到(r)-2-苄基-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸(int-a1)。分析方法7；tr＝1.78min；[m-h]-＝263.5。1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ1.42(s,9h),2.36(dd,j＝16.93,4.58hz,1h),2.48-2.62(m,1h),2.71-2.83(m,1h),3.00-3.18(m,2h),7.12-7.35(m,6h)。
[0934]
((1s,2s)-2-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b1)的合成
[0935][0936]
步骤1.在0℃下将4-硝基苯磺酰氯(23.29g，105mmol)添加到(1s,2s)-( )-1,2-二氨基环己烷(12g，105mmol)和三乙胺(21.97ml，158mmol)于dcm(200ml)中的溶液中并在相同温度下搅拌30min。将反应缓慢升温至室温并搅拌16h。通过tlc(在石油醚中的80％乙酸乙酯)监测反应的进程。将反应混合物浓缩并用水稀释，并且沉淀出固体。将沉淀物过滤并用过量的水和etoac洗涤并真空干燥，得到n-((1s,2s)-2-氨基环己基)-4-硝基苯磺酰胺(int-b1-1)。分析方法7；tr＝0.74min；[m h]

＝300.2。1hnmr(300mhz,cdcl3):δ8.33-8.31(d,j＝8.8hz,2h),8.05-8.02(d,j＝8.8hz,2h),6.19-6.18(d,j＝4.8hz,1h),4.40-4.38(d,j＝7.6hz,1h),3.35-3.33(d,j＝10.4hz,1h),2.97-2.91(m,1h),2.01-1.93(m,2h),1.73-1.68(m,2h),1.67-1.65(d,j＝6.8hz,1h),1.52-1.47(m,9h),1.29-1.16(m,4h)。
[0937]
步骤2.将boc-酸酐(13.70ml，59.0mmol)添加到n-((1s,2s)-2-氨基环己基)-4-硝基苯磺酰胺(int-b1-1)(17.66g，59.0mmol)于dcm(200ml)中的搅拌溶液中并搅拌3h。通过tlc(在石油醚中的50％乙酸乙酯)监测反应的进程。将反应混合物减压浓缩，得到((1s,2s)-2-((4-硝基苯基)磺酰氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b1-2)。分析方法7；tr＝
1.14min；[m-boc h]

＝299.9。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ8.33-8.31(d,j＝9.2hz,2h),8.04-8.02(d,j＝8.8hz,2h),6.17-6.16(d,j＝4.8hz,1h),4.38-4.36(d,j＝7.2hz,1h),3.35-3.32(m,1h),2.96-2.91(m,1h),2.02-1.92(m,2h),1.73-1.65(m,2h),1.52-1.46(m,6h),1.36-1.27(m,9h),1.28-1.21(m,4h)。
[0938]
步骤3.将甲基碘(18.19ml，294mmol)添加到((1s,2s)-2-((4-硝基苯基)磺酰氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b1-2)(23.5g，58.8mmol)和cs2co3(47.9g，147mmol)于dmf(200ml)中的搅拌溶液中并在相同温度下搅拌3h。通过tlc(在石油醚中的40％乙酸乙酯)监测反应的进程。将反应混合物用水(300ml)稀释并用乙酸乙酯(300ml)萃取。将有机层用水和盐水洗涤并经无水na2so4干燥。将有机层减压浓缩，得到粗化合物。将粗化合物经由正相色谱法使用硅胶(100-200目)柱色谱法纯化，用石油醚中的0
→
30％乙酸乙酯作为溶剂洗脱，得到((1s,2s)-2-((n-甲基-4-硝基苯基)磺酰氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b1-3)。分析方法7；tr＝1.22min；[m-boc]

＝313.9。1hnmr(300mhz,cdcl3):δ8.36-8.35(d,j＝6.8hz,2h),8.00-7.97(d,j＝8.8hz,2h),4.48(s,1h),4.14-4.09(m,1h),3.56-3.54(d,j＝6.4hz,2h),2.88(s,3h),2.12-2.10(m,1h),2.04(s,1h),1.72-1.70(d,j＝7.6hz,2h),1.41(s,9h),1.27-1.23(m,4h)。
[0939]
步骤4.将((1s,2s)-2-((n-甲基-4-硝基苯基)磺酰氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b1-3)(1.55g，3.75mmol)、cs2co3(8.55g，26.2mmol)和2-巯基乙酸(1.524ml，14.99mmol)于dmf:meoh(1:1,12ml)的混合物中的混合物在室温下搅拌1h。通过tlc(在dcm中的10％meoh)监测反应的进程。将反应混合物用水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)稀释。将水层用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层合并，用盐水洗涤并经na2so4干燥。将有机层减压浓缩，得到粗产物。将粗产物经由正相色谱法通过硅胶(100-200目)柱色谱法纯化，用在dcm中的0
→
5％meoh作为洗脱剂洗脱，得到((1s,2s)-2-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b1)。分析方法7；tr＝0.75min；[m h]

＝229.3。1h nmr(300mhz,dmso-d6):δ6.26-6.18(m,1h),3.08-3.06(m,1h),2.35(s,3h),2.15-2.12(m,1h),1.93-1.86(m,1h),1.77(m,1h),1.61-1.58(m,2h),1.37(s,9h),1.23-0.96(m,5h)。
[0940]
(s)-n-(2-(甲基氨基)丙基)-4-硝基苯磺酰胺(int-b2)的合成
[0941][0942]
步骤1.在0℃下向n-me-boc-ala-oh(1000.0g，4.92mol)于thf(6l)中的搅拌溶液中添加diea(3179.0g，24.6mol)。5min后，一次性添加hatu(2058.0g，294mmol)并在相同温度下继续搅拌15min。然后添加固体氯化铵(1316.0g，24.6mol)并将混合物在室温下搅拌过夜。形成大量沉淀物，将其通过一次性筛板(frit)过滤，用thf洗涤多次，直到大部分固体溶解。将滤液减压蒸发，得到粗产物。将粗物质用水(2l)稀释并通过石油醚(2
×
2.5l)萃取以
去除非极性杂质。然后将水部分用在石油醚中的40％etoac萃取数次。然后将所有有机部分合并，经无水na2so4干燥，过滤并减压蒸发，得到(s)-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(int-b2-1)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 6.70-7.47(m,2h),4.48-4.49(m,1h),4.11-4.82(m,1h),3.08(s,1h),2.72(s,3h),1.39(br.s.,9h),1.18-1.29(m,3h),1.11(s,1h)。
[0943]
步骤2.在氩气下向(s)-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(int-b2-1)(100g，0.49mol)于1,4-二噁烷(500ml)中的搅拌溶液中添加nabh4(56.4g，1.48mol)。将在二噁烷(200ml)中的乙酸(90ml)滴加到混合物中，以用附有通风孔的鼓泡器保持柔和的泡腾。酸完全添加后，附接回流冷凝器，并将混合物加热至110℃持续4h。趁热去除混合物，并达到室温。将反应物质通过冰淬灭并用2n hcl酸化。将溶液用etoac萃取，并用50％naoh将水性部分碱化至ph 13-14。然后将溶液用二乙醚萃取，经无水na2so4干燥，过滤并减压蒸发，得到(s)-(1-氨基丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(int-b2-2)。将粗化合物不经纯化即用于下一步骤。
[0944]
步骤3.在0℃下向粗(s)-(1-氨基丙-2-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(int-b2-2)(300.0g，1.59mol)于acn(1500ml)中的搅拌溶液中添加nahco3(406.9g，4.78mol)，随后添加对硝基苯磺酰氯(388.9g，1.75mol)。将混合物在室温下搅拌2h。将反应溶液用冰水(2000ml)缓慢淬灭并搅拌2h直到形成白色沉淀物。将固体过滤，用水和石油醚洗涤并真空干燥，得到(s)-甲基(1-((4-硝基苯基)磺酰氨基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(int-b2-3)。将粗化合物不经纯化即用于下一步骤。
[0945]
步骤4.向粗(s)-甲基(1-((4-硝基苯基)磺酰氨基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(int-b2-3)(450.0g，1.2mol)于1,4-二噁烷(2000ml)中的搅拌溶液中添加hcl(在1,4-二噁烷中的4m，2000ml)并将反应混合物在室温下搅拌4h。在反应期间沉淀出固体，将其过滤，用二乙醚洗涤并真空干燥，得到胺，为hcl盐。将粗固体物质通过正戊烷洗涤数次并干燥，得到(s)-n-(2-(甲基氨基)丙基)-4-硝基苯磺酰胺(int-b2)。分析方法7；tr＝0.69min；[m h]

＝274.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.18(d,j＝6.57hz,3h)2.47-2.55(m,4h)2.89-3.13(m,2h)3.14-3.26(m,1h)8.03-8.16(m,2h)8.37-8.52(m,2h)。
[0946]
(s)-(2-(甲基氨基)-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b3)的合成
[0947][0948]
步骤1.在0℃下向fmoc-lys-oh hcl(4.05g，10mmol)于dcm(80ml)中的悬浮液中添加me3sicl(3.83ml，30.0mmol)和diea(8.73ml，50.0mmol)并将所得混合物在0℃下搅拌20min并变成澄清溶液。添加diea(1.747ml，10.00mmol)和2-硝基苯-1-磺酰氯(2.327g，10.50mmol)并将反应混合物在0℃下搅拌30min，然后真空浓缩至干。将所得残余物在etoac(150ml)和5％khso4水溶液(50ml)之间分配。将有机层用5％khso4水溶液(3
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩至干，得到n
2-(((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)-n
6-((2-硝基苯基)磺酰基)-l-赖氨酸(int-b3-1)。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。分析方法10；tr＝1.08min；[m nh4]

＝571.3。
[0949]
步骤2.在0℃下向n
2-(((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)-n
6-((2-硝基苯基)磺酰基)-l-赖氨酸(int-b3-1)(5.36g，9.68mmol)、nh4cl(1.036g，19.36mmol)和hobt(1.483g，9.68mmol)于dmf(80ml)中的悬浮液中添加diea(6.76ml，38.7mmol)。将所得悬浮液在0℃下搅拌5min，然后添加tbtu(3.42g，10.65mmol)。在0℃下搅拌1h后，将反应混合物在etoac(250ml)和5％nahco3水溶液(100ml)之间分配。将有机层用5％nahco3水溶液(3
×
50ml)和盐水(25ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩至干，得到(s)-(1-氨基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯(int-b3-2)。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。分析方法19；tr＝1.04min；[m h]

＝553.3。
[0950]
步骤3-1：向溶于thf(60ml)中的(s)-(1-氨基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯(int-b3-2)(9.66mmol)添加bh
3-s(ch3)2(5.50ml，58.0mmol)并将所得混合物在室温下搅拌2h 15min，然后在50℃下搅拌6.5h。使反
应混合物冷却至室温。
[0951]
步骤3-2：添加h2o(1ml)和6m hcl水溶液(2ml)并将反应混合物在室温下搅拌14.5h。
[0952]
步骤3-3：添加0.5m na2co3水溶液(48.3ml，24.15mmol)和boc2o(2.243ml，9.66mmol)于thf(20ml)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌2h，用在etoh(1ml)中的8m menh2淬灭，并在室温下搅拌30min。
[0953]
步骤3-4：添加4m naoh水溶液(9.66ml，38.6mmol)并将反应混合物在室温下搅拌85min。然后添加4-甲基哌啶(4ml)并将反应混合物在室温下搅拌40min。添加另外的4-甲基哌啶(8ml)并在室温下继续搅拌30min。然后添加meoh(10ml)，伴随在室温下搅拌25min。添加另外的meoh(20ml)和4-甲基哌啶(10ml)并搅拌30min。然后将反应混合物真空浓缩并将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱剂a：etoac/diea(98:2)，洗脱剂b：etoac/meoh/diea(95:5:2))纯化，将纯级分合并并真空浓缩至干，得到(s)-(2-氨基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b3-3)。分析方法10；tr＝0.69min；[m h]

＝417.2。
[0954]
步骤4.将甲酸(0.611ml，15.92mmol)和ac2o(1.502ml，15.92mmol)的混合物在室温下搅拌40min，然后添加到(s)-(2-氨基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b3-3)(1.326g，3.18mmol)于dcm(15ml)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌15min，然后真空浓缩至干。将获得的残余物etoac(80ml)和5％nahco3水溶液(10ml)在之间分配。将有机层用5％nahco3水溶液(4
×
10ml)和盐水(10ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩至干，得到(s)-(2-甲酰胺基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b3-4)(1.217g，2.74mmol，86％产率，为黄色泡沫。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。分析方法10；tr＝0.87min；[m h]

＝445.2。
[0955]
步骤5-1：向溶于thf(20ml)中的(s)-(2-甲酰胺基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b3-4)(1.217g，2.74mmol)中添加bh
3-s(ch3)2(1.300ml，13.69mmol)并将所得混合物在室温下搅拌3h 40min。
[0956]
步骤5-2：将反应通过添加meoh(2ml)淬灭并将所得溶液在室温下搅拌125min。添加meoh(3ml)并在60℃下继续搅拌75min。然后将反应混合物真空浓缩至干。
[0957]
步骤5-3：将获得的残余物溶于meoh(20ml)中并添加10％pd/c(0.087g，0.082mmol)于h2o(1ml)中的悬浮液。将所得混合物在60℃下搅拌3.5h。添加另外的在h2o(1ml)中的10％pd/c(0.087g，0.082mmol)并在60℃下继续搅拌2.5h。将反应混合物通过hyflo(cas号：61790-53-2)过滤，并将滤液真空浓缩至干，得到(s)-(2-(甲基氨基)-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b3)。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。分析方法10；tr＝0.71min；[m h]

＝431.3。
[0958]
(s)-3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)丁酸(int-c1)的合成
[0959][0960]
步骤1.在0℃下向含有(3s)-3-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-(4-氯苯基)丁酸(360g，1.15mol)于thf(8l)中的溶液的20l 4-颈圆底烧瓶(用惰性氮气气氛吹扫并保持)分批添加氢化钠(212g，5.74mol，65％)，并将所得混合物在0℃下搅拌1h。然后滴加mei(1633g，11.5mol)，伴随在0℃下搅拌，并将所得溶液在35℃下搅拌4h。然后将反应混合物通过添加300g的水/冰在-10℃下淬灭，真空浓缩，然后用3l的水稀释。将水相用3
×
1l的醚萃取。在0℃下将水相的ph值用hcl(2n)调节至ph 3，并将所得溶液用3
×
2l的乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用盐水(1
×
2l)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到(s)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)丁酸(int-c1-1)。分析方法7；tr＝1.01min；[m h]

＝328.1。
[0961]
步骤2.向含有(s)-3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)丁酸(int-c1-1)(284.2g，866.98mmol)于dcm(3l)中的溶液的5l 4-颈圆底烧瓶(用惰性氮气气氛吹扫并保持)中滴加tfa(990.8g，8.77mol)，伴随在0℃下搅拌。将所得溶液在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩，得到(s)-4-(4-氯苯基)-3-(甲基氨基)丁酸(int-c1-2)。分析方法1；tr＝0.66min；[m h]

＝228.2。
[0962]
步骤3.向含有(s)-4-(4-氯苯基)-3-(甲基氨基)丁酸三氟乙酸盐(int-c1-2)(320g粗品)于二噁烷:h2o(5:1)(3.6l)中的溶液的5l 4-颈圆底烧瓶(用惰性氮气气氛吹扫并保持)中分若干批次添加碳酸钠(249.1g，2.35mol)。然后在0℃下分若干批次添加fmoc-cl(242g，935.45mmol)。将所得混合物在室温下搅拌过夜，真空浓缩然后用3l的水稀释。将水溶液的ph值用hcl(1n)调节至ph 5。将水相用3
×
1l的乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用盐水(1
×
1l)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将粗残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯/石油醚(1:5-1:3)洗脱，得到(s)-3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)丁酸(int-c1)。分析方法1；tr＝1.60min；[m h]

＝450.3。1h nmr(300mhz,dmso-d6,ppm):δ12.09-12.45(br,1h),7.89(m,2h),7.21-7.69(m,8h),7.13-7.20(m,1h),6.85-7.08(br,1h),4.04-4.55(m,4h),2.73-2.8(m,1h),2.11-2.85(m,6h)。
[0963]
(r)-3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(int-c2)的合成
[0964][0965]
步骤1-1：向溶于甲苯(100ml)和diea(5.11ml，29.3mmol)中的1-(叔丁氧基羰基)-3-(4-氯苄基)哌啶-3-甲酸(6.905g，19.51mmol)中添加二苯基磷酰基叠氮化物(5.48ml，25.4mmol)并将反应在室温下搅拌2.5h，然后在100℃下搅拌4h。将反应混合物在etoac(300ml)和5％nahco3水溶液(60ml)之间分配。将有机相用5％nahco3水溶液(3
×
60ml)和盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩至干。
[0966]
步骤1-2：向溶于二噁烷(200ml)中的来自步骤1-1的残余物中添加1m naoh(195ml，195mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1h，然后真空浓缩至干。将所得残余物在etoac(250ml)和5％na2co3水溶液(20ml)之间分配，并将水相用etoac(70ml)萃取。将合并的有机相用5％na2co3水溶液(40ml)和盐水(40ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩至干，得到外消旋物3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，其不经进一步纯化即用于下一步骤。分析方法10；tr＝0.80min；[m h]

＝325.2。
[0967]
步骤2.将外消旋物3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(19.5mmol)通过制备型sfc(仪器：thar 200制备型sfc)使用以下条件下分离：柱：chiralpak ad，300
×
50mm i.d.，10μm；洗脱剂a：co2；洗脱剂b：etoh(0.1％nh4oh)；梯度：b 45％；流速：200ml/min；背压：100巴；柱温：38℃；循环时间：约9min；将化合物溶于约130ml meoh中；进样：每次进样10ml。(r)-3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(int-c2)(较慢洗脱异构体)和储存时发生的部分结晶允许通过x-射线晶体学进行结构确认。分析方法10；tr＝0.77min；[m h]

＝325.3。
[0968]
(r)-3-(4-氯苄基)哌啶-3-胺盐酸盐(int-c3)的合成
[0969][0970]
将(r)-3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(int-c2)(2.09g，6.43mmol)溶于二噁烷(10ml)中。添加在二噁烷(50ml)和h2o(5ml)中的4m hcl并将溶液在室温下搅拌4h。将反应真空浓缩至干，得到(r)-3-(4-氯苄基)哌啶-3-胺盐酸盐(int-c3)。分析方法10；tr＝0.40min；[m h]

＝225.1。
[0971]
4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苯甲醛(int-f1)的合成
[0972][0973]
步骤1.向5-l 3-颈圆底烧瓶(用惰性氮气气氛吹扫并保持)中放置5-溴-1-甲基-1h-咪唑-2-甲醛(216g，1.14mol，1.00当量)以及在二氯甲烷(3l)和thf(1l)中的分子筛，随后为二甲胺(862.5ml，1.50当量)。将所得混合物在室温下搅拌30min，并且在0℃下分批添加nabh(oac)3(292.6g，1.38mol，1.20当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜然后用水(1l)淬灭。将有机相分离并用h2o(2
×
2l)洗涤。然后将水相用dcm(2
×
1l)萃取。将合并的有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物经由硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷/乙酸乙酯(2:1)洗脱，得到[(5-溴-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基]二甲胺(int-f1-1)。分析方法5；tr＝0.60min；[m h]

＝220.1。
[0974]
步骤2.向3-l 4-颈圆底烧瓶(用惰性氮气气氛吹扫并保持)中放置在n,n-二甲基甲酰胺(1.3l)中的[(5-溴-1-甲基-1h-咪唑-2-基)甲基]二甲胺(int-f1-1)(53.675g，246.11mmol，1.00当量)、(4-羟基苯基)硼酸(66.55g，482.49mmol，1.50当量)、pd(dppf)cl2(11.75g，16.06mmol，0.05当量)和乙酸钾(189.05g，1.93mol，6.00当量)。将所得溶液在90℃下在油浴中搅拌18h。反应以相同规模重复三次。将各批合并，并将混合物冷却至室温然后倾倒入3.5l水/冰中。将所得溶液用etoac(3
×
1.5l)萃取并将有机层合并。将混合物用水(1l)稀释，并将溶液的ph值用2m hcl水溶液调节至4-5。将水相用etoac(2
×
1l)萃取，并将水层合并。然后将溶液的ph值用nh4oh调节至11。将所得溶液用dcm(6
×
1l)萃取，并将有机层合并并真空浓缩。将粗产物经由硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷/甲醇(8:1)洗脱，得到4-[2-[(二甲基氨基)甲基]-1-甲基-1h-咪唑-5-基]酚(int-f1-2)(120g，53％)，为紫色油状物。分析方法5；tr＝0.55min；[m h]

＝232.1。
[0975]
步骤3.向3-l 4-颈圆底烧瓶中放置在n,n-二甲基甲酰胺(2l)中的4-[2-[(二甲基氨基)甲基]-1-甲基-1h-咪唑-5-基]酚(int-f1-2)(120g，518.82mmol，1.00当量)和碳酸钾(214.9g，1.55mol，3.00当量)。将所得混合物在室温下搅拌30min并添加4-氯-2-氟苯甲醛(98.5g，621.23mmol，1.20当量)。将反应混合物在90℃下在油浴中搅拌4h，然后冷却至室温并用水(3l)稀释。将所得溶液用etoac(3
×
2l)萃取并将有机层合并。将混合物用水(1l)稀释，并将溶液的ph值用2m hcl水溶液调节至2。将水相用etoac(3
×
2l)萃取，并将水层合并。将溶液的ph值用nh4oh调节至11，然后用dcm(2
×
2l)萃取。将合并的有机相真空浓缩，然后经由硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷/乙酸乙酯(7:3)洗脱，得到4-氯-2-(4-[2-[(二甲基氨基)甲基]-1-甲基-1h-咪唑-5-基]苯氧基)苯甲醛(int-f1)。1h nmr:(300mhz,cdcl3,ppm):δ
f3)的合成
[0982][0983]
步骤1.在室温下向含有在dma(4ml)中的(r)-2-苄基-4-(叔丁氧基)-4-氧代丁酸(int-a1)(244mg，0.924mmol)的小瓶中分若干批次添加dipea(0.323ml，1.848mmol)和hatu(358mg，0.942mmol)。一旦添加完成，就将所得混合物在室温下再搅拌15min，然后添加滴加到另一个含有在dma(1.5ml)和dipea(0.807ml，4.62mmol)中的(r)-3-(4-氯苄基)哌啶-3-胺(int-c3)(275mg，0.924mmol)的小瓶中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后转移至分液漏斗，用etoac稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水(x3)洗涤。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到(r)-4-((r)-3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-3-苄基-4-氧代丁酸叔丁酯，将其不经纯化即带入下一步骤。
[0984]
步骤2.向含有在无水甲醇(18ml)中的(r)-4-((r)-3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-3-苄基-4-氧代丁酸叔丁酯(435mg，0.924mmol)并在冰浴中冷却的圆底烧瓶中滴加亚硫酰氯(1.35ml，18.47mmol)。当添加完成后，将所得混合物逐渐升温至室温，然后搅拌过夜以完成反应。将反应混合物在30℃水浴中加热下减压浓缩至干。将粗制油溶于etoac中，用半饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。将分离的有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到(r)-4-((r)-3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-3-苄基-4-氧代丁酸甲酯(int-f3)。
[0985]
(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)的合成
[0986][0987]
在室温下向(s)-2-氨基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(1.04mg，4.77mmol)于meoh(10ml)和水(0.46ml)中的悬浮液添加naoh(4.67ml，4.67mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1hr，然后添加4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苯甲醛(int-f1)(1.6g，4.33mmol)并将反应混合物搅拌15min，冷却至-5℃然后搅拌1h。分批添加nabh4(65mg，1.73mmol)，保持内部反应温度低于0℃。将反应混合物在-5℃下搅拌30min，然后在室温下搅拌2小时。将反应混合物通过滴加水淬灭，直到气体停止逸出。然后将反应混合物浓缩以去除meoh并添加60ml水。将含水混合物用etoac(150ml)萃取并将有机层用40ml nahco3溶液洗涤，冷却并添加1.0n hcl以调节ph约8。将所得沉淀物过滤，用水洗涤并干燥。将滤液用dcm(4
×
200ml)萃取。将有机物浓缩并将残余物与沉淀物合并。将固体
真空干燥，得到(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)。分析方法7：tr＝0.66min；[m h]

＝572.0
[0988]
(s)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)戊酸(int-g2)的合成
[0989][0990]
(s)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)戊酸(int-g2)使用类似于(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)的合成中使用的程序的方法获得，不同之处在于用(s)-2-氨基-5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸替换(s)-2-氨基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸。分析方法7：tr＝0.67min；[m h]

＝586.2。
[0991]
(s)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)戊酸(int-g3)的合成
[0992][0993]
(s)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)戊酸(int-g3)使用(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)的合成中使用的程序的方法获得，不同之处在于用(s)-2-氨基-5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊酸替换(s)-2-氨基-4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸并且用4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苯甲醛(int-f2)替换4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苯甲醛(int-f1)。分析方法7：tr＝1.46min；[m h]

＝612.6。
[0994]
ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-氨基丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab1)的合成
基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸叔丁酯(ab1-3)(265g，0.476mol)于1,4-二噁烷(530ml)中的溶液中添加在二噁烷(2.65l)中的4m hcl。将所得混合物搅拌16h然后减压浓缩。将粗产物在230-400-目硅胶柱上纯化，用在石油醚中的30％乙酸乙酯洗脱，得到(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸(ab1-4)。分析方法7；tr＝1.48min；[m h]

＝501.4。
[1000]
步骤5.将2-氯三苯甲基氯树脂(ab-1-4a，4.27g，4.27mmol)用dcm(3
×
20ml)预洗涤。将溶于dcm(20ml)和dipea(1.5ml，8.59mmol)中的(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸(ab1-4)(1.9g，3.80mmol)添加到树脂中。将所得混合物在室温下振荡16h，然后用dcm(3
×
40ml)洗涤，并在dcm/meoh(50ml/20ml)中振荡30min，以封端树脂。然后将树脂过滤，用dmf(2
×
50ml)和dcm(2
×
50ml)洗涤，并真空干燥，得到ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸(ab1-5)树脂(6.13g，粗品)。将树脂不经纯化而带至下一步骤。
[1001]
步骤6.向ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸(ab1-5)(285mg，1.283mmol)中添加在dmf(10ml)中的20％4-甲基哌啶并将所得混合物在室温下振荡2h。然后将树脂过滤，用dmf(2
×
10ml)和dcm(2
×
10ml)洗涤，并真空干燥。这得到树脂ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-氨基丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸(ab1)，将其不经纯化即使用。
[1002]
ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((1s,2s)-2-氨基环己基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab2)的合成
[1003][1004]
ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((1s,2s)-2-氨基环己基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab2)使用ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-氨基丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab1)的合成中使用的程序的方法获得，不同之处在于用((1s,2s)-2-(甲基氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(int-b1)替换(s)-n-(2-(甲基氨基)丙基)-4-硝基苯磺酰胺(int-b2)。
[1005]
ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-氨基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab3)的合成
hcl水溶液(15ml)淬灭并真空浓缩至约一半体积。将残余物在etoac(100ml)和5％khso4(15ml)之间分配。将有机层用5％khso4水溶液(3
×
15ml)和盐水(15ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩至干。将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化。将纯级分合并，并真空浓缩至干。将残余物在etoac(80ml)和5％nahco3水溶液(7ml)之间分配。将有机层用5％nahco3水溶液(3
×
7ml)、5％khso4水溶液(15ml)和盐水(10ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩至干，得到(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸(900mg，1.212mmol，60％产率，为白色泡沫，分析方法11；tr＝1.21min；[m h]

＝743.15。
[1010]
步骤4.将2-氯三苯甲基氯树脂(1.250mg，2.00mmol)用dcm(3
×
30ml)预洗涤。将在dcm(30ml)和diea(1.69ml，9.69mmol)中的(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸叔丁酯(ab3-3)(900mg，1.21mmol)添加到树脂中。将所得混合物在室温下振荡16h，用dcm(3
×
50ml)洗涤，然后在dcm/meoh(5:2)(20ml)中振荡，以封端树脂30min。然后将树脂过滤，用dcm/meoh/diea(17:2:1)(3
×
15ml)洗涤并真空干燥。这得到树脂ps-(2-氯三苯甲基)-(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab3-4)，将其不经纯化即带入下一步骤。
[1011]
步骤5.向ps-(2-氯三苯甲基)-(r)-4-(((s)-1-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab3-4)(266mg，0.336mmol)中添加在dmf(10ml)中的20％4-甲基哌啶并将所得混合物在室温下振荡2h。然后将树脂过滤，用dmf(2
×
10ml)和dcm(2
×
10ml)洗涤，并真空干燥。这得到树脂ps-(2-氯三苯甲基)-(r)-4-(((s)-1-氨基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab3)，将其不经纯化即使用。
[1012]
ps-(2-氯三苯甲基)(4s,7s,12s,15r)-4-氨基-15-苄基-7-(4-氯苄基)-6,12,13-三甲基-5,9,14-三氧代-2-氧杂-6,10,13-三氮杂十七烷-17-酸酯(ab4)的合成
[1013][1014]
步骤1-1.将(s)-3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)丁酸(int-c1)(4.05g，9.00mmol)、tbtu(2.89g，9.00mmol)和diea(1.729ml，9.90mmol)于nmp(70ml)中的溶液在室温下振荡2min，然后添加到已用nmp(3x)洗涤的ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-氨基丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab1)(6.00mmol)中。将
所得悬浮液在室温下振荡20h，然后过滤，并将树脂用dma(3x)洗涤。对于封端，添加ac2o/吡啶/dma(1:1:8)(70ml)并将所得悬浮液在室温下振荡15min。将树脂排干，然后用dma(3x)洗涤。
[1015]
步骤1-2.通过用4-甲基哌啶/dma(1:4)重复处理(5
×
70ml，每次在室温下振荡5min)来进行fmoc-去保护。收集切割溶液，并用于经由uv光谱确定树脂的载量。fmoc去除后，将树脂用dma(3x)、dcm(3x)、dma(3x)和dcm(5x)洗涤并真空干燥，得到ps-(2-氯三苯甲基)(r)-3-苄基-4-(((s)-1-((s)-4-(4-氯苯基)-3-(甲基氨基)丁酰胺基)-丙-2-基)(甲基)氨基)-4-氧代丁酸酯(ab4-1)。
[1016]
步骤2-1.将fmoc-o-甲基-l-丝氨酸(2.292g，6.72mmol)、pyoxim(3.54g，6.72mmol)和diea(2.346ml，13.43mmol)于nmp(55ml)中的溶液在室温下振荡2min，然后添加到已用nmp(3x)洗涤的ps-(2-氯三苯甲基)(r)-3-苄基-4-(((s)-1-((s)-4-(4-氯苯基)-3-(甲基氨基)丁酰胺基)-丙-2-基)(甲基)氨基)-4-氧代丁酸酯(ab4-1)(4.477mmol)中。将所得悬浮液在室温下振荡6h，然后过滤。将fmoc-o-甲基-l-丝氨酸(1.528g，4.48mmol)、pyoxim(2.361g，4.48mmol)和diea(1.564ml，8.95mmol)于nmp(35ml)中的溶液在室温下搅拌2min，然后添加到树脂中。将所得悬浮液在室温下振荡16h并过滤，并将树脂用dma(3x)洗涤。对于封端，添加ac2o/吡啶/dma(1:1:8)(40ml)并将所得悬浮液在室温下振荡15min。将树脂排干，然后用dma(3x)洗涤。
[1017]
步骤2-2.通过用4-甲基哌啶/dma(1:4)重复处理(3
×
30ml，每次在室温下振荡15min)来进行fmoc-去保护。fmoc-去除后，将树脂用dma(3x)和dcm(5x)洗涤，得到ps-(2-氯三苯甲基)(4s,7s,12s,15r)-4-氨基-15-苄基-7-(4-氯苄基)-6,12,13-三甲基-5,9,14-三氧代-2-氧杂-6,10,13-三氮杂十七烷-17-酸酯(ab4)。
[1018]
ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((1s,2s)-2-((s)-3-((s)-2-氨基-3-甲氧基-n-甲基丙酰胺基)-4-(4-氯苯基)丁酰胺基)环己基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab5)的合成
[1019][1020]
ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((1s,2s)-2-((s)-3-((s)-2-氨基-3-甲氧基-n-甲基丙酰胺基)-4-(4-氯苯基)丁酰胺基)环己基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab5)使用ps-(2-氯三苯甲基)(4s,7s,12s,15r)-4-氨基-15-苄基-7-(4-氯苄基)-6,12,13-三甲基-5,9,14-三氧代-2-氧杂-6,10,13-三氮杂十七烷-17-酸酯(ab4)的合成中使用的程序的方法获得，不同之处在于用ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((1s,2s)-2-氨基环己基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab2)替换ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((s)-1-氨基丙-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab1)。
[1021]
n-(4-((2s,5s,8s,13s,16r)-16-苄基-1-(4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基
甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-8-(4-氯苄基)-5-(甲氧基甲基)-2,7,14-三甲基-3,6,10,15,18-五氧代-1,4,7,11,14-五氮杂环十八烷-13-基)丁基)-2-硝基苯磺酰胺(ab6)的合成
[1022][1023]
步骤1-1.将(s)-3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(4-氯苯基)丁酸(int-c1)(0.601g，1.336mmol)、tbtu(0.429g，1.339mmol)和diea(0.257ml，1.4690mmol)于nmp(20ml)中的溶液在室温下振荡2min，然后添加到已用nmp(3x)洗涤的ps-(2-氯三苯甲基)-(r)-4-(((s)-1-氨基-6-((2-硝基苯基)磺酰氨基)己-2-基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab3)(1.113mmol)中。将所得悬浮液在室温下振荡20h，然后过滤，并将树脂用dma(3x)洗涤。对于封端，添加ac2o/吡啶/dma(1:1:8)(70ml)并将所得悬浮液在室温下振荡20h。将树脂排干，然后用dma(3x)洗涤。
[1024]
步骤1-2.通过用4-甲基哌啶/dma(1:4)重复处理(5
×
20ml，每次在室温下振荡
咪唑-5-基)苯氧基)苯甲醛(int-f2)(238mg，0.6mmol)溶于dcm(30ml)和acoh(0.114ml，2mmol)中，并将所得溶液在室温下搅拌1.5h。然后添加nabh(oac)3(530mg，2.5mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18h。添加meoh(2ml)并将反应混合物真空浓缩至干。将粗产物通过制备型反相hplc(洗脱剂a：在h2o中的0.1％tfa和洗脱剂b：acn)纯化。将纯级分合并并冻干，得到(3s,6s,9s,14s,17r)-17-苄基-1-(4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苯基)-9-(4-氯苄基)-6-(甲氧基甲基)-3,8,15-三甲基-14-(4-((2-硝基苯基)磺酰氨基)丁基)-4,7,11,16-四氧代-2,5,8,12,15-五氮杂十九烷-19-酸。分析方法9：tr＝4.05min；[m h] ＝1281.5
[1031]
步骤6.向(3s,6s,9s,14s,17r)-17-苄基-1-(4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苯基)-9-(4-氯苄基)-6-(甲氧基甲基)-3,8,15-三甲基-14-(4-((2-硝基苯基)磺酰氨基)丁基)-4,7,11,16-四氧代-2,5,8,12,15-五氮杂十九烷-19-酸(440mg，271μmol)、hatu(412mg，1.083mmol)和hoat(55.3mg，0.406mmol)于dcm(100ml)中的溶液中添加2,6-卢剔啶(0.946ml，8.13mmol)并将所得混合物在室温下搅拌18.5h。将反应混合物真空浓缩至干并将所得残余物在etoac(100ml)和5％nahco3水溶液(15ml)之间分配。将有机层用5％nahco3水溶液(3
×
15ml)和盐水(10ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并蒸发至干，得到n-(4-((2s,5s,8s,13s,16r)-16-苄基-1-(4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-8-(4-氯苄基)-5-(甲氧基甲基)-2,7,14-三甲基-3,6,10,15,18-五氧代-1,4,7,11,14-五氮杂环十八烷-13-基)丁基)-2-硝基苯磺酰胺(ab6)。分析方法10：tr＝1.1min；[m 2h]
2
＝633.6。
[1032]
实例1-4：(4s,7s,10s,14r,16as,20as)-10-(2-氨基乙基)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基十六氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-2,6,9,12,15(3h)-戊酮(c6)的合成
[1033][1034]
步骤1.向在dmf(20ml)中的(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)(1.000g，1.680mmol)添加dipea(0.587ml，3.36mmol)，随后添加hatu(0.639g，1.680mmol)并将所得混合物搅拌直至完全均匀。然后将该溶液添加到在摇瓶中在10ml dmf中的ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((1s,2s)-2-((s)-3-((s)-2-氨基-3-甲氧基-n-甲基丙酰胺基)-4-(4-氯苯基)丁酰胺基)环己基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab5)(2.8g，0.840mmol)中。将反应混合物在室温下振荡过夜。将树脂过滤，用dmf(3x)和dcm(3x)洗涤，并真空干燥，得到(r)-3-苄基-4-(((1s,2s)-2-((8s,11s,14s)-8-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)-甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)-14-(4-氯苄基)-11-(甲氧基甲基)-2,2,13-三甲基-4,9,12-三氧代-3-氧杂-5,10,13-三氮杂十六烷-16-酰氨基)环己基)(甲基)氨基)-4-氧代丁酸ps-2-氯三苯甲酯，将其不经纯化而带至下一步骤。
[1035]
步骤2.通过用75ml 20％hfip/dcm在室温下振荡20min从树脂上切割(r)-3-苄基-4-(((1s,2s)-2-((8s,11s,14s)-8-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)-甲基)-1-甲基-1h-咪
唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)-14-(4-氯苄基)-11-(甲氧基甲基)-2,2,13-三甲基-4,9,12-三氧代-3-氧杂-5,10,13-三氮杂十六烷-16-酰氨基)环己基)(甲基)氨基)-4-氧代丁酸ps-2-氯三苯甲酯(2.9g，0.87mmol)。将树脂过滤，并收集滤液。将两个步骤再重复三遍，以确保从树脂上切割所有产物。将合并的滤液浓缩，得到粗油状物(1.8g)，将其经由反相色谱法(用含0.1％nh4oh的mecn/h2o洗脱)纯化，得到1(r)-3-苄基-4-(((1s,2s)-2-((8s,11s,14s)-8-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)-14-(4-氯苄基)-11-(甲氧基甲基)-2,2,13-三甲基-4,9,12-三氧代-3-氧杂-5,10,13-三氮杂十六烷-16-酰氨基)环己基)(甲基)氨基)-4-氧代丁酸。分析方法7；tr＝1.77min；[m h]

＝1182.7。
[1036]
步骤3.向溶于dcm(100ml)中的(r)-3-苄基-4-(((1s,2s)-2-((8s,11s,14s)-8-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)-14-(4-氯苄基)-11-(甲氧基甲基)-2,2,13-三甲基-4,9,12-三氧代-3-氧杂-5,10,13-三氮杂十六烷-16-酰氨基)环己基)(甲基)氨基)-4-氧代丁酸(115mg，0.097mmol)中添加hatu(148mg，0.389mmol)、2,6-卢剔啶(0.340ml，2.92mmol)和hoat(13.23mg，0.097mmol)并将所得混合物在45℃下搅拌过夜。然后将反应混合物浓缩至干然后在etoac(100ml)和5％nahco3水溶液(100ml)之间分配。将有机层用5％nahco3水溶液(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并经由旋转蒸发仪浓缩至干。然后将残余物吸收在etoac中并用1m hcl(x2)洗涤。将盐水添加到合并的1m hcl层中并用etoac(x2)反萃取。将合并的etoac层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将产物经由反相色谱法(用mecn/h20洗脱，梯度为20％-65％，含0.1％nh4oh)纯化，得到(2-((4s,7s,10s,14r,16as,20as)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)-甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基-2,6,9,12,15-五氧代二十二氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-10-基)乙基)氨基甲酸三氟乙酸叔丁酯。分析方法2；tr＝3.17min；[m h]

＝1163.6。
[1037]
步骤4.在0℃下向(2-((4s,7s,10s,14r,16as,20as)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)-甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基-2,6,9,12,15-五氧代二十二氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-10-基)乙基)氨基甲酸三氟乙酸叔丁酯(40mg，0.034mmol)于无水二噁烷(1.72ml)中的溶液中滴加hcl(在二噁烷中的4m)(0.67ml，2.40mmol)。反应混合物变浑浊。15min后，去除冰浴然后将混合物在室温下搅拌1hr。然后将反应混合物浓缩并将所得残余物真空干燥。将粗物质溶于etoac中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。然后将水层用新鲜etoac萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到(4s,7s,10s,14r,16as,20as)-10-(2-氨基乙基)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基十六氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-2,6,9,12,15(3h)-戊酮(c6)。分析方法7；tr＝2.36min；[m h]

＝1063.7。
[1038]
实例1-5：(2s,5s,8s,13s,16r)-2-(3-氨基丙基)-16-苄基-1-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-8-(4-氯苄基)-5-(甲氧基甲基)-7,13,14-三甲基-1,4,7,11,14-五氮杂环十八烷-3,6,10,15,18-戊酮(c7)的合成
[1039][1040]
(2s,5s,8s,13s,16r)-2-(3-氨基丙基)-16-苄基-1-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-8-(4-氯苄基)-5-(甲氧基甲基)-7,13,14-三甲基-1,4,7,11,14-五氮杂环十八烷-3,6,10,15,18-戊酮(c7)使用(4s,7s,10s,14r,16as,20as)-10-(2-氨基乙基)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基十六氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-2,6,9,12,15(3h)-戊酮(c6)的合成中使用的程序的方法获得，不同之处在于用ps-(2-氯三苯甲基)(4s,7s,12s,15r)-4-氨基-15-苄基-7-(4-氯苄基)-6,12,13-三甲基-5,9,14-三氧代-2-氧杂-6,10,13-三氮杂十七烷-17-酸酯(ab4)替换ps-(2-氯三苯甲基)(r)-4-(((1s,2s)-2-((s)-3-((s)-2-氨基-3-甲氧基-n-甲基丙酰胺基)-4-(4-氯苯基)丁酰胺基)环己基)(甲基)氨基)-3-苄基-4-氧代丁酸酯(ab5)并且用(s)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)戊酸(int-g2)替换(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)。分析方法7；tr＝1.18min；[m h]

＝1038.4。
[1041]
实例1-6：(4s,7s,10s,14r,16as,20as)-10-(3-氨基丙基)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基十六氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-2,6,9,12,15(3h)-戊酮(c8)的合成
[1042][1043]
(4s,7s,10s,14r,16as,20as)-10-(3-氨基丙基)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基十六氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-2,6,9,12,15(3h)-戊酮(c8)使用(4s,7s,10s,14r,16as,20as)-10-(2-氨基乙基)-14-苄基-11-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-4-(4-氯苄基)-7-(甲氧基甲基)-5,16-二甲基十六氢苯并[l][1,4,7,11,14]五氮杂环十八炔-2,6,9,12,15(3h)-戊酮(c6)的
基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-8-(4-氯苄基)-5-(甲氧基甲基)-2,7,14-三甲基-3,6,10,15,18-五氧代-1,4,7,11,14-五氮杂环十八烷-13-基)丁基)-2-硝基苯磺酰胺(ab6)(532mg，0.271mmol，64.5％)于dmf(15ml)中的溶液中添加2-巯基乙醇(0.115ml，1.628mmol)和dbu(0.082ml，0.543mmol)并将所得混合物在室温下搅拌30min，然后通过添加acoh(0.4ml)淬灭，并真空浓缩至干。将粗产物通过制备型反相hplc(洗脱剂a：在h2o中的0.1％tfa和洗脱剂b：acn)纯化。将纯级分合并并冻干，得到(2s,5s,8s,13s,16r)-13-(4-氨基丁基)-16-苄基-1-(4-氯-2-(4-(1-甲基-2-(吡咯烷-1-基甲基)-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-8-(4-氯苄基)-5-(甲氧基甲基)-2,7,14-三甲基-1,4,7,11,14-五氮杂环十八烷-3,6,10,15,18-戊酮三氟乙酸酯(c10)。分析方法9；tr＝3.85min；[m h]

＝1078.5。
[1050]
实例1-9：(3r,7s,10s,13r)-7-(2-氨基乙基)-3-苄基-6-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-13-(4-氯苄基)-10-(羟基甲基)-1,6,9,12-四氮杂双环[11.3.1]十七烷-2,5,8,11-四酮(c11)的合成
[1051][1052]
步骤1：向fmoc-ser(otbme2si)oh(548mg，1.242mmol)于dma(5ml)中的溶液中添加hatu(455mg，1.197mmol)和dipea(0.789ml，4.52mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2min，然后添加到(r)-4-((r)-3-氨基-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-3-苄基-4-氧代丁酸甲酯(int-f3)(484mg，1.129mmol)于dma(3ml)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌6h。添加另外
的fmoc-ser(otbme2si)oh(88mg，0.200mmol)和hatu(76mg，0.20mmol)，并在室温下继续搅拌过夜。添加4-甲基哌啶(0.8ml，6.77mmol)，并在室温下继续搅拌30分钟。将反应混合物减压浓缩(浴温50℃)并将残余物通过反向快速柱色谱法(用含0.1％nh4oh的5％-90％水/acn洗脱)纯化，得到(r)-4-((r)-3-((s)-2-氨基-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰胺基)-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-3-苄基-4-氧代丁酸甲酯。分析方法7，tr＝1.41min，[m h]

＝630.5。
[1053]
步骤2：向(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)(449mg，0.785mmol)和(r)-4-((r)-3-((s)-2-氨基-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰胺基)-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-3-苄基-4-氧代丁酸甲酯(450mg，0.714mmol)于dma(5ml)中的溶液中添加dipea(0.374ml，2.142mmol)。将所得溶液在室温下搅拌2min，然后添加hatu(299mg，0.785mmol)于dma(3ml)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h。添加另外的(s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酸(int-g1)(88mg，0.14mmol)和hatu(76mg，0.20mmol)并在室温下继续搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩并将残余物通过快速柱色谱法(用含0.3％三乙胺的98/2至85/15dcm/meoh洗脱)纯化，得到(r)-3-苄基-4-((r)-3-((s)-2-((s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酰胺基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰胺基)-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸甲酯。分析方法7，tr＝1.55min，[m h]

＝1184.1。
[1054]
步骤3：向(r)-3-苄基-4-((r)-3-((s)-2-((s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酰胺基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰胺基)-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸甲酯(770mg，0.65mmol)于dma(5ml)中的溶液中添加水(1ml)和thf(4ml)。将所得混合物在室温下搅拌，然后添加lioh(1.300ml，1.300mmol)的溶液。将反应混合物在室温下搅拌3h。添加另外的lioh(1.300ml，1.300mmol)，并在室温下继续搅拌过夜(lcms表明期望产物以及脱甲硅烷基醇r＝h的混合物)。将反应混合物在冰浴中冷却，通过添加1n hcl中和ph(ph＝7)，然后减压浓缩(浴保持在30℃)。将残余物吸收在250ml etoac中。将有机相用水和盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到(r)-3-苄基-4-((r)-3-((s)-2-((s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酰胺基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰胺基)-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸。分析方法5，tr＝1.97min，[m h]

＝1055.1。
[1055]
步骤4：向含有(r)-3-苄基-4-((r)-3-((s)-2-((s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-((4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)氨基)丁酰胺基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙酰胺基)-3-(4-氯苄基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(770mg，0.658mmol)于dcm(700ml)中的溶液的1l圆底烧瓶中添加2,6-卢剔啶(2.3ml，19.74mmol)、hoat(107mg，0.790mmol)和hatu(1001mg，2.63mmol)。将所得混合物在38℃下搅拌16hr。然后将反应混合物减压浓缩至干，并将残余物在etoac(400ml)和5％nahco3水溶液(30ml)之间分配。将有机相用5％nahco3水溶液(2
×
25ml)和盐水(30ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。将粗物质通过反向快速柱色谱法(用含0.1％三氟乙酸的5％-60％水/acn
洗脱)纯化，得到(2-((3r,7s,10s,13r)-3-苄基-6-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-13-(4-氯苄基)-10-(羟基甲基)-2,5,8,11-四氧代-1,6,9,12-四氮杂双环[11.3.1]十七烷-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。分析方法2，tr＝3.22min，[m h]

＝1039.4。
[1056]
步骤5：向含有在无水二噁烷(6ml)中的(2-((3r,7s,10s,13r)-3-苄基-6-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-13-(4-氯苄基)-10-(羟基甲基)-2,5,8,11-四氧代-1,6,9,12-四氮杂双环[11.3.1]十七烷-7-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(320mg，0.308mmol)并在冰浴中冷却的圆底烧瓶中添加在二噁烷(2ml，8.00mmol)中的4.0n氯化氢。然后将冰浴去除并将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩，得到灰白色固体，将其通过反向快速柱色谱法(用含0.1％三氟乙酸的5％-50％水/acn洗脱)纯化，得到(3r,7s,10s,13r)-7-(2-氨基乙基)-3-苄基-6-(4-氯-2-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)-1-甲基-1h-咪唑-5-基)苯氧基)苄基)-13-(4-氯苄基)-10-(羟基甲基)-1,6,9,12-四氮杂双环[11.3.1]十七烷-2,5,8,11-四酮(c11)。分析方法3，tr＝1.23min，[m h]

＝937.6。
[1057]
实例2：fhr3受体配体化合物(c12)至(c16)的合成
[1058]
实例2-1：2-((3s,6s,9r,15s,18s,21s,24s,27s,30s,33s,39s,42s,50as)-3,30-双(2-氨基-2-氧代乙基)-9-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-27-(4-氨基丁基)-6,15,21-三苄基-18,39-双(3-胍基丙基)-33-(4-羟基苄基)-24-(羟基甲基)-5,20,35-三甲基-1,4,7,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43-十四氧代-1,3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,45,50,50a-四十四氢-2h-[1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十四氮杂环四十五烯并[13,12-b]异喹啉-42-基)乙酸(c12)的合成
[1059][1060]
注意：化合物(c12)具有以下氨基酸序列：
[1061][1062]
步骤1：f-r-f(n-me)-s(tbu)-k-n-y(tbu)-g(n-me)-r-d(tbu)-tic-n-f(n-me)-c(trt)-g-nh树脂(1-1b)
[1063]
肽序列2-1b在fmoc-gly-ram tentagel
tm
树脂(2-1a，0.22mmol/g载量，0.25mmol规模)上在肽合成仪上按照一般肽合成循环a-1(fmoc-氨基酸(4当量；在dmf中的0.2m溶液)、hatu(4当量；在dmf中的0.5m溶液)和dipea(4.4当量；在nmp中的2m溶液))合成。然后将树脂过滤并用dmf(2x)和dcm(3x)洗涤，得到期望产物2-1b。
[1064]
步骤2：clch2c(＝o)-f-r-f(n-me)-s(tbu)-k-n-y(tbu)-g(n-me)-r-d(tbu)-tic-n-f(n-me)-c(trt)-g-nh树脂(1-1d)
[1065]
将n-琥珀酰亚胺基2-氯乙酸酯(2-1c，287mg，1.5mmol)于nmp(8ml)中的溶液添加到来自步骤1的肽树脂2-1b(0.25mmol)中并将所得混合物在室温下振荡过夜。然后将树脂排干，用dmf(3x)和dcm(4x)洗涤，并干燥，得到期望产物2-1d。
[1066]
步骤3：clch2c(o)-f-r-f(n-me)-s-k-n-y-g(n-me)-r-d-tic-n-f(n-me)-c-g-nh2(1-1e)
[1067]
将来自步骤2的肽树脂产物2-1d从树脂切割并同时使用上文所述的切割方法1脱保护，得到粗肽2-1e。
[1068]
步骤4：2-((3s,6s,9r,15s,18s,21s,24s,27s,30s,33s,39s,42s,50as)-3,30-双(2-氨基-2-氧代乙基)-9-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-27-(4-氨基丁基)-6,15,21-三苄基-18,39-双(3-胍基丙基)-33-(4-羟基苄基)-24-(羟基甲基)-5,20,35-三甲基-1,4,7,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43-十四氧代-1,3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,14,
15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,45,50,50a-四十四氢-2h-[1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十四氮杂环四十五烯并[13,12-b]异喹啉-42-基)乙酸(c12)
[1069]
将来自步骤3的粗肽1-2e(266mg)溶于dmso(20.5ml)中。添加几滴tea，得到ph 8-9。将所得混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物在离心蒸发器上浓缩到几ml dmso中。将粗环肽通过制备型hplc(sunfire
tm prep c18柱，5μm，30
×
50mm，6min内15％-40％，75ml/min，在水中的acn，含0.1％tfa)纯化然后冻干，得到目标环肽化合物(c12)(seq id no:5)。分析方法9：tr＝3.24，m 1＝1951.20
[1070]
实例2-2：2-((3s,6s,9r,15s,18s,21s,24s,27s,30s,33s,36s,39s,44as)-30-((1h-咪唑-5-基)甲基)-33-((1h-吲哚-3-基)甲基)-9-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-18-(4-氨基丁基)-15-苄基-6,39-双(3-胍基丙基)-24-(羟基甲基)-27-异丁基-20,21,35,36-四甲基-1,4,7,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40-十三氧代四十二氢-12h-吡咯并[1,2-e1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-3-基)乙酸(c13)的合成
[1071][1072]
注意：化合物(c13)具有以下氨基酸序列：
[1073][1074]
环肽化合物(c13)(seq id no:6)使用如实例2-1中所述的类似方法获得，但在步骤1中代替肽序列2-4b合成附接到树脂上的肽序列。分析方法9：tr＝
3.01，m 1＝1710.98
[1075]
实例2-3：2-((3s,6s,9r,15s,18s,21s,24s,27s,30s,33s,36s,39s,42s,50as)-3,30-双(2-氨基-2-氧代乙基)-9-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-36-(4-氨基丁基)-6,15,21-三苄基-18,39-双(3-胍基丙基)-33-(4-羟基苄基)-24-(羟基甲基)-27-异丙基-5,20-二甲基-1,4,7,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43-十四氧代-1,3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,45,50,50a-四十四氢-2h-[1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十四氮杂环四十五烯并[13,12-b]异喹啉-42-基)乙酸(c14)的合成
[1076][1077]
注意：化合物(c14)具有以下氨基酸序列：
[1078][1079]
环肽化合物(c14)(seq id no:7)使用如实例2-1中所述的类似方法获得，但在步骤1中代替肽序列2-4b合成附接到树脂上的肽序列。分析方法9：tr＝3.35，m 1＝1979.25
[1080]
实例2-4：2-((3r,6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,30s,33s,36s,39s)-24-((1h-咪唑-5-基)甲基)-21-((1h-吲哚-3-基)甲基)-3-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-12-(4-氨基丁基)-36,39-二苄基-6,15-双(3-胍基丙基)-30-(羟基甲基)-27-异丁基-18,19,33,34,37-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41-十三氧代-1-硫杂-4,
7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40-十三氮杂环四十二烷-9-基)乙酸(c15)的合成
[1081][1082]
注意：化合物(c15)具有以下氨基酸序列：
[1083][1084]
环肽化合物(c15)(seq id no:8)使用如实例2-1中所述的类似方法获得，但在步骤1中代替肽序列2-4b合成附接到树脂上的肽序列。分析方法9：tr＝3.35，m 1＝1775.07
[1085]
实例2-5：2,2'-((3s,6s,9r,15s,18s,21s,24s,27s,30s,33s,39s,42s,50as)-9-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-42-(4-氨基丁基)-6,15,21-三苄基-18,39-双(3-胍基丙基)-33-(4-羟基苄基)-24-(羟基甲基)-27-异丙基-5,20,35-三甲基-1,4,7,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43-十四氧代-1,3,4,5,6,7,8,9,10,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,45,50,50a-四十四氢-2h-[1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43]十四氮杂环四十五烯并[13,12-b]异喹啉-3,30-二基)二乙酰胺(c16)的合成
[1086][1087]
注意：化合物(c16)具有以下氨基酸序列：
[1088][1089]
环肽化合物(c16)(seq id no:9)使用如实例2-1中所述的类似方法获得，但在步骤1中代替肽序列2-4b合成附接到树脂上的肽序列。分析方法9：tr＝3.45，m 1＝1935.24
[1090]
实例3：asgpr受体配体和m6p受体配体的合成
[1091]
中间体的合成
[1092]
aa型：
[1093]
5-羟基戊酸苄基酯(int-aa1)的合成
[1094][1095]
步骤1：在0℃下向二氢-2h-吡喃-2,6(3h)-二酮(20g，175.44mmol)和bnoh(20.8g，192.98mmol)于dcm(150ml)中的溶液中添加dmap(0.32g，2.62mmol)和et3n(29ml，210.5mmol)。将反应混合物升温至室温并继续搅拌两天。将反应混合物蒸发至干并将所得残余物溶于dcm(200ml)中，用3m hcl(100ml
×
2)洗涤。将有机层经无水na2so4干燥并浓缩。
将残余物通过硅胶柱色谱法(洗脱：pe:ea＝20:1-10:1)纯化，得到5-(苄基氧基)-5-氧代戊酸，为无色油状物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 7.38-7.28(m,5h),5.12(s,2h),2.46-2.40(m,4h),2.00-1.93(m,2h)。
[1096]
步骤2：在0℃下在n2保护下向5-(苄基氧基)-5-氧代戊酸(30g，135.1mmol)于thf(200ml)中的溶液中滴加bh
3-s(ch3)2(20.2ml，202.7mmol)。将混合物升温至室温并搅拌16小时。tlc显示起始材料被完全消耗。将反应用h2o(8ml)小心淬灭。将所得混合物过滤并将滤液浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(洗脱：pe:ea＝20:1-2:1)洗脱，得到5-羟基戊酸苄酯(int-aa1)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 7.41-7.33(m,5h),5.14(s,2h),3.66(t,2h,j＝6hz),2.43(t,2h,j＝7.2hz),1.80-1.73(m,2h),1.65-1.58(m,2h)。
[1097]
3-((6-叠氮己基)氧基)-2-羟基-3-((1-羟基-3-氧代丙烷-2-基)氧基)丙醛(int-aa2)的合成
[1098][1099]
向在乙腈(2ml)和水(0.5ml)中的(3r,4r,5r,6r)-2-((6-叠氮己基)氧基)-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三醇(参见hwu,jih ru；hsu,chuan-i；hsu,ming-hua；liang,yu-chuan；huang,ru chih c.；lee,yuan c.bioorganic and medicinal chemistry letters[生物有机与药物化学快报],2011,第21卷,第1期,第380-382页)(40mg，0.131mmol)中添加在二氧化硅上的高碘酸钠(420mg，0.197mmol)。将混合物在室温下搅拌4h，过滤然后通过反相快速色谱法纯化，得到3-((6-叠氮己基)氧基)-2-羟基-3-((1-羟基-3-氧代丙烷-2-基)氧基)丙醛(int-aa2)。分析方法7：tr＝0.80min，ms m/z 326.2[m na] 。
[1100]
bb型：
[1101]
(2r,3r,4r,5r,6r)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((5-((2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基)-5-氧代戊基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(int-bb1)的合成
[1102]
[1103]
步骤1：在0℃下向(2r,3r,4r,5r)-2-氨基-3,4,5,6-四羟基己醛盐酸盐(100.0g，0.132mol)于吡啶(1l)中的溶液中添加乙酸酐(473g，4.64mol)。将反应混合物在室温下搅拌72小时。将所得沉淀物收集并用h2o(200ml
×
2)洗涤，真空干燥，得到(3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2h-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 5.68(d,1h,j＝8.8hz),5.46(d,1h,j＝9.2hz),5.35(d,1h,j＝3.2hz),5.07(dd,1h,j1＝11.2hz,j2＝3.2hz),4.47-4.39(m,1h),4.18-4.07(m,2h),4.02-3.98(m,1h),2.16(s,3h),2.11(s,3h),2.03(s,3h),2.00(s,3h),1.93(s,3h)。
[1104]
步骤2：向冷却至0℃的(3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2h-吡喃-2,4,5-三基三乙酸酯(100g，0.257mol)于1,2-二氯乙烷(500ml)中的溶液中添加tmsotf(85.5g，0.385mol)，将混合物搅拌10min，然后加热至50℃并搅拌3小时。tlc显示起始材料被完全消耗。冷却后，将所得混合物在0℃下用饱和nahco3水溶液(1000ml)处理，用dcm(500ml
×
2)萃取。将合并的有机层经na2so4干燥并浓缩。将残余物在高真空下干燥过夜，得到(3ar,5r,6r,7r,7ar)-5-(乙酰氧基甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5h-吡喃并[3,2-d]噁唑-6,7-二基二乙酸酯。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 6.00(d,1h,j＝2.8hz),5.47-5.46(m,1h),4.93-4.90(m,1h),4.27-4.18(m,2h),4.13-4.09(m,1h),4.02-3.98(m,1h),2.13(s,3h),2.07(s,6h),2.06(s,3h)。
[1105]
步骤3：将(3ar,5r,6r,7r,7ar)-5-(乙酰氧基甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5h-吡喃并[3,2-d]噁唑-6,7-二基二乙酸酯(65g，197.4mmol)和5-羟基戊酸苄酯(int-aa1)(41g，197.4mmol)溶于dcm(600ml)中。添加分子筛(50g)，将反应搅拌30min，并添加tmsotf(6.5g，29.6mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。tlc显示起始材料被完全消耗。将反应混合物过滤以去除分子筛。将滤液用饱和nahco3水溶液(500ml)处理并用dcm(500ml
×
2)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(洗脱：pe:ea＝2:1-1:2)纯化，得到(2r,3r,4r,5r,6r)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((5-(苄基氧基)-5-氧代戊基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 7.37-7.32(m,5h),5.60(d,1h,j＝8.4hz),5.35(d,1h,j＝2.4hz),5.25(dd,1h,j1＝11.6hz,j2＝3.6hz),5.11(s,2h),4.63(d,1h,j1＝8.4hz),4.15-4.11(m,2h),3.98-3.86(m,3h),3.55-3.45(m,1h),2.41-2.36(m,2h),2.14(s,3h),2.03(s,3h),2.00(s,3h),1.91(s,3h),1.72-1.55(m,4h)。
[1106]
步骤4：将(2r,3r,4r,5r,6r)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((5-(苄基氧基)-5-氧代戊基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(90g，167.4mmol)溶于etoac(250ml)和meoh(250ml)的混合物中，然后添加湿pd/c(4.5g，10％)。将反应混合物脱气并用气球重新填h2，然后搅拌过夜。tlc显示起始材料被完全消耗。将反应混合物过滤并将滤液浓缩至干，得到5-(((2r,3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-4,5-二乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)戊酸。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 5.95(d,1h,j＝8.4hz),5.35(d,1h,j＝2.4hz),5.25(dd,1h,j1＝11.6hz,j2＝3.6hz),4.66(d,1h,j1＝8hz),4.16-4.11(m,2h),4.01-3.90(m,3h),3.56-3.49(m,1h),2.40-2.34(m,2h),2.16(s,3h),2.06(s,3h),2.01(s,3h),1.98(s,3h),1.72-1.55(m,4h)。
[1107]
步骤5：向5-(((2r,3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-4,5-二乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)戊酸(69g，154.2mmol)和nhs-oh(19.5g，169.62mmol)于dcm
(600ml)中的溶液中添加dic(19.4g，154.2mmol)和dmap(36mg，0.29mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。tlc显示起始材料被完全消耗。将所得混合物过滤并将滤液浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(洗脱：pe:ea＝2:1-1:4)纯化，得到(2r,3r,4r,5r,6r)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((5-((2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基)-5-氧代戊基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(int-bb1)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 5.83(d,1h,j＝8.4hz),5.33(d,1h,j＝2.4hz),5.25(dd,1h,j1＝11.6hz,j2＝3.6hz),4.67(d,1h,j1＝8hz),4.13-4.07(m,2h),4.00-3.87(m,3h),2.86-2.82(m,4h),2.73-2.55(m,2h),2.14(s,3h),2.02(s,3h),1.97(s,3h),1.91(s,3h),1.72-1.55(m,4h)。
[1108]
(1s,2r,3r,4r,5s)-4-氨基-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-2,3-二醇(int-bb2)的合成
[1109][1110]
步骤1：将(2r,3r,4r)-2-(羟基甲基)-3,4-二氢-2h-吡喃-3,4-二醇(500g，3.42mol)和吡啶(1.93l，23.95mol)的混合物在20℃下搅拌30min。然后冷却至0℃，然后滴加ac2o(1.12l，11.97mol)，同时将温度保持在5℃与15℃之间。将反应混合物在n2下在20℃下进一步搅拌2小时，冷却至0℃，用冰-水(1l)淬灭，然后首先用mtbe(3
×
1.2l)萃取，然后用ea(2
×
1l)萃取。将合并的有机层用0.5n hcl(3
×
1l)、饱和nahco3(1l)然后盐水(1l)洗涤。然后将合并的水层用etoac(3l)萃取并将有机层用0.5n hcl(3
×
1l)、饱和nahco3(1l)然后盐水(1l)洗涤。将所有有机层合并并经na2so4干燥，过滤并在35℃下真空浓缩，得到(2r,3r,4r)-2-(乙酰氧基甲基)-3,4-二氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯。1h nmr:(cdcl
3 400mhz)δ1.98-2.14(m,9h)4.17-4.33(m,3h)4.71(ddt,j＝5.00,2.61,1.27,1.27hz,1h)5.41(dd,j＝4.34,1.65hz,1h)5.51-5.57(m,1h)6.45(d,j＝6.24hz,1h)。
[1111]
步骤2：将溶于mecn(2l)中的(2r,3r,4r)-2-(乙酰氧基甲基)-3,4-二氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(900g，3.31mol，1当量)溶液添加到mecn(16l)中，伴随在n2流下搅动
(300rpm)，然后将混合物在n2下冷却至-15℃。将nan3(429.82g，6.61mol，2当量)分批添加到反应混合物中，同时同样在温和的n2流下将温度保持在-15℃与-10℃之间。将硝酸铈铵(5.44kg，9.92mol)在搅动(350rpm)下分6次在3小时内添加到反应混合物中，同时在温和的n2流下将温度保持在-15℃与-10℃之间。然后将反应混合物在n2下在-15℃与-10℃之间的温度下搅拌4hr，然后分两批添加mtbe(10l)。将h2o(10l)在n2流下在-5℃与0℃之间的温度下小心添加到反应混合物中，并将混合物在0℃下搅拌30min，然后在室温(25℃)下静置16小时。将混合物分离并将有机层用h2o(8
×
10l)洗涤，然后经na2so4干燥，过滤并在20-25℃下真空浓缩，得到(2r,3r,4r,5r,6r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-叠氮-6-(硝基氧基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯，将其直接用于下一步骤。
[1112]
步骤3：将(2r,3r,4r,5r,6r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-叠氮-6-(硝基氧基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(1140g，3.03mol)于meoh(8l)中的溶液冷却至0℃，然后添加naome(1.1m，1.60l)，同时将温度保持在0℃与5℃之间。然后将反应混合物在0℃与5℃之间的温度下搅拌2小时。然后添加树脂(h )(500g)并将反应混合物进一步搅拌30min。将反应混合物过滤并将滤饼用meoh(2l)冲洗。在室温(25℃)下用meoh(2l)研磨30min并过滤(重复4x)。将所有滤液合并并在35℃下真空浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱色谱法(dcm:meoh＝50:1～30:1)纯化，得到(2r,3r,4r,5r)-5-叠氮-2-(羟基甲基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-3,4-二醇。
[1113]
步骤4：在25℃下将在吡啶(589.17ml，7.30mol)中的(2r,3r,4r,5r)-5-叠氮-2-(羟基甲基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-3,4-二醇(320g，1.46mol)添加到dcm(3.2l)中。将混合物冷却至0℃并在0℃与5℃之间的温度下搅拌30min。然后滴加tmscl(634.42g，5.84mol，741.14ml，4当量)并将所得白色悬浮液在5℃与10℃之间的温度下搅拌1小时。将浆液用饱和nh4cl(1.5l)淬灭，搅拌10min，静置5min，然后分离。将dcm层用nh4cl(1.5l
×
4)和h2o(1.5l
×
5)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在35℃下真空浓缩，得到(((2r,3s,4r,5r)-5-叠氮-6-甲氧基-2-(((三甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基)双(氧基))双(三甲基硅烷)，将其直接用于下一步骤。
[1114]
步骤5：在-10℃与-5℃之间的温度下在n2下向在meoh(3.5l)中的(((2r,3s,4r,5r)-5-叠氮-6-甲氧基-2-(((三甲基甲硅烷基)氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基)双(氧基))双(三甲基硅烷)(580.00g，1.33mol)中滴加溶于meoh(160ml)中的k2co3(1.84g，13.31mmol，0.01当量)并将反应混合物搅拌30min。然后将反应混合物用acoh(1.84g)酸化至ph约6，浓缩然后添加etoac(6l)。将混合物用h2o(3l
×
2)、盐水(3l)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶柱色谱法(石油醚:etoac＝30:1～5:1)纯化，得到((2r,3s,4r,5r)-5-叠氮-6-甲氧基-3,4-双((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)甲醇。
[1115]
步骤6：将戴斯-马丁试剂(cas号：87413-09-0)(346.49g，816.93mmol)在3小时内分批添加到((2r,3s,4r,5r)-5-叠氮-6-甲氧基-3,4-双((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)甲醇(270g，742.66mmol)于dcm(6l)中的溶液中。将反应混合物在8℃下搅拌1小时，倾倒入搅拌的饱和nahco3(4l)中然后分离。将水层用dcm(1l)萃取并将有机层用饱和nahco3(4l
×
2)、h2o(4l
×
2)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到(2s,3s,4r,5r)-5-叠氮-6-甲氧基-3,4-双((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-甲醛。
[1116]
步骤7：在室温(25℃)下向(2s,3s,4r,5r)-5-叠氮-6-甲氧基-3,4-双((三甲基甲硅烷基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-甲醛(200g，553.19mmol)于etoh(1.5l)中的溶液中添加(cho)n(497.87g，16.60mol，30当量)。将反应混合物冷却至0℃，添加在etoh中的naoet(2m，553.19ml，2当量)并将反应混合物在室温下搅拌18小时。然后将反应混合物浓缩并通过硅胶柱色谱法(dcm:meoh＝50:1～20:1)纯化，得到(3r,4r,5r)-5-叠氮-2,2-双(羟基甲基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-3,4-二醇。
[1117]
步骤8：将在硅胶(38g)上的h2so4(10.27ml，192.60mmol)添加到在mecn(600ml)中的(3r,4r,5r)-5-叠氮-2,2-双(羟基甲基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-3,4-二醇(60g，240.75mmol)中并将反应混合物加热至60℃持续1小时。然后将混合物冷却至室温，用nh4oh将ph调节至ph 7～8，浓缩并通过硅胶柱色谱法(dcm:meoh＝30:1～20:1)纯化，得到(1s,2r,3r,4r,5s)-4-叠氮-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-2,3-二醇。1h nmr:(meod 400mhz)δ3.35-3.40(m,1h)3.68-3.74(m,1h)3.77-3.85(m,2h)3.86-3.95(m,3h)5.35(d,j＝1.00hz,1h)。
[1118]
步骤9：在室温下，在ar下添加在etoh(1.2l)中的pd/c(3.63g，3.41mmol，10％纯度)和(1s,2r,3r,4r,5s)-4-叠氮-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-2,3-二醇(37g，170.37mmol)。将反应混合物用h2脱气(5x)然后在h2(20psi)下在25℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤并将滤饼用meoh:h2o(200ml
×
3，1:1)在室温(25℃)下研磨10min并再次过滤。将滤液合并并浓缩，得到(1s,2r,3r,4r,5s)-4-氨基-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-2,3-二醇(int-bb2)。1h nmr:(meod 400mhz)δ:2.75(dd,j＝9.29,1.51hz,1h)3.50(dd,j＝9.16,4.39hz,1h)3.72(q,j＝8.03hz,2h)3.79-3.85(m,2h)3.89-3.95(m,1h)5.24(d,j＝1.25hz,1h)。
[1119]
n-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-4-(羟基甲基)-2,2-二甲基六氢-4,7-环氧基[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-8-基)乙酰胺(int-bb3)的合成
[1120][1121]
步骤1：将在吡啶(280ml)中的(1s,2r,3r,4r,5s)-4-氨基-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-2,3-二醇(int-bb2)(17.7g，92.58mmol)用冰-h2o冷却至0℃，滴加ac2o(89.79g，879.53mmol)然后使其升温至室温，同时搅拌16小时。将反应混合物浓缩，用etoac(800ml)稀释，倾倒入饱和nahco3(800ml)中并分离。将水层用etoac(500ml
×
2)萃取，将合并的有机层用盐水(800ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到(1r,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-1-(乙酰氧基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-2,3-二基二乙酸酯，将其直接用于下一步骤。
[1122]
步骤2：将溶于thf(200ml)和meoh(200ml)中的(1r,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-1-(乙酰氧基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-2,3-二基二乙酸酯(30g，83.49mmol)冷却至0℃，滴加naome(3m，27.83ml)并将反应混合物升温至室温，同时在n2下搅拌30min。将反应混合物冷却至0℃，添加分批树脂(h )ir 120(20g，aldrich：cas号：39389-20-3)然后升
温至室温，同时搅拌1小时。将混合物过滤并用meoh(500ml
×
3)洗涤滤饼。将合并的滤液浓缩并将粗产物通过硅胶柱色谱法(dcm:meoh＝30:1～10:1)纯化，得到n-((1s,2r,3r,4r,5s)-2,3-二羟基-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺。1h nmr:(meod 400mhz)δ2.01(s,3h)3.35-3.41(m,1h)3.68-3.85(m,4h)3.88-3.99(m,3h)5.24(d,j＝1.51hz,1h)。
[1123]
步骤3：将dmp(26.79g，257.27mmol，31.52ml，6当量)和csa(3.98g，17.15mmol，0.4当量)添加到在dmf(150ml)中的n-((1s,2r,3r,4r,5s)-2,3-二羟基-1-(羟基甲基)-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺(10g，42.88mmol，1当量)中并将混合物加热至60℃并在n2下搅拌20小时。使反应混合物冷却至室温，添加无水meoh(20ml)，将混合物搅拌30min然后添加et3n(5ml)。将反应混合物浓缩并将粗产物通过柱色谱法(dcm:meoh＝50:1～20:1)纯化，得到n-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-4-(羟基甲基)-2,2-二甲基六氢-4,7-环氧基[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-8-基)乙酰胺(int-bb3)。1h nmr:(meod400mhz)δ1.36(s,3h)1.50(s,3h)2.00(s,3h)3.77-3.96(m,5h)4.15-4.22(m,1h)4.32(d,j＝5.77hz,1h)5.25(d,j＝2.01hz,1h)。
[1124]
1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)丙-2-胺(int-bb4)的合成
[1125][1126]
步骤1：在30min内向2-氨基-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(15g，123.83mmol)于meoh(75ml)和t-buoh(75ml)中的悬浮液中添加boc2o(35.13g，160.98mmol，36.98ml，1.3当量)于t-buoh(25ml)中的溶液并将混合物搅拌3小时。在25℃下向混合物中添加石油醚(500ml)，搅拌30min并过滤。将滤饼用石油醚(200ml
×
3)洗涤然后真空干燥，得到(1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。1h nmr:(dmso 400mhz)δ1.38(s,9h)3.52(d,j＝5.75hz,6h)4.51(t,j＝5.62hz,3h)5.78(br s,1h)
[1127]
步骤2：向(1,3-二羟基-2-(羟基甲基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(17g，76.84mmol，1当量)于dmf(150ml)中的溶液中添加3-溴丙-1-炔(45.70g，307.34mmol)和koh(22.42g，399.55mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物用mtbe(200ml)和h2o(200ml)稀释，然后分离，并将水层用mtbe(100ml
×
2)萃取。将合并的有机物用盐水(150ml
×
2)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，并将粗产物
[1128]
通过柱色谱法(石油醚:etoac＝15:1～10:1)纯化，得到化合物(1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。1h nmr:(cdcl
3 400mhz)δ1.41(s,9h)2.42(t,j＝2.38hz,3h)3.77(s,6h)4.14(d,j＝2.51hz,6h)4.92(br s,1h)。
[1129]
步骤3：向(1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(10g，29.82mmol)于dcm(450ml)中的溶液中滴加hcl/二噁烷(4m，52.18ml)
并将所得溶液在室温(30℃)下搅拌18小时。将混合物真空浓缩，得到残余固体，将其用dcm:ea:pe(10ml:70ml:70ml)在室温(30℃)下研磨2小时并过滤。将滤饼用etoac(40ml)和石油醚(40ml
×
2)冲洗，然后在45℃下真空干燥2小时，得到1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)丙-2-胺(int-bb4)。1h nmr:(meod 400mhz)δ2.99(t,j＝2.38hz,3h)3.75(s,6h)4.28(d,j＝2.51hz,6h)。ms:(esi)m/z＝236.1[m h]

。
[1130]
1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)丙-2-胺(int-bb5)的合成
[1131][1132]
步骤1：在室温(25℃)下向(1,3-二羟基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(25g，130.74mmol)于thf(200ml)中的溶液中添加tbai(7.24g，19.61mmol)、nai(3.92g，26.15mmol)和3-溴丙-1-炔(68.04g，457.58mmol)。将混合物冷却至10℃，在30min内分批添加koh(14.67g，261.47mmol，2当量)，然后将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用etoac(200ml)和h2o(250ml)稀释，分离并将水层用etoac(200ml
×
2)萃取。将合并的有机物用盐水(300ml
×
2)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过柱色谱法(石油醚:etoac＝15:1～10:1)纯化，得到(1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。1h nmr:(cdcl
3 400mhz)δ1.40-1.49(m,9h)2.45(t,j＝2.38hz,2h)3.53-3.67(m,4h)3.87-3.99(m,1h)4.16(d,j＝2.32hz,4h)4.93(br d,j＝6.36hz,1h)。
[1133]
步骤2：在n2下在0-5℃下向(1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(10g，37.41mmol)于dcm(45ml)中的溶液中滴加hcl/二噁烷(4m，66.67ml)并将溶液在室温下搅拌18小时。将混合物浓缩，得到残余固体，将其用dcm:etoac:石油醚(10ml:70ml:70ml)在室温(30℃)下研磨2小时并过滤。将滤饼用etoac(40ml)和石油醚(40ml
×
2)冲洗，然后在45℃下真空干燥2小时，得到1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)丙-2-胺(int-bb5)。1h nmr:(meod 400mhz)δ2.99(t,j＝2.38hz,2h)3.58-3.65(m,1h)3.67-3.77(m,2h)3.78-3.84(m,2h)4.28(d,j＝2.26hz,4h)。ms:(esi)m/z＝168.1[m h]

。
[1134]
cc型：
[1135]
中间体(int-cc1)的合成
[1136][1137]
步骤1：在20℃下将naoh水溶液(3.2ml，5m)添加到2-氨基-2-(羟基甲基)丙烷-1,3-二醇(20g，165.28mmol)于dmso(32ml)中的混合物中，然后滴加丙烯酸叔丁脂(74g，578.48mmol)。将混合物在20℃下搅拌24小时。将所得混合物用etoac(1l)稀释，用h2o(800ml)洗涤。将有机层经na2so4干燥并浓缩，得到粗3,3'-((2-氨基-2-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁脂，将其直接用于下一步骤。tr＝1.308min，[m h] 506.3
[1138]
步骤2：将nahco3水溶液(1l)添加到3,3'-((2-氨基-2-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁脂(160g，316.20mmol，粗品)于etoac(1l)中的溶液中，然后滴加氯甲酸苄酯(53.9g，316.20mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3
小时。tlc显示反应完成。将有机层分离，用h2o(500ml)洗涤，经na2so4干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(洗脱：pe:ea＝20:1至5:1)纯化，得到3,3'-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁脂。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 7.36-7.26(m,5h),5.29(brs,1h),5.02(s,2h),3.65-3.61(m,12h),2.43(t,6h,j＝6.4hz),1.43(s,27h)。
[1139]
步骤3：将3,3'-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-((3-(叔丁氧基)-3-氧代丙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸二叔丁脂(37g，57.83mmol)于甲酸(100ml)中的溶液在室温下搅拌8小时。将所得混合物浓缩至干，得到3,3'-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-((2-羧基乙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 7.39-7.30(m,5h),5.35(brs,1h),5.06(s,2h),3.71-3.65(m,12h),2.59(t,6h,j＝6.8hz)。
[1140]
步骤4：向3,3'-((2-(((苄基氧基)羰基)氨基)-2-((2-羧基乙氧基)甲基)丙烷-1,3-二基)双(氧基))二丙酸(27g，57.27mmol)和(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁酯(49.8g，286.34mmol)于dmf(600ml)中的混合物中添加hobt(38.6g，286.34mmol)、edci(54.9g，286.34mmol)和et3n(28.9g，286.34mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6小时。tlc显示反应完成。将所得混合物用h2o(1l)稀释，用dcm(800ml
×
3)萃取。将合并的有机层用nh4cl水溶液(1l)洗涤，经na2so4干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(洗脱：dcm:meoh＝50:1-20:1)纯化，得到(10-(13,13-二甲基-5,11-二氧代-2,12-二氧杂-6,10-二氮杂十四烷基)-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-1,10,19-三基)三氨基甲酸苄基二叔丁酯。1h nmr(400mhz,cdcl3)δppm 7.37-7.29(m,5h),6.85(brs,3h),5.55(brs,1h),5.14(brs,3h),5.02(s,2h),3.69-3.64(m,12h),3.31-3.23(m,6h),3.15-3.08(m,6h),2.43-2.36(m,6h),1.65-1.56(m,6h),1.42(s,27h)。
[1141]
步骤5：向(10-(13,13-二甲基-5,11-二氧代-2,12-二氧杂-6,10-二氮杂十四烷基)-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-1,10,19-三基)三氨基甲酸苄基二叔丁酯(35g，37.23mmol)于meoh(500ml)中的溶液中添加hcl于1,4-二噁烷(46ml，186.17mmol，4m)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将所得混合物浓缩至干，得到(1,19-二氨基-10-((3-((3-氨基丙基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-10-基)氨基甲酸苄酯的hcl盐。1h nmr(400mhz,meod)δppm 7.41-7.32(m,5h),5.06(s,2h),3.70-3.64(m,12h),3.33-3.29(m,6h),2.97-2.93(m,6h),2.48-2.45(m,6h),1.88-1.82(m,6h)。
[1142]
步骤6：向(1,19-二氨基-10-((3-((3-氨基丙基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-5,15-二氧代-8,12-二氧杂-4,16-二氮杂十九烷-10-基)氨基甲酸苄酯(10g，13.35mmol)和dipea(17.2g，133.5mmol)于dmf(250ml)中的混合物中添加(2r,3r,4r,5r,6r)-5-乙酰胺基-2-(乙酰氧基甲基)-6-((5-((2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基)-5-氧代戊基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4-二基二乙酸酯(int-bb1)(24g，44.05mmol)的溶液。将反应混合物在室温下搅拌12小时。tlc显示反应完成。将所得混合物用h2o(500ml)稀释，用dcm(300ml
×
3)萃取。将合并的有机层用hcl水溶液(300ml，4m)洗涤，经na2so4干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(洗脱：dcm:meoh＝30:1-15:1)纯化，得到中间体(int-cc1)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 7.85-7.80(m,6h),7.72(brs,3h),7.34-7.30(m,5h),6.52(s,1h),5.19(d,3h,j＝
五氧杂-环十五烷(15-冠-5)(30μl，2.279mmol)和naoh 12m(1ml，2.279mmol)。将混合物在50℃下搅拌16h，然后通过反相硅胶色谱法纯化，得到n-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-4-(13-叠氮-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,2-二甲基六氢-4,7-环氧基[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-8-基)乙酰胺。分析方法7：tr＝0.73min，ms m/z 475.4[m h]

。
[1149]
步骤2：在室温下向在meoh(3ml)中的n-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-4-(13-叠氮-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,2-二甲基六氢-4,7-环氧基[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-8-基)乙酰胺(608mg，1.281mmol)中添加乙酸(1ml)和水(1ml)。将混合物在70℃下搅拌16h。然后添加tsoh(441mg，2.56mmol)，并将混合物在室温下再搅拌2h。将混合物通过反相硅胶色谱法纯化，得到n-((1s,2r,3r,4r,5s)-1-(13-叠氮-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺。分析方法7：tr＝0.57min，ms m/z 435.3[m h]

。
[1150]
步骤3：在室温下向n-((1s,2r,3r,4r,5s)-1-(13-叠氮-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺(0.017ml，0.161mmol)于meoh(2ml)中的溶液中添加thpta(3mg，0.115mmol)和硫酸铜(ii)(1.5mg，9.40μmol)于75μl水中的溶液。然后添加抗坏血酸钠(2.7mg，0.115mmol)于45μl水中的溶液，并将混合物在室温下搅拌16h。将混合物真空浓缩，然后通过反相c18硅胶色谱法纯化，得到n-((1s,2r,3r,4r,5s)-1-(13-(4-((2-氨基乙氧基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺(int-cc3)。分析方法7：tr＝0.47min，ms m/z 534.4[m h]

。
[1151]
n,n'-((1s,1's,2r,2'r,3r,3'r,4r,4'r,5s,5's)-(((((2-氨基丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(亚甲基))双(1h-1,2,3-三唑-4,1-二基))双(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13,1-二基))双(2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1,4-二基))二乙酰胺(int-cc4)的合成
[1152][1153]
在室温下向n-((1s,2r,3r,4r,5s)-1-(13-叠氮-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺(参见int-cc3的合成中的步骤2)(62.4mg，0.144mmol)和1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)丙-2-胺(int-bb5)(12mg，0.072mmol)于meoh(2ml)中的溶液中添加thpta(6mg，0.072mmol)和硫酸铜(ii)(3mg，0.019mmol)于75μl水中的溶液。然后添加抗坏血酸钠(5.4mg，0.072mmol)于45μl水中的溶液，并将混合物在室温下搅拌16h。将混合物真空浓缩，然后置于-20℃直到通过反相c18硅胶色谱法纯化，得到n,n'-((1s,1's,2r,2'r,3r,3'r,4r,4'r,5s,5's)-(((((2-氨基丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(亚甲基))双(1h-1,2,3-三唑-4,1-二基))双(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13,1-二
基))双(2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1,4-二基))二乙酰胺(int-cc4)。分析方法7：tr＝0.49min，ms m/z 1036.8[m h]

。
[1154]
中间体(int-cc5)的合成
[1155][1156]
在室温下向n-((1s,2r,3r,4r,5s)-1-(13-叠氮-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺(参见int-cc3的合成中的步骤2)(62.6mg，0.144mmol)和1,3-双(丙-2-炔-1-基氧基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)丙-2-胺(int-bb4)(11.29mg，0.048mmol)于meoh(2ml)中的溶液中添加thpta(9mg，0.048mmol)和硫酸铜(ii)(4.5mg，0.028mmol)于75μl水中的溶液。然后添加抗坏血酸钠(8.1mg，0.048mmol)于45μl水中的溶液，并将混合物在室温下搅拌16h。将混合物真空浓缩，然后置于-20℃直到通过反相c18硅胶色谱法纯化，得到中间体(int-cc5)。分析方法7：tr＝0.53min，ms m/z 1539.9[m h]

。
[1157]
(((2s,3s,4s,5s,6s)-6-(((2r,3s,4s,5s,6r)-2-(((2r,3s,4s,5r,6r)-2-(4-(2-(2-(氨基氧基)乙酰基)肼基)-4-氧代丁氧基)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-3-(((2r,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-((膦酰基氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,5-二羟基四氢-2h-吡喃-4-基)氧基)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-3-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)甲基)膦酰过氧酸(int-cc6)的合成
[1158][1159]
中间体(int-cc6)使用wo 2008089403a2中描述的合成方法获得。
[1160]
(2-((2r,3s,4s,5s,6s)-6-(2-(氨基氧基)乙氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)乙基)膦酸(int-cc7)的合成
[1161][1162]
步骤1：将amberlite ir-120(90.0g，499.6mmol，1.0当量)添加到2-溴乙醇
(600.0g，4.8mol，340.9ml，9.6当量)中并在90℃下搅拌0.5h。然后添加d-( )-甘露糖(90.0g，499.6mmol，1.0当量)并将混合物在90℃下搅拌2.5h，然后过滤并浓缩。将残余物通过柱色谱法(sio2，乙酸乙酯/meoh＝20/1至7/1)纯化，得到(2s,3s,4s,5s,6r)-2-(2-溴乙氧基)-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三醇。tlc：乙酸乙酯/meoh＝5/1，rf＝0.41
[1163]
步骤2：在0℃下向(2s,3s,4s,5s,6r)-2-(2-溴乙氧基)-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三醇(50.0g，174.2mmol，1.0当量)于吡啶(400ml)中的溶液中添加tmscl(113.5g，1.04mol，132.6ml，6.0当量)。将混合物在30℃下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物用乙酸乙酯(1000ml)稀释并用h2o(1000ml)萃取。将有机层减压浓缩，得到残余物。将粗化合物2不经进一步纯化即用于下一步骤。tlc：石油醚/乙酸乙酯＝5/1，rf＝0.58
[1164]
步骤3：向化合物2(75.0g，130.3mmol，1.0当量)于meoh(300ml)中的溶液中添加k2co3(2.40g，17.4mmol，75.0ml，在meoh中的0.032m)。将混合物在0℃下搅拌1.5hr。添加acoh(0.1ml)然后将混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物通过柱色谱法(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10/1)纯化，得到化合物3。tlc：石油醚/乙酸乙酯＝5/1，rf＝0.48
[1165]
步骤4：向化合物3(55.0g，109.2mmol，1.0当量)于dcm(400ml)中的溶液中添加dmso(68.3g，873.6mmol，68.3ml，8.0当量)、et3n(33.2g，327.6mmol，45.6ml，3.0当量)和pyso3(52.1g，327.6mmol，3.0当量)。将混合物在0℃下搅拌1hr然后用乙酸乙酯(800ml
×
2)和h2o(1000ml)萃取。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物4，其不经进一步纯化即用于下一步骤。1h nmr:(400mhz cdcl3)δppm 9.62(s,1h),4.79(s,1h),3.55-4.13(m,8h),3.33-3.53(m,4h),3.09(m,1h),0.03-0.18(m,27h)。
[1166]
步骤5：向nah(8.77g，219.3mmol，60％纯度，2.0当量)于thf(350ml)中的溶液中添加4a(63.2g，219.3mmol，2.0当量)，搅拌1h，并添加化合物4(55.0g，109.6mmol，1.0当量)。将混合物在25℃下搅拌1.5h，然后减压浓缩以去除溶剂。将残余物用dcm(1000ml)稀释并用h2o(1000ml)萃取。将有机层减压浓缩，得到残余物。将残余物通过柱色谱法(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1至5/1)纯化，得到化合物5。tlc：石油醚/乙酸乙酯＝2/1，rf＝0.11。1h nmr:(400mhz cdcl3)δppm 6.60-6.83(m,1h),5.77-6.03(m,1h),4.54(d,j＝2.00hz,1h),3.87-4.12(m,5h),3.71-3.84(m,1h),3.45-3.71(m,4h),3.22-3.40(m,2h),1.07-1.27(m,6h),0.00-0.10(m,27h)。
[1167]
步骤6：向nah(2.46g，61.5mmol，60％纯度，1.7当量)于dmf(250ml)中的溶液中添加2-羟基异吲哚啉-1,3-二酮(8.85g，54.27mmol，1.5当量)，1h后，添加化合物5(23.0g，36.2mmol，1.0当量)。将混合物在40℃下搅拌12hr，然后将反应混合物浓缩并将残余物用ch3cn 500ml稀释并过滤。将滤饼用ch3cn(200ml)洗涤，然后将有机层减压浓缩，得到粗产物6，其不经进一步纯化即用于下一步骤。lc-ms：tr＝1.60min，ms计算值：717.9，[m 1]

＝718.3
[1168]
步骤7：向化合物6(15.0g，20.9mmol，1.0当量)于ch3cn(150ml)中的溶液中添加吡啶(4.13g，52.2mmol，4.22ml，2.5当量)和tmsbr(31.9g，208.9mmol，27.1ml，10当量)。将混合物在20℃下搅拌3hr，然后减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型hplc(中性条件)纯化。柱：phenomenex luna(2)c18 250*50 10u；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：5％-30％，20min；得到化合物7。lc-ms：tr＝0.51min，ms计算值：445.1,[m 1]

＝446.1，1h nmr:(400mhz meod)δppm 7.81-7.94(m,4h),6.76-6.95(m,1h),6.09-6.29(m,1h),4.88(s,1h),
4.38(t,j＝4.00hz,2h),4.12-4.20(m,1h),3.99(m,1h),3.81-3.89(m,1h),3.77(dd,j＝3.20,1.60hz,1h),3.64(dd,j＝9.20,3.20hz,1h),3.44-3.54(m,1h)。
[1169]
步骤8：在n2气氛下向化合物7(4.00g，8.9mmol，1.0当量)于meoh(40ml)和h2o(20ml)中的溶液中添加pd/c(2.00g，10％纯度)。将悬浮液脱气并用h2吹扫3次。将混合物在h2(15psi)下在20℃下搅拌5hr。然后将反应混合物过滤并减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型hplc(tfa条件)纯化。柱：phenomenex luna(2)c18 250*50 10u；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：5％-30％，20min，得到化合物8。lc-ms：tr＝0.91min，ms计算值：447.1，[m 1]

＝448.1。
[1170]
步骤9：向化合物8(1.30g，2.9mmol，1.0当量)于h2o(5ml)和meoh(5ml)中的溶液中添加h2nnh2(436.5mg，8.7mmol，423.7ul，3当量)。将混合物在25℃下搅拌3hr。然后将反应混合物减压浓缩，得到残余物并将残余物通过制备型hplc(hcl条件)纯化。柱：phenomenex luna(2)c18 250*50 10μm；流动相：[水(0.05％hcl)-acn]；b％：0％-0％，10min，得到(2-((2r,3s,4s,5s,6s)-6-(2-(氨基氧基)乙氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)乙基)膦酸(int-cc7)。lc-ms：tr＝0.16min，ms计算值：317.1，[m 1]

＝318.1
[1171]1h nmr:(400mhz d2o)δppm 4.79(s,2h),4.10(t,j＝4.00hz,2h),3.81-3.96(m,2h),3.72(m,2h),3.36-3.57(m,2h),1.92-2.10(m,1h),1.69-1.87(m,1h),1.40-1.67(m,2h)。
[1172]
(1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十四烷-14-酸(int-cc8)的合成
[1173][1174]
步骤1：将n-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-4-(羟基甲基)-2,2-二甲基六氢-4,7-环氧基[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-8-基)乙酰胺(int-bb3)(315mg，1.15mmol)于thf(5ml)中的搅拌溶液冷却至0℃并添加60％氢化钠(80mg，2.3mmol)，并将反应混合物搅拌1小时。然后在0℃下滴加在thf(3ml)中的(3-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸(650mg，1.95mmol，1.7当量)并将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应减压浓缩，得到粗1-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-8-乙酰胺基-2,2-二甲基四氢-4,7-环氧基[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-4(5h)-基)-2,5,8,11-四氧杂十四烷-14-酸，将其用乙酸乙酯(2
×
10ml)研磨，然后添加甲醇(10ml)，并将混合物过滤。将滤液减压浓缩成1-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-8-乙酰胺基-2,2-二甲基四氢-4,7-环氧基[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-4(5h)-基)-2,5,8,11-四氧杂十四烷-14-酸。lc-ms：[m 1]＝495.25
[1175]
步骤2：将1-((3ar,4s,7s,8r,8ar)-8-乙酰胺基-2,2-二甲基四氢-4,7-环氧基[1,
3]二氧杂环戊烯并[4,5-d]氧杂-4(5h)-基)-2,5,8,11-四氧杂十四烷-14-酸(600mg，1.25mmol，1.0当量)于二氯甲烷(10ml)中的搅拌溶液冷却至0℃，并且在0℃下滴加三氟乙酸(1ml)并在室温下搅拌16h。将反应减压浓缩，得到粗1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十四烷-14-酸，将其用20％乙酸乙酯和己烷(3
×
10ml)研磨，将黏性液体冻干，得到1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十四烷-14-酸(int-cc8)。lc-ms：[m-1]＝436.15。
[1176]
1-(1-(1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-6-氧代-2,9,12,15,18-五氧杂-5-氮杂二十一烷-21-酸2,3,5,6-四氟苯酯(int-cc9)的合成
[1177][1178]
在室温下向在dmf(2ml)中的n-((1s,2r,3r,4r,5s)-1-(13-(4-((2-氨基乙氧基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十三烷基)-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-4-基)乙酰胺(int-cc3)(44mg，0.082mmol)中添加双-dpeg4-tfp酯(cas号：1446282-42-3)(53.6mg，0.091mmol)和dipea(0.043ml，0.247mmol)。将混合物在室温下搅拌2h，然后通过反相硅胶色谱法纯化，得到1-(1-(1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-6-氧代-2,9,12,15,18-五氧杂-5-氮杂二十一烷-21-酸2,3,5,6-四氟苯酯(int-cc9)。分析方法7：tr＝0.87min；ms m/z 958.7[m h]

。
[1179]
dd型：
[1180]
中间体(int-dd1b)的合成
[1181][1182]
步骤1：在室温下将在水中的pd/c 50％(60.7mg，0.057mmol)添加到在甲醇(2ml)中的中间体(int-cc1)(550mg，0.285mmol)中然后将混合物置于1atm的h2下。然后将混合物搅拌16小时，然后过滤并真空浓缩，得到中间体(int-dd1a)。分析方法7：rt.＝0.79min，ms m/z 898.0[(m h)/2]

。
[1183]
步骤2：在室温下向中间体(int-dd1a)(0.511g，0.285mmol)于dmf(2ml)中的溶液中添加双-dpeg9-pfp酯(cas号：1334170-00-1)(0.290g，0.342mmol)和dipea(0.149ml，0.855mmol)。将混合物在室温下搅拌2hr，得到中间体(int-dd1b)。分析方法7：rt.＝0.96min；ms m/z 1229.8。
[1184]
3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-((2-(((s)-1-氨基-6-(((((5as,6r,6ar)-1-(6-((1r,2r)-2-羟基-1-(((r)-1-羟基-3-氧代丙烷-2-基)氧基)-3-氧代丙氧基)己基)-1,4,5,5a,6,6a,7,8-八氢环丙[5,6]环八[1,2-d][1,2,3]三唑-6-基)甲氧基)羰基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(int-dd2)的合成
[1185][1186]
在室温下向在乙腈(0.3ml)和dmso(0.1ml)中的3-((6-叠氮己基)氧基)-2-羟基-3-((1-羟基-3-氧代丙烷-2-基)氧基)丙醛(int-aa2)(4.67mg，0.015mmol)中添加((1r,8s,9s)-双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基)甲基(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸酯(得自克里布鲁克股份有限公司(chiroblock gmbh))(4.49mg，0.015mmol)、环肽(c1)(29.5mg，0.015mmol)和dipea(5.38μl，0.031mmol)。将混合物在室温下搅拌16h，然后通过反相硅胶色谱法纯化，得到中间体(int-dd2)。分析方法7：tr＝1.09min，ms m/z 1142.9[(m h)/2]

。
[1187]
3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-38-苄基-44-(((s)-4-氨基甲酰基-2,10,25-三氧代-25-(2,3,5,6-四氟苯氧基)-13,16,19,22-四氧杂-3,9-二氮杂二十五烷基)氨基甲酰基)-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(int-dd3)的合成
5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(int-dd5)的合成
[1194][1195]
向在乙腈(1ml)中的环肽(c1)(75mg，0.039mmol)、lys(boc)nhs(17.33mg，0.039mmol)、dipea(6.83μl，0.039mmol)中0.1ml水以溶解，并将混合物搅拌过夜。将反应浓缩，用tfa(1ml)处理，搅拌1h并再次浓缩。将残余物溶于dmso中并通过制备型hplc(25％-50％acn/水nh4oh-在30x50mm c18柱上改性)纯化。将纯级分合并并冻干，得到(int-dd5)。分析方法2：r.t.0.89min es 967.3:[m 2h]/2

。
[1196]
3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-((2-(((s)-1-氨基-6-((s)-2,6-双(4-氧代戊酰胺基)己酰胺基)-1-氧代己烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(int-dd6)的合成
[1197][1198]
将中间体(int-dd5)(18mg，在dmso中9.3μm)的溶液用4-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(在dmso中的0.9m，0.021ml，0.019mmol)处理。在完成时，将反应通过制备型hplc(在30x50mm c18柱上改性的35％-60％acn/水甲酸)纯化并冻干，得到中间体(int-dd6)。
[1199]
中间体(int-dd7)的合成
[1200][1201]
将中间体(int-dd1a)(136.2mg，0.071mmol)、双(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)辛烷二酸酯(105mg，0.286mmol)和diepa(0.050ml，0.286mmol)于n,n-二甲基甲酰胺(1.5ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过sfc：tr＝4.71min纯化，得到中间体(int-dd7)。分析方法7：tr＝0.78min；m/z：1024.0(m 2)。
[1202]
实例4：例示性双官能化合物的合成
[1203]
实例4-1：双官能化合物3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-(((s)-34-(((2r,3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)-19,19-双((3-((3-(5-(((2r,3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-4-氨基甲酰基-2,10,17,24,30-五氧代-21-氧杂-3,9,18,25,29-五氮杂三十四基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(bfc-1)的合成
4-氨基甲酰基-2,10,17,24,30-五氧代-21-氧杂-3,9,18,25,29-五氮杂三十四基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸。分析方法7：tr＝1.05min；m/z：1246.8(m 3)。
[1206]
步骤2：将来自步骤1的3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-(((s)-34-(((2r,3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-4,5-二乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)-19,19-双((3-((3-(5-(((2r,3r,4r,5r,6r)-3-乙酰胺基-4,5-二乙酰氧基-6-(乙酰氧基甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)戊酰胺基)丙基)氨基)-3-氧代丙氧基)甲基)-4-氨基甲酰基-2,10,17,24,30-五氧代-21-氧杂-3,9,18,25,29-五氮杂三十四基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(26mg，6.96μmol)溶于在甲醇(2ml，4.0mmol)中的甲胺(2m)中。将所得混合物在室温下搅拌3小时，然后蒸发至干并通过hplc(sunfire
tm prep c18柱，5μm，30
×
50mm，3.5min内25％-50％，75ml/min，在水中的acn，含0.1％tfa)纯化，得到(bfc-1)：tr＝3.16min。分析方法7：tr＝2.18min；m/z 1120.6(m 3/3)。
[1207]
实例4-2：双官能化合物3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-((2-(((s)-1-氨基-6-(4-((e)-((2-(2-(4-(((2r,3s,4s,5r,6r)-4-(((2r,3s,4s,5s,6r)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-3-(((2r,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-((膦酰基氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-3-(((2r,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-((膦酰基氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,5-二羟基四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丁酰基)肼基)-2-氧代乙氧基)亚氨基)甲基)苯甲酰胺基)-1-氧代己烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(bfc-2)的合成
[1208][1209]
在室温下向(((2s,3s,4s,5s,6s)-6-(((2r,3s,4s,5s,6r)-2-(((2r,3s,4s,5r,6r)-2-(4-(2-(2-(氨基氧基)乙酰基)肼基)-4-氧代丁氧基)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-3-(((2r,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-((膦酰基氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,5-二羟基四氢-2h-吡喃-4-基)氧基)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-3-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)甲基)膦酰过氧酸(int-cc6)(7.13mg，5.03μmol)中添加3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-((2-(((s)-1-氨基-6-(4-甲酰基苯甲酰胺基)-1-氧代己烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(int-dd4)(6.5mg，3.36μmol)、水(100μl)和dmso(100μl)。将混合物在室温下搅拌30min。添加乙酸(7.68μl，
0.134mmol)以将ph调节至约5。将混合物在室温下搅拌4h。制备型hplc hilic纯化得到双官能化合物(bfc-2)。分析方法7：tr＝2.74min，ms m/z 1081.8[(m h)/3]

。
[1210]
实例4-3：双官能化合物(bfc-3)的合成
[1211][1212]
在室温下向在水(300μl)和dmso(600μl)中的(((2s,3s,4s,5s,6s)-6-(((2r,3s,4s,5s,6r)-2-(((2r,3s,4s,5r,6r)-2-(4-(2-(2-(氨基氧基)乙酰基)肼基)-4-氧代丁氧基)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-6-((((2s,3s,4s,5s,6r)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)-3-(((2r,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-((膦酰基氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)甲基)-3,5-二羟基四氢-2h-吡喃-4-基)氧基)-4,5-二羟基-6-(羟基甲基)四氢-2h-吡喃-3-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)甲基)膦酰过氧酸(int-cc6)(40.9mg，0.029mmol)中添加中间体(int-dd2)(22mg，9.63μmol)和乙酸(44.1μl，0.770mmol)。将混合物在室温下搅拌16h，
然后通过反相hilic制备型hplc色谱法纯化，得到双官能化合物(bfc-3)。分析方法7：tr＝3.32min，ms m/z 1225.0[(m h)/4] 。
[1213]
实例4-4：双官能化合物3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-((2-(((s)-1-氨基-6-(((((5as,6r,6ar)-1-((6s,8r,e)-8-((r,z)-1-羟基-2-((2-(((2s,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(2-膦酰基乙基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)亚氨基)乙基)-6-(羟基甲基)-1-(((2s,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-(2-膦酰基乙基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)-3,7,9-三氧杂-4-氮杂十五-4-烯-15-基)-1,4,5,5a,6,6a,7,8-八氢环丙[5,6]环八[1,2-d][1,2,3]三唑-6-基)甲氧基)羰基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(bfc-4)的合成
[1214][1215]
向在乙腈(200μl)、dmso(200μl)和水(100μl)中的中间体(int-dd2)(21mg，9.19μmol)中添加(2-((2r,3s,4s,5s,6s)-6-(2-(氨基氧基)乙氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)乙基)膦酸(int-cc7)(13.02mg，0.037mmol)。将混合物在室温下搅拌4h，然后通过反相硅胶色谱法纯化，得到双官能化合物(bfc-4)。分析方法7：tr＝1.19min，ms m/z 1442.3[(m h)/2]

。
6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(bfc-6)的合成
[1220][1221]
在室温下向在dmf(1ml)中的中间体(int-cc5)(38.5mg，0.025mmol)中添加中间体(int-dd3)(55.7mg，0.025mmol)和dipea(0.044ml，0.250mmol)。将混合物在室温下搅拌16h，然后通过制备型hplc用甲酸改性剂纯化，得到双官能化合物(bfc-6)。分析方法5：tr＝0.82min，ms m/z 1201.7[(m h)/3] 。
[1222]
实例4-7：双官能化合物3-((6s,9s,12s,15s,18s,21s,24s,27s,29as,35s,38s,44r,46as)-15,21-双([1,1'-联苯]-4-基甲基)-44-(((s)-1-(1-(1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-4-(((1-(1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-27-氨基甲酰基-6,21,29-三氧代-2,9,12,15,18-五氧杂-5,22,28-三氮杂三十烷-30-基)氨基甲酰基)-38-苄基-24,27-双((r)-1-羟基乙基)-35-异丙基-6,12,13,18,19-五甲基-5,8,11,14,17,20,23,26,29,34,37,40,46-十三氧代四十四氢-5h-二吡咯并[2,1-f:2',1'-g1][1]硫杂[4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40]十三氮杂环四十二烯-9-基)丙酸(bfc-7)的合成
[1223][1224]
在室温下向在dmf(1ml)中的n,n'-((1s,1's,2r,2'r,3r,3'r,4r,4'r,5s,5's)-(((((2-氨基丙烷-1,3-二基)双(氧基))双(亚甲基))双(1h-1,2,3-三唑-4,1-二基))双(2,5,8,11-四氧杂十三烷-13,1-二基))双(2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1,4-二基))二乙酰胺(int-cc4)(25.9mg，0.025mmol)中添加中间体(int-dd3)(55.7mg，0.025mmol)和dipea(0.044ml，0.250mmol)。将混合物在室温下搅拌2h，然后通过反相硅胶色谱法用酸性改性剂纯化，得到双官能化合物(bfc-7)。分析方法5：tr＝0.83min，ms m/z 1550.6[(m h)/2]

。
[1225]
实例4-8：双官能化合物(bfc-8)和双官能化合物(bfc-9)的合成
[1226][1227]
在室温下向在乙腈(240μl)和水(160μl)中的中间体(int-dd6)(27.5mg，0.013mmol)中添加((2r,3s,4s,5s)-6-(((4e,6s,8r,9r,10z)-8,9-二羟基-6-(羟基甲基)-1-(((3s,4s,5s,6r)-3,4,5-三羟基-6-((膦酰基氧基)甲基)四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)-3,7,12-三氧杂-4,11-二氮杂十四-4,10-二烯-14-基)氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)甲基磷酸二氢酯(int-cc7)(16.39mg，0.052mmol)。将混合物在室温下搅拌3天并通过hplc纯化：x-bridge beh c18 30x100mm 5μm柱，含5mm nh4oh的acn/h2o，75ml/min，10％-30％acn/水，氢氧化铵改性。
[1228]
实例4-9：双官能化合物(bfc-10)的合成
[1229][1230]
向中间体(int-dd7)(20.49mg，10.01μmol)于dmso(1ml)中的溶液中添加环肽(c9)(10.8mg，10.01μmol)和diepa(0.017ml，0.100mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后添加在甲醇中的甲胺(2m，3ml)并将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物浓缩并通过制备型hplc如下纯化：首先使用x-bridge prep c18 obd 30x50mm 5μm柱，含0.1％甲酸的acn/h2o(梯度25％-50％acn持续3.5min，75ml/min：(tr＝2.2min)，随后使用x-bridge prep c18 obd 30x50mm 5μm柱，含5mm nh4oh的acn/h2o(梯度35％-60％acn持续3.5min，75ml/min：(tr＝1.84min)，得到双官能化合物(bfc10)。分析方法7：tr＝1.80min；m/z：1317.5(m 2)。
[1231]
实例4-10：双官能化合物(bfc-11)的合成
[1232][1233]
在室温下向在dmf(1ml)中的环肽(c9)(25mg，0.023mmol)中添加1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十四烷-14-酸(int-cc8)(12.16mg，0.028mmol)、hatu(13.21mg，0.035mmol)和dipea(0.016ml，0.093mmol)。将混合物在室温下搅拌2h，然后通过制备型hplc如下纯化：使用x-bridge prep c18 obd 30x50mm 5μm柱，含0.1％甲酸的acn/h2o(梯度25％-50％acn持续3.5min，75ml/min：(tr＝3.1min)，得到双官能化合物(bfc11)。分析方法7：tr＝0.90min，ms m/z 1501.4[m h]

。
[1234]
实例4-11：双官能化合物(bfc-12)的合成
[1235][1236]
在室温下向在dmf(1ml)中的环肽(c9)(11.27mg，10.44μmol)中添加1-(1-(1-((1s,2r,3r,4r,5s)-4-乙酰胺基-2,3-二羟基-6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛烷-1-基)-2,5,8,11-四氧杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-6-氧代-2,9,12,15,18-五氧杂-5-氮杂二十一烷-21-酸2,3,5,6-四氟苯酯(int-cc9)(10mg，10.44μmol)和dipea(9.12μl，0.052mmol)。将混合物在室温下搅拌2h，然后通过反相硅胶色谱法纯化，得到双官能化合物(bfc12)。分析方法9：tr＝1.08min；ms m/z 1868.8(m h) 。
[1237]
实例4-12：双官能化合物(bfc-13)的合成
[1238][1239]
在室温下向在dmf(1ml)中的环肽(c12)(4.84μmol)中添加中间体(int-dd1b)(13.09mg，5.33μmol)和dipea(8.46μl，0.048mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后通过制备型hilic反相纯化，得到双官能化合物(bfc-13)，将其冻干，然后添加在甲醇(1ml，2.000mmol)中的甲胺(2m)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后真空浓缩并干燥，得到双官能化合物(bfc-13)。分析方法7：tr＝0.77min；ms m/z 1922.4[(m-h)/2]

。
[1240]
实例4-13：双官能化合物(bfc-14)的合成
[1241][1242]
使用实例4-12中描述的方法获得双官能化合物(bfc-14)，不同之处在于用环肽(c13)替换环肽(c12)。分析方法7：tr＝0.74min；ms m/z 1901.4[(m-h)/2]

。
[1243]
实例4-14：双官能化合物(bfc-15)的合成
[1244][1245]
使用实例4-12中描述的方法获得双官能化合物(bfc-15)，不同之处在于用环肽(c14)替换环肽(c12)。分析方法7：tr＝0.80min；ms m/z 1935.7[(m-h)/2]

。
[1246]
实例4-15：双官能化合物(bfc-16)的合成
[1247][1248]
使用实例4-12中描述的方法获得双官能化合物(bfc-16)，不同之处在于用环肽(c15)替换环肽(c12)。分析方法7：tr＝0.81min；ms m/z 1834.1[(m-h)/2]

。
[1249]
实例4-16：双官能化合物(bfc-17)的合成
[1250][1251]
使用实例4-12中描述的方法获得双官能化合物(bfc-17)，不同之处在于用环肽(c16)替换环肽(c12)。分析方法7：tr＝0.81min；ms m/z 1913.5[(m-h)/2]

。
[1252]
实例5：双官能化合物体外评价
[1253]
实例5-1：fhr3双官能化合物-fhr3结合数据
[1254]
将spr用于分别获得单独或作为双官能化合物(bfc13)、(bfc14)、(bfc15)、
(bfc16)和(bfc17)的一部分的fhr3受体配体化合物(c12)、(c13)、(c14)、(c15)和(c16)的结合数据。对应的数据在下表6中给出。
[1255]
在proteon xpr36仪器(伯乐实验室公司(bio-rad laboratories))上进行spr结合实验。将具有c-末端生物素化avitag的经纯化的fhr3用于测定。将生物素化的fhr3与五倍摩尔过量的双官能化合物(bfc13)、(bfc14)、(bfc15)、(bfc16)或(bfc17)、或化合物(c12)、(c13)、(c14)、(c15)或(c16)一起孵育，并固定在中性抗生物素蛋白包被的传感器芯片(nlc芯片，伯乐实验室公司)上。在通过以0.1ml/min的流速注入运行缓冲液(20mm tris ph 7.5，300mm nacl，25mm cacl2，2mmβ巯基乙醇，2％dmso和0.05％吐温-20)持续240s调节芯片后，以0.02mg/ml的蛋白浓度在具有五倍摩尔过量的双官能化合物的运行缓冲液中以0.03ml/min的流速注入fhr3，随后用具有1μm双官能化合物的运行缓冲液洗涤4次(0.1ml/min，每次60秒)。
[1256]
为了进行夹心spr结合测定，将his-asgpr1(62-291)蛋白储液用运行缓冲液稀释至期望浓度。将asgpr经240s以0.1ml/min的流速注入，并允许解离1200s。记录缔合和解离相的传感图。通过从反应表面减去从空白对照表面(或点间表面)记录的结合响应，随后减去缓冲液空白注入来处理所有传感图。用proteon manager软件(版本3.1.0.6，伯乐公司(bio-rad,inc.))处理数据。
[1257]
表6
[1258][1259]
实例5-2：fhr3双官能化合物-asgpr结合数据
[1260]
将spr用于获得单独或作为双官能化合物(bfc-13)、(bfc-15)和(bfc16)的一部分的asgp受体配体化合物(int-cc2)的结合数据。对应的数据在下表7中给出。
[1261]
在biacore t200或biacore 8k上进行asgpr1 spr实验。该测定在运行缓冲液中针对biacore(链霉抗生物素蛋白)sa芯片进行优化，该运行缓冲液由20mm hepes、300mm nacl、2mm cacl2、0.01％吐温-20、2％dmso组成，ph 7.4。将具有n-末端生物素化avitag的人asgpr1的重组细胞外结构域在运行缓冲液中稀释至20μg/ml，并在用1m nacl/40mm naoh溶液以30ul/min至少四次60秒注入预处理后固定在sa芯片上。蛋白固定化水平根据分析物的分子量在500r u至3500ru之间变化，目标r
max
为30ru。当在2％dmso中的分析物剂量响应滴定流过固定化蛋白时，观察到分析物与asgpr1的直接结合。在biacore t200评价软件或biacore insight评价软件上进行数据分析。
[1262]
表7
[1263][1264]
实例5-3：pcsk9双官能化合物-pcsk9结合数据
[1265]
将spr用于分别获得单独或作为双官能化合物(bfc1)的一部分的pcsk9受体配体化合物(c5)的结合数据。对应的数据在下表8中给出。
[1266]
在proteon xpr36仪器(伯乐实验室公司)上进行spr结合实验。将具有c-末端生物素化avitag的纯化的重组全长人pcsk9用于测定。将生物素化的人pcsk9与五倍摩尔过量的双官能化合物(bfc1)或化合物(c5)一起孵育，并固定在中性抗生物素蛋白包被的传感器芯片(nlc芯片，伯乐实验室公司)上。在通过以0.1ml/min的流速注入运行缓冲液(20mm tris ph 7.5，300mm nacl，25mm cacl2，2mmβ巯基乙醇，2％dmso和0.05％吐温-20)持续240s调节芯片后，以0.02mg/ml的蛋白浓度在具有五倍摩尔过量的双官能化合物的运行缓冲液中以0.03ml/min的流速注入pcsk9蛋白，随后用具有1μm双官能化合物的运行缓冲液洗涤4次(0.1ml/min，每次60秒)。
[1267]
为了进行夹心spr结合测定，将his-asgpr1(62-291)蛋白储液用运行缓冲液稀释至期望浓度。将asgpr以0.1ml/min的流速注入240s，并允许解离1200s。记录缔合和解离相的传感图。通过从反应表面减去从空白对照表面(或点间表面)记录的结合响应，随后减去缓冲液空白注入来处理所有传感图。用proteon manager软件(版本3.1.0.6，伯乐公司)处理数据。
[1268]
表8
[1269][1270]
注意：n.d.指示未确定
[1271]
实例5-4：pcsk9双官能化合物-asgpr结合数据
[1272]
将spr用于获得单独或作为双官能化合物(bfc1)的一部分的asgp受体配体化合物(int-cc2)的结合数据。对应的数据在下表9中给出。
[1273]
在biacore t200或biacore 8k上进行asgpr1 spr实验。该测定在运行缓冲液中针对biacore sa芯片进行优化，该运行缓冲液由20mm hepes、300mm nacl、2mm cacl2、0.01％吐温-20、2％dmso组成，ph 7.4。将具有n-末端生物素化avitag的人asgpr1的重组细胞外结构域在运行缓冲液中稀释至20μg/ml，并在用1m nacl/40mm naoh溶液以30ul/min至少四次60秒注入预处理后固定在sa芯片上。蛋白固定化水平根据分析物的分子量在500r u至3500ru之间变化，目标rmax为30ru。当在2％dmso中的分析物剂量响应滴定流过固定化蛋白时，观察到分析物与asgpr1的直接结合。在biacore t200评价软件或biacore insight评价软件上进行数据分析。
[1274]
表9
[1275][1276]
注意：n.d.指示未确定
[1277]
实例5-5：pcsk9双官能化合物-m6pr结合数据
[1278]
将spr用于获得单独或作为双官能化合物(bfc-2)的一部分的m6p受体配体化合物(int-cc6)的结合数据。对应的数据在下表10中给出。
[1279]
表10
[1280][1281]
注意：n.d.指示未确定
[1282]
实例6：双官能化合物：体内评价
[1283]
实例6-1：fhr3双官能化合物：体内评价
[1284]
本报告中描述的体内研究是根据机构acuc批准的方案17oph021进行的。内部生成表达人fhr3的转基因小鼠。用于以下研究的雄性人fhr3转基因小鼠为四个月大。
[1285]
将测试双官能化合物bfc-13和bfc-15以30μg/ml和3μg/ml配制在pbs中，以确保0.1ml的固定体积将基于小鼠的平均体重(约30克)递送期望的0.1和0.01mg/kg剂量。
[1286]
在给药前通过断尾将血样收集到edta收集管(奧地利克雷姆斯明斯特的葛雷纳公司(grenier,kremsm
ü
nster,austria))中以测定基线水平。向动物腹膜内推注0.1ml含有0.1mg/kg和0.01mg/kg双官能化合物bfc-13或bfc-15的溶液。对照小鼠仅接受pbs。在给药后1、2和4小时，收集25μl血液并储存在冰上。将血样在15,000g、4℃下离心10分钟，将所得血浆等分并冷冻在-80℃下用于以后的pd测量。
[1287]
为了能够测定转基因小鼠中人fhr3血浆蛋白水平，用美国新泽西州普林斯顿的科文斯公司(covance(princeton,nj,usa))的人fhr3蛋白免疫兔，并使用来自美国马萨诸塞州波士顿的ge公司(ge(boston,ma,usa))的cnbr-活化的琼脂糖亲和纯化从兔血清中分离多克隆抗体。随后，在mesoscale discovery(美国马里兰州罗克维尔(rockville,md,usa))平台上使用免疫测定来测量小鼠血浆中的fhr3水平，其中兔抗fhr3抗体用作捕获抗体，并且生物素化兔抗fhr3用作检测抗体。
[1288]
bfc-13和bfc15的双官能化合物的静脉推注施用后hfhr3的清除率分别示于图1a和图1b中。hfhr3的水平是相对于在施用双官能化合物之前获得的值。数据说明双官能化合物bfc-13和bfc-15相对于媒介物对照促进hfhr3从血浆中的加速清除。
[1289]
实例6-2：pcsk9双官能化合物：体内评价
[1290]
本文所述的体内研究是根据机构acuc批准的方案18cvm018和17cvm029进行的。雄性ldlr(-/-)小鼠得自缅因州巴尔港杰克逊实验室(jackson laboratories,bar harbor,me)(目录号002207)。在研究的早晨，将小鼠称重并分成具有相似平均体重的治疗组。
[1291]
媒介物由10％聚乙二醇300(密苏里州圣路易斯的西格玛奥德里奇公司(sigma-aldrich,saint louis,mo))、25％kolliphor hs 15(20％储备溶液；密苏里州圣路易斯的西格玛奥德里奇公司)和65％pbs(马萨诸塞州沃尔瑟姆的吉布科/赛默飞世尔公司(gibco/thermofisher,waltham,ma))组成。
[1292]
基于小鼠的平均体重配制测试化合物，诸如双官能化合物bfc-1、bfc-2、bfc-5、bfc-7、bfc-11、bfc12、bfc-13和bfc-15、pcsk9配体化合物(c5)和(c15)、asgpr配体(int-cc2)和m6pr配体(int-cc6)，以确保0.1ml的固定体积将递送期望剂量的测试化合物，诸如0.01mg/kg、0.03mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.3mg/kg、1mg/kg或10mg/kg。对于测试化合物与hpcsk9蛋白的共同施用，将测试化合物配制在媒介物中，然后在给药前立即与pbs中的人pcsk9蛋白(33.3μg/ml)组合。另外，对于不含hpcsk9的测试化合物的预施用，用媒介物配制测试化合物。
[1293]
使用旋转尾部注射器(马萨诸塞州布伦特里的布伦特里科学公司(braintree scientific inc.,braintree,ma))，经由侧尾静脉向动物静脉推注0.2ml含有期望浓度的测试化合物和3.3μg野生型人pcsk9蛋白的混合物的溶液。
[1294]
使用edta收集管(德国萨尔施塔特的萨尔施塔特公司(sarstedt ag,sarstedt,germany))在给药后5min、15min、30min、60min、120min和240min时获得血样(25μl)，然后储存在冰上。将血样在15,000g、4℃下离心10分钟，将所得血浆等分并冷冻在-80℃下用于以后的pd测量。
[1295]
pcsk9的血浆浓度使用可商购获得的人(人前蛋白转化酶9/pcsk9quantikine elisa试剂盒，dpc900；明尼苏达州明尼阿波利斯的研发系统公司(r&d systems,minneapolis,mn))elisa试剂盒进行评估。为了测量pcsk9水平，将血浆样品稀释(1:25或1:
50)并根据制造商的说明书进行分析，不同之处在于所有孵育均在滴定板振荡器(伊利诺伊州梅尔罗斯公园的实验室生产线仪器公司(lab-line instruments,melrose park,illinois))上以300rpm进行。
[1296]
实例6-2a：pcsk9双官能化合物-体内pd评价：双官能化合物与hpcsk9蛋白的静脉推注共同施用
[1297]
本发明的双官能化合物与hpcsk9蛋白静脉推注共同施用后hpcsk9蛋白的清除率示于图2-图5中
[1298]
图2a示出了在静脉推注施用媒介物 hpcsk9(3.3μg)、双官能化合物(bfc-1)(0.1mg/kg) hpcsk9(3.3μg)、pcsk9配体(c5)(0.05mg/kg) hpcsk9(3.3μg)或asgpr配体(int-cc2)(0.05mg/kg) hpcsk9(3.3μg)后人pcsk9随时间的血浆浓度。对应的auc图示于图2b中。数据显示，与对于媒介物、单独的pcsk9配体(c5)或单独的asgpr配体(int-cc2)所观察到的相比，用双官能化合物(bfc-1)更快地消除了野生型人pcsk9蛋白从血浆中的清除，所有这些都显示相似的清除率。
[1299]
类似的研究示于图3a和图3b中，其中图3a示出了在静脉推注施用媒介物 hpcsk9(3.3μg)、双官能化合物(bfc-2)(0.1mg/kg) hpcsk9(3.3μg)、pcsk9配体(c5)(0.05mg/kg) hpcsk9(3.3μg)或m6pr配体(int-cc6)(0.05mg/kg) hpcsk9(3.3μg)后作为时间的函数的人pcsk9的血浆浓度。对应的auc图示于图3b中。数据显示，与对于媒介物、单独的pcsk9配体(c5)或单独的m6pr配体(int-cc6)所观察到的相比，用双官能化合物(bfc-2)更快地消除了野生型人pcsk9蛋白从血浆中的清除，所有这些都显示相似的清除率。
[1300]
图4a和图4b示出了在静脉推注施用双官能化合物(bfc-7)(0.03mg/kg) hpcsk9(3.3μg)、双官能化合物(bfc-7)(0.1mg/kg) hpcsk9(3.3μg)和双官能化合物(bfc-7)(0.3mg/kg) hpcsk9(3.3μg)后双官能化合物(bfc-7)对人pcsk9的血浆浓度的清除率的剂量响应。此外，为了比较，在静脉推注施用媒介物 hpcsk9(3.3μg)和双官能化合物(bfc-1)(0.1mg/kg) hpcsk9(3.3μg)之后作为时间的函数的hpcsk9血浆浓度示于图4a和图4b中。与媒介物相比，bfc-1和所有三种剂量的bfc-7显著加速pcsk9清除
[1301]
类似地，图5a和图5b示出了在静脉推注施用以下项后双官能化合物(bfc-5)对人pcsk9清除率的剂量响应：双官能化合物(bfc-5)(0.1mg/kg) hpcsk9(3.3μg)和双官能化合物(bfc-5)(1mg/kg) hpcsk9(3.3μg)。此外，为了比较，在静脉推注施用媒介物 hpcsk9(3.3μg)和双官能化合物(bfc-1)(0.1mg/kg) hpcsk9(3.3μg)之后作为时间的函数的hpcsk9血浆浓度示于图5a和图5b中。与媒介物相比，bfc-1和bfc-5在测试剂量下显著加速pcsk9清除。与相同剂量的媒介物或bfc-1相比，0.1mg/kg的bfc-5显著加速pcsk9清除。
[1302]
实例6-2b：pcsk9双官能化合物-体内评价：预施用相对于共同施用
[1303]
静脉推注共同施用双官能化合物和hpcsk9蛋白与在静脉推注施用hpcsk9蛋白之前静脉推注预施用双官能化合物之间的比较示于图6a和图6b中。
[1304]
具体地，图6a示出了在静脉推注共同施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9、推注共同施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-12) 3.3μg hpcsk9、静脉推注施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-12)随后在70分钟后静脉推注施用3.3μg hpcsk9以及静脉推注共同施用媒介物 3.3μg hpcsk9后hpcsk9随时间推移的血浆浓度。此外，图6a示出了在口服(po)施用30mg/kg双官能化合物(bfc-12)随后在70分钟后静脉推注施用3.3μg hpcsk9后
hpcsk9随时间的血浆浓度。图6b示出了图6a中所示的清除率数据的对应auc图。
[1305]
数据显示hpcsk9从血浆中的清除发生在预给药本发明的双官能化合物之后。还显示本发明的双官能化合物(例如bfc-12)可口服施用并实现hpcsk9的清除。
[1306]
类似的研究示于图7a和图7b中，其中在静脉推注共同施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9、静脉推注共同施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-11) 3.3μg hpcsk9、静脉推注施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-11)随后在40分钟后静脉推注施用3.3μg hpcsk9以及静脉推注共同施用媒介物 3.3μg hpcsk9后hpcsk9随时间的血浆浓度。
[1307]
此外，图7a示出了在口服(po)施用30mg/kg双官能化合物(bfc-11)随后在40分钟后静脉推注施用3.3μg hpcsk9后hpcsk9随时间的血浆浓度。图6b示出了图6a中所示的清除率数据的对应auc图。
[1308]
数据显示hpcsk9从血浆中的清除发生在预给药本发明的双官能化合物之后。还显示本发明的双官能化合物(例如bfc-11)可口服施用并实现hpcsk9的清除。
[1309]
实例6-2c：pcsk9双官能化合物-体内评价：竞争测定
[1310]
使用竞争测定来说明hpcsk9的清除需要结合pcsk9和asgpr两者。图8a示出了在静脉推注施用媒介物 3.3μg hpcsk9(对照)、静脉推注共同施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9(无竞争对照)、静脉推注施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9 10mg/kg asgpr配体(int-cc2)(与asgpr配体竞争)以及静脉推注施用0.1mg/kg双官能化合物(bfc-1) 3.3μg hpcsk9 10mg/kg pcsk9配体(c5)(与pcsk9配体竞争)后hpcsk9的清除率。图8b：示出了图8a中所示的清除率数据的对应auc图。
[1311]
首先关注auc图，虽然与媒介物对照相比，单独的双官能化合物(bfc-1)显著加速清除，但在过量pcsk9配体(c5)或asgpr配体(int-cc2)的情况下未观察到pcsk9清除增加。回到时程，过量的pcsk9配体(c5)在任何时间点均与媒介物对照没有差异。另一方面，过量的asgpr配体(int-cc2)在最早的时间点最显著地减慢清除，效果随时间丧失，可能因为int-cc2随时间通过asgpr清除。
[1312]
应理解，本文描述的实例和实施例仅用于说明目的，其各种修饰或改变对于本领域技术人员将是明了的，并包括在本技术的精神和范围内和所附权利要求书的范围内。